JPH021557A - 生体成分検出方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （１）技術分野： 本発明は、生体成分検出、特に免疫診断を行うための非
常に簡便な検出方法に関する。更に詳しくは、本発明は
抗原−抗体反応を反射性基板上で行わせることによる抗
原物ｆｆ’ｉや抗体タンパクの検出方法の改良に関する
。

（２）従来技術： ４〜めで特異的な生化学反応である抗原−抗体反応を用
いて免疫学的診断がこれまで行われてきた。

具体的方法としては、放射性元素標識免疫診断（以下、
ＲＩＡと略す）、酵素標識免疫診断（ＥＩＡ＞　、ケイ
光色素標識免疫診断（ＦＩＡ＞及びラテックス凝集沈澱
法（ＬＳＡ）などが知られており、実用にも供されてい
る。しかしながら、これらの方法はいずれも解決される
べき技術的課題を抱えている。すなわち、ＲＩＡでは検
出感度は極めて良好であるが放射性元素を取扱う特別な
設備を要するし、ＥＩＡは検出完了までに長時間（通常
、数時間〜１日）を要し、またＦＩＡは検出感度が充分
ではなく、ＬＳＡは非特異的な凝集反応が避は難く、特
に極微量成分の検出に於て信頼性が問題となっている。

簡便に抗原−抗体反応を目視により検出するための提案
として、固体基板上にＭ着された金粒子表面に抗体（又
は抗原）を吸着固定し、抗原−抗体反応に伴なう固定化
抗体（又は抗原）の膜厚増加による反射光の色調変化を
視認する方法がある（特開昭５９−１６０７６３号公報
参照）。この方法によれば、確かに抗原／抗体反応によ
り、固体基板上の金とタンパク薄膜複合体は色調が変化
するが、その変化は褐色から暗褐色に移るもので、非常
に不明瞭であり、抗原抗体反応の判定が極めて主観的に
なる可能性が高い。

また、相当以前にラングミュア−（ｃａｎｇｍｕ　ｉ　
ｒ　）とプロジェット（Ｂｌｏｄｇｅｔｔ）　　（フィ
ジカル・レウ゛ニー、５１巻、９６４〜９７８頁（１９
３７））やプロマン（Ｖｒｏｍａｎ）　　（丁ｈｒｏｍ
ｂ、　　Ｄｉａｔｈ、　　Ｈａｅｍｏｒｒｈａｇ、１０
　　巻、４５５〜４９３（１９６４））によって報告さ
れているようなデバイス構成、すなわち金属クロムやタ
ンタルの如き先高反射性基板の上に設けられた誘電体層
の上に抗原または抗体を固定化し、その表面上で抗原抗
体反応を行った場合、金属基板からの反射光が強すぎて
デバイス表面での直接反射光との間で光干渉が生じにく
い。この光干渉を効率よく、このデバイスで実現するた
めにはデバイス表面での光の反射角度を６０〜７０’以
上にすることが必要となり、視覚で検出する際の困難さ
を伴う。この様な問題点を解決するための別の提案（特
開昭５８−１９５１４２号公報）によれば、光をあまり
反射しない非金属基板上に二種類の誘電体層を設け、基
板表面からの反射光量を誘電体層の表面からの反射光堵
とほぼ等量にすることによって光干渉が効率よく起こる
とされている。しかしなから、このような条件を満たす
基板としては着色しているか光透過性の大なるものに限
られ、光反射率の高いものは使えない。

しかるに基板が着色していると、デバイス表面での光干
渉色の色調に影響を与え検出が困難となるし、基板の光
透過率が人ぎいとデバイスの色調は暗くなり鮮やかな可
視光色を与える光干渉は起こり難い。また、表面反射率
が３０〜７０％と比較的高い基板を用いようとすれば、
屈折率の異なる複数の誘電体層を設けることが必須条件
となりデバイス作成プロセスが複層［になるという新た
な問題点が発生ずる。

