JPH0133118B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はヒトその他の哺乳動物の下垂体の機能
に影響を与えるペプチドに関する。特に本発明は
下垂体による成長ホルモンの放出を促進するペプ
チドを目的とする。 1950年代初期から生理学者および臨床医は脳の
視床下部が腺下垂体のすべての分泌機能を制御す
ることを認識していた。その制御は神経液性であ
り、視床下部の特殊な神経分泌ニユーロンが特殊
なポリペプチドを産生し、それらのそれぞれの作
用および役割は各下垂体ホルモンの分泌を急激に
および長期的に誘発するものである。今日までに
下垂体ホルモンである甲状腺刺激ホルモンおよび
プロラクチン（トリペプチドTRF）に関して、
下垂体性の生殖腺刺激ホルモンである黄体形成ホ
ルモンおよび胞成熟ホルモン（デカペプチド
LRF、LH−RH、GnRHまたはGn−RF）に関
して、また下垂体ホルモンであるβ−エンドルフ
イン（β−endorphin）および副腎皮質刺激ホル
モン（41アミノ酸ポリペプチドCRF）に関して
は視床下部性の放出因子の特性が明らかにされて
いる。さらに抑制因子の特性も明らかにされた。
すなわち視床下部性のソマトスタチン
（somatostatin）は下垂体レベルで成長ホルモン
の分泌を抑制する。これらの視床下部性の放出因
子およびソマトスタチンは全合成により再現さ
れ、天然構造物の同族体が多種合成されており、
それらのうちあるものは天然化合物よりもはるか
に高い活性をもつ。 下垂体成長ホルモンに対応する視床下部性の放
出因子は、今日までにその存在につき広範な生理
学および臨床的な証明が得られてはいるが、その
特性は明らかにされていない。下垂体性生長ホル
モンの放出因子（以下GRF）を単離しその特性
を明らかにする際の主要な問題は、視床下部の各
断片に活性ペプチドが微小量〔50〜150×10^-15モ
ルであると考えられる〕存在すると思われること
である。これは他の視床下部性放出因子について
これまで算出されたいずれのものよりもはるかに
少量である。このことと調和するのは、視床下部
性GRFが著しく高い効力をもつものであるとい
う推論である。 視床下部性GRFの単離に際しての他の問題は、
視床下部抽出液中にきわめて大量のソマトスタチ
ンが存在することであつた。これはもちろん目的
とする生物検定のいずれをも阻害し、あるいは異
常な結果を与えるであろう。この数年にわたつて
幾つかの研究所が視床下部性GRFを単離し、そ
の特性を明らかにしたと主張した。これらの主張
はすべてその後文献著者らが認めたようにアーチ
フアクトに関連するものであつた（シヤリー．
A.V.Sら、J.Biol.Chem.246、6647、1971；ベー
ベルD.F.ら、Biochem.Biophys.Res.
Commun.45、235、1971）。これらの誤つた主張
は、成長ホルモンの放出を評価する際に採用する
生物検定が困難なものであることにより一部は説
明することができる。 下垂体による成長ホルモン（GH）の放出を促
進する残基44個のポリペプチドがヒト島細胞腫か
ら単離され、精製され、その特性が明らかにさ
れ、合成され、試験された。このペプチドは下記
の式をもつ。 Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile −Phe−Thr−Asn−Ser−Tyr −Arg−Lys−Val−Leu−Gly −Gln−Leu−Ser−Ala−Arg −Lys−Leu−Leu−Gln−Asp −Ile−Met−Ser−Arg−Gln −Gln−Gly−Glu−Ser−Asn −Gln−Glu−Arg−Gly−Ala −Arg−Leu−NH₂ これはPGRF（ヒト膵性GRF）であると考えら
れ、以下このように呼ぶ。これはソマトクリニン
（Somatocrinin）とも呼ばれるであろう。これと
共に他の２種の高純度ペプチドも単離された。こ
れらはGH放出活性を示し、PGRF（１−37）遊
離酸およびPGRF（１−40）遊離酸である。これ
らのペプチドは温血動物および水産養殖の冷血動
物の成長を促進するために用いることができる。 本発明の合成ペプチドであるPGRFを薬剤学的
に受容できる液体または固体状の担体に分散した
医薬組成物は臨床医学（人類医学および獣医学双
方）において診断または治療の目的で一時的また
は長期的な投与に際して用いることができる。 ペプチドを規定するために用いられる命名法は
シユレーダーおよびリユプケ著“ペプチド類”
（アカデミツク・プレス（1965）により明確にさ
れたものである。ここでは慣用の表現法に従つて
Ｎ−末端を左側に表わし、Ｃ−末端を右側に示
す。アミノ酸残基が異性体の形をもつ場合、他に
明記しない限り表わされているものはそのアミノ
酸のＬ型である。 本発明は次式 Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile −Phe−Thr−Asn−Ser−Tyr −Arg−Lys−Val−Leu−Gly −Gln−Leu−Ser−Ala−Arg −Lys−Leu−Leu−Gln−Asp −Ile−Met−Ser−Arg−Gln −Gln−Gly−Glu−Ser−Asn −Gln−Glu−Arg−Gly−Ｘ−Ｒ （式中、ＸはAlaまたはAla−Arg−Ala−Arg−
Leuであり、ＲはNH₂またはOHである）の構造
を有する合成ペプチドを提供するものである。 これらのペプチドは適切な方法により、たとえ
ば全固相法により、部分的固相法により、断片縮
合法により、古典的な溶液カツプリング法によ
り、または近年開発された組み換えDNA法によ
り合成される。たとえば全固相合成法は文献“固
相ペプチド合成”（スチユワートおよびヤング著、
フリーマン社、サンフランシスコ、1969年）に述
べられており、米国特許第4105603号（1978年８
月８日、ベイルらに付与）明細書の記載により例
示される。断片縮合による合成法は米国特許第
