JPS6287516A - 悪性腫瘍の生体外での処置法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は白金配位化合物とジヒドロピリジン級のカル
シウム径路遮断性化合物とを投与する悪性腫瘍の処置法
、及び上記の白金配位化合物とカルシウム径路遮断性化
合物とを含む悪性腫瘍治療剤に関する。より特別にはこ
の発明は上述の２種の化合物としてシス−ジアンミンジ
クロロ白金（［）とニフェジピンを備える悪性腫瘍の処
置法と治療剤に関する。

ｍとＵ忙 シス−ジアンミンジクロロ白金（ＣＤＤＰ、シスプラチ
ン）は臨床上で癌の治療に用いられた最初の無機抗腫瘍
剤である。ローゼンバーグ（Ｒｏｓｅｎ　−ｂｅｒｇ）
等によって述べられているように（Ｎ　ａｔｕｒｅ２０
５　＋’　６９　Ｂ　（１９６５）　、Ｎａｔｕｒｅ　
２２２．３８５（１９６９））シスプラチンは、最初に
利用されたように胚新生物に対し有効である（　Ｅ　１
ｎｈｏｒｎ等。

Ｉｎｔ、Ｍｅｄ、８７．　２９３　（１９７７）　）　
ｃ７）みならず肪胱及び卵巣癌、そして頭部及び頚部の
癌に対しても有効な抗腫瘍剤である。シスプラチン単独
またはシスプラチンと他の抗腫瘍剤（例えばアドリアマ
イシン、ビンクリスチン等）との組合せによって、例え
ばエストロゲン耐性の両立腺癌のような通常、化学療法
に応じないと考えられるものを含む多数種の悪性腫瘍を
化学療法で治療するための受容されうる標準的な治療剤
が附与される（ＭａｒｒｉｒｌＣ−Ｅ、　ｅ　Ｃａｎｃ
ｅｒＴｒｅａｔ、Ｒｅｐ、　　６３．　１５７９（１９
７９））。この、そして他の白金配位化合物は例えば米
国特許Ｎα４．１４０，７０７１．Ｎα４Ｊ７７．２６
３及びＮα４，４１９，３５１　に示されている。

不幸なことに、当初はシスプラチンに対し感応していた
悪性腫瘍にシスプラチン耐性が発生ずることによって問
題が起きている（Ｌｅｅ等、ＣａｎｃｃｘＴｒｅａｔ、
Ｒｅｖ、１０．　３９　（１９８３）　）ｏ他の化学療
法用の薬剤についてと同様に一次腫瘍及び再発性の転移
のシスプラチン耐性によってシスプラチンを用いる化学
療法におき、部分的或は完全な緩解度を達成する上で１
５％から７０％を越える緩解度の低下が翠丸癌（Ｓｔｏ
ｔｅｒ等、（：ａｎｃｅｒ　５４　。

１５２１、（１９８４））及び卵巣癌（Ｂｅ１ｉｎｓｏ
ｎ等、Ｃａｎｃｅｒ５４，１９８３　（１９８４））に
ついて、また３０−４０％の緩解度の低下が頭部及び頚
部の癌について（＼Ｖｉｔｔｅｓ等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｔ
ｒｅａｔ、　Ｒｅｐ、　６３　。

１５３３　（１９７９））、生じている。

癌の化学療法的な処置で遭遇する最も重大な問題は、−
次腫瘍の細胞による薬剤耐性の存在及び／または発達に
ある。患者が転移癌により死亡すると転移癌の病巣も普
通、利用可能である化学療法用の薬剤の単一のもの或は
組合せられたものに対する極度の耐性によって特徴付け
られる。一般に薬剤耐性の腫瘍細胞は、化学療法剤に屈
服する細胞が蓄積するよりも少量（致死量以下の量）の
薬剤を蓄積するのみである。薬剤耐性の腫瘍は一時的な
ものか永久的なものかに分級できる（ＤｅＶｉ　ｔａ　
。

Ｖ、Ｔ、、Ｃａｎｃｅｒ５１，１２０９　（１９８３）
）。

一時的薬剤耐性の腫瘍は、例えば循環系から遠い腫瘍細
胞の薬剤に対する致死下の接触（すなわち漂流関門によ
るもの）のような生理学的要因の結果として耐性を有す
ると考えられる（　Ｓ　ｕｔｈｅｒｌａｎｄ　。

Ｒ，Ｍ、等、Ｊ　、　Ｎａｔ　、　０．ａｎｃｅｒ　Ｉ
ｎｔ、　４６　、１１３（１９７１）　、Ｗｅｓｔ、　
Ｇ、　Ｗ、等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５゜工瓜、３６６５
　（１９８０））。また腫瘍の全体的す成長動態（５ｈ
ａｃｋｎｅｙ、　Ｓ　、　Ｅ−等、Ａｎｎ　−Ｉ　ｎｔ
。

Ｍｅｄ、８９，１０７　（１９７８））が腫瘍細胞の一
時的な耐性において重要な要因であると示唆されている
（すなわち、ゆっくり或は非同時的に成長している腫瘍
細胞は注入された抗癌剤に対しより接触し難いと考えら
れる。）。永久的な薬剤耐性の腫瘍細胞は自然発生的に
生じると考えられ、その生存確率は腫瘍量及び／または
腫瘍量と関係がある。薬剤耐性の新生物の自然発生の遺
伝学的起源（Ｇｏｌｄｉｅ及びＣｏｌｄｍａ、ｎ　、　
Ｃａｎｅｅｒ　Ｒｅｓ、　４４　。

３６４３　（１９８４））、転移性からみての突然発生
（ｌＦ’１ｄｌｅｒ、　　Ｉ　、　Ｊ　、　、（：ａｎ
ｃｅｒ　Ｒｅｓ、人８゜２６５１　（１９７８））、及
び薬剤感性からみての突然発生（Ｔａｎｉｇａｗａ　、
　Ｎ、等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　４４゜２３０９　
（１９８４））の概念は、腫瘍細胞の永久的耐性の機序
として広く認められるに至っている。永久的な薬剤耐性
のこれらの２つの主要な機序は、薬剤を「不活性化する
」耐性細胞中の酵素の濃度或は活性度の変化により（３
ａｋｋａ　、　Ａ−等、或は薬剤流入の阻止及びまたは
薬剤流出速度の増大によって細胞への薬剤蓄積を減少さ
せる耐性細胞のプラスマ膜の変化により（Ｇｉａｖａｚ
ｚｉ　、　Ｒ−等、Ｃａｎｅｅｒ　Ｒｅ５−±３．　２
２１６　（１９８３）　、ＹａｎｏｖｉｃｈＳ８等、Ｃ
ａｎｃｅｒＲｅｓ、　４４．４２６５　（１９８４））
、仲介されることが見出されている。

薬剤耐性を回避するための当初の試みは、単一の化学療
法剤を使用しその投与計画、用量及び／または使用法を
変更することに集中されていた（　Ｂｅｎｚ、　Ｃ、等
、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、４２　、’　２０８１（１９
８２）、Ｑｚｏｌｓ　、　Ｒ，Ｆ−等、Ｃａｎｃｅｒ　
Ｒｅｓ、　４２　、４２６５（１９８２））。しかしな
がら異なった活動機序を有する細胞毒性の薬剤を使用す
る複合剤による治療の方が、ずっと見込みがあるように
考えられる。本型式の治療法はい（つかの癌の治癒率を
改善はするが、この戦略の結果としての失敗も数多く報
告されている（Ｌｉｎｇ、　Ｖ、等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｔ
ｒｅａｔ。

