JPH0193540A - 癌転移と増殖の予防および治療用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は増殖障害、ウィルス性感染および新生物形成お
よび転移のような病気を予防し治療するための組成物と
、この組成物を用いた予防および治療法に関する。

（従来の技術） 腫瘍細胞の継続的な増殖は癌にとって本来必要なことで
ある。大抵の癌は結局、第二の部位に転移し腫瘍を形成
する能力のため致命的であるにコルソン・ジー争エル、
　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｌｏｐｙｓ、Ａｃｔａ、０９５
：１１３．１９８２；ポスト・ジーおよびフィドラー・
アイ・ジェ＋、　Ｎａｔｕｒｅ２８３；１３９，１９８
０．およびワイス・エル、　Ｓｅｍ１ｎ、０ｎｃ１．４
：５〜１９．１９７７　）　ｏ従って、転移と腫瘍細胞
増殖を共に抑制できる医薬または生物学的応答変更遺伝
子が必要である。この点で、腫瘍細胞表面に見出される
一定の複合糖質構造が転移現象の表示に対し直接寄与し
ていることが開示されたにコルソン・ジー争エル、　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙ、　Ａｃｔａ　６９５：１
１３．１９８２　）。

本発明者や他の者によって行われた先行的な研究では、
癌細胞のＡｓｎ−結合炭水化物の変化が転移の可能性を
減らす（デニス・ジェー・ダブリュらＮａｔｕｒｅ　２
９２：２４２．１９８１；デニス・ジエー争ダブリュら
、Ｊ、　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、９９：１０３４，１９８
４；デニスΦジェー・ダブリュ、　　Ｊ、　Ｎａｔｌ、
Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、７４：１１１１．１９８５：
　タカサイＯニスら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ
、Ｒｅｓ、Ｃ。

ｍｍｕｎ、９２ニア３５〜７４２．１９８０）　。多く
のネズミ癌細胞系に対し、入手できる細胞表面のガラク
トースとＮ−アセチルガラクトサミンのシアリル化は転
移の可能性を増す（ヨゲスワレン・ジー、およびサルク
・ビー舎エル、サイエンス（Ｗａｓｈ、ＤＣ）　、　１
５１４〜１５１６．１９８１　）。またＢＩＢ黒色腫と
ＭＤＡＹ−Ｄ２癌細胞系のレクチン抵抗変異体において
シア゛ル化したＡｓｎ−結合オリゴ糖の損失が転移の可
能性を減らすことが見出された（フィンφジェーら、Ｃ
ａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、４０　：　２５８０〜２５８７
．１９８０．デニスら、Ｊ。

Ｃｅ１ｌ、Ｂｌｏｌ、９９：１０３４〜１０４４．１９
８４　）　、さらに、本発明者は、これらの構造の損失
がそのまま癌細胞の成長速度を減らすことを示した（ケ
ルベル・アール・ニス、デニスージエー・ダブリュら、
Ｃａｎｅｅｒ　Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　Ｒｅｖｉｅｗｓ
　１，９９．１９８２　）。

ネズミとヒトの細胞の悪性の転移はＡｓｎ−結合オリゴ
糖の分枝を増加することが多い（ヤマシタ・ケイら、Ｊ
、　Ｂｌｏｌ、Ｃｈｅｍ、２５９．１０８３４．１９ｇ
４．ピアス・エムおよびアランゴ・ジエ＋、　Ｊ、　Ｂ
ｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２６１．１０７７２．１９８Ｂ、デ
ブレイ・エイチら、Ｉｎｔ、　ｊ、　Ｃａｎｅａｒ　８
７，８０７．１９８８）　、また、これは複合糖質中の
シアル酸のレベルを増加する。本発明者の最近の研究で
は、分枝の増加は転移した表現型に直接関係しないが、
二次的に遺伝子表現の二次的変化として生ずることがで
きることを示した。重要なことは、Ａｓｎ−結合オリゴ
糖の分枝の増加は、直接癌細胞の転移の可能性に関係し
ていることを、本発明者は示した（デニス・ジエー・ダ
ブリュら、サイエンス、　１９８７）。また、生体中の
選択的成長の利点を癌細胞に与えることができる（ケル
ベル・アール・ニスら、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃ
ａｄ、　Ｓｃ１．　Ｕ、Ｓ、Ａ、、８４．１２６３．１
９８７）。

