JPH02152992A - Ｃ―３位に脂肪鎖を有するビンカ誘導体の複合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、癌治療用の薬物ビンカアルカロイドとして使
用される薬物−キャリア複合体に関する。

これらの薬物は、腫瘍細胞の増殖のみならず、造血細胞
及び腸上皮細胞の場合のように高い分裂速度を有する正
常細胞の増殖をも阻止するという特徴を有している。し
かも、これらの薬物は他の組織に対する毒性作用を存し
ており、各々心毒性及び神経毒性がある。

現在量も使用されているビンカアルカロイドの誘導体は
、ビンブラスチン及びビンクリスチンである。

ビンブラスチン及びビンクリスチンは、ニチニチソウ（
Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ　Ｒｏｓｅｕｓ）の葉から抽
出される２種の二量体誘導体である。ビンデシンは、ビ
ンブラスチンから出発して得られる半合成二世体である
。これら３　Ｊｌの誘導体は、様、νなりイブの癌性疾
患の治療に際して人医学上現在最も多く使用されている
。この使用は、ビンブラスチンの場合がホジキン病、乳
及び肺１１．１！ＪＪ％のような、ビンクリスチン及び
ビンデシンの場合がリンパ肉腫、リンパ芽球白血病及び
慢性リンパ芽球白血球の急性転漠のようなヒト腫瘍に対
するそれらの極めて明瞭な活性によって裏付けられてい
る。しかしながら、これらの物質の使用はそれらの神経
学的及び血液学的毒性によって制限されている。ビンク
リスチン及びビンブラスチンの新規低毒性誘導体の開発
をもくろむリサーチプログラムが数年間にわたり続けら
れてきた。ビンカアルカロイドの多数の誘導体が、更に
有効な抗！ＩＩ瘍薬理活性を得る目的で合成された。か
かる目的でビンカアルカロイド誘導体を高分子キャリア
とカップリングさせるために、治療活性を高める一方で
固有毒性を減少させた同種的薬物の概念的アプローチに
従い、本発明の方法が開発されたのである。例えば、本
発明で提案されたキャリアは、肝細胞及びヒ）〜へバト
ーマ細胞によって選択的に認識されるガラクトシル化ヒ
トアルブミンである。無菌かつ無発熱物質条件下でヒト
に投与しうろこの新糖タンパク？ｆ（ｎｅｏｇｌｙｃｏ
ｐｒｏｔｅｉｎ）を産生ずるだめの技術は完成されてい
る。最終的に、ヒトへバトーマ細胞に対して高い親和性
及び良好な選択性を有するモノクローナル抗体を分泌す
゛るハイブリドーマが得られた。モノクローナル抗体と
の複合化も行われた。

更に正確には、本発明はインドールージヒドロインドー
ルクイプビンカアルカロイドの誘導体と同種的剤との新
規複合体に関する。

本発明による癌化学療法問題に対するアプローチの特異
性は、抗腫瘍剤の選択性を高め、その−方で作用をうけ
ることが望まれる細胞によってできるだけ特異的に認識
されるキャリアにそれらをカンブリングさせることを事
実上目的とした同種的薬物の概念にある。投与されたほ
ぼすべての薬物がその標的に到達するという事実から得
られる更に大きな活性に加えて、このアプローチは抗腫
瘍剤の毒性を著しく低下させることを目的とする。

このアプローチは、薬物及びそのキャリア間に介在する
化学結合の夕・イブに依存している。実際」１、本発明
の結合は、単純な希釈作用による非共有結合複合体の解
離を避けることが可能な共有結合であって、それらは細
胞外生物学的液体中におけるそれらの安定性及びリソソ
ーム酵素存在下におけるそれらの可逆性にも基づいて選
択された。好ましくは、開発された薬物／キャリア複合
体は一方で腫瘍細胞の表面上に存在する特異的部位によ
り認識されねばならないが、他方でそれらは細胞内に取
込まれてリソソームに応答しなければならない。

したがって、本出願では、処理されるべき標的細胞に゛
活性物質を選択的に向かわせる特異的高分子キャリアを
同種的剤として指摘するつもりである。一般的に、これ
らのキャリアはＡＨｇａｌ等のタンパク賞、ＥＧＦ等の
成長因子又はタンパク賞断片、特に免疫グロブリン又は
免疫グロブリン断片である。例えば、ここで関連する癌
の場合には、腫瘍抗原に対するモノクローナル抗体が特
に適している。

前記のように、本発明における同種的系、即ち複合体は
、同種的剤及び活性物質に加えて、これら２種の化合物
間における共有化学結合の存在を必要とする。これは、
例えばＣ００）！及びＮＨ，のような、活性物質の末端
化学基と、同種的剤の相補的化学基間の結合である。そ
れは２種の化合物間の結合を確実化する化学基又は分岐
鎖であればよい。

同種的化概念に伴う様々な要素が有しているにちがいな
い特徴に関する記載は、本出願人により出願されたフラ
ンス特許出願第８５１０２３４号に見られる。

ビンカアルカロイド誘導体は、抗腫瘍剤として更に活性
で、更に選択的かつ低毒性である複合体の形の物質とい
う観点からの製造に関して、多数の調査、研究及び特許
の主題であった。

