JPH05142122A - 固相細胞の乾燥固定方法 - Google Patents
固相細胞の乾燥固定方法Info
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- JPH05142122A JPH05142122A JP32674991A JP32674991A JPH05142122A JP H05142122 A JPH05142122 A JP H05142122A JP 32674991 A JP32674991 A JP 32674991A JP 32674991 A JP32674991 A JP 32674991A JP H05142122 A JPH05142122 A JP H05142122A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】特異性物質の失活するのを防止しつつ固相細胞
を乾燥固定し得る固相細胞の乾燥固定方法を提供する。 【構成】Ｕ底プレートの各ウエルの底面にコムギ胚芽レ
クチン(WGA) をコーティングした後、赤血球をウエル底
面に単層状に固相化して赤血球固相化プレートを得る。
この後、赤血球固相化プレートに、乾燥溶液（サッカロ
ース20重量％、ウシ血清アルブミン0.2 重量％、アジ化
ナトリウム0.05重量％含有）を100 μｌ/well 分注す
る。次いで、３分間放置した後、乾燥溶液を捨てて水切
りする。次にドライインキュベーターにより30℃で30分
間風乾し、更に減圧乾燥機により減圧下で４時間乾燥を
行って、乾燥赤血球固相化プレートを得る。
を乾燥固定し得る固相細胞の乾燥固定方法を提供する。 【構成】Ｕ底プレートの各ウエルの底面にコムギ胚芽レ
クチン(WGA) をコーティングした後、赤血球をウエル底
面に単層状に固相化して赤血球固相化プレートを得る。
この後、赤血球固相化プレートに、乾燥溶液（サッカロ
ース20重量％、ウシ血清アルブミン0.2 重量％、アジ化
ナトリウム0.05重量％含有）を100 μｌ/well 分注す
る。次いで、３分間放置した後、乾燥溶液を捨てて水切
りする。次にドライインキュベーターにより30℃で30分
間風乾し、更に減圧乾燥機により減圧下で４時間乾燥を
行って、乾燥赤血球固相化プレートを得る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、例えば、免疫反応に利
用する組織又は細胞を固相化した後乾燥固定する固相細
胞の乾燥固定方法に関する。
用する組織又は細胞を固相化した後乾燥固定する固相細
胞の乾燥固定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、固相化された組織又は細胞を用い
る免疫反応としては、マイクロプレート等の反応容器の
壁面に対して、赤血球を固相化する方法（特開平２−１
２４４６４号）や、血小板を固相する方法（柴田らのIn
ternational Archives of Allergy and Applied Immuno
logy，74，93-96 ，1984）等が知られている。このよう
な免疫反応は、例えば、赤血球の血液型（ＡＢＯ，Ｒ
ｈ）の検査に適用されている。血液型の検査は、輸血時
の安全確保の為に必要である。また、細胞上に存在する
種々の特異性物質（例えば、血液型物質、ＨＬＡ，血小
板抗原等）と、特異反応物との反応を行うことによっ
て、数々の情報を得られる。
る免疫反応としては、マイクロプレート等の反応容器の
壁面に対して、赤血球を固相化する方法（特開平２−１
２４４６４号）や、血小板を固相する方法（柴田らのIn
ternational Archives of Allergy and Applied Immuno
logy，74，93-96 ，1984）等が知られている。このよう
な免疫反応は、例えば、赤血球の血液型（ＡＢＯ，Ｒ
ｈ）の検査に適用されている。血液型の検査は、輸血時
の安全確保の為に必要である。また、細胞上に存在する
種々の特異性物質（例えば、血液型物質、ＨＬＡ，血小
板抗原等）と、特異反応物との反応を行うことによっ
て、数々の情報を得られる。
【０００３】しかし、上述の固相化した組織又は細胞を
用いた免疫反応では、固相化した組織又は細胞は生きた
ものであり、長期にわたって保存できず、組織又は細胞
の寿命（有効期間）が問題となる。例えば、特開平２−
１２４６４号に記載された、赤血球を、例えば、マイク
ロプレートウェル、試験管、スライドガラスのような支
持体に固相化する方法では、生きた細胞を用いているた
め、固相化した赤血球を長時間にわたって保存できな
い。ここで、赤血球を保存するために、人体より採血し
た後、例えば、アルセバー液やＭＡＰ液に、赤血球を浮
遊させておいても、採血直後から除々に溶血してしま
う。この結果、数週間〜１ケ月で、固相化した赤血球を
試薬として使用できなくなってしまう。また、Ｏｒｔｈ
ｏ社等より市販されているスクリーニング用Ｏ型血球
も、同様の理由で有効期限が設定され、長期保存に適し
ていない。
用いた免疫反応では、固相化した組織又は細胞は生きた
ものであり、長期にわたって保存できず、組織又は細胞
の寿命（有効期間）が問題となる。例えば、特開平２−
１２４６４号に記載された、赤血球を、例えば、マイク
ロプレートウェル、試験管、スライドガラスのような支
持体に固相化する方法では、生きた細胞を用いているた
め、固相化した赤血球を長時間にわたって保存できな
い。ここで、赤血球を保存するために、人体より採血し
た後、例えば、アルセバー液やＭＡＰ液に、赤血球を浮
遊させておいても、採血直後から除々に溶血してしま
う。この結果、数週間〜１ケ月で、固相化した赤血球を
試薬として使用できなくなってしまう。また、Ｏｒｔｈ
ｏ社等より市販されているスクリーニング用Ｏ型血球
も、同様の理由で有効期限が設定され、長期保存に適し
ていない。
【０００４】このような組織又は細胞の保存期間を延長
する手段として、組織又は細胞を固定することが考えら
れる。組織又は細胞の固定方法は、例えば細胞診等にお
いて種々の方法が行なわれている。例えば、「細胞診教
本−その基礎と実際−」に開示されるような、アルコー
ル等の溶媒、重クロム酸等の重金属、ホルマリン、グル
タルアルデヒド等の固定剤を用いて、組織又は細胞内の
タンパク質を不溶性にする方法が一般的である。また、
特公昭６１−６９４１号にも赤血球の固定方法が開示さ
れている。他にも、組織又は細胞を、煮沸、乾燥凍結す
ることも固定方法の１つであると考えられる。
する手段として、組織又は細胞を固定することが考えら
れる。組織又は細胞の固定方法は、例えば細胞診等にお