スワインソニン（ＳＷ）は、斑入りロコ草中に見られ、
家畜が摂取すると、この化合物はりソソームマンノシダ
ーゼとゴルジα−マンノシダーゼ■を抑制する（モリノ
ー・アール・ジエーおよびジェイムス・エル・エフ、サ
イエンス（Ｗａｓｈ、ＤＣ）２１８：１９０〜１９１．
１９８１；ツリサニ・デイ−・アール・ビーら、Ｊ、　
Ｂｌｏｌ、　Ｃｈｅｗ、２５７：７９３６〜７９１９．
１９８２　）。脳組織は遺伝性のりソソーム貯蔵病に見
られるものと同じオリゴマンノース構造を含むリソソー
ム小胞を蓄積する。多くの組織特定化マンノシダーゼが
あり、ネズミはスワインソニンによって抑制されない脳
酵素を有することが見出された（ツルシアニ・デイ−・
アール・ビー、およびトウスター−オー、　Ｊ、　Ｂｌ
ｏｔ、　Ｃｈｅｍ、２６０：１３０８１〜１３０８７゜
１９１１１５）。さらに、ラットの脳はオリゴマンノー
ス構造を蓄積せず、この化合物を与えても神経°病の徴
候を示さない（ツルシアニ・デイ−・アール・ビーら、
　　Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｌｏｐｈｙｓ、２
３２　　：　７Ｂ　〜８５．１９８４）。最も顕著なこ
とは、スワインソニンがゴルジ処理酵素α−マンノシダ
ーゼ■を拮抗的に阻害することによって、Ａｓｎ−結合
オリゴ糖の分枝を抑えることが見出されたことである（
ツルシア二・デイーΦアールφピー、　Ｊ、　Ｂｌｏｌ
、　Ｃｈｅｍ、２５８゜７５７８．１９８３　）。

ハンフリーら（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　
Ｓｅｔ、　Ｕ、Ｓ、Ａｇ３：１７５２〜２７５８．１９
８８　）は、８１８ＦｌＯネズミ黒色腫細胞をスワイン
ソニンで治療すると、８１８ＦＩＯ細胞の静脈内注射後
にＣ５７ＢＬ／６マウスの肺にコロニーをつくる能力を
阻害することを見出した。

しかし、この治療は皮下移植後の８１６Ｆ１０の生存力
や腫瘍形成に影響しなかった。

ツニカマイシンはストレプトミセス争すゾスペルフィク
スによって生成される抗生物質であり、Ａｓｎ−結合オ
リゴ糖鎖の形成の第一段階を阻害することが見出された
（ケラ−・アール・ケイら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、１８：３
９４Ｂ　〜３９５２．１９７９　）　、ツニカマイシン
中で終夜成長したＢｌＢ黒色腫細胞は肺のコロニー化に
あまり有効でなかった（イリムラら、Ｃａｎｅｅｒ　Ｒ
ｅｓ、４１．３４１１〜３４１８．１９８１　）　、し
かし、ツニカマイシンは糖蛋白の局在化の著しい機能不
全と細胞中の機能を生じさせる（ギブソン・アールら、
Ｔｒｅｎｄｓ　　ｉｎ　　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　Ｓｃ１
．　　ＮＯｖ、２９０　〜２９３．１９８０）　　。

従って多くの細胞に対して毒性があることが見出された
（クリスオド・ビー・エイ、およびニス・ニス・フラグ
、　Ｊ、　Ｃｅ１ｌ　ＢＩｏｌ、、９４：５８Ｂ　〜５
９１　、　１９８２）。

インターフェロンはウィルスおよび成長因子に応答する
動物細胞によって選択される蛋白質である（ズロ・ゼッ
ト・エフら、Ｃｅ１ｌ　４３ニア９３．１９８５）。

インターフェロンは細胞表面のりセプターに結合し、多
数の抗ウィルス効果および細胞成長の抑制を含む生物学
的応答を現わす（ニス・エル・リンら、サイエンス２３
３：３５Ｂ〜３５８．１９８６）。

インターフェロンはヒトの細胞系のＣ−ミック腫瘍遺伝
子の表現を減らすことが示された（エイナト・エムら、
　Ｎａｔｕｒｅ　３１３．５９７．１９８５　）　、　
Ｃ−ミックは細胞質遺伝子のひとつであり、増殖するよ
うに刺激された細胞中で活発に転写しくラウ・エル・エ
フおよびナサンズ・デイ−、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ｔｌｓＡ　８４．１１８２，１
９８７　）　、細胞の増殖に必要であると考えられてい
る（ホワイトフィールド・ジエー譬エフら、　Ｃａｎｃ
ｅｒ　ａｎｄ　ＭｅｔａｓｔａｔｌｓｉｓＲｅｖｉｅｗ
ｓ　５，２０５．１９８７）　、このように、細胞中の
Ｃ−ミックｍＲＮＡの水準は、細胞成長段階のインジケ
ーターとして使用できる。

インターフェロンは大抵の癌の治療に臨床的に試用され
てきた（ゴールドシュタイン・デイ−１およびラスグロ
ージエ−，Ｃａｎ、　Ｒｅｓ、　４６：４３１５，１９
８６）。インターフェロンに対する重要な応答速度は、
毛細胞白血病およびリンパ腫で観察されたが、他の腫瘍
タイプはあまり応答しなかった。高濃度のインターフェ
ロンが必要な場合が多く、これは例えば低血圧や腎疾患
のような生命が危機に直面する副作用がある（レビン・
エイ・エスラ、　Ｃａｎ。

ｒｅｓ、３９：１６４５〜１６５０．１９７９　）。

多数のインターフェロン誘導物質が開示された。

ポリイノシニック・ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ．Ｃ，）
）、合成二重鎖ＲＮＡは生体外と生体内のインターフェ
ロンの有効な誘導物質である。ポリ（Ｉ．Ｃ，）−リシ
ン（ポリ（Ｉ．Ｃ，）、ＬＣ）はポリ（Ｉ．Ｃ，）より
もヒトにおいて安定であり、臨床研究に使用された（レ
ビン・エイ・ニスら、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５Ｊ９：１
Ｂ４５〜１８５０）　、ティー・ハンター（Ｎａｔｕｒ
ｅ　３２２　：　１４〜１６．１９８８）は、他のイン
ターフェロン誘導物質、すなわち形質転換成長因子（Ｔ
ＧＦ−β）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を発表した。