Ｒｅｐ、６７、　８６９　（１９８３）　、Ｃ１ｔｒｉ
ｎ、　Ｄ、　Ｌ。

等、Ｃｅｎｃｅｒ５旦、２０１　（１９８２））。

最近、癌の化学療法的な措置に大いに役立ちうる新たな
方法論が提唱されて来ている。この方法論は、細胞毒性
の薬剤の初期の殺害率を高めるように作用する薬剤及び
／または腫瘍の薬剤耐性を克服するように抗腫瘍剤の能
力を高める薬剤を使用するといったものである。

１１ｈｂａ　、　Ｍ−等（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　３
９　、２２００（１９７９））はアドリアマイシン及び
ダウノルビシンに耐性のＰ３８８白血病細胞によるアド
リアマイシン及びダウノルビシンの取り込み及び貯留が
、耐性細胞による２つの細胞毒性剤の活発な外部輸送（
運び出し）によって仲介され有為に減少されると、報告
している。かかる発見は耐性腫瘍細胞からの細胞毒性剤
の外部輸送を克服するのに脱活性化合物を利用可能であ
ろうことを、示唆している。Ｒｉｅｈｍ及びＢｉｅｌｄ
ｅｒ　（１９７２年）はチャイニーズ費ハムスター細胞
のアドリアマイシンＤ耐性を、洗浄剤ＴＷｅｅｎ　８０
を用いた措置により克服できたと報告している。また■
ａｌｅｒｉｏｔｅ等（Ｖａｌｅｒｉ６ｔｅ　’ｆ？　、
等、（：ａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　３９　、２０４１（
１９７９））は脱活性の抗生アンホテリシンＢが、ＡＫ
Ｒ白血病に対するアドリアマイシン及びビンクリスチン
の効果を高めるのに役立ったと報告している。Ｔｓｕｒ
ｕｏ等（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　４１　。

１９６７　（１９８１）　）はフェニルアルキルアミン
級のカルシウム径路遮断剤（ベラパミー／リヲ、生体外
（管内）及゛び生体内でＰ３８８白血病のビンクリスチ
ン耐性を克服するのに用いている。

Ｔｓｕｒｕｏの次いでの報告（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、
　　４２．４７３０（１９８２）、４３．２２６７　（
１９８３ｃ）、４４．４３０３　（１９８４））及び他
の研究者による報告によって、ベラパミール（５１ａｔ
ｅｒ等１Ｊ−Ｃ１１ｎ、　　Ｉｎｖｅｓｔ、　　７０．
　１１３１　　（１９８２））−ｍ−−τ 及び他のカルシウム制御性化合物（Ｑａｎａｐａｔｈｉ
等、（：ａｎｅｅｒ　Ｒｅｓ、　４±、５０５６　（１
９８４））が薬剤耐性の腫瘍に対する抗癌剤の細胞毒性
効果を高めるのに有用であることが確定されている。

ベラパミールが未処置及び耐性の腫瘍細胞からのアドリ
マイシン、ビンクリスチン及びダウノルビシンの流出を
減少させうることが、実証されて来ている。これからし
て細胞毒性剤の細胞内への有効な蓄積が増し、抗腫瘍剤
のＬＤ５０濃度がｉＬ＆少する。ダウノルビシン耐性及
び感性のエールリヒ（Ｅｈｒｌ　ｉｃｈ　）腹水癌細胞
のダウノルビシン蓄積及び貯留能力は、培養培地中のＣ
ａ　□）６度が高いほど低くなる（Ｍｕｒｒａｙ等、Ｃ
ａｎｅｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐ、　Ｐｈａｎｎａ
ｃｏ１１３．６９　（１９８４））。耐性のエールリじ
腫瘍細胞中でのダウノルビシンの細胞毒性を増すことと
するベラパミールの能力は、カルシラノ、流入を阻止す
るといったベラバミールの能力に少なくとも部分的には
由来するものであって、細胞外のＣａ　を減少させるこ
とによって得られる効果に類似した効果をもちつる。

°　シスプラチンの細胞溶解作用の機序は、白金の半量
が標的細胞の核内にＤＮＡ−ＤＮＡ及びＤＮＡ−たんば
く質の架橋を形成する能力をもち、かくして新たなｎ１
ＲＮＡの転写とＤＮＡの複製が阻止されることにあると
知られている（　Ｒｏｂｅｒｔｓ　、　Ｊ　。

Ｊ、著ｒＭｏｌｅｃｕｌａｒ　　Ａｃｔｉｏｎｓ　ａｎ
ｄ　Ｔａｒｇｅｔｓ　ｆｏｒ　ｃａｎｃｅｒＣｈｅｍｏ
ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ＡｇｅｎｔｓＪ−＝ニーヨー
クの）〜ｃａｄｃｍｉ　ｃＰ　ｒｅｓｓ肚、１９８１年
発行の第１７頁）。しかしながらシスプラチンに対して
の耐性の正確な機序は知られていない（Ｃｕｒｔ等、Ｃ
ａｎｃｅｒ　Ｔｒｅａｔ、　Ｒｅｐ。

旦８．　８７　　（１９８４）　）　。Ｓｉｇｄｅｓｔ
ａｄ等（ｃａｎｃｅｒＴｒｅａｔ　、　　Ｒｅｐ、　　
６５．　８４５　　（１９８１）　）　に！＊スミの線
維肉腫の細胞が生体内でシスプラチンに対し、０１期が
１０の因数で最も感性であるも細胞周期の全期（Ｇｌ、
Ｓ、Ｇ２及Ｍ）において感性であると、報告している。

この資料は、ゆっくりと成長しつつある細胞或は非同時
的に成長しつつある腫瘍細胞が結局はシスプラチン耐圧
を表すこととなる細胞の母集団であろうことを、示唆し
ている。細胞周期の成長速度或は相が酵素活性或は（シ
スプラチン耐性を基準としての）耐性細胞の膜に影響を
及ぼすかどうかについては知られていない。

シスプラチン耐性の機序についての理解がこのように欠
除していることからして、シスプラチン耐性の腫瘍細胞
の問題をシスプラチン類似化合物の開発により避けて通
ろうとする試みがなされて来ており、そのような類似化
合物は目下、臨床試験に附されている。不幸なことに類
似化合物の多（はシスプラチンはど抗腫゛癌性でなく、
これよりして耐性の腫瘍集団を生き延べさせ増殖させる
ような薬剤療法の可能性が未だ残されている（Ｒｏｓｅ
等、Ｃａｎｑｅｒ　Ｔｒｅａｔ、　Ｒｅｐ　、　６６　
ｒ　　１３５Ｇ９８２））　。

シスプラチンの抗新生物効果を１頂めるのに非化学療法
剤を利用することについてはほとんど研究されておらず
、これはおそらくンスブラチン：Ｔｉ１Ｊ　ｉ生の機序
が未知のままに残っていることを理由としていよう。放
射線検査技師であるＭｉｓｏｎｉｄａｚｏｌｅ　はネズ
ミの小網細胞癌Ｍ　５０７６に対する試験ｌｌｌ１こ、
シスプラチンではなくシクロホスファミド及びＬ−フェ
ニルアラニン剤の細胞溶解効果が高められることを発見
している（（、Ｉｅｍｅｎｔ等、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ、
４０．４１６５　（１９８０））。培養Ｈｅ　Ｌａ細胞
及びマウスＦ　Ｍ　３　Ａ細胞を用いた早期の研究では
ベラパミールが、ペプロマイシン（ｐｅｐｌｏｍｙｃｉ
ｎ。

抗生物質のブレオマイシン群の一員）の細胞溶解効果を
高めたがシスプラチンの細胞溶解効果を高めることはで
きなかったとされている（Ｍｉｚｕｎｏ及びｌ５ｈｉｄ
ａ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ　、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ
、　Ｃｏｍｍｕｎ−１０７，１０２１（１９８２））　
　。