現在までのところ、インドールージヒドロインドール二
世体対タンパク質のカンプリングは実質上２つの経路で
考えられてきた。

１）Ｃ−４位におけるカンプリング ａ）ビンカアルカロイド骨格の４位における炭素上のヒ
ドロキシル基から誘導されるエステル基を介する（欧州
特許出願第１２４　、５０２号）。これはヘミスクシネ
ート分岐鎖を介してビンデシンを免疫グロブリンとカッ
プリングさせることを要した。

ｂ）特にルクセンプルグ特許出願第８６２１２号におけ
る特にＡ　ｌ　ａ−Ｍａ　ｌのようなマレオイルアミノ
酸タイプの二官能性有機誘導体を介する。

しかしながら、これら２つのタイプによる他のＣ−４カ
ンブリングも欧州特許出願第１２１，３８８号及び第１
２３，４４１号に見られる。

２）Ｃ−３位におけるカンプリング ａ）ビンデシンは、欧州特許出願第５６．３２２号にお
いてアジド誘導体を介して直接免疫グロブリンにカンプ
リングされた。

ｂ）欧州特許出願第２０６．６６６号、第２０６．６６
７号もヘミスクシネートタイプの分岐鎖を介して免疫グ
ロブリンに結合されるビンブラスチンヒドラジドのカッ
プリングについて提案している。

本発明では、本出願人により出願されたフランス特許出
願第８６０００３６４号及び第８６１７４Ｉ２号に記載
されている新規誘導体から出発してビンカアルカロイド
誘導体の新規複合体を得ることについて提案している。

実際に、本発明の主題は、ポリペプチド性の高分子キャ
リアに共有結合を介してＣ−３位で結合せしめられた少
なくとも７個の脂肪族炭素原子の脂肪鎖（ｄｅｔｅｒｇ
ｅｎｔ　ｃｈａｔｎ又はｆａｔｔｙ　ｃｈａｉｎ）を有
するビンカ（インドール−ジヒドロインドール）誘導体
の複合体である。

更に具体的には、本発明の主題はＣ−３位において少な
くとも７個の脂肪族炭素原子の脂肪鎖を有するビンカ（
インドール−ジヒドロインドール）アルカロイド誘導体
の複合体であって、上記類はアミド（−Ｃ０ＮＨ−）結
合を介してポリペプチド性の高分子キャリアの遊離アミ
ノ基にカップリングされたＣ０ＯＨ基によりその末端に
おいて置換されている。

更に具体的には、下記式１を有する複合体である： 上記式中、 （Ｒ１、Ｒ，）は（−Ｅｔ　、−０Ｈ）又は（−１（、
−Ｅｔ）を表わし； Ｒ４は−Ｈ１−Ｍｅ又は−ＣＨｏを表わし；Ｒ３は−Ｏ
Ｈ又は−０−Ｃ−ＣＨｘを表わし；Ｒは−Ａ−Ｒ’−Ｃ
−を表わし； Ａは−ＮＨ−−ＮＨ−ａｒｋ−Ｃ−０及び−ＮＨ−ａ１
に−Ｃ−ＮＨ−の中から選択されるか、あるいはＡは−
ＮＨ及び−Ｃ−Ｏ又は−ＮＨ−及び−Ｃ−ＮＨで終結す
るタンパク質構造中に属するアミノ酸の二価基であり； ａｒｋは直鎖又は分岐鎖状のＣＩＣ？二価炭化水素鎖を
表わし； Ｒ′は少なくとも７個の脂肪族炭素原子を有する脂肪族
炭化水素基を表わし； Ｒは÷Ｃ−ＮＨ＋結合を介してキャリアＴの遊離アミノ
基にカップリングされたＲ１の末端−ＣＯＯＩＩ基に由
来するーｃ−４によって置換されており；したがって、
−Ｒ−Ｔは＝Ａ　−Ｒ’　−Ｃ−Ｎ　Ｈ−ＰＩ３ （Ｔ＝−ＮＨ−Ｐ）で示すことができる。

脂肪族炭化水素基の中では、下記基： ・直鎖又は分岐鎖状ＣＩＣｚ。アルキル、及び・直鎖又
は分岐鎖状Ｃ＋　　Ｃｚ。アルケニルが挙げられるが、
これらの基は直鎖であることが好ましい、これらの基が
置換されている場合には、それらは鎖の末端で置換され
ていることが好ましい。

ａＡ’に基としては、１以上の基ＯＨ，ＮＨ！もしくは
Ｃ０ＯＨで置換された又は非置換の直鎖又は分岐鎖状Ｃ
Ｉ　　Ｃ７、好ましくはＣ，−Ｃ，炭化水素基が挙げら
れる。

Ａがタンパク質構造中に属するアミノ酸の二価基である
場合に、それが不斉炭素原子を有するときには、それは
０体でも又はＬ体であってもよい。

５ＡはＧｌｙ　％　Ａｌａ　、　Ｖａｌ　、　Ｌｅｕ　
、　ｆｌｕ　、　Ｐｈｅ、Ｓｅｒ　、　Ｔｈｒ　％　Ｌ
ｙｓ　％　Ｌｙｓ−ＯＨｓ　Ａｒｇ　ＸＡｓｐ　、　Ａ
ｓｐ−Ｎ１１ｚ、Ｇｌｕ　、、Ｇｌｕ−ＮＨ２、Ｃｙｓ
−５１１、Ｍｅｔ　、、Ｔｙｒ　、Ｔｒｐ又は１１ｉｓ
に由来するが、Ａｌａが好ましい。

