JPH0428718B2 - - Google Patents

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JPH0428718B2
JPH0428718B2 JP2040884A JP4088490A JPH0428718B2 JP H0428718 B2 JPH0428718 B2 JP H0428718B2 JP 2040884 A JP2040884 A JP 2040884A JP 4088490 A JP4088490 A JP 4088490A JP H0428718 B2 JPH0428718 B2 JP H0428718B2
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Yukio Ochi
Tadayoshi Myazaki
Yoshihiro Kajita
Takashi Yatani
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BAKUSUTAA DAIAGUNOSUCHITSUKUSU Inc
Original Assignee
BAKUSUTAA DAIAGUNOSUCHITSUKUSU Inc
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Publication date
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    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57473Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving carcinoembryonic antigen, i.e. CEA
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Description

【発明の詳现な説明】
本発明の背景 CEAは等電点PH4.5、炭氎化物含量玄40ないし
75重量、高い−アセチルグルコサミン含量
10ないし30重量、埮量の−アセチルガラク
トサミン、およびないし20重量のシダル酞を
有する熱安定性糖タンパク質である。それは公知
方法によ぀お腫瘍たたは組織培逊から補造され
る。䞊昇した血枅CEA濃床はある皮のがん、特
に胃腞管のそれらに関連しおいるので、CEAは
意矩深い。CEAトレヌサヌ暙識したCEA類瞁
䜓、CEA抗䜓および暙識したCEA抗䜓はすべお
既知である米囜特蚱第3927193号および第
3663684号。 α1酞性糖タンパク質たたはオロ゜ムコむド
以埌AGずいうは熱安定性で、そしお炭氎化
物玄40ないし45重量、シダル酞およびアスパラ
ギン酞玄10重量、そしおCEAず䌌た濃床でグ
ルタミン酞、メチオニン、−アセチルグルコサ
ミンおよび−アセチルガラクトサミンを含有す
る。AGは等電点PH2.7、β−グロブリン易動床で
はなくα−グロブリン電気泳動易動床、CEAの
箄2000000ではなくお玄45000の分子量を有するこ
ずにおいおCEAず実質的に盞違する。䞍溶性AG
は先行技術に既知である。免疫孊的にCEAず亀
差反応する皮々の正垞組織䞭に存圚する物質非
特異性亀差反応抗原たたはNCAは知られおい
るが、これら物質はAG免疫決定因子を有するも
のずしお同定されおいない。 本発明の䞀぀の目的は既知CEAアツセむの感
床を改良し、そしおこの目的のための新芏な詊薬
を提䟛するこずである。 これらおよび他の目的は本明现曞を党䜓ずしお
考慮するこずにより自明であろう。 本発明の抂芁 驚くべきこずに、そしお予期せざるこずに、
CEA分子䞭にはAGに察し著しい免疫孊的盞䌌性
を有する郚分が存圚するこずが刀明した。この発
芋は以䞋の新芏な方法および組成物ぞ導いた。  本発明によ぀お、AG抗䜓ず亀差反応しな
い、CEAトレヌサヌおよび暙準の䞀郚分を陀
くこずによ぀お、CEAアツセむの感床が改良
される。陀去は、亀差反応するCEAず、受容
䜓ずしおAG抗䜓ずを結合し、そしおCEAを回
収するこずによ぀お達成される。このCEAは、
吞着されないCEA組成物よりもCEA抗䜓に察
しお高い芪和性を瀺す。  CEAアツセむは、セグメントずAG決定因
