JPH02151765A - 固相免疫検定用哺乳類細胞の乾燥法及びその物品 - Google Patents
固相免疫検定用哺乳類細胞の乾燥法及びその物品Info
- Publication number
- JPH02151765A JPH02151765A JP1285099A JP28509989A JPH02151765A JP H02151765 A JPH02151765 A JP H02151765A JP 1285099 A JP1285099 A JP 1285099A JP 28509989 A JP28509989 A JP 28509989A JP H02151765 A JPH02151765 A JP H02151765A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- solution
- red blood
- cell
- monolayer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000001035 drying Methods 0.000 title claims abstract description 55
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title claims description 27
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 title abstract 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 78
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims abstract description 29
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 87
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 83
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 54
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 37
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 claims description 35
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 33
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 32
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 claims description 28
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 23
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 18
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 claims description 16
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims description 15
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 13
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 12
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 claims description 12
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 12
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 11
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 11
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 10
- 150000003999 cyclitols Chemical class 0.000 claims description 9
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 4
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 4
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 claims description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N L-sorbitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 3
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 claims description 2
- 239000000987 azo dye Substances 0.000 claims description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 2
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 claims description 2
- 239000012954 diazonium Substances 0.000 claims description 2
- QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N lichenxanthone Natural products COC1=CC(O)=C2C(=O)C3=C(C)C=C(OC)C=C3OC2=C1 QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 2
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims description 2
- 238000002764 solid phase assay Methods 0.000 claims description 2
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- AAAQKTZKLRYKHR-UHFFFAOYSA-N triphenylmethane Chemical compound C1=CC=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 AAAQKTZKLRYKHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 4
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 claims 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims 2
- AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 2h-thiazine Chemical compound N1SC=CC=C1 AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- QZHXKQKKEBXYRG-UHFFFAOYSA-N 4-n-(4-aminophenyl)benzene-1,4-diamine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1NC1=CC=C(N)C=C1 QZHXKQKKEBXYRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical compound C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- SRBFZHDQGSBBOR-STGXQOJASA-N alpha-D-lyxopyranose Chemical compound O[C@@H]1CO[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-STGXQOJASA-N 0.000 claims 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims 1
- 150000001989 diazonium salts Chemical class 0.000 claims 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 claims 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 claims 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 abstract 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 10
- PBTFWNIEMRWXLI-UHFFFAOYSA-L alcian yellow Chemical compound [Cl-].[Cl-].CN(C)C(=[N+](C)C)SCC1=C(C)C=C2SC(C3=CC=C(C=C3)N=NC3=CC=C(C=C3)C3=NC=4C=C(C(=CC=4S3)C)CSC(N(C)C)=[N+](C)C)=NC2=C1 PBTFWNIEMRWXLI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 10
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- GCKMFJBGXUYNAG-HLXURNFRSA-N Methyltestosterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@](C)(O)[C@@]1(C)CC2 GCKMFJBGXUYNAG-HLXURNFRSA-N 0.000 description 7
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 7
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 7
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 7
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229940085503 testred Drugs 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 6
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- -1 dimethyl spermidate Chemical compound 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 2
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 108091006629 SLC13A2 Proteins 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-DPYQTVNSSA-N aldehydo-L-galactose Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-DPYQTVNSSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-O diazynium Chemical compound [NH+]#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 239000002920 hazardous waste Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 210000000557 podocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 150000004897 thiazines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003557 thiazoles Chemical class 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 229930195727 α-lactose Natural products 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
