JPH02122260A - 分取用液体クロマトグラフ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （イ）産業上の＋ｌＩ用分野 この発明は分取用液体クロマトグラフに関する。

さらに詳しくは試料中の目的成分を逆相液体クロマトグ
ラフィを利用して分離分取てきる液体クロマトグラフに
関する。

（ロ）従来の技術 従来、目的成分を、分離用カラムを用いて緩衝液からな
る溶離液によって分取する液体クロマトグラフィにおい
て、汎用の逆相クロマトグラフィ用カラムからなる分離
用カラムから流出した目的成分を含む溶出液を、この分
離用カラムより保持力の大きな固定相からなるトラップ
用カラムに直接導入して目的成分を保持し、次に何機溶
剤を用いて面記トラップ用カラムに保持した目的成分を
溶出し、有機溶剤を蒸発乾燥して目的成分を分取する方
法か知られている（特開昭６２−１３８７５３号公報）
。

（ハ）発明か解決しようとする課題 しかしなから、上記従来の方法においては、前述のごと
くトラップ用カラムとして汎用の逆相クロマトグラフ用
カラムより保持力の大きな特殊なしのを用いる必要かあ
る。このようなカラムは固定相の作製コストか高いため
高価となるしのであり、かつ汎用性かないため入手自体
に困難を伴なう乙のであった。さらに加え、トラップさ
れる目的成分の種類が上記トラップカラムの保持力によ
って制限されるため、分取成分についての汎用性らなく
、場合によっては目的成分毎に保持力の異なるトラップ
用カラムを取り換える必要もあっｆこ。

この発明は、かかる状況下なされたちのであり、ことに
分離用カラムとトラップ用カラム共に汎用の逆用クロマ
トグラフィ用カラムを用いて低コストに構成でき、かつ
トラップ用カラムの保持力に規制されることなく、種々
の目的成分を分離分取でき、しかも分離分取を高純度に
行える液体クロマトグラフを提供しようとするものであ
る。

（ニ）課題を解決するための手段 かくしてこの発明によれば、逆相液体クロマ）・グラフ
ィ用カラムで構成される分離用カラム及びトラップ用カ
ラムと、この分離用カラムに試料導入部を介して緩衝液
を供給しうる溶離液供給手段と、この分離用カラムから
の溶出液を上記トラップ用カラムへ選択して供給しうる
分取用流路を備え、この分取用流路に、（ａ）トラップ
用カラムへの溶出液供給時に該溶出液に極性の大きな溶
媒を混合して該トラップ用カラム内に目的成分をトラッ
プしうる第１溶媒供給手段（ｂ）目的成分がトラップさ
れたトラップ用カラムに極性の大きな溶媒を流通して夾
雑塩成分をカラム外へ排出しうる第２溶媒供給手段及び
（Ｃ）夾雑塩成分が排出されたトラップ用カラムに極性
の小さな溶媒を導入して目的成分を溶出しうる第３溶媒
供給手段を接続してなる分取用液体クロマトグラフが提
供されろ。

この発明においては、逆相液体クロマトクラフィ用カラ
ムで構成される分離用カラムか用いられる。

このカラムとしては例えばＯＤＳカラム等の汎用の逆相
液体クロマトクラフィ用カラムを用いることかできる。

この発明におけるトラップ用カラムとしては、前記分離
用カラムと同様の逆用液体クロマトクラフィ用カラムか
用いられる。なお、トラップ用カラムは分取を目的とす
る成分の数に対応した数几は設置するのが適しており、
この数か複数の場合は例えば流路切換バルブにより分取
用流路に切換接続しうるよう構成するのか適している。

この発明における溶離液供給手段としては、例えばポン
プによって送液する手段が挙げられる。

ここで溶離液としては緩衝液が用いられ、この緩衝液と
しては、例えば、リン酸塩バッファ、ホウ酸塩バッファ
、トリスバッファあるいは、これに溶出促進用の親水性
有機溶媒（アセトニトリル、メタノール等）を混合した
ちの等の通常の逆相り〔ツマ）・グラフィ用緩衝液か目
的に応して選択して用いられる。