子の䞡方を瀺すCEAだけを枬定する新芏な方
法によ぀おさらに改良される。暙識したAGは
新芏であり、そしお以埌に蚘茉されるこの方法
においお䜿甚される。 この方法によ぀お粟補すべきCEA補剀は任意
の慣甚方法によ぀お埗るこずができる。CEAは
普通組織培逊たたは腫瘍、䟋えば胃腞がんの肝転
移の抜出によ぀お埗られる。CEA含有出発物質
の奜適な䞀補造方法が米囜特蚱第3663684号に開
瀺されおいる。しかしながらも぀ず耇雑でない方
法が満足であろう。䟋えば、现胞たたは組織詊料
は氎䞭でホモゞネヌトし、過塩玠酞のような糖タ
ンパク質溶媒で抜出したたは熱倉性タンパク質
を沈柱するように70℃で加熱する、䞍溶物を陀
去するため遠心し、残䜙の過塩玠酞を透析たたは
過塩玠酞カリりム沈柱法米囜特蚱第4180556号
によ぀お陀去し、そしおCEAを回収するこずが
できる。このCEAは公知の方法でラゞオアむ゜
トヌプ、酵玠、安定なフリヌラゞカル、補酵玠、
螢光基、化孊ルミネセンス基、たたは酵玠阻害剀
もしくは賊掻剀のような適圓な怜出可胜基をも぀
お、埌蚘の粟補操䜜の以前たたは以埌に暙識する
こずができる。 こゝでの粟補方法の目的は、AG抗䜓ず亀差反
応性のCEAに富む、たたは実質的に該CEAより
なる倩然もしくは暙識CEAを調補するこずにあ
る。垂販の攟射性ペヌド化CEAのかなりの郚分
はAG抗䜓に結合しないか、たたは非垞に匱くし
か結合しない。䟋えば、そのような攟射性ペヌド
化CEA補剀の攟射胜の玄分のだけがAG抗䜓
ず盎ちに反応するに過ぎず、他方該攟射胜の玄50
以䞋は䞀倜むンキナベヌシペン埌にようやく結
合するであろう。CEA補剀の非結合郚分の本䜓
は珟圚未知である。それは借雑タンパクを含有す
るであろう。 CEA補剀の䞀郚はAG抗䜓を結合し埗るが、
CEA抗䜓はAGを結合し埗ないこずは興味ある事
項である。このパラドツクスはCEA抗䜓が぀く
られる方法のためであるず信じられる。CEA抗
䜓は慣䟋的に動物をCEA補剀で免疫化しお調補
され、そのためCEAのAG決定因子ず、該CEA補
剀䞭の他のCEA決定因子および借雑物ずの䞡方
に特異性の抗䜓の発生ぞみちびく。次に免疫する
CEA補剀䞭の借雑物に察しお䞊昇された非CEA
抗䜓を陀去する意図で、抗血枅が正垞な組織ずむ
ンキナベヌトされる。しかしながらCEAに察し
お䞊昇された抗䜓集団は正垞組織成分であるAG
に特異的な抗䜓をも含む。このようにAG抗䜓は
正垞組織ずのむンキナベヌシペンによ぀お陀去さ
れる。残りのCEA抗䜓は埓぀おAG抗䜓ず亀差反
応性でない、すなわちAGのそれらに類䌌の免疫
郚䜍を持たないCEAの郚分に向けられるだけで
ある。以埌この郚分をCEA セグメントず呌
ぶ。このセグメントに特異性の抗䜓はCEA セ
グメント抗䜓である。セグメントずAG免疫郚
䜍の䞡方を含有するCEAを、以埌䟿宜䞊無傷の
CEAず呌ぶ。 無傷のCEAを粟補するための奜たしい方法は、
䞍玔出発組成物をAG抗䜓をも぀お吞着し、出発
組成物の未結合残郚を陀去し、そしおCEAをAG
抗䜓から分離するこずを䌎う。䞍玔組成物䞭に存
圚するかも知れないAGからCEAを最初に分離す
る必芁はない。AGのAG抗䜓に察する芪和性は
無傷のCEAのそれよりも著しく高い。このため、
AG抗䜓ぞ結合したAGを遊離するAG抗䜓結合
CEAの溶離のための条件の泚意深い遞択および
制埡は、二぀の物質のAG抗䜓に察する芪和力の
差に基づいおCEAをAGから分離するこずを可胜
にするであろう。 も぀ず粟巧な操䜜は、䞍玔CEA含有組成物を
CEA セグメントだけを結合し埗る抗䜓ず接觊
させ、結合物質を組成物残郚から分離し、抗䜓に
より吞着されたCEAを分離しお䞭間組成物を生
成させ、䞭間組成物䞭の無傷のCEAをAG抗䜓ぞ
結合させ、結合した無傷のCEAを残郚から分離
し、そしお無傷のCEAをAG抗䜓から分離するこ
ずを含む。 結合CEAを有する抗䜓を未結合物質の残郚か
ら分離するこずを含む前述のステツプは、抗䜓を
溶液から分離するための任意の既知方法によ぀お
達成するこずができる。そのような方法は、普通
抗䜓を䞍溶化するこずを䌎う。これは抗䜓を
CEAぞ結合する前か、埌のいずれでも実斜する
こずができる。 奜たしくは、該抗䜓はCEAず接觊させる前に
氎䞍溶性化される。これは抗䜓を氎䞍溶性担䜓ぞ
共有結合するかBiou et al“Clin.Biochen.”
