JPH02174688A - ジデオキシリバビリン誘導体及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はジデオキシリバビリン及びジデオキシ−５−ア
ミノリバビリン等のジデオキシリバビリン誘導体並びに
微生物によるジデオキシリバビリン誘導体の製造法に関
する。

（従来技術） ２′３′−ジデオキシヌクレオシドはＡＩＤＳの治療薬
として最近期待されている。その中でアジドチミジン（
３’　−ａｚｉｄｏ　−３’　−ｄｅｏｘｙｔｈｙｍｉ
ｄｉｎｅ）はすでにＡＩＤＳ治療薬として使われており
、また２　’　、３’−ジデオキシシチジン、２　’　
、３’　−ジデオキシアデノシン及び２　’　、３’　
−ジデオキシイノシンもＡＩＤＳ治療薬として現在アメ
リカで臨床試験明、ｆ：１音の１゛７！書 されている。一方、リバビリン（１−β−Ｄ−リボフラ
ノシルー１．２．４−　トリアゾール−３−カルボキサ
ミド）はアメリカで発見された抗ウィルス剤で、現在小
児用のウィルス性肺炎で使われているほか、ラッサ熱、
インフルエンザの薬として期待されている。これまでリ
バビリンの誘導体としては２′−デオキシリバビリンや
アラビノシルリバビリンなどが合成されている（　Ｊ、
　Ｃａｒｂ。

ｈｙｄｒａｔｅｓ　Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ　Ｎｕｃｌ
ｅｏｔｉｄｅｓ　１９７５＋　２＋１”）が、ジデオキ
シリバビリン（１−β−Ｄ−（２’＋３′−ｄｉｄｅｏ
ｘｙｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ　　１＋２＋４　　ｔ
ｒｉａｚｏｌｅ３−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ　）及びジ
デオキシ−５−アミノリバビリン（ｌ−β−Ｄ−（２′
、３”ｄｉｄｅｏｘｙｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ　−
５−ａｍｉｎｏ　−１＋２＋４ｔｒｉａｚｏｌｅ　−３
−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ　）等のジデオキシリバビリ
ン誘導体は今までにまったく報告されていない。

またジデオキシリバビリン及びジデオキシ−５アミノリ
バビリン等のジデオキシリバビリン誘導体は新規物質で
あり、抗ウィルス剤としての利用が期待されている。

尚、本発明においてはジデオキシリバビリンもジデオキ
シリバビリン誘導体に含まれるものとする。

（発明が解決しようとする課題） 本発明の課題は新規物質であるジデオキシリバビリン誘
導体及び微生物によるジデオキシリバビリン誘導体の提
供である。

（課題を解決する為の手段） 本発明者等は上記課題を解決する為に鋭意検討を行った
結果、微生物を用いてジデオキシリバビリン、ジデオキ
シ−５−アミノリバビリン等のジデオキシリバビリン誘
導体を製造することができ、しかも該ジデオキシリバビ
リン誘導体が抗ウィルス活性を有することを１１１１　
ＥＥし、本発明を完成に至らしめた。即ち、本発明はジ
デオキシリバビリン誘導体及び微生物によるジデオキシ
リバビリン誘導体の製造法である。

本発明のジデオキシリバビリン誘導体は下記の−・般式
で示す構造を有する。また下記の一般式で示す構造を有
するものであれば全て本発明のジデオキシリバビリン誘
導体に含まれる。

本発明のジデオキシリバビリン誘導体のなかでも以下に
示す構造を有するジデオキシリバビリン及びジデオキシ
−５−アミノリバビリンが特に効果の面から優れている
。

くジデオキシリバビリン〉 くジデオキシ−５−アミノリバビリン〉これらジデオキ
シリバビリン及びジデオキシ−５−アミノリバビリンは
塩の形で存在してもよく、塩の例としては塩酸、硫酸、
リン酸、酢酸等の塩があげられる。

