JPH02184336A - リポソームの安定化方法、安定化リポソーム組成物、ならびにそれを含む医薬組成物および化粧料組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、水和脂質薄ト目（ｂｙｄｒａｔｅｄ　ｌｉｐ
ｉｄＩａｍｅｌｌａｒ　ｐｈａｓｅｓ）の安定化方法、
安定化水和脂質ｔ″４ｖ相糾成物、ならびにそれを含む
医薬組成物および化粧料組成物に関する。さらに詳しく
は、本発明は、アテロコラーゲンおよびグリコザミノグ
リカン類に基いた安定化支持体 （ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ　５ｕｐｐｏｒｔ）の使用に
よる、たとえはリポソームなどの水和脂質動用の安定化
方法、たとえはリポソームなどのような水和脂質動用の
安定化された組成物、ならびにそれを含む医薬組成物お
よび化粧料組成物に関する。

［従来の技術・発明か解決しようとする課題］水和脂質
動用、すなわちリポソーム類によって構成される特殊な
形態は、バングハム（ＢＡＮＧＩＩＡＭ）の仕事（バン
グハムら、ジャーナル・オフ・モレキュラー・バイオロ
ジー （Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ）　１３巻、　２３８〜２５３頁（］９６５）
およびハングハムら、ケミストリー・アンド・フィジッ
クス・オフ・リピッズ（Ｃｂｅｍ、Ｐｈｙｓ、Ｉ、１ｐ
ｉｄｓ）　１巻、２５５頁（ｂ９Ｂ７）参照）以来知ら
れている。リポソーム類については他にも多くの論文か
発表されている（パパハジョポウロス（ＰＡＰＡＨＡＤ
ＪＯＰＯＬＩＬＯ８）、バイオロジー・工ｌ・・バイオ
ロジー・アクタ （Ｂｉｏｃｈｊｍ、Ｂｊｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ）１３５
巻、　６２４〜６３８頁（ｂ９８７）およびワイスマン
（ＷＥＩＳＳＭＡＮ）　、ジャナル・オフ・リピッス・
リザーチ（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｌｉｐｉｄｓ　Ｒｅ５
ｅａｒｃｈ）　９巻、３１．０−３１８頁（＋９［ｉ８
）参照）。

リン脂質カプセルであるリポソーム類は、活性物質をそ
れか吸収される細胞の方へ輸送させることができるため
美容ケア（ｂｅａｕｔｙ　ｃａｒｅ）や薬学分野におい
て、まずまず重要になってきていることか知られている
。実際、バングハムの仕事により知られるようになった
ことだが、リン脂質の膜が細胞膜と非常に類似している
というリン脂質の性質のため、結果として２つの膜（ｅ
ｎｖｅｌｏｐｅ）の融合に至る。

あいにくリポソーム類は安定性か低いためこれらの開発
はひどく遅れており、この事が主要な問題をなしている
。多くのはあい、リポツム類を構成している保水槽（ｒ
ｅｓｅｒｖｏｉ　ｒｓ）は、標的細胞と接触を開始する
前にこわれる。さらに、リポソーム類の完成された製品
との統合（ｂ吋ｃｇｒａｔｉｏｎ）はかなりしはしは保
水槽の破壊をひきおこす。とくに、美容ケアにおいて、
脂肪相はリン脂質膜の開放をひきおこす傾向かあるため
、リポソーム類を含むエマルジョンの製造はきわめて扱
いにくい仕事である。これに加えて生体親和性でなけれ
ばならないような物質によるリポソーム類の安定化に対
して、多くの仕事がなされてきた。

リポソーム類の安定化のだめの様々な溶液、とくに、親
水コロイドのゲル形態（ａ　ｇｅｌ　ｆｏｒｍｉｎ　ａ
　ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｊｄ）の利用が提唱されてきた
。

（ジャーナル・オフ・ファーマシューティカル・ファー
マコロシイ（Ｊ、Ｐｈａｒ［Ｉｌ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ
、）３４巻、７号、４７３〜４７４頁（ｂ，９８２）に
発表された論文に関連するケミカル・アブストラクツ（
Ｃ，Ａ、）９７巻、　　１８８１５６Ｋ　（ｂ９８２）
。国際公開公報ＷＯ３５１０３６４０も参照。これには
ゲル化剤（ｇｅｌｌｉＢａｇｅｎｔｓ）として用いるこ
とのできる多数の物質、とくにセルロース類などの炭水
化物、とくにカラゲニン、キザンタン、コラーゲン、ポ
リアクリルアミド、ポリシロキサン類などのゴム類（ｇ
ｕｍｓ）、ゼラチン化アルブミン、ゼラチンなどのアミ
ノ酸のポリマーか書かれている（ｂ２頁、２３〜３４行
目））。