- G01N33/552—Glass or silica
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/961—Chemistry: molecular biology and microbiology including a step of forming, releasing, or exposing the antigen or forming the hapten-immunogenic carrier complex or the antigen per se
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/963—Methods of stopping an enzyme reaction or stabilizing the test materials
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/826—Additives, e.g. buffers, diluents, preservatives
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
この発明は一般に固相免疫検定法１％に固相免疫検定法
に使用する固相支持体に吸着ぜれる哺乳類細胞を乾爆す
る方法および固体支持体を組み込んだ物品に関する。
に使用する固相支持体に吸着ぜれる哺乳類細胞を乾爆す
る方法および固体支持体を組み込んだ物品に関する。
固相免疫検定法は研究所の技術者がより便利にかつ容易
に行える高感度で特異の免役検定法を提供するために開
発されてきた。固相検定法において、抗原または抗体の
ような免疫反応の一成分は固相支持体の表面に固定化さ
れる。抗体または抗原は技術的に周知の１−ＩＢ−の方
法によって固相支持体上に直接固定化される。抗原や抗
体の外に、赤血球、白血球、リンパ球、血小板筐たは他
の哺乳類細胞のような細胞は全て、かかる細胞に特定の
免疫検定を行うために固相支持体の表面へ固定化するこ
とができる。こハらの種類の細胞の各々は分析せんとす
る生物流体試料中の抗体を検出するために使用すること
ができる抗原をその細胞表面に提供する。特定の抗原ま
たは抗体は別の形式の免疫検定法のために細胞の表面に
吸着させることできる。従って、前記型式の細胞を含む
免疫検定法は、血液群および感染性病原体、特に血液の
細胞成分に直接作用するものの検定法において抗原また
は抗体の存在を決定するために開発されてきた・ 全細胞が固相免疫法に利用されるとき、こハらの細胞を
固相支持体へ固定化するために用いる現在の方法は細胞
の表面上の官能基を固相支持体の表面上の官能基へ矯か
けづせる化学剤を使用する。
に行える高感度で特異の免役検定法を提供するために開
発されてきた。固相検定法において、抗原または抗体の
ような免疫反応の一成分は固相支持体の表面に固定化さ
れる。抗体または抗原は技術的に周知の１−ＩＢ−の方
法によって固相支持体上に直接固定化される。抗原や抗
体の外に、赤血球、白血球、リンパ球、血小板筐たは他
の哺乳類細胞のような細胞は全て、かかる細胞に特定の
免疫検定を行うために固相支持体の表面へ固定化するこ
とができる。こハらの種類の細胞の各々は分析せんとす
る生物流体試料中の抗体を検出するために使用すること
ができる抗原をその細胞表面に提供する。特定の抗原ま
たは抗体は別の形式の免疫検定法のために細胞の表面に
吸着させることできる。従って、前記型式の細胞を含む
免疫検定法は、血液群および感染性病原体、特に血液の
細胞成分に直接作用するものの検定法において抗原また
は抗体の存在を決定するために開発されてきた・ 全細胞が固相免疫法に利用されるとき、こハらの細胞を
固相支持体へ固定化するために用いる現在の方法は細胞
の表面上の官能基を固相支持体の表面上の官能基へ矯か
けづせる化学剤を使用する。
この目的に使用する典型的な化学剤はグルタルアルデヒ
ドおよびジメチル・スペルイミダーテである。
ドおよびジメチル・スペルイミダーテである。
全踊乳類細胞を含む免疫検定のためのこｒｔら化学剤の
使用に伴う第１の問題点は、化学剤は細胞を支持体へ固
定化するが、それらはまた抗原活性に対して責任のある
反応性基のいくつか全ブロックすることである。細胞の
表面に見られる抗原子が極めて複雑で多数あるために、
細胞膜の抗原性に影響を与えない単一の化学槁かは剤は
見出さｆ″１ていない。単一または少しの抗原決定子の
みを保持すればよい場合の免疫検定においては、化学椙
かけ剤は有効に利用することができる。しかしながら、
患者の血清中の不規則抗体を検出するために用いる赤血
球単分子層を利用する検定の場合のように、抗原決定子
の全てを保持しなければ・ならない場合には、それらは
潜在的反応性基のいくつかをブロックする□ また、全１１ｉ乳類細胞は細胞から水を抜き取る化学剤
によって固定化することもできる。細胞から水を抜き取
る、または細胞内の水を置換する典型的な化学剤はメタ
ノール、アセトンおよびジメチル・スルホキシドである
。メタノールおよびアセトンは顕倣夜模食用絹織切片を
固定するために使用されてきたが、それらは細胞、特に
赤血球の表面上の抗原を破壊する傾向にあるために赤血
球。
使用に伴う第１の問題点は、化学剤は細胞を支持体へ固
定化するが、それらはまた抗原活性に対して責任のある
反応性基のいくつか全ブロックすることである。細胞の
表面に見られる抗原子が極めて複雑で多数あるために、
細胞膜の抗原性に影響を与えない単一の化学槁かは剤は
見出さｆ″１ていない。単一または少しの抗原決定子の
みを保持すればよい場合の免疫検定においては、化学椙
かけ剤は有効に利用することができる。しかしながら、
患者の血清中の不規則抗体を検出するために用いる赤血
球単分子層を利用する検定の場合のように、抗原決定子
の全てを保持しなければ・ならない場合には、それらは
潜在的反応性基のいくつかをブロックする□ また、全１１ｉ乳類細胞は細胞から水を抜き取る化学剤
によって固定化することもできる。細胞から水を抜き取
る、または細胞内の水を置換する典型的な化学剤はメタ
ノール、アセトンおよびジメチル・スルホキシドである
。メタノールおよびアセトンは顕倣夜模食用絹織切片を
固定するために使用されてきたが、それらは細胞、特に
赤血球の表面上の抗原を破壊する傾向にあるために赤血
球。
リンパ球または血小板のような細胞の被固定単層と併用
することができない。メタノールおよびアセトンのよう
な化学剤に伴う別の問題点は、危険な廃棄物処理の必要
条件−それらの蒸気が研究室に漏れた場合の可燃性およ
び毒性を伴う間浄である。細胞内の水と置換するジメチ
ル・スルホキシド、糖およびアミノ酸のような剤は懸濁
細胞の保存用にも使用されてきたが、これらの細胞は凍
結して貯蔵すると共に使用前に洗浄しなげねばならない
。
することができない。メタノールおよびアセトンのよう
な化学剤に伴う別の問題点は、危険な廃棄物処理の必要
条件−それらの蒸気が研究室に漏れた場合の可燃性およ
び毒性を伴う間浄である。細胞内の水と置換するジメチ
ル・スルホキシド、糖およびアミノ酸のような剤は懸濁
細胞の保存用にも使用されてきたが、これらの細胞は凍
結して貯蔵すると共に使用前に洗浄しなげねばならない
。
細胞を凍結貯蔵するときはいつでも、凍結−融解サイク
ル中に細胞膜を破壊し、従って細胞をロスする開−があ
ることである。細胞の凍結を含む方法に伴う別の間馳は
凍結器のコスト、研究室スペースの損失および使用前の
細胞の解凍および洗浄をしなければならない不便さであ
る。
ル中に細胞膜を破壊し、従って細胞をロスする開−があ
ることである。細胞の凍結を含む方法に伴う別の間馳は
凍結器のコスト、研究室スペースの損失および使用前の
細胞の解凍および洗浄をしなければならない不便さであ
る。
従って、上記の間浄点を取り除くために免疫学の分野に
おいては、哺乳類７則胞の単分子層を乾燥または免疫検
定用の固相支持体へ固定化する方法の必要がある。
おいては、哺乳類７則胞の単分子層を乾燥または免疫検
定用の固相支持体へ固定化する方法の必要がある。
従って１本発明の主目的は、哺乳類細胞表面抗坤の完全
な抗原性を維持すると共に、乾燥した細胞の単層を有す
る固相支持体を室温で貯蔵して氷点下の温度における貯
蔵の開動を回避するように。
な抗原性を維持すると共に、乾燥した細胞の単層を有す
る固相支持体を室温で貯蔵して氷点下の温度における貯
蔵の開動を回避するように。
免疫検定法において使用する固相支持体上に吸着された
哺乳類細胞の単層を乾燥する方法を提供することにある
。
哺乳類細胞の単層を乾燥する方法を提供することにある
。
本発明の別の目的は、乾燥させた哺乳類細胞を室１ＩＳ
Ｉｉにおいて少なくとも６ケ月貯蔵することができると
共に高感度で免役検定を行うことができるところの固相
免疫検定法に使用する物品を提供することにある。
Ｉｉにおいて少なくとも６ケ月貯蔵することができると
共に高感度で免役検定を行うことができるところの固相
免疫検定法に使用する物品を提供することにある。
さらに本発明の別の目的は、細胞単層の貯蔵寿命を伸ば
すことによって免疫検定に含まれるコストを下げるとこ
ろの免疫検定法に使用する固相支持体上に吸着された哺
乳類細胞の単層を乾燥する方法を提供することにある。
すことによって免疫検定に含まれるコストを下げるとこ
ろの免疫検定法に使用する固相支持体上に吸着された哺
乳類細胞の単層を乾燥する方法を提供することにある。
さらに本発明の目的は、乾燥用溶液が単層に有害でなく
、かつ分析の性能を妨害しないところの免疫検定法に使
用する固体支持体上に吸Ｍ芒れた哺乳類細胞の単層を乾
燥する方法を提供することにある。
、かつ分析の性能を妨害しないところの免疫検定法に使
用する固体支持体上に吸Ｍ芒れた哺乳類細胞の単層を乾
燥する方法を提供することにある。
本発明の目的は、乾燥用溶液が単糖類、三糖類。
三糖類またはシフＩＪ ）−ルと塩との水溶液から成る
ところの免疫検定法に使用する固相支持体上の赤血球、
リンパ球、白血球および血小板のような哺乳類細胞の単
層を乾燥する方法を提供することである。
ところの免疫検定法に使用する固相支持体上の赤血球、
リンパ球、白血球および血小板のような哺乳類細胞の単
層を乾燥する方法を提供することである。
その他の目的は次の説明および特許請求の範囲から明臼
となるであろう。
となるであろう。
我々は、単糖類、三糖類、三糖類せたはシクリトールを
含有する適当な低張性の塩溶液を使用して、細胞の完全
な抗原活性を維持しなから固相支持体上に固定化した赤
血球、白血球、リンパ球および血小板の単層を保存でき
ることを見出した。
含有する適当な低張性の塩溶液を使用して、細胞の完全
な抗原活性を維持しなから固相支持体上に固定化した赤
血球、白血球、リンパ球および血小板の単層を保存でき
ることを見出した。
本発明の方法を受けた被固足細胞の単層は精度や感度を
余り失うことなく室温で少なくとも６ケ月貯蔵すること
ができるゆ主題の細胞を固相支持体へ固定化する好適な
方法は正味正電荷を有する有機染料で前もって染色した
固体支持体へ＃Ｉｆｆ、＝ｌを吸着させる方法である。
余り失うことなく室温で少なくとも６ケ月貯蔵すること
ができるゆ主題の細胞を固相支持体へ固定化する好適な
方法は正味正電荷を有する有機染料で前もって染色した
固体支持体へ＃Ｉｆｆ、＝ｌを吸着させる方法である。
この固定化卸ｌ胞の単層に乾燥用溶液を施加する。
乾燥用溶液における単糖類、三糖類、三糖類またはシク
リトールの望捷しい濃度範囲は、０．１〜５．０モル／
ｌである。乾燥用ｍ液における塩の望ましい範囲は５０
〜３７７ミリモル／ｊである。
リトールの望捷しい濃度範囲は、０．１〜５．０モル／
ｌである。乾燥用ｍ液における塩の望ましい範囲は５０
〜３７７ミリモル／ｊである。
使用する望ましい塩は塩化ナトリウムでおるが、塩化カ
リウムおよびリン酸ナトリウムのような他の塩類も同一
の効果および適当さをもって利用できる。いずれの単糖
類、二糖知、三糖類またはシクリトールも利用できるが
、好適な物質はデキストロースまたはＤ ｌ−１グルコ
ースである。そして望ましい乾燥用溶液はＬＯモル／ｊ
のデキストロースと１５キミリモル／ｌのＮａＣＪから
なる。
リウムおよびリン酸ナトリウムのような他の塩類も同一
の効果および適当さをもって利用できる。いずれの単糖
類、二糖知、三糖類またはシクリトールも利用できるが
、好適な物質はデキストロースまたはＤ ｌ−１グルコ
ースである。そして望ましい乾燥用溶液はＬＯモル／ｊ
のデキストロースと１５キミリモル／ｌのＮａＣＪから
なる。
固相免疫検定法は固相支持体として広いアレイの物品を
利用する。その支持体はしばしば試験管。
利用する。その支持体はしばしば試験管。
ビード、シート、ペトリ皿、膜筐たはマイクロタイター
・フレートの形をとる。本発明の目的全実施するのに他
の型式の支持体または支持体の形も有用であって、同様
に適用できる。
・フレートの形をとる。本発明の目的全実施するのに他
の型式の支持体または支持体の形も有用であって、同様
に適用できる。
固相はポリスチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル
またはナイロンのような有機重合体製にすることができ
る。さらに、哺乳類細胞の単Ｊ曽を結合することができ
る材料１例えばガラスも同様に適用することができる。
またはナイロンのような有機重合体製にすることができ
る。さらに、哺乳類細胞の単Ｊ曽を結合することができ
る材料１例えばガラスも同様に適用することができる。
本発明を実施するのに最適の固相支持体は複数の凹所く
ぼみを有するミクロタイター・プレートである。そのミ
クロタイター・プレートは有機重合体から成ることが望
ましく、最適にはポリスチレン製である。
ぼみを有するミクロタイター・プレートである。そのミ