いて種々の方法が行なわれている。例えば、「細胞診教
本−その基礎と実際−」に開示されるような、アルコー
ル等の溶媒、重クロム酸等の重金属、ホルマリン、グル
タルアルデヒド等の固定剤を用いて、組織又は細胞内の
タンパク質を不溶性にする方法が一般的である。また、
特公昭６１−６９４１号にも赤血球の固定方法が開示さ
れている。他にも、組織又は細胞を、煮沸、乾燥凍結す
ることも固定方法の１つであると考えられる。
【０００５】上述の固定剤を用いる固定方法等では、先
に述べたように組織又は細胞のタンパク質を変性させる
ため、組織又は細胞の形態の保存や染色には問題ない。
しかし、上述のような免疫反応に使用する組織又は細胞
を固定するには、その組織又は細胞上の特異性物質が変
性してしまい適用できない。このような欠点は、特開平
２−１５１７６５号の３８３頁左下欄第４行目〜３８４
頁、左下欄第４行目に記載されている。
に述べたように組織又は細胞のタンパク質を変性させる
ため、組織又は細胞の形態の保存や染色には問題ない。
しかし、上述のような免疫反応に使用する組織又は細胞
を固定するには、その組織又は細胞上の特異性物質が変
性してしまい適用できない。このような欠点は、特開平
２−１５１７６５号の３８３頁左下欄第４行目〜３８４
頁、左下欄第４行目に記載されている。
【０００６】これに対して、組織又は細胞上の特異性物
質を変性させないで組織又は細胞を固定する方法とし
て、乾燥による組織又は細胞の固定方法が考えられる。
例えば、各種抗原（ウィルス・細菌など）や抗体を結合
させた人工・天然粒子を凍結乾燥する方法が知られてい
る。また、担体上に固相化した組織又は細胞を乾燥固定
する方法としては、イムコア社の固相動物細胞の乾燥固
定化方法（特開平２−１５１７６５号）が知られてい
る。
質を変性させないで組織又は細胞を固定する方法とし
て、乾燥による組織又は細胞の固定方法が考えられる。
例えば、各種抗原（ウィルス・細菌など）や抗体を結合
させた人工・天然粒子を凍結乾燥する方法が知られてい
る。また、担体上に固相化した組織又は細胞を乾燥固定
する方法としては、イムコア社の固相動物細胞の乾燥固
定化方法（特開平２−１５１７６５号）が知られてい
る。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上述の
特開平２−１５１７６５号（以下、文献１と記す）に記
載された乾燥固定方法は、次のような欠点を有する。ま
ず、文献１の３８５頁右下欄第９行目〜第１２行目、３
８６頁左下欄第１６行目〜第１８行目にも記載されてい
るが、文献１の乾燥固定方法を実施するには、赤血球、
血小板等の細胞を固相する場合に、正味正電荷を帯びた
有機染料で染色した固相支持体上に細胞の単層を形成し
ている。この正味正電荷を帯びた有機染料を使用した細
胞の固相化は、タンパク質により阻害される。このた
め、固相化する細胞の表面等にタンパク質が付着してい
てはならない。また、その後使用する乾燥溶液もタンパ
ク質を含んではならない。従って、文献１の乾燥固定方
法では、細胞からタンパク質を除くために遠心洗浄等を
行う必要がある。しかし、タンパク質を含まない溶液中
に細胞を浮遊させた場合にも、除々にタンパク質が細胞
から遊離してくる。例えば血小板等は、輸血学会誌vol.
36,No.2 には、生理食塩水等に浮遊しておくだけで抗原
が抽出されることが記載されている。このような場合に
は、再度細胞を洗浄する必要が生じる。上述のように、
文献１の乾燥固定方法では、タンパク質を除去すること
が不可欠であり、操作が極めて繁雑になる欠点があっ
た。
特開平２−１５１７６５号（以下、文献１と記す）に記
載された乾燥固定方法は、次のような欠点を有する。ま
ず、文献１の３８５頁右下欄第９行目〜第１２行目、３
８６頁左下欄第１６行目〜第１８行目にも記載されてい
るが、文献１の乾燥固定方法を実施するには、赤血球、
血小板等の細胞を固相する場合に、正味正電荷を帯びた
有機染料で染色した固相支持体上に細胞の単層を形成し
ている。この正味正電荷を帯びた有機染料を使用した細
胞の固相化は、タンパク質により阻害される。このた
め、固相化する細胞の表面等にタンパク質が付着してい
てはならない。また、その後使用する乾燥溶液もタンパ
ク質を含んではならない。従って、文献１の乾燥固定方
法では、細胞からタンパク質を除くために遠心洗浄等を
行う必要がある。しかし、タンパク質を含まない溶液中
に細胞を浮遊させた場合にも、除々にタンパク質が細胞
から遊離してくる。例えば血小板等は、輸血学会誌vol.
36,No.2 には、生理食塩水等に浮遊しておくだけで抗原
が抽出されることが記載されている。このような場合に
は、再度細胞を洗浄する必要が生じる。上述のように、
文献１の乾燥固定方法では、タンパク質を除去すること
が不可欠であり、操作が極めて繁雑になる欠点があっ
た。
【０００８】一方、乾燥溶液を用いて細胞を乾燥固定し
た後にさらに乾燥するのに、文献１の乾燥固定方法で
は、文献１の３８７頁左上欄第１１行目〜右上欄第２行
目には、一般的に行われている真空乾燥やけい藻土やシ
リカ粒子を使用した乾燥では、満足度が低下するため、
分子ふるい乾燥剤を用いて、長時間かけて、ゆっくり乾
燥することが好ましいことが記載されている。しかし、
この分子ふるい乾燥剤を用いた乾燥方法は、分子ふるい
乾燥剤が比較的高価であり、かつ、乾燥に長時間を要す
るため、工業的に大量に固相細胞を乾燥固定する場合に
は製造時間も制約されるので不適当である。このため、
工業的に安定かつ安価に乾燥固定した固相細胞を製造す
るには、真空乾燥や自然乾燥でも十分満足し得るような
固相細胞の乾燥固定方法が要求されている。
た後にさらに乾燥するのに、文献１の乾燥固定方法で
は、文献１の３８７頁左上欄第１１行目〜右上欄第２行
目には、一般的に行われている真空乾燥やけい藻土やシ
リカ粒子を使用した乾燥では、満足度が低下するため、
分子ふるい乾燥剤を用いて、長時間かけて、ゆっくり乾
燥することが好ましいことが記載されている。しかし、
この分子ふるい乾燥剤を用いた乾燥方法は、分子ふるい
乾燥剤が比較的高価であり、かつ、乾燥に長時間を要す
るため、工業的に大量に固相細胞を乾燥固定する場合に
は製造時間も制約されるので不適当である。このため、
工業的に安定かつ安価に乾燥固定した固相細胞を製造す
るには、真空乾燥や自然乾燥でも十分満足し得るような
固相細胞の乾燥固定方法が要求されている。
【０００９】さらに、文献１の固相細胞の乾燥固定方法
では、上述のようにタンパク質が全く存在しないことが
要求されているが、タンパク質が存在しない条件下で固
相細胞の乾燥固定を行った場合、次のような問題があ