ツニカマイシンはエンベロープウィルスにインターフェ
ロンの抗ウィルス性効果を促進させ、３Ｔ３繊維芽細胞
のインターフェロンの抗増殖性効果を促進する（モヘシ
ュワリ・アール・ケイら。

サイエンス２１９：１３３９〜１３４１．１９８３　）
。ツニカマイシンは毒性があるので臨床的には用いられ
なかった（モリンーｚム・ジエーら、　Ｃａｎ　、　Ｒ
ｅｓ、　４３：１Ｂ６９〜１６７４．１９８３　）。

（問題点を解決するための手段） 本発明はゴルフα−マンノシダーゼＩＩの酵素阻害物質
を有する組成物であり、インターフェロンまたはインタ
ーフェロン誘導物質を含む。ゴルフα−マンノシダーゼ
ＩＩの酵素阻害物質を有する組成物は、製薬的配合にお
いて、癌転移と細胞増殖を阻害する。以下、促進組成物
と呼ぶこの組成物は、ゴルジ酵索α−マンノシダーゼＩ
Ｉの酵素阻害物質とインターフェロンまたはインターフ
ェロン誘導物質を含有し、インターフェロンまたはイン
ターフェロン誘導物質の抗増殖性効果と抗ウィルス性効
果を促進し、新生物形成と転移を阻害する。

本発明はゴルフα−マンノシダーゼＩＩの酵素阻害物質
と製薬的に許容できるキャリヤの有効量を患者に投与す
る増殖障害と癌転移の予防および治療方法である。本発
明はまた、有効量のゴルフα−マンノシダーゼＩＩの酵
素阻害物質と有効量のインターフェロンまたはインター
フェロン誘導物質を患者に投与する増殖障害とウィルス
性感染と新生物形成と転移の予防および治療方法である
。

先の研究では、スワインソニンを用いたＢＩＢＦ１０ネ
ズミ黒色腫細胞の治療は６匹のネズミに対しＣ５７ＢＬ
の肺をコロニー化する能力を阻害することを示した（ハ
ンフリーら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃ１．　Ｕ、Ｓ、Ａ：８３；１７５２〜２９３．１９
８０）。しかし、これまで、スワインソニンは腫瘍に関
係している動物には投与されてなく、先にも、スワイン
ソニンは癌転移の予防や治療の治療剤として使用できる
ことは示唆がなかった。

本発明によれば、スワインソニン単独の投与後に転移を
減らした。スワインソニンをマウスのグループに経口投
与し、続いて、スワインソニン処理のＢｌＢＦ１０黒色
腫細胞を静脈注射した。これらのマウスは、未処理のコ
ントロールマウススワインソニン処理のＢ１８ＦｌＯ黒
色腫細胞を投与したコントロールマウスよりも、かなり
肺の結節が少なくなっていた。ハツカネズミのリンパ性
網状腫瘍系ＭＤＡＹ−Ｄ２およびヒトの結腸癌細胞を用
いて、同様の結果が得られた。

ヌードマウスの飲料水に投与したスワインソニン単独で
は、続いてマウスに移植したヒトの結腸癌細胞系の成長
速度を減らした。同様に生体外でのヒトの癌細胞の倍に
なる時間は、培養基にスワインソニンを添加すると増加
した。スワインソニンを加えて培養したＨＴ２９ｍヒト
結晶癌細胞は、さらに低い増殖状態で細胞に対し期待さ
れるようなＣ−ミック表現が減少していた。

本発明による促進組成物は、投与されるインターフェロ
ンおよびインターフェロン誘導物質を少量投与でき毒性
の問題を減らすので、増殖障害とウィルス性感染と新生
物形成と転移の予防と治療に対して、インターフェロン
またはインターフェロン誘導物質単独よりも優れている
。

充実性腫瘍成長の重要な抑制は、インターフェロン誘導
物質のポリ（Ｉ．Ｃ，）と組み合わせたスワインソニン
を、リンパ性網状腫瘍系ＭＤＡＹ−Ｄ２を注射したマウ
スに投与した場合に認められた。スワインソニンとイン
ターフェロン誘導物質ポリ（Ｉ．Ｃ，）の作用は付加的
でなく、反対に共同的であることは意外である。またス
ワインソニンは生体外でＭＤＡＹ−Ｄ２ａ瘍細胞にマウ
スα／βインターフェロンの抗増殖性効果を促進するこ
とが見出された。これは、スワインソニンとインターフ
ェロンの阻害効果が腫瘍細胞増殖の阻害によることを示
している。

