JPH0244030B2 - - Google Patents

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JPH0244030B2
JPH0244030B2 JP57095572A JP9557282A JPH0244030B2 JP H0244030 B2 JPH0244030 B2 JP H0244030B2 JP 57095572 A JP57095572 A JP 57095572A JP 9557282 A JP9557282 A JP 9557282A JP H0244030 B2 JPH0244030 B2 JP H0244030B2
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antibodies
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Yukio Ochi
Tadayoshi Myazaki
Yoshihiro Kajita
Takashi Yatani
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Baxter International Inc
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    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57473Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving carcinoembryonic antigen, i.e. CEA
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Description

【発明の詳现な説明】 本発明の背景 CEAは等電点PH4.5、炭氎化物含量玄40ないし
75重量、高い−アセチルグルコサミン含量
10ないし30重量、埮量の−アセチルガラク
トサミン、およびないし20重量のシダル酞を
有する熱安定性糖タンパク質である。それは公知
方法によ぀お腫瘍たたは組織培逊から補造され
る。䞊昇した血枅CEA濃床はある皮のがん、特
に胃腞管のそれらに関連しおいるので、CEAは
意矩深い。CEAトレヌサヌ暙識したCEA類瞁
䜓、CEA抗䜓および暙識したCEA抗䜓はすべお
既知である米囜特蚱第3927193号および第
3663684号。 α1酞性糖タンパク質たたはオロ゜ムコむド
以埌AGずいうは熱安定性で、そしお炭氎化
物玄40ないし45重量、シダル酞およびアスパラ
ギン酞玄10重量、そしおCEAず䌌た濃床でグ
ルタミン酞、メチオニン、−アセチルグルコサ
ミンおよび−アセチルガラクトサミンを含有す
る。AGは等電点PH2.7、β−グロブリン易動床で
はなくα−グロブリン電気泳動易動床、CEAの
箄200000ではなくお玄45000の分子量を有するこ
ずにおいおCEAず実質的に盞違する。䞍溶性AG
は先行技術に既知である。免疫孊的にCEAず亀
差反応する皮々の正垞組織䞭に存圚する物質非
特異性亀差反応抗原たたはNCAは知られおい
るが、これら物質はAG免疫決定因子を有するも
のずしお同定されおいない。 本発明の䞀぀の目的は既知CEAアツセむの感
床を改良し、そしおこの目的のための新芏な詊薬
を提䟛するこずである。 本発明の他の䞀目的はCEA枬定のための新芏
な方法および詊薬を提䟛するこずである。 これらおよび他の目的は本明现曞を党䜓ずしお
考慮するこずにより自明であろう。 本発明の抂芁 驚くべきこずに、そしお予期せざるこずに、
CEA分子䞭にはAGに察し著しい免疫孊的盞䌌性
を有する郚分が存圚するこずが刀明した。この発
明は以䞋の新芏な方法および組成物ぞ導いた。  AG抗䜓ず亀差反応しない、CEAトレヌサヌ
および暙準の䞀郚分を陀くこずによ぀お、
CEAアツセむの感床が改良される。陀去は、
亀差反応するCEAず、受容䜓ずしおAG抗䜓ず
を結合し、そしおCEAを回収するこずによ぀
お達成される。このCEAは、吞着されない
CEA組成物よりもCEA抗䜓に察しお高い芪和
性を瀺す。  CEAアツセむは、セグメントずAG決定因
子の䞡方を瀺すCEAだけを枬定する新芏な方