ゲルの利用には多くの不都合な点が存在する。

まず第一に、組成物、とくに医薬組成物または化粧料組
成物の調製を非常に複雑にする。実際、ゲルの利用は、
ゲルの物理的性質のためとくにその非流動的性質（ｎｏ
ｎ−ｐｏｕｒａｂｌｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒ）において
、重大な取り扱い」二の問題をかかえている。最後に、
ゲル支持体としてのコラーゲンの使用にさらに特別に関
係している問題は、コラーゲンは低いが、ある抗原性を
示すということである。また一方、コラーゲンのばあい
、通常、酸可溶性コラーゲンか用いられる。ところか組
成物のｐｌ＋は、リポソーム類の安定性の点から中性付
近でなけれはならないし、また、美容ケアに使われるば
あいは、生理的ｐＨに近接していなければならない。こ
れらのｐＨ条件は酸可溶性コラーゲンが沈澱するｐ　＋
−１条件であり、リポツム類の包含（ｉｎｃｌｕｓｉｏ
ｎ）は不可能になる。工業的規模では適用できない、４
°Ｃに近い低温の条件を含む非常に複雑で高価な条件に
よって、この現象は防ぐことかできる。このことは低い
原価での工業的生産は期待できないことを意味している
。

［課題を解決するための手段］ したかって、本発明の１」的は、充分に流動性である（
ｆ’　Ｉｕｊｄ）溶液形態で利用可能な安定化支持体に
より、水利脂質動用、とくにリポソームを安定化させる
ことか可能になるような溶液を提供し、ゲル形態での安
定化支持体の使用に固有な不都合さをすべて排除し、新
しい技術的課題を解決することにある。

本発明のもう一つの目的は、抗原性かなく、さらに非常
に簡単な手順の実行のみを必要とし、簡単な管理状況下
で工業的に適用でき、さらにその状況は比較的広く変え
ることができ、その結果、実際的には完全な再生産性を
伴うような充分に流動性である安定化支持体の使用によ
り、水和脂質動用、とくにリポソームを安定化させるこ
とか可能な溶液を供給することからなる、新しい技術的
課題を解決することにある。

本発明のもう１つの目的は、エマルジョンの形成と両立
できる（ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ）安定化支持体の使用に
より、水和脂質動用、とくにリポソームを安定化させる
ことができる溶液を提供することからなる、新しい技術
的課題を解決することにある。

［実施例］ 前記の技術的課題のすべては、工業的に用いることかで
きる満足な方法で、本発明によりはじめて解決される。

したがって、１つの観点からは、本発明は、たとえはリ
ポソームなどの水和脂質動用を安定化支持体に導入する
ことからなり、該安定化皮持体が以下の方法で調製され
ることが特徴である該水利脂質動用のための安定化方法
を提供する。

ａ）アテロコラーゲン（ａｔｅｌｏｃｏｌ　Ｉａｇｅｎ
）溶液およびグリコサミノグリカン類溶液を独立に調製
し、ついで ｂ）該アテロコラーゲン溶液を該グリコサミノグリカン
類溶液と混合する。

本発明による方法によるある実施態様として、前記混合
物（安定化支持体）はグリコサミノグリカン類溶液をア
テロコラーゲン溶液に導入することによっても調製され
る。

本発明のひとつの実施態様によれば、グリコサミノグリ
カン類溶液は、アテロコラーゲン溶液を混合したのちに
安定化支持体を構成する混合物のｐＨが中性に近いがや
や塩基性を維持するようにその１１　Ｈが調整された塩
基性水溶液に、グリコサミノグリカン類を溶解すること
によって調製される。好ましくは、最終的なｐＨが８に
近接しているのかよい。具体的には、ｐＨ７，５〜８．
５か好ましい。好ましくは、この塩基性水溶液は水酸化
ナトリウム水溶液である。

本発明の方法における特色によれば、グリコサミノグリ
カン類溶液におけるグリコサミノグリカン濃度は、好ま
しくは０．５重量％から４重量％、とくに０５重量％か
ら２重量％、さらに好ま（、＜は１重量％に近接してい
るのがよい。