る。
では、上述のようにタンパク質が全く存在しないことが
要求されているが、タンパク質が存在しない条件下で固
相細胞の乾燥固定を行った場合、次のような問題があ
る。
【００１０】一つは、通常、抗原や抗体を保存する際
に、その反応性や特異性の失活を防止するために行なわ
れるタンパク質の添加を行えないことである。例えば、
抗原や抗体を感作した粒子を凍結乾燥する際に、乾燥溶
液に糖以外にウシ血清アルブミン（以下、ＢＳＡと記
す）、動物血清のようなタンパク質を添加することが多
い。
に、その反応性や特異性の失活を防止するために行なわ
れるタンパク質の添加を行えないことである。例えば、
抗原や抗体を感作した粒子を凍結乾燥する際に、乾燥溶
液に糖以外にウシ血清アルブミン（以下、ＢＳＡと記
す）、動物血清のようなタンパク質を添加することが多
い。
【００１１】例えば、特公平２−３０６６８号の１８０
頁の表１には、乾燥溶液の組成と感度（反応性）の一覧
が示されているが、このうち、優れた感度を示すのは、
タンパク質（例えば、ＢＳＡ）が添加されているものが
多い。また、特開昭６２−２０９３６２号には、糖に血
清アルブミンを添加した乾燥溶液を用いた、凍結乾燥し
た感作血球の作成方法が開示されている。また、市販さ
れている抗体や抗原感作粒子の凍結乾燥メディウムの一
覧表のほとんどに、ＢＳＡや動物血清のようなタンパク
質が添加されていることが示されている。
頁の表１には、乾燥溶液の組成と感度（反応性）の一覧
が示されているが、このうち、優れた感度を示すのは、
タンパク質（例えば、ＢＳＡ）が添加されているものが
多い。また、特開昭６２−２０９３６２号には、糖に血
清アルブミンを添加した乾燥溶液を用いた、凍結乾燥し
た感作血球の作成方法が開示されている。また、市販さ
れている抗体や抗原感作粒子の凍結乾燥メディウムの一
覧表のほとんどに、ＢＳＡや動物血清のようなタンパク
質が添加されていることが示されている。
【００１２】従って、文献１の固相細胞の乾燥固定方法
では、乾燥溶液にタンパク質が存在する条件下で固相細
胞の乾燥固定を行えないので、特異性物質の失活は防止
するために、タンパク質を添加できない。
では、乾燥溶液にタンパク質が存在する条件下で固相細
胞の乾燥固定を行えないので、特異性物質の失活は防止
するために、タンパク質を添加できない。
【００１３】もう一つは、完成した固相細胞を使用し
て、酵素免疫測定法のような免疫学的反応を行った場合
に、通常実施されるブロッキング処理が行えないことで
ある。ブロッキング処理とは、タンパク質により本来の
特異的反応ではない反応（非特異的反応）を防止するこ
とである。この結果、文献１の固相細胞の乾燥固定方法
に従って作成した赤血球を使用した免疫反応では、ブロ
ッキング処理を行えないので、組織又は細胞上の特異反
応物質が非特異反応を起す可能性が高い。
て、酵素免疫測定法のような免疫学的反応を行った場合
に、通常実施されるブロッキング処理が行えないことで
ある。ブロッキング処理とは、タンパク質により本来の
特異的反応ではない反応（非特異的反応）を防止するこ
とである。この結果、文献１の固相細胞の乾燥固定方法
に従って作成した赤血球を使用した免疫反応では、ブロ
ッキング処理を行えないので、組織又は細胞上の特異反
応物質が非特異反応を起す可能性が高い。
【００１４】本発明は、かかる点に鑑みてなされたもの
であり、特異性物質の失活するのを防止しつつ固相細胞
を乾燥固定し得る固相細胞の乾燥固定方法を提供する。
であり、特異性物質の失活するのを防止しつつ固相細胞
を乾燥固定し得る固相細胞の乾燥固定方法を提供する。
【００１５】
【課題を解決するための手段】本発明は、組織又は細胞
を担体に固相化した後、前記組織又は前記細胞に乾燥溶
液を接触させて前記組織又は前記細胞を乾燥固定するこ
とを特徴とする固相細胞の乾燥固定方法を提供する。
を担体に固相化した後、前記組織又は前記細胞に乾燥溶
液を接触させて前記組織又は前記細胞を乾燥固定するこ
とを特徴とする固相細胞の乾燥固定方法を提供する。
【００１６】以下、本発明の固相細胞の乾燥固定方法
を、さらに詳細に説明する。
を、さらに詳細に説明する。
【００１７】本発明の固相細胞の乾燥固定方法に用いる
乾燥溶液は、糖類及びペプチドを含有するものが好まし
い。ここで糖類としては、グルコース、ラクトース等の
単糖類、サッカロース、マルトース等の二糖類、三糖
類、または、デキストラン等の多糖類を挙げることがで
きる。これらのうち、特にサッカロースが有効である。
糖類の濃度は、０．１重量％以上５０重量％以下が望ま
しい。
乾燥溶液は、糖類及びペプチドを含有するものが好まし
い。ここで糖類としては、グルコース、ラクトース等の
単糖類、サッカロース、マルトース等の二糖類、三糖
類、または、デキストラン等の多糖類を挙げることがで
きる。これらのうち、特にサッカロースが有効である。
糖類の濃度は、０．１重量％以上５０重量％以下が望ま
しい。
【００１８】また、ペプチドは、特異性物質の失活を防
止するために添加される。ペプチドとしては、例えば、
ＢＳＡ、ゼラチン、ゼラチン加水分解物のようなキャリ
アタンパクやペプチドが好ましい。
止するために添加される。ペプチドとしては、例えば、
ＢＳＡ、ゼラチン、ゼラチン加水分解物のようなキャリ
アタンパクやペプチドが好ましい。
【００１９】特に好ましい乾燥溶液は、２０重量％サッ
カロース、０．２重量％ＢＳＡを含有するものである。
カロース、０．２重量％ＢＳＡを含有するものである。
【００２０】さらに、乾燥溶液には、浸透圧を制御する
ために適宜塩類を添加してもよい。ここで用られる塩類
としては、塩化ナトリウム、リン酸塩、塩化カリウムが
好ましいが、他の塩類も使用可能である。
ために適宜塩類を添加してもよい。ここで用られる塩類
としては、塩化ナトリウム、リン酸塩、塩化カリウムが
好ましいが、他の塩類も使用可能である。
【００２１】また、本発明の固相細胞の乾燥固定方法で
は、組織又は細胞を担体に固相化する際に、レクチン又
は抗体を使用することが好ましい。レクチンとしては、
コムギ胚芽レクチン（以下、ＷＧＡと記す）、リシン
（Ｒｉｃｉｎ）（ヒママメレクチン）又はレンズマメ
（ｌｅｎｔｉｌ）レクチンを用いることができる。この
ような結合剤を使用して、細胞を例えば単層状に固相化
する。
は、組織又は細胞を担体に固相化する際に、レクチン又
は抗体を使用することが好ましい。レクチンとしては、
コムギ胚芽レクチン（以下、ＷＧＡと記す）、リシン
（Ｒｉｃｉｎ）（ヒママメレクチン）又はレンズマメ
（ｌｅｎｔｉｌ）レクチンを用いることができる。この
ような結合剤を使用して、細胞を例えば単層状に固相化