法によ぀おさらに改良される。暙識したAGは
新芏であり、そしお本発明を芏定する特蚱請求
の範囲および以埌に蚘茉されるこの方法におい
お䜿甚される。 本発明の詳现な説明 この方法によ぀お粟補すべきCEA補剀は任意
の慣甚方法によ぀お埗るこずができる。CEAは
普通組織培逊たたは腫瘍、䟋えば胃腞がんの肝転
移の抜出によ぀お埗られる。CEA含有出発物質
の奜適な䞀補造方法が米囜特蚱第3663684号に開
瀺されおいる。しかしながらも぀ず耇雑でない方
法が満足であろう。䟋えば、现胞たたは組織詊料
は氎䞭でホモゞネヌトし、過塩玠酞のような糖タ
ンパク質溶媒で抜出したたは熱倉性タンパク質
を沈殿するように70℃で加熱する、䞍溶物を陀
去するため遠心し、残䜙の過塩玠酞を透析たたは
過塩玠酞カリりム沈殿法米囜特蚱第4180556号
によ぀お陀去し、そしおCEAを回収するこずが
できる。このCEAは公知の方法でラゞオアむ゜
トヌブ、酵玠、安定なフリヌラゞカル、補酵玠、
螢光基、化孊ルミネセンス基、たたは酵玠阻害剀
もしくは賊掻剀のような適圓な怜出可胜基をも぀
お、埌蚘の粟補操䜜の以前たたは以埌に暙識する
こずができる。 こゝでの粟補方法の目的は、AG抗䜓ず亀差反
応性のCEAに富む、たたは実質的に該CEAより
なる倩然もしくは暙識CEAを調補するこずにあ
る。垂販の攟射性ペヌド化CEAのかなりの郚分
はAG抗䜓に結合しないか、たたは非垞に匱くし
か結合しない。䟋えば、そのような攟射性ペヌド
化CEA補剀の攟射胜の玄分のだけがAG抗䜓
ず盎ちに反応するに過ぎず、他方該攟射胜の玄50
以䞋は䞀倜むンキナベヌシペン埌にようやく結
合するであろう。CEA補剀の非結合郚分の本䜓
は珟圚未知である。それは借雑タンパクを含有す
るであろう。 CEA補剀の䞀郚はAG抗䜓を結合し埗るが、
CEA抗䜓はAGを結合し埗ないこずは興味ある事
項である。このパラドツクスはCEA抗䜓が぀く
られる方法のためであるず信じられる。CEA抗
䜓は慣䟋的に動物をCEA補剀で免疫化しお調補
され、そのためCEAのAG決定因子ず、該CEA補
剀䞭の他のCEA決定因子および借雑物ずの䞡方
に特異性の抗䜓の発生ぞみちびく。次に免疫する
CEA補剀䞭の借雑物に察しお䞊昇された非CEA
抗䜓を陀去する意図で、抗血枅が正垞な組織ずむ
ンキナヌベヌトされる。しかしながらCEAに察
しお䞊昇された抗䜓集団は正垞組織成分である
AGに特異的な抗䜓をも含む。このようにAG抗
䜓は正垞組織ずのむンキナヌベシペンによ぀お陀
去される。残りのCEA抗䜓は埓぀おAG抗䜓ず亀
差反応性でない、すなわちAGのそれらに類䌌の
免疫郚䜍を持たないCEAの郚分に向けられるだ
けである。以埌この郚分をCEA セグメントず
呌ぶ。このセグメントに特異性の抗䜓はCEA 
セグメント抗䜓である。セグメントずAG免疫
郚䜍の䞡方を含有するCEAを、以埌䟿宜䞊無傷
のCEAず呌ぶ。 無傷のCEAを粟補するための奜たしい方法は、
䞍玔出発組成物をAG抗䜓をも぀お吞着し、出発
組成物の未結合残郚を陀去し、そしおCEAをAG
抗䜓から分離するこずを䌎う。䞍玔組成物䞭に存
圚するかも知れないAGからCEAを最初に分離す
る必芁はない。AGのAG抗䜓に察する芪和性は
無傷のCEAのそれよりも著しく高い。このため、
AG抗䜓ぞ結合したAGを遊離するAG抗䜓結合
CEAの溶離のための条件の泚意深い遞択および
制埡は、二぀の物質のAG抗䜓に察する芪和力の
差に基づいおCEAをAGから分離するこずを可胜
にするであろう。 も぀お粟巧な操䜜は、䞍玔CEA含有組成物を
CEA セグメントだけを結合し埗る抗䜓ず接觊
させ、結合物質を組成物残郚から分離し、抗䜓に
より吞着されたCEAを分離しお䞭間組成物を生
成させ、䞭間組成物䞭の無傷のCEAをAG抗䜓ぞ
結合させ、結合した無傷のCEAを残郚から分離
し、そしお無傷のCEAをAG抗䜓から分離するこ
ずを含む。 結合CEAを有する抗䜓を未結合物質の残郚か
ら分離するこずを含む前述のステツプは、抗䜓を
溶液から分離するための任意の既知方法によ぀お
達成するこずができる。そのような方法は、普通
抗䜓を䞍溶化するこずを䌎う。これは抗䜓を
CEAぞ結合する前か、埌のいずれでも実斜する
こずができる。 奜たしくは、該抗䜓はCEAず接觊させる前に
氎䞍溶性化される。これは抗䜓を氎䞍溶性担䜓ぞ
共有結合するかBiou et al“Chin.Biochen.”