本発明のジデオキシリバビリン及びジデオキシ−５−ア
ミノリバビリンは表−１のような理化学的性質を有して
いる。

明細Ｓの１７１書 ジデオキシリバビリン誘導体の製造法としては１）　ジ
デオキシウリジン等のジデオキシヌクレオシドの加リン
酸分解等で得られるジデオキシリボース−１−リン酸と
１．２．４−　トリアゾール−３−カルボキサミド誘導
体に微生物を作用させてジデオキシリバビリン誘導体を
生成させる方法、２）　ジデオキシウリジン及び無機リ
ン酸若しくはその塩及びリバビリンの塩基部分である１
、２．４トリアゾール−３−カルボキサミド誘導体に微
生物を作用させて直接ジデオキシリバビリン誘導体を生
成せしめる方法がある。

上記方法でジデオキシリバビリン誘導体の内、ジデオキ
シリバビリンを製造する場合には１，２．４−トリアゾ
ール−３−・カルボキサミドを、ジデオキシ−５−アミ
ノリバビリンを製造する場合には５−アミノ−１，２，
４−）リアゾール−３−カルボキサミドをそれぞれ１．
２．４−　）リアゾール−３力ルボキサミド誘導体とし
て用いればよい。

さて、ジデオキシリボース−１−リン酸は化学的に調整
したものを用いてもよいし、本倣生物を明細Ｚの浄書 ジデオキシウリジン等のジデオキシヌクレオシドとリン
酸に作用させて調整したものを用いてもよい。本発明に
使用される微生物は、１）ジデオキシウリジンを加リン
酸分解してジデオキシリボース−１−リン酸を生成する
酵素と、２）ジデオキシリボース−１−リン酸と１．２
．４−　）リアゾール−３−カルボキサミド又は５−ア
ミノ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド
をジデオキシリバビリンあるいはジデオキシ−５−アミ
ノリバビリンに変換する酵素の両方を有しているので、
これらの方法には同一の微生物を用いることができる。

これらの方法に使用される微生物はエシェリヒア属、フ
ラボバクテリウム属、セラチア属、エンテロバクタ−属
、エルビニア属、シトロバクタ−属、コリネバクテリウ
ム属、ハフニア属、クルイヘラ属、サルモネラ属、又は
キサントモナス属に属し、このような微生物の例として エシェリヒア　コリ　　　　　　　　ＡＴＣＣ１０７９
Ｂ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）を挙げること
ができる。

これらの微生物を用いてジデオキシリバビリン若しくは
ジデオキシ−５−アミノリバビリン、又明、泪πｙ　Ｆ
　？、δ はこれらの物質の前駆体であるジデオキシリボース−１
−リン酸を生成せしめる方法は、微生物の培養中に基質
を添加する培養法を用いても良いし、また培養した菌体
あるいはこの処理物を基質に作用させる酵素法を用いて
も良い。

培養法を用いる場合には、炭素源、窒素源、Ｐ、Ｓ、Ｐ
ｅＭｎ等の無機イオン、更に必要ならばビタミン等の＠
量栄養素または蛋白分解物、酵母エキスのような有機窒
素源を含有する通常の培地に■ジデオキシウリジン及び
リン酸若しくはその塩を添加（ジデオキシリボース−１
−リン酸を生成する場合）、又は■ジデオキシウリジン
及びリン酸若しくはその塩及び１，２．４−　）リアゾ
ール−３−カルボキサミド若しくは５−アミノ−１，２
，４−ト’Ｊ　７７’−ルー　３−カルボキサミドを添
加（ジデオキシリバビリンあるいはジデオキシ−５−ア
ミノリバビリンを生成する場合）した培地を用いて培養
すれば良い。上記基質の添加は培養初期でも培養途中で
も構わない。

