JPH02231427A - ユキノシタ由来抗紫外線誘発突然変異作用剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 『発明の目的」 本発明は、抗突然変異作用物質（バイオアンチミュータ
ジエン）の新規な開発に関する．本発明は，その原科起
源がユキノシタ科植物のユキノシタ（Ｓａｘｉｆｒａｇ
ａ　　ｓｔｌｏｎｉｆｅｒａ　　Ｍｅｅｒｂ．）の全草
から抽出される，新規な抗突然変異作用物質に関する．
「産業上の利用分野］ 本発明による物質は，抗突然変異作用（パイオアンチミ
エータジエン》に優れ、効率の良いＤＮＡ修復作用を有
する．よって、本発明による物質はＰＭえば．医薬品．
医薬部外品，化粧品，食品（６！康食品）又は発酵工業
，遺伝子工学分野等に用いることが出来る．又，その利
用に当りでは、例えば、人体用の医薬品、Ｉ１！康食品
（！５Ｉ能性食品）化粧品に配合して用いることによっ
て，抗癌作用が期待され、あるいは、その予防を目的と
して利用でき．更に、動物用の医薬品，あるいは動物用
飼料に添加して利用することが出来る．「従米の技術」 従来から種々の変異原性物質が確認されているが、これ
らの物質が一つの原因となって，癌化な誘発することは
、すでに知られている．このため、最近では抗変興原性
作用を有した物質の開発が活発に行なわれている． ［発明が解決しようとする課題」 本発明者らは抗変異原性作用（パイオアンチミュータジ
エン）をもった物質を，天然物＝ｗｉ物中から求め，そ
の開発に当ることを課題となし，鋭意研究を続けてきた
結果，ユキノシタ科の植物，ユキノシタの全草から得ら
れた抽出物中に，効率の良いＤＮＡ修復作用をもつ、バ
イオアンチミュータジエンが存在することを見出すに至
ったのである． そこで、この物質がいかなる成分であるのか，その特定
に当った．その結果、以下に示すごと《の理化学的手段
をもって、特定することができ、本発明を完成するに至
ったのである． 【発明の構成Ｊ 本発明における抗突然変異作用物質（パイオアンチミュ
ータジエン）は，ユキノシタ科植物のユキノシタから得
られた縮合型タンニンをもってなる． ｒＢ題を解決するための手段Ｊ 【１｝出発原料 本発明によ・る抗突然変異作用物質は．ユキノシタ科植
物のユキノシタ（Ｓａｘｉｆｒａｇａｓｔｌｏｎｉｆｅ
ｒａ　　Ｍｅｅｒｂ．）又は，生薬名：虎耳草を出発原
料となし、抽出、精製することによって製造出来るが，
その際の出発原料は．ｌｌ織培養法によって得られた．
ユキノシタ又は虎耳草を用いることも出来る． 〔２１粗抽出法 ユキノシタの全軍を粉砕して、室温下で然水エタノール
（無水エタノールに特定する必要はな《．他の公知な親
木性有機溶媒，例えば、１．３−プチレングリコール、
ブロビレングリコール，ポリエチレングリコールなどの
ポリ才一ル，％ｌ１１媒、あるいは，グリセリン、アセ
トン、メタノールの単独，又はそれらの混液，あるいは
、水と前記各々の溶媒と任意に混合した溶液を用いるこ
とが出来る．）を加えて，２〜３日間浸漬した後，濾遇
を行って，濾液を分取する．濾過の際に得られた残漬物
を．再び、上記操作に従い、２回繰り返して，得られた
濾液を上記操作で得られた濾液と混合して，減圧濃縮を
行う＜ｇ圧濃縮は濾液中に含有される各種何機溶媒が完
全に除去されるまで行い、水懸濁液又は乾固した状態に
する）． この操作により、緑褐色の水懸濁化物又は乾燥物を得る
．次に、水懸濁化物又は乾燥物に対して，クロロホルム
を加えて、室温下で充分攪拌後、濾過を行い、残渣部を
分取して、再度，減圧旋縮による乾燥を行って、茶褐色
の租抽出物を得る． ＋３］精製分離法 前記工程で得られた粗抽出物に，１部の８０％エタノー