3972859号明細書（1976年８月３日）に例示され
ている。他の用いられる合成法は米国特許第
3842067号（1974年、10月15日）および同第
3862925号（1975年１月28日）各明細書により例
示される。組み換えDNA法を採用した合成ペプ
チドの製造は大規模の商業的要求を満足させるた
めに用いられるようである。 カツプリング型合成に一般的なことは、各種ア
ミノ酸部分の不安定な側鎖基をこの部位で化学反
応が起こるのを阻止する適切な保護基によつて、
この基が最終的に除去されるまで保護することで
ある。同様に通常一般的であるのは、アミノ酸ま
たは断片上のα−アミノ基を保護し、その間にこ
れがカルボキシル基において反応し、次いでα−
アミノ保護基を選択的に除去してこの部位で次ぎ
の反応が起こりうる状態にすることである。従つ
て合成の一工程として、ペプチド鎖中に希望する
順位で位置する各アミノ酸残基を含みかつ側鎖保
護基が適切な残基に結合した中間化合物を合成す
ることが一般的に行われる。 同様に本発明のペプチドの中間体は次式で表わ
される。 X¹−Tyr（X²）−Ala−Asp（X³） −Ala−Ile−Phe−Tyr（X⁴） −Asn−Ser（X⁵）−Tyr（X²） −Arg（X⁶）−Lys（X⁷）−Val −Leu−Gly−Gln−Leu−Ser（X⁵） −Ala−Arg（X⁶）Lys（X⁷） −Leu−Leu−Asp（X³）−Ile −Met−Ser（X⁵）−Arg（X⁶） −Gln−Gln−Gly−Glu（X³） −Ser（X⁵）−Asn−Gln−Gln −Glu（X³）−Arg（X⁵orX⁶） −Gly−Ala（X⁶）−Arg（X⁶） −Ala−Arg（X⁶）−Leu−X⁸ 上記式中X¹は水素原子またはα−アミノ基保
護基である。X¹により意図されるα−アミノ基
保護基はポリペプチドの段階的の合成の分野で有
用であることが知られているものである。X¹に
含まれるα−アミノ基保護基には下記のものがあ
る。 (1)アシル型保護基、たとえばホルミル基、トリ
フルオルアセチル基、フタリル基、トルエンスル
ホニル基（Tos）、ベンゼンスルホニル基、ニト
ロフエニルスルフエニル基、トリチルスルフエニ
ル基、ｏ−ニトロフエノキシアセチル基、クロル
アセチル基、アセチル基およびγ−クロルブチリ
ル基、(2)芳香族ウレタン型保護基、たとえばベン
ジルオキシカルボニル基（Ｚ）、および置換され
たＺ、たとえばｐ−クロルベンジルオキシカルボ
ニル基、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル
基、ｐ−ブロムベンジルオキシカルボニル基、ｐ
−メトキシベンジルオキシカルボニル基、(3)脂肪
族ウレタン保護基、たとえばｔ−ブチルオキシカ
ルボニル基（BOC）、ジイソプロピルメチルオキ
シカルボニル基、イソプロピルオキシカルボニル
基、エトキシカルボニル基、アリルオキシカルボ
ニル基、(4)シクロアルキルウレタン型保護基、た
とえばシクロペンチルオキシカルボニル基、アタ
マンチルオキシカルボニル基およびシクロヘキシ
ルオキシカルボニル基、(5)チオウレタン型保護
基、たとえばフエニルチオカルボニル基、(6)アル
キル型保護基、たとえばトリフエニルメチル基
（トリチル基）、ベンジル基、(7)トリアルキルシラ
ン基たとえばトリメチルシラン。好ましいα−ア
ミノ基保護基はBOCである。 X²はTyrのフエノール性水酸基のための保護
基であり、テトラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル
基、トリチル基、Bzl、CBZ、4Br−CBZおよび
２，６−ジクロルベンジル基よりなる群から選ば
れる。好ましい保護基は２，６−ジクロルベンジ
ル基である。X²は水酸基であつてもよい。これ
は水酸基に保護基がないことを意味する。 X³は水素原子、またはAspもしくはGluのカル
ボキシル基のためのエステル形成型保護基であ
り、Bzl、２，６−ジクロルベンジル基、メチル
基およびエチル基よりなる群から選ばれる。 X⁴およびX⁵はTyrおよびSerの水酸基のための
保護基であり、アセチル基、ベンゾイル基、ｔ−
ブチル基、トリチル基、テトラヒドロピラニル
基、Bzl、２，６−ジクロルベンジル基および
CBZよりなる群から選ばれる。好ましい保護基
はBzlである。X⁴および／またはX₅は水素原子で
あつてもよい。これは水酸基に保護基がないこと
を意味する。 X⁶はArgのグアニジノ基のための保護基であ
り、ニトロ基、Tos、CBZ、アダマンチルオキシ
カルボニル基およびBOCよりなる群から選ばれ
るか、あるいは水素原子である。 X⁷は水素原子またはLysの側鎖アミノ置換基の
ための保護基である。適切な側鎖アミノ基保護基
の具体例は２−クロルベンジルオキシカルボニル
基（２−Cl−Ｚ）、Tos、CBZ、ｔ−アミルオキ
シカルボニル基およびBOCである。 側鎖アミノ基保護基の選択は厳密なものではな
いが、ただし合成に際してα−アミノ基の脱保護
中に除去されないものでなければならない。従つ
てα−アミノ基保護基および側鎖アミノ基保護基
は同一ではあり得ない。 X⁸はOH、OCH₃、エステル基、アミド基、ヒ
ドラジド基、−Ｏ−CH₂−樹脂系支持体および−
NH−樹脂系支持体よりなる群から選ばれ、OH
およびアミド以外の基は広義には保護基と考えら
れる。 中間体の式においてX¹、X²、X³、X⁴、X⁵、
X⁶、X⁷およびX⁸のうち少なくとも１つは保護基
である。 ペプチドの合成に用いられる特定の側鎖保護基
を選択する際には、下記の規準に従う。(a)保護基
は合成の各段階においてα−アミノ基保護基を除
去するために選ばれる試薬に対し同条件下で安定
でなければならない。(b)保護基はカツプリング反
応条件下でその保護特性を保持しなければなら
ず、同条件下で離脱してはならない。(c)側鎖保護
基は希望するアミノ酸配列を含む合成が終了した
時点で、ペプチド鎖を変化させない条件下におい
て除去されなければならない。 ペプチドはメリフイールド〔J.Am.Chem.