この発明において（」、前記分離用カラムからの溶出液
を上記トラップ用カラムへ選択して供給しうる分取用流
路か備えられる。この分取用流路には、例えば検出器が
付設されていてらよい。ことに検出器の出力により目的
成分のフラクションを選択して上記トラップ用カラムに
供給できるよう構成するのか適している。この際、目的
成分以外の溶出液はトレインやフラクションコレクタへ
排出されるよう構成するのか一つの好ましい態様である
。

この発明においては、前記分取用流路に、まず、トラッ
プ用カラムへの溶出液供給時に該溶出液に極性の大きな
溶媒を混合して該トラップ用カラム内に目的成分をトラ
ップしうる第１溶媒供給手段が付設される。ここで極性
の大きな溶媒とは、溶離液として用いる緩衝液の極性よ
りも大きな溶媒を意味し、前記緩衝液を目的成分出力の
弱い移動相に転換するものである。この溶媒は目的成分
及び緩衝液の種類によって選択することかでき、目的成
分が前記分離用カラムで分離できず２種以上混合してい
る場合にも後のトラップ用カラムで分離できるよう選択
することができる。

かかる溶媒の具体例としては、水や水／有機溶媒混合溶
媒か挙げられ、この有機溶媒としては、例えばアセトニ
トリル、メタノール等の親水性有機溶媒か挙げられる。

ただし、水／有機溶媒混合溶媒は、溶離液として有機溶
媒含有緩衝液を用いた場合に用いられ、その有機溶媒含
有量は緩衝液中の量よりも少量とされろ。なお、かかる
溶媒の溶出液への混合量はとくに限定されないか、通常
、溶出液に対して０３〜１．０倍量とするのが適してい
る。この溶媒の混合は、分取用流路に分岐状に溶媒供給
流路を付設することにより簡便に行うことができる。

また、前記分収用流路には目的成分がトラップされたト
ラップ用カラムに極性の大きな溶媒を流通して夾雑塩成
分（ことに溶媒の用いた緩衝液中の塩成分由来の吸着塩
成分）をカラム外へ排出しうる第２溶媒供給手段か付設
される。

この極性の大きな溶媒は、第１溶媒供給手段に用いられ
る溶媒と同様なものを用いることがてきる。ただし塩成
分をより短時間で排出できる点で有機溶媒を含まないか
その含有量のより少ない水をポンプによって送液して用
いるのが好ましい。

さらに前記分取用流路には、夾雑塩成分か排出されたト
ラップ用カラムに極性の小さな溶媒を導入して目的成分
を溶出しうる第３溶媒供給手段か付設される。この極性
の小さな溶媒としては、面記した溶雑用緩衝液と同程度
またはそれ以下の極性の溶媒を用いるのが適しており、
現水性有機溶媒や含水親水性有機溶媒を用いることがで
きる。

最適の溶媒は、目的成分によって異なるが、蒸発しやす
い有機溶媒が分取後のａ縮や乾燥の簡便さの点で好まし
く、例えばアセトニトリル、メタノール等を用いるのが
好ましい。かかる溶媒もポンプによって送液して供給す
ることができる。

前記トラップ用カラムから溶出された溶出液は、例えば
フラクンヨンコレクタで採取されたのち蕉発乾燥され、
それにより目的成分を単離することがてきる。

（ホ）作用 分離用カラムから溶出される目的成分の画分は、第１溶
媒供給手段からの溶媒と混合されてトラップ用カラムに
導入されろ。ここで移動相は分離時に比して極性か大き
くなっているため目的成分の逆相用カラムへの保持力が
」１昇して、この目的成分がトラップ用カラム内にトラ
ップされａ縮されろ。この際、分離に用いた緩衝液から
の各種塩成分らトラップさシするか、第２溶媒供給手段
から溶媒をトラップ用カラムに流通することにより、目
的成分をトラップした状部でこれら塩成分か該カラムか
ら排出され、洗浄が行われる。次いで第３溶媒供給手段
から溶媒を供給することにより、目的成分の保持力か低
下して該目的成分かトラップ用カラムから排出され、夾
雑塩成分を含まない高純度な分取を行うことか可能とな
る。