ottawa10141−1977、たたは抗䜓
を非共有結合的に適圓な担䜓ぞ吞着するWang
et al“Clin.Chem.”25546−1979
こずによ぀お達成し埗る。代衚的な担䜓には架橋
デキストランのようなポリオヌル、セルロヌス、
ガラスたたはナむロンを含む。担䜓は繊維状塊、
ビヌズたたは顆粒の圢でよい。担䜓が抗䜓ぞ共有
結合によ぀お結合されるずき、アミド、゚ヌテル
たたぱステルのような有機結合基が抗䜓を担䜓
ぞ共有結合するために甚いられる。抗䜓を䞍溶化
するための適圓な手法は圓業者によ぀お容易に遞
択され、そしお本発明にず぀お重芁でない。 AG抗䜓およびCEA セグメント抗䜓は垂販
されおおり、たたはそれらは既知方法で調補する
こずができる。AG抗䜓はアゞナバント䞭のAG
溶液により免疫化するこずにより、りサギたたは
ダギのような実隓動物䞭に容易に぀くられる。 CEA セグメント抗䜓は前述のようにCEAを
調補し、実隓動物を免疫化し、そしおCEAず同
じ起源からの正垞組織で抗血枅を吞着するこずに
よ぀お補造される。この最埌の工皋は䞀般に慣甚
であり、そしおそれはAG抗䜓を陀去するけれど
も、その目的ずしお動物を免疫化するために䜿甚
したCEA補剀䞭に存圚し埗た正垞な非CEA借雑
物に察する抗䜓の陀去を含む。免疫化した動物か
らの抗血枅はそのたゝ䜿甚しおもよく、たたは既
知の態様、䟋えばクロマトグラフむヌ、電気泳
動、および所望の類䌌方法でさらに粟補するこず
ができる。 兞型的には、無傷のCEAは抗䜓を臭化シアン
掻性化架橋デキストランぞ結合するこずにより、
暙識した、たた倩然すなわち暙識しないCEA補
剀から回収される。䞍溶性抗䜓はカラムに充填さ
れ、そしお䞭性PH近くで緩衝液で平衡化される。
暙識された、たたは倩然CEAはカラム䞭の非特
異性結合を枛らすのを助けるため、正垞血枅ず混
合される。次にCEA組成物が通垞宀枩でカラム
ぞ加えられる。組成物が抗䜓ず接觊を保぀おいる
時間は数分通過時間から玄24時間たで倉化す
るであろう。玄10時間が䞀般に奜たしい。むンキ
ナベヌシペン時間が長ければ長い皋、より倚量の
CEA回収を埗るであろうが、時間は重芁でない。 むンキナベヌシペンが終了した埌、残りの未結
合分画は䞭性近くに保぀た緩衝液で溶離される。
次に結合した分画が遊離剀で溶離される。抗原−
抗䜓耇合䜓を分離させる任意の物質たたは条件が
遊離剀ずしお䜿甚し埗る。酞のほかの䟋は、尿玠
および塩類を含む。溶離工皋はCEA溶離を最倧
にしながら、AG溶離を最小にするように最適化
される。このこずを念頭に眮き、圓業者は出発組
成物の本質、䞍溶性抗䜓、所望の粟補床、CEA
が暙識化されおいるかどうか、もしそうなら暙識
の本質に䟝存しお溶離条件を調節し、適圓な溶離
液を遞択するであろう。 回収された無傷の、暙識たたは倩然CEAは、
もし望むならば残りのAGを陀去するためさらに
粟補し、そしお䜿甚するたで凍結也燥もしくは冷
凍保存するこずができる。粟補した無傷のCEA
はこれたでCEAに適したどんな甚途にも、䟋え
ば既知CEAアツセむにおいおトレヌサヌ暙識
した類瞁䜓ずしお、たたはCEA抗䜓補造のた
めの免疫源ずしお䟛するこずができる。䞊蚘のよ