Soc.、85、2149（1963）〕により記述されるよう
に、固相合成法を用いて製造されることが好まし
い。ただし前記のように当業界で知られている他
の相当する化学合成法も用いることができる。固
相合成はペプチドのＣ−末端から、保護されたα
−アミノ酸を適切な樹脂にカツプリングさせるこ
とにより行われる。この種の出発物質はα−アミ
ノ基を保護されたLeuもしくはAlaをエステル結
合によりクロルメチル化樹脂もしくはヒドロキシ
メチル樹脂に結合させるか、またはアミド結合に
よりBHA樹脂もしくはMBHM樹脂に結合させ
ることによつ製造することができる。ヒドロキシ
メチル樹脂の製造についてはボダンスキーら
〔Chem.Ind.（ロンドン）38、1597−98（1966）〕に
より記述されている。クロルメチル化樹脂はバイ
オ・ラド・ラボラトリーズ社（カリフオルニア州
リツチモンド）およびラボ−システムズ社から市
販されている。この種の樹脂の製造についてはス
チユワートらにより“固相ペプチド合成”（フリ
ーマン社、サンフランシスコ、1969年）、第１章、
１〜６頁に記載されている。BHAおよびMBHA
樹脂系支持体は市販されており、合成される目的
ポリペプチドがＣ−末端にα−カルボキシアミド
基をもつ場合にのみ一般に用いられる。 アミノ酸40個のペプチドを合成することを希望
する場合、BOCにより保護されたAlaをモナーン
およびギロンのバイオポリマーズ、12、2513−
2519（1973）の方法に従つてクロルメチル化樹脂
にカツプリングさせる。支持体樹脂にBOC−Ala
をカツプリングさせたのち、たとえば塩化メチレ
ン中のトリフルオル酢酸（TFA）、TFA単独ま
たはジオキサン中のHClを用いることによりα−
アミノ基保護基を除去する。脱保護反応はほぼ０
℃から室温までの温度で行われる。シユレーダー
およびリユプケ著“ペプチド”Ｉ、72〜75頁（ア
カデミツク・プレス社、1965年）に記載されるよ
うに、特定のα−アミノ基保護基を除去するため
の他の標準的な脱離試薬および条件を用いること
ができる。 Alaのα−アミノ基保護基を除去したのち、残
りのα−アミノ基および側鎖を保護されたアミノ
酸を希望する順に段階的にカツプリングさせ、前
記の中間化合物を得るか、あるいは合成に際し各
アミノ酸を別個に添加する代わりにこれらのうち
幾つかを固相反応器に添加することができる。適
切なカツプリング試薬を選択することは当技術分
野に含まれる。カツプリング試薬として特に適切
なものはＮ，N′−ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド（DCCI）である。 ペプチドの固相合成に用いられる活性化試薬は
ペプチド技術において周知である。適切な活性化
試薬の例は下記のものである。(1)カルボジイミ
ド、たとえばＮ，Ｎ−ジイソプロピルカルボジイ
ミド、Ｎ−エチル−N′−（３−ジメチルアミノプ
ロピル）カルボジイミド、(2)シアナミドたとえば
Ｎ，Ｎ−ジベンジルシアナミド、(3)ケテイミン、
(4)イソキサゾリウム塩、たとえばＮ−エチル−５
−フエニルイソキサゾリウム−3′−スルホネー
ト、(5)環中に１〜４個の炭素原子を含有し、芳香
族の特性をもつ単環式の窒素含有複素環式アミ
ド、たとえばイミダゾリド、ピラゾリドおよび
１，２，４−トリアゾリド；有用な特定の複素環
式アミドにはＮ，N′−カルボニルジイミダゾー
ル、Ｎ，N′−カルボニル−ジ−１，２，４−ト
リアゾールが含まれる、(6)アルコキシ化アセチレ
ン、たとえばエトキシアセチレン、(7)アミノ酸の
カルボキシル部分と混合無水物を形成する試薬、
たとえばクロル蟻酸エチルおよびクロル蟻酸イソ
ブチル、ならびに(8)アミノ酸のカルボキシル部分
と活性エステルを形成する試薬、たとえば１個の
環窒素原子上に水酸基をもつ窒素含有複素環式化
合物たとえばＮ−ヒドロキシフタルイミド、Ｎ−
ヒドロキシスクシンイミドおよび１−ヒドロキシ
ベンゾトリアゾール（HOBT）。ペプチドのカツ
プリングにおける他の活性化試薬およびそれらの
使用についてはシユレーダーおよびリユプケによ
り前出の文献、章に、およびカプール
（Kapoor）によりJ.Phar.Sci.、59、１−27（1970）
に記述されている。 保護された各アミノ酸またはアミノ酸配列を約
２倍またはそれ以上過剰に固相反応器に導入し、
ジメチルホルムアミド（DMF）：CH₂Cl₂（１：
１）の媒体中で、またはDMFもしくはCH₂Cl₂単
独の中でカツプリング反応を行うことができる。
不完全なカツプリング反応が起こつた場合、次ぎ
のアミノ酸のカツプリングを行う前に、α−アミ
ノ基保護基の除去前に上記のカツプリング操作を
繰り返す。合成の各段階におけるカツプリング反
応の成功は、E.カイザーら〔Anal.Biochem.、
34、595（1970）〕により記述されているようにニ
ンヒドリン反応によつて監視される。 希望するアミノ酸配列が終了したのち、樹脂か
らペプチドを離脱させるだけでなく残存するすべ
ての側鎖保護基X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷およ
びX⁸ならびにα−アミノ基保護基X¹をも離脱さ
せる試薬（たとえば液体フツ化水素）で処理する
ことにより、支持体樹脂から中間体ペプチドを分
離し、ペプチドを得る。 代替経路として、アリコーリシスにより支持体
樹脂から中間体ペプチドを分離し、得られたＣ−
末端アルキルエステルをその後加水分解により酸