また転移はＢｌＢＦ１０１１ｍ瘍細胞を注射したマウス
群にスワインソニンとポリ（Ｉ．Ｃ，）を投与した後、
減少した。

ヒトのα２−インターフェロンの規則正しい投与と組合
わせたスワインソニンの経口投与は、ヌードマウスでの
ＨＴ　２９ｍヒト結腸癌細胞の成長を阻害するように共
同して作用した。またスワインソニンはヒトＨＴ　２９
ｍ結腸癌細胞および組織培養で成長するヒト腎臓癌細胞
５Ｎ１２ＣＬ１に対するインターフェロンの抗増殖性効
果を促進する。ヒト癌細胞成長に対するスワインソニン
とα２−インターフェロンの共同作用の効果は、ハッカ
ネズミのリンパ性網状腫瘍系に認められたものと同じで
ある。

本発明はゴルジα−マンノシダーゼＩＩの酵素阻害物質
を有する組成物に関し、インターフェロンまたはインタ
ーフェロン誘導物質を含有する。

ゴルジα−マンノシダーゼＩＩの酵素阻害物質を有する
組成物は製薬的配合において癌転移と細胞増殖を阻害す
る。ゴルジα−マンノシダーゼＩＩの酵素阻害物質とイ
ンターフェロンまたはインターフェロン誘導物質を含有
する促進組成物は、インターフェロンまたはインターフ
ェロン誘導物質の抗増殖性効果と抗ウィルス性効果を促
進し、新生物形成と転移を阻害する。

ゴルジα−マンノシダーゼＩＩの適当な酵素阻害物質は
、スワインソニンと、これの活性類似物質である。

本発明の促進組成物に対し適当なインターフェロンとイ
ンターフェロン誘導物質はα−インターフェロン、β−
インターフェロン、γ−インターフェロン、ポリ（Ｉ．
Ｃ，）、ポリＬ−リシンとコンプレックスしたポリ（Ｉ
．Ｃ，）（ポリ（Ｉ。

Ｃ，）−ＬＣ）、！ｉ瘍キネクローシス因子ＴＮＦ）、
形質転換成長因子であり、α−インターフェロンおよび
β−インターフェロンが好ましい。

酵素阻害物質は、例えば充填剤、乳化剤、潤滑剤または
緩衝物質のような製薬的に許容できるキャリヤと組み合
わせる。成分は、例えば経口投与用の錠剤とカプセル、
または経口投与、静脈注射、筋肉内注射または腹膜内投
与に適した懸濁液または溶液のような適当な処方形態の
慣習的方法を用いて構成される。

ゴルジα−マンノシダーゼＨの酵素阻害物質と製薬的に
許容できるキャリヤの投与は、転移と細胞増殖を減らす
効果があり、従って、種々の形の癌の治療に使用できる
。さらに特に、種々の形の腫瘍形成、例えば白血病、リ
ンパ腫、肉腫、黒色腫、アデノーマ、充実性組織の癌腫
、および乳頭腫のような良性の病変を治療するために用
いられる。組成物はヒトや種々の他の咄乳動物の治療に
用いられる。

本発明による好適な促進組成物は、スワインソニンとα
−２β−またはγ−インターフェロンまたはポリ（Ｉ．
Ｃ，）またはポリ（Ｉ．Ｃ，）　−ＬＣ，またはＴＮＦ
、またはＴＧＦを含み、α−またはβ−インターフェロ
ンが好ましい。

α−マンノシダーゼ■酵素阻害物質とインターフェロン
またはインターフェロン誘導物質の組み合わせは、抗増
殖性効果を高める効果があり、新生物形成と転移を阻害
し、従って、種々のタイプの治療、例えば種々の形の癌
の治療に使用できる。

本発明による促進組成物は、治療は次の化学療法または
放射線療法を用いる。さらに特に、促進組成物は種々の
形の腫瘍形成、例えば白血病、リンパ腫、黒色腫、アデ
ノーマ、肉腫、充実性組織の癌腫、神経系の腫瘍および
乳頭腫のような良性の病変を治療するために用いられる
。促進組成物は関節硬変症やウィルス性の感染のような
他の増殖性の状態に使用できる。促進組成物はヒトや種
々の他の補乳動物を治療するために用いることができる
。

本発明の組成物の成分の濃度は、成分の活性度に依存し
て変わる。酵素阻害物質に対して、濃度は０．０３〜３
００μｇ／ｇである。インターフェロンまたはインター
フェロン誘導物質に対して、例えば、ポリ　（Ｉ．Ｃ，
）およびポリ（Ｉ．Ｃ，）−ＬＣの濃度は０．１　ｍｇ
　〜１００　ｍｇ／ｍ２であり、α−またはβ−インタ
ーフェロンに対して、濃度は、１０２〜５Ｘ１０７単位
／ｒｒｆである。

本発明はまた、ゴルジα−マンノシダーゼＩＩの酵素阻
害物質と製薬的に許容できるキャリヤの有効量を患者に
投与する癌転移と細胞増殖の予防と治療のための方法に
関する。

さらに本発明は、有効量のゴルジ酵素α−マンノシダー
ゼＩＩの酵素阻害物質と有効量のインターフェロンまた
はインターフェロン誘導物質を患者に投与する増殖障害
とウィルス性感染と新生物形成と転移の予防および治療
方法である。

