JPH02108631A - トランスグルタミナーゼを含有する免疫抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、免疫抑制剤の製造方法におけるトランスグル
タミナーゼの使用に関する。

マクロファージと多形核中性好性白血球（ＰＭＮ）は主
として生体の免疫応答に関与する。これらは、ひとつに
はプロテアーゼ、他方では強力な酸化剤（Ｎ−クロラミ
ンおよび酸素ラジカル）からなる攻撃系を有する。これ
らは、このプロテアーゼと酸化剤を介して免疫応答に影
響し、それを増強する。

免疫応答の語は、炎症促進物質、感染、組織トランスホ
ーメーションおよび組織修復に対する免疫担当細胞たと
えば単球／マクロファージ系の反応を意味する。単球は
血液から、特に特異的免疫学的課題を担当する広範囲の
組織に移動するので、単球／マクロファージ系は全生体
において広範囲の様々な課題を遂行する。たとえば、単
球は、肺では肺胞マクロファージに、肝臓ではクツバー
細胞に、骨では破骨細胞に、中枢神経系（ＣＮＳ）では
小腰細胞に、腎臓では糸゛球体間質マクロファージに、
滑膜内では表面細胞に、そして体腔内では胸腔マクロフ
ァージまたは腹腔マクロファージに分化する。

これらのマクロファージおよびＰＭＨのインヒビターは
、多くのヒト疾患がマクロファージ活性の増大に関連す
ることから、臨床的にきわめて興味がある。

免疫系の１または２以上の区画の機能の抑制が望ましい
場合がある。このような可能性が考えられる場合として
は、免疫系が正常程度を越えた反応を示す場合（ヒベル
エルギー状Ｍ）または生体自体の組織に対して免疫系が
反応する場合がある。

マクロファージの生物学的活動を阻害できる物質は免疫
抑制剤として作用できる。ａ）副作用がほとんどなく、
ｂ）高度に特異的な、免疫抑制剤に対しては大きな需要
がある。臨床的に広く用いられているコルチコイド誘導
体は、ａ）もｂ）も満足していない。

酸素ラジカルの分泌を抑制するように働く物質をマクロ
ファージについてｉｎ　ｖｉｔｒｏ系で試験したとき、
驚くべきことに、オルニチルデ力ルポキシラーゼのとく
にトランスグルタミナーゼ型のインヒビター、好ましく
は胎盤および血漿の両者に由来するＸＩＩＩ因子生理学
的濃度で、マクロファージの酸素ラジカル放出に誘導さ
れる化学ルミネッセンス反応に対し強力な阻害作用を有
することが見出された。

さらに、驚くべきことに、ｘｍ因子は１ｎｖｉｖｏにお
いて、移植モデルで免疫抑制作用を有することも明らか
にされｔ；。

しＩ；がって、本発明は、免疫抑制剤の製造のための、
トランスグルタミナーゼ、好ましくはｘｍ因子の使用に
関する。

この種類の免疫抑制剤が使用できる病理学的状態の例と
しては、慢性関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎
、多発性硬化症、ギランバレー症候群、乾鮮および他の
自己免疫疾患のような慢性炎症過程、パーキンソン病の
ようす変性性疾患、動脈硬化症、新生物疾患、ヒベルエ
ルギー／アレルギー性障害、移植片対宿主反応、ＡＲＤ
Ｓ　（成人呼吸窮迫症候群）のようなショック症候群、
火傷後障害、消費性凝固障害および敗血症を挙げること
ができる。この種類の薬剤はＡＩＤＳのような感染性疾
患に対しても重要である。

外因性組織の移植・も、異物として認識される移植臓器
に対する免疫反応または移植片対宿主反応に類似の受容
者臓器に対する免疫反応を伴い、これが拒否反応を招く
。このような性質の拒否クリーゼは、母体によって異物
として認識される場合もある胎盤組織においても起こり
、これが胎盤／栄養芽層障害および胎盤早期剥離を招く
ことがある。したがって、移植片または受容者の生存を
保証するためには、受容者臓器または移植片の免疫系を
抑制することが必要である。