（へ）実施例 第１図及び第２図はこの発明の分取用液体クロマトグラ
フの一実施例を示す構成説明図である。

図に示すごとく分収用液体クロマトグラフは各々逆相液
体クロマトグラフィ用カラムからなる分離用カラム４及
びトラップ用カラム１５を存している。分離用カラム４
には溶離液供給容器ｌ、送液ポンプ２及び試料導入部３
をこの順に接続しｎｍ離液供給路が接続されており、こ
の分離用カラム４は高圧六方バルブ５、ＵＶ検出器６、
三方バルブ８を介設してなる分収用流路へによりトラッ
プ用カラム１５へ接続されてなる。また、トラップ用カ
ラムＩ５の後段には、切換により上記六方バルブ５、Ｕ
Ｖ検出器６及び三方バルブ８を介してフラクノヨンコレ
クタ１６へ接続構成できる排出流路Ｂか付設されている
。

そして、上記分取用流路Ａの途中には、この発明の第１
〜３溶媒供給手段としての溶媒供給路ＣかＴ字管９を介
して分岐接続されてなる。ここで溶媒供給路Ｃは、第１
溶媒供給容器ＩＯ５第２溶媒供給容器１１及び第３溶媒
供給容器１２を備え、これらのいずれかの容器を選択す
る流路切換バルブ１３と送液ポンプＩ４で構成されてい
る。そしてここで第１溶媒としては、水、第２溶媒とし
ては有機溶媒含有の水、第３溶媒としては有機溶媒又は
水含有有機溶媒を用いている。なお、図中７はデータ処
理器を示す乙のである。

上記分取用液体クロマトグラフを用いて分取操作を行っ
た例について以下説明する。なお、分離用カラム４及び
トラップ用カラムＩ５としては、各々ｓｈｉｍ　ｐａｃ
ｋ　ＰＲＥＰ−ＯＤＳカラム（粒径１５μｍの固定相充
填；内径２０ＩＩＩｍ、長さ２５０ｍｗ、（ｐＪ）島津
製作所製）を用いた。また、溶離用の緩衝液としては、
ｌ０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液／アセトニトリル（４
／Ｉ）のｐＨ２，６の緩衝液を用い、第１溶媒としては
水を用い、第２溶媒としては水／アセトニトリル（９／
Ｉ）混合溶媒を用い、第３溶媒としては水／アセトニト
リル（１／９）混合溶媒を用いた。また、ポンプ２．Ｉ
４の流量は１０１／分とし、カラム温度は室温とし、Ｕ
Ｖ検出は２８０ｎｍで行った。

まず、第１図の六方バルブ５を実線位置、三方バルブ６
を破線位置に設定した状態で、ポンプ２を駆動して緩衝
液を分離用カラム４へ供給した。

この状態で試料導入部３より試料としてカフエイン抽出
液を注入した。これによりカフェイン抽出液は分離用カ
ラム４内に導入され、そこで各成分か保持性の差に基つ
いて分離され、順次検出器６の方向へ移送される。カフ
ェイン画分が検出されると制御部（図示什ず）は三方バ
ルブ８を実線側へ切換えてトラップ用カラム１５へ溶出
液を移送すると共に、流路切換バルブ１３を第１溶媒１
ノ（給容器１０側に切換えかつポンプ１４を駆動して第
１溶媒を上記トランプ用カラムＩ５へ供給する。

これにより第１溶媒と溶出液との混合液かＴ字管９を介
してトランプ用カラムに導入される。この際、第１溶媒
の混合によりカフェイン画分の移動相の極性か上昇して
いるためカフェインのトラップ用カラムへの保持か著し
く強くなりその結果、カフェインかトラップ用カラム１
５内に吸着、濃縮される。

この後、制御部はポンプ３を停止さＵ、切換バルブ１３
を第２溶媒供給容器１１側に切換えて、第２溶媒のみを
トラップ用カラムＩ５へ流通さ什る。これによりトラッ
プ用カラムＩ５内の夾雑塩成分（ことにリン酸塩成分）
がカラム外に排出されるか、カフェインはこれら夾雑塩
成分に比して保持力がより強いので保持されたままの状
態となり、結果的にカフェインの脱塩洗浄が行われるこ
ととなる。