酵素阻害物質とインターフェロンまたはインターフェロ
ン誘導物質を同時に、別々にまたは逐次的に投与できる
。スワインソニンとα−またはβ−インターフェロンに
対して、例えば、スワインソニンは毎日１回α−または
β−インターフェロンの投与と共に１日１回または数回
投与できる。

適当な製薬的処方における酵素阻害物質は経口、静脈内
、腹膜内に投与でき、経口投与が好ましい。

経口投与の形態に対して、酵素障害物質は適当な投与形
態、例えば水溶液、錠剤、およびカプセルに慣習的方法
によって変えられる。静脈内、筋肉内または腹膜内投与
に対して、酵素阻害物質と製薬的に許容できるキャリヤ
を慣習的方法を用いて溶液、懸濁液または乳濁液にする
。

適当な製薬処方におけるインターフェロンまたはインタ
ーフェロン誘導物質は、静脈内、筋肉内または腹膜内ま
たは経口で腫瘍に投与できる。静脈内、筋肉内、腹膜内
または局所投与に対して、インターフェロンまたはイン
ターフェロン誘導物質は、希望するときはこの目的のた
めの慣習的物質、例えば可溶剤、乳化剤または他の補助
剤と共に、溶液、懸濁液または乳濁液に変える。適当な
溶媒の例は水、生理的食塩水溶液、アルブミン、カルボ
キシメチルセルロース溶液、および蛋白質安定剤である
。

ゴルジ酵素α−マンノシダーゼＩＩの酵素阻害物質と製
薬的に許容できるキャリヤの有効量を患者に投与する癌
転移と細胞増殖の予防と治療のための本発明方法によれ
ば、酵素阻害物質の十分な投与は、転移を減らしおよび
／または抗増殖性効果を示すために十分な最小の投与量
である。また、この投与量は患者の体重と体格に依存す
る。

有効量のゴルジ酵素α−マンノシダーゼＩＩの酵素阻害
物質の有効量のインターフェロンまたはインターフェロ
ン誘導物質を患者に投与する増殖障害、ウィルス性感染
および新生物形成、および転移の予防と治療のための本
発明方法によれば、酵素阻害物質とインターフェロンま
たはインターフェロン誘導物質の投与量は、酵素阻害物
質とインターフェロンまたはインターフェロン誘導物質
単独では十分な効果を示さないような量をそれぞれ選択
する。酵素阻害物質とインターフェロンまたはインター
フェロン誘導物質の十分な投与量は、抗増殖性または抗
ウィルス性効果を促進し、あるいは新生物形成および転
移を阻害するために十分な最小量である。成分の投与量
は患者の体重と体格に依存する。

ヒトおよび他の哺乳動物において本発明による方法は、
例えば酵素阻害物質の投与量は体重１ｇにつき０．０３
〜３００μｇであり、１〜ｌＯμｇが好ましい。ポリ（
Ｉ．Ｃ，）とポリ（Ｉ、Ｃ，）−ＬＣの投与量は０６０
１〜１００　ｍｇ／ｒｙｆであり、α−またはβ−イン
ターフェロンは１０２〜５×１０７単位／Ｍである。

（実　施　例） 以下、実施例により本発明を説明する。

実施例Ｉ ８１８Ｆ　１０黒色腫細胞による肺臓コロニー化８１８
Ｆ１０１ｈｌｉ瘍細胞をスワインソニン（０，３μｇ／
ｄ）の存在または不存在下で４８時間培養し、１０５個
の細胞を最初の日にＣ５７ＢＬマウスの側部尾静脈に注
射した。マウスに２．５μｇ　／　ｍｌのスワインソニ
ンを含む飲料水を与え、２日後に腫瘍細胞を注射し、ス
ワインソニンを１７日間維持した。ポリ（Ｉ．Ｃ，）を
注射したマウスに、その前日に１００μｇの腫瘍細胞を
腹膜内注射した。

肺臓結節を２４日目に数え、それぞれ５匹ずつのマウス
群にした。

第１表の結果は、Ｃ５７ＢＬのマウスの飲料水に２．５
μｇ／＋！ｉ！のスワインソニンを添加するトＢ　ｔｅ
ＦｌＯ黒色腫細胞による器官のコロニー化が減少した。

実施例２ ハツカネズミＭＤＡＹ−Ｄ２Ｍ瘍細胞の実験的転移 ＭＤＡＹ−Ｄ２１ｋｌ！瘍細胞を４８時間スワインソニ
ン（０，３μｇ／ｍ）の存在または不存在下に培養し、
１０４個の細胞を最初の日にマウスの側部尾静脈に注射
した。マウスにスワインソニン（２，５μｇ／ｍりを含
む飲料水を与え、２日後に腫瘍細胞を注射し、スワイン
ソニンを１７日間保持した。ポリ（Ｉ．Ｃ，）を注射し
たマウスに前日に１００μｇの腫瘍細胞を腹膜内注射し
、再び３日目に注射した。１００日以上生きたものは腫
瘍がなく長期生存したものとして数えた。

スワインソニン処理した細胞を注射したマウス（第２表
）は、未処理の細胞を注射したものに比べて、長期生存
する率がかなり高い。また長期生存する率の高いものは
スワインソニンを投与したマウスにも見られた。