酵素法を用いる場合の酵素源としては、炭素源、窒素源
、Ｐ　、　Ｓ　、　Ｆｅ、　Ｍｎ等の無機イオン、更に
必要ならばビタミン等の微量栄養素または蛋白分解物、
酵母エキスのような有機窒素源を含有する通常の培地で
培養した培養液、洗浄菌体が使用できる他に、菌体処理
物も使用できる。菌体処理物としては、アセトン乾燥菌
体、菌体の磨砕物、菌体の超音波処理物、界面活性剤あ
るいはトルエン等の処理菌体、リゾチーム等の酵素処理
菌体、菌体より抽出した後、塩析等により分離した菌体
の蛋白区分、本反応の酵素活性を有する蛋白区分の精製
物、更に本菌体および菌体処理物の固定化物等いずれも
が使用できる。

基質として使用するジデオキシウリジンの濃度は１　１
０００ｍＭ程度が適当であり、リン酸またはその塩の濃
度はジデオキシリボース−１−リン酸生成の場合にはジ
デオキシウリジンと等モルあるいは等モル以上加えるの
がよく、通常１−１０倍モル程度添加する。

またジデオキシリバビリンかつ直接ジデオキシリバビリ
ン又はジデオキシ−５−アミノリバビリＦＶＩ廁”７ノ
２７ｉ　！ ン生成の場合には反応系でリン酸がリサイクルできるの
でジデオキシリボース−１−リン酸生成の場合より少な
（でき、０．０１−１０倍モル程度が適当である。

無機リン酸の塩は反応の進行を大きく阻害しないもので
もあればいずれを用いても良く、例えばナトリウム塩、
カリウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシ
ウム塩等の無機塩、さらにはトリメチルアンモニウム塩
等の有機塩が用いられる。ジデオキシリバビリン又はジ
デオキシ−５−アミノリバビリンの生成の場合の１．２
．４−　）リアゾール−３−カルボキサミド又は５−ア
ミノ−１，２，４−）リアゾール−３−カルボキサミド
の添加量はジデオキシウリジンと等モルあるいはそれ以
上が適当で、通常１−１０倍モル程度が適当である。基
質のジデオキシウリジンが反応液に残っても良い場合に
は、これらの１．２．４−　）リアゾール−３−カルボ
キサミドあるいは５−アミノ−１２，４−）リアゾール
−３−カルボキサミドの添加量はジデオキシウリジンの
等モル以下でも良い。これらを含む水溶液に前記菌体、
またはその処理物を加え、ｐＨを４−１０の範囲に調製
した後、２０−７０°Ｃ１望ましくは４０−５５°Ｃで
静置あるいは攬はんしながら１０分−１Ｏ日間保持する
と反応が進行し、反応液中に目的とするジデオキシリボ
ース−１−リン酸あるいはジデオキシリバビリンあるい
はジデオキシ−５−アミノリバビリンが著量蓄積される
。

またジデオキシリボース−１−リン酸を出発物質として
目的とするジデオキシリバビリン及びジデオキシ−５−
アミノリバビリンを製造する場合、ジデオキシリボース
−１−リン酸の濃度は１ｌ１０００ｓ程度が適当であり
、１，２．４−　トリアゾール−３−カルボキサミドあ
るいは５−アミノ−１，２，４−トリアゾール−３−カ
ルボキサミドの添加量はジデオキシリボース−１−リン
酸と等モルあるいはそれ以上が適当で、通常１−１０倍
モル程度が適当である。基質のジデオキシリボース−１
−リン酸が反応液に残っても良い場合には、これらの１
．２．４−　）リアゾール−３−カルボキサミドあるい
は５−アミノ−１，２，４−１−リアゾール−３−カル
ボキサミドの添加量はジデオキシリボース−１−リン酸
の等モル以下でも良い。これらを含む水溶液に前記菌体
、またはその処理物を加え、ｐＨを４−１０（７）範囲
ニｇＪｌ製した後、２０−７０　’Ｃ１望ましくは４０
−５５°Ｃで静置あるいは攪はんしながら１０分＝ｌＯ
日間保持すると反応が進行し、反応液中に目的とするジ
デオキシリバビリンあるいはジデオキシ−５−アミノリ
バビリンが著Ｉｓ積される。