この後、制御部は切換バルブ１３を第３溶媒供給容器１
２側に切換えると共に、六方バルブ５及び三方バルブ８
を第２図に示す位置に切換える。

これにより第３溶媒かトラップ用カラム１５に導入され
、バルブ５．８を介してフラクノヨンコレクタ１６へ移
送される。ここで第３溶媒は極性の小さな溶媒からなる
ため、トラップ用カラム１５内に保持されたカフェイン
の保持性か急激に低下して該カラムから溶出される。こ
の溶出画分は、検出器６てモニターされ、フラクンヨン
コレクタ１６の所定の容器内に分取されることとなる。

そして、分取液の溶媒を蒸発させることにより、カフェ
インが脱塩状態で高純度に分取精製されることか確認さ
れた。

なお、上記操作の終了後、第１溶媒又は第２溶媒をトラ
ップ用カラムＩ５に送液しておくことにより、次の分取
操作に備えることかできる。

なお、上記実施例では、トラップ用カラムを１つ用いた
例を示したか、複数のトラップ用カラムを並列して構成
することらできる。この並列構成した例を第３図に示し
た。図中、１５ａ〜１５ｃは各々トラップ用カラムを示
す乙のであり、１７ａ、１７ｂは各々これらのトラップ
用カラムを選択切換する切換バルブである。

（ｌ・）発明の効果 この発明の分取液体クロマトグラフによれば、分離用カ
ラムとトラップ用カラム共に汎用の逆用クロマトグラフ
ィ用カラムを適用して目的成分の分離分取を高純度に行
うことかできる。従って、低コストに装置構成すること
ができる。しから、各第１〜３溶媒を選択することによ
り、トラップ用カラムの保持力や極性に規制されること
なく、種々の目的成分を脱塩して分離分取することがで
きる。従って、分離用カラＪえて分離できなかった重な
る成分についてもトラップ用カラムで分別することら可
能であり、複合モード分離ノステムにそのまま応用する
ことができる。

さらに、第３溶媒として蒸発し易い非含水有機溶媒を適
用オろことらできるため、分取液の乾燥に必要な時間や
コストを低減化することもてきる。

従って、この発明の分取用液体クロマトクラフは食品、
化学、製薬、生化学等の分野における成分の分離や精製
用装置として極めて何州なものである。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図は、この発明の一実施例の分取用液体
クロマトグラフの構成説明図、第３図は同しく他の実施
例の要部を示す構成説明図である。 溶離液供給容器、 ４・・・送液ポンプ、３ 分離用カラム、５ ・ＵＶ検出器、　　７・ 三方バルブ、　　９ 第１溶媒供給容器、 試料導入部、 高圧六方バルブ、 データ処理器、 Ｔ字管、 １１　・ １２・ ・・第２溶媒供給容器、 ・・第３溶媒供給容器、 １７ａ、＋７ｂ　　・・・流路切換バルブ、１５ａ、１
５ｂ　　１５ｃ ・・・・ｌ・ラップ用カラム、 フラクノヨンコレクタ。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、逆相液体クロマトグラフィ用カラムで構成される分
   離用カラム及びトラップ用カラムと、この分離用カラム
   に試料導入部を介して緩衝液を供給しうる溶離液供給手
   段と、この分離用カラムからの溶出液を上記トラップ用
   カラムへ選択して供給しうる分取用流路を備え、 この分取用流路に、（ａ）トラップ用カラムへの溶出液
   供給時に該溶出液に極性の大きな溶媒を混合して該トラ
   ップ用カラム内に目的成分をトラップしうる第１溶媒供
   給手段（ｂ）目的成分がトラップされたトラップ用カラ
   ムに極性の大きな溶媒を流通して夾雑塩成分をカラム外
   へ排出しうる第２溶媒供給手段及び（ｃ）夾雑塩成分が
   排出されたトラップ用カラムに極性の小さな溶媒を導入
   して目的成分を溶出しうる第３溶媒供給手段を接続して
   なる分取用液体クロマトグラフ。 ２、トラップ用カラムが複数配設され、分取用流路がこ
   のいずれかのトラップ用カラムに切換接続しうるように
   構成されてなる請求項１の分取用液体クロマトグラフ。