このような問題点に対し、本発明者らは先に、生体成分
検出後のデバイス表面に高層ｑ・Ｊ性の金属薄Ｉ模を被
覆することにより、該デバイス表面での反射率か３０〜
５０％に高まり生体成分の検出に際して視覚判定性が飛
躍的に向上することを提案した。

しかしながら本発明者らのその後の検討によれば、検出
されるべき生体成分濃度が稀博な（例えば１０ｎ！Ｊ／
　ｄ以下）場合、上記の金属薄膜被覆のみでは充分な感
度が得られないことか判明した。

（３）本発明の開示： 本発明者らは従来のこうした問題点を有さず、かつ高感
度な検出か容易に行える生体成分検出用デバイスを鋭意
検討の結果、被検知物質（ＩＶ）を４検知物質（■、）
と反応した後または反応させながら、該被検知物質（Ｉ
Ｖ）中の別の反応部位と特異的に反応しつる物質（Ｖ）
をざらに反応させることにより、生体成分検出感度を大
幅に改善できることを見いだし本発明を完成するに到っ
た。すなわら、本発明は、 （１）実質的に乱反ｑシのない光反射性基板（Ｉ）、及
びこの上に積層された光干渉ＦＪ（ＩＩ）、更にこのＩ
ｄ（Ｕ）の上に設けられた実質的に単分子層からなる、
生体成分を検知するための物質層（１）よりなるデバイ
スを用いて、当該層（ＩＩＩ）を被検知物質（ＩＶ）溶
液と接触させた後、デバイス表面での光干渉色の色調変
化、または反射光の）農淡変化として上記物質（ＩＶ）
を検出する方法において、上記物質層（ＩＩＩ）を被検
知物質（ＩＶ）と反応させた後、又は反応させながら、
該被検知物質中の別の反応部位と特異的に反応しうる物
質（Ｖ）をざらに反応させ、デバイス表面での光干渉色
変化または反射光の濃淡変化を増幅することを特徴とす
る、生体成分検出方法。

（２）当該物質（ＩＩＩ＞か抗体タンパクであることを
特徴とする、第１項記載の生体成分検出方法。

（３）当該被検知物ｖｉ（Ｉｖ）が抗原物質であること
を特徴とする第１項記載の生体成分検出方法。

（４）生体成分検出反応増幅のために用いる当該物質（
Ｖ）が、上記第３項記・伐の抗原物質に対する第２抗体
であるか、まｌζは、第２抗体と金属コロイド又は高分
子物ｖ１との結合体であることを特徴とする、第１項記
載の生体成分検出方法。

（５）当該光干渉ｔｆｆｌ（Ｉｆ）が４００〜８００ｎ
ｍの可視光領域で実質的に吸収を有さず、かつ生体成分
を検知する物質層（ＩＩＩ）に親和性のある有機物また
は金属酸化物であることを特徴とする、第１項記載の生
体成分検出方法。

（６）当該光干渉層（ｎ）の表面に生体成分を検知する
物質層（１）が化学結合されてなる第１項記載の生体成
分検出方法。

（７）上記第１項記載の生体成分検出反応を行った後、
当該デバイス表面からの直接反射光量が反射角（θ２．
）　Ｏ”〜５０°において、基板面からの反射光Ｗとほ
ぼ等しくかつ可視光領域の第１の光干渉色を呈し、また
被検知物質と反応していない部分のデバイス表面からの
直接反射光量は反射角（θ１　〉Ｏ°〜５０’において
基板面からの反射光ｒｉ　（Ｃ）とほぼ等しく、かつ上
記第１の光干渉色とは異なる可視光領域の第２の光干渉
色を￥するようにして、被検知物質（ＩＶ）を識別・検
出することを特徴とする、第１項記・戎の生体成分の検
出方法。

（８）上記第７項において、生体成分検出反応を行った
後の当該デバイス表面からの光反射率が１０〜５０％と
なるように金属薄膜層を設けたことを特徴とする生体成
分検出方法。

（９）上記の第（１）〜（８）項の生体成分検出方法に
おいて、反応後のデバイス表面の光干渉色または明暗変
化を、色彩・色差計で定量的に測定することを特徴とす
る、生体成分の検出方法。