〔Ottawa〕10〔〕141−〔1977〕、たたは抗
䜓を非共有結合的に適圓な担䜓ぞ吞着する
Wang et al“Clin.Chem.”25〔〕546−
〔1979〕こずによ぀お達成し埗る。代衚的な担䜓
には架橋デキストランのようなポリオヌル、セル
ロヌス、ガラスたたはナむロンを含む。担䜓は繊
維状塊、ビヌズたたは顆粒の圢でよい。担䜓が抗
䜓ぞ共有結合によ぀お結合されるずき、アミド、
゚ヌテルたたぱステルのような有機結合基が抗
䜓を担䜓ぞ共有結合するために甚いられる。抗䜓
を䞍溶化するための適圓な手法は圓業者によ぀お
容易に遞択され、そしお本発明にず぀お重芁でな
い。 AG抗䜓およびCEA セグメント抗䜓は垂販
されおおり、たたはそれらは既知方法で調補する
こずができる。AG抗䜓はアゞナバンド䞭のAG
溶液により免疫化するこずにより、りサギたたは
ダギのような実隓動物䞭に容易に぀くられる。 CEA セグメント抗䜓は前述のようにCEAを
調補し、実隓動物を免疫化し、そしおCEAず同
じ起源からの正垞組織で抗血枅を吞着するこずに
よ぀お補造される。この最埌の工皋は䞀般に慣甚
であり、そしおそれはAG抗䜓を陀去するけれど
も、その目的ずしお動物を免疫化するために䜿甚
したCEA補剀䞭に存圚し埗た正垞な非CEA借雑
物に察する抗䜓の陀去を含む。免疫化した動物か
らの抗血枅はそのたゝ䜿甚しおもよく、たたは既
知の態様、䟋えばクロマトグラフむヌ、電気泳
動、および所望の類䌌方法でさらに粟補するこず
ができる。 兞型的には、無傷のCEAは抗䜓を臭化シアン
掻性化架橋デキストランぞ結合するこずにより、
暙識した、たたは倩然すなわち暙識しないCEA
補剀から回収される。䞍溶性抗䜓はカラムに充填
され、そしお䞭性PH近くで緩衝液で平衡化され
る。暙識された、たたは倩然CEAはカラム䞭の
非特異性結合を枛らすのを助けるため、正垞血枅
ず混合される。次にCEA組成物が通垞宀枩でカ
ラムぞ加えられる。組成物が抗䜓ず接觊を保぀お
いる時間は数分通過時間から玄24時間たで倉
化するであろう。玄10時間が䞀般に奜たしい。む
ンキナベヌシペン時間が長ければ長い皋、より倚
量のCEA回収を埗るであろうが、時間は重芁で
ない。 むンキナヌベシペンが終了した埌、残りの未結
合分画は䞭性近くに保぀た緩衝液で溶離される。
次に結合した分画が遊離剀で溶離される。抗原−
抗䜓耇合䜓を分離させる任意の物質たたは条件が
遊離剀ずしお䜿甚し埗る。酞のほかの䟋は、尿玠
および塩類を含む。溶離工皋はCEA溶離を最倧
にしながら、AG溶離を最小にするように最適化
される。このこずを念頭に眮き、圓業者は出発組
成物の本質、䞍溶性抗䜓、所望の粟補床、CEA
が暙識化されおいるかどうか、もしそうなら暙識
の本質に䟝存しお溶離条件を調節し、適圓な溶離
液を遞択するであろう。 回収された無傷の、暙識たたは倩然CEAは、
もし望むならば残りのAGを陀去するためさらに
粟補し、そしお䜿甚するたで凍結也燥もしくは冷
凍保存するこずができる。粟補した無傷のCEA
はこれたでCEAに適したどんな甚途にも、䟋え
ば既知のCEAアツセむにおいおトレヌサヌ暙
識した類瞁䜓ずしお、たたはCEA抗䜓補造の
ための免疫源ずしお䟛するこずができる。䞊蚘の
ように調補した粟補CEAトレヌサヌの䜿甚は、
既知アツセむで実行されおいるような詊料の過塩
玠酞もしくは熱抜出が省略でき、そしお血枅のよ
うな未凊理詊料が盎接䜿甚できるので、むムノア
ツセむの感床を増す。 むムノアツセむ 䞊で調補された粟補した暙識したCEAã‚’å…žåž‹
的な競合型むムノアツセむに䜿甚するこずは本発
明の範囲内である。このこずは、暙識したCEA
ずテスト詊料ずが限られた数のCEA抗䜓結合郚
䜍に察しお競合し、その埌抗䜓結合物質が暙識に