さらにまた好ましくは１重量％である。

本発明の方法のもう１つの特色によれば、アテロコラー
ゲン溶液はアテロコラーゲンの水溶液であり、好ましく
は、その濃度か０．５重足％から２重量％がよく、さら
に好ましくは１重量％に近接しているのがよい。さらに
また好ましくは１重量％である。このアテロコラーゲン
溶液は、本発明によれば、アテロコラーゲンの繊維をや
や酸性の水溶液に溶解することによって調製されうる。

本発明のある実施態様によれば、アテロコラゲンのこれ
らの繊維は０．１Ｍ酢酸に溶解される。

本発明による方法のまた別の実施態様によれは、アテロ
コラーゲンはコラーゲンの酵素的消化により製造される
。

本発明による方法のさらに別の特色によれば、たとえは
リポソームなどの水和脂質動用は、本発明による安定化
支持体の溶ｉＩｋ中に２つの構成要素の容量をほぼ塙し
くして導入される。水和脂質薄相溶液の水和脂質薄相溶
液と安定化支持体溶液との混合物に対する好ましい割合
は３０〜６０容量％である。すなわち、水和脂質薄相溶
液が、脂質要用と安定化支持体混合物の最終溶液中の３
０〜６０容量％に相当するように導入される。

本発明のある実施態様によれは、たとえはリポソームな
どの水和脂質薄相の割合としては、最終組成物の０．５
〜１．５重量％がよく、さらに好ましくは約１．１ｌＬ
ｆｎ％かよい。

本発明はまた、安定化支持体かアテロコラケンおよびグ
リコサミノグリカン類の混合物を含む溶液形態で存在す
ることを特徴とする。安定化支持体の存在によって安定
化された、たとえばりボソームなとの水和脂質薄相を含
む組成物をも提供する。

本発明のある実施態様によれば、用いられるグリコサミ
ノグリカン類は構造（ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ）グリコサ
ミノグリカン類、とくにヒアルロン酸、コンドロイチン
４−硫酸、コンドロイチン６−硫酸、デルマタン硫酸、
ヘパラン硫酸、ケラタン硫酸の中からや、すべての分泌
（ｓｃｃｒｅｔｏｒｙ）グリコサミノグリカン類、とく
にヘパリンとその誘導体、およびムコイチン硫酸の中か
ら選はれる。

本発明による組成物のもう１つの特色によれは、この後
半は本発明の方法においてすでにその特性が述べられた
、混合物の溶液の調製のためのアテロコラーゲンおよび
グリコサミノグリカン類の出発溶液（ｓｔａｒｔｊｎｇ
　５ｏｌｕｉｊｏｎ）に関する。

グリコサミノグリカン類のアテロコラーゲンに対する相
対的割合はアテロコラーゲンの１８重量％から２５重量
％か好ましい。

本発明による組成物のもう１つの特色によれは、安定化
支持体溶液のｐ　＋−１は中性に近いがやや塩基性であ
って、８のオーダー（ｏｒｄｅｒ）であることか好まし
い。具体的には、ｐｌ＋７．５〜８．５が好ましい。

本発明による組成物のもう１つの特色によれば、この組
成物は、たとえばリポソームなどの水和脂質薄相溶液と
、安定化支持体溶液のほぼ等しい容量を混合することに
よって製造される。

水利脂質薄相溶液の、本発明の組成物（水和脂質薄相溶
液と安定化支持体溶液との混合物）に対する好ましい割
合は３０〜６０容量％である。すなわち、水和脂質薄相
溶液は、脂質要用と安定化支持体混合物の最終溶液中の
３０〜ｂ相当する。

本発明による組成物の好ましい利用は薬用または化粧用
組成物形態における薬学または美容ケアにおける利用に
関連する。すなわち、本発明は前記組成物を含む医薬品
組成物または化粧料組成物をも提供する。この目的のた
め、組成物は、このまま、または全ての特別な問題がな
い、当業者によく知られている種々の成分または適当な
賦形剤を、添加しても、水和脂質薄相、とくにリポソー
ムの安定性を変化させないことか確立されているならば
、これらを加えたのちに医薬組成物または化粧料組成物
として用いてもよい。

本発明の組成物は凍結乾燥してもよく、このことにより
、本発明の組成物の利用は工業的に有利である。

全（予想していなかった方法で、本発明は該安定化支持
体の抗原性を減少させている。

さらに、安定化支持体の１つの構成成分の保護と言う点
で、すなわち、アテロコラーゲンの遅延効果をインビボ
で延長させるコラゲナーゼに対するアテロコラーゲンの
保護と言う点で、本発明の方法および組成物は、顕著な
改良を提供した。