（１０）上記の第（９）項の生体成分検出方法において
、反応後のデバイス表向の膜厚変化をエリプンメータで
定量的に測定することを特徴とする、生体成分の検出方
法。

（１１）入射光線が波長４００〜８００ｎｍの可視光で
ある、第（１）項記載の生体成分検出方法、である。

本発明に用いられる光反射性基板としては、金。

恨、銅、鉄、アルミ等の光反射率の高い金属板か、他の
固体基板上にこれらの金属を蒸着又はスパッタリング等
の方法により薄膜形成したものが用いられる。また、本
発明の光干渉層としては次の要件を満すことが必要であ
る。すなわら、（１）可視光（波長３００〜８００ｎｍ
）に対して、実質的に反射特性を有さないこと、（２）
本発明のデバイスの最表面に設けられる、抗体タンパク
及び／又は抗原物質層の抗原−抗体反応に伴う厚み増加
が、光の干渉色変化として表われる様に光干渉層の膜厚
が制御されていること及び（３）その表面が、抗原物質
もしくは抗体タンパクと充分な親和性又は反応性を右す
ることである。

上記（１）〜（３）の要件のうち、（１）と（２）を満
ず材料の中で、有機物質としては、可視光領域（３００
〜８００Ｑｍ）で実質的に反射特性を有さず、かつ薄膜
形成能のあるものなら使用可能であるが、好ましくは後
述の抗原抗体反応によるタンパクの膜厚増加に伴なった
光の干渉色変化が効率よく起るために、その膜厚を５０
〜１００八オーダで制御できるものがよい。その様なも
のとしては、長鎖カルボン酸、及びその金属塩、ざらに
長鎖カルボン酸エステルのように水面上で安定な凝縮単
分子膜を形成する化合物、コーティングや蒸着による２
０００Å以下の塗膜形成が可能な材おＩが好適例として
挙げられる。前者の具体例としては、パルミチン酸、ス
テアリン酸、リグノセリン駿、オレイン酸、ω−トリコ
セン酸等の長鎖飽和及び不飽和カルボン酸、そのエステ
ル及び１〜３価の金属塩等があげられ、後者の具体例と
しては、ポリメチル（メタ）アクリレート、ポリスチレ
ン、ポリアクリロニトリル、ポリ塩化ビニル等のビニル
系重合体、ポリエヂレン、ポリプロピレン、ポリ−４メ
チルペンテン−１等のポリオレフィン、ポリアミド、ポ
リエステル等の縮合系ポリマー等があげられる。一方、
光干渉層として無機化合物を用いる場合も、上記有機物
の場合と同様に可視光領域で反射がなく、かつその膜厚
が５０〜１００八オーダて制御され、かつその表面が抗
体又は抗原タンパクと親和性を有するか反応性を有する
ことが必要である。その様な特性を備えているものとし
ては、酸化ケイ素、酸化アルミ、酸化錫、酸化鉛、酸化
タングステン、酸化マグネシウム、酸化コバルト。

酸化モリブデン、酸化チタン、酸化ジルコニウム。

酸化亜鉛、酸化タンタル等の金属酸化物、フッ化マグネ
シウム、フッ化ルテチウム等の金属フッ化物、及びヂッ
化ケイ素やガリウムーヒ素等の金属間化合物などが挙げ
られる。これらは、蒸着法ヤスバッタリング法により所
望の膜厚に制御され光干渉層として本発明の反射基板上
に設けられる。

その膜厚としては、図２と図３に示した本発明のデバイ
スに於る入射光の光路差；　ｎ３　ｘ　（ＢＣ＋Ｇ１１
）　＋ｎ２　Ｘ　（ＣＩ）十ＦＧ）　十ｒｌｌ　Ｘ　（
叶十ＥＦ）倍になる様に制御されなければならない。さ
らに、図２と図３とに於る上記光路差も異なることが、
抗原抗体反応部位の識別の為に必要である。ちなみに、
光干渉層の厚みは、この層の屈折率が１．４〜２．０の
範囲にあるときには、約５００〜５０００人、好ましく
は７００〜３０００人に制御することが必要になる。そ
の様な正確な膜厚制御法としては、ラングミュア・ブロ
ージェット法（水面上の単分子膜を固体基板上に累積す
る方法）、スピンコード法及びスパッタ法などが挙げら
れる。

