JPH013105A - 穀類又はナッツ類のアフラトキシン汚染を防除する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 アフラトキシンは、現在知られている物質の中で発癌性
の最も強い物質の一つと考えられている。

このアフラトキシンは、アスペルギルス・フラバノ（Ａ
ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｌａｖｕｓ）又はアスペルギ
ルス・パラシティカス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｐａ
ｒａｓｉｔｉｃｕｓ）などのアフラトキシン産生菌によ
り産生され、Ｂ１、Ｇ１なと幾つかの誘導体が知られて
いる。

小麦、大麦、米、コーンなとの穀類やハーゼルナッツ、
アーモンド、ブラジルナツツ、ビーナツツなどのナツツ
類などにアフラトキシンて汚染されたもの（Ａｍ、　Ａ
ｓｓ、　Ｃｅｒｅａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｓ　Ｉｎｃ、、
５９５゜１９７４；６０３．＋９７５：ＪＡＯＣ５９８
０Ａ、１９８１；Ｊ、　Ａｇｒｉｃ、　ＦｏｏｄＣｈｅ
ｍ、、２６，２４９，１９７８；Ｄｔｓｃｈ　Ｌｅｂｅ
ｎｓｍ、　Ｒｕｄｓｃｈ、　７６゜４７、＋９８０；　
Ｌｅｂｅｎｓｍ、−ｗｉｓｓ、　ＩＪ、　−Ｔｅｃｈｎ
ｏｌ、、１４，２５２゜１９８１など）が見つかってお
り、これらの汚染された作物が栽培、収穫された地域は
、アフラトキシン産生菌で汚染されている可能性が大き
い。このようなアフラトキシンに汚染された穀類やナツ
ツ類は、健康上問題があるため、輸入が厳しく規制され
ている。

これらの穀類やナツツ類がアフラトキシン産生菌で汚染
された畑で栽培された場合、生産物がアフラトキシンで
汚染される可能性が大きくなる。

特に、熱帯地方や亜熱帯地方ては、アフラトキシン産生
菌て汚染されているところが多く見つかっている。

この発明は、穀類やナツツ類がアフラトキシンて汚染さ
れるのを防除するとき用いられ、アフラトキシンて汚染
される心配のない穀類やナツツ類を（杖することを目的
としている。

従来の技術 アフラトキシンが土壌で減少すること（５ｏｉｌＳｃｉ
、　Ｓｏｃ、　Ａｍ、　Ｊ、、１１４，１２３７．］Ｄ
８０）が知られており、土壌への吸着や微生物の関与が
考えられる。また、多くの微生物がアフラ）・キシンを
溶解した溶液中のアフラトキシンを減少することも報告
されている（Ｊ、　Ｒａｃｔ、、９３，４６４，１９６
７；　ｊ、　ｇｅｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、。

Ｆ２３．１８５　、１９６８　；Ｎａｔ、ｕｒｕ　ｉ　
５ｓｅｎｓｃｈａｆｔ、ｅｎ、（’ｉ２　、５３７　、
１９７５；Ｐｒｏｃ、　ｊｐｎ、　ＡＳＳＱＣ，Ｍｙｃ
ｏｔｏｘｉｃｏｌ、１２，３３．１９８０）。

そのなかで、ｍ？Ｒ中のアフラトキシンな特に減少する
微生物としてフラボバクテリウム・オウランテイアカム
（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｕｒａｎｔｉａｃ
ｕｍ）、ノ飄チルス・メカチリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
　ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ　）、コリネハクテリウｊｘ−
ルブウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｕｂｒｕ
ｍ）、ペニシリウム・イスランデイカム（Ｐｅ−ｎｉｃ
ｉｌｌｉｕｍ　ｉｓｌａｎｄｉｃｕｍ　）、スタキボト
リス・ロブラータ（Ｓｔ、ａｃｈｙｂｏｔ、ｒｙｓ　Ｉ
ｏｂｕｌａｔ、ａ）、カニングハメラ−ｘキヌラータ（
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ　ｅｃｈｉｎｕｌａｔａ
）、スｌ、レブトコッカス・ラクチス（Ｓｔｒｅｐｆ、
ｏｃｏｃｕｓ　１ａ−ｃ　ｔ　ｉ　ｓ　）などが報告さ
れている。