実施例３ スワインソニンとポリＣ１，Ｃ，）−阻害充実性腫瘍成
長 マウスとスワインソニン（２，５μｇ／ｍ）を含む飲料
水を与え、２日後に１０５個のＭＤＡＹ−Ｄ２腫瘍細胞
を注射した。１日前にポリ（Ｉ．Ｃ，）を投入し、２日
後に腫瘍細胞を注射した。腫瘍を１５日目に除き体重を
計った。飲料水に追加したスワインソニンおよび／また
は２回のポリ（Ｉ．Ｃ。

）の腹幕内注射を与えたマウスのＭＤＡＹ−Ｄ２腫瘍の
成長を第１図に示す。飲料水に加えたスワインソニンと
２回のポリ（Ｉ．Ｃ，）の腹膜内注射の組み合わせは、
ＭＤＡＹ−Ｄ２腫瘍の成長速度を減少した。ポリ（Ｉ、
　　Ｃ，）とスワインソニンが作用し、ＭＤＡＹ−Ｄ２
腫瘍成長をそのまま阻害した。

実施例４ スワインソニンによるインターフェロンの抗増殖性効果
の促進 ＭＤＡＹ−Ｄ２腫瘍細胞を１０３　／ｄで組織培養プレ
ートに接種し、一連の希釈したマウスα／β−インター
フェロン（シグマ）を添加した。細胞をスワインソニン
（１μｇ／ｍｌりの存在および不存在に培養し、コウル
ターカウンタを用いて５日目に細胞数を測定した。第２
図の結果は、スワインソニンがα／β−インターフェロ
ンの抗増殖性効果を高めることを示した。

実施例５ 確立したＭＤＡＹ−Ｄ２転移を受けるマウスの生存に対
するスワインソニンとポリ（Ｉ．Ｃ，）の効果 ＭＤＡＹ−Ｄ２８！細胞をＳ、Ｃ，注射し、得られた腫
瘍を１２日後に外科的に切除した。マウスを４つの治療
群に分けた。ポリ（Ｉ．Ｃ，）を１２日目と１５日目に
投与し、スワインソニン追加飲料水を１２〜３０日の間
に与えた。生存時間を９０日まで測定し、９０日以上生
存したマウスを長期生存とした。

第３図は確立したＭＤＡＹ−Ｄ２転移を受けるマウスの
生存にスワインソニンとポリ（Ｉ．Ｃ，）の効果を示す
。スワインソニンとポリ（Ｉ．Ｃ，）の組み合わせはマ
ウスの生存時間を長くした。

実施例６ ヒト結腸癌細胞（）ＩＴ２９ｍ）をスワインソニンの存
在または不存在下で４８時間培養し、１０６個の細胞を
マウスに静脈注射した。第３表の結果は、スワインソニ
ンがヒト結腸癌細胞（ＨＴ２９ｍ）の転移を減らしたこ
とを示している。

第３表 ＨＴ２９Ｍ処理　　転移した　　マウスの病変マウス　
　平均数 無　　　　　　　　　４７５　　　　　　２．４スワイ
ンソニン　　　２１５　　　　０．６実施例７ ヒト結腸癌細胞（ＨＴ２９ｍ）とヒト腎臓癌細胞（Ｓ　
Ｎ１２ＣＬ　Ｉ　）を、無添加（Ｃ）、１μｇ　／　ｍ
ｌのスワインソニン（ＳＷ）　、１０００単位のヒトα
２−インターフェロン（α２）；またはスワインソ二ン
とＣ２−インターフェロンの組み合わせ（ＳＷ＋α２）
、および７％胎児牛血清を含む借地で成長させた。細胞
を１日目に１０５７ｄで培養し４日後に数えた。スワイ
ンソニン中の細胞は実験開示日０日前の４８時間スワイ
ンソニン中で予じめ成長させた。

第４図の結果は、スワインソニン単独は組織培養基中で
成長するヒト癌細胞の増殖性を減らしたことを示してい
る。またスワインソニンは組織培養基中で成長するヒト
癌細胞に対するヒトα２−インターフェロンの抗増殖性
効果を促進した。抗増殖性効果は、ここでは実施例８と
９で述べるヌードマウス中で成長する腫瘍細胞に見られ
るものと類似であることを示した。

実施例８ Ｂａｔ　ｂ／ｃヌードマウスに１０’　ヒト結腸癌細胞
（ＨＴ２９ｍ）を皮下注射し、腫瘍の成長をモニターし
た。マウスを、飲料水に含む２．５μｇ　／　ａｊ！の
スワインソニンを与えたもの（ＳＷ）、週に二度１０’
単位のヒトα２−インターフェロンを静脈注射したもの
（Ｃ２）、飲料水に含む２．５μ、ｇ／ｄのスワインソ
ニンを与え、さらに週に二度１０４単位のヒトα２−イ
ンターフェロンを静脈注射したもの（ＳＷ＋α２）、ま
たは処理しなかったもの（無）のそれぞれの群に分けた
。１日目に処理を開始し、マウスが４７日目に犠牲とな
るまで続けた。