前記安定化支持体は、増強された水利能力を示し、細胞
発達の増加により真皮および表皮に対してさらに著しい
再生作用を示す。

もう１つの予想していなかった都合のよい点および工業
開発の観点から決定的に重要なことの１つは、本発明に
より溶液形態で使用されるアテロコラーゲンかとくに簡
単な方法でグリコサミノグリカン類と混合されるので、
安定化方法の単純化かなされ、したがって治療」二のま
たは化粧品としての利用のいずれにせよ、組成物の製造
工程の単純化をもたらすという事実である。

さらに、溶液形態での安定化支持体の利用は当業者に評
価されるであろう都合のよい流動性特性を伴う。

したかって、本発明は、従来技術と比較して決定的かつ
顕著な進歩を提供していると考えられうる。

以下に本発明を実施例を用いてさらに詳細に説明するが
、本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない
。実施例中、とくに表示のない限り、パーセンテージ（
％）は重量％を表わす。

実施例１ アテロコラーゲン−グリコサミノグリカン支持体中のリ
ポソーム組成物の調製 ａ）大きな多薄層小胞（ｌａｒｇｅ　ｍｕｌｔｉｌａｍ
ｅｌｌａｒｖｅｓｉｃｌｅｓＳＭ、Ｌ、Ｖ、）の調製大
豆レシチンをクロロホルムに溶解し、ついで真空での溶
媒の蒸発により、ガラスフラスコの壁上に薄いフィルム
の形態でこれを析出させた。ついで８０°Ｃに加熱した
水を前記フラスコに注ぎ、渦動混合機（Ｖｏｒｔｅｘ　
ｍ１ｘｅｒ）で撹拌しながら１０分間この温度で保持し
た。用いた水の容量は、最Ｒ混合物か１％のレシチンを
含む量であった。ついでフラスコの中身を室温まで放冷
した。このようにしてえられた溶液は１％のリン脂質を
ＭＬＶリポソームの形態で含んでいた。

水溶性物質を封入するばあいは、この物質を調製する間
に添加される水に溶解させておかなければならない。親
油性物質を膜内に導入するはあいは、リン脂質を含むク
ロロホルム相に混合しなければならない。

ｂ）非架橋コラーゲンまたはアテロコラーゲンの調製 新しく屠殺した子牛の皮を、硫酸ナトリウム３％および
石灰４％を含む浴（ｂａ　ｔ　ｂ　）中で、皮１００ｇ
に対し、溶液２００ｃｍ”の割合で脱毛のための化学処
理を行なった。ついで残った皮から回転式の帯のこぎり
（ｒｏｔａｔｉｎｇ　ｂａｎｄ　ｓａｗ）を用いた剥離
術（ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ）により
真皮を単離した。

えられた組織を摩砕し、４　ｍｍの穴を有する格子（ｇ
ｒｉｄ）を介して押し出した。ついで摩砕した調製物を
飽和石灰水に、溶液４ｇに対して１１電の割合で３週間
接触さゼた。このように処理した皮を４０００回転／分
で回転する遠心機で加速度（ａｃｃｅｌ　ｅｒａｔ　１
ｏｎ）　２０００　ｇの連続遠心により」−清と分離し
た。ついでえられたペレット（ｐｅｌｌｅｔ）をステン
レス鋼タンク中、水４ｇあたりペレット１　ｋｇの希釈
で、穏やかに撹拌しながら水道水で２度洗浄した。つい
で摩砕した調製物を水での洗浄と同じ条件下、リン酸緩
衝液ｐＨ７，８（Ｎａ２１１ＰＯ４２１，７ｇ＃）およ
びＫ）１２　ＰＯ４０，７８ｇ／Ω）での２回の処理に
供した。ついでえられたペレットを脱イオン水および滅
菌水の２つの浴中で洗浄した。えられた摩砕した調製物
を酢酸溶液（０，５ｇ／ρ、ｐＨ３，４）中に、２０ｇ
の溶液あたり１　ｋｇで希釈した。５分間撹拌したのち
、前述した方法による連続デカンテーションによりえら
れた上清をペレットから分離した。ついで乾燥塩化ナト
リウムを最終濃度的１０％になるように添加して上清か
らコラーゲンを沈澱させた。上清を重力下にデカンテー
ションしたのち、えられた繊維を、好ましくはカットオ
フポイント（ｃｕｔ−ｏｆｆｐａｉｎｔ）が６０００ダ
ルトンから８０００ダルトンの透析チュービングから作
成した透析膜により、脱イオン水および滅菌水に対して
透析した。透析された繊維が塩化ナトリウムをもはや含
んでいないことを硝酸銀の方法による検査で調べたのち
、蛋白質の最終濃度が１％となるように、酢酸６ｇ／ρ
を含む浴中に溶解した。えられた混合物を２４時時間中
かに撹拌した。