臨床的に使用されている、生成したスーパーオキシドイ
オンを中和できるスーパーオキシドジスムターゼと異な
り、Ｘｍ因子はスーパーオキシドイオンの生成を予防す
る。トランスグルタミナーゼはまた、ヒト疾患多発性硬
化症の疾患モデルと考えられるアレルギー性脳を髄炎（
ＡＥ）に対して作用する。

病理学的に増大した白血球活性には、新生物疾患の原因
に対する寄与もありうる。これらの疾患としては、たと
えば、組織球増殖症Ｘ１白血病とくに骨髄細胞系白血病
、およびマクロファージのように挙動するある種の腫瘍
またはマクロファージの援助（たとえば脈管形成の意味
での腫瘍間質の供給）に依存する腫瘍が包含される。し
たがって、本発明による免疫抑制療法は、これらの新生
物疾患に対しても同様に勧められる。

正常状態を越えた免疫系の反応ならびにそれに伴う酸素
ラジカルおよび／またはプラスミノーゲン活性化因子の
放出の病理学的な上昇は、再潅流状態、すなわち以前に
低流状態にあった組織への、高濃度の酸素の吸入、たと
えばパラコートの臨床的使用または中毒、シスプラチン
、アドリアマイシン、ニトロ７ラントイン、プレオマイ
シン、ストレプトシトシンおよび他の糖尿病誘発物質に
よる処置、放射線療法およびそれに伴う組織傷害に際し
ての、突然の血流によっても起こる。

免疫系の抑制に適当なことが知られている方法としては
、リンパ組織に対する抗体、電離放射線および化学物質
による処置がある。この種類の侵襲的処置は著明な副作
用、すなわち臓器毒性、細胞増殖抑制剤および電離放射
線による不妊、トラネキサム酸による脳浮種、抗体処置
に際して血清疾患の危険がある抗−抗体の生成を伴うも
のである。

これに対し、ヒトの生理学的なＸｍ因子の使用は上述の
副作用が全くなく、低用量でも、かなりのより効果的な
作用を発揮する。ヒト血漿中高濃度のＸｍ因子でも悪影
響は誘発されず、このタンパク質の治療係数は明らかに
高い（少なくとも正常血漿濃度の１０倍まで）。再潅流
時の組織傷害の危険、炎症過程、蛛蜘膜下出血、自己免
疫疾患、変性性疾患、動脈硬化症、新生物疾患（白血病
、組織球増殖症Ｘ等）、ヒペルエルギー／アレルギー性
障害、火傷後障害、移植片不適合性、胎盤早期剥離およ
び子痴前症、ショック症候群の阻止のためのトランスグ
ルタミナーゼの有効量は、多くの因子、たとえば患者の
年齢および体重ならびに臨床状態によって決定される。

トランスグルタミナーゼ、好ましくはＸｍ因子の有効量
は約０．７〜３，０００とくに好ましくは７−３００Ｕ
本／ｋｇ／２４時間であり、ｉ、ｖ、または可溶化して
ｉ、ｎ＋、投与することができる。Ｘｍ因子のようなト
ランスグルタミナーゼは、安定化剤、を二とえばアルブ
ミン、ポリゲリン、まｔこはグリシンのようなアミノ酸
を添加して安定化することができる（本ｔｕはヒト加ク
エン酸血漿中のＸｍ因子の量に相当する）。

Ｘｍ因子のようなトランスグルタミナーゼはまた、創傷
治癒の障害、移植片拒否、喘息性気管支障害、火傷およ
び他のマクロファージ活性増大を伴う疾患の局所療法お
よび予防のため、局所的に投与することもできる。

トランスグルタミナーゼと、組織プラスミノーゲン活性
化因子（ＬＰＡ）、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ
またはプラスミノーゲンーストレプトキナーゼ活性化因
子複合体の併用は、好ましくは動脈閉塞たとえば心筋梗
塞または卒中の洪散療法への医療用適用がある。トラン
スグルタミナーゼと線維素溶解物質の併用は、たとえば
急性再潅流時および後の、活性亢進白血球による壊死の
ような組織傷害を直接阻止することを可能にする。

