JPH01314967A - 免疫検定法を行う装置及び方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） この発明は、アフィニティークロマトグラフィー装置及
びその方法に関する。

この発明はさらに、免疫検定法を行う半自動化装置及び
その方法に関する。

さらに詳細には、この発明は、アフィニティークロマト
グラフィー装置により、酵素結合型免疫サンドイッチ検
定方法（ｅｎｚｙｍｅ−１ｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｉｃａｌ　ｓａｎｄｗｉｃｈ　ａｓｓａｙｓ；以下Ｅ
ＬＩＳＡと略す）を半自動的に行う装置及び方法に関す
る。

この発明はさらに、親和紙、又はその他の可撓性保持マ
トリクスのクロマトグラフィー装置により、゛サンドイ
ッチ型“の免疫検定を半自動的に実施するための装置及
び方法に関する。

（従来の技術） 最近のバイオテクノロジーの発達と、安価で均質性のあ
る免疫グロブリンのソースとしての単クローン性抗体の
商業化によって、ヒト及び動物の体液中に見出される広
範囲の抗原物質に対して安価で、比較的使い易い、免疫
検定が広く使われるようになった。

サンドイッチ型検定においては、抗原被検者分子Ｘを含
むか又は含まないサンプルは、前もって共有的に又はそ
の他の仕方で紙ストリップ又はその他の保持マトリクス
に結合された抗Ｘ抗体と反応させられる。抗Ｘ抗体と反
応するサンプル中の如何なる被検者分子Ｘも結果的に紙
ストリップ又はその他の保持マトリクスに不可逆的に結
合されることになる。

次に、マーカーに前もって共有的に結合された同じタイ
プの又は別のタイプの抗Ｘ抗体からなる抱合体が、元の
被検者分子Ｘ−抗Ｘ抗体の固定複合体と反応させられる
。余剰の自由抱合体は次に洗い流される。この技術にお
いては、複合体に不可逆的に結合されることになるマー
カーの量は、問題となるサンプル中の被検者分子Ｘの量
に比例する。

抱合体に結合されたマーカーは、放射性アイソトープと
してもよいし、或いは酵素としてもよい。放射性アイソ
トープ型のマーカーであれば、従来のシンチレーション
計数法により容易に測定することができる。抱合体に結
合された酵素マーカーの場合は、選ばれた特別の酵素を
普通に測定できる方法であって好ましい方法であればど
の方法で測定してもよい。免疫検定用マーカーとして使
用するのに最も都合のよいタイプの抱合体結合酵素の一
つは、発色酵素、即ち、無色、又は無色に近いクロマト
ゲンを濃色の、従って測定しやすい色素体に変換する酵
素である。加えて、ある方法においては、螢光マーカー
も同様に、この発明の装置及び方法に用いることが考え
られる。発色酵素マーカーは、放射性マーカーよりもＥ
ＬＩＳＡに用いるのが概して容易で、安全で、かつ安価
である。

以上の保持マトリクスは可撓性の非紙質で多孔質又は非
多孔質の膜、或いは可撓性の紙ストリップとするのが好
ましい。いずれの場合でも、ＥＬＩＳＡは特別の型式の
アフィニティークロマトグラフィー装置を構成子る。

上記の解説は、ここでは、この発明の装置及び方法を利
用してヒト又は動物の液体中の関係ある種々の抗原タン
パク分子又は非タンパク分子を検出するために比色ＥＬ
ＩＳＡアフィニティークロマトグラフィー法を用いるに
際しての背景と理論的根拠を与えるものである。