クロタイター・プレートは有機重合体から成ることが望
ましく、最適にはポリスチレン製である。
本発明の目的を果たすには、細胞の単層は利用する哺乳
類細胞の完全な抗原性をそのままにして置くように固相
支持体表面へ吸着させることが望ましい。これは有機染
料を有機重合体の表面へ吸着させることによって最適に
達成される。各々が正味負の表面電荷を帯びるヒトの赤
血球、リンパ球、白血球または血小板を固定化づせるた
めに。
類細胞の完全な抗原性をそのままにして置くように固相
支持体表面へ吸着させることが望ましい。これは有機染
料を有機重合体の表面へ吸着させることによって最適に
達成される。各々が正味負の表面電荷を帯びるヒトの赤
血球、リンパ球、白血球または血小板を固定化づせるた
めに。
染料は正味正電荷をもたなければならない。細胞が染料
と物理的に接触しているとき、細胞は非イオン結合、水
素結合、ファンデルワールス力および疎水性力のような
非結合相互作用によって染料へ吸着されることによって
固定化でれることになる。このように、被固定化細胞の
単層が得られ、続いて非結合細胞が洗い落される。次に
その細胞の単層は、固相赤血球付着のように免疫検定に
使用して、固定化された細胞の表面上に見られる抗原に
対する抗体の検出をする。生物試験溶液中の特定の抗原
を検出するために、細胞単層の上へ特定の抗体を吸着さ
せることもできる。
と物理的に接触しているとき、細胞は非イオン結合、水
素結合、ファンデルワールス力および疎水性力のような
非結合相互作用によって染料へ吸着されることによって
固定化でれることになる。このように、被固定化細胞の
単層が得られ、続いて非結合細胞が洗い落される。次に
その細胞の単層は、固相赤血球付着のように免疫検定に
使用して、固定化された細胞の表面上に見られる抗原に
対する抗体の検出をする。生物試験溶液中の特定の抗原
を検出するために、細胞単層の上へ特定の抗体を吸着さ
せることもできる。
哺乳類細胞を吸着するために最も有用であることがわか
った染料は正味正電荷を有しかつ疎水性芳香族環構造を
有する有機染料である。かかる正味正電荷を有し固相支
持体へ付滑する疎水性芳香族環構造金有する染料は全て
赤血球、リンパ球。
った染料は正味正電荷を有しかつ疎水性芳香族環構造を
有する有機染料である。かかる正味正電荷を有し固相支
持体へ付滑する疎水性芳香族環構造金有する染料は全て
赤血球、リンパ球。
白血球および血小板のような哺乳類細胞を固定できるこ
とがわかった。適用できる特定の染料および該染料を固
相支持体へ吸着させる方法は、 １９８８年７月５日
付は米国特許第２１５．０１１１、発明の名称： Ａｎ
Ａｒｔｉｃｌｅ ｆｏｒ ＰｅｒｆｏｒｍｉｎｇＩｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓ５ａｙｓ Ｕｔｉｌｉｚ
ｉｎｇ ＯｒｇａｎｉｃＤｙｅｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏ
ｄ ｆｏｒ Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ
Ｓａｍｅ） において検討されている。
とがわかった。適用できる特定の染料および該染料を固
相支持体へ吸着させる方法は、 １９８８年７月５日
付は米国特許第２１５．０１１１、発明の名称： Ａｎ
Ａｒｔｉｃｌｅ ｆｏｒ ＰｅｒｆｏｒｍｉｎｇＩｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓ５ａｙｓ Ｕｔｉｌｉｚ
ｉｎｇ ＯｒｇａｎｉｃＤｙｅｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏ
ｄ ｆｏｒ Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ
Ｓａｍｅ） において検討されている。
一般に、この目的に最適の染料はアルシアン・ブルーお
よびアルシアン・イエローであることがワカった。アル
シアン・ブルーはフタロシアニンでありアルシアン・イ
エローはアゾ染料であり、それぞれ正味正電荷ヲ１する
。使用可能である正味正電荷を有する他の染料はジアゾ
染料、ポリアゾ染料、゛ジアゾニウムおよびテトラゾニ
ウム塩類。
よびアルシアン・イエローであることがワカった。アル
シアン・ブルーはフタロシアニンでありアルシアン・イ
エローはアゾ染料であり、それぞれ正味正電荷ヲ１する
。使用可能である正味正電荷を有する他の染料はジアゾ
染料、ポリアゾ染料、゛ジアゾニウムおよびテトラゾニ
ウム塩類。
テトラゾリウム塩類、トリフェニルメタン、キサンテン
またはアクリジン、キノリン染料、チアゾール、インダ
ミン、アジン、アミノアジン、サフロニン、チアジンお
よびフタビシアニンを含む・アルシアン・ブルーを使用
する場合には、それを最初に等張塩類溶液に１μＩＩ／
ｎｌ〜１ ｔｚ ／ ｅｘｔの濃度で溶解させる。望ま
しい濃度はＯ，ｌ ｍｌ／ ／ Ｎであって、固相支持
体を完全に覆うべくその有機重合体の支持体に５０〜２
５０μ！を冷布する。その染料は固相支持体に十分な接
触をさせたま＼にした後、過剰の染料を洗い落す。大部
分の染料に必要な接触時間は即時接触でよいが、他の染
料のあるものには染料を固相支持体へ吸着きせるために
長時間を必要とする。アルシアン・ブルーを使用する場
合には、それは水溶液に可溶性でないから１００％メタ
ノールの十分な量に溶解させなければならない。次に等
体積の等張塩類溶液を溶解したアルシアン・イエローに
添加して１μｙ／ｍｌ〜１ｙ／ｍξ最適にはＯ，ｌ １
１９ ／ １１１の最終濃度範囲にする。再び５０〜２
５０μｌのアルシアン・イエロー溶液を固相支持体、望
ましくはミクロタイター・プレートに塗布して、固相支
持体上に染料を吸着させる。
またはアクリジン、キノリン染料、チアゾール、インダ
ミン、アジン、アミノアジン、サフロニン、チアジンお
よびフタビシアニンを含む・アルシアン・ブルーを使用
する場合には、それを最初に等張塩類溶液に１μＩＩ／
ｎｌ〜１ ｔｚ ／ ｅｘｔの濃度で溶解させる。望ま
しい濃度はＯ，ｌ ｍｌ／ ／ Ｎであって、固相支持
体を完全に覆うべくその有機重合体の支持体に５０〜２
５０μ！を冷布する。その染料は固相支持体に十分な接
触をさせたま＼にした後、過剰の染料を洗い落す。大部
分の染料に必要な接触時間は即時接触でよいが、他の染
料のあるものには染料を固相支持体へ吸着きせるために
長時間を必要とする。アルシアン・ブルーを使用する場
合には、それは水溶液に可溶性でないから１００％メタ
ノールの十分な量に溶解させなければならない。次に等
体積の等張塩類溶液を溶解したアルシアン・イエローに
添加して１μｙ／ｍｌ〜１ｙ／ｍξ最適にはＯ，ｌ １
１９ ／ １１１の最終濃度範囲にする。再び５０〜２
５０μｌのアルシアン・イエロー溶液を固相支持体、望
ましくはミクロタイター・プレートに塗布して、固相支
持体上に染料を吸着させる。
正味正電荷を帯びた１機染料で染色した固相支持体上に
細胞の単層を作るために、固定化させる細胞は最初汚染
するタンパク質を含まないように洗浄しなけｔばならな
い。赤血球に適当な洗浄溶液は等張塩類溶液、試薬赤血
球希釈剤（Ｉｍｍｕｃｏｒ社製品）、またはリン酸塩緩
衝化塩類溶液（ｐＨ）である。血小板には、オルシーパ
ー溶液または改良オルシーバー溶液、或いは血小板洗浄
および貯蔵溶液（Ｉｍｍｕｃｏｒ社製品）を使用するこ
とができる。
細胞の単層を作るために、固定化させる細胞は最初汚染
するタンパク質を含まないように洗浄しなけｔばならな
い。赤血球に適当な洗浄溶液は等張塩類溶液、試薬赤血
球希釈剤（Ｉｍｍｕｃｏｒ社製品）、またはリン酸塩緩
衝化塩類溶液（ｐＨ）である。血小板には、オルシーパ
ー溶液または改良オルシーバー溶液、或いは血小板洗浄
および貯蔵溶液（Ｉｍｍｕｃｏｒ社製品）を使用するこ
とができる。
本発明に利用される細胞は工業的に既知の標準供給源か
ら得られる。＃１胞を洗浄後、典型的にそれらは等張塩
類溶液に懸濁させる。本発明の目的のための懸濁液中の
細胞の濃度は０．１〜０．１１％（ｖ／ｖ）である。最
も有用な範囲は０．１％〜０．２％（Ｖ／Ｖ ）の範囲
内である。
ら得られる。＃１胞を洗浄後、典型的にそれらは等張塩
類溶液に懸濁させる。本発明の目的のための懸濁液中の
細胞の濃度は０．１〜０．１１％（ｖ／ｖ）である。最
も有用な範囲は０．１％〜０．２％（Ｖ／Ｖ ）の範囲
内である。
洗浄した細胞懸濁液は染料を塗布した固相支持体へ添加
して、細胞を沈降させる。または遠心分離さすことによ
って染料と接触させる。適当な期間、細胞を有機染料と
結合させた後、過剰の細胞溶液をデカントして、染料を
塗布した固相支持体へ固定化しｆｃ細胞の単層を後に残
す。遠心分離法を用いる場合には、典型的に１〜５分を
必要とし。
して、細胞を沈降させる。または遠心分離さすことによ
って染料と接触させる。適当な期間、細胞を有機染料と
結合させた後、過剰の細胞溶液をデカントして、染料を
塗布した固相支持体へ固定化しｆｃ細胞の単層を後に残
す。遠心分離法を用いる場合には、典型的に１〜５分を
必要とし。
重力によって細胞を沈降させる場合には１１０〜６０分
を要する。血小板のような小細砲金使用するときには、
完全接触と細胞の均一単層の形成を確実にするためには
それらを１晩沈降づせることが最良である。
を要する。血小板のような小細砲金使用するときには、
完全接触と細胞の均一単層の形成を確実にするためには
それらを１晩沈降づせることが最良である。
一旦、細胞の単層を固相支持体へ吸着させたならば１本
発明の乾燥用溶液を利用して細胞を乾燥または固相支持
体へ固定化させる。赤血球を細胞の単層として利用する
とき、乾燥用溶液の添加前に単層からなる細胞全適当な
溶解溶液で溶解させることによって、さらに良好な結果
が得られることがわかった。血小板、リンパ球および白
血球に対しては、その溶解工程は必要ない。
発明の乾燥用溶液を利用して細胞を乾燥または固相支持
体へ固定化させる。赤血球を細胞の単層として利用する
とき、乾燥用溶液の添加前に単層からなる細胞全適当な
溶解溶液で溶解させることによって、さらに良好な結果
が得られることがわかった。血小板、リンパ球および白
血球に対しては、その溶解工程は必要ない。
一般に、乾燥溶液は塩と、単糖類、三糖類、三糖類およ
びシフＩＪ ）−ルから成る群から選んだ糖を含有する
水溶液から成る。本発明に有用な単糖類、三糖類、三糖
類せたはシクリトールはＤ−（剖ラフィノース、Ｌ−（
−）ソルボース、Ｄ−（−Ｈ）レバロース、Ｄ−（＋１
キシロース、Ｄ−（−１グルコース、Ｄ−（−１ソルビ
トール、スクロース、Ｌ−（＋１アラビノース、Ｄ−（
−１セロビノース、Ｄ−（−１フルクトース−Ｄ−（＋
ｌガラクトース、ミローイソシトール（シクリトール）
、α−ラクトース、Ｄ−（＋ｌリキオース、マルトース
およびＤ−（＋１マンノースから成る群から選ぶことが
できる。さらに詳しくは。
びシフＩＪ ）−ルから成る群から選んだ糖を含有する
水溶液から成る。本発明に有用な単糖類、三糖類、三糖
類せたはシクリトールはＤ−（剖ラフィノース、Ｌ−（
−）ソルボース、Ｄ−（−Ｈ）レバロース、Ｄ−（＋１
キシロース、Ｄ−（−１グルコース、Ｄ−（−１ソルビ
トール、スクロース、Ｌ−（＋１アラビノース、Ｄ−（
−１セロビノース、Ｄ−（−１フルクトース−Ｄ−（＋
ｌガラクトース、ミローイソシトール（シクリトール）
、α−ラクトース、Ｄ−（＋ｌリキオース、マルトース
およびＤ−（＋１マンノースから成る群から選ぶことが
できる。さらに詳しくは。
この群からの最も有用な物質はＤ−（−１グルコース、
スクロース、Ｄ−（−１ソルビトール ース，ミオーイソシトールーＤ−（＋１セロビオースお
よヒＬ−（−１ソルボースである。上記群からの最適の
糖はデキストロースまたはＤ−（−１グルコース（これ
はＦｉｓｈｅｒによれば化学式Ｃ６Ｈ１□０６・Ｈ２Ｏ
を有する）である。上記の対応する鏡像体糖類も利用で
きると考えられる。乾燥用溶液は単糖類、三糖類，三糖
類またはシクリトールの濃度０． １〜５、０モル／ｊ
を有するように調製嘔れる。最適濃度はＬＯＭのテキス
トロースであって，この濃度は赤血球および血小板細胞
の単層で最良に作用するＯ 本発明に有用な塩類は塩化ナトリウム（ＮａＣ！ｊ）。
スクロース、Ｄ−（−１ソルビトール ース，ミオーイソシトールーＤ−（＋１セロビオースお
よヒＬ−（−１ソルボースである。上記群からの最適の
糖はデキストロースまたはＤ−（−１グルコース（これ
はＦｉｓｈｅｒによれば化学式Ｃ６Ｈ１□０６・Ｈ２Ｏ
を有する）である。上記の対応する鏡像体糖類も利用で
きると考えられる。乾燥用溶液は単糖類、三糖類，三糖
類またはシクリトールの濃度０． １〜５、０モル／ｊ
を有するように調製嘔れる。最適濃度はＬＯＭのテキス
トロースであって，この濃度は赤血球および血小板細胞
の単層で最良に作用するＯ 本発明に有用な塩類は塩化ナトリウム（ＮａＣ！ｊ）。
塩化カリウム（ＫＣｊ）およびリン酸ナトリウムから成
る群からのものを含む。乾燥用溶液中の塩の望ましい濃
度範囲は５０ミリモル／！〜５ ７ ７ ミＩＪモル／
ｊである。望ましい塩は１５１ｉｍＭの濃度で乾燥用溶
液に存在する塩化ナトリウムである。
る群からのものを含む。乾燥用溶液中の塩の望ましい濃
度範囲は５０ミリモル／！〜５ ７ ７ ミＩＪモル／
ｊである。望ましい塩は１５１ｉｍＭの濃度で乾燥用溶
液に存在する塩化ナトリウムである。
乾燥用溶液は分析系に導入される全ての汚染するタンパ
ク質を回避するためにきれいなガラス器具中において蒸
留水または脱イオン水で調製する。
ク質を回避するためにきれいなガラス器具中において蒸
留水または脱イオン水で調製する。
乾燥用溶液を一旦調農したら，次にそれを試験管、さら
に望ましくは凹所（くぼみ）を有するミクロタイター・