さて、反応液よりジデオキシリボース−１−リン酸又は
ジデオキシリバビリン若しくはジデオキシ−５−アミノ
リバビリンを採取する方法は、水等の溶媒に対する溶解
度差を利用したり、イオン交換樹脂や吸着樹脂を用いる
方法で行うことができる。またこれら生成物の定量は高
速液体クロマトグラフィーを用いる方法で行った。

本発明の新規物質の製造方法としては、本発明による微
生物学的な方法のみならず、リバビリンあるいは、２′
−デオキシリバビリンを化学合成的に直接還元する方法
を用いてもよい。この場合すでに公知の方法を用いてジ
デオキシリバビリンあるいはジデオキシ−５−アミノリ
バビリンを合成することが可能である。例えば光による
リバビリンからは脱酸素化反応（Ｓａｉｔｏ、１．　ｅ
ｔ　ａｌ、＋　Ｊ。

Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、　、　１９８６＋　１０
８．３１１５．）、ブロモアセテートの還元的脱離（Ｍ
ａ＝ｕｍｏｔｏ、Ｒ，ｅｔ　ａｌ、、ＣｈｅＩ！。

Ｐｈａｒｖ、Ｂｕｌｌ、、１９７４，２２，１２８．Ｊ
ｕｓｓｅｌ　　Ａ、Ｆ、　ｅｔ　ａｉ、。

Ｊ、＾ｍｅｒ、ｃｈｅｉ、ｓｏｃ、＋１９７３．９５＋
４０２５．、　Ｉｎｏｕｅ、ｌ　ｅｔａｌ、、Ｊ、Ｏｒ
ｇ、Ｃｈｅｉ、、１９７９，４４．１４０４．＋Ｒｏｂ
ｉｎｓ、Ｍ、Ｊ、　ｅｔａｉ、、Ｔｅｔｒａｌｌｅｄｒ
ｏｎ　１ｅｔｔ−＋　１９８４＋２５＋３６７）　、チ
オカーボネートのラジカル還元（Ｍｉｔｓｕｙａ、Ｉｌ
、　ｅｔ　ａｌ、。

Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｓ、＋１９８７．３０，８６２．、
ＢａｒＬｏｎ、Ｄ、）１．　ｅｔ　ａｌ、。

Ｊ、Ｃ，Ｓ、Ｐｅｒｋｔｎ　１．．１９７７．１７ｉ８
．）などが、また２′−デオキシリバビリンからはトシ
レート経由（Ｒｏｂｉｎｓ、Ｒ，に、　ｅＬ　ａｌ、＋
Ｊ、Ａｍｅｒ、（：ｈｅ＠、ｓｏｃ、、１９６６＋８８
．１５４９．）　、あるいはメシレート経由（ｌｌＯｒ
ｗｉ　Ｌｚ　＋Ｊ、Ｐ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、ｏｒｇ
、Ｃｈｅｍ、＋１９６７＋３２＋８ｔ７−＋　１ｂｉｄ
。

１．９６６．３１，２０５．　）での合成法、バートン
還元（Ｓａｍｕｋｏｖ　ｅｔ　ａｌ、＋Ｂｉｏｏｒｇ、
Ｋ１１ｖ、＋１９８３＋９＋５２．）などがジデオキシ
リバビリンあるいはジデオキシ−５−アミノリバビリン
の合成に利用できる。但し、これらの方法でジデオキシ
リバビリンあるいはジデオキシ−５−アミノリバビリン
の化学合成法がすべて限られるわけではなく、他のどの
様な方法で本発明の新規物質を合成してもかまわない。

ジデオキシリバビリン及びジデオキシ−５−アミノリバ
ビリンの抗ウィルス活性は５ｃｉｅｎｃｅ　２２６　１
？２−１７４　（１９８４）のｌ（、Ｍｉ　ｔｓｕｙａ
　らの方法を用イーｉｒ確認した。