（発明が解決しようとする課題） ドイチュ及びミードの米国特許第４．０９４．６４７号
明細書、並びに上ピン及びヒラトの米国特許第４，６９
０，９０７号明細書に開示されているような従来技術と
しての毛細管アフィニティークロマトグラフィーシステ
ムでもってＥＬ　Ｉ　ＳＡを利用するに当って遭遇する
主たる問題点の一つは、かかるシステムでは、本発明が
関するところの単一の半自動手順型式でＥＬＩＳＡを実
施できないことである。すなわち、抱合体が上記の従来
システムで反応し、そして余剰の抱合体が洗い流された
後で、保持マトリクスを洗浄溶液リザーバから物理的に
取り出し、そして別個の発色現像溶液リザーバの中に手
で移さねばならない。このように、ＥＬＩＳＡを従来の
アフィニティークロマトグラフィーシステムで実施する
ためには二つの別個の手動ステップ即ち手順が必要であ
る。これら二つの手動手順がもし注意深くかつ清潔に実
行されない、又は正確な時間に正確に分離されないと、
一部の原因として発色現像溶液と余剰の未結合抱合体と
の反応のために、偽陽性及びその他の擬似の試験結果が
生じ得ることになる。

このような事情に鑑みて本発明は、検定を楽な°°悪態
様即ち半自動の単一手順で実行できる免疫検定を行うた
めの方法及び装置を提供することを目的としている。

（課題を解決するための手段） 本発明は、異なる高さを有するように形成され複数の順
次的に配列された液体リザーバを利用し、サンプル、抗
原、抗体、及び抱合体にそれぞれ接触する液体を順次に
かつ離散的な層流的かつ非乱流的に運動させることにな
る、アフィニティークロマトグラフィー装置による゛°
サンドイッチ型パ、免疫検定を半自動手順で行うための
構成を有する。

即ち、本発明は各々が異なる所定形状の高さにて配列さ
れた複数の液体リザーバ区画室からなり、前もってサン
プル、抗体及び抱合体が面上に付着された保持マトリク
スに沿って半自動・的、順序的そして離散的な液体の運
動が生じるようにしたアフィニティークロマトグラフィ
ー装置を備えている。

この装置は好ましくは、紙又は他の多孔質若しくは非多
孔質マトリクスのアフィニティークロマトグラフィー装
置を実行するための複数の区画室を含む箱状即ちタンク
状構造からなっており、かかる箱状即ちタンク状構造は
さらに複数の液体溶剤リザーバからなり、第１の液体リ
ザーバは第２の液体リザーバよりも高い位置にある。高
い位置にある第１の液体リザーバは洗浄溶液を収容して
おり、低い位置にある第２の液体リザーバは発色現像溶
液を収容している。

洗浄液リザーバから最も下流に位置する紙ストリップ又
は保持マトリクスの端部は、装置の余剰流体リザーバ内
の吸収パッドと接触するように置くのが好ましい。紙ス
トリップ即ち保持マトリクスの他端は、洗浄溶液と発色
現像の両リザーバを通るときにループを描いている。

この発明の装置を用いる本発明の方法においては、 抗体を保持マトリクスに付着させて結合し、サンプルを
保持マトリクス上に抗体から離して付着させ、抱合体を
保持マトリクス上にサンプル及び抗体から離して付着さ
せ、保持マトリクスをクロマトグラフィー装置の反応室
内に置く前又は後に抗体、サンプル及び抱合体を面上に
付着させた保持マトリクスを配置し、 これにより、まず洗浄溶液が毛細管により保持マトリク
スに沿って順序的かつ離散的に移動して、抗体、サンプ
ル及び抱合体の間に免疫反応が生じ、 次に、発色現像溶液が毛細管により保持マトリクスに沿
って洗浄溶液の先行した移動の完了に続いて移動し、前
記免疫反応で生じた生成物と前記発色現像溶液とによっ
て発色反応が生じる、各ステップを含んでいる。

より具体的には、特定の抗原材料分子Ｘに対する抗体が
、洗浄リザーバから下流において紙ストリップ又は他の
保持マトリクスに付着され、そして共有的又はそれ以外
の仕方で支持マトリクスに対して結合される。次に、未
結合の抱合体が洗浄リザーバの下流近くで紙又は保持マ
トリクス上に置かれる。次にサンプルが紙又は保持マト
リクス上の抗体と抱合体との間に置かれる。一つの実施
例においては、今や抱合体、抗体及びサンプルを含むこ
とになった保持マトリクスが、次にクロマトグラフィー
装置の反応区画室内に置かれる。しかしながら、この発
明の別の実施例では、保持マトリクスは、サンプル、抱
合体及び抗体を保持マトリクスに適用する前に、装置内
に置くこともできる。