これらの基が結合基以外の基として存在する場合には、
それらは例えばＣｂｚ　（カルボベンジルオキシ）基の
ようなタンパク質化学において公知の保３９％で保護さ
れていてもよい。

Ｒ，＝−ＯＨかつＡ　＝　−Ｎ　Ｈ−である複合体が特
に挙げられる。

弐Ｉの複合体の中では、（Ｒ＋　−Ｒｚ）　＝　（−Ｅ
ｔ、　−０ｆｆ）かつＲ４＝Ｍｅである゛複合体も更に
特に挙げられる。

特に有利な複合体は、−Ａ−Ｒ’が−・ＮＨ（ＣＨｚ）
ｚ、ＮＨ−（ＣＨり　Ｉｔ及びＮＨ−（Ｃ）＋２）？　
　ＣＨ＝ＣＩＩ　　（ＣＩＩＺ）１１の中から選択され
る場合に得られる。

好ましくは、高分子キャリアはタンパク質、新機タンパ
ク買及びＩｇＧ免疫グロブリン又はそれらの断片の中か
ら選択される。

タンパク質又は新機タンパク質としては、・牛アルブミ
ン血清、 ・ガラクトシル化ヒトアルブミン、及び・ＥＧＦ　ｌ：
皮成長因子）のような成長因子が挙げられる。

事実上、２つのタイプのキャリアが特に挙げられる。第
一は、ガラクトース残基を有しかつ肝細胞及びヒトへバ
トーマ細胞の表面上に存在するレセプターによって認識
される新機タンパク質である。

他方、腫瘍細胞の場合には、もう一つのタイプのキャリ
アとしてモノクローナル抗体がこのケースにおいて挙げ
られる。このアプローチは抗原／抗体反応の選択性とい
う点で効果的であり、腫瘍細胞がそれらの原形質膜上に
多かれ少かれ特異的抗原を有しているいう仮定に基づい
ている。抗体がそれに対して産生される第一の抗原は器
官特異性抗原である。これは薬物／キャリア複合体の捕
捉を単一細胞型に限定させるが、しかしながら抗原を有
する正常細胞への複合体の接近を妨げない。

第二のタイプの標的は、腫瘍に関連する抗原から構成さ
れる。悪性転換時に再出現する胎児性細胞の表面上に存
在する抗原又は正常細胞の表面上に非常に少数でしか存
在しないが癌進行中に著しく数が増加する抗原もこのカ
テゴリー内に含まれる。

ある場合において、これらは感染しかつ形質転換された
細胞の表面上に出現するウィルス源の抗原であってもよ
い。標的として考えられる第三のタイプの抗原は、腫瘍
細胞の特異的抗原から構成される。この対象は主として
まだ検討中であるけれども、特異的抗原は癌転換中に出
現して腫瘍細胞の表面上に現われうるようである。この
ような抗原に対する抗体が理想的なキャリアである。機
能上腫瘍特異性と考えられる抗原の例としては、Ｂ型白
血病又はリンパ腫のある細胞によって運ばれる表面免疫
グロブリンのイデオオタイプがある。

したがって、肝細胞及びヒトへパトーマ細胞によって選
択的に認識されるガラクトシル化ヒトアルブミンがキャ
リアとして挙げられる。

ヒトへバトーマ細胞に対して高い親和性と良好な選択性
とを有するモノクローナル抗体の中では、フランス特許
出願第８５１０２３４号に記載された抗体ＣＴ−Ｍ−０
１が使用可能である。

また本発明は、 １）力・７ブリソグされるべきＣ−３ビンカアルカロイ
ド誘導体が： ａ）下記式のヒドラジド： をＣ−３位において対応アジドを形成させるために亜硝
酸塩と反応させ、 ｂ）咳アジドを下記式のアミン： Ｈ−Ａ−Ｒ’　−ＣＯＺ （Ｒ’の末端ＣＯＯ１１５は、特にヘンシル基のような
Ｚタンパク質化学において公知の保護基の形で保護され
ている） と反応させ、かつ Ｃ）工程ｂ）後に得られる誘導体においてＲ′の末端Ｃ
００）！基から保護基を除くことによって製造され； ２）工程Ｃ）で得られる誘導体が： ａ）工程１ｃ）で得られる誘導体中のＣ０ＯＨ基を−Ｃ
ＯＺ’　　（Ｚ’は下記ｂ）の結合を形成しうるペプチ
ド化学において公知の反応し易い基である）の形に活性
化し、 ｂ）ポリペプチドキャリアの遊離アミノ基と共有のアミ
ド結合を形成させることによってポリペプチドキャリア
とカップリングされることを特徴とする複合体の製造方
法に関する。