プレートのような細胞単層を含む固相支持体の表面へ添
加する。ミクロタイター・プレートの凹所を被覆するた
めに添加する必要のある乾燥用溶液の体積は細胞単層を
完全に被覆するのに十分なものでなければならない，２
５〜１５０μｌが十分な量であるが、１００μノが好適
な量である。乾燥用溶液を細胞単層上に装置する最適時
間および最適渇置扁度は試験する細胞単層の種類毎に決
める必要がある。最適の時間および瀧置渇度を決定する
ために利用できる１つの方法は。
に望ましくは凹所（くぼみ）を有するミクロタイター・
プレートのような細胞単層を含む固相支持体の表面へ添
加する。ミクロタイター・プレートの凹所を被覆するた
めに添加する必要のある乾燥用溶液の体積は細胞単層を
完全に被覆するのに十分なものでなければならない，２
５〜１５０μｌが十分な量であるが、１００μノが好適
な量である。乾燥用溶液を細胞単層上に装置する最適時
間および最適渇置扁度は試験する細胞単層の種類毎に決
める必要がある。最適の時間および瀧置渇度を決定する
ために利用できる１つの方法は。
単一の細胞源で抜機の凹所全調製し，同一量の乾燥用溶
液を各凹所へ添加し，接触直後から１１時間までの腐Ｉ
Ｍに至るデカンティングの範囲内の時間間隔でそれらの
井戸状凹所を検定のために除去ζせることである。他の
全てのパラメーターが一定に維持できるならば、検定結
果の評価が最適の結果を得るのに必要な最適の温置峙間
を与える。同様の試験を高度のみを変えて行うことがで
きる。
液を各凹所へ添加し，接触直後から１１時間までの腐Ｉ
Ｍに至るデカンティングの範囲内の時間間隔でそれらの
井戸状凹所を検定のために除去ζせることである。他の
全てのパラメーターが一定に維持できるならば、検定結
果の評価が最適の結果を得るのに必要な最適の温置峙間
を与える。同様の試験を高度のみを変えて行うことがで
きる。
乾燥用溶液をヒトの血小板，白血球，リンパ球および赤
血球の単層に深加するのに最適の温置時間および温度は
、室温で乾燥用溶液の即時の添加およびデカンティング
である。乾燥用溶液は流しの上へのフリツキングまたは
真空吸引によって細胞の単層から最良に除去される。乾
燥用溶液を除去する他の方法も同様に適用できる。
血球の単層に深加するのに最適の温置時間および温度は
、室温で乾燥用溶液の即時の添加およびデカンティング
である。乾燥用溶液は流しの上へのフリツキングまたは
真空吸引によって細胞の単層から最良に除去される。乾
燥用溶液を除去する他の方法も同様に適用できる。
その試験管またはミクロタイター・プレートは次に中に
乾燥剤を備えた基パウチまたはパケットに入れて、密封
する。パウチは極少または全く水を透過しないようにし
、試験管またはミクロタイター・プレート内の水は全て
乾燥剤によって吸着させなければならない。この目的に
望ましい乾燥材料は工業的に尚知の供給源から得られる
分子ふるい乾燥剤である。けい藻土およびシリカ粒子の
ような他の乾燥材料や真空乾燥も使用できるが。
乾燥剤を備えた基パウチまたはパケットに入れて、密封
する。パウチは極少または全く水を透過しないようにし
、試験管またはミクロタイター・プレート内の水は全て
乾燥剤によって吸着させなければならない。この目的に
望ましい乾燥材料は工業的に尚知の供給源から得られる
分子ふるい乾燥剤である。けい藻土およびシリカ粒子の
ような他の乾燥材料や真空乾燥も使用できるが。
満足度は低下する。必要な乾燥剤の量は固相支持体に存
在する量より多い水量を吸収する容量を有する前である
。容量が２１の分子ふるい乾燥剤を使用する場合には、
２〜３の該パケットの添加で十分である。密封パウチ内
の乾燥剤による固相支持体上の水の吸収に必要な高度お
よび時間の許容範囲は２〜８℃の温度において３〜８日
、最適には５〜７日であることがわかった。ヒトの赤血
球。
在する量より多い水量を吸収する容量を有する前である
。容量が２１の分子ふるい乾燥剤を使用する場合には、
２〜３の該パケットの添加で十分である。密封パウチ内
の乾燥剤による固相支持体上の水の吸収に必要な高度お
よび時間の許容範囲は２〜８℃の温度において３〜８日
、最適には５〜７日であることがわかった。ヒトの赤血
球。
リンパ球、白血球および血小板に最適の乾燥時間は２〜
８℃において７日である。この吸収期間を過ぎた後、密
封固相支持体は室温または室温以下の温度で検定の精度
または効率２下げることなく少、なくとも６ケ月間貯蔵
することができる。
８℃において７日である。この吸収期間を過ぎた後、密
封固相支持体は室温または室温以下の温度で検定の精度
または効率２下げることなく少、なくとも６ケ月間貯蔵
することができる。
給体に必要ではないけれども、細胞間の内容物を空にす
るために乾燥溶液の添加前に赤血球単層を溶解すること
が望ましい。こハは、乾燥溶液を細胞の内部へよりアク
セスさせることによって乾燥処理を助ける。溶解溶液は
脱イオン水の溶液から１２０ ｍＭ Ｎａｐ／塩溶液に
選ぶことができる。
るために乾燥溶液の添加前に赤血球単層を溶解すること
が望ましい。こハは、乾燥溶液を細胞の内部へよりアク
セスさせることによって乾燥処理を助ける。溶解溶液は
脱イオン水の溶液から１２０ ｍＭ Ｎａｐ／塩溶液に
選ぶことができる。
５００〜ｇ ＯＯｍＭのＮａ１ｌの等６長溶液も使用で
きる。最適の溶解溶液は８０ ｍＭのＮａ０ｊである。
きる。最適の溶解溶液は８０ ｍＭのＮａ０ｊである。
赤血球溶液を染色した固相支持体に接触させた後、迦剰
の細胞溶液をデカントし、溶解溶液を細胞単層へ直接添
加して、１〜３０分間潟置さ装る。高置時間は赤血球の
場合１分であることがわかった。溶解溶液をデカントし
て、品物を等張溶液で２回洗浄する。次に乾燥用溶液を
前述のように添加する。
の細胞溶液をデカントし、溶解溶液を細胞単層へ直接添
加して、１〜３０分間潟置さ装る。高置時間は赤血球の
場合１分であることがわかった。溶解溶液をデカントし
て、品物を等張溶液で２回洗浄する。次に乾燥用溶液を
前述のように添加する。
リン酸塩緩衝化塩溶１（ＰＢＳ）、塩化カルシウム、ト
リス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）お
よび組織培地のようなＮａＣ１以外の塩溶液も溶解溶液
用に使用できる。
リス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）お
よび組織培地のようなＮａＣ１以外の塩溶液も溶解溶液
用に使用できる。
上に乾燥した哺乳石線＋１８の単層を有する固相支持体
を使用するために、パウチを開けて、試験する生物流体
を試験管またはミクロタイター・プレートの井戸状凹所
へ添加する。典型的に生物流体はヒトの血清又は血漿で
ある。低イオン強度の添加物１例えば、約１９＃／ｊの
グリシン溶液全この時点でその凹所に添加する。そのグ
リシン溶液はさらにチメロサールのような保存剤と染料
を含有することができる。適当な温画期間の後に、試験
管またはミクロタイター・プレートの凹所を洗浄して未
結合の血漿または血清成分を除去する。
を使用するために、パウチを開けて、試験する生物流体
を試験管またはミクロタイター・プレートの井戸状凹所
へ添加する。典型的に生物流体はヒトの血清又は血漿で
ある。低イオン強度の添加物１例えば、約１９＃／ｊの
グリシン溶液全この時点でその凹所に添加する。そのグ
リシン溶液はさらにチメロサールのような保存剤と染料
を含有することができる。適当な温画期間の後に、試験
管またはミクロタイター・プレートの凹所を洗浄して未
結合の血漿または血清成分を除去する。
特に固定化された細胞単層に結合される抗体の存在は放
射線免疫検定法、酵素結合免疫吸収剤検定法（ｇＬ Ｉ
５Ａ）−免疫検定法または固相赤血球粘着法のような
多数の既知方法によって検出される。
射線免疫検定法、酵素結合免疫吸収剤検定法（ｇＬ Ｉ
５Ａ）−免疫検定法または固相赤血球粘着法のような
多数の既知方法によって検出される。
本発明に従って調製された固相支持体は、ヒトの赤血球
またはヒトの血小板へ向けられた予測づれない抗体の検
出をする抗体スクリーニング、種々の既知抗原パターン
を有する赤血球または血小板のパネルを使用することに
よって生物試料中の抗体の同一性を決定する抗体スクリ
ーニング、逆ＡＢＯグループ分け、正ＡＢＯグループ分
け、Ｄ−型決定、赤血球表現型決定および哺乳類の組織
細胞に向けられた抗体の検出法を含む広範囲の免疫検定
法に用途を有する。
またはヒトの血小板へ向けられた予測づれない抗体の検
出をする抗体スクリーニング、種々の既知抗原パターン
を有する赤血球または血小板のパネルを使用することに
よって生物試料中の抗体の同一性を決定する抗体スクリ
ーニング、逆ＡＢＯグループ分け、正ＡＢＯグループ分
け、Ｄ−型決定、赤血球表現型決定および哺乳類の組織
細胞に向けられた抗体の検出法を含む広範囲の免疫検定
法に用途を有する。
次の実施例は説明のためのみに与えるものであって、限
定する性格を有するものではない。
定する性格を有するものではない。
本発明の方法を利用してヒトの赤血球へ向けられた予測
されない抗体を検出する免疫検定を行うために、複数の
井戸状凹所を備えたミクロタイター・プレートを最初に
全ての凹所がアルシアン・イエロー溶液で檀われるよう
にアルシアン・イエローの十分な量で０．１ ｘｇ ／
ｍｌの濃度において処理する。アルシアン・イエロー
溶液をミクロタイター・プレートと約う０分間接触させ
た１ままして、過剰の染料溶液を除去する。それぞれの
井戸状凹所当り塩溶液または試薬赤血球希釈液中にヒト
のＲＢＯの０．２％（ｖ／ｖ）懸濁液１００μ！を添加
することによって染色されたプレート上にヒトの赤血球
の単層が形成される。赤血球は室温で１時間重力によっ
て沈降させる。それらの細胞は次に８０■ｋＪａ０１の
凹所当り１００μｌを添加することによって溶解させる
。その溶解溶液は凹所内で室温において１分間扁首させ
て１次に吸込によって除去する。そのミクロタイター・
プレートは自動洗浄装置または手動法によって等張塩溶
液で少なくとも２回洗浄して未結合の赤血球を除去する
。
されない抗体を検出する免疫検定を行うために、複数の
井戸状凹所を備えたミクロタイター・プレートを最初に
全ての凹所がアルシアン・イエロー溶液で檀われるよう
にアルシアン・イエローの十分な量で０．１ ｘｇ ／
ｍｌの濃度において処理する。アルシアン・イエロー
溶液をミクロタイター・プレートと約う０分間接触させ
た１ままして、過剰の染料溶液を除去する。それぞれの
井戸状凹所当り塩溶液または試薬赤血球希釈液中にヒト
のＲＢＯの０．２％（ｖ／ｖ）懸濁液１００μ！を添加
することによって染色されたプレート上にヒトの赤血球
の単層が形成される。赤血球は室温で１時間重力によっ
て沈降させる。それらの細胞は次に８０■ｋＪａ０１の
凹所当り１００μｌを添加することによって溶解させる
。その溶解溶液は凹所内で室温において１分間扁首させ
て１次に吸込によって除去する。そのミクロタイター・
プレートは自動洗浄装置または手動法によって等張塩溶
液で少なくとも２回洗浄して未結合の赤血球を除去する
。
それぞれの凹所へＬＯＭのデキストロースおよび１５４
ｍＭの塩化ナトリウムを含有する乾燥用溶液１００μｊ
を添加する。乾燥用溶液の添加後直ちに、各凹所を吸
引して過剰の乾燥用溶液を全て除去する。そのミクロタ
イター・プレートは次に少なくとも２１の容量の分子ふ
るい乾燥剤パケットを内蔵する基パウチまたはパケット
に逆さまに入れる。そのパウチを熱で密封して２〜８℃
で７日間乾燥する。
ｍＭの塩化ナトリウムを含有する乾燥用溶液１００μｊ
を添加する。乾燥用溶液の添加後直ちに、各凹所を吸
引して過剰の乾燥用溶液を全て除去する。そのミクロタ
イター・プレートは次に少なくとも２１の容量の分子ふ
るい乾燥剤パケットを内蔵する基パウチまたはパケット
に逆さまに入れる。そのパウチを熱で密封して２〜８℃
で７日間乾燥する。
免疫検定にミクロタイター・プレー）ｆ使用するために
、基パウチを開けて、血清または血漿或いは対照試料の
ような生物流体１滴を各凹所へ添加する。保存剤および
着色用染料と共にグリシンの１９１／ｌ溶液２滴も各凹
所へ添加する。これらの溶液をう７℃で１５分間そ九ら
の凹所内で温酋させる。濡置後、ミクロタイター・プレ
ートの凹所を望ましくは自動洗浄装置（例えば、Ｂ１０
Ｔｅｋ ＥＬ−１４０２型）によって塩溶液で５回洗
浄する。次にその各凹所へ抗−ＩｊｌＧコーテッド指示
薬の赤血球を添加する。そのミクロタイター・プレート
を１Ｊ５０ｘＧで１分間遠心分離する。そのプレートは
次に赤血球単層への指示薬赤血球の付着性または非付着
性を検査する。反応表面上への指示薬赤血球の付着によ
って陽性反応が見られる。
、基パウチを開けて、血清または血漿或いは対照試料の
ような生物流体１滴を各凹所へ添加する。保存剤および
着色用染料と共にグリシンの１９１／ｌ溶液２滴も各凹
所へ添加する。これらの溶液をう７℃で１５分間そ九ら
の凹所内で温酋させる。濡置後、ミクロタイター・プレ
ートの凹所を望ましくは自動洗浄装置（例えば、Ｂ１０
Ｔｅｋ ＥＬ−１４０２型）によって塩溶液で５回洗
浄する。次にその各凹所へ抗−ＩｊｌＧコーテッド指示
薬の赤血球を添加する。そのミクロタイター・プレート
を１Ｊ５０ｘＧで１分間遠心分離する。そのプレートは
次に赤血球単層への指示薬赤血球の付着性または非付着
性を検査する。反応表面上への指示薬赤血球の付着によ
って陽性反応が見られる。
陰性反応は凹所の底部に指示赤血球の別個のボタンを形
成して、付着を示さない。
成して、付着を示さない。
従って、試験される生物流体が抗体を赤血球の単層に向
けた場合には、それは赤血球の単層に結合する。抗−Ｉ
ｊｌ（）コーテッド指示赤血球が同様にそれらが凹所へ
添加されるときに結合される抗体へ結合する。これは前
記の陽性反応を示す。赤血球へ向けられた抗体が試験す