Ｔｓｕｒｕｏ等（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　４１　、
　１９６７（１９８１））、は生体外で、カルシウム径
路遮断剤であるベラパミールが正常及び薬剤耐性のネズ
ミの腫瘍に対する抗腫瘍剤の効果を高めることを示した
（　’Ｉ’５ｕｒｔｎ等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、４２
　、４７３０　（１９８２）　）。

ベラパミールによるこの抗腫瘍剤効果の向上は、ベラパ
ミールがビンカ赤アルキロイド（ｖｉｎｅａａｌｋｙｌ
ｏｉｄ　）の細胞溶解効果を高めもしく　’ｆ’　５ｕ
ｒｕ。

等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　４３　、８０８　（１９
８３ａ　）　）アントラシフリン（ａｎｔｈｒａｅｙｃ
ｌｉｎｅ　）抗生物質の細胞溶解効果を高めもする（１
７ｓｕｒｕｏ等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ。

４３．２９０５　（１９８３ｂ））ことから考えて、や
や不特定であるように見受けられる。ベラパミールが細
胞溶解効果を向上させる能力は、ネズミの腫瘍細胞系に
対するものに限定されない。

ＲＯｇａｌｌ等（３ｃｉｅｎｃｅ　２２４，９９４　（
１９８４）ノはベラパミールが培養されたヒト卵巣癌細
胞系に対するアドリアマイシン耐性を克服することを示
し、またＴｓｕｒｕｏ等（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　
４３　、　２２６７（１９８３Ｃ）はベラパミールがヒ
ト造血腫瘍細胞系に対するビンクリスチン及びアドリア
マイシンの効果を増強すると報告している。

カルシウム糸路遮断性化合物（ＣＣＢ）または他の脱活
性化合物により生体内で、正常或は薬剤耐性の腫瘍細胞
系に対する抗腫瘍剤の効果を向上させる問題について述
べている研究者はほとんどいない。Ｔｓｕｒｕｏ等（Ｃ
ａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　４１　、　　ｉ　９６７（１
９８１）　、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　４３　、　
２９０５（１９８３ｂ））は、Ｐ３８８白血病中でのビ
ンクリスチン及びアドリアマイシン耐性が生体内でベラ
パミールにより克服できると、報告している。不幸なこ
とにＰ３８８白血病は固形性腫瘍（５ｏｌｉｄ　ｔｕｍ
ｏｒ）ではなくて液性腫瘍であり、またヒトにおいて致
命的な悪性腫瘍の大多数は固形性腫瘍及び／またはその
転移腫である。Ａｋａｇａｗａ　、　Ｓ　０等（Ｋａｇ
ａｋｕ　Ｎｙｏｋ。

１１．９４３−７　（１９８４））はヒトの食道癌の治
療において、二カージピン（口１ｃａｒｄｉｐｉｎｅ　
）をビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）の硫酸塩及びジ
クロロ白金Ｈと共に用いたと述べている。部分的な感応
が得られている。Ａｋａｚａｗａ　、　Ｓ−等は食道癌
の処置に際し、大音投与（血流中で１−当り５００ナノ
グラム）によってビンデシン硫酸塩（ＶＤＳ）及びジア
ンミンジクロロ白金（［）（ＣＤＤＰ）　の効果が高め
られるらしいことを、発見している。同処置の結果とし
て種々の腫瘍の後退が得られているようであるけれども
、二カージピンの有効な用量が多く、より低い用量では
効果があられれていない。本試験はＣＤＤＰではなくＶ
ＤＳの効果を高めるためのものである。

出願人が特願昭５９−６２０６２号（特開昭６０−６６
１３号）で述べているように、ジヒドロピリジン級のＣ
ＣＢはその抗転移効果がベラパミールよりも強力である
ことが見出されている。Ｋｅｓｓｅｌ及びＷｉｌｂｅｒ
ｄｉｎｇ　　（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ
、　３３　、　１１５７（１９８４））ｉ；！ベラパミ
ールと二トシンンピン（ｎ１ｔｒｅｎｄｉｐｉｎｅ、ジ
ヒドロピリジン級のＣＣＢ）とが、Ｐ２Ｓ５及びＰ３８
８／ＡＤＲの耐性細胞培養物中でダウノルビシン（ｄａ
ｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ　）　＋７）　’Ｍ　積ヲ仲介す
る上で互に異なった活動型式を示すことを。

発見している。ベラパミールはダウノルビシンの蓄積を
高めるのに、耐性細胞中でよりも正常細胞中でより優れ
た能力を示している。これに対しニトレンジピンによる
ダウノルビシンの蓄積向上は両Ｐ３８８細胞系において
等しかった。また両腫瘍細胞系でのダウノルビシンの蓄
積を高めるニトレンジピンのロヒカは、ベラパミールの
それよりもずっと（マイクロモルのオーダー）優れてい
た。

コレラの個々の研究者による成果は、ジヒドロピリジン
級のカルシウム径路遮断性化合物が抗癌特性においてベ
ラパミールよりも優れているといった、以前に発表され
た）（ｏｎｎ等の業積を支持する。ものとなっている。

しかしながら従来技術には選択されたカルシウム径路遮
断性化合物の低い用Ｂ１を、腫瘍の減少或は後退のため
に白金配位化合物と共に用いるようなことについての示
唆がみられない。

目　　　的 したがってこの発明は、悪性腫瘍の後退或は転移の減少
を生じさせる悪性腫瘍の処置法と薬剤組酸物とを提供す
ることを目的とする。このためには、ジヒドロピリジン
級のカルシウム径路遮断性化合物を白金配位化合物と共
に投与する方法を提案する。さらにこの発明は、単純で
有効な処置法を提供することも目的としている。

一般的な説明 この発明は悪性腫瘍を生体外で処置する方法であって、
一般式 （式中、Ｒ２及びＲ２はメチル基、Ｒ３及びＲ４は１−
８個の炭素原子を含むアルキル基またはアルキルオキシ
アルキレン基、Ｒｓ及びＲ６は水素または１個或は２個
の電子奪取性の置換体である。）で示される群から選択
されたジヒドロピリジン級のカルシウム径路遮断性化合
物を白金配位化合物と共に腫瘍に対し、白金配位化合物
１１を独で達成されるよりも高い腫瘍後退の増大もしく
は腫瘍転移の減少もしくは腫瘍後退の増大と腫瘍転移の
減少が得られるような有効量だけ投与することを特徴と
する、悪性腫瘍の生体外での処置法に係る。

この発明はまた、（ａ）一般式 （式中、Ｒ１及びＲ２はメチル基、Ｒ３及び１り、は１
−８個の炭素原子を含むアルキル基またはアルキルオキ
シアルキレン基、Ｒ５及びＲ６は水素または１個或は２
個の電子奪取性の置換体である。）で示される群から選
択されたジヒドロピリジン級のカルシウム径路遮断性化
合物、ｔｂ）抗腫瘍性の白金配位化合物を含み、カルシ
ウム径路遮断性化合物と白金配位化合物との重量比がｉ
：１ｏｏｏから１０：１の範囲にある悪性腫瘍治療剤に
係る。

上記した薬剤組成物は乳糖、ショ糖、でん粉、ゼラチン
、微品質セルローズ、ステアリン酸マグネシウム或はタ
ルクのような固体賦形剤と混合して錠剤、カプセル剤或
は糖剤の形式で径口投与できる。同組成物は矯味シロッ
プ或はチンキを用いて、径口投与に適したものともでき
る。非径口投与は水溶液、水性エタノール溶液或は油性
の形で行なえる。水性溶液は水、生理的食塩水、リンゲ
ル液等で緩衝剤と共に、或は緩衝剤なしに調製すること
ができる。油性形式のものは例えば、天然油（ピーナツ
油とかオリーブ油）或は安息香酸ベンジル中でつくりう
る。カルシウム径路遮断性化合物を径口的に、白金配位
化合物□を注射により、投与することも望ましい。