に変えることもできる。次いでいずれの側鎖保護
基をも前記の方法または他の既知の方法、たとえ
ば接触還元（たとえばBaSO₄上のPd）により離
脱させることができる。脱離のためにフツ化水素
を用いる場合は、脱除のためにアニソールおよび
硫化メチルエチルを反応器に装入することができ
る。 下記の具体例は固相法によりPGRFを合成する
ための好ましい方法を示したものである。もちろ
ん対応するより短かいペプチド断片の合成は同じ
方法で、単に鎖のいずれかの端において必要な数
のアミノ酸を除去することにより行われることは
理解されるであろう。しかし、生物活性をもつ断
片はＮ−末端にここに示した配列を含むべきであ
ると現在は考えられる。 例 １ Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−
Asn−Ser−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly
−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−Lys−Leu−
Leu−Gln−Asp−Ile−Met−Ser−Arg−Gln
−Gln−Gly−Glu−Ser−Asn−Gln−Glu−
Arg−Gly−Ala−Arg−Ala−Arg−Leu−OH 上記式の構造をもつPGRF（１−44）遊離酸の
合成を、ベツクマン社990型ペプチド合成器を用
いてクロロメチル化樹脂（ラボ・システムズ社か
ら得られる0.9MegCl／ｇを含有するもの）上で
段階的に行つた。樹脂へのBOC−Leuのカツプリ
ングはモナーンらにより“バイオポリマーズ”12
（1973）、2513〜2519に示された一般法により行わ
れ、これにより樹脂１ｇにつき約0.22ミリモルの
Leuが置換された。用いた溶剤はすべて不活性ガ
ス（好ましくはヘリウム）を噴入することにより
注意深く脱ガスされ、Met残基のイオウ原子を不
本意に酸化する可能性のある酸素の不在を確実に
ものにした。 脱保護基および中和ののち、ペプチド鎖を樹脂
上に段階的に形成させた。脱保護基、中和、およ
び各アミノ酸の添加は一般に米国特許第3904594
号明細書（ギレミンら）に詳述される方法に従つ
て行われた。カツプリングは詳細には下記の表に
従つて行われれた。カツプリングは詳細には下記
の表に従つて行われた。

【表】 要約すると、カツプリング反応のためには樹脂
１ｇにつき塩化メチレン中のBOC−保護アミノ
酸１ミリモル、および塩化メチレン中の0.5M・
DCCIもしくは塩化メチレン中の30％DMF1当量
を２時間使用した。Argをカツプリングさせる場
合は、10％DMFおよび塩化メチレンの混合物を
用いた。SerおよびThrの側鎖水酸基の保護基と
してはBzlと使用した。Lys側鎖の保護基として
は２−クロル−ベンジルオキシカルボニル（2Cl
−Ｚ）を用いた。Argのグアニジノ基を保護する
ためにはTosを用い、GluおよびAspのカルボキ
シル基はBzlエステルとして保護された。Tyrの
フエノール性水酸基は２，６−ジクロルベンジル
基により保護された。合成終了時に、下記の組成
物が得られた。 X¹−Tyr（X²）−Ala−Asp（X³）−Ala−Ile−
Phe−Tyr（X⁴）−Asn−Ser（X⁵）−Tyr（X²）−
Arg（X⁶）−Lys（X⁷）−Val−Leu−Gly−Gln−
Leu−Ser（X⁵）−Ala−Arg（X⁶）−Lys（X⁷）−
Leu−Leu−Asp（X³）−Ile−Met−Ser（X⁵）−
Arg（X⁶）−Gln−Gln−Gly−Glu（X³）−Ser
（X⁵）−Asn−Gln−Glu（X³）−Arg（X⁶）−Gly
−Ala−Arg（X⁶）−Ala−Arg（X⁶）−Leu−X⁸ 上記式中X¹はBOC、X²は２，６−ジクロルベ
ンジル基、X₃はベンジルエステル、X⁴はBzl、
X⁵はBzl、X⁶はTos、X⁷は2Cl−ＺおよびX⁸は−
Ｏ−CH₂−ベンゼン−ポリスチレン樹脂系支持体
である。 最後のTyr残基が樹脂にカツプリングしたの
ち、CH₂Cl₂中の45％TFAでBOC基を除去した。
得られた保護されたペプチド鎖を分離し、保護基
を除去するため、これをペプチド鎖１ｇにつきア
ニソール1.5ml、硫化メチルエチル0.25mlおよび
フツ化水素（HF）10mlで−20℃において1/2時
間、および０℃において1/2時間処理した。高度
の真空下でHFを除去したのち、残存する樹脂−
ペプチドを乾燥ジエチルエーテルおよびクロロホ
ルムで交互に洗浄し、次いでペプチドを脱ガスし
た2N酢酸水溶液で抽出した。酢酸抽出液の凍結
乾燥により、白色の綿毛状物質が得られた。 分離され、保護基を除去されたこのペプチドを
次いで30％酢酸に溶解し、セフアデツクスＧ−50
微細ゲル過にかけた。 次いで0.01M・NH₄OAc（PH4.5）400mlを含有
する混合フラスコに0.4M・NH₄OAc（PH6.5）１
を滴下することにより形成された凹形密度勾配
を用いてCM−32カルボキシメチルセルロース
（ワツトマン社製）陽イオン交換クロマトグラフ
イー（1.8×18cm、Vbed＝50ml）によつてペプチ
ドをさらに精製した。最終精製はセフアデツクス
Ｇ−50微細支持体（フアルマシア社製）上で溶剤
系としてnBuOH：EtOH：ピリジン：0.2％Ｎ
HOAc（４：１：１：７）を用いる分配クロマト
グラフイーにより行われた。精製の詳細は一般に
リングらによりBiochem.Biophys.Res.