発明が解決しようとする問題点 しかし、これらの微生物によるアフラトキシンの減少の
多くは、菌体に吸着するものであると報告（，１，ｚｅ
ｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、５４．１８５，１９６８
；　Ｊ、　Ｂａｃ−４，ｅｒｉｏｌ、、凹、４６４．１
９６７　）されており、しかもイ容ン夜中のアフラ）・
キシンを減少するのてあって、アフラトキシン産生苗の
繁殖を隋書したり、収穫した穀類やナツツ類又は畑で栽
培されているこれらの農産物のアフラトキシンな減少す
るかどうかなとは調べられていない。したがって、これ
らの微生物を用いて畑で栽培されている穀類やナツツ類
からアフラ）・キシンを除去したり、アフラトキシンに
汚染されるのを防くことは、行われていない。

また、収［後の穀類やナツツ類からアフラトキシンな除
去するにしても多量の菌体な用いなければならず、食品
に不向きな方法である。しかも、穀類やナツツ類の内部
に存在するアフラトキシンな完全に除去することは、困
難である。その−１−５これらの苗は、食品に用いた場
合、人体に無害であるかどろか不明であり、病原性なと
て衛生り問題がある菌も−考えられる。さらに、例えは
ストレプトコッカス・ラクチスなとのように菌の栄養要
求性が高いため、穀類やナツツ類を処理するのに適さな
いものもある。

この発明の発明者は、食品に用いても安全な微生物を用
いて穀類やナツツ類がアフラトキシンに汚染されるのを
防ぎ、除く方法を開発すべく各種の菌を検索し、昔から
食品と関係の深いバチルス・ズブチルス（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ　　５ｕｂｔｉｌｉｓ）に属する菌株に溶液中のア
フラトキシンを減少し、しかもアフラトキシン産ノ１゛
菌の生育とアフラトキシンの産生をト１■害する性質を
有するものを見いたし、この発明を完成させた。

なお、Ｒ，Ｍａｎｎは、バチルス・ズブチルスのなかに
アフラトキシンを除去する菌株（Ａ、　Ｔ　ＣＣ６６３
３株、ＡＴＣＣ９３７２株）があること（Ｚｌｒｂｅｎ
ｓｍ、−１１ｎｊ、ｅｒｓ、−Ｆｏｒｓｃｈ、、１６．
３，３９．１９７７）を＋［３りｊしている。この報告
は、アフラトキシンｉ容渋を用い２０ＦＩ間処理して４
．０−　Ｆ５０％減少したとしているが、この程度の減
少では畑で栽培している穀類やリーツツ類に用いてもほ
とんど効果が期待てきない。

問題点を解ン夫するための手段 この発明は、アフラトキシン産生菌の繁殖を抑制し、ア
フラトキシンの産生を防ぎ、アフラトキシンな減少する
働きを持ったバチルス・ズブチルスＪＡＭ　　１１４５
株に関するものであり、該バチルス・ズブチルスＪＡＭ
　　１１４．５株を穀類やナツツ類に作用させて穀類や
ナツツ類がアフラトキシンに汚染されるのを防除しよう
とするものである。

この発明に用いるバチルス・ズブチルスＴ　Ａ、　Ｍｌ
　１４、５株は、カルチャーコレクションの東京大学応
用微生物研究所有用菌株施設か保存する菌株であり、誰
でも入手可能である。

なお、その性質からみてバチルス・ズフチルスＩＡＭ１
１４−５株は、本発明の発明者か発見し、先に特許出願
（特願昭６２−２５４．７　Ｆ；弓）したバチルス・ズ
ブチルスＮ　Ｋ　−３３０株（Ｆ　Ｔ’：　ＲＭＰ−９
１６２）とは別の菌株である。