第５図の結果は、スワインソニン単独でヌードマウスに
植え付けたヒト癌細胞の成長速度が減ることを示してい
る。ヒトα２−インターフェロンと組み合わせたスワイ
ンソニンはヌードマウス中のヒト癌細胞の成長を阻害す
るように作用した。

実施例９ Ｂａｌ　ｂ／ｃヌードマウスに、１０５　ヒト結腸癌細
胞（ＨＴ２９ｍ）を皮下脈注射し、腫瘍の成長をモニタ
ーした。マウスを、飲料水に含む２．５μｇ／ａｆのス
ワインソニンを与えたもの（ＳＷ）、週に二度１００μ
ｇのポリ１．　Ｃ，を静脈注射したもの（ポリ１．Ｃ，
）、飲料水に含む２．５μｇ／ａｄのスワインソニンを
与え、さらに週に二度１００μｇのポリ１．　　Ｃ，を
静脈注射したもの（ＳＷ＋ポリ１、Ｃ，）、または処理
しなかったもの（無）のそれぞれの群に分けた。１日目
に処理を開始し、マウスが３９日目に犠牲となるまで続
けた。

第６図の結果は、スワインソニン単独でヌードマウスに
植え付けたヒト癌細胞の成長速度が減ることを示してい
る。ポリＩ、Ｃ，と組み合わせたスワインソニンはヌー
ドマウス中のヒト癌細胞の成長を阻害するように作用し
た。この協同作用の効果は、実施例８で見られたものと
は大きさが同じでなかった。これは多分、マウスをヒト
タフェロンの非交差反応性に依るのであろう。ポリｌ。

Ｃ１の投与は、そのままヒト癌細胞に活性でないマウス
インターフェロンを生じる。

実施例１０ 全ＲＮＡは、１μｇ　／　ＩＩｄ！のスワインソニンの
存在または不存在下で４８時間、または１０００単位／
７！のインターフェロンＡ／Ｄ中で成長したＨ　Ｔ　２
９ｍヒト結腸癌細胞から抽出した。全ＲＮＡ　（１０μ
ｇ）を電気泳動で分離し、ニトロセルロースにトランス
フエクションした。Ｃ−ミックｍＲＮＡ写しを、ベクタ
ーｐＳ　Ｖ−ｃ　−ｍｙｃ　−１に運ばれたＭＯＰＣ３
１５マウスプラズマサイトマから誘導したマウスＣ−ミ
ックのエクソン■フラグメントを用いる標準ノジンブロ
ッティング法で消した。

スワインソニンの存在下（Ｂ）に培養したＨＴ２９ヒト
結腸癌細胞は、Ｃ−ミック発現が減った（第７図）。

【図面の簡単な説明】

第１図はスワインソニン（ＳＷ）追加飲料水および２回
のポリ（Ｉ．Ｃ，）の腹膜内投与の片方または両方を与
えたマウスにおいて、ＭＤＡＹ−Ｄ２１１ｍ瘍の成長を
示すグラフであり、第２図は、組織培養におけるスワイ
ンソニンによるインターフェロンの抗増殖性効果の促進
を示すグラフであり、 第３図は確立したＭＤＡＹ−Ｄ２転移を受けるマウスの
生存に対するスワインソニンとポリ（Ｉ。 Ｃ６）の効果を示すグラフであり、 第４図はヒトＨＴ２９ｍ結腸癌および５Ｎ１２ＬＣ■腎
臓癌細胞を用いる組織培養におけるＣ２−インターフエ
ロンおよび／またはスワインソニンの抗増殖性効果を示
す棒グラフであり、 第５図はＳＷ−追加飲料水および週２回のヒトα２−イ
ンターフェロン静脈注射の片方または両方で治療したヌ
ードマウスのヒトＨＴ２９ｍ結Ａｉ３癌細胞の成長を示
すグラフであり、 第６図はＳＷ−追加飲料水および週２回のポリ１、　　
Ｃ，の静脈注射の片方または両方で治療したヌードマウ
スのヒトＨＴ２９ｍ結腸癌細胞の成長を示すグラフであ
り、 第７図は未処理（Ａ）、スワインソニン処理（Ｂ）、イ
ンターフェロン処理（Ｃ）　、ＨＴ２９ｍ細胞における
Ｃ−ミックｍＲＮＡの水準を比較するため、Ｃ−ミック
に対し調べたノジンプロットのオートラジオダラムであ
る。 Ｆｉｇ、　Ｉ ＣＳＷ　Ｐｂ１ｙ’ＬＣ５Ｗ Ｐｏｌｙ１．Ｃ 図面の浄書（内容に変更なし） 手続補正書く方式） ％式％ １、　事件の表示 昭和６２年　特許願　　第２４５．７１２号２、　発明
の名称 ゴルジα−マンノシダーゼ■酵素阻書物質を含有事件と
の関係　　　　　特許出願人 名　称　マウント　シナイ　ホスピタル４、代理人 住　所　東京都港区六本木５−２−１　　　　　　はう
らいやビル７階昭和６３年　１０月　２５　日　（発送
臼）６、補正の対象 明細書の「図面の簡単な説明」の欄および図面７、補正
の内容 ｌ）明細書第３５頁最終行「オートラジオグラム」をｒ
Ｘ線写真」に補正する。