る生物流体に存在しない場合には、抗−工ＩＧコーテッ
ド指示赤血球は結合する相補的免疫成分をもたなくて、
前記のように別個のボタンとして凹所の底部に集まるこ
とになる。上記の方法および固相支持体を利用する免疫
検定法は常に標準のチューブ・テストによって得られる
結果よりも高感度の結果を与える。
けた場合には、それは赤血球の単層に結合する。抗−Ｉ
ｊｌ（）コーテッド指示赤血球が同様にそれらが凹所へ
添加されるときに結合される抗体へ結合する。これは前
記の陽性反応を示す。赤血球へ向けられた抗体が試験す
る生物流体に存在しない場合には、抗−工ＩＧコーテッ
ド指示赤血球は結合する相補的免疫成分をもたなくて、
前記のように別個のボタンとして凹所の底部に集まるこ
とになる。上記の方法および固相支持体を利用する免疫
検定法は常に標準のチューブ・テストによって得られる
結果よりも高感度の結果を与える。
球のパネルが染色されたミクロタイター・プレートの個
々の凹所へ吸着されることを除いて１本質的に実施例１
のように調製でれる。赤血球は実施例１で記載したよう
に溶解、洗浄そして乾燥される。試験血清または血漿試
料において予想されない抗体の検出および検出される特
定抗体の決定のために、かかる血清または血漿の１滴を
ミクロタイター・プレート上の乾燥した赤血球の各パネ
ル凹所へ添加する。検定は実施例１で記載したように行
なう、そして次にそれぞれの凹所において陽性反応をも
たらす試料中の抗体の特異性は陽性反応を示す個々の凹
所のパネル構成員の表現型の判定によって決定される。
々の凹所へ吸着されることを除いて１本質的に実施例１
のように調製でれる。赤血球は実施例１で記載したよう
に溶解、洗浄そして乾燥される。試験血清または血漿試
料において予想されない抗体の検出および検出される特
定抗体の決定のために、かかる血清または血漿の１滴を
ミクロタイター・プレート上の乾燥した赤血球の各パネ
ル凹所へ添加する。検定は実施例１で記載したように行
なう、そして次にそれぞれの凹所において陽性反応をも
たらす試料中の抗体の特異性は陽性反応を示す個々の凹
所のパネル構成員の表現型の判定によって決定される。
本発明は、赤血球へ向けられた予測されない抗体の検出
のために検定用抗体パネルを有するミクロタイター・プ
レートｔ−調製することに利用することができる。ミク
ロタイター・プレートは、既知で種々の血液型抗原表現
型をもったヒトの赤面本発明はヒトの血小板に向けられ
た予想ぜｈない抗体の検出のために抗体スクリーンとし
て有用なミクロタイター・プレートの調製に利用するこ
とができる。ミクロタイター・プレートは実施例１で記
載したようにアルシアン・イエローで染色される。血小
板細胞の単層はミクロタイター・プレートの各凹所へ血
小板と改良されたオルシーバー溶液の０．１％（Ｖ／ｖ
）懸濁液１００μｌを添加することによって形成される
。血小板は２〜８℃で２１ｉ時間重力によって沈降させ
る。過剰の血小板溶液をデカントして、そのプレート全
等張塩溶液で２回洗浄する。ＬＯＭデキストロースと１
５４ｍＭ ＮａＣｊ から成る乾燥用溶液１００μｌ
を各凹所に添加して直ちにデカントする。そのプレート
を分子ふるい乾燥剤を備えた箔バックに入れて、２〜８
℃で７日間乾燥尽せる。ヒトの生物流体中の予測されな
い抗体を試験するために一各凹所へ血清、血漿または対
揮試料の１滴を添加して凹所において３７℃で１５分間
扁装する。それらの凹部を等張塩＃液で５回洗浄し、各
凹所へ指示赤血球を１滴を添加する。そのプレートを９
００ｘＧで１分間遠心分離した後、指示赤血球の血小板
単層への付滑性または非付漕性全検査する。陽性反応は
凹所表面への指示赤血球の付着を示す。陰性反応は凹所
の底部における指示赤血球の別個のボタンを形成する。
のために検定用抗体パネルを有するミクロタイター・プ
レートｔ−調製することに利用することができる。ミク
ロタイター・プレートは、既知で種々の血液型抗原表現
型をもったヒトの赤面本発明はヒトの血小板に向けられ
た予想ぜｈない抗体の検出のために抗体スクリーンとし
て有用なミクロタイター・プレートの調製に利用するこ
とができる。ミクロタイター・プレートは実施例１で記
載したようにアルシアン・イエローで染色される。血小
板細胞の単層はミクロタイター・プレートの各凹所へ血
小板と改良されたオルシーバー溶液の０．１％（Ｖ／ｖ
）懸濁液１００μｌを添加することによって形成される
。血小板は２〜８℃で２１ｉ時間重力によって沈降させ
る。過剰の血小板溶液をデカントして、そのプレート全
等張塩溶液で２回洗浄する。ＬＯＭデキストロースと１
５４ｍＭ ＮａＣｊ から成る乾燥用溶液１００μｌ
を各凹所に添加して直ちにデカントする。そのプレート
を分子ふるい乾燥剤を備えた箔バックに入れて、２〜８
℃で７日間乾燥尽せる。ヒトの生物流体中の予測されな
い抗体を試験するために一各凹所へ血清、血漿または対
揮試料の１滴を添加して凹所において３７℃で１５分間
扁装する。それらの凹部を等張塩＃液で５回洗浄し、各
凹所へ指示赤血球を１滴を添加する。そのプレートを９
００ｘＧで１分間遠心分離した後、指示赤血球の血小板
単層への付滑性または非付漕性全検査する。陽性反応は
凹所表面への指示赤血球の付着を示す。陰性反応は凹所
の底部における指示赤血球の別個のボタンを形成する。
従って、検定される生物流体が抗体を血小板へ向けた場
合には、それは血小板の単層へ結合する。
合には、それは血小板の単層へ結合する。
かかる抗体が生物流体に存在しない場合には、指示細胞
は凹所の底部に集まる。上記の方法および固相支持体を
利用する検定法は常に標阜のチューブ試験で得られる結
果より高感度の結果を与える。
は凹所の底部に集まる。上記の方法および固相支持体を
利用する検定法は常に標阜のチューブ試験で得られる結
果より高感度の結果を与える。
本発明に従って調製したミクロタイター・プレートはヒ
トの血小板へ向けられた予測されない抗体の検出するた
めの抗体パネルを調製するために使用することができる
。この検定法は、既知で種々の抗原表現型をもったヒト
の血小板のパネルをミクロタイター・プレートの個々の
凹所に調製することを除いて実施例５で記載した免疫検
定法と同一である。そのミクロタイター・プレートは実
施例５で記載した方法で乾燥用溶液全添加することによ
って洗浄および乾燥を行った。そのミクロタイター・プ
レートは、乾燥した血小板の個々の凹所へ１滴の血清ま
たは血漿を添加することによって免疫検定に利用する。
トの血小板へ向けられた予測されない抗体の検出するた
めの抗体パネルを調製するために使用することができる
。この検定法は、既知で種々の抗原表現型をもったヒト
の血小板のパネルをミクロタイター・プレートの個々の
凹所に調製することを除いて実施例５で記載した免疫検
定法と同一である。そのミクロタイター・プレートは実
施例５で記載した方法で乾燥用溶液全添加することによ
って洗浄および乾燥を行った。そのミクロタイター・プ
レートは、乾燥した血小板の個々の凹所へ１滴の血清ま
たは血漿を添加することによって免疫検定に利用する。
その検定は実施例５で記載したように行なう。陽性反応
をもたらす個々の凹所における試料中の抗体の特異性は
１個々のパネル構成員の表現型を判定することによって
決定することができる。
をもたらす個々の凹所における試料中の抗体の特異性は
１個々のパネル構成員の表現型を判定することによって
決定することができる。
実施例４の検定法は、乾燥溶液の添加前にＨＬＡ抗原の
クロロキン除去によってＨＬＡ以外の特異の血小板抗体
の同定に利用することができる。実施例４に示した方法
を次のように改良するニー旦、血小板の単層を調製して
、各凹所毎に２０ｍＭのＭＥＳ緩衝溶１（ｐＨ６，０）
中に１００冨９／１のクロロキン１００μｌを添加する
。対照の凹所は２０ｍＭのＭＥＳ緩衝溶液のみを含有す
る。ミクロタイター・プレートはう７℃で１時間温首し
て、塩溶液で４回洗浄する。実施例４で記載した乾燥用
溶液を添加し、ミクロタイター・プレートの最終調製お
よび検定を実施例４で記載したように行なう。
クロロキン除去によってＨＬＡ以外の特異の血小板抗体
の同定に利用することができる。実施例４に示した方法
を次のように改良するニー旦、血小板の単層を調製して
、各凹所毎に２０ｍＭのＭＥＳ緩衝溶１（ｐＨ６，０）
中に１００冨９／１のクロロキン１００μｌを添加する
。対照の凹所は２０ｍＭのＭＥＳ緩衝溶液のみを含有す
る。ミクロタイター・プレートはう７℃で１時間温首し
て、塩溶液で４回洗浄する。実施例４で記載した乾燥用
溶液を添加し、ミクロタイター・プレートの最終調製お
よび検定を実施例４で記載したように行なう。
本発明は逆ＡＢＯグループ分は検定を行うのに適した固
相支持体の調製に利用することができる。
相支持体の調製に利用することができる。
ミクロタイター・プレートを実施例１で記載したアルシ
アン・イエローで染色し、Ａ１の０，２％（ｖ／ｖ）懸
濁液および塩溶液または試薬赤血球希釈液中のＢ赤血球
の類似懸濁液の１００μ７ｅ初数の個々の凹所へ添加す
る。その赤血球を室温で＋＋０〜６０分間重力によって
沈降させる。各凹所へ８０ｍＭの塩化ナトリウム１００
μｌｆ：添加して赤血球を箔屑する。溶解溶液を凹所に
おいて室温で１分間淘首させた後、吸引によって除去す
る。
アン・イエローで染色し、Ａ１の０，２％（ｖ／ｖ）懸
濁液および塩溶液または試薬赤血球希釈液中のＢ赤血球
の類似懸濁液の１００μ７ｅ初数の個々の凹所へ添加す
る。その赤血球を室温で＋＋０〜６０分間重力によって
沈降させる。各凹所へ８０ｍＭの塩化ナトリウム１００
μｌｆ：添加して赤血球を箔屑する。溶解溶液を凹所に
おいて室温で１分間淘首させた後、吸引によって除去す
る。
次にそのミクロタイター・プレートを自動洗浄装置を使
用して等張塩溶液で２回洗浄する。ＬＯモル／１１のデ
キストロースと１５４ミリモル／ｌの塩化ナトリウムか
ら成る乾燥用溶液１００μｌｆ：各凹所へ添加する。乾
燥用溶液はそれ全凹所へ添加した直後に吸引によって除
去し、マイクロタイター・プレートを分子ふるい乾燥剤
を内蔵する基パウチに逆さ１に入れる。そのパウチを熱
で密封して、２〜８℃で５日間乾爆させる。
用して等張塩溶液で２回洗浄する。ＬＯモル／１１のデ
キストロースと１５４ミリモル／ｌの塩化ナトリウムか
ら成る乾燥用溶液１００μｌｆ：各凹所へ添加する。乾
燥用溶液はそれ全凹所へ添加した直後に吸引によって除
去し、マイクロタイター・プレートを分子ふるい乾燥剤
を内蔵する基パウチに逆さ１に入れる。そのパウチを熱
で密封して、２〜８℃で５日間乾爆させる。
逆ＡＢＯグループ分は検定を行うために、箔パックを開
けて血清、血漿または対胛試料の１滴を各凹所に添加し
て、５７℃で１５分間扁置きせた。
けて血清、血漿または対胛試料の１滴を各凹所に添加し
て、５７℃で１５分間扁置きせた。
ミクロタイター・プレートは自動洗浄装置で塩溶液を使
用してう回洗浄した。Ａ、Ｂ指示赤血球細胞の１滴を各
凹所へ添加する。そのミクロタイター・プレー）’ｋｌ
１５０ｘｏで１分間遠心分離にかけて、該プレーＩｆ検
査し指示赤血球の赤血球細胞単層への付着または非付着
全判定する。患者の生物流体試料がＡ、型赤血球の抗体
を有すると、それらはＡＩ型型面血球単層有する凹所へ
結合する、そして陽性反応が指示細胞の反応表面上への
付着によって見られる。同様に、患者の血清または血漿
がＢ型赤血球の抗体を有すると、それらはＢ型光血球細
胞単層を有する凹所へ結合する。陰性反応が付着を示づ
ない凹所の底部に指示赤血球の別個のボタンを形成する
。
用してう回洗浄した。Ａ、Ｂ指示赤血球細胞の１滴を各
凹所へ添加する。そのミクロタイター・プレー）’ｋｌ
１５０ｘｏで１分間遠心分離にかけて、該プレーＩｆ検
査し指示赤血球の赤血球細胞単層への付着または非付着
全判定する。患者の生物流体試料がＡ、型赤血球の抗体
を有すると、それらはＡＩ型型面血球単層有する凹所へ
結合する、そして陽性反応が指示細胞の反応表面上への
付着によって見られる。同様に、患者の血清または血漿
がＢ型赤血球の抗体を有すると、それらはＢ型光血球細
胞単層を有する凹所へ結合する。陰性反応が付着を示づ
ない凹所の底部に指示赤血球の別個のボタンを形成する
。
実施例７
本発明は、正ＡＢＯグループ分けおよびＤ型を決定する
ための検定を行うのに有用な固相支持体の調製に利用さ
れる。実施例１で記載したようにアルシアン・イエロー
で染色したミクロタイター・プレートを調製して、塩溶
液中にＡ１．Ｂおよび０−Ｒｈ陽性赤血球のそｈぞれ０
．２ ％ （ｖ／ｖ ）懸濁液ｉｏｏμＩｆそれぞれの
凹所へ添加する。赤血球を室温で１時間重力によって沈
降嘔せる。細胞を沈降させた後、過剰の細胞溶液をプレ
ートからデカントさせる。次に細胞の単層を抗−八、抗
−Ｂおよび抗−りの適当な希釈液１００μｌを凹所に添
加することによって増感させる。その凹所中で抗血清を
３７℃で６０分間濡装して、過剰の抗血清を吸引によっ
て除去する。次に溶解用溶液として８０ｍＭの塩化ナト
リウム１αＯμＩｆ各凹所へ添加して、室温で１分間ｌ
晶給させる。過剰の溶解用溶液は吸引で除去し、ミクロ
タイター・プレートは等張塩溶液で２回洗浄する。１０
モル／ｌのデキストロースおよび１５１ｉミリモル／ｌ
の塩化ナトリウムの１００μｌから成る乾燥用溶液ヲ０
．５％プロメラインと共に各凹所へ添加する。
ための検定を行うのに有用な固相支持体の調製に利用さ
れる。実施例１で記載したようにアルシアン・イエロー
で染色したミクロタイター・プレートを調製して、塩溶
液中にＡ１．Ｂおよび０−Ｒｈ陽性赤血球のそｈぞれ０
．２ ％ （ｖ／ｖ ）懸濁液ｉｏｏμＩｆそれぞれの
凹所へ添加する。赤血球を室温で１時間重力によって沈
降嘔せる。細胞を沈降させた後、過剰の細胞溶液をプレ
ートからデカントさせる。次に細胞の単層を抗−八、抗
−Ｂおよび抗−りの適当な希釈液１００μｌを凹所に添