次に洗浄溶液は、自動的に、非乱流的に、離散的に、サ
ンプル帯を、まず保持マトリクス上に結合された抗体帯
の場所に選ぶ、このとき、抗原試料分子Ｘが、もしサン
プル中に存在すれば、抗体に結びつくことになる。次に
洗浄溶液は、自動的にそして離散的に抱合体を、抗原試
料分子Ｘ複合体の場所に運び、そして次に抱合体が、抗
原試料分子Ｘ複合体に結合する。残った洗浄溶液は余剰
の未結合の抱合体を余剰流体リザーバに実質的に運び去
ることになる。

（作　用） 洗浄溶液が高い位置にある第１の液体リザーバから完全
に排出されると、低い位置にある第２の液体リザーバ内
に収容されている発色現像溶液が毛細管作用により保持
マトリクスに沿って移動し始める。発色現像溶液が抗原
試料分子Ｘ−抱合体複合体のあるところに到達すると、
抱合体の酵素は、発色現像溶液内に見出されるクロマト
ゲンを測定可能な色素体に変換する作用をする。最終的
には、もし前に導入したサンプル内に真に幾分かの試料
分子Ｘが存在していたならば、抗体−試料分子Ｘ−抱合
体複合体の場所に測定可能な色が付いた帯又は領域が見
られる結果となる。もしサンプル中に試料分子Ｘが何ら
含まれていなければ、保持マトリクス上には区別できる
色の帯は何ら現われない。

この発明の重要な特徴は、ここに記載される装置及び方
法は、発色現像溶液が固定サンドイッチ複合体と反応で
きる前に、未結合の抱合体が、固定された抗体−試料分
子Ｘ−抱抱合サンドイッチ命命体ら実質的にかつきれい
に洗い流されるのを自動的に確実に行うという点にある
。結果として、発色現像化合物が未結合の抱合体と反応
するときに生じる可能性がある偽陽性やその他の擬似結
果が防止される。

（実施例） 第１図は、この発明の免疫検定を行う装置の好ましい実
施例を上方正面から見た斜視図であるが、この図を参照
して以下説明する。

第１図に見られるように、この発明の免疫検定を行う装
置が、総括的に符号１で示されている。

この好ましい実施例においては、免疫検定を行う装置１
は直方体の形をした箱状、即ちタンク構造の形をなして
おり、ハウジングはポリスチレン又はポリビニールクロ
ライド等の゛°プラスチック°°材料から作るのが好ま
しい。箱形状の装置１は、さらに、垂直パネル２、垂直
パネル３、及び垂直パネル４によって四つの個別の区画
室に分割されているが、これについては後にさらに説明
する。垂直パネル２，３及び４は、垂直方向を向いたハ
ウジングパネル１５゜１６、１７及び１８の頂部まで到
達しないように低くするのが好ましい。

パネル２，３及び４は背を低くしであるので、もし所望
であれば、パネル１５．１６．１７及び１８の頂部にカ
バーパネル（図示せず）を載せることもできる。カバー
パネルは、装置の使用中に装置の温度を維持するのを助
けることができると共に環境汚染を防止することにもな
る。カバーパネルはまた、この発明の方法を実施するユ
ーザーによってサンプル、抗体、抱合体又はその他の物
質を付着させかつこれらを目視するのにも有用である種
々の形の孔を有することができる。

第１図に示されているように、装置１の第２の液体リザ
ーバ１９の端部から装置１の最も下流の端部に向って順
次に、貯蔵液体用リザーバである第２の液体リザーバ区
画室１９がパネル１６及び２、並びにパネル１７．１８
及び６の一部分によって境界づけられており、パネル６
は実際上、装置１の底、即ち床パネルである。