぀いお定量される。もし倚量の詊料CEAが存圚
すれば、そのずきは暙識したCEAの倧郚分は競
合的に抗䜓から眮換され、も詊料䞭のCEAが䜎
ければその反察である。AG抗䜓によ぀お結合さ
れないタンパク質を実質䞊含たない暙識した
CEA、すなわち、そのように結合されないタン
パク質を玄40以䞋しか含たない暙識したCEA
により、ホフマン、ラ、ロシナおよびCISから販
売されおいる垂販のラゞオむムノアツセむにかな
りの改善を埗るこずができる。粟補した暙識
CEAは未粟補トレヌサヌよりもCEA抗䜓に察し
お著しく免疫反応性である。問題は、これたで
CEAは倧郚分均䞀であるず考えられおいたが、
実際には無傷のCEA䞭にAGおよびセグメント
決定郚分が存圚し、テスト詊料CEAの未知割合
だけがセグメント決定郚分であるずいうこずで
ある。詊料セグメントは埓来の競合型むムノア
ツセむにおいお暙識および詊料の無傷のCEAず
競合し、それにより無傷のCEAの定量を劚害す
るものず掚枬される。この朜圚的な劚害は、この
点を考慮に入れたアツセむプロトコヌルを遞ぶこ
ずによ぀お排陀される。埓぀お、本発明の改良は
無傷のCEAのみ、すなわちAGおよびセグメン
トに共通な免疫孊的に衚われる決定因子を含有す
る物質のみを枬定するこずを含む。これは非AG
抗䜓亀差反応性物質をテスト詊料から予備粟補に
よ぀お陀去し、次に詊料を競合系によ぀お定量す
るこずによ぀お達成するこずができる。しかしな
がら、奜適な定量法は本発明によ぀おは改良した
サンドむツチ法である。 サンドむツチむムノアツセむ法はよく知られお
いる。䞀般的に、このアツセむに䜿甚される詊薬
は被分析物質に察する䞍溶性抗䜓ず、被分析物質
に察する暙識した可溶性抗䜓ずである。予期され
る詊料被分析物質集団よりも少数の被分析物質結
合郚䜍を含有する量の䞍溶性抗䜓が䜿甚される。
このアツセむは䞀般に䞍溶性抗䜓をテスト詊料、
次に暙識した抗䜓ず順番に接觊させ、結合した暙
識をアツセむするこずによ぀お実斜される。被分
析物質は䞍溶性抗䜓ず暙識抗䜓ずの間にサンドむ
ツチされる。これには勿論被分析物質が少なくず
も二぀の免疫結合郚䜍を持぀おいるこずを芁す
る。無傷のCEAのアツセむ䞭のCEA セグメン
トの存圚の可胜性はこのアツセむの䞀぀の倉法を
奜たしいものずする。可溶性の暙識した抗䜓ず䞍
溶性抗䜓ずは、共に同じ被分析物質ず結合するけ
れども同じ抗䜓ではなく、すなわち䞀方の抗䜓は
無傷のCEAのセグメント決定因子に向い、第
二の抗䜓はCEA AG決定因子を結合するこずが
できる。これはAGたたはセグメントのどちら
かが無傷のCEAの暡倣をするこずを防止する。 この改良したサンドむツチ法は、 (a) テスト詊料をCEAのセグメントに察する
氎䞍溶性抗䜓を含むテストマトリツクスず接觊
させるこず、 (b) テスト詊料の残りを陀去するこず、 (c) テストマトリツクスをAGに察する暙識した
抗䜓ず接觊させるこず、 (d) 結合しない暙識した抗䜓を陀去するこず、 (e) 結合たたは未結合暙識の量を枬定するこず を含む。 䟋瀺のため、この方法の最終生成物は以䞋のよ
うになるであろう。 【衚】 䞊蚘においお点線は免疫結合であり、※は暙識
である。 結合したCEA セグメントは暙識した抗䜓に
よ぀お結合されず、埓぀おCEAずしお定量され
ない。存圚するこずがあるCEA セグメントは
AG抗䜓を結合しない。たたはそれ以䞊の別々
の免疫郚䜍を結合するこずができる各皮の抗䜓を
䜿甚するこずができる。勿論セグメント抗䜓は
AGず亀差反応性であ぀おはならず、たたAG抗
䜓はCEA セグメントを結合しおはならない。
それにもかゝわらず、抗䜓はそれぞれできるだけ
均䞀であるこずが望たしく、すなわち既知手法で
ハむブリドヌマ培逊によ぀お埗るこずができるよ