加することによって増感させる。その凹所中で抗血清を
３７℃で６０分間濡装して、過剰の抗血清を吸引によっ
て除去する。次に溶解用溶液として８０ｍＭの塩化ナト
リウム１αＯμＩｆ各凹所へ添加して、室温で１分間ｌ
晶給させる。過剰の溶解用溶液は吸引で除去し、ミクロ
タイター・プレートは等張塩溶液で２回洗浄する。１０
モル／ｌのデキストロースおよび１５１ｉミリモル／ｌ
の塩化ナトリウムの１００μｌから成る乾燥用溶液ヲ０
．５％プロメラインと共に各凹所へ添加する。
その乾燥用溶液はそれを凹所へ添付直後に吸引によって
除去し、ミクロタイター・プレートを分子ふるい乾燥剤
を有する箔パケットに逆さまに入れる。その箔パケット
は熱で密封し、２〜８℃で７日間乾爆させる。
除去し、ミクロタイター・プレートを分子ふるい乾燥剤
を有する箔パケットに逆さまに入れる。その箔パケット
は熱で密封し、２〜８℃で７日間乾爆させる。
上記のように調製したミクロタイター・プレトを利用し
て正ＡＢＯグループ分けおよびＤ型化を行うために、塩
溶液中で希釈した試験用赤血球の０．２〜０．３％（ｖ
／ｖ ）懸濁液１滴全各凹所へ添加して、３７℃で１５
分間扁置きせる。次にミクロタイター・プレートはｎ
５０ｘＧで１分間遠心分離させる。そのプレート（ｒ検
査して試験赤血球の増感赤血球単層への付着または非付
着を判定する。試験赤血球が抗〜Ａ抗血清を有するＡ、
赤施球を含有する凹所へ付着するならば、試験赤血球は
八−型細胞である。試験細胞がＢ型であると。
て正ＡＢＯグループ分けおよびＤ型化を行うために、塩
溶液中で希釈した試験用赤血球の０．２〜０．３％（ｖ
／ｖ ）懸濁液１滴全各凹所へ添加して、３７℃で１５
分間扁置きせる。次にミクロタイター・プレートはｎ
５０ｘＧで１分間遠心分離させる。そのプレート（ｒ検
査して試験赤血球の増感赤血球単層への付着または非付
着を判定する。試験赤血球が抗〜Ａ抗血清を有するＡ、
赤施球を含有する凹所へ付着するならば、試験赤血球は
八−型細胞である。試験細胞がＢ型であると。
それらは細胞に吸着した抗−Ｂを有する凹所へ結合する
ことになる。ＡＢ型赤血球は抗−Ａおよび抗−Ｂ増感細
胞へ結合し、０型赤血球はいずれの＋ 細胞にも付着しない。Ｄ である試験赤血球は抗−Ｄｉ
有する凹所へ結合するが、Ｄ である細胞は結合しない
。陰性反応は付着を示さない凹所の底部に赤血球の別個
のボタンを形成する。
ことになる。ＡＢ型赤血球は抗−Ａおよび抗−Ｂ増感細
胞へ結合し、０型赤血球はいずれの＋ 細胞にも付着しない。Ｄ である試験赤血球は抗−Ｄｉ
有する凹所へ結合するが、Ｄ である細胞は結合しない
。陰性反応は付着を示さない凹所の底部に赤血球の別個
のボタンを形成する。
本発明は赤血球の表現型を決定する検定に有用な固相支
持体の調製に利用される。ミクロタイター・プレートを
実施例１で記載したようにアルシアン・イエローで再び
染色し、財知抗原血液型衣現型をもった塩溶液中の赤血
球の個々の溶液の１％（ｖ／ｖ ）懸濁液１００μ！の
添加によって、個々の凹所に細胞の単層を調製する。そ
れらの細胞懸濁液は室温で１時間重力によって沈降させ
る。
持体の調製に利用される。ミクロタイター・プレートを
実施例１で記載したようにアルシアン・イエローで再び
染色し、財知抗原血液型衣現型をもった塩溶液中の赤血
球の個々の溶液の１％（ｖ／ｖ ）懸濁液１００μ！の
添加によって、個々の凹所に細胞の単層を調製する。そ
れらの細胞懸濁液は室温で１時間重力によって沈降させ
る。
次に細胞単層を問題の抗血清の適当な希釈液１００μ！
で増感して、５７℃で６０分間淘置市る。問題の抗血清
は単ＪＷＩを形成する細胞上の特定既知抗原に特異の抗
体である。次に細胞単層は１３０ ｍ Ｍの塩化ナトリ
ウム１００μｊ／凹所を添加するととによって溶解させ
る、そして過剰の溶解用溶液は室淘で１分間の装置に吸
引によって除去する。
で増感して、５７℃で６０分間淘置市る。問題の抗血清
は単ＪＷＩを形成する細胞上の特定既知抗原に特異の抗
体である。次に細胞単層は１３０ ｍ Ｍの塩化ナトリ
ウム１００μｊ／凹所を添加するととによって溶解させ
る、そして過剰の溶解用溶液は室淘で１分間の装置に吸
引によって除去する。
次にそのプレートを適当な方法によって等張塩溶液で２
回洗浄する。次にＬＯモル／ｊデキストロースと１５４
ミリモル／ｌ塩化ナトリウムから成る乾燥用溶液１００
μ！を各凹所へ添加する。乾燥用溶液は直ちに吸引によ
って除去し、ミクロタイター・プレート’を分子ふるい
乾燥剤２有する箔パケットに逆さまに入れる。そのパケ
ットを熱で密封して、４℃で７日間乾燥させる。
回洗浄する。次にＬＯモル／ｊデキストロースと１５４
ミリモル／ｌ塩化ナトリウムから成る乾燥用溶液１００
μ！を各凹所へ添加する。乾燥用溶液は直ちに吸引によ
って除去し、ミクロタイター・プレート’を分子ふるい
乾燥剤２有する箔パケットに逆さまに入れる。そのパケ
ットを熱で密封して、４℃で７日間乾燥させる。
赤血球表現型の検定を行うために、ミクロタイター・プ
レートラ箔バックから取り出し、塩溶液中で予め希釈し
た試験赤血球の０．２〜０．３％（ｖ／ｖ ）懸濁液の
１滴を各凹所へ添加して、５７℃で１５分間渇装置る。
レートラ箔バックから取り出し、塩溶液中で予め希釈し
た試験赤血球の０．２〜０．３％（ｖ／ｖ ）懸濁液の
１滴を各凹所へ添加して、５７℃で１５分間渇装置る。
そのミクロタイター・プレートを１１５０ＸＧで１分間
遠心分離した後、そのプレートを検査して試験赤血球の
赤血球細胞単層への付着または非付着を判定する。陽性
反応は反応表面上への細胞の付着によって見られ、試験
赤血球が細胞単層へ増感された抗体に相補的抗原を含む
こと金示す。陰性反応は付着ヲ示さない凹所の底部にお
ける赤血球の別個のボタンを形成する。このように、試
験赤血球の表現型が決定される。
遠心分離した後、そのプレートを検査して試験赤血球の
赤血球細胞単層への付着または非付着を判定する。陽性
反応は反応表面上への細胞の付着によって見られ、試験
赤血球が細胞単層へ増感された抗体に相補的抗原を含む
こと金示す。陰性反応は付着ヲ示さない凹所の底部にお
ける赤血球の別個のボタンを形成する。このように、試
験赤血球の表現型が決定される。
本発明は、酵素−結合免疫吸着検定法（ＥＬＩｓＡ）に
よってヒトの赤血球へ向けられた予測されない抗体の検
出のだめのミクロタイター・プレートの調製に利用する
ことができる。そのミクロプレートは実施例１のように
調製する。試験血清または血漿試料中の予測されない抗
体を検出するために、かかる血清または血漿の１滴を乾
燥した赤血球の各凹所へ添加し、続いて低イオン強度溶
液２滴を添加する。こｒｒらの溶液を凹所内で５７℃に
おいて１１５分間渇置装置る。温置後、ミクロタイター
・プレートの凹所全塩溶液で、望ましくは自動洗浄装置
によって４回洗浄する。各凹所へアルカリ性のホスファ
ターゼ共役抗−ヒ） ＩｊｌＧ溶液を添加する。その酵
素共役−ＩｊｌＧ溶液全う７℃で１時間扁置する。共役
抗−ヒトＩｊｌＧはこれらの凹所で免疫学的に結合する
。試験試料からのＩ、９０は乾燥化赤血球単層に結合し
ている（ Ｉｓ性試験）そして次の洗浄工程で洗い落さ
れる。陰性凹所における共役抗−ヒ）ＩｙＧ（試験試料
からのＨＩＧはいずれも乾燥化赤血球単層へ結合してい
ない）は結合しなくて１次の洗浄工程で洗い落される。
よってヒトの赤血球へ向けられた予測されない抗体の検
出のだめのミクロタイター・プレートの調製に利用する
ことができる。そのミクロプレートは実施例１のように
調製する。試験血清または血漿試料中の予測されない抗
体を検出するために、かかる血清または血漿の１滴を乾
燥した赤血球の各凹所へ添加し、続いて低イオン強度溶
液２滴を添加する。こｒｒらの溶液を凹所内で５７℃に
おいて１１５分間渇置装置る。温置後、ミクロタイター
・プレートの凹所全塩溶液で、望ましくは自動洗浄装置
によって４回洗浄する。各凹所へアルカリ性のホスファ
ターゼ共役抗−ヒ） ＩｊｌＧ溶液を添加する。その酵
素共役−ＩｊｌＧ溶液全う７℃で１時間扁置する。共役
抗−ヒトＩｊｌＧはこれらの凹所で免疫学的に結合する
。試験試料からのＩ、９０は乾燥化赤血球単層に結合し
ている（ Ｉｓ性試験）そして次の洗浄工程で洗い落さ
れる。陰性凹所における共役抗−ヒ）ＩｙＧ（試験試料
からのＨＩＧはいずれも乾燥化赤血球単層へ結合してい
ない）は結合しなくて１次の洗浄工程で洗い落される。
ミクロプレートの凹所は塩溶液で４回洗浄する。１０％
ジェタノール−ｄＨ２０中にｐ−ニトロフェノール・ホ
スフＩ−ト（ＰＮＰＰ）の１− Ｏｙｘｇ ／ｒｔｒｌ
から成る酵素基質の溶液１００μ！を凹所へ添加する。
ジェタノール−ｄＨ２０中にｐ−ニトロフェノール・ホ
スフＩ−ト（ＰＮＰＰ）の１− Ｏｙｘｇ ／ｒｔｒｌ
から成る酵素基質の溶液１００μ！を凹所へ添加する。
室扇で５０分間扁渡した後、ｌｉｌ１０５ｎおける凹所
の吸光度ラミクロプレート分光光度計で測定する。陽性
凹所において抗−ヒ） Ｉ、９Ｇへ共役されたアルカリ
性ホスファターゼ酵素はＰＮＰＰ基質を酵素的に分解し
て、目で見ることができる黄緑色をもたらす。陰性凹所
（アルカリ性ホスファターゼ共役抗−ＩｊｌＧが存在し
ない）においては−ＰＮＰＰ基質は酵素で分解さｈない
で透明に見える。
の吸光度ラミクロプレート分光光度計で測定する。陽性
凹所において抗−ヒ） Ｉ、９Ｇへ共役されたアルカリ
性ホスファターゼ酵素はＰＮＰＰ基質を酵素的に分解し
て、目で見ることができる黄緑色をもたらす。陰性凹所
（アルカリ性ホスファターゼ共役抗−ＩｊｌＧが存在し
ない）においては−ＰＮＰＰ基質は酵素で分解さｈない
で透明に見える。
以上の記載から１本発明は前述の全ての目的を達成する
のに適したものであることがわかる。
のに適したものであることがわかる。
本発明の範囲を逸脱することなく、多くの考えられる実
施態様が可能であるから、本明細に示した全ての事項は
説明のためのものであって、限定を意図するものではな
い。
施態様が可能であるから、本明細に示した全ての事項は
説明のためのものであって、限定を意図するものではな
い。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、哺乳類細胞を固相支持体へ固定化する工程； 前記固定化された細胞に乾燥用溶液を接触させることに
よつて、前記固相支持体へ固定化された細胞を乾燥する
工程；および 前記固定化された細胞との接触から前記乾燥用溶液を取
り除く工程、から成ることを特徴とする固相免疫検定に
使用する固相支持体上の哺乳類細胞を乾燥溶液の使用を
介して乾燥する方法。 ２、前記乾燥工程の前に、前記固定化された細胞を溶解
する工程を含む特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、前記溶解が、前記固定化された細胞へ溶解用溶液を
添加することによつて行われる特許請求の範囲第２項記
載の方法。 ４、前記溶解用溶液が脱イオン水又は塩溶液である特許
請求の範囲第３項記載の方法。 ５、前記固相支持体が有機ポリマーまたはガラス製であ
る特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６、前記乾燥用溶液が単糖類、二糖類、三糖類、および
シクリトールからなる群から選択した１つの構成員と塩
との混合体からなる特許請求の範囲第１項記載の方法。 ７、前記単糖類、二糖類、三糖類又はシクリトールはＤ
−（−）グルコース、スクロース、Ｄ−（−）Ｄ−（＋
）リキソース、ミオ−イノシトール、Ｄ−（＋）セロビ
オース、およびＬ−（−）−ソルボースからなる群から
選ぶ特許請求の範囲第６項記載の方法。 ８、前記単糖類がＤ−（−）グルコースである特許請求
の範囲第７項記載の方法。 ９、前記混合体における前記単糖類、二糖類、三糖類ま
たはシクリトールが０．１Ｍ〜３．０Ｍの濃度を有する
特許請求の範囲第６項記載の方法。 １０、前記混合体中の塩が５０ｍＭ〜３７７ｍＭの濃度
で存在する特許請求の範囲第６項記載の方法。 １１、前記塩は塩化ナトリウム、塩化カリウムまたはリ
ン酸ナトリウムからなる群から選ぶ特許請求の範囲第１
０項記載の方法。 １２、前記混合体中の塩が１５４ｍＭの塩化ナトリウム
である特許請求の範囲第１１項記載の方法。 １３、前記乾燥用溶液は前記固相支持体へ前記固定化細
胞を完全にカバーする量を添加する特許請求の範囲第１
項記載の方法。 １４、前記取り除き工程がさらに、 前記固相支持体から前記乾燥溶液をデカントする工程；
および 前記固相支持体を乾燥剤を内蔵した密封容器に入れる工
程からなる特許請求の範囲第１項記載の方法。 １５、前記哺乳類細胞は赤血球、血小板、白血球、リン
パ球および組織細胞から成る群から選ぶ特許請求の範囲
第１項記載の方法。 １６、前記哺乳類細胞が赤血球又は血小板である特許請
求の範囲第１項記載の方法。 １７、固相支持体； 正味正電荷および前記支持体に吸着された疎水性芳香族
環構造を有する有機染料の被膜；および 前記有機染料に固定化された免疫反応性成分の乾燥単分
子層から成ることを特徴とする固相免疫検定を行うため
の物品。 １８、前記免疫反応性成分は哺乳類細胞から成る群から
選ぶ特許請求の範囲第１７項記載の方法。 １９、前記哺乳類細胞は赤血球、リンパ球、白血球、血
小板および組織細胞から成る群から選ぶ特許請求の範囲
第１８項記載の方法。 ２０、前記哺乳類細胞が赤血球または血小板である特許
請求の範囲第１９項記載の方法。 ２１、前記有機染料はアゾ染料、ジアゾニウム塩類、テ
トラアゾニウム塩類、テトラゾリウム塩類、トリフェニ
ルメタン、キサンテン、アクリジン、キノリン、チアゾ
ール、インダミン、アジン、アミノアジン、チアジンお
よびフタロシアニンから成る群から選択する特許請求の
範囲第１７項記載の方法。 ２２、前記固相支持体が有機ポリマー製である特許請求
の範囲第２１項記載の方法。 ２３、前記支持体がガラス製である特許請求の範囲第２