次に、やはり貯蔵液体用リザーバである第１の液体リザ
ーバ区画室２０はパネル２，３．１７及び１８の部分に
よって境界づけられており、そして水平に配された床パ
ネル５をさらに有していて、この床パネル５は、パネル
６、即ち第２の液体リザーバ区画室１９の床のレベルよ
り相当上に位置している。

もし所望であれば、他の液体リザーバ、実際、複数のか
かる液体貯蔵リザーバをこの発明の種々の実施例に採用
することもできる。これらのリザーバも、この発明の実
施例の原則に従って種々のレベルに配置される。

この好ましい実施例では次に第３の区画室、即ち反応区
画室２２が続き、この区画室は液体を含んでいなくそし
て側部をパネル１７及び１８で、底部をパネル６で、そ
して端部をパネル３及び４で境界づけられている。

最後に、第３のリザーバ区画室２１である第４の区画室
が続き、この区画室はここでは余剰液体リザーバ２１と
しての働きその名称で称されるが、構造的には垂直パネ
ル１５及び４とパネル１７、１８及び６の一部分によっ
て形成されている。

本発明の範囲内の免疫検定を行う好ましい方法、及び第
１図に示された本発明の装置と結び合わせて利用される
方法を次に記述する。この発明の方法は、ヒト絨毛性ゴ
ナドトロピン（性腺刺激ホルモン）（ＨＣＧ）の検出に
用いる発色免疫検定によってさらに具体化されている。

ＨＣＧ抗原を含むか又は含まない流体サンプルは、細長
い紙ストリップ又はそれ以外の多孔質性又は非多孔質性
の保持マトリクス１１の幅にわたるサンプルバンド１３
として、第１図に示めされた場所に付着される。ＨＣＧ
に対する抗体（抗ＨＣＧ抗体）も同様に付着され前記保
持マトリクスの幅にわたる抗体バンドとして、第１図に
示された場所に付着されかつ保持マトリクス１１に共有
的又はその他の仕方で結合される。

抗ＨＣＧ抗体は、クロマトゲン基質酵素、即ち抱合体に
対して共有的に結合されるが、この抗ＨＣＧ抗体もまた
、保持マトリクスの幅にわたる抱合体バンド１４として
第１図に示された場合において付着される。この支持マ
トリクス１１もまた、所望に応じて種々の形をとること
ができる。

サンプル、抗体及び抱合体等々は、バンド以外の形をと
って保持マトリクスに沿って個別の離れた領域に付着さ
せることも可能である。さらに、付着させた物質を分離
させるために、部分的にパ分離された゛ストリップを用
いることも考えられる。

前述のように、液体、試薬等を個々に人の手で保持マト
リクス及び液体リザーバに収容し、かつ付着させるのに
代えて、必要な全ての液体、試薬等を収容し、かつ付着
させるための自己保持性と自己分配性のあるカセット状
の装置を用いることも同様に考えられる。

水性の緩衝洗浄溶液９が、免疫検定装置の高い位置にあ
る第１の液体リザーバ区画室２０内に導入される。水性
の緩衝発色現像溶液８が、免疫検定装置の低い位置にあ
る第２の液体リザーバ区画室１９内に導入される。発色
現像溶液８は、無色又は無色に近いクロマトゲンを含ん
でおり、このクロマトゲンは抱合体の酵素作用によって
、色の付いた、それゆえ測定可能な色素体に変換される
。区画室１９内の発色現像溶液８の水位は、区画室２０
内に収容されている洗浄溶液９の低パネル５のレベルよ
り僅かに下方に維持される。

上述のように結合された抗ＨＣＧ抗体バンド１２、未結
合のサンプルバンド１３、及び未結合の抱合体バンド１
４を面上に付着した保持マトリクス１１は、第１図に示
されているように、免疫検定装置１の反応区画室２２の
上側部分に実質的に位置づけられている。サンプル、抗
体、抱合体等は、保持マトリクス１１が反応区画室２２
の所定位置に置かれているときか、或いはまだ反応区画
室２２の外にある時のいずれかに保持マトリクス１１に
付着できることにも注意すべきである。