Ｚ′は、ボダンスキー（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ）、Ｙ、Ｓ
、クラウスナ−（Ｙ、５ＪＩａｕｓｎｅｒ）及びＭ、Ａ
、オンデッテイ（Ｍ、Ａ、０ｎｄｅｔｔｉ）、ペプチド
合成、第二版−＜１９７６年）、ジシン・ウィリー＆サ
ンズ（Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ）、特に第
８５−１３６頁で記載されているように当業界で公知の
基である。Ｚ′としては、（’Ｎｚ）基、ハロゲン、特
に臭素もしくは塩素、又は式Ｒ’Ｃ００（１？’は、例
えばＣＩ−ａ　アルキルのような脂肪族又は号香族基で
ある）のアシルオキシ基、アルコキシ基、好ましくはＣ
ｌ−Ｃｍアルコキシ基又はアリールオキシ基、メタンス
ルホニルオキシ、トシルオキシもしくはベンゼンスルホ
ニルオキシ、イミダゾリル基又はＮ−アシルヒドロキシ
ルアミン誘導体の基が挙げられる。例えば、Ｚ′はスク
シンイミドオキシ、フタルイミドオキシ又はベンゾトリ
アゾリルオキシである。好ましい例は、Ｎ−アシルヒド
ロキシルアミン基、特に１−シクロへキシル−３−（２
−モルホリノエチル）カルボジイミドメト−ｐ−）ルエ
ンスルホネートもしくは１．３−ジシクロへキシルカル
ボジイミドを用いて又はクロロギ酸イソブチルから得ら
れるような混合無水物を介して製造されるＮ−ヒドロキ
シスクシンイミドエステルである。

Ｚ′がイミダゾリル基である場合にそれはジイミダゾー
ルカルボニル基を用いて製造され、Ｚ′カＲ’Ｃ００（
Ｒｓハｃ＋　−Ｃ４７７１／キル、特ニＩ　チ）Ｌｉ及
びイソブチルである）である場合にそれは１−エトキシ
カルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン
及びクロロギ酸イソブチルを用いて各々製造される。

反応は下記のように行われる。ヒドラジドは例えばＩＮ
Ｈ（Ｊ等の酸媒体中ＭｅＯＨのような溶媒に溶解され、
溶液は冷却され、亜硝酸ナトリウムのような亜硝酸塩が
加えられ、しかる後ｐｉ（が重炭酸ナトリウムのような
弱塩基で調整され、こうして酸アミドが得られるが、こ
れは塩化メチレンのような非混和性溶媒で抽出される。

分離後、乾燥かつ濃縮されたアジドは望ましい生成物に
対応するアミン（Ｈ−Ａ−Ｒ’　−ＣＯＺ）で処理され
、粗生成物が反応混合物から分離されて、必要であれば
精製される。

得られたアミドは、いずれかの適すな方法によって反応
媒体から分離される。

次いで、保護されたＣ０ＯＨ基を有する誘導体は保護基
を除去させるために処理され、例えばそれはｌＯ％パラ
ジウム炭存在下メタノール中で水素添加に付される。

最後に、タンパク質とのカップリングは５〜２５℃の温
度、例えば室温及び７．５〜９．５、好ましくは８〜９
のｐｋＩにおいて水性媒体中で行われることが好ましい
、カップリングは、ビヒクルタンパク賞の遊離アミノ基
、例えばリジン基のアミノ基において生じる。

更に、本発明は請求項９記載の方法で用いられた中間生
成物を経由してＣ−３位に少なくとも７個の脂肪族炭素
原子の脂肪鎖を有するＣ−３ビンカ誘導体に関するが、
上記載は請求項９記載の方法の工程２ａ）によりその末
端においてｃｏｚ’基で置換されている。

また本発明は、薬物としての複合体の用途、並びにこれ
らの複合体を含有しかつ薬学上許容される賦形剤、担体
又はビヒクルを含有した医薬組成物に関する。

本発明の化合物は、特に白血病、全身性ホジキン病、あ
るリンパ腫、肉腫又は癌腫のような悪性腫瘍形成の治療
に際してそれらを特に有益なものとする抗１１［性を事
実上有している。

本発明の他の特徴及び利点は、第１〜３図で説明される
下記実施例から明らかとなるであろう。

ス１１九上 Ｎ−（１１−カルボキシウンデシル）−４−デアセチル
ビンブラスチン−３−カルボキサミド（化へ隘２０６０
）の 本プロセスは後記合成経路Ｉに関して記載されている。

Ａ）Ｎ−（１１−カルボベンジルオキシウンデシル）−
４−デアセチルビンブラスチン−３−カルボキサミド（
３） デアセチルビンブラスチン（１）のヒドラジド〔その製
造法はコンラッドら、ジャーナル・オブ・メディシナル
・ケミストリー、第２２巻、第３９１頁、　１９７９　
　（Ｃｏｎｒａｄ　　ｅｔ　　ａｌ、、Ｊｏｕｒｎａｌ
　　ｏｆ　　ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ、
２２．３９１（１９７９）　）に記載されている〕０．
６００　ｇ　（０，７８ミリモル）をメタノールＩ２ｉ
及びＩＮＩＩ（Ｊ３６Ｎｄ含有混合物に溶解する。溶）
夜をＱ　’Ｃに冷却し、しかる後乾燥ＮａＮ０ｚ　０．
１２３　ｇ（１，７８ミリモル）を撹拌下で−・度に加
える。

１３分間後、溶液のｐ■を冷胞和ＮａＨＣＯ３溶液で８
．５に調整する。

デアセチルビンブラスチンの酸アジドをＣＨ，（１゜１
５ＴＩ１１で４回速やかに抽出し、しかる後ＮａＣβ飽
和溶液で洗浄する。

抽出液をＮａｔＳＯ，で乾燥し、容量２０−に濃縮する
。１２−アミノドデカン酸ベンジル（２１０，３５４ｇ
（１，１６ミリモル）をＣＩ＋２（Ｊ、溶液に加え、溶
液を室温で２時間攪拌する。３層クロマトグラフィーで
は主成分を出現する（Ｒｆ　＝０．４６　；メタノール
：塩化メチレン５：９５）。