Ｃ）　コンドロイチン４−硫酸の調製 筋肉および脂肪組織を除去した子牛鼻中隔を刻み、４　
ｍｍの穴を有する格子を介した押し出しによって摩砕し
た。ついて、えられた刻まれたもの（ｍｉｎｃｏ）をメ
ルク（ＭＥＲＣＫ）社製パパイン１％を含む塩化カリウ
ム緩衝液（ＫＣｇｌｌ、、８ｇ＃！　、システィン７８
．８ｍｇ／　、Ｑ　、　ＩＥＤＴＡ　１８０ｍｇ／　Ｄ
　）に、緩衝液１ρあたり刻まれたちの　１３０ｇの割
合で２４時間、温度６°Ｃて放置した。

えられた」二清を、４０００回転／回転目転する遠心分
ｉ４機を用いた連続遠心によりペレットから分離した。

ついで−Ｌ清に４０ｇ／Ωのトリクロロ酢酸を加えた。

前記の方法を用いた連続遠心により沈澱を除去した。え
られた」二清を水酸化すトリウムのペレットで中和した
。ついてえられた混合物をカッ１〜オフポイントが６０
００ダルトンから８０００ダルトンの透析チュー７によ
り、脱イオン水および滅菌水に対して透析した。透析さ
れた溶液を凍結乾燥した。コンドロイチン４−硫酸を乾
燥した状態でえた。

ｄ）　アテロコラーゲン−コンドロイチン４−硫酸混合
物の調製 ムコ多糖を水酸化すトリウムを含む浴に１％溶液となる
ように溶解させた。この溶液を、穏やかに撹拌された蛋
白質の１％を含むアテロコラーゲン溶液に、コラーゲン
溶液１ｇに対し該溶液２５０　ｍｌの割合で添加した。

水酸化ナトリウムの量は最終のｐＨか８となる瓜であっ
た。

ｅ）　　リポソーム−アテロコラーゲン−コンドロイチ
ン４−硫酸組成物の調製 大豆レシチンを２％含むリポソームの水溶液を、穏やか
に撹拌されたアテロコラーゲン−コンドロイチン４−硫
酸の混合物に、最終複合体（ｆｉｎａｌ　ｃｏｍｐｌｅ
ｘ）がレシチンを１％含むように２つの溶液の容量を等
しくして導入した。

実施例２ アテロコラーゲン−グリコサミノグリカン支持体中のリ
ポソーム組成物の調製 ａ）　　ＳＵＶリポソームの調製（小さな単薄層小胞（
ｓｍａｌｌ　ｕｎｉｌａｍａｌｌａｒ　ｖｃｓｉｃｌｃ
ｓ））卵白レシチンを濃度３０ｍｍｏｌ／Ωでエタノー
ルに溶解した。ついでえられたアルコール溶液を塩化カ
リウムの０１５Ｍ溶液に添加した。これにより単薄層小
胞か形成した。ついてえられた−１−消を、残留アルコ
ールを除去するため透析したが、限外濾過により２％ま
で濃縮してもよい。

１））　　非架橋コラーゲンまたはアテロコラーゲンの
調製 子牛の皮の刻んだものは、先の実施例中と同じ方法で調
製した。ついでこれをリン酸緩衝液ｐＨ７，８（Ｎａ２
１１ＰＯ４２１，７ｇ＃！およびＫｌ−＋２　ＰＯ４０
，７９ｇ／ρ）での２回の処理に供した。前記処理は溶
液１ｇあたり刻んだもの１　ｋｇの濃度で行なった。各
々の処理ののち、４０００回転／回転目転し、加速度２
０００　ｇとなる遠心分離機を用いた連続遠心により、
残渣を回収した。リン酸緩衝液で洗浄したのち、刻んだ
ものを前に用いたのと同じ条件で脱イオン水および滅菌
水の２つの浴中で洗浄した。

ついで刻んたものをコラーゲンに関してはペプシン７．
５％を含む０．０１Ｎ塩酸中、２００ｇ／ｉ）の濃度に
おいた。えられた混合物を室温で２４時間放置した。こ
のののち、同量のペプシンを再び該浴に加え、えられた
混合物を前に述べたのと同じ条件下に放置した。