好ましいカルシウム径路遮断性化合物としてはニフェジ
ピン（ｎ１ｆｅｄｉｐｉｎｅ）、ニモジピン（ｎｉｍｏ
ｄｉｐｉｎｅ　）ニルジピン（ｎ１ｌｕｄｉｐｉｎｅ入
ニソルジピン（ｎ１ｓｏｌｄｉｐｉｎｅ）、ニトレンジ
ピン（ｎｉｔｒｅｎｄｉｐｉｎｅ）　及びフェロジピン
（ｆｅｌｏｄｉｐｉｎｅｊがある。これらは全て、密接
に関連し合っている同族体或は類似体である。好ましい
電子奪取性の置換体としては周知のように、ニトロ基或
はへ口基（フルオロ基、クロロ基、ブロモ基）がある。

明細な説明 図面に示す試験結果について 第１図はＢ１６ａ腫瘍細胞の三次培養物にχ・１するシ
スプラチンの細胞毒性効果を示すグラフである。ＣＰＲ
−０，２５及びＣＰ　Ｒ−５，０で示されている細胞は
、Ｂ　１６　ａ細胞の一次培養物を２回、フラスコ中を
通過させたものである。各通過中に細胞を１日１回、４
Ｄ間にわたりそれぞれ０．２５μＭないし５，０μＭの
シスプラチ７（ＣＴＳ）で処理した。５　ＩＩ　Ｕに細
胞を再び平板培ｉ７した。

「正常」細胞は対照として、２回通過させ食塩水で処理
したものである。ＣＰ　Ｒ−５，０細胞は「正常」細胞
及び低濃度（０，２５，μへ１）シスプラチンで処理し
た細胞と比較して、シスプラチンの抗増殖効果に対し有
為に抵抗する。グラフ中の各俸線は５個のフラスコより
成る各群についての結果を表している（平均＋／−３Ｅ
Ｍ）。

第２図はシスプラチンによるＢ　１６　ａの増殖阻止効
果の経時変動を示すグラフであるｏ　Ｂ１６ａ細胞の二
次培養物を第１１．］　Ｌ１に平板培養した（４．０．
０００細胞／′フラスコで）。４Ｆ１目にシスプラチン
を加えた（０．５μ■し′フラスコ）。５Ｅ］目にＩＸ
で示しているフラスコについての細胞培養を終了した。

培地を捨て、付着細胞をトリプシンで分離した。

残りのフラスコにはシスプラチンをυＩＩえ、１　？！
１宛順次、１［１ごとに培養を終了していった。全ての
肝について細胞の生存率は８５％より高かった（終了時
において）。対照フラスコは平均で１０／６細胞／フラ
スコの細胞を含み、グラフ中では１００％に等しいとお
いている。棒線は５個のフラスコより成る各群について
の結果を表している（平均十／−５ＥＭ）。

第３図は生体外（管内）でシスプラチンの抗増殖効果に
対しカルシウム径路遮断性化合物としてのニフェジピン
（ＮＰ）が与える増強効果を示すグラフである。ニフェ
ジピン（５，０／ｌｋｌ　）　ｌｂ−Ｕ　同一フラスコ
に加えたシスプラチンよりする増殖１且止効果は、これ
らの何れかのみで処理したフラスコ中で観察された阻止
効果よりも高かった３、ｊ′ｉ１則１ｑ（４０，０００
／フラスコ）を第１　ＩＩ　Ｌ’１．ｌこ平Ｕ・ｉ培（
ｊし、薬剤添加を４　＋−１［ｌから始めて、８１−１
１．、、Ｉの終ｊ′［Ｉまで毎ｌ−１、添加を続けた。

付ｒｔ　ｉｎ胞の生存率は８５％より高かった。対照フ
ラスコ中ＯＪ）　ｋｔ＋＋　胞ｏ＞　平均個数（１，８
Ｘ　１０／　６）を、グラフ中で１００％に等しいとお
いた。棒線は５個のフラスコより成る各群についての結
果を表している（平均−罎−・−３ＥＭ）。

第４ａ図及び第４　＋）図はそれぞれ、マウスの生体内
での一次Ｂ１６ａ腫瘍の重ｈ１及び練性転移の個数に対
しニフェジピン（単独）、シスプラチン（単独）、及び
ニフェジピン　プラス　シスプラチンの効果を示すグラ
フである。ニフェジピン（単独）は腫瘍重量或は転移個
数にχ・１し有為の効果を持たなかった。シスプラチン
（単独）は腫瘍重量及び転移個数の両者を有為に（ｐ＜
、ｏ５）減少させた。ニフェジピンとシスプラチンとの
両者で処理した群は一次腫瘍重量１を著減せしめられ、
また転移が全く無かった。棒線は各群（ｎ＝５）につい
ての平均＋／−５ＥＭを表している。対照の平均は２９
＋／−３，５の転移個数、２．５＋／−０，３ｇの一次
腫瘍重量を有していた。

第５ａ図及び第５　ｂ図はマウスの生体内での一次Ｂ１
６ａ腫瘍の重量及び練性転移の個数に対するニフェジピ
ン（単独）、シスプラチン（単独）、及ヒニフエジピン
　プラス　シスプラチンの効果を示すグラフである。ニ
フェジピン（単独）で；３回の処理（３Ｘ）は上記何れ
の指標に対しても効果を有しなかった。シスプラチン（
単独）での処理及びシスプラチンとニフェジピンとでの
処理を１回行なったもの（ＩＸ）は、−次腫瘍東量及び
転移個数を有為に（ｐ＜、０５）減少した。しかしなが
らこれらの２群間には差がみられなかった。

シスプラチン（単独）での処理及びシスプラチンとニフ
ェジピンとでの処理を３回行なったもの（３Ｘ）は、−
次腫瘍重量と転移個数とをさらに減少した。シスプラチ
ン（単独）での：３回処理の細胞群（３Ｘ）は、１回処
理の細胞群（ＩＸ）と有為の差を有しなかった。これに
刻しシスプラチンとニフェジピンとの両者で３回処理し
た細胞群（３Ｘ）については、対照ノ洋に対してはもと
より処理した群の他の何れに対しても有為の差（＜。

０１）の減少が得られた。対照（ロー１２）についての
平均の転移個数は４４　＋／　−５、−次腫瘍重量は２
．６　＋　／　−０，４９であった。

第６ａ図及び第６ｂ図はそれぞれ、Ｂ　１６　ａ腫瘍細
胞系についての肺１生転移個数及び−次；１・Ｒ瘍重量
に対するニフェジピン（単独）、シスプラチン（！１ｉ
ｆｌり、及びニフェジピン　プラス　シスプラチンの３
回投与の効果を示すグラフである。ニフェジピン（単独
、１．　Ｏｌ１ｇ／’）、ａ体重の用量の投与）は、転
移個数に対しても腫瘍重量にχ−ｔ　（、てらｆＴ　７
．’ｈの効果を与えなかった。シスプラチン（ｆｉｔ独
、４η、、／’ｌ（ｇ体重の用量の投与）は、転移個数
及びルＦ瘍重；１℃を有為Ｒ：　（ｐ　＜、　　０１）
減少させた。ニフェジピン及びシスプラチンの両者で処
理され群は、１　（’、）　−ｇ７ｋｇのニフェジピン
予処理のみて有為の（ｐ＜、００１Ｊ抗腫瘍効果を現出
した。シスプラチンに先立って与えられた０、　１或は
ｌ、Ｑｍｇ／ｋｇのニフェジピンは、シスプラチンの抗
腫瘍効果を高めなかった。棒線は１１匹のマウスから成
る各［ｔについての平均十／ＳＥＭを表す。