上記の光干渉層（Ｉ［＞と後で述べる抗原物質及び／又
は抗体タンパクの検知物質層（１）との間に、抗原又は
抗体と反応しうる化合物から成る反応性中間層（■°）
を設けて、上記層（１）か本発明のデバイスから脱着し
たり、不安定になることを防ぐことも本発明の特徴であ
るが、その様な反応性中間層としては、タンパクのアミ
ノ塁、カルボキシル単又はチオール基のいずれかと反応
しうる化合物から成ることか好ましい。また、先に述べ
た光干渉が起るための膜厚の制限から、上記反応性層も
膜厚が精密に制御できることが好ましい。

こうした条１１（！−満す反応性化合物の内、タンパク
のアミ、）棋と反応しうるちのとしては、エボギシ基、
酸無水物塁、イソシアネー１〜基、マレイミド基、アク
リルアミド基を含む化合物がある。

本発明のデバイス表面に固定される抗体タンパク又は抗
原物質としては、免疫反応に関わるもので、その最大分
子リイズが３０〜５００人好ましくは５０〜３００人の
範囲にあるものか光干渉法による抗原−抗体反応には好
ましい。抗原の具体例としては、ＩｇＧ、ｂ＋Ａ　　Ｉ
ｇＥ、　ＩｇＭなとの免疫グロブリンや絨毛性性腺刺激
ホルモン（）−ＩＣＧ）、ガン胎児性抗原（ＣＥＡ）な
どがあげられ、抗体としては、これらの抗１京に対づる
ポリクローナル又はモノクローナルな抗体が用いられる
。

これらの抗体又（ＪＬ抗原は単独でも、組合ｌ！で用い
てもにい。また、これらのタンパクの認識部位（Ｆａｂ
部分）とＦｃ部分とを切りはなして用いてもよい。

これらの抗原や抗体を本発明のデバイス表面に固定化す
るためには、上記抗原又は抗体水溶液中にデバイスを０
．５〜１０時間、浸漬しておいたのら、物理的に付着し
ている抗原（又は抗体）分子を、充分に水洗すればよい
。この浸漬処理ににす、抗原（又は抗体）か甲分子層と
して前記の光干渉層上に物理的な吸着状態又は前述の化
学反応を伴って固定化される。

かくの如く、抗体（又は抗原）が固定された本発明のデ
バイスを用いて抗原抗体反応により免疫検出を行うに当
っては、まず該デバイスを被検体溶液中に浸漬し１〜２
０°Ｃ１好ましくは４〜１５℃で１０・−６０分攪拌す
る。その後、デバイスを被検体にたいして反応できる第
２の物質（Ｖ）とざらに反応ざぜる。そのＪ：うな第２
の物質（Ｖ）としては、前もってデバイス上に固定した
物質が抗体分子でおる場合はその第２抗体を含むもので
ある。当該第２抗体は単独で本発明に用いることもでき
るが、その分子中のカルボキシル基やチオール基または
アミン基を介して仙の高分子化合物に結合して用いるこ
とも可能である。そのような高分子化合物としては下記
の如き構造の、分子Ｍ　５　、０００〜３００００００
　、好ましくは１０．０００〜２．０００．０００のら
のが用いられる。

Ｏ＝Ｃ −Ｏ ＋　ＣＨｚ　　Ｃ，＋　ｐ ＣＯＯＣＨ２Ｃｆ−Ｉ−ＣＨ２ １６Ｈ３３ ＋　ＣＨ２Ｃ）−１−Ｃト１−　　ＣＩ−１＋０＝Ｃ＝
Ｃ＝０ ＼　／ これらの物質（Ｖ）は、デバイス上に予め固定された物
質層（ＩＩＩ）とは異なる部位で該被検知物質と特異的
に反応し、デバイス表面での膜厚増加を引き起こすこと
により光干渉色変化または反射光の濃淡変化を増幅する
ものである。

