JP4758659B2 - スピンコート製膜法 - Google Patents
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Description
好ましくは、被製膜基板を導入する密閉容器の容積は、被製膜基板表面を被覆する塗布液の容積の3倍以上1000倍以下である。
好ましくは、インナーカップの回転で発生する被製膜基板上の遠心力の分布が、最大となる点での遠心力が最小となる点での遠心力の100倍以下となるようなインナーカップ上の位置に、被製膜基板をセットし、該被製膜基板の表面に塗布液を滴下し、該被製膜基板を回転させる。
好ましくは、被製膜基板表面を塗布液で被覆し、続いて被製膜基板を密閉構造を有する容器内に導入し、実質的に回転しない状態で10秒以上4000秒以内の時間保持した後、被製膜基板を回転して基板上に薄膜を製膜する。
好ましくは、被膜は疎水性ポリマー層であり、基板から最も離れた層に表面修飾層を有する。
好ましくは、前記表面修飾層は、共有結合を生成することのできる官能基を有する。
好ましくは、本発明のセンサー用固体基板は、固体基板と疎水性ポリマー層との間に金属層を有する。
好ましくは、金属膜は、金、銀、銅、白金又はアルミニウムからなる群より選ばれる自由電子金属からなるものである。
好ましくは、生理活性物質を固定化することができる官能基は、−OH、−SH、−COOH、−NR1R2(式中、R1及びR2は互いに独立に水素原子又は低級アルキル基を示す)、−CHO、−NR3NR1R2(式中、R1、R2及びR3は互いに独立に水素原子又は低級アルキル基を示す)、−NCO、−NCS、エポキシ基、またはビニル基である。
好ましくは、本発明のセンサー用固体基板は、非電気化学的検出に使用され、より好ましくは、表面プラズモン共鳴分析に使用される。
好ましくは、本発明のセンサー用固体基板は、生理活性物質が表面に結合している。
本発明によるセンサー用固体基板の製造方法は、スピンコート塗布において、塗布溶剤蒸気圧が飽和蒸気圧に対して50%以上100%以下の雰囲気内で被製膜基板を回転することによって、被製膜基板上の塗布液を薄膜化して製膜することを特徴とする。
核酸としては、測定の対象とする核酸と相補的にハイブリダイズするものを使用することができる。核酸は、DNA(cDNAを含む)、RNAのいずれも使用できる。DNAの種類は特に限定されず、天然由来のDNA、遺伝子組換え技術により調製した組換えDNA、又は化学合成DNAの何れでもよい。
低分子有機化合物としては通常の有機化学合成の方法で合成することができる任意の化合物が挙げられる。
免疫グロブリン結合性蛋白質としては、例えばプロテインAあるいはプロテインG、リウマチ因子(RF)等を使用することができる。
糖結合性蛋白質としては、レクチン等が挙げられる。
脂肪酸あるいは脂肪酸エステルとしては、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、ステアリン酸エチル、アラキジン酸エチル、ベヘン酸エチル等が挙げられる。
以下の実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
(1)金表面基板の作製
縦8mm×横120mm×厚さ0.5mmのガラス基板に、平行平板型6インチ用スパッタ装置(SH−550、アルバック(株)社製)を用いて基板上にクロムの厚さが
2nmとなるようスパッタし、さらにクロム上に金の厚さが50nmになるようにスパッタ製膜を行った。この基板をModel-208UV-オゾンクリーニングシステム(TECHNOVISION INC.)で30分処理し、金表面基板を作製した。
ポリ(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-トリデカフルオロオクチルアクリレート)-ポリ(ベンジルメタクリレート)コポリマー(モノマー質量比4/6、質量平均分子量3万、以降ポリマーAと略記)1.9gをメチルイソブチルケトンに溶解し、液量が100mLになるようにメチルイソブチルケトンを添加した。このポリマーA溶液を0.45μmフィルターで濾過し塗布液Aを調製した。メチルイソブチルケトンは予めモレキュラーシーブス4A 1/16で16時間脱水処置したものを使用した。