さらに、トランスグルタミナーゼと、ヒト血漿由来また
は遺伝子操作で誘導された抗トロンビン■の併用も免疫
抑制剤としての使用が指示される。

好ましい様式における医療用適用としては、トランスグ
ルタミナーゼと胎盤由来のプラスミノーゲン活性化因子
インヒビター（ＰＡＩ−２）の併用の、免疫抑制剤とし
ての使用がある。ＰＡＩ２をトランスグルタミナーゼと
併用する場合、ＰＡ　Ｉ−２の有効用量は一般的に、７
〜３．０００ウロキナ一ゼ阻止単位／　ｋｇ／　２４時
間、すなわち、体重７５ｋｇの患者に全身投与する際に
は５２５〜２２５．０００単位である。

マウスおよびヒトの免疫応答に対するトランスグルタミ
ナーゼの作用は、免疫抑制剤の評価への使用が知られて
いる選ばれた標準的１ｎｖｉｖｏおよびｉｎ　ｖｉＬｒ
ｏ試験法により、以下の例を用いて詳細に説明する。実
験は精製された胎盤Ｘ■因子を用いて実施した。精製血
漿Ｘ■因子を使用した確認試験においても同等の結果が
得られた。

実施例　ｌ ヒト食細胞のｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける刺激に対するχ
ｍ因子の作用−Ｘ■因子とプラスミノーゲン活性化因子
インヒビター２の相加作用 多形核顆粒球と単核貧食細胞は健康供血者の末梢血から
得、供試薬剤の投与後に各種機能について試験した。検
討する貧食細胞機能のパラメーターは、化学ルミネッセ
ンス反応およびリソソーム酵素の分泌とした。非活性化
貧食細胞（−ＩＣ）および免疫複合体によって活性化さ
れた貧食細胞（＋ＩＣ）の両者に対するＸ■因子の作用
を測定した。

相当する対照群からの貧食細胞（非処置細胞）に比べて
、化学ルミネッセンス反応（酵素ラジカルの発生）はヒ
ト顆粒球および単球（貧食細胞）によって有意に、かつ
用量依存性に低下した（第１表）。

ＸＩ［［因子のこの抑制作用は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにお
ける免疫複合体ＩＣ（５０Ｕｇ／　ＩＩＱ）の共刺激に
よりさらに明白である。物質で処置されたヒト単核貧食
細胞はそのリソソーム酵素の分泌がはっきりと阻止され
る点でとくに顕著である（第２表）。

０．０５ＵのＸ■因子を０．ｌＵの胎盤プラスミノーゲ
ン活性化因子インヒビター（ＰＡＩ）−２とともにＩＣ
刺激下に与えると、個々の物質による阻害は約５０％で
あるにもかかわらず、生じた阻害は４０％以下であり、
２種の物質の相加／相剰様式の作用が明らかである。

実施例　２ マウス腹腔マクロファージの活性に対する１ｎｖｉｖｏ
でのＸ■因子の作用 雌性ＮＭＲＩマウス（１８〜２０９）に、ｘｍ因千０．
２５〜２．５Ｕ／動物の濃度を非経口的に投与する。

対照には同容量（０，５ｍ１２）の溶媒（生理的緩衝食
塩溶液１）Ｈ７，２）を与えた。２時間後および２４時
間後にマウスを層殺し、腹腔からマクロファージを取り
出し、実施例１に記載したように、化学ルミネッセンス
を用いて活性の測定を行った。

第３表から明らかなように、Ｘ■因子は、供試薬剤で前
処置したマウスから採取したマクロ７アージの活性を低
下させる。免疫複合体を１ｎｖｉｔｒｏで添加した場合
も添加しなかった場合も、物質の投与２時間後および２
４時間後の両者で、化学ルミネッセンスに抑制が認めら
れた。