Commun.、95、945（1980）に示されている。ク
ロマトグラフイーの画分はTLCにより注意深く
監視され、実質的な純度を示す画分のみを集め
た。 アミノ酸分析は加水分解ののち密閉した試験管
中でAnal.Biochem.、126、144−156（1982）に記
載した方法を採用し、正確な配列が得られたこと
を調べるためリクイマート社型アミノ酸分析器
を用いて行われ、下記の結果を得た。 Asx（3.62）、Thr（0.75）、Ser（3.5）、Glx（6.83）
、
Gly（2.87）、Ala（5.10）、Val（0.9）、Met（1.23）
、
Ile（1.84）、Leu（5.045）、Tyr（2.09）、Phe（0.91
）、
Lys（2.31）、およびArg（6.61） 分析によつて配列の正しいことが確認された。 例 ２ Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−
Asn−Ser−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly
−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−Lys−Leu−
Leu−Gln−Asp−Ile−Met−Ser−Arg−Gln
−Gln−Gln−Gly−Glu−Ser−Asn−Gln−
Glu−Arg−Gly−Ala−OH 上記式の構造をもつPGRF（１−40）の合成を
ベツクマン社990型ペプチド合成器を用いて例１
に記載した方法によりクロルメチル化樹脂上で段
階的に行つた。TLCおよびHPLCを用いてこの
ペプチドは実質的に純粋であると判定された。 正しい配列が得られることを調べるため、加水
分解ののちアミノ酸分析を行い、下記の結果を得
た。 Asx（3.89）、Thr（0.88）、Ser（3.66）、Glx（7.04）
、
Gly（3.07）、Ala（4.02）、Val（0.96）、Met（1.01）
、
Ile（1.86）、Leu（4.28）、Tyr（2.0）、Phe（0.86）
、
Lys（2.24）、およびArg（4.15）。 分析により配列の正しいことが確認された。 参考例 １ Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−
Asn−Ser−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly
−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−Lys−Leu−
Leu−Gln−Asp−Ile−Met−Ser−Arg−Gln
−Gln−Gly−Glu−Ser−OH 上記式の構造をもつPGRF（１−34）遊離酸の
合成を、ベツクマン社990型ペプチド合成器を用
いて例１に記載した方法によりクロルメチル化樹
脂上で段階的に行つた。TLCおよびHPLCを用
いてこのペプチドは実質的に純粋であると判定さ
れた。 正しい配列が得られたことを調べるため加水分
解ののちアミノ酸分析を行い、下記の結果を得
た。 Asx（2.87）、Thr（0.78）、Ser（3.78）、Glx（5.11）
、
Gly（1.93）、Ala（3.03）、Val（0.88）、Met（0.96）
、
Ile（1.88）、Leu（4.14）、Tyr（2.05）、Phe（1.07）
、
Lys（2.29）、およびArg（3.22）。 分析により配列の正しいことが確認された。 参考例 ２ Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−
Asn−Ser−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly
−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−Lys−Leu−
Leu−Gln−Asp−Ile−Met−Ser−Arg−Gln
−Gln−OH 上記式の構造をもつPGRF（１−31）遊離酸の
合成をベツクマン社990型ペプチド合成器を用い
て例２に記載した方法によりクロルメチル化樹脂
上で段階的に行つた。TLCおよびHPLCを用い
てこのペプチドは実質的に純粋であると判定され
た。 正しい配列が得られたことを調べるため、加水
分解ののちアミノ酸分析を行い、下記の結果を得
た。 Asx（2.73）、Thr（0.75）、Ser（2.77）、Glx（3.95）
、
Gly（0.98）、Ala（3.06）、Val（0.80）、Met（0.98）
、
Ile（1.77）、Leu（4.28）、Tyr（2.23）、Phe（1.14）
、
Lys（2.34）、およびArg（3.22）。 分析により配列の正しいことが確認された。 参考例 ３ Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−
Asn−Ser−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly
−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−Lys−Leu−
Leu−Gln−Asp−Ile−Met−Ser−OH 上記式の構造をもつPGRF（１−28）遊離酸の
合成をベツクマン社990型ペプチド合成器を用い
て例１に記載した方法によりクロルメチル化樹脂
上で段階的に行つた。TLCおよびHPLCを用い
てこのペプチドは実質的に純粋であると判定され
た。 正しい配列が得られたことを調べるため、加水
分解ののちアミノ酸分析を行い、下記の結果を得
た。 Asx（2.66）、Thr（0.73）、Ser（2.66）、Glx（1.98）
、
Gly（0.81）、Ala（2.89）、Val（0.90）、Met（1.15）
、
Ile（1.72）、Leu（4.14）、Tyr（2.43）、Phe（1.58）
、
Lys（2.15）、およびArg（2.19）。 分析により配列の正しいことが確認された。 例 ３ Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−
Asn−Ser−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly
−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−Lys−Leu−
Leu−Gln−Asp−Ile−Met−Ser−Arg−Gln
−Gln−Gly−Glu−Ser−Asn−Gln−Glu−
Arg−Gly−Ala−Arg−Ala−Arg−Leu−
NH₂ 上記式の構造をもつPGRF（１−44）の合成を
ベツクマン社990型ペプチド合成器を用いて
MBHA樹脂上で例１に記載した方法により段階
的に行つた。TLCおよびHPLCを用いてこのペ
プチドは実質的に純粋であると判定された。 正しい配列が得られたことを調べるため、加水
分解ののちアミノ酸分析を行い、下記の結果を得
た。 Asx（3.75）、Thr（0.80）、Ser（3.60）、Glx（6.98）
、