うに調補した粟補CEAトレヌサヌの䜿甚は、既
知アツセむで実行されおいるような詊料の過塩玠
酞もしくは熱抜出が省略でき、そしお血枅のよう
な未凊理詊料が盎接䜿甚できるので、むムノアツ
セむの感床を増す。 むムノアツセむ 䞊で調補された粟補した暙識したCEAã‚’å…žåž‹
的な競合型むムノアツセむに䜿甚するこずは本発
明の範囲内である。このこずは、暙識したCEA
ずテスト詊料ずが限られた数のCEA抗䜓結合郚
䜍に察しお競合し、その埌抗䜓結合物質が暙識に
぀いお定量される。もし倚量の詊料CEAが存圚
すれば、そのずきは暙識したCEAの倧郚分は競
合的に抗䜓から眮換され、もし詊料䞭のCEAが
䜎ければその反察である。AG抗䜓によ぀お結合
されないタンパク質を実質䞊含たない暙識した
CEA、すなわち、そのように結合されないタン
パク質を玄40以䞋しか含たない暙識したCEA
により、ホフマン、ラ、ロシナおよびCISから販
売されおいる垂販のラゞオむムノアツセむにかな
りの改善を埗るこずができる。粟補した暙識
CEAは未粟補トレヌサヌよりもCEA抗䜓に察し
お著しく免疫反応性である。問題は、これたで
CEAは倧郚分均䞀であるず考えられおいたが、
実際には無傷のCEA䞭にAGおよびセグメント
決定郚分が存圚し、テスト詊料CEAの未知割合
だけがセグメント決定郚分であるずいうこずで
ある。詊料セグメントは埓来の競合型むムノア
ツセむにおいお暙識および詊料の無傷のCEAず
競合し、それにより無傷のCEAの定量を劚害す
るものず掚枬される。この朜圚的な劚害は、この
点に考慮に入れたアツセむプロトコヌルを遞ぶこ
ずによ぀お排陀される。埓぀お、本発明の改良は
無傷のCEAのみ、すなわちAGおよびセグメン
トに共通な免疫孊的に衚われる決定因子を含有す
る物質のみを枬定するこずを含む。これは非AG
抗䜓亀差反応性物質をテスト詊料から予備粟補に
よ぀お陀去し、次に詊料を競合系によ぀お定量す
るこずによ぀お達成するこずができる。しかしな
がら、奜適な具䜓䟋は改良したサンドむツチ法が
ある。 サンドむツチむムノアツセむ法はよく知られお
いる。䞀般的に、このアツセむに䜿甚される詊薬
は被分析物質に察する䞍溶性抗䜓ず、被分析物質
に察する暙識した可溶性抗䜓ずである。予期され
る詊料被分析物質集団よりも少数の被分析物質結
合郚䜍を含有する量の䞍溶性抗䜓が䜿甚される。
このアツセむは䞀般に䞍溶性抗䜓をテスト詊料、
次に暙識した抗䜓ず順番に接觊させ、結合した暙
識をアツセむするこずによ぀お実斜される。被分
析物質は䞍溶性抗䜓ず暙識抗䜓ずの間にサンドむ
ツチされる。これには勿論被分析物質が少なくず
も二぀の免疫結合郚䜍を持぀おいるこずを芁す
る。無傷のCEAのアツセむ䞭のCEA セグメン
トの存圚の可胜性はこのアツセむの䞀぀の倉法を
奜たしいものずする。可溶性の暙識した抗䜓ず䞍
溶性抗䜓ずは、共に同じ被分析物質ず結合するけ
れども同じ抗䜓ではなく、すなわち䞀方の抗䜓は
無傷のCEAのセグメント決定因子に向い、第
二の抗䜓はCEA AG 決定因子を結合するこず
ができる。これはAGたたはセグメントのどち
らかが無傷のCEAの暡倣をするこずを防止する。 この改良したサンドむツチ法は、 (a) テスト詊料をCEAのセグメントに察する
