JPH02231076A - デキストラン修飾スーパーオキシドジスムターゼ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野〕 本発明は、生体内の酸素分子から発生したスーパーオキ
シド（０７）による組織障害の治療に有用なデキストラ
ンで修飾されたスーパーオキシドジスムターゼ（以下、
ＳＯＤと略す）に関するものである． 〔従来技術の説明〕 スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）は、下弐に示
す不均化反応によってスーパーオキシド（０；）を消失
させる作用を持つ酵素である。

ＳＯＤ ２０■＋２Ｈ　　　　　　　　Ｏ．＋Ｈ，Ｏ■従って、
ＳＯＤは、生体内で酸素分子から発生した０；による組
織障害、例えば、変形性関節炎、慢性関節リウマチ、放
射線照射による障害、紫外線による障害、未熟児酸素網
膜症、白内障、アドリアマイシンなどの制癌剤の副作用
、虚血部分への血流再開に伴う障害などに対する有効な
治療薬として注目されている． このようにＳＯＤが医薬として有望であるにもかかわら
ず、ＳＯＤの血流内半減期が非常に短い（約５分）ため
に、その薬理活性が充分に発揮されない場合が多い． ＳＯＤの血流内半減期が非常に短い原因としては、その
分子量（３２，０００）が腎糸球体の濾過限界値（分子
量で約５０，０００）よりも小さいために血中から速や
かに消失し、尿中に排泄されることが考えられている． 従って、ＳＯＤの薬理活性を充分に発揮させるために、
ポリエチレングリコール（Ｐｙａｔｏｋ，Ｐ．Ｓ，ｅｔ
　　ａｔ，；Ｒｅｓｅａｒｃｈ　　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａ
ｔｉｏｎｓ　　ｉｎ　　Ｃｈｅｍｉｃａｔ　　　Ｐａｔ
ｈｏｌｏｇｙ　　　ａｎｄ　　　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏ
ｇｙ．２９，１１３　　（１９８０））、ラットアルブ
ミン（Ｗｏｎｇ，Ｋ．ｅｔ　　ａｌ．；Ａｇｅｎｔ　　
ａｎｄ　　Ａｃｔｉｏｎｓ，上Ｌ２３１　　（１９８０
））、フイコール（ＭｃＣｏｒｄ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ　　ａ
ｌ，；Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　　ｏｆ　　Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ　　Ａｃａｄｅｍｙｏｆ　　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，
Ｕ，Ｓ，Ａ．７工，１１５９　（１９８０））、ポリア
ルキレングリコール（特開昭６１−２４９３８８）やイ
ヌリン（特開昭５８−３２８２６）などを用いてＳＯＤ
を巨大分子化させ、ＳＯＤの血中半減期を増加させる試
みがなされている． ところで、巨大分子化したＳＯＤを通常の静脈投与剤と
して使用する場合には、その血中半減期が長くなるのみ
ならず、その酵素活性保持率が高く、かつ医薬としての
安全性が高いことが望ましい． しかしながら、これらの巨大分子化ＳＯＤには、酵素活
性保持率、血中半減期の長さ、抗原性および医薬として
の安全性に対して十分には満足できないという問題があ
る。

（発明が解決しようとする問題点〕 本発明の目的は、生体内の酸素分子から発生したＯ；に
よる組織障害の治療に有用なＳＯＤと医薬として安全性
が確認されているデキストランとを結合させることによ
って得られた修飾ＳＯＤ（以下、ｒ修飾ＳＯＤＪと略す
）を提供するものである． 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは、前記の問題点を解決するために鋭意研究
した結果、本発明の『修飾ＳＯＤＪは、ＳＯＤ修飾に伴
うＳＯＤ活性の低下は殆ど認められず、また、ｒ修飾Ｓ
ＯＤＪの血中半減期も顕著に長くなることを見出し、本
発明を完成するに至った． 即ち、本発明は、デキストランで修飾されたＳＯＤに関
するものである． 以下、本発明について詳しく説明する。

