JPH02231076A - デキストラン修飾スーパーオキシドジスムターゼ - Google Patents
デキストラン修飾スーパーオキシドジスムターゼInfo
- Publication number
- JPH02231076A JPH02231076A JP1050003A JP5000389A JPH02231076A JP H02231076 A JPH02231076 A JP H02231076A JP 1050003 A JP1050003 A JP 1050003A JP 5000389 A JP5000389 A JP 5000389A JP H02231076 A JPH02231076 A JP H02231076A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sod
- dextran
- modified
- enzyme
- life
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 title claims abstract description 45
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 title claims abstract description 45
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 title claims abstract description 23
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 8
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 abstract description 6
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 abstract description 4
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 abstract description 4
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 3
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical compound ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 abstract description 3
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 abstract description 3
- JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-triazine Chemical group C1=CN=NN=C1 JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241001302584 Escherichia coli str. K-12 substr. W3110 Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- 206010033546 Pallor Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 101000930457 Rattus norvegicus Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010038933 Retinopathy of prematurity Diseases 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 241000219315 Spinacia Species 0.000 description 1
- 235000009337 Spinacia oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000006854 communication Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000007323 disproportionation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野〕
本発明は、生体内の酸素分子から発生したスーパーオキ
シド(07)による組織障害の治療に有用なデキストラ
ンで修飾されたスーパーオキシドジスムターゼ(以下、
SODと略す)に関するものである. 〔従来技術の説明〕 スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)は、下弐に示
す不均化反応によってスーパーオキシド(0;)を消失
させる作用を持つ酵素である。
シド(07)による組織障害の治療に有用なデキストラ
ンで修飾されたスーパーオキシドジスムターゼ(以下、
SODと略す)に関するものである. 〔従来技術の説明〕 スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)は、下弐に示
す不均化反応によってスーパーオキシド(0;)を消失
させる作用を持つ酵素である。
SOD
20■+2H O.+H,O■従って、
SODは、生体内で酸素分子から発生した0;による組
織障害、例えば、変形性関節炎、慢性関節リウマチ、放
射線照射による障害、紫外線による障害、未熟児酸素網
膜症、白内障、アドリアマイシンなどの制癌剤の副作用