本発明においては、上記の第２物質（Ｖ）を反応した後
、ざらにその表面に光を高度に反射する金属層を設ける
・ことも可能である。そのような金属層としては、金、
銀、アルミニウム、パラジウム、ニッケル、銅、鉄など
がめげられるが、特に金か生体成分への吸着特性の点か
ら好ましい。このような高反射性金属層は、当該金属の
コロイド水溶液に、生体成分検出反応後のデバイスを浸
漬することにより容易に形成される。

本発明の物質（Ｖ）の別の態様として、前記第２抗体に
金属コロイド粒子が吸着又は反応固定されたものも使用
可能である。そのような金属コロイド粒子としては、抗
体タンパクに吸着されやすい特性を有する貴金属コロイ
ドが好適に用いられる。

これらの具体例としては、金、銀、白金、ロジウム、パ
ラジウムのコロイドが挙げられる。中でも金コロイド、
が好適に用いられる。これらの金属コロイドの粒径は５
０〜５００人、好ましくは５０−２００人であり、水溶
液中で抗体タンパクに吸着固定される。ぞの吸着方法は
公知の方法、例えばエム・ポリスバーガー著“′透過お
よび走査電顕のための細胞マーカとしての金コロイドの
評価″バイオロジカル、セル３６巻、２５３ページ（１
９７９年）により行うことができる。金属コロイド標識
された第２抗体はデバイス上に予め固定された抗体が被
検液中の抗原物質と反応する前に、または反応しながら
、あるいは反応した後に当該抗原とのみ反応する。この
様にして、デバイス上の抗原・抗体反応部位のみが金標
識第２抗体で覆われることになり、デバイス全面を全標
識物質で覆った場合に比べ視認性は格段に向上する。

上記の方法によりデバイス上にて行われた生体成分検出
反応は、被検知物質の濃度が比較的高い（〉１０００ｇ
〜１μｇ／Ｉｎ１）場合には直接目視により確認できる
が、濃度が低い場合には色彩・色差δｆやエリプソメー
タを用いて定量化することが可能である。色彩・色差ｈ
］の原理および装置の詳細については、既知の文献（材
料技術Ｖｏｌ　５．　Ｎｏ、２２９−３３（１９８７）
）に記されている。また、エリプソメータについては、
欧州特許明細書第１９０８８号、および特開昭６１−２
５８１０４号に詳細に記されている。

このような装置を用いれば、１０ｇ／威以下の８源な生
体成分も検出が可能となる。

以上述べたように、本発明によれば従来困難でおったａ
薄濃度の生体成分が非帛°に高感度に増幅されて検出さ
れ、ぞの工業的意義は極めて大である。以下、実施例を
あげ、本発明をざらに詳しく説明する。

実施例１ 高周波スパッタリング装置内に５ｉＱ２ターゲツトおよ
び基板であるクロムメツキしたステンレス板を装着した
のら、チャンバー内圧力がｌＸｌ０−５ｒｏｒｒになる
まで排気した。Ａｒ　１００％ガスを導入しチャンバー
内圧力１．Ｏｘｌｏ−３Ｔｏｒｒに保持し、５００ｗで
グロー放電させた。グロー放電を１３分行い、基板り［
１ムメッ、キ面上にｉ　ｏｏｏ入の５１０２１Ｍを形成
した。

１０００人の５ｉＱｚ層を有するクロムメツキしたステ
ンレス板をオクタデシルトリクロロシランの１．０×１
０−２　ｗｔ％クロロホルム溶液に２時間浸漬すること
により５ｉＱ２表面を疎水化した。

ついで、この基板を５　ｘ　１０−５　ｇ　／（Ｂｌｌ
の抗ヒト１（ＩＧ液に１２時間浸漬した。さらに５　Ｘ
　１Ｏ−９（］　／ｍｉのヒトＩＵＧ　　（ト１　＆　
Ｌ　ｇＦ！特異性）液に５分間浸漬した。