Gly（3.16）、Ala（5.04）、Val（0.77）、Met（1.02）
、
Ile（1.79）、Leu（5.41）、Tyr（2.03）、Phe（0.84）
、
Lys（2.39）、and Arg（6.43）。 分析により配列の正しいことが確認された。 参考例 ４ Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−
Asn−Ser−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly
−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−Lys−Leu−
Leu−Gln−Asp−Ile−Met−Ser−Arg−Gln
−Gln−Gly−Glu−Ala−Asn−Gln−Glu−
Ser−Gly−Arg−OH 上記式の構造をもつPGRF同族体の合成をベツ
クマン社990型ペプチド合成器を用いてラボ・シ
ステムズ社から得られるクロルメチル化樹脂上で
例１に記載した方法により段階的に行つた。
TLCおよびHPLCを用いてこのペプチドは実質
的に純粋であると判定された。 正しい配列が得られたことを調べるため、加水
分解ののちアミノ酸分析を行い、下記の結果を得
た。 Asx（4.35）、Thr（1.06）、Ser（3.80）、Glx（7.53）
、
Gly（2.96）、Ala（4.05）、Val（0.97）、Met（0.86）
、
Ile（1.94）、Leu（3.70）、Tyr（2.05）、Phe（1.06）
、
Lys（2.06）、and Arg（3.53）。 分析により配列の正しいことが確認された。 例 44 Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−
Asn−Ser−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly
−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−Lys−Leu−
Leu−Gln−Asp−Ile−Met−Ser−Arg−Gln
−Gln−Gly−Glu−Ser−Asn−Gln−Glu−
Arg−Gly−Ala−NH₂ 上記式の構造をもつPGRF（１−40）−アミドを
ベツクマン社990型ペプチド合成器を用いて
MBHA樹脂上で例１に記載した方法により段階
的に行つた。TLCおよびHPLCを用いてこのペ
プチドは実質的に純粋であると判定された。 正しい配列が得られたことを確認するため加水
分解ののちアミノ酸分析を行い、下記の結果を得
た。 Asx（3.76）、Thr（0.88）、Ser（3.68）、Glx（6.89）
、
Gly（3.12）、Ala（4.08）、Val（0.88）、Met（1.36）
、
Ile（1.76）、Leu（4.24）、Tyr（2.00）、Phe（0.80）
、
Lys（2.32）、and Arg（4.16）。 分析により配列の正しいことが確認された。 参考例 ５ Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−
Asn−Ser−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly
−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−Lys−Leu−
Leu−Gln−Asp−Ile−Met−Ser−Arg−Gln
−Gln−Gly−Glu−Ser−Asn−Gln−Glu−
OH 上記式の構造をもつPGRF（１−37）遊離酸の
合成をベツクマン社990型ペプチド合成器を用い
て例１に記載した方法によりクロルメチル化樹脂
上で段階的に行つた。TLCおよびHPLCを用い
てこのペプチドは実質的に純粋であると判定され
た。 正しい配列が得られたことを調べるため、加水
分解ののちアミノ酸分析を行い、下記の結果を得
た。 Asx（3.92）、Thr（0.79）、Ser（3.62）、Glx（7.05）
、
Gly（1.97）、Ala（3.17）、Val（1.03）、Met（1.0）
、
Ile（1.91）、Leu（4.37）、Tyr（1.86）、Phe（0.76）
、
Lys（2.15）、およびArg（3.40）。 分析により配列の正しいことが確認された。 参考例 ６ Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−Phe−Thr−
Asn−Ser−Tyr−Arg−Lys−Val−Leu−Gly
−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−Lys−Leu−
Leu−Gln−Asp−Ile−Met−Ser−Arg−Gln
−Gln−Gly−Glu−Ser−Asn−Gln−Glu−
NH₂ 上記式の構造をもつPGRF（１−37）アミドの
合成をベツクマン社990型ペプチド合成器を用い
てMBHA樹脂上で例１に記載した方法により行
つた。TLCおよびHPLCを用いてこのペプチド
は実質的に純粋であると判定された。 正しい配列が得られたことを調べるため、加水
分解ののちアミノ酸分析を行い、下記の結果を得
た。 Asx（4.02）、Thr（0.80）、Ser（3.49）、Glx（6.90）
、
Gly（1.92）、Ala（3.08）、Val（1.15）、Met（1.01）
、
Ile（1.77）、Leu（4.05）、Tyr（2.02）、Phe（1.14）
、
Lys（2.50）、およびArg（3.27）。 分析により配列の正しいことが確認された。 本発明のペプチドの物理特性を次のようにまと
めた：

【表】

【表】 PGRF（１−40）OH、PGRF（１−４）NH₂お
よびPGRF（１−44）OHについてはさらに下記
の特性が示される：

【表】 例 ５ 成長ホルモンの放出を促進するペプチドの有効
性を判定するため、例２の合成PGRF（１−40）
を用いて、当モル濃度の抽出精製した天然PGRF
（１−40）および下垂体細胞からの成長ホルモン
の放出を促進する既知の有効性をもつGRF標準
品との密接な比較のもとにインビトロ検定を行つ
た。標準品はブラゾー（Brazeau）らのエンドク
リノロジー、Vol.110、A538（1982）に記載され
定義されており、下垂体細胞単層生物検定におい
てGH放出に関して最大値の半分の応答を生じる
量のラツト視床下部由来の製剤である。ほぼ４〜
５日前に摘出されたラツト下垂体の細胞を含む培
養物を用いた。定められた標準培地の培養物およ
び成長ホルモンの分泌に最適と考えられる培養物
の双方をブラゾーらのレギユラトリー・ペプタイ
ズ、1255、1981に記載された一般法により比較試
験に用いた。被試物質に関するインキユベーシヨ
ンを３〜４時間行い、培地の一部を取り出して処
理し、それらの免疫反応性GH（irGH）を十分に
特性が明らかにされたラジオイムノアツセイによ
り測定した。 この比較試験の結果、表１に示すように等モル
比において合成PGRF（１−40）は天然ペプチド
の完全な生物活性をもつ。合成ペプチドのED₅₀