する。
【００２２】組織又は細胞を固相化する担体は、マイク
ロプレートのウェル、ガラス試験管、スライドガラス等
の支持体が好ましい。
ロプレートのウェル、ガラス試験管、スライドガラス等
の支持体が好ましい。
【００２３】本発明の固相細胞の乾燥固定方法では、組
織又は細胞を固相化すると同時に、または終了後に、上
述のような乾燥溶液を組織又は細胞に接触させて、乾燥
固定を行う。この後、組織又は細胞を軽く遠心等して水
切りを行い、約３７℃のインキュベーター等の中で風に
あてて乾燥させたり、完全に乾燥するために真空乾燥や
凍結乾燥を行ってもよい。
織又は細胞を固相化すると同時に、または終了後に、上
述のような乾燥溶液を組織又は細胞に接触させて、乾燥
固定を行う。この後、組織又は細胞を軽く遠心等して水
切りを行い、約３７℃のインキュベーター等の中で風に
あてて乾燥させたり、完全に乾燥するために真空乾燥や
凍結乾燥を行ってもよい。
【００２４】また、組織又は細胞の固相化は、組織又は
細胞を乾燥溶液に直接浮遊させて行うことも可能であ
る。この方法によれは、満足度はやや低下するものの細
胞の固相と乾燥溶液による乾燥固定処理が一度に行える
利点がある。
細胞を乾燥溶液に直接浮遊させて行うことも可能であ
る。この方法によれは、満足度はやや低下するものの細
胞の固相と乾燥溶液による乾燥固定処理が一度に行える
利点がある。
【００２５】また、特異性物質の活性を保つように、組
織又は細胞を低張液に接触させて内容物を溶出（例えば
溶血）させた後、乾燥溶液に接触させて乾燥固定するこ
ともできる。
織又は細胞を低張液に接触させて内容物を溶出（例えば
溶血）させた後、乾燥溶液に接触させて乾燥固定するこ
ともできる。
【００２６】本発明の固相細胞の乾燥固定方法は、例え
ば、赤血球、白血球、血小板等の表面等に抗原のような
特異的反応物質を担体上に固相化し、乾燥固定するのに
適用できる。
ば、赤血球、白血球、血小板等の表面等に抗原のような
特異的反応物質を担体上に固相化し、乾燥固定するのに
適用できる。
【００２７】また、本発明の固相細胞の乾燥固定方法に
従って製造された固相細胞は、特開平２−１２４４６４
号に示されているような、磁性体封入の抗体感作粒子、
酵素を用いた酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定
法（ＲＩＡ）、蛍光抗体法のような免疫反応に利用でき
る。特に、磁性体粒子を用いたアッセイ系に最適であ
る。
従って製造された固相細胞は、特開平２−１２４４６４
号に示されているような、磁性体封入の抗体感作粒子、
酵素を用いた酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定
法（ＲＩＡ）、蛍光抗体法のような免疫反応に利用でき
る。特に、磁性体粒子を用いたアッセイ系に最適であ
る。
【００２８】
【作用】本発明の固相細胞の乾燥固定方法では、組織又
は細胞をレクチン又は抗体を使用して担体に固相化して
いるので、担体と組織又は細胞の結合がタンパク質によ
り阻害され難い。これにより、固相化する組織又は細胞
の表面等からタンパク質を除去する必要がない。また、
乾燥溶液中にタンパク質を添加しても、組織又は細胞の
固相化状態に何ら影響を与えずに、乾燥固定を行うこと
ができる。この結果、組織又は細胞上の特異反応物質の
失活を防止するために乾燥溶液にタンパク質を添加でき
る。さらに、乾燥固定した組織又は細胞を使用して、免
疫反応を行う際にブロッキング処理を施して、非特異的
反応を防止できる。
は細胞をレクチン又は抗体を使用して担体に固相化して
いるので、担体と組織又は細胞の結合がタンパク質によ
り阻害され難い。これにより、固相化する組織又は細胞
の表面等からタンパク質を除去する必要がない。また、
乾燥溶液中にタンパク質を添加しても、組織又は細胞の
固相化状態に何ら影響を与えずに、乾燥固定を行うこと
ができる。この結果、組織又は細胞上の特異反応物質の
失活を防止するために乾燥溶液にタンパク質を添加でき
る。さらに、乾燥固定した組織又は細胞を使用して、免
疫反応を行う際にブロッキング処理を施して、非特異的
反応を防止できる。
【００２９】
実施例１ １−１．赤血球固相化用マイクロプレートの作成 Ｎｖｎｃ社のＵ底プレート（Ｍａｘｉｓｏｒｐ Ｔｙｐ
ｅ）に、ＷＧＡを１０μｇ／mlの濃度に０．０１Ｍリン
酸緩衝液（以下、ＰＢＳと記す）ｐＨ＝７．０に溶解し
たものを、５０μｌ／well分注した。この後、このＵ底
プレートを室温で３０分間インキュベートした後、同Ｐ
ＢＳで５回洗浄して、ＷＧＡでコーティングしたウエル
を有する赤血球固相化用マイクロプレートを得た。
ｅ）に、ＷＧＡを１０μｇ／mlの濃度に０．０１Ｍリン
酸緩衝液（以下、ＰＢＳと記す）ｐＨ＝７．０に溶解し
たものを、５０μｌ／well分注した。この後、このＵ底
プレートを室温で３０分間インキュベートした後、同Ｐ
ＢＳで５回洗浄して、ＷＧＡでコーティングしたウエル
を有する赤血球固相化用マイクロプレートを得た。
【００３０】１−２．赤血球の固相化 抗原性が既知のスクリーニング用Ｏ型赤血球サージスク
リーン１（Ｏｒｔｈｏ社製）を、ＰＢＳで約１．０重量
％になるように希釈懸濁した後、１−２で得た赤血球固
相化用マイクロプレートに２５μｌ／well分注し、１０
分間室温で静置した。この後、生理食塩水を用いて各ウ
ェル３回を洗浄して、赤血球をウエル底面に単層状に固
相化した赤血球固相化プレートを得た。
リーン１（Ｏｒｔｈｏ社製）を、ＰＢＳで約１．０重量
％になるように希釈懸濁した後、１−２で得た赤血球固
相化用マイクロプレートに２５μｌ／well分注し、１０
分間室温で静置した。この後、生理食塩水を用いて各ウ
ェル３回を洗浄して、赤血球をウエル底面に単層状に固
相化した赤血球固相化プレートを得た。
【００３１】１−３．赤血球の乾燥 １−２で得た赤血球固相化プレートに、乾燥溶液（サッ
カロース２０重量％、ＢＳＡ０．２重量％、アジ化ナト
リウム０．０５重量％含有）を１００μｌ／well分注し
た。次いで、赤血球固相化プレートを３分間放置した
後、乾燥溶液を捨てて水切りした。次に、ドライインキ
ュベーターにより、赤血球固相化プレートを、３０℃で
３０分間風乾し、更に、減圧乾燥機により減圧下で４時
間乾燥を行って、乾燥赤血球固相化プレートを得た。得
られた乾燥赤血球固相化プレートでは、赤血球は、乾燥
した状態でウエルの底面に固相化されており、ウェルは
淡茶色に見えた。このウエル底面に乾燥固定された赤血
球像を図１の顕微鏡写真に示す。図１から明らかな如
く、赤血球は、ウエル底面に形態を維持しまま、単層状