しかるのら、このデバイスをさらに５Ｘ１０−５！１１
／威の抗ヒトＩ（ＩＱ水溶液に引続き３０分接触さけた
。

このような処理を施した基板を７０’の角度から目視す
ると、５ｉＱｚ面は淡黄色、抗ヒトＩ（ＩＧ吸着面は黄
色、ヒトＩＣＩＧ反応面は赤紫色の干渉色を呈している
ことが確認された。

ついでこの基板を、粒子径５ｎｍの金コロイド溶液（６
，５ｘ１０１４個／ｄ）に２０分浸漬したところ、３０
”の角度の目視により、５ｉＯｚ面は黄色、抗ヒト１（
ＩＧ吸着面はダイダイ色、抗ヒ１〜ＩＣＩＧ反応面は青
紫色の干渉色が認められ、その児やすさがざらに向上し
た。

比較例１ 実施例１の生体成分被検体において、抗原・抗体反応後
のデバイスを第２抗体（抗１（ＩＧ）溶液に浸漬しなか
った場合、抗ヒトＩｇＧのみが吸着した部位と抗原・抗
体゛反応部位の干渉色は識別し難く、被検体を約７０°
に傾けて（入射角２反射角を７０゜にして）初めて視認
できた。

実施例２ ステアリンＭ８ＩＩ１ｇを１ｄの蒸留クロロホルムに溶
解して溶液とした。４９１．４　ｃｍ２の水槽表面積を
有する表面圧−面積曲線（以下π−Ａ曲線と略す）測定
用水槽に張った塩化バリウム３　ｘ　１０−５　Ｍ　、
炭酸水素カリウム４　Ｘ　１０−４　）１の混合水溶液
上にクル１〜ラマイクロピペツトを用いて、上記溶液２
００μｌを徐々に滴下した。滴下終了後５分間静置し、
表面圧２０１１１Ｎ／ｍになるまで仕切板を移動させた
。

この水面展開膜を表面圧２０ｍＮ／ｍを常に保ったまま
、疎水化処理（ステアリン酸鉄（Ｉｎ＞塗布）を施した
クロムメツキしたステンレス板（鏡面仕上げ）上に、垂
直浸漬、引き上げ法（以後ＬＢ法と略す）によって３５
層（膜厚８５０人）累積した（詳細は新実験化学講座第
１８巻４９９頁）。この時基板は、ステアリン酸累積膜
の存在により、光干渉色として黄色を呈した。このステ
アリン酸バリウム層の上に、予め水面展間したＮ−オク
タデシルマレイミドの単分子膜を水平付着法により一層
累積した処、基板の光干渉色は黄橙色になった。

ついで、この基板を０．４ｍａ　／ｍａｌのヒツジ抗ヒ
ト１（ＩＧ　　（ｔ−１＆Ｌ鎖特異性）液に２時間浸漬
したところ、デバイス表面の光干渉による色調は赤とな
り、抗ヒトＩｐＧが基板に単分子状に吸着したことがわ
カッタ。ａ　１３１．：　ヒトＩｇＧ液（５ｘｉｏ−＋
θｇ／ｍりに２時間浸漬したが、基板に吸着している抗
ヒトＩＱＧとヒトＩｑＧとの抗原抗体反応によるデバイ
ス表面の色調は識別し難かった。次いで、予め、粒径５
０人の金コロイドを１分子あたり１個吸着固定した抗ヒ
トＩｇＧの水溶液（１μｇ／ｍｌ）に上記デバイスを浸
漬したところ、抗原・抗体反応部の光干渉色は青紫色に
変化し、抗原の識別が容易にできた。

実施例３ 実施例２において全標識２久抗体を用いる代りに抗ヒト
Ｉ（ＩＧを反応固定したスブレンー無水マレイン酸交互
共重合体の水溶液を用い、抗原−抗体反応後のデバイス
を浸漬したところ、反応部位は緑色に変化し、抗原の識
別ができた。