ル水溶液を加えて溶解させた後，３部の酢酸エチルを加
えて、室温下で充分攪拌した後，遠心分離して，その上
４１部（上層部）を分取．減圧乾燥する． 次に，ここで得られた減圧乾燥物に少量の無水エタノー
ルを加えて、溶解させた後、さらに，クロロホルムと水
の割合が２対ｌの混液を加えて、撹拌後，遠心分離して
上層部（水層１１Ｓ）を分取，再度、減圧乾燥して．ユ
キノシタ由来抗突然変異作用物質を得る（以下，便宜上
，この物質をユキノシタ物質と述べる．）． （４］理化学的性質に関する試験結果 ＜Ａ＞溶剤に対する溶解性試験 ユキノシタ物質は，水とエタノールの混液に易溶であり
、水、エタノールの単独では，やや難溶クロロホルムに
不溶であることが５１ｆ　Ｌｌされた．（Ｂ）分子量測
定試験 ユキノシタ物質は．ザリトリウス社製、セントリザルト
！，分子量１万を分別する限外濾過膜を通遇する．よっ
て分子量は、１万以下と確認された・ ＜Ｃ＞薄層クロマトグラム試験 シリカゲル６　０　Ｆ　ａｘｓにおいて，展開溶媒とし
て展開溶媒：エタノール／クロロホルム／水／酢酸＝（
８：４：２：１）を使用した場合のＲｆＭはｏ．８７と
６１［１１ｔ’ｌ．展開溶媒；ｎ−ブタノール／メタノ
ール／酢酸／水＝（２０：２０：５：４）を使用した場
合のＲｆ値は０．８９と確認された． （　３　》 展開溶媒；メタノール／クロロホルム／水＝（４：２：
Ｉ１を使用した場合，原点よりＲｆ値０　８２まで広が
ることが確認された．．展開溶媒：メタノール／クロロ
ホルム／水／アンモニア水＝（８：４：２：１）を使用
した場合，Ｒ点に留まり，クロマトグラム展開後，ヨウ
素蒸気中では．赤色に変色することがｉｌ［認された． （Ｄ）縮合型タンニン反応試験 ユキノシタ物質は，塩化第二鉄試液により、虹灰色を呈
する．又、ｎ−ブタノール中において，塩酸を加えて，
加熱するとき，アンドシアニシン様の淡赤色を呈するこ
とが確認され、よって、縮合型タンニンであることが確
認された．（Ｅ＞赤外吸収スペクトル試験 ユキノシタ物質のＫＢｒ法による赤外線吸叡スペクトル
（第１図に示す）からは，水酸基、カルボニル基，ベン
ゼン環の有する特有のピークが確認された． 以上，本発明によるユキノシタの全草から得られた，抗
突然変異作用物質（パイオアンチミエータジエン）の有
する特徴については、理化学的に求めることによって、
特定することが出来た．［５］作用又は効果に関する試
験結果 本発明によるユキノシタ物質について、抗突然変異作用
物質（パイオアンチミエータジエン）の測定を行った． 尚、測定法は、望月、賀田の方法（Ｍｕｔａｔｉｏｎ　
　Ｒｅｓｅａｃｈ．ｖｏｌ．９５．ｐ４５７．１９８２
年）に従い，紫外線照射方法及びパイオアンチミュータ
ジエンを加えた後の浸とう時間について，一部を改良し
て実施した．（＋１測定法 （ａｌ使用菌株 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　　Ｃｏｌｉ　　Ｂ／ｒＷＰ２
　　ｔｒｐを使用した． （ｂ）紫外線照射法 ｌ晩，前培養した菌をｌｏｏｍＭリン酸ナトリウム緩衝
液（ｐＨ７．０に！ＩＭ）で３回洗浄し，同緩衝液中で
撹拌しながら、４８．６Ｊ／ｍ”の紫外綿を貝財して（
直径９０ｍｍのシャーレ、液層は，約２ｍｍ）行った・ （ｃｌ検体（ユキノシタ物質）の！Ｉ１！１滅菌した試
験管に，溶解した３０μβのＤＭＳＯと５００ｕＩ２の
ｌｏｏｍＭリン酸ナトリウム緩衝液を入れておき、次に
，一定量の検体を加えて，調整溶液とする． （ｄ）変異原性の測定 前記（ｃ）で調整した溶液に，前記（ｂ）で得られた菌
懸濁液１００μｉを加え，３７℃、３０分即振とうを行
い，次に．２．５ｍｊ！の軟寒天を加えて、最小グルコ
ース寒天培地１偶五げた後，３７℃で，４８時間の培養