バチルス・ズブチルスＩＡＭ１１４．５株のアフラトキ
シン産生菌の生育阻害効果は、ポテト・デキストロース
寒天の平板培地上に画線して確かめた。

また、例えば実施例１．２に見られるように、この菌株
の培養液を添加したポテト・デキストロース寒天の平板
培地上で、アフラトキシン産生菌（アスペルギルス・フ
ラバスＮＲＲＬ　　３３５７株又はアスペルギルス・バ
ラシティカスＮＲＲＬ２９９９株）の胞子の発芽を阻害
した。

一方、この菌株は、例えば実施例３に見られるように、
アフラトキシンＢ１を添加したニュートリエンド・ブロ
ス培地に接種して３０°Ｃで１週間培養したときアフラ
トキシンＢ１の約８７％を除去した。これは先に述へた
Ｒ、Ｍａｎｎの用いたバチルス・ズブチルス（ＡＴＣＣ
６６３３株及びＡＴＣＣ９３７２株）が３週間培養して
も約４０〜５０％除去したにすぎないのに比へ、はるか
に効率的である。

また、例えば実施例４．５．６．７に示すように、バチ
ルス・ズブチルスＪＡＭ　　１１４５株を殺菌したビー
ナツツ又はコーン粒にアフラトキシン産生菌の胞子と共
に接種すると、これらのアフラトキシン産生菌の胞子の
発芽を著しく阻害した。

このような性質は例えば比較例７．１０．１３．１６に
その例を示すように同しバチルス・ズブチルスに属する
ＩＡＭ　　１０２６株なとのほかの菌には認められなか
った。

さらに、バチルス・ズブチルスＪＡＭ　　１１４５株は
、例えば実施例８．９に示すように、土壌中のアフラト
キシン産生菌によるアフラトキシンの産生を阻害し、穀
類やナツツ類がアフラトキシンて汚染されるのを防除す
る働きがある。

従って、収穫した後の穀類やナツツ類をこの菌株で処理
することによりアフラトキシンによる汚染を防除するこ
とができる。また、収穫前の畑にこの菌株を散布、混合
すると簡単に処理でき、その畑で収穫した穀類やナツツ
類がアフラトキシンにより汚染するのを防くことができ
る。

なお、この発明のバチルス・ズブチルスＪＡＭ１１４５
株を作用させると言うことには、菌体を作用させるのみ
ならず、この菌を培養した培養液を作用させることも含
めるものである。

発明の効果 Ｒ，Ｍａｎｎの用いたバチルス・ズブチルスＡＴＣＣ６
６３３株及びＡＴＣＣ９３７２株が３週間の培養で溶液
中のアフラトキシンを４０〜５０％除去したにすぎない
のに対し、この発明のバチルス・ズブチルスＩＡＭ　　
１１４５株は、例えば実施例３の場合１週間の培養でそ
の８７％を除去したように、溶液中のアフラトキシンを
減少した。しかも、実施例８．９に例を示すようにアフ
ラトキシン産生菌が存在する土壌に加えることにより穀
類やナツツ類に産生されるアフラトキシンが減少し、抑
制することができる。

したがって、畑にバチルス・ズブチルスＩＡＭ１１４５
株を散布、混入させることにより、その畑で収穫する穀
類やナツツ類がアフラトキシンて汚染されるのを防ぐこ
とができ、アフラトキシンの汚染の心配の少ない穀類や
ナツツ類が得られる。

さらに、バチルス・ズブチルスＩＡＭ　　１１４５株の
持っているアフラトキシン又はアフラトキシン産生菌に
対する防除機構に関する遺伝子を遺伝子組替えの資源と
して利用することも可能である。

実施例１ １００ｍｌのポテト・デキストロース液体培地にバチル
ス・ズブチルスＩＡＭ　　１１４５株を１白金耳接種し
、３０℃で２日間振盪培養し、生した菌体を８，０００
ｇで分離した。この菌体を分離した培養液に粉末のポテ
ト・デキストロース液体培地を３肌　６ｇ／ｌの割合て
加え、】２１°Ｃのオートクレーブで殺菌後、平板培地
とした。

この培地にアスペルギルス・パラシティカスＮＲＲＬ　
　２９９９株の胞子を塗布し、２５℃で９日間培養した
ときの胞子の発芽数、コロニーの大きさは、第１表のよ
うになった。