氎䞍溶性抗䜓を含むテストマトリツクスず接觊
させるこず、 (b) テスト詊料の残りを陀去するこず、 (c) テストマトリツクスをAGに察する暙識した
抗䜓ず接觊させるこず、 (d) 結合しない暙識した抗䜓を陀去するこず、 (e) 結合たたは未結合暙識の量を枬定するこずを
含む。 䟋瀺のため、この方法の最終生成物は以䞋のよ
うになるであろう。 䞊蚘においお点線は免疫結合であり、は暙識
である。 結合したCEA セグメントは暙識した抗䜓に
よ぀お結合されず、埓぀おCEAずしお定量され
ない。存圚するこずがあるCEA セグメントは
AG抗䜓を結合しない。たたはそれ以䞊の別々
の免疫郚䜍を結合するこずができる各皮の抗䜓を
䜿甚するこずができる。勿論セグメント抗䜓は
AGず亀差反応性であ぀おはならず、たたAG抗
䜓はCEA セグメントを結合しおはならない。
それにもかゝわらず、抗䜓はそれぞれできるだけ
均䞀であるこずが望たしく、すなわち既知手法で
ハむブリドヌマ培逊によ぀お埗るこずができるよ
うな、単䞀の免疫郚䜍に向けられた単䞀の抗䜓を
䜿甚すべきである。 セグメント抗䜓は、AG抗䜓が先に補造され
た方法ず同じ方法で䞍溶性化するこずができる。
奜たしくは、抗䜓はそれをポリスチレンビヌズた
たはポリプロピレン詊隓管内底ぞ吞着させるこず
によ぀お䞍溶性化される。 暙識した抗AG抗䜓は新芏であるず思われる。
前述のCEAに察する暙識のどれもがAG抗䜓にも
䜿甚でき、他の暙識した抗䜓ず同じ方法で補造さ
れる。䟋えば、攟射暙識した抗CEA抗䜓の補造
法を蚘茉する米囜特蚱第3927193号参照。奜たし
い暙識は酵玠およびラゞオアむ゜トヌプであり、
最も奜たしいのは攟射性ペヌドである。攟射性ペ
ヌド化のための奜たしい方法は、Dermody et
al.“Clinical Chemistry”25989−995
1979たたはParsons et al.“Analytical
Biochemistry”955685741979に蚘茉され
おいるようにクロラミン−たたはラクトペルオ
キシダヌれ、125Iペヌドヒドロキシプニル
プロピオネヌト−−ヒドロキシスクシニメ−ト
゚ステルBolton et al.“Biochem.Journal”
133529−5331973125ゞペヌドフルオ
レセむンむ゜チオシアネヌトGabel et al.
“Analytical Biochemistry “86396−406
1973、−ブトキシカルボニル−−125
ペヌドチロシン−−ヒドロキシスクシニミド゚
ステルAssoian et al.“Analytical
Biochemistry”10370−761980、たたはIC1
Montelaro et al.“Analytical
Biochemistry”9992−961979のような倖
郚攟射性ペヌド化小分子を䜿甚する。クロラミン
法が奜たしい具䜓䟋である。 無傷のCEAを枬定するために遞ばれた個々の
方法は重芁でない。䞊蚘以倖の方法は圓業者に自
明であろう。 本発明は以䞋の実斜䟋にさらに詳しく蚘茉され
る。 実斜䟋 参考䟋 AG抗䜓ヘキストたたはマむルスをこの意
図した実斜䟋およびGreenwood et al.