次に本発明を実施例により詳しく説明する。

実施例 （実施例１） 酵母エキス０．５ｇ／ｄｊｌ！、ペプトン１．０ｇ／ｄ
ｌ。

ＫＮＯ＋　０．３ｇ／ｄｆ、　ＫＨ２ＰＯ４０，１ｇ／
ｄｉ、　ＫＪＰＯａｏ、３　ｇ／ｄＱ、　Ｐｅ５Ｏａ　
７ＨｚＯＯ，ＯＧＩ　ｇ／ｄｅ、オよびＭｎ５Ｏａ　４
ＨｔＯＯ，００１ｇ　／　ｄ　１を含む培地（ｐＨ７，
０）５０ｍｆを５００ｍｆ容肩付フラスコに分注し殺菌
した。この培地に、ブイヨン寒天培地にて３０°Ｃ１１
６時間前培養した第１表に示す微生閉門！；の（７・ａ 物を１白金耳ずつ摂取し、３０°Ｃにて１６時間振とう
培養した。得られた培養液より菌体を遠心分離により分
離した後、０．０５　Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，０
）で洗浄し、更に遠心分離することにより洗浄菌体を調
製した。上記の洗浄菌体を０２０ｍＭのジデオキシリボ
ース−１−リン酸と２０ｍＭのＬ２．４−　トリアゾー
ル−３−カルボキサミドあるいは■２０ｍＭのジデオキ
シリボース−１−リン酸と２０ｍＭの５−アミノ−１，
２，４−トリアゾール−３−カルボキサミドを含む１１
００ｒｎのリン酸バッフｙ−（ｐＨ７゜０）ＬＯｍｌに
５％になるように添加し、６０°Ｃ１２４時間反応させ
た。各反応液中に生成したジデオキシリバビリン及びジ
デオキシ−５−アミノリバビリンの濃度を高速液体クロ
マトグラフィーを用いて測定した。結果を第１表に示し
た。

明細口の、７・書 （実施例２） 実施例１と同様の方法で培養して調整した菌体を０２０
ｍＭのジデオキシウリジンと２０ｍＭの１．２．４−　
）リアゾール−３−スルホキサミドあるいは０２０ｍＭ
のジデオキシウリジンと２０ｍＭの５−アミノ−１，２
，４−トリアゾール−３−カルボキサミドを含む１００
ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ７，０）ｌｏｍｆ！に５
％になるように添加し、６０゛Ｃ１２４時間反応させた
。各反応液中に生成したジデオキシリバビリン及びジデ
オキシ−５アミノリバビリンの濃度を高速液体クロマト
グラフィーを用いて測定した。結果を第２表に示した。

実施例１と同様の培地を用いて実施例１と同様の方法で
３７°Ｃ１１６時間培養したエシェリヒアコリ　ＡＴＣ
Ｃ１３０４８の培養液に、予め殺菌した２００ｍＭのジ
デオキシウリジンと２００　ｍＭ　１，２．４−トリア
ゾール−３−カルボキサミドを含む５００ｍＭのリン酸
バッフｙ　　（ｐＨ７，０）５ｍｆを添加し更に１０時
間培養を続けた。この培養液中に生成したジデオキシリ
バビリンを実施例１の方法と同様に定量した結果、４１
ｍｇ／ｄｊ！のジデオキシリバビリンが生成していた。

（実施例４） ニジエリシア　コリＡＴＣＣ１０７９８を実施例１で使
用した培地を用いて、実施例１と同様の培養方法で生育
させ、洗浄菌体を調製した。この洗浄菌体を０５０ｍＭ
のジテオキシウリジンと５０ｍＭの１．２．４−　）リ
アゾール−３−カルボキサミドあるいは０２０ｍＭのジ
デオキシウリジンと２０ｍＭの５−アミノ−１，２，４
−）リアゾール−３−カルボキサミドを含む１００ｍＭ
のリン酸バッファーし、６０°Ｃ１２４時間反応させた
。それぞれの反応液を遠心分離にかけ、菌体と沈澱物を
分離した後、それぞれの上澄みを合成吸着樹脂５ｐ−２
０７（三菱化成（株）社製）カラム（２０Ｘ５００ｍａ
ｉ）に注ぎ最初は水で溶出し、ジデオキシリボース−１
−リン酸と１．２．４−トリアゾール−３−カルボキサ
ミドあるいは５−アミノ−１，２，４−トリアソール−
３−カルボキサミドが溶出し終わってから、溶出液を１
０％エタノールを含む水に変えてさらに溶出を続けた。