溶媒を蒸発させ、残渣をシリカクロマトグラフィーに付
し、溶離液として酢酸エチル：メタノール（９６：　４
）の混合物を用いる。適切な分画を合わせ、溶媒を除去
して、Ｎ−（１１−カルボベンジルオキシウンデシル）
−４−デアセチルビンブラスチン−３−カルボキサミド
４５０ｍｇ（収率５５％）を得るが、これは下記物理的
特性を有している。

Ｒｆ　：　０．４６　（シリカ、Ｃｌ１ｚＣ（ｌ　ｚ：
ｃＩｈｏｌｌ　９５：５　）門Ｓ：質量分析（ＤＣＩ　
、　イソブタン）　１１０４３（”＋１）、１１０５７
（”＋１４＋ｉ）、１０２５．１０１１．９９９．９８
５．９６６、ＮＭＲ：　（ＣＤＣｌ　３．２００　ＭＨ
ｚ）　：９．５２（０）１．　ＬＨ）　、８．０３（Ｎ
ｌｌ、　ＩＨ）、７．５１（Ｈ，）１４．ｌｌ−１２’
　）（２Ｈ）、７．４５−７．０４　（芳香族化合物、
７１１）、６．６１　（）Ｉ−１２，１）１）、６．０
７（Ｈ−９，ＩＨ）、５．８３（ＩＩ−１４，Ｈ−１５
，２Ｈ）、５．１２（ＣＩ□−Ｐｈ、２Ｈ）１．１１９
（Ｈ−１７，１）１）、３．９６０１−１７Ａ　’　、
ＩＨ）、３．７７（ＯＣＲ３、３８）、３．５８（ＯＭ
ｅ、３Ｈ）、３．３５（Ｈ−２）、２．７９（Ｎ−ＣＨ
：ｌ）、２．６４　（Ｈ−２１）ＩＲ：　（ＫＢｒ、　
　ｃｌｌｌ−’）：　　３４６０．２９３０．２８５８
．１７３４．１６６０．１６１４．１５０８．１４６０
．１２２８．７４０分子式：　ＣｂｔＨ＠３ＮｓＯｑ 分子量：　１０４１．６１？ Ｂ）Ｎ−（］　］ｌ−カルボキシウンデシル−４−デア
セチルビンブラスチン−３−カルボキサミド（４） メタノール２５−中Ｎ−（１１−カルボベンジルオキシ
ウンデシル）−４−デアセチルビンブラスチン−３−カ
ルボキサミド（３１４００■（０，３８ミリモ１し）の
？容？ｆｌを微量のｌＯ％パラジウム炭存在下室温大気
圧下で水素添加に付す。１５時間攪拌後、ＮＯ，飽和メ
タノール２−を加え、溶液をデカライト（Ｄｅｃａ　１
　ｉ　ｔｅ）で濾過する。フィルターをメタノール１０
ｄで２回洗浄する。

濾液を減圧下でｌ１４縮する。次いで、得られた残渣を
シリカクロマトグラフィーに付し、エーテル、メタ、ノ
ール及び１５Ｎアンモニア水５０／４９．５１０．５の
比率からなる溶離液用金物を用いて精製する。

適切な分画を合わせ、溶媒を除去して、Ｎ−（１１−カ
ルボキシウンデシル）−４−デアセチルビンブラスチン
−３−カルボキサミド３０７＋＋ｖ（０，３２ミリモル
）を得る。収率８４％酢酸エチル及び石油エーテルの混
合物で摩砕後、下記物理的特性を有する非晶質白色粉末
の形で生成物を得る。

Ｒｆ　：　０．３３　（シリカ、ＣｔｌｚＣｌ　ｚ：ｃ
ｌＩｉＯＨ９０：１０）ＭＳ　：　（ＤＣり　９５２．
８９２．８０９．７４９．７０９．６６３．６５１．６
１０．５９８．５７１ ＮＭＲ：　（ＣＤＣｌ　３．２００　Ｍｌｌｚ）　：８
．０２（Ｎ１１．　ｌ１ｌ）　、７．５２（ＩＩ−１１
゜Ｈ−１２，２Ｈ）、　６．４９（ＩＩ−１２，ｌ１ｌ
）、６．０７（Ｈ−９，ｌ１１）、５．８ｉ　（Ｈ−１
４−１５，２Ｈ）、４．１５（）Ｉ−１７，ＩＨ）、３
．７７（ＯＭｅ。

３Ｈ）、３．５８（ＯＭｅ、３Ｈ）、３．３３　（Ｈ−
２）、２．７９（Ｎ−Ｍｅ）、２．５８（Ｈ−２１） ［Ｒ：（にＢ＊＋　ａｍ−’）：　３４６０．２９２５
．２８５３．１７１９．　１６６０．１６１３．１５０
１．１４６０，１２２９分子式：　Ｃ５５Ｈ？？Ｎ５Ｏ
９ 分子量：９５１．５７ 無水エタノールにＮ−（１１−カルボキシウンデシル）
−４−デアセチルビンブラスチン−３−カルボキサミド
ｆ４１（１１０■）を溶解し、２％エタノール性メタン
スルホン酸を加えることによって、ビスメタンスルホン
酸塩を製造する。ｌ合液を減圧下で濃縮する。蒸留水３
−を残渣に加え、得られた溶液を凍結乾燥させ、ビスメ
タンスルホン酸塩１３３呵を得る。