第１表 なお、比較例１は、バチルス・ズブチルスＩＡＭ　　１
１４　Ｆ）株を１））養しでいないポテト・デギスト［
１−ス液体培地に粉末のポテト・デギスｌ−ロース寒天
培地を同様に加え処理した平板培地に胞子を塗イＩｉ　
Ｌ・たものてあり、比較例２はポテト・デキストロース
液体培地の代わりに水を用い同様に粉末のポテト・テキ
ストロース寒天培地を：’３９．　　Ｃ３ｇ／ｌの割合
で加え甲板培地としたものに胞子を塗イ１１１）たもの
を同様に処理したものである。

あ１゛）か１ノめバチルス・ズブチルスＩＡ、Ｍ］、１
４５株を培養した培地を用いた場合（実施例１）は、バ
チルス・ズブチルス［ＡＭｉ１４５株を培養していない
培地（比較例１及び２）に比ヘア゛ノラトキシン産生閑
の胞子の発芽が著しく少なく、！、）かも生したコロニ
ーの太きさも小さかった。すなわち　実施例１の発芽は
、個数７比較した場合、比較例１ど比へ６９．　９％、
　　：４−た比較例２と比へ７２．８％がＦｉ１害され
たＪ二とになる。

実施例２ アース−Ｎノ粉−ギ−２に一フーエーーフーシーハース
ーーＮ−、、［＜、Ｒ，−ｊ、−−−３−蔓−５７株バ
ρ−胞−了−Ｑ−１発−芽」こ−灼Ａ−ろ−ｐｌｔ′Ａ
、、作用実施例１のバチルス・ズノチルスＩＡ、Ｍ１］
４５株を培養し八　　９１体を分離１ノだ’Ｎｍ液を加
λ、たポテト・デキストロース寒人マ［板培１１１！に
、アスペルギルス・フラハスＮ　ＲＲＬ　　３　：（Ｆ
コ′７株の胞子・を塗イ１１シフ、２　Ｆ＋　Ｔ’で９
１１間培４した。このときの胞子の発芽Ｆ１．及び：ｌ
：Ｉ　Ｉ−１二゛、−の−にきさ乙；１．第２表のよう
になυ〕、・０ 第２表 なお、比較例７３及び比較例／ｌは、あらかしめバチル
ス・スフチルスＩ　Ａ　Ｍ　　１　］、　４．．５株を
培養し１ていないポテト・デキストロース液体培地（比
較例７３）及び水ぐ比較例・・１）にポテト・デキスト
ロース寒天培１１！！粉末を加えた甲板培地に胞子を塗
布し実施例２ど同様とこ処理したものである。

あ６゛）かしめバチルス・ズフチルスＩＡＭ１１７１１
５株をｔγｆＢした培地を用いた場合（実施例２）は、
バチルス・ズブチルス！　Ａ、Ｍ　　１１４．、５株を
ＩＫ養していない培地（比較例１３及び４）に比ヘアー
ノラトキシン産生菌の胞子の発芽が著しく少なく、しか
も牛したコ［］ニーの大きさが小さかった。−４なわち
、実施例２の発芽は、個数で比Φぐした場合、比較例；
３と比へ７７、ｒ（％、比較例４と比へ７３゜７％が発
芽をｒｎ害されたことになる。

実施例：３ ！＼−Ｊ−ルニス　：−−−ス゛−フー刀−西−スーＬ
へＮ−，，、−１−ｉ、、、、−４−旦−株−リ」容液
沖−の一二４フラー１ビＡ−）ン−５）−去パ勉−宋ニ
コートリエント・フロス培地５　ｒｎ　ｌに、シメーＴ
〜ルスルフＡオギ」ノ′イ）’（ｒ）ＭＳＯ）に溶解し
たアフラＩ・キシン］（＋を約：３　（１／Ｉ　Ｂ　ｉ
、ｐ、、加し、これ（こバチルス・スブチルスＩＡＭ！
１４５株を約＋（１６細胞接種し、３０　”Ｃて標点培
養したとＮの培養開始前（以下（）■目とする）及び培
養７ｎｌ」のアフラトキシンの含量は、第７（表のよう
になった。