第７ａ図及び第７ｂ図はそれぞれ、ルイス肺癌腫（３Ｌ
Ｌ）について−次腫瘍の重量と肺性転移の個数に対する
ニフェジピン（単独）、シスプラチン（単独）、及びニ
フェジピン　プラス　シスプラチンの２回投与の効果を
示すグラフである。

ニフェジピン（単独）は腫瘍重量に対してモ転移個数に
対しても効果を有しなかった。シスプラチン（単独）も
、腫瘍重量と転移個数の何れに対しても効果を示さなか
った。ニフェジピンとシスプラチンとの両者で処理した
群は、−次腫瘍重量の有為の減少（ｐ〈１．０５）を示
し、また転移個数が著減（ｐ＜、Ｏｆ）した。棒線は１
１匹のマウスから成る各群についての平均＋、／”−３
ＥＭを表す。

第８図は非処理（対照）、ニフェジピン単独（１０ｕ／
ｈｇを径口投与）、シスプラチン単独（４ｍｇ／ｋｇを
静脈注射）、及びニフェジピンとシスプラチンとの両者
（シスプラチンの投与２０分前にニフェジピンを投与）
の各効果を、マウスの生存日数で比較した結果を示すグ
ラフである。シスプラチン耐性の８１６ａ細胞は培養物
からのものであり、第０日に静脈注射（３７，０００細
胞／マウス）した。上記の薬剤は４目目、１４０目及び
３６１１目に投与した。両種の薬剤で処理したグループ
は他の３グループの平均と比較して、Ｔ　Ｉ／２　（１
，／２生存時間）において約１００％の増加を示した。

試験計画と試験法 （１）、腫瘍 Ｂ１６メラニン欠乏黒色腫（Ｂ１６ａ）とルイス（Ｌｅ
ｗｉｓ　）肺癌腫とを生体内での試験のために、これら
が自発性起源の２つの組織学的に区別される腫瘍型の代
表であることからして、選択した。

これらの両癌腫は肺に対し自発的に転移し、また同一の
マウス株（Ｃ５７ＢＬ／６　Ｊ）に対し同質遺伝子的で
ある。また該両細胞系は同一の方策（プロトコール）を
用いて分散及び水ひでき（次の（２）を参照）ると共に
、培養物中に移しえ、皮下注射及び尾部静脈注射により
マウスに注入できる。

これらの両腫瘍細胞系はアメリカ合衆国、ワシントン州
のナショナル・キャンサー・インスチチュートのディシ
イティ・ヒユーマン・アンドΦアニマル・インベステイ
ゲーションＯチューマ・バンク　　（ｉ、ｔｈｅ　　Ｄ
ＣＴ　　Ｈｕｍａｎ　　ａｎｄ　　Ａｎｉｍａｌ　　Ｉ
ｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎＴｕｍｏｒ　　Ｂａｎｋ　　
ｏｆ　　ｔｈｅ　　Ｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｃａｎｃｅｒ
　　Ｉ　ｎ５ｔｉｔｕｔ、ｅ　）　　から入手した。同
腫瘍は同質遺伝子的のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雄、２
０　２２９、ジャクソン拳ラボラトリーズ−Ｊ　ａｃｋ
ｓｏｎ　１ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　）に移植して保存
した。同種移植組織の個数が大きい（＞１０）間は、腫
瘍転移能力が安定しなかった。したがって貯蔵腫瘍を各
６回の同種移植後に液体Ｎ２凍結細胞（ＤＣＴから受領
後の第１同量種移植世代からの腫瘍を表す。）から更新
した。

（２）、腫瘍細胞へ北風 生体内での試験においては先行技術が教示するところに
従い、皮下の一次腫瘍から得られた単分散細胞を利用し
た。皮下の腫瘍を逐次的なコラゲナーゼ消化により分散
させた（　Ｓ　ｂ）ａｎｅ等、５ｃｉｅｎｃｅ２１２、
　］、１５１−１１５３　（１９８１））。次に分散細
胞を汚染宿主リンパ球、大食細胞、ＲＢＣ（赤血球）等
から、５１ｏａｎｅ等が述べているように遠心水ひ法で
分離し精製した。腫瘍細胞の水ひ分を等比率で組合せて
汚染宿主細胞が３％より少なく腫瘍細胞生存率が９５％
より高い最終の単分散懸濁物を得た。

（３）、シスプラチン アメリカ合衆国、ニューヨーク州、ンラキューズ（５ｙ
ｒａｃｕｓｅ　）のブリストル・ラボラトリーズ（Ｂｒ
１ｓｔｏｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）により市販さ
れているシスプラチンを使用した。このシスプラチン、
つまリソスージアンミンジククロ白金（ｃｉｓ　−ｄ　
ｉａｍｍ目１ｅ−ｄｉｅｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎｕｍ）
は、シスプラチ７１　ｍｇ当り１０ｍｇのマンニトール
及び９　ｍｙのＮａ（：ｌ　を含む白色の凍結乾燥粉と
して入手可能である。調製は殺菌カラスでの蒸留水中に
１５　ｍｇ、’ｔｒＪの濃度で懸濁させることで、行な
った。上記の濃度は、生体内に０，１−／マウスで注入
したとき／！　ｕｇ／ｋｇ　　のシスプラチンに相当す
る。

＋４）、　　−一次腫瘍 一次皮下腫瘍はｔ（ｏｎｎ、　Ｋ　、　Ｆ、等（ＣＩｉ
ｎ、　Ｅｘｐ。

Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　２．６１　（１９８４）　）が
述べているところに従い、生存水ひ腫瘍細胞のｉｏｏ、
ｏｏ。

個（０月−中）を皮下注射することによって形成した。

（５）、用量と投与及び注入手順 Ｃｈａｈｉｎｉａｎ、　　　Ａ　　、　　　Ｐ　　−等
　　（Ｃａｎｃｅｒ　　Ｒｅｓ、４　　４　．１６８８
（１９８４））に基いて、シスプラチンの用量としテ４
　ｍｇ／ｋｇを選択した。（：１ｌａｈｉｎｉａｎ等は
上記の４吋／ｋｇの用量のシスプラチンをヌードマウス
に対し３週間、各週に与えると認容できる死亡率２４％
（６０Ｅ１以上）が得られる旨、報告している。発明者
らはこのシスプラチン用量をＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスで
試験し、４５０以上で０％の死亡率を見出した（腫瘍を
有しないマウスについて）。ニフェジピンの用量として
は発明者らの特願昭５９−６２０６２号（’１．７開昭
６０−６６１３′１じ）で洟べているニフェジピンの抗
転移及び抗トロンボゲン形成効果（Ｉ（ｏｎｎ、　　　
Ｋ　　、　　　Ｖ　　、　　　等、　　Ｐｒｏｃ、　　
　Ｓｏｃ、　　鱗＜ｐｌ、　　Ｂｉｏｌ、　　ＡＩｃｄ
ｌ　７４　、　１６　　（１９８３）　、Ｑｎｏ市）、
Ｊ、Ｍ　　等、Ｔｈｒｏｍり、Ｒｅｓ、　３４　、　３
６７　（１９８４）　）についての研究成果からして、
１０　ｍｙ／ｋｑの用量を選択した。ニフェジピンのプ
ラスマ中でのピーク濃度が同薬剤（ポリエチレン・グリ
コール４００中）の径口投与後、約２０分間で得られ、
１−２時間の期間で減少して行くことを示したヒトの薬
物動態学についての研究（Ｆｌａｉｍ及びＺｌｉｓ、　
Ｆｅｄ　、　Ｐｒｏｃ。