に乾燥固定されている。
カロース２０重量％、ＢＳＡ０．２重量％、アジ化ナト
リウム０．０５重量％含有）を１００μｌ／well分注し
た。次いで、赤血球固相化プレートを３分間放置した
後、乾燥溶液を捨てて水切りした。次に、ドライインキ
ュベーターにより、赤血球固相化プレートを、３０℃で
３０分間風乾し、更に、減圧乾燥機により減圧下で４時
間乾燥を行って、乾燥赤血球固相化プレートを得た。得
られた乾燥赤血球固相化プレートでは、赤血球は、乾燥
した状態でウエルの底面に固相化されており、ウェルは
淡茶色に見えた。このウエル底面に乾燥固定された赤血
球像を図１の顕微鏡写真に示す。図１から明らかな如
く、赤血球は、ウエル底面に形態を維持しまま、単層状
に乾燥固定されている。
【００３２】１−４．抗体の検出 １−３で得た乾燥赤血球固相化プレートに、ＬＩＳＳ
（低イオン等張溶液）を２５μｌ／well分注した。この
とき、乾燥固定された赤血球は、ＬＩＳＳで湿潤されて
復元されて溶血し、赤血球像は見えなくなった。この
後、抗Ｄ血清及び抗体を持たない健常者の血清を所定の
ウエルに分注した。次に、３７℃で１０分間インキュベ
ートし、各ウエルを生理食塩水で６回洗浄した。この
後、磁性体封入抗ヒトＩｇＧ感作粒子（オリンパス光学
工業（株）製）の懸濁液を、２５μｌ／well分注した。
次に、乾燥赤血球固相化プレートを磁石上に３分間載置
して、パターン形成した。対照として、同じ赤血球を固
相化したが乾燥固定していない、非乾燥赤血球固相化プ
レートを使用して同様の操作を行った。
（低イオン等張溶液）を２５μｌ／well分注した。この
とき、乾燥固定された赤血球は、ＬＩＳＳで湿潤されて
復元されて溶血し、赤血球像は見えなくなった。この
後、抗Ｄ血清及び抗体を持たない健常者の血清を所定の
ウエルに分注した。次に、３７℃で１０分間インキュベ
ートし、各ウエルを生理食塩水で６回洗浄した。この
後、磁性体封入抗ヒトＩｇＧ感作粒子（オリンパス光学
工業（株）製）の懸濁液を、２５μｌ／well分注した。
次に、乾燥赤血球固相化プレートを磁石上に３分間載置
して、パターン形成した。対照として、同じ赤血球を固
相化したが乾燥固定していない、非乾燥赤血球固相化プ
レートを使用して同様の操作を行った。
【００３３】このようにして、乾燥赤血球固相化プレー
ト及び非乾燥赤血球固相化プレートにおいて抗Ｄ血清を
用いてアッセイを行い、抗Ｄ血清の反応性を評価した。
この結果を表１に示す。
ト及び非乾燥赤血球固相化プレートにおいて抗Ｄ血清を
用いてアッセイを行い、抗Ｄ血清の反応性を評価した。
この結果を表１に示す。
【００３４】
【表１】 表１から明らかなように、乾燥赤血球固相化プレートで
は、抗Ｄ血清が非乾燥赤血球固相化プレートと略同等の
反応性で免疫反応を起した。この結果、乾燥固定による
抗原性の低下はないことが確認された。
は、抗Ｄ血清が非乾燥赤血球固相化プレートと略同等の
反応性で免疫反応を起した。この結果、乾燥固定による
抗原性の低下はないことが確認された。
【００３５】実施例２ 実施例１と同様の乾燥赤血球固相化プレートに、表２に
示すＯｒｔｈｏ社及びＢＣＡ社（コスモバイオ（株））
製の抗血清８種（ただしＬｅa は患者血清）を用いて、
実施例１と同様にアッセイを行い、赤血球抗原の有無及
び各種抗血清の反応性を評価した。この結果を表２に示
す。
示すＯｒｔｈｏ社及びＢＣＡ社（コスモバイオ（株））
製の抗血清８種（ただしＬｅa は患者血清）を用いて、
実施例１と同様にアッセイを行い、赤血球抗原の有無及
び各種抗血清の反応性を評価した。この結果を表２に示
す。
【００３６】
【表２】 表２から明らかなように、各種の赤血球の抗原が抗原性
を保持しており、特に吸着抗原というＬｅa 抗原も保持
していた。
を保持しており、特に吸着抗原というＬｅa 抗原も保持
していた。
【００３７】実施例３ ＷＧＡ以外の結合剤、すなわち、リシン、レンズマメレ
クチン、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して、乾
燥赤血球固相化プレートを作成した。リシン、レンズマ
メレクチンは、１０μｇ／mlの濃度にＰＢＳに溶解し
て、Ｎｖｎｃ社のＵ底プレートに分注した。この後、Ｕ
底プレートを、室温で３０分インキュベートした。
クチン、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して、乾
燥赤血球固相化プレートを作成した。リシン、レンズマ
メレクチンは、１０μｇ／mlの濃度にＰＢＳに溶解し
て、Ｎｖｎｃ社のＵ底プレートに分注した。この後、Ｕ
底プレートを、室温で３０分インキュベートした。
【００３８】一方、ＰＥＩ（ナカライテスク社製）を
０．０１重量％の濃度にＰＢＳで希釈したものを、同じ
くＮｖｎｃ社のＵ底プレートに、５０μｌ／well分注し
た。このＵ底プレートを、室温で３０分インキュベート
した。
０．０１重量％の濃度にＰＢＳで希釈したものを、同じ
くＮｖｎｃ社のＵ底プレートに、５０μｌ／well分注し
た。このＵ底プレートを、室温で３０分インキュベート
した。
【００３９】このようにして作成した、リシン，レンズ
マメレクチン、ＰＥＩでウエル底面をコーティングした
赤血球固相化用マイクロプレートに、実施例１と同様の
手順で抗原性が既知のスクリーニング用Ｏ型赤血球を固
相化した後、固定乾燥して乾燥赤血球固相化プレートを
作成した。作成した各種乾燥赤血球固相化プレートにお
いて、抗Ｄ血清及び陰性血清を用いてアッセイを行い、
血清の反応性を評価した。この結果を表３に示す。
マメレクチン、ＰＥＩでウエル底面をコーティングした
赤血球固相化用マイクロプレートに、実施例１と同様の
手順で抗原性が既知のスクリーニング用Ｏ型赤血球を固
相化した後、固定乾燥して乾燥赤血球固相化プレートを
作成した。作成した各種乾燥赤血球固相化プレートにお
いて、抗Ｄ血清及び陰性血清を用いてアッセイを行い、
血清の反応性を評価した。この結果を表３に示す。
【００４０】
【表３】 表３から明らかなように、陰性のパターンにやや差があ
るものの、ＷＧＡ以外の結合剤も十分に使用可能である
ことが確認された。
るものの、ＷＧＡ以外の結合剤も十分に使用可能である
ことが確認された。
【００４１】実施例４ 固相化した赤血球を乾燥溶液で乾燥固定した後に凍結乾
燥した場合について説明する。
燥した場合について説明する。
【００４２】実施例１の１−２で得た赤血球固相化用マ
イクロプレートに、赤血球サージスクリーン（Ｏｒｔｈ
ｏ社製）を固相化した後、乾燥溶液（サッカロース２０
重量％、ＢＳＡ０．２重量％、アジ化ナトリウム０．０
５重量％含有）を１００μｌ／well分注した。次に、こ