第：３表 市なわら、７　Ｂ　「−１のアフラトキシンの量は、比
較例５　（７）　７　［’、３目の革に比へ８〔ｉ、８
％（Ｏ［］目の半に比へると１１９．４％）減少し、効
率よく除去された。

なお、比較例５は、バチルス・スブチルスＩ△Ｍ１１４
５株を接種しないアフラトギシン含有培地を同様に処理
したときのアフラトキシンの含φ−である。

実施例４ アスベ±］ルス・フラバノＮＲＲＬ　　３３５７■ 南アフリカ産の小粒ビーナツツ（ナタールコモン種）を
およそ２時間水に浸漬しく吸水率的５０％）、その１５
ｇを三角フラスコにとり、オートクレーブで１２１℃、
１５分間加熱殺菌した後、アスペルギルス・フラバノＮ
ＲＲＬ　　３３５７株（約２０胞子／フラスコ）と共に
バチルス・ズブチルスＩＡＭ１１４．５株（約２００細
胞／フラスコ）を接種した。２５°Ｃて培養したときの
ビーナツツ中のアフラトキシンＢ＋　（第４表）の量を
経時的に測定した結果、バチルス・ズブチルスＩＡＭ　
　１１４５株を加えたものは、比較例６に比ヘアフラト
キシンの産生量が著しく少なく、その産生を阻害した。

なお、比較例６は、バチルス・ズブチルスＩＡＭ１１４
５株を接種せずアスペルギルス・フラバノＮＲＲｒ、　
３３５７株のみを接種したときの７フラトキシンの産生
量である。

第４表 ＩＡＭ　　１０２６株及びシュードモナス嶋エルギノー
ザＩＡＭ１５１４株を用いて実施例４と同様に処理した
ときのピーテ・フッ中のアフラトキシンの産生量である
。これらの菌株は、アフラトキシンの産生を阻害しない
か、阻害か不十分てあった。

実施例５ 乱立月 １５一 実施例４て殺菌処理した南アフリカ産のビーナツツにア
スペルギルス・パラシティカスＮＲＲＬ２９９９株（約
２０胞子／フラスコ）と共にバチルス・ズブチルスＩＡ
Ｍ　　１１４５株（約２００細胞／フラスコ）を接種し
、２５℃で培養したときのビーナツツ中のアフラトキシ
ンＢ＋　（第５表）及びアフラトキシンＧ＋　（第６表
）の量を経時的に測定した。その結果、バチルスφズブ
チルスＩＡＭ　　１１４５株を加えると比較例９に比ヘ
アフラトキシンの産生量が著しく少なく、アフラトキシ
ンの産生を阻害した。

第５表 なお、比較例９は、バチルス・ズブチルスＩＡＭ　　１
１４５株を接種せずにアスペルギルス・パラシティカス
ＮＲＲＬ　　２９９９株のみを接種し、同様に処理した
ときのビーナツツ中のアフラトキシンの産生量である。

第６表 また、比較例１０．１１は、バチルス・ズブチルスＩＡ
Ｍ　　１０２６株及びシュードモナス・エルギノーザＩ
ＡＭ　　１５１４株を用いて実施例５と同様に処理した
ときのアフラトキシンの産生量である。これらの菌株は
、アフラトキシンの産生を阻害しないか、阻害が不十分
てあった。

実施例６ アスベル　ルス・フラバノＮＲＲＬ　　３３５７土（に
−よ□ろ−フーニニン」立−（７）二メーフーラニ北ニ
ヤニア）！４し」ζフ４二丈−４阻」１作−用 実施例４と同様に殺前処理したＩＦｉｇのコーン粒に、
アスペルギルス・フラハスＮＲＲＬ　　３３５７株（約
２０胞子／フラスコ）と共にバチルス・ズブチルスＪＡ
Ｍ　　１１４５株（約２００細胞／フラスコ）を接種し
た。２５°Ｃて培養したときのコーン粒中のアフラトキ
シンＢ＋　（表７）の量を経時的に測定した結果、バチ
ルス・ズブチルスＩＡＭ　　１１４５株を加えたものは
比較例１２に比ヘアフラトキシンの産生量が著しく少な
く、その産生を阻害した。