を行い、育成したコロニーをもって，突然変異した菌と
判定する．尚，生菌数の判定は、３７℃、３０分間振と
うした後の混液を．１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液
で，１０の６剰倍（１０’倍）に希釈して，前培養用液
体培地に寒天を加えて作った培地に広げ，３７℃，２４
時間の培養後のコロニー数を生菌数とした． （２》成績結果 ユキノシタ物質の抗突然変異作用について、その結果を
．次表（第ｌ表）をもって示す．尚，第１表中の生存率
は、紫外線無照射において、ユキノシタ物質無添加時の
生国数を１００％となし，これを基準に求めた。

一方，第１表中の突然変異率は、紫外線照射において、
ユキノシタ物質無添加時の突然変異頻度をｌＯＯ％とな
し，これを基準に求めた．すなわち，本発明において得
られたユキノシタ物質は，系中に添加することによって
、明らかに突然変異率が減少すること． 又，生国数の増加は、ｌ　Ｏ　Ｏ　μｇ　／　ｐ　ｌ　
ａ　ｔ　ｅ当りに右ける生ｍ数は，紫外ｍｌ照射前と同
じレベルまでに回復することが確認された． 【６｝発明の効果 本発明により得られたユキノシタ物質は，前記第ｌ表に
示したごとく、抗突然変異作用物質（パイオアンチミュ
ータジエン）として評価された．又、その作用について
まとめてみると，次のどと《述べることが出来る． ユキノシタ物質は、紫外線の照射によって誘発される、
突然変異を著明に抑制すること．ユキノシタ物質は，紫
外線に照射された大腸菌の生存率を著明に上昇させるこ
と． したがって，これらの作用は，紫外線によって誘発され
た，ＤＮＡの突然変異を効率よく修復し，正常に戻すた
めと考えられた． すなわち，本発明者らの研究は，植物中がら、ユキノシ
タ科植物，ユキノシタの全草がら抽出したエキス中に、
抗突然変異作用（バイ才アンチミュータジエン）を有す
る物質が存在することを発見し，これがいかなる物質で
あるのか，その追求，研究に当り，単雌と同定に成功し
，本発明を見出すに至った． 従来，ユキノシタ植物には，抗突然変異作用（パイオア
ンチミエータジエン）があることは、まったく知られて
おらず，本発明の成功は、植物（天然産物）の有効利用
を促進するものとして，そのもたらす効果は大きく，よ
って、発酵工業、遺伝子工学を用いた医薬品の＃ｌ！発
や医薬部外品．化粧品，食品等への応用が可能であり．
又，生命工学、生物学．生体学など．種々の分野に渡り
、利用することが出来る．

【図面の簡単な説明】

第１図は，ユキノシタ物質の赤外線吸暇スペクトルであ
る． 第　１　図 透過率（ｚ）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１） ユキノシタ科植物のユキノシタの全草から抽出された、
   縮合型タンニン物質を含有し、次に示す（ａ）〜（ｃ）
   又は（ｄ）〜（ｆ）を特徴とする抗突然変異作用物質。 （ａ）水とエタノールの混液に易溶、水、エタノールの
   単独では、やや難溶、クロロホルム に不溶である。 （ｂ）分子量が１万以下にある。 （ｃ）薄層クロマトグラム（シリカゲル６０Ｆ＿２＿４
   ＿５；展開溶媒＝エタノール／クロロホルム／水／酢酸
   　８：４：２：１）上の Ｒｆ値が０．８７にある。 （ｄ）薄層クロマトグラム（シリカゲル６０Ｆ＿２＿４
   ＿５；展開溶媒＝ｎ−ブタノール／メタノール／酢酸／
   水　２０：２０：５：４） 上のＲｆ値が０．８９にある。 （ｅ）薄層クロマトグラム（シリカゲル６０Ｆ＿２＿４
   ＿５；展開溶媒＝メタノール／クロロホルム／水　４：
   ２：１）上のＲｆ値が原点 から０．８２にある。 （ｆ）タンニン反応確認試験が陽性である。