【図面の簡単な説明】

図１は本発明に用いられる増幅前のデバイスの概念断面
図である。 図２は図１に対応するデバイスの光干渉の概念図１図３
は図１のデバイスを増幅反応した後の光干渉の概念図で
ある。 図１〜図３において、■は光反射性基板（■）。 ■は光干渉層（ｎ）、ＩＩＩは生体成分検知層（■）。 ＩＶは被検物質ｆ３（ＩＶ）、Ｖは増幅反応層を表わし
、ｎｏは空気の屈折率、「１１　は層（ＩＩ）の屈折率
。 「）ｚはＩＩ（ＩＩＩ）の屈折率、ｎ３はＩＩ（ＩＶ）
の屈折率、「１４は層（Ｖ）の屈折率である。

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. （１）実質的に乱反射のない光反射性基板（ I ）、及
   びこの上に積層された光干渉層（II）、更にこの層（I
   I）の上に設けられた実質的に単分子層からなる、生体
   成分を検知するための物質層（III）よりなるデバイス
   を用いて、当該層（III）を被検知物質（IV）溶液と接
   触させた後、デバイス表面での光干渉色の色調変化、ま
   たは反射光の濃淡変化として上記物質（IV）を検出する
   方法において、上記物質層（III）を被検知物質（IV）
   と反応させた後、又は反応させながら、該被検知物質中
   の別の反応部位と特異的に反応しうる物質（Ｖ）をさら
   に反応させ、デバイス表面での光干渉色変化または反射
   光の濃淡変化を増幅することを特徴とする、生体成分検
   出方法。
2. （２）当該物質（III）が抗体タンパクであることを特
   徴とする、特許請求の範囲第１項記載の生体成分検出方
   法。
3. （３）当該被検知物質（IV）が抗原物質であることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の生体成分検出方法
   。
4. （４）生体成分検出反応増幅のために用いる当該物質（
   Ｖ）が、上記第３項記載の抗原物質に対する第２抗体で
   あるか、または、第２抗体と金属コロイド又は高分子物
   質との結合体であることを特徴とする、特許請求の範囲
   第１項記載の生体成分検出方法。
5. （５）当該光干渉層（II）が４００〜８００ｎｍの可視
   光領域で実質的に吸収を有さず、かつ生体成分を検知す
   る物質層（III）に親和性のある有機物または金属酸化
   物であることを特徴とする、特許請求の範囲第１項記載
   の生体成分検出方法。
6. （６）当該光干渉層（II）の表面に生体成分を検知する
   物質層（III）が化学結合されてなる特許請求の範囲第
   １項記載の生体成分検出方法。
7. （７）上記第１項記載の生体成分検出反応を行った後、
   当該デバイス表面からの直接反射光量が、反射角（θ＿
   ２）０°〜５０°において基板面からの反射光量とほぼ
   等しくかつ可視光領域の第１の光干渉色を呈し、また被
   検知物質と反応していない部分のデバイス表面からの直
   接反射光量は反射角（θ＿１）０°〜５０°において基
   板面からの反射光量とほぼ等しく、かつ上記第１の光干
   渉色とは異なる可視光領域の第２の光干渉色を呈するよ
   うにして、被検知物質（IV）を識別・検出することを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の生体成分の検出方
   法。
8. （８）生体成分検出反応を行った後の当該デバイス表面
   からの光反射率が１０〜５０％となるように金属薄膜層
   を設けたことを特徴とする特許請求の範囲第７項記載の
   生体成分検出方法。
9. （９）反応後のデバイス表面の光干渉色または明暗変化
   を、色彩・色差計で定量的に測定することを特徴とする
   、特許請求の範囲第（１）〜（８）項記載のいずれかの
   生体成分の検出方法。
10. （１０）反応後のデバイス表面の膜厚変化をエリプソメ
    ータで定量的に測定することを特徴とする、特許請求の
    範囲第（１）〜（８）項記載のいずれかの生体成分の検
    出方法。
11. （１１）入射光線が波長４００〜８００ｎｍの可視光で
    ある、特許請求の範囲第（１）項記載の生体成分検出方
    法。