溶出されたジデオキシリバビリンあるいは５−アミノジ
デオキシリバビリンの両分を集めて、２ｍｆｆまで濃縮
してから液体クロマトグラフィー（山村科学社製、ＯＤ
Ｓ　−Ｄカラム；溶離液５％アセトニトリル／ＨｚＯ；
流速１ｍｆ／ｗｉｎ　）で分取した。その結果、ジデオ
キシリバビリンが２５０ｍｇ、がジデオキシ−５−アミ
ノリバビリン１１２ｍｇ得られた。

（効　果） ジデオキシリバビリン及びジデオキシ−５−アミノリバ
ビリン等のジデオキシリバビリン誘導体は抗ウィルス活
性を有する為にエイズ、ＡＴＬ等のウィルス性疾患の治
療薬として期待される。

また本発明によれば、微生物を用いて容品に抗ウィルス
作用を有するジデオキシリバビリン誘導体を製造できる
。

【図面の簡単な説明】

第１図はジデオキシリバビリンの紫外線吸収スペクトル
を示す。 第２図はジデオキシ−５−アミノリバビリンの紫外線吸
収スペクトルを示す。 第３図はジデオキシリバビリンの赤外線吸収スペクトル
を示す。 第４図はジデオキシ−５−アミノリバビリンの赤外線吸
収スペクトルを示す。 第５図はジデオキシリバビリンのＦａｂ−ＭＳスペクト
ルを示す。 第６図はジデオキシ−５−アミノリバビリンのＦａｂ−
ＭＳスペクトルを示す。 第７図はジデオキシリバビリンのＮＭＲスペクトルを示
す。 第８図はジデオキシ−５−アミノリバビリンのＮＭＲス
ペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）下記の一般式で表わされるジデオキシリバビリン誘
   導体 ▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｒ＝Ｈ、ＮＨ＿２、ＣＨ＿３、ＯＣＨ＿３、Ｃｌ、Ｂ
   ｒ、Ｆ）２）エシェリヒア属、フラボバクテリウム属、
   セラチア属、エンテロバクター属、エルビニア属、シト
   ロバクター属、コリネバクテリア属、ハフニア属、クル
   イヘラ属、サルモネネラ属、又はキサントモナス属に属
   し、 （イ）２，３−ジデオキシリボース−１−リン酸及び （ロ）１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド
   誘導体 からジデオキシリバビリン誘導体を生成する能力を有す
   る微生物を水性溶媒中で （イ）２，３−ジデオキシリボース−１−リン酸及び （ロ）１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド
   誘導体 に作用せしめることを特徴とするジデオキシリバビリン
   誘導体の製造法。 ３）エシェリヒア属、フラボバクテリウム属、セラチア
   属、エンテロバクター属、エルビニア属、シトロバクタ
   ー属、コリネバクテリア属、ハフニア属、クルイヘラ属
   、サルモネネラ属、又はキサントモナス属に属し、（イ
   ）２′，３′−ジデオキシウリジン、（ロ）無機リン酸
   又はその塩、及び（ハ）１，２，４−トリアゾール−３
   −カルボキサミド誘導体とからジデオキシリバビリン誘
   導体を生成する能力を有する微生物を水性溶媒中で （イ）２′，３′−ジデオキシウリジン、（ロ）無機リ
   ン酸又はその塩、及び（ハ）１，２，４−トリアゾール
   −３−カルボキサミド誘導体に作用せしめることを特徴
   とするジデオキシリバビリン誘導体の製造法。