本発明のｒ修飾ＳＯＤＪは、ＳＯＤと多糖類であるデキ
ストランとを化学的に結合させて得られたものであり、
約８５％の酵素活性保持率と約１６時間の血中半減期を
示すものである．本発明のｒ修飾ＳＯＤＪの作製に用い
るＳＯＤとしては、ウシ、ヒトなどの動物、ホウレン草
などの植物、及びセラチアなどの微生物に由来するもの
を挙げることができるが、ヒトに対する抗原性を考慮し
た医薬のｒ修飾ＳＯＤＪとしては、ヒ｝ＳＯＤを用いる
ことが好ましい． そのようなヒトＳＯＤとしては、ヒト赤血球、胎盤など
のＳＯＤを用いることもできるが、近年、遺伝子工学技
術を応用して生産されたヒ｝ＳＯＤ（例えば、特開昭６
１−１１１６９０など）を用いると、大量に安定した試
料を得られるのでさらに好ましい． 本発明のｒ修飾ＳＯＤＪの製造に用いるデキストランと
しては、平均分子量が４０，０００のものが好ましい． 本発明のｒ修飾ＳＯＤＪの製造におけるＳＯＤとデキス
トランとの結合割合は、１分子のＳＯＤ当たり１〜１０
分子がよく、好ましくは３〜５分子がよい． 本発明の『修飾ＳＯＤＪは、ＳＯＤの官能基（例えば、
アミノ基またはカルボキシル基）とデキストランの官能
基（例えば、カルボキシル基、アミノ基または水酸基）
とを利用して、好ましくはｐ　Ｈ　６．　０〜１０、さ
らに好まし《はｐ　Ｈ　７．　０〜８．５で０．１〜１
０％の濃度としたＳＯＤと活性化デキストランを結合さ
せたものであり、例えば、■デキストランの水酸基に塩
化シアヌルを反応させた後、これをそのトリアジン環を
介してＳＯＤのアミノ基に結合させることによってＳＯ
Ｄとデキストランとを結合させる方法 ■デキストランのカルボキシル基をＮ−ヒドロキシコハ
ク酸とジシクロへキシル力ルポジイミドとを用いてエス
テルを導入し、これをＳＯＤのアミノ基に結合させるこ
とによらてＳＯＤとデキストランとを結合させる方法 ■デキストランの水酸基に無水コハク酸を用いてカルポ
キシル基を導入し、さらにそのカルポキシル基をＮ−ヒ
ドロキシコハク酸とジシクロへキシルカルボジイミドと
を用いてエステルを導入し、これをＳＯＤのアミノ基に
結合させることによってＳＯＤとデキストランとを結合
させる方法などの方法で作製することができる． このようにして、デキストランとＳＯＤとを結合するこ
とによって得られるｒ修飾ＳＯＤＪは、８３％の酵素活
性保持率を有するものである。

〔実施例〕

以下、本発明を実施例によって具体的に説明する．なお
、これらの実施例は、本発明を例示するためのものであ
って、本発明の範囲を限定するものではない． 本発明の実施例に示したｒ修飾ＳＯＤＪの活性保持率は
、大柳の示した方法（Ｏｙａｎａｇｕｉ，Ｙ．；Ａｎａ
ｌｙｔｉｃａｌ　　ＢｉｏｃｈｅｍｉＳｔｒｙ．１４２
，２９０−２９６　（１９８４））に準じてデキストラ
ンの修飾前後におけるＳＯＤの比活性を求め、その変化
から求めた。

また、デキストランがＳＯＤＩ分子当たり何分子結合す
るかは、分析用の高速ゲル濾過カラムである３　０　０
　０　ＰＷおよび５０００ＰＷ（いづれも、東ソー社製
）を用いて『修飾ＳＯＤＪの分子量を測定し、その分子
量とＳＯＤの分子量とを比較することによって決定した
． 実施例１ １　００ｍｇのデキストラン（平均分子量は４０，００
０．シグマ社製．）を２ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルム
アミドに溶解し、これに１　０ｍｇのＮーヒドロキシコ
ハク酸イミドと２０ｍｇのジシクロへキシルカルボイミ
ドを加え、室温で穏やかに１５時間攪拌した．生じた沈
澱物を濾過して除去し、得られた濾液に５０ｍｊ！のエ
チルエーテルを加え、生じた沈澱を濾過分取し、乾燥し
て７０ｍｇの活性化デキストランを得た． このようにして得られた４　０ｍｇの活性化デキストラ
ンをヒトＣｕ，Ｚｎ−ＳＯＤ溶液〔特開昭６１−１１１
６９０号に示されたヒトＣｕ，Ｚｎ−ＳＯＤ生産菌Ｅ．
ｃｏｌｉ　　Ｗ３１１０　（ｐＵＢＥ２）で生産し、精
製して得られた２５ｍｇを１０ｍｌの０．１Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．５）に溶解．〕に溶解し、室温で穏やか
に３時間攪拌した．その後、水に対して透析し、さらに
凍結乾燥することによて５５ｍｇのｒ修飾ＳＯＤＪを得
た．デキストランはＳＯＤ１分子当たり約４分子結合し
ており、その酵素活性保持率は８３％であった． 実施例２ ウイスタ一系ラット（♂、体重は２５０±３０ｇ）の２
匹に、生理食塩水に溶解した実施例１の『修飾ＳＯＤＪ
溶液を、１匹当たりＳＯＤの蒼白質量として０．　６　
ｍ　ｇづつ総頚静脈へ注入した．注入から、２分、５分
、１５分、３０分、６０分、９０分、１２０分、１５０
分、１８０分経過時に０．　４　ｍ　ｌづつ採血し、．
その血漿中のＳＯＤ量を前記の大柳のＳＯＤ活性測定法
で測定した．『修飾ＳＯＤＪの血流内半減期を求めるた
めに、これらの血漿中のＳＯＤの相対活性を時間に対し
てプロットした結果、その半減期は、約１６時間であっ
た． 比較例１ 未修飾のＳＯＤの血流内半減期を求めるために、実施例
２の場合と同様にして、ウイスタ一系ラット（♂、体重
は２５０±３０ｇ）を用いて血漿中のＳＯＤの相対活性
及び相対濃度を時間に対してプロットした結果、その半
減期は、相対活性及び相対濃度のいずれの場合において
も約５分であった． 〔発明の効果〕 本発明の酵素活性保持率が高《、かつ血流内半減期が改
善されたｒ修飾ＳＯＤＪは、静脈投与剤としてのＳＯＤ
の薬理効果を高めるものである．特許出願人　　宇部興
産株式会社

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. デキストランで修飾されたスーパーオキシドジスムター
   ゼ。