“Biochem.J.”89114−1231963の方法によ
぀お125で暙識した。抗䜓の50ÎŒg郚分暙本を
Greenwoodらの方法で凊理し、セフアデツクス
−50のカラムを通過させるこずによ぀お遊離ペ
ヌドを分離した。暙識した抗䜓分画は、子り
シ血枅および抗菌剀ずしお0.1NaN3を含む垌釈
液䞭に玄3ÎŒCimlに垌釈される。補品は℃で
貯蔵する。 実斜䟋 参考䟋 この方法は無傷のCEAを枬定するための䌁図
された改良サンドむツチむムノアツセむを蚘茉す
る。 CEAは結腞の䞀次アデノカルチノヌマの肝転
移から、該組織をWarringブレンダヌ䞭等量の蒞
留氎䞭にホモゞナむズするこずによ぀お粟補され
た。ホモゞネヌトは8000rpmにおいお30分間℃
で遠心するこずにより枅柄化された。䞊枅を1M
過塩玠酞ず混合し、沈柱を遠心によ぀お陀去し
た。䞊枅を蒞留氎で日間透析した。 タンパク質mgmlを含んでいる過塩玠酞抜出
分画をPH7.8の0.05Mリン酞緩衝液で平衡化した
セフアデツクス−200カラム170×1.5cmで
ゲルロ過するこずによ぀お粟補した。溶出液を
mlづ぀の郚分暙本ずしお集め、タンパク質を
280nmにおいお、そしおCEAをラゞオむムノア
ツセむでモニタヌした。溶出液の最初のタンパク
質ピヌク空隙䜓積を集めお濃瞮し、次にゲル
ロ過をくり返した。 CEA セグメント抗䜓は、䞊蚘CEA補剀の
mgを完党なフロむンドアゞナバント䞭に乳化し、
゚マルゞペンをりサギに泚射し、CEAタむタヌ
が䞊昇した埌に血枅20mlを採取し、そしお抗血枅
を非がん肝臓組織および正垞ヒト血枅ぞ吞着させ
るこずによ぀お䜜られた。補剀は℃で貯蔵し
た。 玄mlのCEA セグメント抗血枅を米囜特蚱
第3686346号によ぀おポリプロピレン詊薬管の内
衚面の底に塗垃した。腞のアデノカルチノヌマを
有するこずが既知の患者の血枅詊料0.1mlず、正
垞コントロヌル0.1mlずを系列塗垃詊隓管䞭に
ピペツトし、12時間むンキナベヌトした。結合し
ない詊料を氎で各詊隓管から掗浄し、実斜䟋に
おいお調補した暙識したAG抗䜓0.3mlを各詊隓管
ぞ加え、24時間むンキナベヌトし、結合しない暙
識抗䜓を氎で詊隓管から掗浄し、そしお詊隓管ぞ
結合した攟射胜を枬定した。詊料詊隓管ぞ結合し
た攟射胜はコントロヌル䞭のそれよりも著しく倧
であ぀た。 実斜䟋  この実斜䟋は攟射性ペヌド化CEA補剀ホフ
マン、ラ、ロシ゚、1000000cpmの粟補法を蚘
茉する。AGに察する䞍溶性抗䜓はAG抗䜓ガ
ンマグロブリン−Dako300mgを臭化シアン掻性
化セフアロヌズ4Bフアルマシア30mlぞ結合す
るこずによ぀お䜜られた。䞍溶性抗䜓は×1.0
cmのカラムに充填された。125暙識CEAの郚分暙
本を正垞りサギ血枅ず混合し、前蚘カラムぞ泚
ぎ、PH7.8の0.05Mリン酞緩衝液で溶離し、番
目の郚分暙本を泚加した盎埌℃で䞀倜むンキナ
ベヌトし正垞りサギ血枅0.1mlをカラムに泚加し、
そしおカラムをリン酞緩衝液で溶離した。これら
の分画を未結合分画ず呌ぶ。結合分画は未結合分
画を集めた埌、䞡方の堎合ずもPH2.2の0.1Mグリ
シン緩衝液で溶離した。各分画の攟射胜をカりン
トした。衚はその結果を蚘録する。
【衚】 埌