実施例　３ ラット足部からの移植皮膚の生存時間に対するＸＩＩＩ
因子作用 この実験計画では、　Ｌｅｗｉｓラットからの足部皮膚
のサイズ約Ｑ、５Ｘ１．Ｑｃｍの切片を、Ｆｉｓｃｈｅ
ｒラットの局部に移植した。受容動物の免疫系により、
移植皮膚片は異物として認識され、拒絶される。第４表
から明らかなように、溶媒のみで処置された対照群での
Ｌｅｗｉｓ／　Ｆｉｓｃｈｅｒラットモデルにおける移
植片の生存時間は１６〜１８日であった。ＸＩＩＩ因子
５Ｕ／動物）は、移植後第１日または第１０日のいずれ
かから開始して連続７日間腹腔内に投与した。この実験
から、驚くべきことに、使用した濃度のＸＩＩＩ因子、
移植片の生存日数を１７．０±１．４から２４．８±１
．９および２６．８±２．２に増大させることが明らか
にされＩこ　。

第２表 ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおけるマクロファージ活性（ヒト単
球、３Ｘ１０’細胞）に対するＸＩＩＩ因子作用８３６
５±２１９ ２５１４±５７４ ４２５４±５４１ ６３５８±６３２ ７７０３±２８８ １６２０５±１７０３ ２７２３±３３３ ６４２８±１１１２ １０３２０±１０３０ １３４８３±７９４ 第３表 ｉｎ　ｖｉｖｏにおけるマクロファージ活性（ｌ　Ｘ　
１０’細胞）に対するＸＩＩＩ因子作用２６８±５４ ５１２±１０３ ９８１±１１１ １１１３±６７ ２７７５±３７５ ４９６±７９ ９５９±１６３ １２９０±２４０ ２１０５±２７６ ４４８０±４５３ ４４６３±５６７ ８４８５±７０７ １１３００±１４２４ １６２３３±２７０６ ３６７６７±３２２７ 第１表 ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける、免疫複合体（５０μｇ／ｒ
ｎのによる刺激の存在下または非存在下での酸化的代謝
（化学ルミネッセンス）に対するＸＩＩＩ因子作用ヒト
単球 （貧食細胞） ＩＸＩＯ’細胞 １６７４±２４５ ２５２±４８ ３８４±９５ ４７４±６１ ５７５±６１ ６３７±８１ ８７３±７５ １９７７５±１４５０ ９４７±１５２ １２９４±　５８ ２１９５±　３５ ５１９５±４８８ ６８５０±３５４ １００５５±６２９ ヒト顆粒球 ２Ｘ１０’細胞 ２６７８±３５３ １４８±２４ ３４２±３１ ６４５±６８ ８６３±５１ １０７５±１３４ １２２６±１８６ ５８６５０±２１２４ ６４４８±１５０５ ９５８３±１１９３ １５７３３±２０３５ １８７００±１１１４ ２６９００±１５５６ ３７４００±２８５１ １２ＬＵ−相対光単位 第４表 Ｆｉｓｃｈｅｒラットにおける皮膚移植に対するｘｍ因
子の作用 １〜７日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）免疫抑制剤の製造方法におけるトランスグルタミナ
   ーゼの使用。 ２）トランスグルタミナーゼはＸIII因子である請求項
   １に記載の使用。 ３）移植片拒否クリーゼ、胎盤／栄養芽層障害および移
   植片対宿主反応の治療および予防のための薬剤を製造す
   る請求項１に記載の使 用。 ４）自己免疫疾患の治療のための薬剤を製造する請求項
   １に記載の使用。 ５）酸素ラジカルの生成増大を伴う病理学的過程の治療
   のための薬剤を製造する請求項１に記載の使用。 ６）急性再潅流時および後における組織障害の治療およ
   び予防のための薬剤を製造する請求項１に記載の使用。 ７）局所用薬剤を製造する請求項１に記載の使用。 ８）単球／マクロファージ系の抑制剤を製造する請求項
   １に記載の使用。 ９）１回用量（体重７５ｋｇ）あたり５２．５〜２２５
   ，０００単位のトランスグルタミナーゼを含有する薬剤
   を製造する請求項１に記載の使用。 １０）トランスグルタミナーゼとプラスミノーゲン活性
   化因子インヒビター好ましくはＰＡＩ−２を含有する組
   成物。 １１）１回用量（体重７５ｋｇ）あたり５２．５〜２２
   ５，０００単位のトランスグルタミナーゼと１回用量あ
   たり５２．５〜２２５，０００単位のプラスミノーゲン
   活性化因子インヒビターを含有する請求項１０に記載の
   組成物。