前記金表面基板を縦30mm×横130mm×深さ10mmの密閉構造を有するアルミニウム容器内にセットした。このアルミニウム容器は上板部に開閉可能な直径10mmの空気穴構造を有しており、必要に応じて内部の溶剤蒸気を希釈することが可能であった。このアルミニウム容器を密閉式インナーカップを有するスピンコート機(MODEL SC408(特)、ナノテック社製)のインナーカップ上に金表面基板が中心から135mmの位置に円弧の接線方向が長軸となるよう固定した。マイクロピペットを用いてこの金表面基板上に塗布液Aを100μL滴下し、金表面基板全面を塗布液Aで被覆した。アルミニウム容器を密閉し、30秒間静置した後、200rpmで60秒間回転させた。回転開始直前のアルミニウム容器内の溶剤蒸気圧は、飽和蒸気圧に対して90%であった。容器内容積は、使用した塗布液容積に対して390倍であった。基板は5分間密閉容器中に静置した後、密閉容器から取り出し室温で一晩常圧乾燥させ、ポリマーAコーティングチップを得た。
上記のように作成したポリマーAコーティングチップを60℃に保温した1N NaOH水溶液に16時間浸漬した後、純水の流水中で洗浄し、ポリマーAコーティング層表面にCOOH基が導入されたバイオセンサーチップを作製した。
上記の方法で作成したスピンコートチップに、1−エチルー2、3−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド(200mM)と、N−ヒドロキシスクシンイミド(50mM)との混合液を30分接触させ、次に純水で洗浄した。次に、ProteinA(ナカライテスク社製)溶液(100μg/mL、50mM酢酸バッファー、pH4.5)を30分間接触させ、その後50mM酢酸バッファー(pH4.5)で洗浄した。
ProteinA固定チップの検出位置に依らず、結合信号が安定しているほど、実験の信頼性が高い。mouse IgGの結合量のProteinA固定チップ位置依存は以下の方法で評価した。
実施例1(3)のポリマーAコーティングチップの作製において、アルミニウム容器の内寸を縦30mm×横130mm×深さ30mmとしたこと以外実施例1と同じ方法でスピンコートを実施した。回転開始直前のアルミニウム容器内の溶剤蒸気圧は、飽和蒸気圧に対して80%であった。容器内容積は、使用した塗布液容積に対して1200倍であった。
エリプソメーターから平均膜厚20nm、膜厚の変動係数(標準偏差を平均値で割った値の百分率)は6%であった。さらに実施例1(4)から(6)の操作を実施した。
実施例1(3)のポリマーAコーティングチップの作製において、アルミニウム容器の空気穴の開閉を調整し、30秒間静置した回転直前のアルミニウム容器内の溶剤蒸気圧を飽和蒸気圧に対して40%となるよう調節したこと以外実施例1と同じ方法でスピンコートを実施した。エリプソメーターから平均膜厚20nm、膜厚の変動係数(標準偏差を平均値で割った値の百分率)は12%であった。さらに実施例1(4)から(6)の操作を実施した。
実施例2のポリマーAコーティングチップの作製において、アルミニウム容器の空気穴の開閉を調節し、30秒間静置した回転直前のアルミニウム容器内の溶剤蒸気圧を飽和蒸気圧に対して30%となるよう調節したこと同じ方法でスピンコートを実施した。エリプソメーターから平均膜厚20nm、膜厚の変動係数(標準偏差を平均値で割った値の百分率)は14%であった。さらに実施例1(4)から(6)の操作を実施した。
表1にmouse IgG結合によるチップ内の位置による信号変化を示す。CVは、変動係数(標準偏差を平均値で割った値の百分率)を示す。
Claims (4)
- スピンコート塗布において、塗布溶剤蒸気圧が飽和蒸気圧に対して50%以上100%以下の雰囲気内で被製膜基板を回転することによって、被製膜基板上の塗布液を薄膜化して製膜する、表面に被膜を有するセンサー用固体基板の製造方法において、インナーカップの回転で発生する被製膜基板上の遠心力の分布が、最大となる点での遠心力が最小となる点での遠心力の100倍以下となるようなインナーカップ上の位置に、被製膜基板をセットし、該被製膜基板の表面に塗布液を滴下し、該被製膜基板を回転させる、上記方法。
- 被製膜基板を密閉容器内に導入し、該密閉容器内において塗布溶剤蒸気圧が飽和蒸気圧に対して50%以上100%以下の雰囲気内で被製膜基板を回転する、請求項1に記載の方法。
- 被製膜基板を導入する密閉容器の容積が、被製膜基板表面を被覆する塗布液の容積の3倍以上1000倍以下である、請求項1又は2に記載の方法。
- 被製膜基板表面を塗布液で被覆し、続いて被製膜基板を密閉構造を有する容器内に導入し、実質的に回転しない状態で10秒以上4000秒以内の時間保持した後、被製膜基板を回転して基板上に薄膜を製膜する、請求項1から3の何れかに記載の方法。
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