の赤血球固相化プレートを３分間放置した後、乾燥溶液
を捨てて水切りした。この後、予め−４０℃に冷却して
おいた凍結乾燥機［ラブコンコ（Labconco）社製;Stopp
ering Tray Dryer］に移して、−４０℃まで凍結処理し
た後、−２０℃で一昼夜（約２０時間）減圧して、凍結
乾燥を行った。
イクロプレートに、赤血球サージスクリーン（Ｏｒｔｈ
ｏ社製）を固相化した後、乾燥溶液（サッカロース２０
重量％、ＢＳＡ０．２重量％、アジ化ナトリウム０．０
５重量％含有）を１００μｌ／well分注した。次に、こ
の赤血球固相化プレートを３分間放置した後、乾燥溶液
を捨てて水切りした。この後、予め−４０℃に冷却して
おいた凍結乾燥機［ラブコンコ（Labconco）社製;Stopp
ering Tray Dryer］に移して、−４０℃まで凍結処理し
た後、−２０℃で一昼夜（約２０時間）減圧して、凍結
乾燥を行った。
【００４３】このようにして作成した乾燥赤血球固相化
プレートにおいて、抗Ｄ血清又は陰性血清を用いてアッ
セイを行ったところ、実施例１と同様に、陽性、陰性の
区別ができた。
プレートにおいて、抗Ｄ血清又は陰性血清を用いてアッ
セイを行ったところ、実施例１と同様に、陽性、陰性の
区別ができた。
【００４４】実施例５ 赤血球の形態を残さずに、その内容物を溶出させた赤血
球（赤血球ゴースト）を乾燥固定した場合について説明
する。
球（赤血球ゴースト）を乾燥固定した場合について説明
する。
【００４５】まず、実施例１の１−２で得た赤血球固相
化用マイクロプレートの各ウエルの底面に、実施例１と
同様にして赤血球を固相化した。次に、各ウエルに、蒸
留水を１００μｌ／well分注した後、１分間放置して赤
血球を溶血させた。この後、蒸留水を捨てて、表４に示
す乾燥溶液ａ〜ｆを異なるウエルに注ぎ入れ、３分間放
置した後、乾燥溶液を捨てて水切りした。次いで、実施
例１と同様に、赤血球を乾燥固定して、ウエルの底面に
赤血球ゴーストが固相化された乾燥赤血球固相化プレー
トを得た。
化用マイクロプレートの各ウエルの底面に、実施例１と
同様にして赤血球を固相化した。次に、各ウエルに、蒸
留水を１００μｌ／well分注した後、１分間放置して赤
血球を溶血させた。この後、蒸留水を捨てて、表４に示
す乾燥溶液ａ〜ｆを異なるウエルに注ぎ入れ、３分間放
置した後、乾燥溶液を捨てて水切りした。次いで、実施
例１と同様に、赤血球を乾燥固定して、ウエルの底面に
赤血球ゴーストが固相化された乾燥赤血球固相化プレー
トを得た。
【００４６】得られた乾燥赤血球固相化プレートを用い
て、実施例１と同様に、抗Ｄ血清又は陰性血清でアッセ
イを行い、その反応性を評価した。この結果を表４に示
す。
て、実施例１と同様に、抗Ｄ血清又は陰性血清でアッセ
イを行い、その反応性を評価した。この結果を表４に示
す。
【００４７】
【表４】 表４から明らかなように、溶血した赤血球を乾燥固定す
るには、等張以下の乾燥溶液（ｃ〜ｆ）が有効であるこ
とがわかった。
るには、等張以下の乾燥溶液（ｃ〜ｆ）が有効であるこ
とがわかった。
【００４８】また、溶血させた赤血球をウエルの底面に
乾燥固定したときの赤血球像を図２の顕微鏡写真に示
す。図２から明らかなように、溶血した赤血球は、図１
に示す赤血球像とは異なり、その形態が崩れて、いわゆ
るゴースト状態で固相化され、そのまま乾燥固定された
ことがわかる。
乾燥固定したときの赤血球像を図２の顕微鏡写真に示
す。図２から明らかなように、溶血した赤血球は、図１
に示す赤血球像とは異なり、その形態が崩れて、いわゆ
るゴースト状態で固相化され、そのまま乾燥固定された
ことがわかる。
【００４９】実施例６ サッカロースの濃度を、表５に示すように変更した乾燥
溶液I 〜VIIと、ＢＳＡを添加しなかった乾燥溶液VII
I，IXと、サッカロースに代えて、ラクトース、グルコ
ースを用いた乾燥溶液Ｘ，XIを用いた以外は、実施例１
と同様の手順に従って、乾燥赤血球固相化プレートを作
成し、各乾燥赤血球固相化プレートにおいて、抗Ｄ血清
又は陰性血清を用いてアッセイを行い、その反応性を評
価した。その結果を表５に示す。
溶液I 〜VIIと、ＢＳＡを添加しなかった乾燥溶液VII
I，IXと、サッカロースに代えて、ラクトース、グルコ
ースを用いた乾燥溶液Ｘ，XIを用いた以外は、実施例１
と同様の手順に従って、乾燥赤血球固相化プレートを作
成し、各乾燥赤血球固相化プレートにおいて、抗Ｄ血清
又は陰性血清を用いてアッセイを行い、その反応性を評
価した。その結果を表５に示す。
【００５０】
【表５】 表５から明らかなように、赤血球を溶血せずに固相化し
た後、乾燥固定する場合には、溶血を防ぐために等張以
上になるような濃度でサッカロース、ラクトース又はグ
ルコースを含有し、かつ、ＢＳＡを添加した乾燥溶液
（I 〜IV, Ｘ,XI）が好ましいことが確認された。
た後、乾燥固定する場合には、溶血を防ぐために等張以
上になるような濃度でサッカロース、ラクトース又はグ
ルコースを含有し、かつ、ＢＳＡを添加した乾燥溶液
（I 〜IV, Ｘ,XI）が好ましいことが確認された。
【００５１】実施例７ 赤血球を乾燥溶液中に懸濁して固相化を行った場合につ
いて説明する。まず、乾燥溶液［０．０５Ｍ ＰＢ、塩
化ナトリウム０．４５重量％、サッカロース２．５重量
％、ＢＳＡ０．２重量％含有］に、Ｏｒｔｈｏ社の赤血
球、サージスクリーンＣｅｌｌ（Ｒｈ+ ）を濃度が約
０．７重量％になるように希釈懸濁した。この赤血球の
懸濁液を、実施例１の１−２に従って作成した赤血球固
相化用プレートに、２５μｌ／well分注し、室温で１０
分間静置した。この後、結合しなかった赤血球を含む乾
燥溶液を捨てて水切りした。次に、実施例１と同様の手
順に従って、固相化した赤血球を乾燥固定して、乾燥赤
血球固相化用プレートを得た。得られた乾燥赤血球固相
化用プレートにおいて、抗Ｄ血清及び陰性血清を用いて
アッセイを行った結合、実施例１と同様に、陽性、陰性
を区別できた。
いて説明する。まず、乾燥溶液［０．０５Ｍ ＰＢ、塩
化ナトリウム０．４５重量％、サッカロース２．５重量
％、ＢＳＡ０．２重量％含有］に、Ｏｒｔｈｏ社の赤血
球、サージスクリーンＣｅｌｌ（Ｒｈ+ ）を濃度が約
０．７重量％になるように希釈懸濁した。この赤血球の
懸濁液を、実施例１の１−２に従って作成した赤血球固
相化用プレートに、２５μｌ／well分注し、室温で１０
分間静置した。この後、結合しなかった赤血球を含む乾
燥溶液を捨てて水切りした。次に、実施例１と同様の手
順に従って、固相化した赤血球を乾燥固定して、乾燥赤
血球固相化用プレートを得た。得られた乾燥赤血球固相