、虚血部分への血流再開に伴う障害などに対する有効な
治療薬として注目されている. このようにSODが医薬として有望であるにもかかわら
ず、SODの血流内半減期が非常に短い(約5分)ため
に、その薬理活性が充分に発揮されない場合が多い. SODの血流内半減期が非常に短い原因としては、その
分子量(32,000)が腎糸球体の濾過限界値(分子
量で約50,000)よりも小さいために血中から速や
かに消失し、尿中に排泄されることが考えられている. 従って、SODの薬理活性を充分に発揮させるために、
ポリエチレングリコール(Pyatok,P.S,et
at,;Research Communica
tions in Chemicat Pat
hology and Pharmacolo
gy.29,113 (1980))、ラットアルブ
ミン(Wong,K.et al.;Agent
and Actions,上L231 (1980
))、フイコール(McCord,J.M.et a
l,;Proceedings of Natio
nal Academyof Sciences,
U,S,A.7工,1159 (1980))、ポリア
ルキレングリコール(特開昭61−249388)やイ
ヌリン(特開昭58−32826)などを用いてSOD
を巨大分子化させ、SODの血中半減期を増加させる試
みがなされている. ところで、巨大分子化したSODを通常の静脈投与剤と
して使用する場合には、その血中半減期が長くなるのみ
ならず、その酵素活性保持率が高く、かつ医薬としての
安全性が高いことが望ましい. しかしながら、これらの巨大分子化SODには、酵素活
性保持率、血中半減期の長さ、抗原性および医薬として
の安全性に対して十分には満足できないという問題があ
る。
SODは、生体内で酸素分子から発生した0;による組
織障害、例えば、変形性関節炎、慢性関節リウマチ、放
射線照射による障害、紫外線による障害、未熟児酸素網
膜症、白内障、アドリアマイシンなどの制癌剤の副作用
、虚血部分への血流再開に伴う障害などに対する有効な
治療薬として注目されている. このようにSODが医薬として有望であるにもかかわら
ず、SODの血流内半減期が非常に短い(約5分)ため
に、その薬理活性が充分に発揮されない場合が多い. SODの血流内半減期が非常に短い原因としては、その
分子量(32,000)が腎糸球体の濾過限界値(分子
量で約50,000)よりも小さいために血中から速や
かに消失し、尿中に排泄されることが考えられている. 従って、SODの薬理活性を充分に発揮させるために、
ポリエチレングリコール(Pyatok,P.S,et
at,;Research Communica
tions in Chemicat Pat
hology and Pharmacolo
gy.29,113 (1980))、ラットアルブ
ミン(Wong,K.et al.;Agent
and Actions,上L231 (1980
))、フイコール(McCord,J.M.et a
l,;Proceedings of Natio
nal Academyof Sciences,
U,S,A.7工,1159 (1980))、ポリア
ルキレングリコール(特開昭61−249388)やイ
ヌリン(特開昭58−32826)などを用いてSOD
を巨大分子化させ、SODの血中半減期を増加させる試
みがなされている. ところで、巨大分子化したSODを通常の静脈投与剤と
して使用する場合には、その血中半減期が長くなるのみ
ならず、その酵素活性保持率が高く、かつ医薬としての
安全性が高いことが望ましい. しかしながら、これらの巨大分子化SODには、酵素活
性保持率、血中半減期の長さ、抗原性および医薬として
の安全性に対して十分には満足できないという問題があ
る。
(発明が解決しようとする問題点〕
本発明の目的は、生体内の酸素分子から発生したO;に
よる組織障害の治療に有用なSODと医薬として安全性
が確認されているデキストランとを結合させることによ
って得られた修飾SOD(以下、r修飾SODJと略す
)を提供するものである. 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは、前記の問題点を解決するために鋭意研究
した結果、本発明の『修飾SODJは、SOD修飾に伴
うSOD活性の低下は殆ど認められず、また、r修飾S
ODJの血中半減期も顕著に長くなることを見出し、本
発明を完成するに至った. 即ち、本発明は、デキストランで修飾されたSODに関
するものである. 以下、本発明について詳しく説明する。
よる組織障害の治療に有用なSODと医薬として安全性
が確認されているデキストランとを結合させることによ
って得られた修飾SOD(以下、r修飾SODJと略す
)を提供するものである. 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは、前記の問題点を解決するために鋭意研究
した結果、本発明の『修飾SODJは、SOD修飾に伴
うSOD活性の低下は殆ど認められず、また、r修飾S
ODJの血中半減期も顕著に長くなることを見出し、本
発明を完成するに至った. 即ち、本発明は、デキストランで修飾されたSODに関
するものである. 以下、本発明について詳しく説明する。
本発明のr修飾SODJは、SODと多糖類であるデキ
ストランとを化学的に結合させて得られたものであり、
約85%の酵素活性保持率と約16時間の血中半減期を
示すものである.本発明のr修飾SODJの作製に用い
るSODとしては、ウシ、ヒトなどの動物、ホウレン草
などの植物、及びセラチアなどの微生物に由来するもの
を挙げることができるが、ヒトに対する抗原性を考慮し
た医薬のr修飾SODJとしては、ヒ}SODを用いる
ことが好ましい. そのようなヒトSODとしては、ヒト赤血球、胎盤など
のSODを用いることもできるが、近年、遺伝子工学技