は約113ピコグラムであり、これはこれまでの
CH放出因子と主張された他のいかなる分子より
もはるかに効力が高い。

【表】 成長ホルモンの分泌に関するインビトロ試験の
ほか、ペントバルビタールで麻酔した正な雄ラツ
ト（体重約200ｇ）に合成ペプチドを注射するこ
とによりインビボ試験を行つた。表に示した結
果から、合成PGRFペプチドは下垂体性成長ホル
モンの分泌に対する強力な刺激剤であることが示
される。

【表】 追加試験から、参考例４の合成PGRFは天然
PGRF（１−40）と実質的に等しい生物学的効力
を示し、参考例５および参考例６の合成断片もき
わめて実質的な生物学的効力を示すことが知られ
た。さらにＣ末端にα−カルボキサミドをもつ例
４のPGRF（１−40）ペプチドは、例５で試験さ
れた合成ペプチドの生物学的効力の実質的に２倍
をもつていた。 例 ６ 成長ホルモンの放出を促進するペプチドの有効
性を判定するため、例１の合成PGRF（１−44）
を用いて、下垂体細胞からの成長ホルモンの放出
を促進する既知の有効性をもつGRF標準品との
密接な比較のもとにインビトロ検定を行つた。標
準品はブラゾー（Brazeau）らのエンドクリノロ
ジー、Vol.110、A538（1982）に記載され定義さ
れており、下垂体細胞単層生物検定においてGH
放出に関して最大値の半分の応答を生じる量のラ
ツト視床下部由来の製剤である。ほぼ４〜５日前
に摘出されたラツト下垂体細胞を含む培養物を用
いた。定められた標準培地の培養物および成長ホ
ルモンの分泌に最適と考えられる培養物の双方を
ブラゾーらのレギユラトリー・ペプタイズ、
1255、1981に記載された一般法により試験を用い
た。被験物質に関するインキユベーシヨンを３〜
４時間行い、培地の一部を取り出して処理し、そ
れらの免疫反応性GH（irGH）を十分に特性が明
らかにされたラジオイムノアツセイにより測定し
た。 この試験の結果、表に示すように等モル比に
おいて合成PGRF（１−44）は天然ペプチドの完
全な生物活性をもつことがわかつた。 表 GRF標準品 インビトロでのGH分泌 （単位／ml） （ｎｇ／ml） ０ 870±26 0.63 1710±60 1.25 2626±24 2.50 3928±40 ５ 5586±52 10 6803±48 20 7060±75 合成PGRF（１−44） （10^-5モル／ml） ０ 343±12 3.1 647±９ 6.3 733±13 12.5 1123±12 25 1447±７ 50 1720±30 100 2046±17 200 2133±13 他の試験から、例１で合成された合成PGRF
（１−44）遊離酸は天然PGRF（１−44）よりも若
干低い効力を示し、合成PGRF（１−44）アミド
は天然PGRF（１−44）と実質的に等しい効力を
示すことが知られた。合成PGRF（１−44）アミ
ドは実験動物（ラツト）に注射した場合、例５の
表のPGRF（１−40）が示すものと等しい型の
GH放出活性を示し、ただしPGRF（１−40）遊
離酸よりも効力が約2.5〜3.0倍高い（重量基準）。 例 ７ PGRF（１−44）およびPGRF（１−40）の効力
を比較するために、各ペプチド0.02ナノモルを雄
ラツトに投与した。 まず、ラツトに60mg／Kgのペントバルビタール
を腹腔内注射して麻酔して15分後に血液を採取し
た。同時に0.5mlの生理塩水に溶かした各ペプチ
ド0.02ナノモルを静脈内投与した。各ペプチド投
与後の成長ホルモン（GH）の放出能力を第１図
に示した。第１図の各点は４〜６匹のラツトから
のデータの平均値を示し、各点より上下に延びた
線は標準誤差を示す（危険率Ｐ＜0.05）。図中の
□はPGRF（１−40）を示し、■はPGRF（１−
44）を示す。 各ペプチドはすぐれたGH放出能力を有し、互
いに有意の差はなかつた。 米国で生まれる子供7000〜150000人のうち約１
人は下垂体性成長ホルモン欠損症すなわち“下垂
体性小人”であることが知られている。すなわち
彼らはその血液中に正常な水準の下垂体性GHを
欠如しているため小人である。これらの患者は大
部分が正常な下垂体をもつており、これらの問題
の原因はGHに対する視床下部性放出因子の合成
または分泌が欠如していることであると提示する
臨床的根拠がある。合成PGRFはこれまでヒト下
垂体性GH、すなわちもつぱらヒト下垂体から死
体解剖に際して得られるきわめて高価な製剤の注
射によつて治療されてきたこれらの症例のための
理想的な治療法となることが期待されている。
DNA組み換え法により製造されるヒトGHは文
献中には示されているが現在のところ常用するた
めに得られるものではない。合成PGRFはこれよ
りもはるかに簡単な分子であり、この種の下垂体
性小人が数十万人いると推定される世界中で使用
されるために著しい利点をもつはずである。 合成PGRFはGH分泌に関して下垂体の機能を
特異的に評価するものとして最初に知られた分子
であるので、医師が下垂体機能の特異的な欠損を
疑うすべての症例においてGH分泌に関する最初
のルーチン試験を提供する。従つて合成PGRFは
GH分泌能を評価するために診断法として現在採
用されている頻雑な方法（アルギニン注入、低血
糖、Ｌ−DOPA注射など）に代わるべきもので
ある。 合成PGRFは医師が陽性の窒素平衡および同化
作用を希望する臨床医学的症例すべて、たとえば
傷の治瘉、広範囲の火傷の治療、広範囲の外科手
術に伴う術後期間その他の医学的衰弱状態、なら
びに多くの老人医学的症状および未熟状態で出産
した乳児の小児医学的症状において興味深いもの
となるはずである。充実性腫瘍のための広範囲の
放射線療法中およびその後の患者においても、同
化作用を刺激するため、また造血系の幹細胞の刺
激に対するGHの作用を利用するために、GH分
泌の刺激は興味深い。合成PGRFペプチドはヒト
に投与するためには少なくとも約93％、好ましく
は少なくとも98％の純度をもたなければならな
い。この純度は、目的とするペプチドが存在する
類似ペプチドおよびペプチド断片すべてのうちで
上記の重量％を構成しなければならないことを意
味する。 生物活性をもつペプチドは大部分が最初に認識
されたもの以外の生物活性をもつことが認められ
ている。このような前例からみて、PGRFは実際
上興味深い下垂体外活性をもつことが見出される
見込みがある。PGRFはヒトの膵臓腫瘍から抽
出、単離されたが、全体的な経験および実験に基
づいて、PGRF（１−44）アミドのアミノ酸配列
はヒト視床下部性のGH放出因子の配列と同一で
あると信じられている。 合成PGRFペプチドを農場の動物その他の温血
動物に長期投与することにより同化作用が促進さ
れ、従つて筋肉量に関して体重が増加すると期待
される。水産養殖において魚類その他の冷血海水
動物を飼育して生育を促進するために用いること
も予定されている。動物には約５％程度の低い純
度で投与することも許容できる。 合成PGRFまたはその無毒性塩を、薬剤組成物
を形成する薬剤学的に受容できるキヤリヤーと組
み合わせてヒトを含む哺乳動物に静脈内、皮下、
筋肉内または経口的に投与することができる。こ
の投与は、治療されるべき受容者がこの種の治療