化用プレートにおいて、抗Ｄ血清及び陰性血清を用いて
アッセイを行った結合、実施例１と同様に、陽性、陰性
を区別できた。
【００５２】実施例８ 血小板の乾燥固定方法 血小板ＰＬＡ1 が陽性の被験者より採血しＡＣＤを添加
した血漿を、１０分間遠心して血小板豊富血漿(Platele
t Rich Plasma ：ＰＲＰ) を得た。得られたＰＲＰの１
０重量％にあたる量のＡＣＤ液を加えて１１００Ｇで１
５分間遠心して、血小板濃縮物（Platelet Concentrat
e: ＰＣ）を得た。得られたＰＣを生理食塩水で２回洗
浄した。洗浄後、約１０万個／μｌの血小板濃度になる
ように調整した血小板溶液を、実施例１の１−２で作成
した赤血球固相化用マイクロプレートと同様のＷＧＡを
ウエル底部にコーティングしてなるマイクロプレート
に、２５μｌ／well分注した。このマイクロプレート
を、プレート遠心機により、６５０Ｇで５分間遠心し
て、ウエル底部に血小板を固相化した。
した血漿を、１０分間遠心して血小板豊富血漿(Platele
t Rich Plasma ：ＰＲＰ) を得た。得られたＰＲＰの１
０重量％にあたる量のＡＣＤ液を加えて１１００Ｇで１
５分間遠心して、血小板濃縮物（Platelet Concentrat
e: ＰＣ）を得た。得られたＰＣを生理食塩水で２回洗
浄した。洗浄後、約１０万個／μｌの血小板濃度になる
ように調整した血小板溶液を、実施例１の１−２で作成
した赤血球固相化用マイクロプレートと同様のＷＧＡを
ウエル底部にコーティングしてなるマイクロプレート
に、２５μｌ／well分注した。このマイクロプレート
を、プレート遠心機により、６５０Ｇで５分間遠心し
て、ウエル底部に血小板を固相化した。
【００５３】この後、クロロキン溶液を５０μｌ／well
分注し、室温で３０分間静置した。次に、クロロキン溶
液を除き、水切りした後、生理食塩水で３回洗浄した。
分注し、室温で３０分間静置した。次に、クロロキン溶
液を除き、水切りした後、生理食塩水で３回洗浄した。
【００５４】次いで、各ウエルに、乾燥溶液（サッカロ
ース２０重量％、ＢＳＡ０．２重量％を含有する水溶
液）を、１００μｌ／well分注し、３分間静置した。こ
の後、乾燥溶液を除き、水切りして、実施例１と同様の
手順に従って、固相化した血小板を乾燥して、乾燥固定
血小板プレートを得た。
ース２０重量％、ＢＳＡ０．２重量％を含有する水溶
液）を、１００μｌ／well分注し、３分間静置した。こ
の後、乾燥溶液を除き、水切りして、実施例１と同様の
手順に従って、固相化した血小板を乾燥して、乾燥固定
血小板プレートを得た。
【００５５】得られた乾燥固定血小板プレートにおい
て、ａｎｔｉ−ＰＬＴ−オリビオ−ＭＰＨＡ［商品名：
オリンパス光学工業（株）製］のＰＬＡ1 陽性コントロ
ールと、ＰＬＡ1 陰性コントロールを用いてアッセイを
行った。この結果、陽性、陰性を明瞭に区別することが
できた。
て、ａｎｔｉ−ＰＬＴ−オリビオ−ＭＰＨＡ［商品名：
オリンパス光学工業（株）製］のＰＬＡ1 陽性コントロ
ールと、ＰＬＡ1 陰性コントロールを用いてアッセイを
行った。この結果、陽性、陰性を明瞭に区別することが
できた。
【００５６】
【発明の効果】本発明の固相細胞の乾燥固定方法によれ
ば、レクチン又は抗体を用いて組織又は細胞を固相化す
る。これにより、組織又は細胞から溶出したタンパク質
等の存在に影響されずに組織又は細胞を固相化できる。
また、固相化した組織又は細胞を、タンパク質を含む乾
燥溶液に接触させて乾燥固定する。これにより、乾燥固
定処理において、組織又は細胞上の特異反応物質が失活
するのを略完全に防止できる。また、この固相細胞を免
疫反応に利用する際にブロッキング処理を施して非特異
反応を低減することができる。さらに、組織又は細胞を
乾燥固定したので、固相化した組織又は細胞の保存性を
著しく向上できる。この結果、免疫反応を利用した検査
時間を大幅に短縮できると共に、固相化した組織又は細
胞の試薬としての有効期間を著しく延長できる等顕著な
効果を奏する。特に、本発明の効果は、従来十数種類の
生の赤血球を使用し、多くの工程及び時間、試薬を必要
としていた抗体同定において顕著である。さらに、各々
のウェルに夫々抗原性の異なるパネル血球を乾燥固定し
ておくことで、より迅速でかつ低コストな抗体同定が可
能である。
ば、レクチン又は抗体を用いて組織又は細胞を固相化す
る。これにより、組織又は細胞から溶出したタンパク質
等の存在に影響されずに組織又は細胞を固相化できる。
また、固相化した組織又は細胞を、タンパク質を含む乾
燥溶液に接触させて乾燥固定する。これにより、乾燥固
定処理において、組織又は細胞上の特異反応物質が失活
するのを略完全に防止できる。また、この固相細胞を免
疫反応に利用する際にブロッキング処理を施して非特異
反応を低減することができる。さらに、組織又は細胞を
乾燥固定したので、固相化した組織又は細胞の保存性を
著しく向上できる。この結果、免疫反応を利用した検査
時間を大幅に短縮できると共に、固相化した組織又は細
胞の試薬としての有効期間を著しく延長できる等顕著な
効果を奏する。特に、本発明の効果は、従来十数種類の
生の赤血球を使用し、多くの工程及び時間、試薬を必要
としていた抗体同定において顕著である。さらに、各々
のウェルに夫々抗原性の異なるパネル血球を乾燥固定し
ておくことで、より迅速でかつ低コストな抗体同定が可
能である。
【図１】本発明の固相細胞の乾燥固定方法に従って乾燥
固定された赤血球像である生物の形態を示す写真。
固定された赤血球像である生物の形態を示す写真。
【図２】本発明の固相細胞の乾燥固定方法に従って溶血
した後乾燥固定された赤血球像である生物の形態を示す
写真。
した後乾燥固定された赤血球像である生物の形態を示す
写真。
Claims (10)
- 【請求項１】 組織又は細胞を担体に固相化した後、前
記組織又は前記細胞に乾燥溶液を接触させて前記組織又
は前記細胞を乾燥固定することを特徴とする固相細胞の
乾燥固定方法。 - 【請求項２】 担体に固相化した組織又は細胞に低張液
を接触させて、前記組織又は前記細胞の内容物を溶出さ
せた後、前記組織又は前記細胞を乾燥固定すること特徴
とする請求項１記載の固相細胞の乾燥固定方法。 - 【請求項３】 乾燥溶液が、糖類及びペプチドを含むこ
と特徴とする請求項１記載の固相細胞の乾燥固定方法。 - 【請求項４】 乾燥溶液が、サッカロース２０重量％及
びウシ血清アルブミン０．２重量％を含有することを特
徴とする請求項３記載の固相細胞の乾燥固定方法。 - 【請求項５】 乾燥溶液が塩を含むことを特徴とする請