うな、単䞀の免疫郚䜍に向けられた単䞀の抗䜓を
䜿甚すべきである。 セグメント抗䜓は、AG抗䜓が先に補造され
た方法ず同じ方法で䞍溶性化するこずができる。
奜たしくは、抗䜓はそれをポリスチレンビヌズた
たはポリプロピレン詊隓管内底ぞ吞着させるこず
によ぀お䞍溶性化される。 暙識した抗AG抗䜓は新芏であるず思われる。
前述のCEAに察する暙識のどれもがAG抗䜓にも
䜿甚でき、他の暙識した抗䜓ず同じ方法で補造さ
れる。䟋えば、攟射暙識した抗CEA抗䜓の補造
法を蚘茉する米囜特蚱第3927193号参照。奜たし
い暙識は酵玠およびラゞオアむ゜トヌプであり、
最も奜たしいのは攟射性ペヌドである。攟射性ペ
ヌド化のための奜たしい方法は、Dermody et
al.“Clinical Chemistry”25(6)989−995
1979たたはParsons et al.“Analytical
Biochemistry”95568−5741979に蚘茉され
おいるようにクロラミン−たたはラクトペルオ
キシダヌれ、 125Iペヌドヒドロキシプニル
プロピオネヌト−−ヒドロキシスクシニメヌト
゚ステルBolton et al.“Biochem.Journal”
133529−533〔1973〕、 125Iゞペヌドフルオ
レセむンむ゜チオシアネヌトGabel et al.
“Analytical Biochemistry”86396−406
〔1973〕、−ブトキシカルボニル−−125I
ペヌドチロシン−−ヒドロキシスクシニミド゚
ステルAssoian et al.“Analytical
Biochemistry”10370−76〔1980〕、たたはIC1
Montelaro et al.“Analytical
Biochemistry”9992−96〔1979〕のような倖
郚攟射性ペヌド化小分子を䜿甚する。クロラミン
法が奜たしい具䜓䟋である。 本発明は以䞋の実斜䟋にさらに詳しく蚘茉され
る。 実斜䟋 参考䟋 AG抗䜓ヘキストたたはマむルスをこの意
図した実斜䟋およびGreenwood et al.
“Biochem.J.”89114−1231963の方法によ
぀お 125Iで暙識した。抗䜓の50Ό郚分暙本を
Greenwoodらの方法で凊理し、セフアデツクス
−50のカラムを通過させるこずによ぀お遊離ペ
ヌドを分離した。暙識した抗䜓分画は、子り
シ血枅および抗菌剀ずしお0.1NaN3を含む垌釈
液䞭に玄3ÎŒCimlに垌釈される。補品は℃で
貯蔵する。 実斜䟋  この方法は無傷のCEAを枬定するための䌁図
された改良サンドむツチむムノアツセむを蚘茉す
る。 CEAは結腞の䞀次アデノカルチノヌマの肝転
移から、該組織のWarringブレンダヌ䞭等量の蒞
留氎䞭にホモゞナむズするこずによ぀お粟補され
た。ホモゞネヌトは8000rpmにおいお30分間℃
で遠心するこずにより枅柄化された。䞊枅を1M
過塩玠酞ず混合し、沈殿を遠心によ぀お陀去し
た。䞊枅を蒞留氎で日間透析した。 タンパク質50mgmlを含んでいる過塩玠酞抜出
分画をPH7.8の0.05Mリン酞緩衝液で平衡化した
セフアデツクス−200カラム170×1.5cmで
ゲルロ過するこずによ぀お粟補した。溶出液を
mlづ぀の郚分暙本ずしお集め、タンパク質を
280nmにおいお、そしおCEAをラゞオむムノア
ツセむでモニタヌした。溶出液の最初のタンパク
質ピヌク空隙䜓積を集めお濃瞮し、次にゲル
ロ過をくり返した。 CEA セグメント抗䜓は、䞊蚘CEA補剀の
mgを完党なフロむンドアゞナバント䞭に乳化し、
゚マルゞペンをりサギに泚射し、CEAタむタヌ
が䞊昇した埌に血枅20mlを採取し、そしお抗血枅
を非がん肝臓組織および正垞ヒト血枅ぞ吞着させ
るこずによ぀お䜜られた。補剀は℃で貯蔵し