前に述べた方法による連続遠心によりペレ・ソトから」
−清を分離した。塩化すｌ・リウムを１０％の濃度とな
るように上清に添加した。えられた繊維を連続遠心によ
り単離しＶｊｓｋｉｎｇ透析チューブ（ヴイスキングｍ
５ＫＩＮＧ）社製）中にお０た（参照符号（ｒｅｒ）　
　：　３０／３２）。完全に塩化すトリウムを除去した
のち、えられた繊維を１％のコラーゲン濃度となるよう
に０．１Ｍ酢酸中に溶解した。

Ｃ）デルマタン硫酸の調製 角質層および皮下組織を標準的な方法で剥離させた豚の
皮を刻み、４　ｍｍの穴を有する格子を介した押し出し
により摩砕した。

ついで刻んだものをクロロホルム−メタノール混合物（
容量で２／１０割合）で洗浄した。真空下で溶媒を蒸発
させたのち、乾燥した残渣を実施例】での鼻中隔から刻
んだものをえたのと同しように処理して、デルマタン硫
酸を乾燥状態でえた。

ｄ）　アテロコラーゲンーデルマクン硫酸混合物の調製 ムコ多糖を水酸化すトリウムを含む浴中に１％溶液とな
るように溶解した。この溶液を、穏やかに撹拌した蛋白
質の１９６を含むアテロコラゲンの溶液に、コラーゲン
溶液１りあたり溶液３００ｍ１の割合で添加した。水酸
化ナトリウムの量は最終１）Ｈか８となるような量とし
た。

ｅ）　リポソームーアテロコラーゲンーデルマタン硫酸
塩複合体の調製 卵白レシチンを２％含むリポソームの水溶液をアテロコ
ラーゲン−デルマタン硫酸混合物中に穏やかに撹拌しな
から導入した。コラーゲン溶液とリポソーム溶液の容量
が等量であったので、最終段合体はレシチンを１％含ん
でいた。

実施例３ 本発明によるアテロコラ−ケン−グリコサミノグリカン
支持体中のリポソームの安定性のコントロールアッセイ
（ｃｏｎｔｒｏｌ　ａｓｓａｙ）リポソームの存在およ
び品質のコントロールを電子顕微鏡検査によりおこなっ
た。すなわち、実施例１および２に準拠して調製したレ
シチンを１％含む調製品を１０倍に希釈した。希釈溶液
の１滴をニトロセルロースのフィルムで彼覆した電子顕
微鏡の格子」二においた。そののちただちに、新しく調
製してｐｌ＋７に中和したホスホタングステン酸の２重
量％の溶液の１滴を同じ格子に添加した。前記格子を風
乾し、透過型電子顕微鏡で調べた。

電子顕微鏡検査コントロールによりリポソームはその形
状を維持しており、困難なく水と接触しうろことがわか
った。凍結乾燥工程は、１つには無制限の期間、複合体
を保存することを可能にし、また一方では生体内へ非常
に小さい容量で注入できるリポソーム類とアテロコラー
ゲンの非常に濃縮されたペーストを調製することを可能
にした。

リポソームの本発明による組成物中における安定性はこ
れらの組成物を超音波衝撃に供することによって調べた
。

そのためには、該組成物は２２０００回転／分回転転す
るウルトラートユラックス （Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒａｘ）型の超音波ホモジナイザー
で、１分間、３分間または５分間かきまぜてもよい。

リポソーム単独の水溶液を同じ条件に供することによっ
て比較を行なった。

このように処理した組成物、すなわち本発明により実施
例１および２でえられた組成物およびリポソーム単独の
水溶液からなる比較組成物の電子顕微鏡検査により、水
溶液中ではリボツム類はだんだんと崩壊し、非組織的な
膜になることがわかった。

一方、本発明による安定化支持体中では、リポソーム小
胞は５分間の処理の後でさえ、その形状を維持していた
。

このように本発明は、前に述べたように、高い流動性の
溶液の使用に固有な都合のよい点を保持している限り、
リポソームを安定化することを可能にした。

実施例４ 医薬または化粧料組成物 実施例１および２で調製されたような組成物は医薬組成
物または化粧料組成物として用いることができる。もち
ろん、このようなばあい、通常リポソーム中、リポソー
ムの膜内かリポソームの内側かのいずれかに、有効成分
が性質として疎水性であるが、親水性であるかによって
、さらに、実施例１中、ａ）の最後に引用されていて、
当業者によく知られている工程により有効成分を封入す
る必要がある。