４０．２８８１　　（１９８１））に基づき、ニフェジ
ピンはシスプラチンを尾部静脈注射するより２０分間前
に径口投与した。ニフェジピンに対する宿主細胞及び腫
瘍細胞の最大の接触は、シスプラチンの尾部静脈注射前
に達成された筈である。シスプラチンは注入直後に腫瘍
細胞中に蓄漬しく　Ｂ　ｅ　ｒｎａ　ｒｄ　。

Ｐ、Ｐ、等、（：ａｎｃｅｒ　ＴｒｅＹｌｔ　、　Ｒｅ
ｐ　、　　６７　、　４５７（１９８３））、投与後に
１時間といった短時間で不活性となるかプラスマから消
失されうる（Ｒｏｂｉｎｓ。

Ａ、Ｂ、等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｒｅａｔ　、　Ｒｅｐ　
、　６７　、　２４５（１９８３））。薬剤の投与口は
一次腫瘍の寸法、制圧転移の存在の確率、及びシスプラ
チンの副作用に対するマウスの耐１’Ｊ＝　（Ｇｕａｒ
ｉｏ、　Ａ　、　ｆｖｌ　、等、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ、
３９．２２０４　（１９７９））を基準に選択した。発
明者らの以前の研究によって肺（生転移は一次Ｂ１６ａ
から腫瘍細胞の移植後１４［、ｉｌ　［１までに、そし
てｔｏ−１４０目に発展するといった並足転移型（ｆｏ
ｏｄｐａｄ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｎｔｏｄｅｌ　）
で行なわれることが、発見されている。シスプラチンの
抗転移効果、そして−次腫瘍に対抗する効果が観察され
るべきことからして、１４１１１Ｊを注入計画の最初の
１１に選択した。次にマウスに対し、腫瘍細胞の移植後
の１７　ＥＩ　ＬＪと２５１１目とに注入を行なった。

これはそのような１］に、マウスが物理的な外観、体重
及び活発さから判定してその前のシスプラチン注入の影
響がおさまるように回復及び／または安定したと見受け
られたためである。

したがって薬剤にニフェジピン及びシスプラチン）口口
に１［１１回、投与された。試験は、薬剤非投与のマウ
スが一次腫瘍及び制圧転移の効果からして著しく病弱化
し死に近付いたことを主たる理由として、３３１１目に
終了した。マウスの腫瘍帯ｆ１′群にニフェジピンのみ
を注入し次いで食塩水をＩｄ部静脈注射するか、ポリエ
チレン・グリコール４００を予め投与した１−でシスプ
ラチンのみを、主人した（単独薬剤によるχ・を照１７
ｊとして）。マパノスをエーテルで１酔させ頚部転移（
ごよって犠牲にした。−次種瘍を取除き評ｉ、ａ　Ｌ／
た。肺を切除してホーインス溶、１にで定：’？　Ｌ／
、可視の肺（トド結　　　　　果 １、テ願昭５９ー６２０６２号（特開昭６０−６６１３
号）に開示した発明者らによる抗転移剤としてのカルシ
ウム径路遮断性化合物についての研究成果に基づき、シ
スプラチンの塞栓効果、細胞毒性効果及び抗転移効果を
高める能力を生１ド外（管内）及び生体内で調べるため
にニフェジピンを選択した。なおニフェジピンは治療［
−１的に用いられている（心臓血’＋’Ｆ　Ｘ　ｋ串〕
１！Ｆ　：：’；　０）ｆ−　ｒ　１Ｂ　１６メラニン
欠乏黒色腫、ネズミの腫瘍細胞系を培養物中で成長させ
るために採用した。増殖試験は薬剤をｉ　ｔ−ｉ　ｉ回
添加した対数期の細胞を用いて行なった。第１図はシス
プラチンで処理しなかったＢｌ　６ａ二次培養物（正常
）、低用量（０，２５）１Ｍ）のシスプラチンで処理し
たＢｌ　６ａ二次培養物（ＣＰＲ−０，２５）　、及び
高用量（５，０μＭ）のシスプラチンで処理したＢ１６
ａ二次培養物（ＣＰ　Ｒ−５，０）について、シスプラ
チンの塞栓効果を示している。シスプラチンの塞栓効果
は、正常Ｂ１６ａ細胞及び低用量のシスプラチン処理の
８１６ａ細胞については互に類似していた。高濃度のシ
スプラチンで予め処理した細胞は、シスプラチンによる
３回目の処理による塞栓効果に抵抗した。正常Ｂ１６ａ
細胞とＣＰ　Ｒ−０，２５細胞との増殖速度はＣＰ　Ｒ
−５，０細胞の約２倍であることを、見出した。細胞の
平均個数は対照フラスコ中では９．２Ｘ１０’細胞／フ
ラスコ、ＣＰ　Ｒ−０２５（シスプラチン感性群）では
８．３　ｘ　１０５細胞／　７ラスコ、モして０．ＰＲ
−５，０（シスプラチン耐性群）では：３．７　Ｘ　１
０５細胞７／′フラスコであった。これらの結果は、培
養１３１６ａ腫瘍細胞中でのシスプラチン耐性が耐性細
胞の成長動態ないしＫ１１ｌ胞周期の関数でありうるこ
とを示唆している。この仮説について調べるべ〈発明者
らは、対数期の正常Ｂｌ　６ａ細胞を］、　−４１１間
、毎Ｌｉシスプラチン（０，５，ｌ１Ｍ）を投与して処
理し、投Ｌｊの２１．−１後に最大の塞栓効果が達成さ
れることを観察した（第２図）。これらの予備実験から
して発明者らは、ンスブラチン感性の条件を極大とする
ために迅速に増殖しつつある正常腫瘍細胞群を用いて、
シスプラチン耐性細胞に対抗する培養物中での正常■３
１６ａ細胞に対する効果を、シスプラチン塞栓促進剤に
ついて試験した。培養Ｂ１６ａ細胞の耐性の機序は腫瘍
細胞膜（シスプラチンの細胞内蓄積に影響する。）の関
数であるのみでなく、細胞周期の関数でもありうる。

シスプラチンの塞栓７／細胞毒性（抗増殖）効果を増強
する能力につき、ニフェジピンを試験した。

第３図に示すようにニフェジピンが、シスプラチンの抗
増殖効果を増強することを見出した。発明者らは以前に
、薬剤学的に許容される量のＣＣＢの日々の適用により
培養物中でのＢｌ　６ａ腫瘍細胞の増殖が阻止されるこ
とを見出した。ニフェジピン単独でもＢ　１６　ａ増殖
を若干阻止するが、ニフェジピンとシスプラチンとの組
合せの方力Ｗ　効である。したがって生体外でニフエジ
ンにより誘発されたシスプラチンの増強された抗増殖効
果はこれらの２つの化合物の相乗作用に山来し、相加作
用にのみ因るものではないと結論された。

生体外での試験に基づいて、ニフェジピンは生体内で皮
下８１６ａ腫瘍及びその（練性）転移に対してもシスプ
ラチンの細胞毒性／塞栓効果を向」−させる能力を有し
つると、仮定した。生体外での試験データは、Ｂ１６ａ
細胞に対する塞栓効果のためにシスプラチンを複数回投
与することが必要であることを示唆している（第２図）
。そこで生ｆＪｓ　内での試験方策として、ニフェジピ
ンとシスプラチンとを１２１１間で３回（３Ｘ）投与す
る方法を採択した。Ｂ１６ａ腫瘍をもつマウスに対し、
シスプラチンを尾部静脈法則する２０分前にニフェジピ
ンを径口投与した。ヒトにおいてはプラスマ中でのニフ
ェジピンのピーク濃度が径口摂取後はぼ２０分で得られ
る（　Ｆ　ｌａｉｍ及びＺｅｌｉｓ　、　ｌ？ｅｄ。