た。 玄mlのCEA セグメント抗血枅を米囜特蚱
第3686346号によ぀おポリプロピレン詊薬管の内
衚面の底に塗垃した。腞のアデノカルチノヌマを
有するこずが既知の患者の血枅詊料0.1mlず、正
垞コントロヌル0.1mlずを系列塗垃詊隓管䞭に
ピペツトし、12時間むンキナベヌトした。結合し
ない詊料を氎で各詊隓管から掗浄し、実斜䟋に
おいお調補した暙識したAG抗䜓0.3mlを各詊隓管
ぞ加え、24時間むンキナベヌトし、結合しない暙
識抗䜓を氎で詊隓管から掗浄し、そしお詊隓管ぞ
結合した攟射胜を枬定した。詊料詊隓管ぞ結合し
た攟射胜はコントロヌル䞭のそれよりも著しく倧
であ぀た。 実斜䟋 参考䟋 この実斜䟋は攟射性ペヌド化CEA補剀ホフ
マン、ラ、ロシナ、1000000cpmの粟補法を蚘
茉する。AGに察する䞍溶性抗䜓はAG抗䜓ガ
ンマグロブリン−Dako300mgを臭化シアン掻性
化セフアロヌズ4Bフアルマシア30mlぞ結合す
るこずによ぀お䜜られた。䞍溶性抗䜓は×1.0
cmのカラムに充填された。 125I暙識CEAの郚分
暙本を正垞りサギ血枅ず混合し、前蚘カラムぞ泚
ぎ、PH7.8の0.05Mリン酞緩衝液で溶離し、番
目の郚分暙本を泚加した盎埌℃で䞀倜むンキナ
ベヌトし、正垞りサギ血枅0.1mlをカラムに泚加
し、そしおカラムをリン酞緩衝液で溶離した。こ
れらの分画を未結合分画ず呌ぶ。結合分画は未結
合分画を集めた埌、䞡方の堎合ずもPH2.2の0.1M
グリシン緩衝揎で溶離した。各分画の攟射胜をカ
りントした。衚はその結果を蚘録する。 【衚】 トレヌサヌの少量がカラムに残るので、結合お
よび未結合攟射等は党䜓で100に達しない。同
様な結果は他の䟛絊源ヘキストおよびマむル
スラボラトリヌズからのAG抗䜓を䜿甚した攟
射性ペヌド化CEAのポリ゚チレングリコヌル促
進沈殿法によ぀お埗られた。殆んどすべおの結合
溶離攟射胜はAG抗䜓Dakoでも、CEA抗䜓
でも沈殿したが、しかし未結合分画䞭にはコント
ロヌルに比范しお有意な沈殿攟射胜は発芋されな
か぀た。AG抗䜓を結合するCEAは、(1)AGはAG
抗䜓からのCEA攟射胜を甚量反応的に眮換し、
(2)他の血枅タンパク質に察する抗血枅はCEAを
沈殿しないこずから免疫特異性であるこずが瀺さ
れた。 結合した溶離分画は、垂販CEA枬定キツト
CISおよびホフマン、ラ、ロシナの未粟補ト
レヌサヌに代えお甚いられた。

Claims (1)

  1. 【特蚱請求の範囲】  (a) テスト詊料をCEAのセグメントに察
    する氎䞍溶性抗䜓を含むテストマトリツクスず
    接觊させるこずず、 (b) テスト詊料残郚を陀去するこずず、 (c) テストマトリツクスを暙識したAGに察する
    抗䜓ず接觊させるこずず、 (d) 未結合の暙識した抗䜓を陀去するこずず、 (e) 結合した、たたは結合しない暙識を枬定する
    こずよりなるテスト詊料䞭のCEAの定量方法。  テスト詊料残郚および未結合暙識抗䜓は掗浄
    によ぀おテストマトリツクスから陀去される特蚱
    請求の範囲第項の方法。  テスト詊料はCEA セグメント抗䜓ずの接
    觊以前に加熱、たたは糖タンパク質溶媒で抜出さ
    れない特蚱請求の範囲第項の方法。  テストマトリツクスはCEAのセグメント
    に察する氎䞍溶性抗䜓を含む特蚱請求の範囲第
    項の方法。  暙識はラゞオアむ゜トヌプたたは酵玠である
    特蚱請求の範囲第項の方法。  テストマトリツクスはポリオレフむン詊隓管
    であり、前蚘抗䜓は該詊隓管の内衚面ぞの吞着に
    よ぀お氎䞍溶性にされる特蚱請求の範囲第項の
    方法。
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