即ち、一端、換言すると保持マトリクス１１の下流即ち
開始端は、発色現像溶液８を収容する第２の液体リザー
バ区画室１９の底部に置かれる。

保持マトリクス１１の次のさらに下流の部分は、緩衝洗
浄溶液９を収容する第１の液体リザーバ区画、室２０の
底部を通ってループとなりこの底部に接触している。抗
体バンド１２、サンプルバンド１３及び抱合体バンド１
４を有する保持マトリクス１１の次のさらに下流の部分
は、第３区画室、即ち免疫検定装置の反応区画室２２の
外側境界を定めるパネル３及び４の頂部の上の空中に支
持するのが好ましい。

保持マトリクス１１の最も下流の端部、即ち末端は、最
後の且つ第４の区画室、即ち、免疫検定装置の、余剰溶
液リザーバ２１とも呼ばれる第３のリザーバ区画室２１
内に導入される。吸収パッド手段１０を第３の液体リザ
ーバ区画室２１内に置くのが好ましく、かかる吸収パッ
ド１０は保持マトリクス１１の末端と密接な物理的接触
をしており、それによって本発明の液体毛細管輸送プロ
セスを一様に促進している。

本発明の免疫検定を行う装置及び゛方法は、次に述べる
ように作用する。所望のサンプル、抗体、抱合体等を有
する適正に準備された保持マトリクス１１が適正に準備
された免疫検定装置１内の所定位置に置かれるとすぐに
、高い位置にある第１の液体リザーバ区画室２０内に収
容された緩衝洗浄溶液９が毛細管作用により保持マトリ
クス１１に沿って層流で、非乱流の上昇流れを開始する
。洗浄溶液９は、抱合体バンド１４をサンプルバンド１
３との可動成分と接触し、前記可動成分を液体前線の後
方での二つの順次的に分離した移動するバンドとして、
きれいに且つ混合せずに、結合抗体バンド１２に向けて
輸送する。

第１の順次的に移動して、結合抗体バンド１２に遭遇す
るバンドはサンプルバンド１３である。

サンプルバンド１３に存在する抗原ＨＣＧは、抗体バン
ド１２にしっかりと付着することになる。

その次に順次的に移動して、今やＨＣＧが付着した抗体
バンド１２に遭遇するバンドは、抱合体バンド１４であ
る。

今や抗体によって固定されてしまった抗原ＨＣＧの各分
子は、今度は、抱合体の一つ又は複数の分子を固定する
。もしサンプル中に抗体によって固定されるべきＨＣＧ
分子が全くなければ、そのときは抱合体が保持マトリク
ス１１上に固定されることはない。

緩衝洗浄溶液９が毛細管作用により第１の液体リザーバ
区画室２０から完全に移動し、それによって抗体１２か
ら実質的に全ての余剰自由抱合体を流し去ると、そのと
き、そしてそのときにのみ、発色現像溶液８は下側に位
置する第２の液体リザーバ区画室１９から保持マトリク
ス１１に沿って移動し始めることになる。

発色現像溶液８が、結合した抗体−ＨＣＧ−抱合体のサ
ンドイッチ複合体に到達すると、そのときには抱合体中
の酵素はクロマトゲンから色素体を発生させ、比色定量
的に測定可能な着色バンドを生じ、これによって、もし
あればサンプル中のＨＣＧの量を指示する。発色現像溶
液８が第２の液体リザーバ区画室１９から毛細管作用に
より完全に移動してしまった後で、保持マトリクス１１
を最終的に目視で又はその外の手段で測定すれば、サン
プル中のＨＣＧの存在及びその量を決定することができ
る。ストリップ上に偶然にも自由な未結合の抱合体が存
在すると、ストリップの゛背景゛°色の量が変動すると
いうことに注意もすべきである。それゆえ、免疫検定方
法の結果の読取りに誤りを除くために確実性のある及び
試薬の制御を採用することが有用である。゛分割°°ス
トリップ（即ち、長手方向に部分的に分割したもの）も
また、一つのストリップについて制御と幾つかのサンプ
ルとを管理するとき、採用することができる。