Ｐｒｏｃ、　　４０．　２８８１　　（１９８１）　）
　。ネズミについての薬物動態学的データを有しないた
め、ヒトの動態学的データを利用した。ニフェジピンは
シスプラチンの細胞毒性７／塞閉効果を、（１）−次腫
瘍ノ細胞中でシスプラチンの濃度を、腫瘍への血液流量
を増す（Ｋａｅ　Ｉ　ｉｎ　、〜Ｖ、　Ｇ　　等、Ｃａ
ｎｅｃｒ　Ｒｅｓ、４３．３９４４　（１９８２））こ
とにより腫瘍の低酸素領域中での強力な増加（Ｗｅｓｔ
等、Ｃ旧ＩＣｃｒＲｅｓ、４０．：３６６５　（１９８
０））を含めて増加させることによって、或は（２）シ
スプラチンの最大細胞内濃度を、シスプラチンの輸送／
′透過性に関係する腫瘍細胞膜特性を変更する（　Ｙａ
ｎｏｖｉｃｈ及びＰｒｅｓｔｏｎ、　□ａｎｃｅｒ　　
Ｒｅｓ　、　　４４．１７４３　（１９８４））ことで
高めることによって、或は（３）腫瘍細胞ＤＮＡに対す
るシスプラチン作用を修復するのに必要なＣａ　依存性
の酵素を阻害する（　Ｃｈａｆｏｕｌｅａｓ、　　Ｊ　
。

Ｇ１等、５ｃｉｃｎｃｅ２２４．　１３４６　（１９８
４）　）ことによって、増強しうると想定した。

予備の生体内試験（第４ａ及び４　ｂ図）において、腫
瘍細胞移植後の１４１１．＋　＋１．１７１”＋　１１
及び２３目口に逐次、ニフェジピンとシスプラチンを投
与した。ニフェジピン単独は一次腫瘍重量に対しても原
性転移の個数に対しても、効果をもたなかった。シスプ
ラチン単独は、−次腫瘍重量と原性転移の個数とを有為
に減少させた。ニフェジピンとシスプラチンとの両者を
投与した群は原性転移が全（無く、またシスプラチン群
の平均の腫瘍重量よりも有為に減少されている著減され
た一次腫瘍重はを有した。第１回目と同一の基本方策で
はあるが２　ｎ’ｐを追加した第２回目の生体内試験を
実施した。１群当りのマウス数を５匹から１２匹へと増
し、追加の２群を加えた。新たな２群には薬剤を１回の
み投与することとし、そのうちの−の群にはシスプラチ
ンのみを、他の１洋にはニフェジピン及びシスプラチン
を、それぞれ投与した。

第５図に示すようにシスプラチンの単−回投与は平均腫
瘍重量及び練性転移を減少させうるも、ニフェジピンが
シスプラチンの効果を高め得ながった。シスプラチンを
３回投与した群とニフェジピン及びシスプラチンを３回
投与したｌｊｒとは、予備試験で観察された結果をｉｌ
Ｔ現した。シスプラチンを３回受取った群（３Ｘ）は対
照７！’ｒ、及びシスプラチンを】回受取ったノ１ｔと
ｔＪ比して、平均の腫瘍重量及び転移個数を有為に減少
された。ニフェジピン及びシスプラチンを３回受取った
群（３Ｘ）は平均のル■瘍重量と原性転移の個数を一層
減せしめられ、その減少度は対照Ｉｆｆ　、ｌ！＝　Ｚ
ｌ比してはもと、Ｊ、リシスプラチン３回投与ＩＦＴ、
（３Ｘ）と対比してもずっと大であった。

Ｂｌ　６ａル■瘍系を用い、前述したのと同一の時期で
の薬剤注入及び試験終了を行なう試験を実施した。試験
方策を、組合された２種の薬剤による措置を受ける群の
数を１から３へと増すように変更した。これらの３１！
ｔについてシスプラチンの用量を４　票ｇ／ｋｇ体重と
一定にし、ニフェジピンの用量を変えた。ニフェジピン
を第１の肝にはＯ，ｌ　ｍｙ　７に９、第２の群には１
．０　ｍｇ／ｋｇ、第３の群には１０．０ｍｇ／ｋｇ、
それぞれ投与した。第６図に示すようにシスプラチンの
抗腫瘍効果を向上させるニフェジピンの働きは、ニフェ
ジピンの用量と正の相関々係を有した。ニフェジピンの
濃度（用量）が０．１１１１９７ｋｇから１．　Ｏｍｙ
／ｋｇへと、そして１．　Ｏｍｙ／ｋｇから１０ｍｇ／
ｋｇへと増されると、シスプラチンの抗腫瘍及び抗転移
効果も増した。シスプラチン単独の抗腫瘍効果（第６ａ
図）は、対照腫瘍の重ｆｆｉと対比して有為の（ｐ＜、
０１）−次腫瘍重量の減少を引起した。シスプラチンに
先立って与えた０、１或は１、０　ｍｇ／ｋｉ＋のニフ
ェジピンは、シスプラチンの抗腫瘍効果を高めえなかっ
た。しかしながら１０．０−ｐ／ｋｇニフェジピンでの
予装置は、シスプラチン単独による処置或はニフェジピ
ンによる２低用量での処置と比較して、シスプラチンの
抗腫瘍効果を有為に（１）＜、００１）高めた。原性転
移に対すルＭ　似ノ効果が第６１）図に示されている。

シスプラチン単独による処置と対比してのニフェジピン
による予装置を行なった場合の効果向上は、ニフエジピ
：／の用量が１０　ｍｇ／’ｋｇのときにのみ観察され
た。第６ａ及び６り図に示したように１０　ｍｐ／′ｋ
ｗのニフェジピン単独は、対照Ｒと対比してみて一次腫
瘍重量に対しても原性転移に対してもｆ”Ｊら有為の効
果を示さなかった。これらの試験に基づいてニフェジピ
ンの望ましい用量は曲孔動物の体重１　ｋｇ当り０．０
１−２０隅９であり、静１派内にはより低用量を与えう
る。シスプラチンの望ましい川ｊＩｋは曲孔動物の体重
１ｋｇ当り０．１−５　ｍｇである。望ましくは曲孔動
物に対し体重１　ｋｇ当りシスプラチンは０．４−４−
９、ニフェジピンは１０−２０−ｇ、径目的に投与する
。対応するＩＩ目、１の池のンヒトロピリジンを用いる
ことも可能である。

組織学的に人別のネズミ腫瘍系であるルイス肺癌腫（３
Ｌ　Ｌ、）に対するシスプラチンの効果を向」ニさせる
ニフェジピンの能力について、試験した。

ルイス肺癌ル１ｉ（３ＬＬ）細胞を皮下注射したマウス
を、腫瘍細胞の注入後の１．４１１１’Ｊと１７　Ｆ、
Ｉ　ＩＩ＋とに措置した。対照マウスが呼吸困ｆｆ１ｌ
＃　（Ｉｂ１ｉ姓転移に原因）に落人ったことからして
、腫瘍細胞注入後の２３０１゜１に試験を終了した。第
７図に掲げたデータはしたがって、ニフェジピン単独、
シスプラチン単独、及びニフェジピン及びシスプラチン
による２回の措置の効果を示すものである。ニフェジピ
ン単独１独は一次腫瘍重量に対しても肝性転移に対して
も効果を有しなかった。シスプラチン単独による措置も
、−次腫瘍重量に対しても肝性転移に対しても効果を示
さなかった。これに対し両種の薬剤を受取った群は、−
次腫瘍重はと帥性転移との両者を有為に減少させた（４
／１１のマウスは転移なし）。