ス財ｌ随１ Ｎ−（１１−カルボキシウンデシル）−４−デアセチル
ビンブラスチン−３−カルボキサミド（４）及びガラク
トシル　ヒ　　゛アルブミン　の　人乾燥ジオキサン（
２■）中クロロギ酸イソブチル（１６μ２）の溶液をジ
オキサン（８０ｔｊ）に？８解されたＮ−（１１−カル
ボキシウンデシル−４−デアセチルビンブラスチン−３
−カルボキサミド（９７■）及びトリエチルアミン（１
７μｍ）に１０℃攪拌下で滴下する．１５分間攪拌後、
有機混合物を０．１５Ｍリン酸緩衝液（ｐ）１８．５）
中ガラクトシル化ヒト血清アルブミン溶液１８５−（５
．４■／ｄ）に撹拌下で滴下しながら加える。

混合物を室温で１５時間攪拌する。次いで、９％ＮａＣ
　ｌ溶液で平衡化されたＧ２５ゲルで濾過することによ
り、それを精製する。

溶出ピークを回収し、ミリパック＝ＩＯ（Ｍｉｌｌｉｐ
ａｋ４０）（０．２２μ）で濾過し、容量１６−まで濃
縮し、滅菌する。

タンパク質素ヱはローリ−（Ｌｏｗｒｙ）法により測定
し、アルカロイド含量は放射能測定により調べる。

こうして製造された複合体は、ガラクトシル化アルブミ
ン１モルにつきＮ−　（１　１−カルボキシウンデシル
）−４−デアセチルビンブラスチン−３−カルボキサミ
ドロ、２モルを含んでいる。

化合物２０６０　（ν３　−　（ＣＭ　２）　ｌ　ｌ−
ＣＯＯＨ）をＡｌｇａ　ｌにカンプリング　せる　　の 最大の薬物／キャリアモル比を有しその一方でモノマ一
体としてできるだけ最良の高分子キャリア収率を維持し
た複合体を得ることが望まれる。

薬物／キャリアモル比のある闇値を超えると、キャリア
の重合が非常に急速に生じて、それを使用可能にさせて
しまう．この重合はタン−バク質の認識特性に影響を与
えるようである。

スＪＵ汁ｌ 実施例１及び２のＶＬＢ複合体誘導体の抗腫瘍活性を測
定する試験は、下記方法に従いマウスで行われた。

３、１．１．　　孟庄バ立り二叉ユ ２つの活性パラメーターが用いられた。

“１．Ｌ、Ｓ、”パラメーターは下記式に従い百分率と
して延命期間を表わし； （Ｔ　（日数）は治療マウスの平均延命期間であり、Ｃ
（日数）は参照マウスの平均延命す間である。）“長期
生存数”パラメーターはその百分率として６０日目に計
算値が求められた。

３、１．２．　　腹■血殴亙 雌性ＢＤＦ、マウスを０８目に白血病１）３８８細胞１
０６個で腹腔的感染させた。翌日、化合物２０６０を腹
腔内投与した。

２５　　　　　７　　　８２　　０／７　　　ＮａＣ１
９％４５　　　　７　　　１８６　　０／７　　　Ｈ！
０５０　　　　　７　　　１０５　　０／７　　　Ｎａ
Ｃ１９％４０　　　　７　　　１５６　　２／７　　　
Ｈｚ０７５　　　　　７　　　−３８　　０／７　　　
ＮａＣｆ９％５３７　　２０　　２５９　　７　　　＞
５８２　４／７　６．２　　１１６６５４３　　２０　
　３１８　　７　　　＞６８９　４／７　５．１　　１
１８２５４３　　３０　　４７７　　７　　　１９７　
３／７　５．１　　１１８２５３７　　４０　　５１７
　　７　　　−３１　０／７　６．２　　１１６６ガラ
クトシル化ヒトアルブミン（ＡＨｇ）にカンブリングさ
れた誘導体２０６０の複合体は下記の顕著な結果を示し
た。

ＪＪ　性Ｂ　Ｄ　Ｆ　＋　マウスに腹腔内移植された白
血病Ｐ３８８に対する２　０６０−ＡＨｇ複合体の化学
療法（１０”　　　　　　　　１　　　　に　　　　　
　　　）約２１ｓ３断片の）ＩｅｐＧ　２ヘパトーマを
Ｏ日目に剃毛されたＢａ　ｌ　ｂ／ｃ雌性マウスの背側
に左右対称に皮下移植した。１ｌｔｊ＆が所定量（約５
００■）に達したときに、治療剤を静脈内投与した。腫
瘍量の増加を時間の関数として追跡した。下記式から腫
瘍量を求めるために、腫瘍の直径を測定した。