Claims (28)

【特許請求の範囲】
1. （１）ゴルジα−マンノシダーゼIIの酵素阻害物質を有
   し、インターフェロンまたはインターフェロン誘導物質
   を含有する組成物。
2. （２）ゴルジα−マンノシダーゼIIの酵素阻害物質の有
   効量と製薬的に許容できるキャリヤを有する癌転移と増
   殖障害の予防および治療用組成物。
3. （３）ゴルジα−マンノシダーゼIIの酵素阻害物質がス
   ワインソニンである特許請求の範囲第２項記載の組成物
   。
4. （４）ゴルジα−マンノシダーゼIIの酵素阻害物質の有
   効量とインターフェロンまたはインターフェロン誘導物
   質の有効量を有し、インターフェロンまたはインターフ
   ェロン誘導物質の抗増殖性と抗ウィルス効果を促進し、
   新生物形成と転移を阻害する組成物。
5. （５）ゴルジα−マンノシダーゼIIの酵素阻害物質がス
   ワインソニンである特許請求の範囲第４項記載の組成物
   。
6. （６）インターフェロンまたはインターフェロン誘導物
   質がα−またはβ−インターフェロンである特許請求の
   範囲第５項記載の組成物。
7. （７）インターフェロンまたはインターフェロン誘導物
   質がポリ（Ｉ．Ｃ．）である特許請求の範囲第５項記載
   の組成物。
8. （８）インターフェロンまたはインターフェロン誘導物
   質がポリ（Ｉ．Ｃ．）−ＬＣである特許請求の範囲第５
   項記載の組成物。
9. （９）スワインソニンの濃度が０．０３〜３００μｇ／
   ｇである特許請求の範囲第３、５または６項記載の組成
   物。
10. （１０）スワインソニンの濃度が０．０３〜３００μｇ
    ／ｇである特許請求の範囲第７または８項記載の組成物
    。
11. （１１）α−またはβ−インターフェロンの濃度が１０
    ＾２〜５×１０＾７単位／ｍ＾２である特許請求の範囲
    第６項記載の組成物。
12. （１２）ゴルジα−マンノシダーゼIIの酵素阻害物質の
    有効量と製薬時に許容できるキャリヤを患者に投与する
    癌転移と増殖障害の予防と治療方法。
13. （１３）ゴルジα−マンノシダーゼIIの酵素阻害物質が
    スワインソニンである特許請求の範囲第１２項記載の方
    法。
14. （１４）スワインソニンと製薬時に許容できるキャリヤ
    を経口投与する特許請求の範囲第１３項記載の方法。
15. （１５）スワインソニンと製薬時に許容できるキャリヤ
    の投与量が０．０３〜３００μｇ／ｇである特許請求の
    範囲第１３項または第１４項記載の方法。
16. （１６）ゴルジα−マンノシダーゼIIの酵素阻害物質の
    有効量とインターフェロンまたはインターフェロンの有
    効量を患者に投与する増殖障害、ウィルス性感染および
    新生物形成および転移の予防および治療方法。
17. （１７）ゴルジα−マンノシダーゼIIの酵素阻害物質が
    スワインソニンである特許請求の範囲第１６項記載の方
    法。
18. （１８）インターフェロンまたはインターフェロン誘導
    物質がα−またはβ−インターフェロンである特許請求
    の範囲第１７項記載の方法。
19. （１９）インターフェロンまたはインターフェロン誘導
    物質がポリ（Ｉ．Ｃ．）である特許請求の範囲第１７項
    記載の方法。
20. （２０）インターフェロンまたはインターフェロン誘導
    物質がポリ（Ｉ．Ｃ．）−ＬＣである特許請求の範囲第
    １７項記載の方法。
21. （２１）スワインソニンの投与量が０．０３〜３００μ
    ｇ／ｇである特許請求の範囲第１７、１８または１９項
    記載の方法。
22. （２２）スワインソニンの投与量が０．０３〜３００μ
    ｇ／ｇである特許請求の範囲第２０項記載の方法。
23. （２３）α−またはβ−インターフェロンの投与量が１
    ０＾２〜５×１０＾７単位／ｍ＾２である特許請求の範
    囲第１８項記載の方法。
24. （２４）ポリ（Ｉ．Ｃ．）の投与量が０．０１〜１００
    μｇ／ｍ＾２である特許請求の範囲第１９項記載の方法
    。
25. （２５）ポリ（Ｉ．Ｃ．）の投与量が０．０１〜１００
    μｇ／ｍ＾２である特許請求の範囲第２０項記載の方法
    。
26. （２６）酵素阻害物質を経口投与し、インターフェロン
    またはインターフェロン誘導物質を静脈内、筋肉内、腹
    膜内または局所に投与する特許請求の範囲第１６項記載
    の方法。
27. （２７）スワインソニンを経口投与し、α−またはβ−
    インターフェロンを静脈内投与する特許請求の範囲第１
    ８項記載の方法。
28. （２８）スワインソニンを経口投与し、ポリ（Ｉ．Ｃ．
    ）を静脈内投与する特許請求の範囲第１９項記載の方法
    。