術を応用して生産されたヒ}SOD(例えば、特開昭6
1−111690など)を用いると、大量に安定した試
料を得られるのでさらに好ましい. 本発明のr修飾SODJの製造に用いるデキストランと
しては、平均分子量が40,000のものが好ましい. 本発明のr修飾SODJの製造におけるSODとデキス
トランとの結合割合は、1分子のSOD当たり1〜10
分子がよく、好ましくは3〜5分子がよい. 本発明の『修飾SODJは、SODの官能基(例えば、
アミノ基またはカルボキシル基)とデキストランの官能
基(例えば、カルボキシル基、アミノ基または水酸基)
とを利用して、好ましくはp H 6. 0〜10、さ
らに好まし《はp H 7. 0〜8.5で0.1〜1
0%の濃度としたSODと活性化デキストランを結合さ
せたものであり、例えば、■デキストランの水酸基に塩
化シアヌルを反応させた後、これをそのトリアジン環を
介してSODのアミノ基に結合させることによってSO
Dとデキストランとを結合させる方法 ■デキストランのカルボキシル基をN−ヒドロキシコハ
ク酸とジシクロへキシル力ルポジイミドとを用いてエス
テルを導入し、これをSODのアミノ基に結合させるこ
とによらてSODとデキストランとを結合させる方法 ■デキストランの水酸基に無水コハク酸を用いてカルポ
キシル基を導入し、さらにそのカルポキシル基をN−ヒ
ドロキシコハク酸とジシクロへキシルカルボジイミドと
を用いてエステルを導入し、これをSODのアミノ基に
結合させることによってSODとデキストランとを結合
させる方法などの方法で作製することができる. このようにして、デキストランとSODとを結合するこ
とによって得られるr修飾SODJは、83%の酵素活
性保持率を有するものである。
ストランとを化学的に結合させて得られたものであり、
約85%の酵素活性保持率と約16時間の血中半減期を
示すものである.本発明のr修飾SODJの作製に用い
るSODとしては、ウシ、ヒトなどの動物、ホウレン草
などの植物、及びセラチアなどの微生物に由来するもの
を挙げることができるが、ヒトに対する抗原性を考慮し
た医薬のr修飾SODJとしては、ヒ}SODを用いる
ことが好ましい. そのようなヒトSODとしては、ヒト赤血球、胎盤など
のSODを用いることもできるが、近年、遺伝子工学技
術を応用して生産されたヒ}SOD(例えば、特開昭6
1−111690など)を用いると、大量に安定した試
料を得られるのでさらに好ましい. 本発明のr修飾SODJの製造に用いるデキストランと
しては、平均分子量が40,000のものが好ましい. 本発明のr修飾SODJの製造におけるSODとデキス
トランとの結合割合は、1分子のSOD当たり1〜10
分子がよく、好ましくは3〜5分子がよい. 本発明の『修飾SODJは、SODの官能基(例えば、
アミノ基またはカルボキシル基)とデキストランの官能
基(例えば、カルボキシル基、アミノ基または水酸基)
とを利用して、好ましくはp H 6. 0〜10、さ
らに好まし《はp H 7. 0〜8.5で0.1〜1
0%の濃度としたSODと活性化デキストランを結合さ
せたものであり、例えば、■デキストランの水酸基に塩
化シアヌルを反応させた後、これをそのトリアジン環を
介してSODのアミノ基に結合させることによってSO
Dとデキストランとを結合させる方法 ■デキストランのカルボキシル基をN−ヒドロキシコハ
ク酸とジシクロへキシル力ルポジイミドとを用いてエス
テルを導入し、これをSODのアミノ基に結合させるこ
とによらてSODとデキストランとを結合させる方法 ■デキストランの水酸基に無水コハク酸を用いてカルポ
キシル基を導入し、さらにそのカルポキシル基をN−ヒ
ドロキシコハク酸とジシクロへキシルカルボジイミドと
を用いてエステルを導入し、これをSODのアミノ基に
結合させることによってSODとデキストランとを結合
させる方法などの方法で作製することができる. このようにして、デキストランとSODとを結合するこ
とによって得られるr修飾SODJは、83%の酵素活
性保持率を有するものである。
以下、本発明を実施例によって具体的に説明する.なお
、これらの実施例は、本発明を例示するためのものであ
って、本発明の範囲を限定するものではない. 本発明の実施例に示したr修飾SODJの活性保持率は
、大柳の示した方法(Oyanagui,Y.;Ana
lytical BiochemiStry.142
,290−296 (1984))に準じてデキストラ
ンの修飾前後におけるSODの比活性を求め、その変化
から求めた。
、これらの実施例は、本発明を例示するためのものであ
って、本発明の範囲を限定するものではない. 本発明の実施例に示したr修飾SODJの活性保持率は
、大柳の示した方法(Oyanagui,Y.;Ana
lytical BiochemiStry.142
,290−296 (1984))に準じてデキストラ
ンの修飾前後におけるSODの比活性を求め、その変化
から求めた。
また、デキストランがSODI分子当たり何分子結合す
るかは、分析用の高速ゲル濾過カラムである3 0 0
0 PWおよび5000PW(いづれも、東ソー社製
)を用いて『修飾SODJの分子量を測定し、その分子
量とSODの分子量とを比較することによって決定した
. 実施例1 1 00mgのデキストラン(平均分子量は40,00
0.シグマ社製.)を2mlのN,N−ジメチルホルム
アミドに溶解し、これに1 0mgのNーヒドロキシコ
ハク酸イミドと20mgのジシクロへキシルカルボイミ
ドを加え、室温で穏やかに15時間攪拌した.生じた沈
澱物を濾過して除去し、得られた濾液に50mj!のエ
チルエーテルを加え、生じた沈澱を濾過分取し、乾燥し
て70mgの活性化デキストランを得た. このようにして得られた4 0mgの活性化デキストラ
ンをヒトCu,Zn−SOD溶液〔特開昭61−111
690号に示されたヒトCu,Zn−SOD生産菌E.