を必要とする場合に、成長ホルモンの放出を刺激
するために医師により採用することができる。必
要な用量は治療される特定の状態、状態の重症
度、および目的とする治療の期間に応じて変わる
ものであろう。 この種のペプチドはしばしば、薬剤学的に受容
できる無毒性の塩たとえば酸付加塩、またはたと
えば亜鉛、鉄などとの金属錯体（これらは本発明
の目的のための塩と考えられる）の形で投与され
る。この種の酸付加塩の具体例は塩酸塩、臭化水
素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、マレイン酸塩、酢酸
塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、リン
ゴ酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩などであ
る。活性成分を錠剤の形で投与すべきである場
合、錠剤には結合剤、たとえばトラガカント、コ
ーンスターチもしくはゼラチン；崩壊剤、たとば
アルギン酸；および滑沢剤、たとえばステアリン
酸マグネシウムが含有されていてもよい。液状で
の投与を希望する場合、甘味剤および／または香
味剤を用いてもよく、等張食塩液、リン酸塩緩衝
液などに入れて静脈内投与することも行われる。 これらのペプチドは医師の指導のもとに投与さ
れるべきであり、薬剤組成物は通常はペプチド
を、慣用される薬剤学的に受容できるキヤリヤー
と共に含有するであろう。通常は用量は受容者の
体重１Kg当たりペプチド約20〜約2000ナノグラム
であろう。 本発明のペプチドの急性毒性は次のとおりであ
る： ラツトにおけるPGRF（１−44）の静脈内注射 使用動物：体重250〜1000ｇの雄および雌のスプ
ラグドーリーラツト50匹以上 披験化合物：PGRF（１−44）１〜10mg／ml0.9％
生理食塩水覚醒している自由に動き回つている
ラツトにPGRF（１−44）100μｇを静注しても
ラツトの行動に何ら明白な変化は見られなかつ
た。月令３ケ月ないし22ケ月の若いラツトをペ
ントバルビタールナトリウム塩で麻酔して25μ
ｇ／KgのPGRF（１−44）を静注しても正常に
覚醒した。 ラツトにおけるPGRF（１−40）の静脈内注射 使用動物：体重250〜400ｇの雄および雌のスプラ
グドーリーラツト50匹以上 被験化合物：PGRF（１−40）1μｇ／0.9％生理食
塩水 覚醒して自由に動き回つているラツトにPGRF
（１−40）を100μｇを静注してもラツトの行動に
何ら明白な変化は見られなかつた。ペントバルビ
タールナトリウム塩で麻酔して50μｇ／Kgの
PGRF（１−40）を静注してもすべてのラツトは
正常に覚醒した。 マウスにおけるPGRF（１−40）OHの静脈内注
射 使用動物：体重17〜24ｇのマウス15匹 被験化合物：PGRF（１−40）OH1mg／ml（媒
体） 媒体組成：0.9％NaCl、10％マンニトール、0.9ベ
ンジルアルコール、１ｍＭアスコルビン酸、10
ｍＭ酢酸 すべてのマウスをエーテル麻酔し、外科的に露
出させたけい静脈に、75μ1媒体のみ（７匹のマ
ウス）、75μｇのPGRF（１−40）OH／75μ1の媒
体（８匹のマウス）を各々注射した。切り口をク
リツプで閉じて、マウスをケージに戻した。ペプ
チドで処理された上記マウスは≧３mgペプチド／
Kg（体重）のペプチドを注射されたことになる。
これらのマウスは、注射後１時間および24時間径
過した時点ですべて生きていた。 本発明者らに現在知られている最良の形態を構
成する好ましい実施態様に関して本発明を記述し
たが、特許請求の範囲に示した本発明の範囲を逸
脱することなく当業者に明らかな各種の変更およ
び修正を行うことができると解すべきである。た
とえば44員子の鎖における変更、特にペプチドの
カルボキシ末端に始まる削除を今日既知の実験慣
例に従つて行い、長さ40残基以下であり、Ｃ−末
端にNH₂またはOHをもち、ペプチドの効力のす
べてまたはきわめて実質的な部分を保持する断
片、たとえばPGRF（１−27）を製造することが
でき、これらのペプチドは本発明の範囲内にある
と考えられる。さらにいずれの末端もしくは両未
端に付加を行い、および／または一般にペプチド
化学の全搬的技術において周知のように天然残基
の代わりに一般的に等しい残基を用いて、本発明
の範囲から逸脱することなく天然ポリペプチドの
効力の少なくとも実質的な部分をもつ同族体を製
造することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明のペプチドPGRF（１−44）お
よびPGRF（１−40）の生長ホルモン（GH）放
出能力の比較（例７）を示すグラフである。図中
□はPGRF（１−40）、■はPGRF（１−44）を示
す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile −Phe−Thr−Asn−Ser−Tyr −Arg−Lys−Val−Leu−Gly −Gln−Leu−Ser−Ala−Arg −Lys−Leu−Leu−Gln−Asp −Ile−Met−Ser−Arg−Gln −Gln−Gly−Glu−Ser−Asn −Gln−Glu−Arg−Gly−Ｘ−Ｒ （式中、ＸはAlaまたはAla−Arg−Ala−Arg−
   Leuであり、ＲはNH₂またはOHである）の構造
   を有する合成ペプチド。 ２ ＸがAlaであり、ＲがNH₂である特許請求の
   範囲第１項に記載の合成ペプチド。 ３ ＸがAlaであり、ＲがOHである特許請求の
   範囲第１項に記載の合成ペプチド。 ４ ＸがAla−Arg−Ala−Arg−Leuであり、Ｒ
   がNH₂である特許請求の範囲第１項に記載の合
   成ペプチド。 ５ ＸがAla−Arg−Ala−Arg−Leuであり、Ｒ
   がOHである特許請求の範囲第１項に記載の合成
   ペプチド。 ６ 式 Ｈ−Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile −Phe−Thr−Asn−Ser−Tyr −Arg−Lys−Val−Leu−Gly −Gln−Leu−Ser−Ala−Arg −Lys−Leu−Leu−Gln−Asp −Ile−Met−Ser−Arg−Gln −Gln−Gly−Glu−Ser−Asn −Gln−Glu−Arg−Gly−Ｘ−Ｒ （式中、ＸはAlaまたはAla−Arg−Ala−Arg−
   Leuであり、ＲはNH₂またはOHである）の構造
   を有する合成ペプチドおよび薬剤学的に受容でき
   る液体または固体状の担体を含むヒトにおいて成
   長ホルモンの放出を促進する医薬組成物。 ７ ＸがAlaであり、ＲがNH₂である特許請求の
   範囲第６項に記載の医薬組成物。 ８ ＸがAlaであり、ＲがOHである特許請求の
   範囲第６項に記載の医薬組成物。 ９ ＸがAla−Arg−Ala−Arg−Leuであり、Ｒ
   がNH₂である特許請求の範囲第６項に記載の医
   薬組成物。 １０ ＸがAla−Arg−Ala−Arg−Leuであり、
   ＲがOHである特許請求の範囲第６項に記載の医
   薬組成物。