当然のことながら、様々な賦形剤またはその他の活性成
分を、それらが、本発明による支持体の安定化効果を無
効にしないならば、所望により添加してもよい。

エマルジョン形態の組成物の例 この組成物は以下の経験」−の組成（ｅｍｐｉｒｉｃａ
ｌｆｏｒｍｕｌａｔａｒ）をもち、数字は重量％をあら
れしている。

ポリオキシプロピレンｌ　５　（ＰＯＰ）　−４ステア
リルアルコール ２−ステアロイルラフタートナトリウムポリオキシエチ
レン脂肪酸エステル グリセロールステアラート ポリプロピレングリコールの ジオクトナート メチルパラベンゾエ−１−０、３ ポリプロピレングリコール　　　　　　　２アラントイ
ン　　　　　　　　　　　　　０．２カーボナー９４Ｏ
Ｒ０，２ （Ｃａｒｂｏｎｅｒ　　９４０Ｒ１別名カルボポル９４
０（Ｃａｒｂｏｐｏｌ　９４０）、ポリプラスチック（
ＰＯＬＹＰＬＡＳＴＩＣ）社製） トリエタノールアミン　　　　　　　　　　０．５本発
明によるアテロコラーゲン−３０ グリコサミノグリカン安定化 支持体中のリポソーム類の複合体 精製水　　　　　　　　　　　　　　　５０．８１００
％ このエマルジョン形態の組成物の調製は、以下の方法で
行なう。

まず、標準的な方法で、本発明によるアテロコラーゲン
−グリコサミノグリカン安定化支持体中のリポソームの
複合体を除くすべての成分を含む精製水中のエマルジョ
ンを調製した。

このエマルジョンを形成し、本発明によるアテロコラー
ゲン−グリコサミノグリカン安定化支持体中のリポソー
ムの複合体を、実施例１または２にしたかって、１時間
撹拌を維持し、温度を３０°Ｃ以下に保持するよう注意
して調製した。

このようにして、そこではリポソームが安定であるエマ
ルジョン形態の組成物をえた。

この安定性を電子顕微鏡検査により調べると、驚くべき
安定性を示した。

もちろん、本発明は前記の試薬の技術的等価物をなすす
べての試薬およびそれらの神々の組みあわせをも含む。

たとえはグリコサミノグリカン類は、直鎖様に配置され
た三糖類単位からなるポリマーで、通常はウロン酸およ
びヘキソサミンから構成されるものであれはよく、「グ
リコサミノグリカン」という語は厳密に解釈される必要
はなく、等価物としてムコ多糖を含むことはきわめて明
らかである。したがって、ムコ多糖はグリコサミノグリ
カン類の定義の中に含まれる。

同様に、アテロコラーゲンは、テロペプチド（ｔｃｌｏ
ｐｃｐｔ　１ｄｃｓ）か取り除かれたコラーゲンであり
、当業者に理解されているように非架橋コラゲンをなす
コラーゲン類であると理解されるべきである。

［発明の効果］ グリコサミノグリカン類およびアテロコラーゲンの本発
明による組合せは、溶液形態てｐＨが中性に近接してい
てアテロコラーゲンを沈澱させない安定化支持体の調製
を可能にした。さらに、本発明による安定化支持体は、
本発明の明白な技術的有利性をなすエマルジョンの調製
を困難なく可能にした。