（発明の効果） 本発明は前もってサンプル、抗体及び抱合体が面上に付
着された保持マトリクスに沿って洗浄溶液が自動的に順
序的にかつ離散的に移動し、続いて発色現像溶液が移動
し、未結合の抱合体は発色現像溶液が免疫複合体に自動
的に接触するに至る前に免疫サンドイッチ複合体から実
質的に洗い流されることになるので、抗体−抗原−抱合
体の複合体の形成及び色素体インジケータの現像が半自
動的に容易に行うことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の免疫検定を行う装置の上方正面から
見た斜視図である。 １・・・免疫検定装置 ２．３．４・・・垂直パネル　５・・・底パネル６・・
・床パネル　　　　　　８・・・発色現像溶液９・・・
洗浄溶液　　　　　　ｌＯ・・・パッド１１・・・保持
マトリクス １２・・・抗ＨＣＧ抗体バンド １３・・・サンプルバンド　　　１４・・・抱合体バン
ド１５、１６．１７．１８・・・ハウジングパネル１９
・・・第２の液体リザーバ区画室 ２０・・・第１の液体リザーバ区画室 ２１・・・第３のリザーバ区画室 ２２・・・反応区画室

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）各々が異なる所定形状の高さにて配列された複数
   の液体リザーバ区画室からなり、前もってサンプル、抗
   体及び抱合体が面上に付着された保持マトリクスに沿っ
   て半自動的、順序的そして離散的な液体の運動が生じる
   ようにしたアフィニティークロマトグラフィー装置にお
   ける酵素結合型免疫サンドイッチ検定（ＥＬＩＳＡ）を
   半自動的に行う装置。（２）複数の液体リザーバ区画室
   がそれぞれ所定形状の異なる高さに配列され、さらに前
   記液体リザーバ区画室が低い位置にあって発色現像溶液
   を収容する第２の液体リザーバ区画室と、高い位置にあ
   って洗浄溶液を収容する第１の液体リザーバ区画室とを
   含んでいる請求項１に記載のアフィニティークロマトグ
   ラフィー装置における酵素結合型免疫サンドイッチ検定
   を半自動的に行う装置。 （３）複数のパネルによって定められ複数の順序的に配
   列された複数の区画室に区画された１つのクロマトグラ
   フィー装置からなり、さらに該装置は低い位置にあって
   発色現像溶液を収容する第２の液体リザーバ区画室と、
   高い位置にあって洗浄溶液を収容する第１の液体リザー
   バ区画室と、液体が満たされていない反応区画室と、余
   剰液体蓄積用の第３のリザーバ区画室を含み、前記第２
   及び第１の液体リザーバ区画室の前記所定形状の異なる
   高さによって前記第２及び第１の液体リザーバ区画室か
   ら前記反応区画室内に予め位置を決めて置かれた保持マ
   トリクスに沿って、自動的に、順序的に、そして離散的
   に発生する層流で非乱流の液体の流れが生じ、前記保持
   マトリクスに前もって付着された抗体、サンプル及び抱
   合体の間に免疫反応が生じ、同様に続いて前記保持マト
   リクス上に発色反応が生じることを特徴とする、アフィ
   ニティークロマトグラフィー装置により酵素結合型免疫
   サンドイッチ検定を半自動的に行う装置。 （４）ａ）抗体を保持マトリクスに付着させて結合し、 ｂ）サンプルを前記保持マトリクス上に前記抗体から離
   して付着させ、 ｃ）抱合体を前記保持マトリクス上に前記サンプル及び
   抗体から離して付着させ、 ｄ）前記保持マトリクスをクロマトグラフィー装置の反
   応室内に置く前又は後に、前記抗体、前記サンプル及び
   前記抱合体を面上に付着させた前記保持マトリクスを配
   置し、これにより； ｅ）まず、洗浄溶液が毛細管により前記保持マトリクス