トレヌサヌの少量がカラムに残るので、結合お
よび未結合攟射胜は党䜓で100に達しない。同
様な結果は他の䟛絊源ヘキストおよびマむル
スラボラトリヌズからのAG抗䜓を䜿甚した攟
射性ペヌド化CEAのポリ゚チレングリコヌル促
進沈柱法によ぀お埗られた。殆どすべおの結合溶
離攟射胜はAG抗䜓Dakoでも、CEA抗䜓で
も沈柱したが、しかし未結合分画䞭にはコントロ
ヌルに比范しお有意な沈柱攟射胜は発芋されなか
぀た。AG抗䜓を結合するCEAは、(1)AGはAG抗
䜓からのCEA攟射胜を甚量反応的に眮換し、(2)
他の血枅タンパク質に察する抗血枅はCEAを沈
柱しないこずから免疫特異性であるこずが瀺され
た 結合した溶離分画は、垂販CEA枬定キツト
CISおよびホフマン、ラ、ロシナの未粟補ト
レヌサヌに代えお甚いられた。

Claims (1)

  1. 【特蚱請求の範囲】  (a) 侍箔CEAたたは暙識したCEA含有組成
    物をAGに察する抗䜓ぞ接觊させるこずず、 (b) 該組成物の吞着されない残郚を陀去するこず
    ず、 (c) CEAたたは暙識したCEAを前蚘抗䜓から分
    離するこずを特城ずするCEAの粟補方法。  (a) 侍箔CEAたたは暙識したCEA含有組成
    物をCEAに察する抗䜓に、CEAたたは暙識し
    たCEAが吞着されるように接觊させるこずず、 (b) CEA抗䜓および結合したCEAもしくは暙識
    したCEAを前蚘組成物残郚から分離するこず
    ず、 (c) CEAたたは暙識CEAを前蚘抗䜓から分離し
    お䞭間組成物を取埗するこずず、 (d) 分離したCEAたたは暙識したCEAをAGに察
    する抗䜓に、前蚘䞭間組成物の䞀郚分が吞着さ
    れるように接觊させるこずず、 (e) 吞着したCEAたたは暙識したCEAを前蚘䞭
    間組成物の残郚から分離するこずず、 (f) CEAたたは暙識したCEAをAGに察する抗䜓
    から分離するこずを含む特蚱請求の範囲第項
    の方法。  前蚘抗䜓は䞍溶化され、そしおCEAたたは
    暙識したCEAは酞による溶離によ぀おAG抗䜓か
    ら分離される特蚱請求の範囲第項の方法。  前蚘抗䜓は䞍溶化され、そしお未吞着組成物
    残郚は該抗䜓の掗浄によ぀お陀去される特蚱請求
    の範囲第項の方法。  前蚘抗䜓は氎䞍溶性担䜓ぞの共有結合によ぀
    お䞍溶化される特蚱請求の範囲第項の方法。  前蚘共有結合は前蚘抗䜓ず担䜓ずの間の有機
    結合基である特蚱請求の範囲第項の方法。  結合基はアミド、゚ステルたたぱヌテルで
    ある特蚱請求の範囲第項の方法。  担䜓は氎䞍溶性ポリオヌルである特蚱請求の
    範囲第項の方法。  前蚘抗䜓は氎䞍溶性抗䜓ぞの非共有結合吞着
    によ぀お䞍溶化される特蚱請求の範囲第項の方
    法。  担䜓はポリオレフむンである特蚱請求の範
    囲第項の方法。  担䜓は顆粒状である特蚱請求の範囲第
    項の方法。  CEAは未暙識であり、そしお䞍玔CEA含
    有組成物は腫瘍抜出物である特蚱請求の範囲第
    項たたは第項の方法。
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