さらに、グリコサミノグリカン類はアテロコラーゲンの
残留している抗原性をほぼ完全に抑制した。

本発明により調製された完成された組成物は凍結乾燥し
てもよく、このことが重大な工業的有利性をなすことも
また注目すべきである。

ほか２名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　水和脂質薄相を、 （ａ）アテロコラーゲン溶液およびグリコサミノグリカ
   ン類溶液を独立に調製し、ついで （ｂ）該アテロコラーゲン溶液をグリコサミノグリカン
   類溶液と混合することにより調製されることを特徴とす
   る安定化支持体に導入することからなる、該水和脂質薄
   相の安定化方法。 ２　水和脂質薄相がリポソームであることを特徴とする
   請求項１記載の安定化方法。 ３　グリコサミノグリカン類溶液をアテロコラーゲン溶
   液に導入することによって安定化支持体を調製すること
   を特徴とする請求項１または２記載の方法。 ４　アテロコラーゲン溶液と混合したのち、えられた安
   定化支持体のｐＨが中性に近いがやや塩基性を維持する
   ように調整された塩基性水溶液にグリコサミノグリカン
   類を溶解することによってグリコサミノグリカン類溶液
   が調製されることを特徴とする請求項１、２または３記
   載の方法。 ５　該塩基性水溶液のｐＨが、安定化支持体の最終ｐＨ
   が７．５〜８．５となるように調整された請求項４記載
   の方法。 ６　該塩基性水溶液が水酸化ナトリウム水溶液であるこ
   とを特徴とする請求項４または５記載の方法。 ７　グリコサミノグリカン類溶液中のグリコサミノグリ
   カン濃度が０．５から４重量％であることを特徴とする
   請求項１、２、３、４、５または６記載の方法。 ８　該グリコサミノグリカン濃度が０．５から２重量％
   であることを特徴とする請求項７記載の方法。 ９　該グリコサミノグリカン濃度が１重量％であること
   を特徴とする請求項８記載の方法。 １０　アテロコラーゲン溶液が、アテロコラーゲンの水
   溶液であって、アテロコラーゲン濃度が０．５から２重
   量％であることを特徴とする請求項１、２、３、４、５
   、６、７、８または９記載の方法。 １１　該アテロコラーゲン濃度が１重量％であることを
   特徴とする請求項１０記載の方法。 １２　アテロコラーゲン溶液がアテロコラーゲン繊維を
   やや酸性の水溶液に溶解させることによって調製される
   ことを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、
   ８、９、１０または１１記載の方法。 １３　アテロコラーゲン繊維を０．１Ｍ酢酸に溶解させ
   ることを特徴とする請求項１２記載の方法。 １４　アテロコラーゲンをコラーゲンの酵素的消化によ
   りえることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６
   、７、８、９、１０、１１または１２記載の方法。 １５　水和脂質薄相溶液を安定化支持体中に二成分の容
   量がほぼ等しくなるように導入することを特徴とする請
   求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
   、１２、１３または１４記載の方法。 １６　水和脂質薄相がリポソームであることを特徴とす
   る請求項１５記載の方法。 １７　水和脂質薄相の割合が、最終組成物の０．５〜１
   重量％であることを特徴とする請求項１５または１６記
   載の方法。 １８　水和脂質薄相がリポソームであることを特徴とす
   る請求項１７記載の方法。 １９安定化支持体がアテロコラーゲンおよびグリコサミ
   ノグリカン類の混合物を含む溶液の形態であることを特
   徴とする安定化支持体の存在によって安定化された水和
   脂質薄相を含む組成物。 ２０　水和脂質薄相がリポソームであることを特徴とす
   る請求項１９記載の組成物。 ２１　該グリコサミノグリカン類がヒアルロン酸、コン
   ドロイチン４−硫酸、コンドロイチン６−硫酸、デルマ
   タン硫酸、ヘパラン硫酸、ケラタン硫酸からなる群より
   選択される構造グリコサミノグリカン類、ならびにヘパ
   リンとその誘導体、およびムコイチン硫酸からなる群よ
   り選択される分泌グリコサミノグリカン類からなる群よ
   り選択されるものであることを特徴とする請求項１９ま
   たは２０記載の組成物。 ２２　アテロコラーゲンに対するグリコサミノグリカン
   類の相対的割合が１８〜２５重量％であることを特徴と
   する請求項１９、２０または２１記載の組成物。 ２３　安定化支持体が中性に近いがやや塩基性のｐＨで
   あることを特徴とする請求項１９、２０、２１または２
   ２記載の組成物。 ２４　安定化支持体のｐＨが７．５〜８．５であること
   を特徴とする請求項２３記載の組成物。 ２５　水和脂質薄相溶液と安定化支持体溶液をほぼ等し
   い容量混合することによってえることを特徴とする請求
   項１９、２０、２１、２２、２３または２４記載の組成
   物。 ２６　水和脂質薄相がリポソームであることを特徴とす
   る請求項２５記載の組成物。 ２７　凍結乾燥形態であることを特徴とする請求項１９
   、２０、２１、２２、２３、２４、２５または２６記載
   の組成物。 ２８　請求項１９、２０、２１、２２、２３、２４、２
   ５、２６または２７で定義された、もしくは請求項１、
   ２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、
   １３、１４、１５、１６、１７または１８記載の方法に
   よりえられた組成物を含む医薬組成物または化粧料組成
   物。 ２９　該組成物をそのまま、もしくは、これに加えて適
   切な成分または賦形剤を含むことを特徴とする請求項２
   ８記載の医薬組成物または化粧料組成物。