第７表 なお、比較例１２は、バチルス・ズブチルス■ＡＭ　　
１１４５株を接種せず、アスペルギルス・フラハスＮ　
ＲＲ１，、、、：３３５７株のみを接種したときのアフ
ラトキシンの産生量である。

また、比較例１３及Ｕ１４は、バチルス・ズフチルスＪ
ＡＭ　　１０２６株及びシュードモナス・エルギノーザ
ｌＡＭ１１４ｉ”ｉ株を実施例６と同様に処理したとき
のコーン粒中のアフラトギシンの産生量である。これら
の菌株は、アフラトギシンの産生を阻害しないか、阻害
が不十分てあった。

実施例７ アニス！凶逃ヨＶフにじ仁こ□パ□プーシーテーイーカ
ーヌー１ｑ、、−、Ｂ−１丈−１、−−−−２−旦ゴし
刀」朱−（ζ−よ−ろ−２−二久粒４と７≦しラートギ
ーシーン産生にス・目Ｊ１１．”　削剥 実施例４と同様に殺菌処理した１５ｇのコーン粒に、ア
スペルギルス・パラシティカスＮ　ＲＦ＜　ｌ−２９９
９株く約２０胞子／フラスコ）と共にバチルス・ズブチ
ルスＩＡＭ１１４５株（約２（）０細胞／フラスコ）を
接種した。２５°Ｃて培養したときのコーン粒中のアフ
ラトキシンＲ＋　（第８表）及びアフラトキシンＧ＋　
（第９表）の量を経時的に測定した。その結果、バチル
ス・ズブチルスＩＡＭ　　１１４５株を加えたものは、
比較例１５に比ペアフラトギシンの産生量が著しく少な
く、その産生を阻害した。

第８表 なお、比較例１５は、バチルス・ズブヂルスＩＡＭ１１
４．５を接種せずアスペルギルス・バラシティカスＮＲ
ＲＬ　　２９９９株のみを接種したときのアフラトキシ
ンの産生量である。

また、比較例１６及び１７は、バチルス・ズブチルスＩ
ＡＭ　　１０２６株及びシュードモナス・エルギノーザ
ＩＡＭ　　１１４５株を実施例７と同様に処理したとき
のコーン粒中のアフラトキシンの産生量である。これら
の菌株は、アフラトキシンの産生を阻害しないか、して
もこぐわずかであった。

第９表 実施例８ 市販の培養土を５００ｍ１の三角フラスコに約２５ｇ入
れ、オー］・クレープで１２１℃、１時間殺菌し、アス
ペルギルスφフラバスＮＲＲＬ３３５７株（約２０胞子
／フラスコ）とバチルス・ズブチルスＩＡＭ　　１１４
．５株（約２００細胞／フラスコ）を接種した。この菌
を接種した培養土に、実施例４に記載の殺菌処理した南
アフリカ産ビーナツツ１５ｇを加え２５℃で培養した。

ビーナツツのアフラトキシン含量を測定した結果第１０
表のようになり、　ＩＡＭ　　１１４５株を接種しない
で同様に処理した比較例１８と比ヘアフラトキシンの産
生が著しく阻害されている。

第１０表 実施例９ 実施例８の殺菌した土壌に、アスペルギルス・バラシテ
ィカスＮＲＲＬ　　２９９９株（約２０胞子／フラスコ
）とバチルス・ズブチルスＪＡＭ１１４５株（約２００
細胞／フラスコ）を接種した。この菌を接種した土壌に
実施例４に記載の殺菌処理したビーナツツの１５ｇを加
え２５℃で培養し、ビーナツツに生じたアフラトキシン
のｔを測定した結果第１１表のようになった。

第１１表 すなわち、　ＪＡＭ　　１１４５株を接種しない比較例
１９と比ヘアフラトキシンの産生が著しく阻害された。

特許出願人　　　森永製菓株式会社

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 穀類又はナッツ類にバチルス・ズブチルスＩＡＭ１１４
   ５株を作用させることを特徴とする穀類又はナッツ類の
   アフラトキシン汚染を防除する方法。