   に沿って順序的かつ離散的に移動して、前記抗体、サン
   プル及び抱合体の間に免疫反応が生じ、そして； ｆ）次に、発色現像溶液が毛細管により前記保持マトリ
   クスに沿って、洗浄溶液の先行した移動の完了に続いて
   移動し、前記免疫反応で生じた生成物と前記発色現像溶
   液とによって発色反応が生じる、 ことを含んでいるアフィニティークロマトグラフィー装
   置に よって酵素結合型免疫サンドイッチ検定を半自動的に行
   う方法。 （５）余剰液体のための前記第３のリザーバはさらに吸
   収パッドを収容しており、前記パッドは前記保持マトリ
   クスと物理的に接触している、請求項３に記載のアフィ
   ニティークロマトグラフィー装置による酵素結合型免疫
   サンドイッチ検定を半自動的に行う装置。 （６）ａ）抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）抗体
   を保持マトリクスに付着させて結合し、 ｂ）ＨＣＧを含む可撓性のあるサンプルを、前記保持マ
   トリクス上に前記抗ＨＣＧ抗体から離して付着させ、 ｃ）抗ＨＣＧ抗体−酵素抱合体を、前記保持マトリクス
   上に前記サンプル及び前記抗ＨＣＧ抗体から離して付着
   させ、 ｄ）前記保持マトリクスを前記クロマトグラフィー装置
   の反応区画室内に置く前又は後に、前記抗ＨＣＧ抗体、
   前記サンプル及び前記抗ＨＣＧ抗体−酵素抱合体を面上
   に付着させた前記保持マトリクスを配置し、これにより
   ；まず洗浄溶液が前記保持マトリクスに沿って順序的に
   、非乱流的にかつ離散的に移動し；続いて次に、発色現
   像溶液が、前記保持マトリクスに沿って順序的に、非乱
   流的にかつ離散的に移動し、洗浄溶液及び発色現像溶液
   が毛細管作用によって移動し、 ｅ）前記洗浄溶液が前記保持マトリクスに沿って前記順
   序的かつ離散的な動きをすることによって、前記サンプ
   ル、抗体及び抱合体の間に免疫反応が生じ、 ｆ）続いて次に、前記洗浄溶液により前記保持マトリク
   スから余剰サンプルを取り除き、ｇ）続いて次に、前記
   抗体−酵素抱合体を、抗体によって固定されたＨＣＧの
   分子と反応させ、 ｈ）続いて、前記洗浄溶液により抗体から余剰の抱合体
   を取り除き、 ｉ）続いて、発色現像溶液を前記免疫反応の生成物と反
   応させて、色が着いた測定可能な生成物を形成する、こ
   とを含んでいるアフィニティークロマトグラフィー装置
   によりＨＣＧの酵素結合型免疫サンドイッチ検定を半自
   動的に行う方法。 （７）前記発色現像溶液は、無色、又は無色に近いクロ
   マトゲンを含み、該クロマトゲンは抱合酵素、又は前記
   反ＨＣＧ抗体−酵素抱合体によって、強く着色されそし
   て測定可能な色素体に変換されることを特徴とする請求
   項３記載のアフィニティークロマトグラフィー装置によ
   り酵素結合型免疫サンドイッチ検定を半自動的に行う装
   置。 （８）さらに全ての必要な液体、試薬等を収容し保持マ
   トリクス及び液体リザーバに付着させるための自己保持
   性と自己分配性があるカセット状の手段を付加してなる
   、請求項３に記載のアフィニティークロマトグラフィー
   装置により酵素結合型免疫サンドイッチ検定を半自動的
   に行う装置。 （９）請求項４記載のアフィニティークロマトグラフィ
   ー装置により酵素結合型免疫サンドイッチ検定を半自動
   的に行う方法を実施するための請求項３又は７記載の装
   置。 （１０）請求項６記載のアフィニティークロマトグラフ
   ィー装置により酵素結合型免疫サンドイッチ検定を半自
   動的に行う方法を実施するための請求項３又は７記載の
   装置。