第８図はシスプラチン＋１を独、ニフェジピン単独、こ
れらの２化合物の組合せについての比較結果を、示して
いる。２化合物の組合せによって２分の１生存時間が著
しく増される。

これらの試験結果は、シスプラチンの抗腫瘍及び抗転移
作用を有為に高めることとするカルシウム径路遮断性化
合物ニフェジピンの働きを、如実に実証している。

ニフェジピンとシスプラチンとを混合して混合物を調製
し同時にｔ、Ｊ：、入してもよいことを、見出した。こ
れらの両薬剤とも既にヒトに対し投与して用いられてい
ることから、組合せ剤のヒトに’ｂｆする安全性と汀効
性に問題はないと信じられる。

ニフェジピンの他の同族体或は近似の類似体も、本発明
においてイｆ効に用い得る。

カルシウム径路遮断性化合物と組合されたシスプラチン
は頭部及び頚部、卵巣、翠丸、膀胱、及び結腸癌に対し
特に有効に用いつる。シスプラチンを５−フルオロウラ
シン或は池の抗癌剤と組合せて使用することも、好まし
い３．

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ｂ１６ａ腫瘍細胞の三次培養物にχ・ｊする
シスプラチンの細胞毒性効果を示すグラフである。 第２図は、シスプラチンによる３１６ａの増殖阻止効果
の経時変動を示すグラフである。 第３図は、生体外（管内）でシスプラチンの抗増殖効果
に対しカルシウム径路遮断性化合物としてのニフェジピ
ンが与える増強効果を示すグラフである。 第４ａ図及び第４ｂ図はそれぞれ、マウス中での一次Ｂ
１６ａ腫瘍の重量及び肝性転移の個数にχ、ｔしニフェ
ジピン単独、シスプラチン単独、及びニフェジピンとシ
スプラチンとの組合せが与える効用を示すグラフである
。 第５ａ図及び第５１）図はそれぞれ、マウス中での一次
Ｆ３１６　ａ腫瘍の重は及び肝性転移の個数にス１しニ
フェジピン単独、シスプラチン単独、及びニフェジピン
とシスプラチンとの徂かせが与える効果を示すグラフで
ある。 第６ａ図及び第６ｂ図はそれぞれ、Ｂ１６ａ腫瘍細胞系
についての肺性転移個数及び−次腫瘍重量に対しニフェ
ジピン単独、シスプラチン単独、及びニフェジピンとシ
スプラチンとの９１［合せが３回の投与で与える効果を
示すグラフである。 第７ａ図及び第７ｂ図はそれぞれ、ルイス肺癌腫（３Ｌ
Ｌ）について−次腫Ｊ、Ｎ、Ｓの重量と肝性転移の関数
に対しニフエジピンス１１．独、シスプラチン単ｌｂ−
／＆びニブニジピンとシスプラチンＪ−ｎ）：ＩＩ　Ｏ
仕が２回投与により与える効果を示すグラフである。 第８図は非処理（対照）、ニフェジピンＩＩ独（１０■
／ｋｇを径口投与）、シスプラチン単独（，１ｍｇ　７
ｋｇを静脈注射）、及びニフェジピンとシスプラチンと
の両者（シスプラチンの投与２　Ｑ　分前にニフェジピ
ンを投与）の各効果を、マウスの生存１１数で比較した
結果を示すグラフである。 ンスフ９ラナン９．５μＭ〕 シスフｏ；Ｆフン、ニフＬジヒリン（末Ｍ）ＣＮＦ　　
　　　　　　Ｃ−〇耐ｆ （ｔＸ）　　建）　　　Ｃ３Ｘ）　　　（３Ｘ）（ＩＸ
）　　　（ＩＸ）　　　（３Ｘ）　　　ＯＸ）０．０　
　１０　　４　　　　　　０．Ｉ　　　ＬＯ１０ＣＦＦ
　　　　Ｃｉｓ　　　　　　　　　　　　　Ｃｉｓ＋）
ＦＣＮＦ　　Ｃｉｓ　　　　　　Ｃｉｓ＋ＮＦ昨　閏Ｃ
日）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、悪性腫瘍を生体外で処置する方法であつて、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１及びＲ＿２メチル基、Ｒ＿３及びＲ＿４
   は１−８個の炭素原子を含むアルキル基またはアルキル
   オキシアルキレン基、Ｒ＿５及びＲ＿６は水素または１
   個或は２個の電子奪取性の置換体である。）で示される
   群から選択されたジヒドロピリジン級のカルシウム径路
   遮断性化合物を白金配位化合物と共に腫瘍に対し、白金
   配位化合物単独で達成されるよりも高い腫瘍後退の増大
   もしくは腫瘍転移の減少もしくは腫瘍後退の増大と腫瘍
   転移の減少が得られるような有効量だけ投与することを
   特徴とする、悪性腫瘍の生体外での処置法。 ２、特許請求の範囲第１項に記載の処置法であつて、カ
   ルシウム径路遮断性化合物がニフエジピン、ニモジピン
   、ニルジピン、ニソルジピン、フエロジピン及びニトレ
   ンジピンから成る群から選択されたものであることを特
   徴とする、悪性腫瘍の生体外での処置法。 ３、特許請求の範囲第１項に記載の処置法であつて、カ
   ルシウム径路遮断性化合物がニフエジピンであることを
   特徴とする、悪性腫瘍の生体外での処置法。 ４、特許請求の範囲第１項に記載の処置法であつて、白
   金配位化合物がシス−ジアンミンジクロロ白金（II）で
   あることを特徴とする、悪性腫瘍の生体外での処置法。 ５、（ａ）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１及びＲ＿２はメチル基、Ｒ＿３及びＲ＿
   ４は１−８個の炭素原子を含むアルキル基またはアルキ
   ルオキシアルキレン基、Ｒ＿５及びＲ＿６は水素または
   １個或は２個の電子奪取性の置換体である。）で示され
   る群から選択されたジヒドロピリジン級のカルシウム径
   路遮断性化合物、（ｂ）抗腫瘍性の白金配位化合物を含
   み、カルシウム径路遮断性化合物と白金配位化合物との
   重量比が１：１０００から１０：１の範囲にある悪性腫
   瘍治療剤。 ６、特許請求の範囲第５項に記載の治療剤であつて、白
   金配位化合物がシス−ジアンミンジクロロ白金（II）で
   ある悪性腫瘍治療剤。 ７、特許請求の範囲第５項に記載の治療剤であつて、カ
   ルシウム径路遮断性化合物がニフエジピンである悪性腫
   瘍治療剤。 ８、特許請求の範囲第５項に記載の治療剤であつて、カ
   ルシウム径路遮断性化合物がニフエジピンであり白金配
   位化合物がシス−ジアンミンジクロロ白金である悪性腫
   瘍治療剤。 ９、特許請求の範囲第５項に記載の治療剤であつて、注
   入投与可能な形式のものである悪性腫療治療剤。 １０、特許請求の範囲第５項に記載の治療剤であつて、
   カルシウム径路遮断性化合物がニフエジピン、ニモジピ
   ン、ニルジピン、ニソルジピン、フエロジピン及びニト
   レンジピンから成る群から選択されたものである悪性腫
   瘍治療剤。