Ｌ＝長さ；　　２＝幅 Ｘ日目の腫瘍量／治療初日のＩＩ！ｉ瘍量の比率を時間
の関数としてグラフにプロットした（相対量又はＲＭ　
／　Ｔ　）。

投与された製品は、コントロールの９％ＮａＣ１と１５
．２０及び２５ｎｒ／ｋｇ（７）各用量（７）２０６０
−　Ａｌｌｇａ　ｌ複合体である。第１図のグラフは、
時間の関数として平均相対量を示している。治療剤は、
静脈注射で５回各々２６．３３．４０．４７及び５４日
目に投与した。

第１図の結果によれば、調べられた３つの用量のうち一
部が有意の腫瘍増殖阻害を示す。

ＨｅｐＧ　２の場合、腫瘍について非常に大きな不一致
が観察され、時々特定量の腫瘍が一定時点で進行を止め
ている。これはコントロール系の場合に観察される。実
際に、コントロールの平均相対量は開始値の２５倍に達
するまで増加している゛、最大のＩＩ！Ｔｉ瘍をもつマ
ウスは死亡し、しかる後平均値の低下が観察される。そ
の後は進行を停市したヘパトーマに相当する非常に低い
値まで下落する。

実際に、通常平均値はＯまで下落する。

複合体の効果に関して、非常に明瞭な腫瘍型増加阻害が
観察される。治療中止後、腫瘍再増殖が観察される。治
療動物の生存数は、コントロールの場合よりも多い。

裏施拠土 ４．１　　血清中における２　０６０−ＡＨｇａｌ複合
体の２０６０−ＡＨｇａｌ複合体を８０％ヒト血清又は
９％ＮａＣ１（生理学的血清）の存在下３７℃でインキ
ュベートした。

様々なインキュベート時間Ｔの経過後、血清アルブミン
５ｍｇ添加の後で、２倍容量のア七ト二トリルによって
非分解タンパク賞を沈殿させた。

サンプルを４℃で１時間インキュづ一部した後、これら
を遠心分離し、液体シンチレーションで一部を計測する
ことにより上澄液の放射能を調べた。

可溶分放射能値は分解複合体の測定値である。

下記第１表で示された値は、可溶分放射能（トリチウム
化ビンカ）の百分率である。

第２図でも再現されている第１表の結果は、血清中にお
いて複合体が良好な安定性を有することを示している。

４．２　　リソソーム酵素による２　０６０−ＡＨｇａ
ｌ複Ａの 複合体を５ｍＭシスティン、４０ｍＭ酢酸緩衝液及びリ
ソソーム酵素（Ｔ、Ｓ、）又は水の存在下３７℃でイン
キュベートした。

様々なインキュベート時間Ｔの経過後、血清アルブミン
５■添加の後で、２倍容量のア七ト二トリルによって非
分解タンパク賞を沈殿させた。

サンプルを４℃で４０分間インキュベートしかつ３００
０ｒｐｍで４０分間遠心分離した後、液体シンチレーシ
ョンで一部を計測することにより上澄液の放射能を調べ
た。可溶分放射能値は分解複合体の測定値である。

第１表及び第３図で示された可溶分放射能の百分率は、
約８０％の複合体がリソソーム酵素（Ｔ、Ｓ、）で分解
されたことを示し７ている。

第１表 Ｖｓ　−Ｃ＋　ｚ　−ＡＨｇａ　ｌ　（２０６０ＡＧ）
安定性　　８０％ヒト血清　　　　分解丁Ｓ時間（Ｈ）
９χＮａＣｌ　　血清　　Ｈｚｏ　　ＴＳｏ　　　　　
１４　　１２．２　　１２．３　　１４．３２４．３　
　　１６．８　　　８　　１１．２　　６７．８４７．
５５　　　１６．６　　　９　　１２．３　　７７．３
７１．５　　　１３．３　　１８．４　　１４．１　　
８２．８大施■立 Ｎ−（１１−カルボキシウンデシル）−４−デアセチル
ビンブラスチン−３−カルボキサミドのモノクローナル
抗体（ＩｇＧ　ＣＴＭ　０１タイプ）へのカップ１ング 乾燥ジオキサン（０，５ｍ）中クロロギ酸イソブチル（
２，８μｌ）の溶液をジオキサンｌ−に溶解したＮ−（
１１−カルボキシウンデシル）−４−・デアセチルビン
ブラスチン−３−カルボキサミド（１６■）に１０℃で
攪拌上滴下する。１５分間攪拌後、有機混合物をｐＨ８
，５の０．１　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液中モノクローナル抗
体溶液（８，５■Ｐ／−）２０−に攪拌下で滴下する。

混合物を室温で一夜撹拌する。次いで、ｐＨ７，５の９
％ＮａＣｌ溶液で平衡化されたセファデックスＧ２５ゲ
ルで濾過することにより、それを精製する。溶出ピーク
を集め、限外濾過により濃縮し、滅菌する。

タンパク賞含量はローリ−法で測定し、アルカロイド含
量は放射能測定により調べる。

こうして製造された複合体は、モノクローナル抗体１モ
ルにつきＮ−（１１−カルボキシウンデシル）−４−デ
アセチルビンブラスチン−３−カルボキサミド１モルを
有している。