求項１記載の固相細胞の乾燥固定方法。 - 【請求項６】 塩が、塩化ナトリウム、リン酸塩又は塩
化カリウムである請求項５記載の固相細胞の乾燥固定方
法。 - 【請求項７】 乾燥溶液を接触させて組織又は細胞を乾
燥固定した後、真空乾燥、自然乾燥又は凍結乾燥を行う
ことを特徴とする請求項１記載の固相細胞の乾燥固定方
法。 - 【請求項８】 担体が支持体であることを特徴とする請
求項１記載の固相細胞の乾燥固定方法。 - 【請求項９】 組織又は細胞を担体に固相化する際に使
用する結合剤が、レクチン又は抗体であることを特徴と
する請求項１記載の固相細胞の乾燥固定方法。 - 【請求項１０】 レクチンがコムギ胚芽レクチン、リシ
ン又はレンズマメレクチンであることを特徴とする請求
項９記載の固相細胞の乾燥固定方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32674991A JPH05142122A (ja) | 1991-11-15 | 1991-11-15 | 固相細胞の乾燥固定方法 |
| EP92119465A EP0542301A1 (en) | 1991-11-15 | 1992-11-13 | A method of fixing coated biological substances by drying them |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32674991A JPH05142122A (ja) | 1991-11-15 | 1991-11-15 | 固相細胞の乾燥固定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05142122A true JPH05142122A (ja) | 1993-06-08 |
Family
ID=18191256
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32674991A Withdrawn JPH05142122A (ja) | 1991-11-15 | 1991-11-15 | 固相細胞の乾燥固定方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0542301A1 (ja) |
| JP (1) | JPH05142122A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000321269A (ja) * | 1999-05-11 | 2000-11-24 | Olympus Optical Co Ltd | 乾燥固相化方法 |
| US8187805B2 (en) | 2004-02-09 | 2012-05-29 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | Method of detecting nucleic acid and utilization thereof |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103543258B (zh) * | 2012-07-12 | 2015-09-02 | 艾博生物医药(杭州)有限公司 | 一种自动化快速烘干样品接收垫的方法 |
| CN110308288B (zh) * | 2019-04-16 | 2022-12-13 | 广州血液中心 | 一种新型血小板交叉配型试剂盒 |
| RU2754633C1 (ru) * | 2020-12-30 | 2021-09-06 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ставропольский государственный аграрный университет" | Способ иммунологического мониторинга животных |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE68919565T2 (de) * | 1988-07-20 | 1995-06-29 | Olympus Optical Co | Immuntestverfahren unter Verwendung magnetischer Markerteilchen. |
| US5059518A (en) * | 1988-10-20 | 1991-10-22 | Coulter Corporation | Stabilized lyophilized mammalian cells and method of making same |
| US5030560A (en) * | 1988-11-04 | 1991-07-09 | Immucor, Inc. | Method for drying mammalian cells for use in solid phase immunoassays and articles incorporating same |
| IE76319B1 (en) * | 1990-07-23 | 1997-10-22 | Becton Dickinson Co | Preservation of cells as controls or standards in cellular analysis |
-
1991
- 1991-11-15 JP JP32674991A patent/JPH05142122A/ja not_active Withdrawn
-
1992
- 1992-11-13 EP EP92119465A patent/EP0542301A1/en not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000321269A (ja) * | 1999-05-11 | 2000-11-24 | Olympus Optical Co Ltd | 乾燥固相化方法 |
| US8187805B2 (en) | 2004-02-09 | 2012-05-29 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | Method of detecting nucleic acid and utilization thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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