coli W3110 (pUBE2)で生産し、精
製して得られた25mgを10mlの0.1Mリン酸緩
衝液(pH7.5)に溶解.〕に溶解し、室温で穏やか
に3時間攪拌した.その後、水に対して透析し、さらに
凍結乾燥することによて55mgのr修飾SODJを得
た.デキストランはSOD1分子当たり約4分子結合し
ており、その酵素活性保持率は83%であった. 実施例2 ウイスタ一系ラット(♂、体重は250±30g)の2
匹に、生理食塩水に溶解した実施例1の『修飾SODJ
溶液を、1匹当たりSODの蒼白質量として0. 6
m gづつ総頚静脈へ注入した.注入から、2分、5分
、15分、30分、60分、90分、120分、150
分、180分経過時に0. 4 m lづつ採血し、.
その血漿中のSOD量を前記の大柳のSOD活性測定法
で測定した.『修飾SODJの血流内半減期を求めるた
めに、これらの血漿中のSODの相対活性を時間に対し
てプロットした結果、その半減期は、約16時間であっ
た. 比較例1 未修飾のSODの血流内半減期を求めるために、実施例
2の場合と同様にして、ウイスタ一系ラット(♂、体重
は250±30g)を用いて血漿中のSODの相対活性
及び相対濃度を時間に対してプロットした結果、その半
減期は、相対活性及び相対濃度のいずれの場合において
も約5分であった. 〔発明の効果〕 本発明の酵素活性保持率が高《、かつ血流内半減期が改
善されたr修飾SODJは、静脈投与剤としてのSOD
の薬理効果を高めるものである.特許出願人 宇部興
産株式会社
るかは、分析用の高速ゲル濾過カラムである3 0 0
0 PWおよび5000PW(いづれも、東ソー社製
)を用いて『修飾SODJの分子量を測定し、その分子
量とSODの分子量とを比較することによって決定した
. 実施例1 1 00mgのデキストラン(平均分子量は40,00
0.シグマ社製.)を2mlのN,N−ジメチルホルム
アミドに溶解し、これに1 0mgのNーヒドロキシコ
ハク酸イミドと20mgのジシクロへキシルカルボイミ
ドを加え、室温で穏やかに15時間攪拌した.生じた沈
澱物を濾過して除去し、得られた濾液に50mj!のエ
チルエーテルを加え、生じた沈澱を濾過分取し、乾燥し
て70mgの活性化デキストランを得た. このようにして得られた4 0mgの活性化デキストラ
ンをヒトCu,Zn−SOD溶液〔特開昭61−111
690号に示されたヒトCu,Zn−SOD生産菌E.
coli W3110 (pUBE2)で生産し、精
製して得られた25mgを10mlの0.1Mリン酸緩
衝液(pH7.5)に溶解.〕に溶解し、室温で穏やか
に3時間攪拌した.その後、水に対して透析し、さらに
凍結乾燥することによて55mgのr修飾SODJを得
た.デキストランはSOD1分子当たり約4分子結合し
ており、その酵素活性保持率は83%であった. 実施例2 ウイスタ一系ラット(♂、体重は250±30g)の2
匹に、生理食塩水に溶解した実施例1の『修飾SODJ
溶液を、1匹当たりSODの蒼白質量として0. 6
m gづつ総頚静脈へ注入した.注入から、2分、5分
、15分、30分、60分、90分、120分、150
分、180分経過時に0. 4 m lづつ採血し、.