１項記載の方法。 ２４、前記支持体は試験管、ミクロタイター・プレート
、ビード、シートまたは膜から成る群から選択する特許
請求の範囲第２２項記載の方法。 ２５、前記支持体は複数の井戸状凹所を有するミクロタ
イター・プレートである特許請求の範囲第２４項記載の
方法。 ２６、固定化および乾燥され、細胞表面に抗原を提供す
る哺乳類細胞の単層を提供する固相表面を設ける工程； 生物流体に存在する場合の免疫反応性成分を前記哺乳類
細胞上の抗原へ結合させるように、該生物流体と前記固
定化および乾燥化細胞の単層とを接触させる工程； 前記細胞に結合した免疫反応性成分は全てそのままにし
ながら、前記細胞との接触から前記生物流体を除去する
工程；および 固体支持体を分析して前記免疫反応成分の前記細胞への
付着又は非付着を判定する工程、 から成ることを特徴とする固体表面へ固定化および乾燥
された哺乳類細胞に対して生物流体中の免疫反応性成分
の存在を試験するために固相検定を行う方法。 ２７、前記哺乳類細胞が赤血球または血小板である特許
請求の範囲第２６項記載の方法。 ２８、前記固体表面を提供する工程が、複数の凹所を有
するプレートを提供することから成り、前記哺乳類細胞
の単層が赤血球または血小板の単層から成る特許請求の
範囲第２６項記載の方法。 ２９、前記接触工程が前記生物流体を前記凹所における
細胞の単層と接触させることから成る特許請求の範囲第
２８項記載の方法。 ３０、前記接触工程が血漿、血清、赤血球溶液または血
小板溶液を前記固定化および乾燥化細胞単層へ接触させ
ることから成る特許請求の範囲第２６項記載の方法。 ３１、既知抗血清を前記細胞表面上の相補的抗原へ結合
させるために、前記接触工程の前に前記固定化および乾
燥化細胞単層を既知抗血清で増感させる工程を含む特許
請求の範囲第２６項記載の方法。 ３２、前記分析工程が、赤血球付着法、酵素−結合免疫
吸着検定法、放射線免疫検定法または免疫螢光法によつ
て前記付着または非付着を検出することから成る特許請
求の範囲第２６項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US267014 | 1988-11-04 | ||
| US07/267,014 US5030560A (en) | 1988-11-04 | 1988-11-04 | Method for drying mammalian cells for use in solid phase immunoassays and articles incorporating same |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02151765A true JPH02151765A (ja) | 1990-06-11 |
| JP3030710B2 JP3030710B2 (ja) | 2000-04-10 |
Family
ID=23016953
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1285099A Expired - Lifetime JP3030710B2 (ja) | 1988-11-04 | 1989-11-02 | 固相免疫検定用哺乳類細胞の乾燥法及びその物品 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5030560A (ja) |
| EP (1) | EP0367468B1 (ja) |
| JP (1) | JP3030710B2 (ja) |
| AT (1) | ATE131870T1 (ja) |
| AU (2) | AU623441B2 (ja) |
| CA (1) | CA1320690C (ja) |
| DE (1) | DE68925185T2 (ja) |
| ES (1) | ES2081307T3 (ja) |
| GR (1) | GR3019134T3 (ja) |
| NZ (1) | NZ230909A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004037426A (ja) * | 2002-07-08 | 2004-02-05 | Olympus Corp | 血清学的検査容器およびその製造方法 |
| JP2006501441A (ja) * | 2002-08-02 | 2006-01-12 | グリコマインズ リミテッド | 多発性硬化症を診断するための方法 |
| US8048639B2 (en) | 2009-02-12 | 2011-11-01 | Glycominds Ltd. | Method for evaluating risk in multiple sclerosis |
| JP2019154382A (ja) * | 2018-03-15 | 2019-09-19 | 株式会社メタジェン | 糞便の保存方法 |
Families Citing this family (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992011864A1 (en) * | 1991-01-11 | 1992-07-23 | Cryopharm Corporation | Method of detecting circulating antibody types using dried or lyophilized cells or cell-like material |
| US5759774A (en) * | 1988-05-18 | 1998-06-02 | Cobe Laboratories, Inc. | Method of detecting circulating antibody types using dried or lyophilized cells |
| US5958670A (en) * | 1988-05-18 | 1999-09-28 | Cobe Laboratories, Inc. | Method of freezing cells and cell-like materials |
| IL90188A0 (en) * | 1988-05-18 | 1989-12-15 | Cryopharm Corp | Process and medium for the lyophilization of erythrocytes |
| US5045446A (en) * | 1988-08-26 | 1991-09-03 | Cryopharm Corporation | Lyophilization of cells |
| DE59107810D1 (de) * | 1990-11-22 | 1996-06-20 | Giannitsis Dimitrios | Verfahren zum Nachweis von Antikörpern |
| DE4137220C2 (de) * | 1991-11-13 | 1994-05-05 | Imtox Privatinstitut Fuer Immu | Verfahren und Mittel zur in vitro-Bestimmung der Toxizität von Substanzen oder Substanzgemischen |
| JPH05142122A (ja) * | 1991-11-15 | 1993-06-08 | Olympus Optical Co Ltd | 固相細胞の乾燥固定方法 |
| CA2128527A1 (en) * | 1992-01-21 | 1993-07-22 | Raymond P. Goodrich, Jr. | Method of freezing cells and cell-like materials |
| DE9203583U1 (de) * | 1992-03-17 | 1992-05-07 | Alcan Deutschland GmbH, 3400 Göttingen | Näpfchenplatte |
| JP3167415B2 (ja) * | 1992-04-30 | 2001-05-21 | オリンパス光学工業株式会社 | 固相免疫検査における抗原細胞の保存方法 |
| GB9211176D0 (en) * | 1992-05-27 | 1992-07-08 | Central Blood Lab Authority | Assay |
| DE69333924T2 (de) * | 1992-05-29 | 2006-08-17 | University Of North Carolina At Chapel Hill | Im immobilisierten Zustand getrocknete pharmazeutisch verträgliche menschliche Blutplättchen |
| US7666308B2 (en) * | 1996-06-07 | 2010-02-23 | Veridex, Llc. | Magnetic separation apparatus and methods |
| US6660159B1 (en) | 1996-06-07 | 2003-12-09 | Immunivest Corporation | Magnetic separation apparatus and methods |
| US6790366B2 (en) * | 1996-06-07 | 2004-09-14 | Immunivest Corporation | Magnetic separation apparatus and methods |
| US6890426B2 (en) | 1996-06-07 | 2005-05-10 | Immunivest Corporation | Magnetic separation apparatus and methods |
| US6136182A (en) * | 1996-06-07 | 2000-10-24 | Immunivest Corporation | Magnetic devices and sample chambers for examination and manipulation of cells |
| US5985153A (en) * | 1996-06-07 | 1999-11-16 | Immunivest Corporation | Magnetic separation apparatus and methods employing an internal magnetic capture gradient and an external transport force |
| FR2760093B1 (fr) * | 1997-02-21 | 1999-05-14 | Univ Henri Poincare Nancy I | Procede et trousse pour detecter la presence d'une immunoglobuline |
| US6270986B1 (en) | 1999-02-16 | 2001-08-07 | Patrick T. T. Wong | Method of preserving biological tissue specimens and method of infrared spectroscopic analysis which avoids the effects of polymorphs |
| US7429466B2 (en) * | 2000-01-24 | 2008-09-30 | Hypromatrix, Inc | Methods and arrays for detecting biological molecules |
| US6770478B2 (en) | 2000-02-10 | 2004-08-03 | The Regents Of The University Of California | Erythrocytic cells and method for preserving cells |
| CA2397362A1 (en) * | 2000-02-10 | 2001-08-16 | The Regents Of The University Of California | Therapeutic platelets and methods |
| US6528309B2 (en) * | 2001-03-19 | 2003-03-04 | The Regents Of The University Of California | Vacuum-mediated desiccation protection of cells |
| US20040241763A1 (en) * | 2002-08-02 | 2004-12-02 | Nir Dotan | Method for diagnosing multiple sclerosis |
| US6927062B2 (en) * | 2002-11-25 | 2005-08-09 | Agdia, Inc. | Controls and standards for assays and method for manufacture thereof |
| US7572592B2 (en) * | 2005-01-31 | 2009-08-11 | Glycominds Ltd | Method for diagnosing multiple sclerosis |
| US8216791B2 (en) * | 2005-01-31 | 2012-07-10 | Glycominds Ltd. | Method for diagnosing multiple sclerosis |