【図面の簡単な説明】

第１図は、様々な用量の複合体２０６０＾ｉ１ｇａｌテ
処理すれたＩＩｅｐＧ２ヘパトーマに関して、時間の関
数として相対的腫瘍量を示しており；第２図は、本発明
の２０６０ＡＩＩｇａｊ？複合体の血清中における安定
曲線を示しており； 第３図は、リソソーム酵素による同一複合体の分解曲線
を示している。 口Ｇｊ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ポリペプチド性の高分子キャリアに共有結合を介し
   てＣ−３位で結合せしめられた少なくとも７個の脂肪族
   炭素原子の脂肪鎖を有するビンカ（インドール−ジヒド
   ロインドール）誘導体の複合体。 ２、Ｃ−３位において少なくとも７個の脂肪族炭素原子
   の脂肪鎖を有するビンカ（インドール−ジヒドロインド
   ール）アルカロイド誘導体の複合体であって、 上記鎖がアミド（−ＣＯＮＨ−）結合を介してポリペプ
   チド性の高分子キャリアの遊離アミノ基にカップリング
   されたＣＯＯＨ基によりその末端において置換されてい
   ることを特徴とする複合体。 ３、高分子キャリアＴにカップリングされた誘導体が下
   記一般式 I を有する： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔上記式中、 （Ｒ＿１、Ｒ＿２）は（−Ｅｔ、−ＯＨ）又は（−Ｈ、
   −Ｅｔ）を表わし； Ｒ＿４は−Ｈ、−Ｍｅ又は−ＣＨＯを表わし；Ｒ＿３は
   ＯＨ又は▲数式、化学式、表等があります▼を表わ し； Ｒは▲数式、化学式、表等があります▼を表わし； Ａは−ＮＨ−、▲数式、化学式、表等があります▼及び ▲数式、化学式、表等があります▼の中から選択され るか、あるいはＡは−ＮＨ及び▲数式、化学式、表等が
   あります▼又は −ＮＨ−及び▲数式、化学式、表等があります▼で終結
   するタンパク 質構造中に属するアミノ酸の二価基であり；ａｌｋは直
   鎖又は分岐鎖状のＣ＿１−Ｃ＿７二価炭化水素鎖を表わ
   し； Ｒ′は少なくとも７個の脂肪族炭素原子を 有する脂肪族炭化水素基を表わし； Ｒは▲数式、化学式、表等があります▼結合を介してキ
   ャリアＴ の遊離アミノ基にカップリングされたＲ′の末端−ＣＯ
   ＯＨ基に由来する▲数式、化学式、表等があります▼基
   によって置換されており；したがって、−Ｒ−Ｔは ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｔ＝−ＮＨ−Ｐ） で示すことができる〕 請求項１又は２記載の複合体。 ４、Ｒ＿３＝ＯＨかつＡ＝−ＮＨ−である、請求項２記
   載の複合体。 ５、（Ｒ＿１、Ｒ＿２）＝（−Ｅｔ、−ＯＨ）かつＲ＿
   ４＝Ｍｅである、請求項３又は４記載の複合体。 ６、−Ａ−Ｒ′が−ＮＨ−（ＣＨ＿２）＿１＿１、−Ｎ
   Ｈ−（ＣＨ＿２）＿１＿７、−ＮＨ−（ＣＨ＿２）＿７
   −ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ＿２）＿８の中から選択される、
   請求項３〜５のいずれかに記載の複合体。 ７、高分子キャリアがタンパク質、新糖タンパク質又は
   これらの断片の中から選択される （タンパク質及び新糖タンパク質は、例えば牛アルブミ
   ン血清、ガラクトシル化ヒトアルブミン又はＥＧＦのよ
   うな成長因子である）請求項１〜６のいずれかに記載の
   複合体。 ８、キャリアがモノクローナル抗体、特にＣＴＭ−０１
   抗体のようなＩｇＧ免疫グロブリン又はこれらの断片の
   中から選択される、請求項１〜７のいずれかに記載の複
   合体。 ９、１）カップリングされるべきＣ３ビンカアルカロイ
   ド誘導体が、 ａ）下記式のヒドラジド： ▲数式、化学式、表等があります▼ をＣ−３位において対応アジドを形成させるために亜硝
   酸塩と反応させ、 ｂ）該アジドを下記式のアミン： Ｈ−Ａ−Ｒ′−ＣＯＺ （Ｒ′のＣＯＯＨ基は、ベンジル基のようなＺタンパク
   質化学において公知の保護基の形で保護されている） と反応させ、かつ ｃ）工程ｂ）後に得られる誘導体において Ｒ′のＣＯＯＨ基から保護基を除くことによって製造さ
   れ； ２）工程ｃ）で得られる誘導体が： ａ）工程１ｃ）で得られる誘導体中のＣＯＯＨ基を−Ｃ
   ＯＺ′（Ｚ′は下記ｂ）の結合を形成しうるペプチド化
   学において公知の反応し易い基である）の形に活性化し
   、 ｂ）ポリペプチドキャリアの遊離アミノ基 と共有アミド結合を形成させることによってポリペプチ
   ドキャリアとカップリングされる請求項１〜８のいずれ
   かに記載の複合体の製造方法。 １０、請求項９の方法で用いられる中間生成物として、
   少なくとも７個の脂肪族炭素原子の脂肪鎖をＣ−３位に
   有するＣ−３ビンカ誘導体（上記鎖は、請求項９の方法
   の工程２ａ）からその末端においてＣＯＺ′基で置換さ
   れている）。 １１、活性成分として請求項１〜８のいずれかに記載の
   複合体を含有している医薬組成物。 １２、注射可能な形である、請求項１１記載の組成物。