その血漿中のSOD量を前記の大柳のSOD活性測定法
で測定した.『修飾SODJの血流内半減期を求めるた
めに、これらの血漿中のSODの相対活性を時間に対し
てプロットした結果、その半減期は、約16時間であっ
た. 比較例1 未修飾のSODの血流内半減期を求めるために、実施例
2の場合と同様にして、ウイスタ一系ラット(♂、体重
は250±30g)を用いて血漿中のSODの相対活性
及び相対濃度を時間に対してプロットした結果、その半
減期は、相対活性及び相対濃度のいずれの場合において
も約5分であった. 〔発明の効果〕 本発明の酵素活性保持率が高《、かつ血流内半減期が改
善されたr修飾SODJは、静脈投与剤としてのSOD
の薬理効果を高めるものである.特許出願人 宇部興
産株式会社
Claims (1)
- デキストランで修飾されたスーパーオキシドジスムター
ゼ。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1050003A JPH02231076A (ja) | 1989-03-03 | 1989-03-03 | デキストラン修飾スーパーオキシドジスムターゼ |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1050003A JPH02231076A (ja) | 1989-03-03 | 1989-03-03 | デキストラン修飾スーパーオキシドジスムターゼ |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH02231076A true JPH02231076A (ja) | 1990-09-13 |
Family
ID=12846825
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1050003A Pending JPH02231076A (ja) | 1989-03-03 | 1989-03-03 | デキストラン修飾スーパーオキシドジスムターゼ |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH02231076A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5238837A (en) * | 1991-02-05 | 1993-08-24 | Kuraray Co., Ltd. | Superoxide dismutase derivatives |
US5834273A (en) * | 1991-03-28 | 1998-11-10 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Heat-stable and water soluble modified enzymes |
-
1989
- 1989-03-03 JP JP1050003A patent/JPH02231076A/ja active Pending
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5238837A (en) * | 1991-02-05 | 1993-08-24 | Kuraray Co., Ltd. | Superoxide dismutase derivatives |
US5834273A (en) * | 1991-03-28 | 1998-11-10 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Heat-stable and water soluble modified enzymes |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5080891A (en) | Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols | |
AU2015242970B2 (en) | Glycopolysialylation of non-blood coagulation proteins | |
US5177059A (en) | Polymyxin B conjugates | |
JPH0525470B2 (ja) | ||
JPH0770195A (ja) | 糖修飾インターフェロン | |
JPH07508727A (ja) | 生体分子と結合したポリオキシメチレン−オキシエチレン共重合体 | |
ES2284670T3 (es) | Procedimiento para fabricacion de vehiculos de oxigeno sinteticos a partir de hemoglobinas reticuladas covalentemente con propiedades funcionales mejoradas mediante reticulacion en presencia de efectores que no reaccionan quimicamente de la afinidad por oxigeno de la hemoglobina. | |
JP2022058911A (ja) | 非血液凝固タンパク質の糖ポリシアル酸化 | |
EP0377613B1 (en) | Conjugates of superoxide dismutase | |
AU639952B2 (en) | Polymyxin conjugates | |
JP2978187B2 (ja) | 修飾スーパーオキサイドディスムターゼの製造法 | |
JPH02231078A (ja) | ヒアルロン酸修飾スーパーオキシドジスムターゼ | |
ES2395894T3 (es) | Hemoglobinas de mamífero compatibles con plasma sanguíneo, reticuladas y conjugadas con poli(óxidos de alquileno) como portadores de oxígeno médicos artificiales, su preparación y su uso | |
WO2021168996A1 (en) | Catalase nanocapsules and methods for use | |
JP3209338B2 (ja) | ポリエチレングリコール修飾アルギニンデイミナーゼおよびその製造法 | |
JPH02231076A (ja) | デキストラン修飾スーパーオキシドジスムターゼ | |
JPH02231075A (ja) | デキストラン硫酸修飾スーパーオキシドジスムターゼ | |
JPH0195774A (ja) | 修飾スーパーオキサイド・ジスムターゼ | |
JPH02231077A (ja) | ヘパリン修飾スーパーオキシドジスムターゼ | |
AU711200B2 (en) | Polymyxin conjugates | |
JP2545729B2 (ja) | メトトレキセート誘導体とピラン共重合体の高分子結合体及びその製造方法 | |
US20030236224A1 (en) | Modified polysaccharides exhibiting altered biological recognition | |
JPH09500262A (ja) | 毒素結合性バイオポリマーの製造、その使用 | |
JPH02273176A (ja) | グリコサミノグリカンで修飾されたスーパーオキシドジスムターゼ及びその製造法 | |
JP3522798B2 (ja) | 糖修飾蛋白質の製造法 |