| US20080280310A1 (en) * | 2007-05-09 | 2008-11-13 | Louis Panagopoulos | Testing for Blood Group Immunological Reaction Without the Use of Anti-Human Globulin |
| WO2009079192A1 (en) * | 2007-12-17 | 2009-06-25 | Ribo Guo | Universal tandem solid-phases based immunoassay |
| MX2014003549A (es) | 2011-09-27 | 2014-05-28 | Koninkl Philips Nv | Compesacion de no linealidades de transitor bipolar de puerta aislante (igbt) para convertidores de energia. |
| FR2991689B1 (fr) * | 2012-06-11 | 2018-04-20 | Diagast | Dispositif de diagnostic immuno-hematologique et utilisations |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6035000A (ja) * | 1983-03-31 | 1985-02-22 | バイク―マリンクロツド・ケミシエ・プロダクテ・ゲーエムベーハー | 蛋白質をポリスチレン表面に不可逆的に結合させる方法 |
| JPS63117263A (ja) * | 1986-10-29 | 1988-05-21 | クールター・コーポレーション | 免疫検定用コントロール スライドおよびその製造方法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4608246A (en) * | 1983-03-10 | 1986-08-26 | Immucor, Inc. | Testing for a blood group immunological reaction |
| JPS6035263A (ja) * | 1983-08-05 | 1985-02-23 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 不溶性担体に固定化された免疫活性物質の安定化法及び該物質を構成単位として含む生理活性物質測定用試薬 |
| US4596723A (en) * | 1984-05-02 | 1986-06-24 | Daryl Laboratories, Inc. | Immunoassay substrate |
| US4666829A (en) * | 1985-05-15 | 1987-05-19 | University Of California | Polypeptide marker for Alzheimer's disease and its use for diagnosis |
| US4891319A (en) * | 1985-07-09 | 1990-01-02 | Quadrant Bioresources Limited | Protection of proteins and the like |
| GB8604983D0 (en) * | 1986-02-28 | 1986-04-09 | Biocompatibles Ltd | Protein preservation |
| US5108923A (en) * | 1986-04-25 | 1992-04-28 | Collaborative Research, Inc. | Bioadhesives for cell and tissue adhesion |
-
1988
- 1988-11-04 US US07/267,014 patent/US5030560A/en not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-09-28 CA CA000614322A patent/CA1320690C/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-05 NZ NZ230909A patent/NZ230909A/en unknown
- 1989-10-12 AU AU42837/89A patent/AU623441B2/en not_active Expired
- 1989-10-23 EP EP89310895A patent/EP0367468B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-23 AT AT89310895T patent/ATE131870T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-10-23 DE DE68925185T patent/DE68925185T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-23 ES ES89310895T patent/ES2081307T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-02 JP JP1285099A patent/JP3030710B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-06-18 AU AU18316/92A patent/AU651699B2/en not_active Expired
-
1996
- 1996-02-28 GR GR960400558T patent/GR3019134T3/el unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6035000A (ja) * | 1983-03-31 | 1985-02-22 | バイク―マリンクロツド・ケミシエ・プロダクテ・ゲーエムベーハー | 蛋白質をポリスチレン表面に不可逆的に結合させる方法 |
| JPS63117263A (ja) * | 1986-10-29 | 1988-05-21 | クールター・コーポレーション | 免疫検定用コントロール スライドおよびその製造方法 |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004037426A (ja) * | 2002-07-08 | 2004-02-05 | Olympus Corp | 血清学的検査容器およびその製造方法 |
| JP2006501441A (ja) * | 2002-08-02 | 2006-01-12 | グリコマインズ リミテッド | 多発性硬化症を診断するための方法 |
| JP2009258138A (ja) * | 2002-08-02 | 2009-11-05 | Glycominds Ltd | 多発性硬化症を診断するための方法 |
| JP4721703B2 (ja) * | 2002-08-02 | 2011-07-13 | グリコマインズ リミテッド | 多発性硬化症を診断するための方法 |
| US8048639B2 (en) | 2009-02-12 | 2011-11-01 | Glycominds Ltd. | Method for evaluating risk in multiple sclerosis |
| JP2019154382A (ja) * | 2018-03-15 | 2019-09-19 | 株式会社メタジェン | 糞便の保存方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE68925185T2 (de) | 1996-05-09 |
| AU1831692A (en) | 1992-09-10 |
| AU4283789A (en) | 1990-05-10 |
| DE68925185D1 (de) | 1996-02-01 |
| JP3030710B2 (ja) | 2000-04-10 |
| AU651699B2 (en) | 1994-07-28 |
| NZ230909A (en) | 1992-01-29 |
| AU623441B2 (en) | 1992-05-14 |
| EP0367468B1 (en) | 1995-12-20 |
| ATE131870T1 (de) | 1996-01-15 |
| EP0367468A1 (en) | 1990-05-09 |
| CA1320690C (en) | 1993-07-27 |
| ES2081307T3 (es) | 1996-03-01 |
| GR3019134T3 (en) | 1996-05-31 |
| US5030560A (en) | 1991-07-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH02151765A (ja) | 固相免疫検定用哺乳類細胞の乾燥法及びその物品 | |
| EP0662218B1 (en) | Solid phase immunological assay | |
| CA1225586A (en) | Method of performing an immuno-assay, article for use therein and method for making such article | |
| US7855068B2 (en) | Methods and kits for detecting a target cell | |
| WO1992011864A1 (en) | Method of detecting circulating antibody types using dried or lyophilized cells or cell-like material | |
| US4681782A (en) | Article for determining the presence of immune complexes | |
| EP0746767B1 (en) | Analyzer cuvette, method and diagnostic test kit for determination of analytes in whole blood samples | |
| US4317810A (en) | Waffle-like matrix for immunoassay and preparation thereof | |
| EP0350233B1 (en) | An article for performing immunological assays utilizing organic dyes and methods for producing and utilizing same | |
| US4360358A (en) | Immunoassay with solid phase having coating containing blood platelet substitute | |
| US5192663A (en) | Article having an organic dye and a monolayer of dried mammalian cells and a method for utilizing the article | |
| CA1334825C (en) | Solid phase indicator red blood cells and method | |
| CN110174519A (zh) | 一种基于固相凝集技术的汇检式红细胞血型不规则抗体检测试剂盒及制备方法 | |
| CN110308288B (zh) | 一种新型血小板交叉配型试剂盒 | |
| EP0217845B1 (fr) | Procede de determination immunologique d'une substance biologique dans un echantillon | |
| CA1089359A (en) | Blood cell typing and compatibility test by solid phase immunoadsorbtion | |
| JPH06148188A (ja) | 免疫学的再検査方法 | |
| Sample | 11. Assay Procedure Continued… | |
| JPS6244221B2 (ja) | ||
| SE458237B (sv) | Foerfarande och medel foer bestaemmning av immunkomplex eller aggregerade gammaglobuliner |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090210 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090210 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100210 Year of fee payment: 10 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100210 Year of fee payment: 10 |