JPH01290700A - グルコシルトランスフェラーゼ阻害組成物 - Google Patents
グルコシルトランスフェラーゼ阻害組成物Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
〈産業上の利用分野〉
本発明は、グルコシルトランスフェラーゼ（以下’ＧＴ
ａｓｅ、と略称）阻害剤、その製造法、およびそれを有
効成分とする、 う蝕子防剤に関する。 ＧＴａｓ ｅは、微生物のストレプトコッカス・ミュー
タンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）
によって生産される酵素で、口腔内で、シュクロースか
ら不溶性でかつ付着性のあるグルカンを合成し、歯垢形
成、さらには う蝕発生の原因となっている。 本発明は、このＧＴａｓｅの活性を阻害する物質を提供
することを一つの目的とし、他の目的は、ＧＴａｓｅ
阻害物質の製造法を提供すること、および該物質を有効
成分とする う蝕子防剤を提供するにある。 〈従来の技術〉 従来よｈ、 う蝕予防の方法の一つとして、ミュータン
ス菌のＧＴａｓｅ を阻害することによｈ、歯垢の形成
を阻止することが考えられている。 各種微生物の生産するＧＴａｓｅ阻害物貰とじては、特
開昭５６−１０３１９３、特開昭５７−９８２１５、特
開昭５７−９９５１８、特開昭６１−１２６０３３、特
公昭６１−４７５１５等があｈ、また植物に含有されて
いるＧＴａｓｅ阻害物質としては、特開昭５８−１２１
２１８、特開昭６０−５４３１２等があげられる。 これらは、有効な阻害物質であるが、発酵法の場合は、
比較的長い培養時間を要し、植物由来の阻害剤も含めて
、概して複雑な精製工程を必要としていた。 〈発明が解決しようとする問題点〉 本発明者らは、微生物の培養のように長時間と多大の光
熱費を必要とせず、また、植物からの抽出のように、有
機溶媒を用いた複雑な工程を経ずに、簡単な精製法によ
って、目的とする ＧＴａｓｅ阻害物質を得るために、
鋭意探索と研究を重ね、本発明を完成した。 〈問題点を解決するための手段〉 本発明者らは、タンパク質と還元性糖類との反応で生ず
るメラノイジン物質の中に、ＧＴａｓｅ阻害作用を有す
るものがあることを発見し、タンパク質および還元性糖
類の種類、反応条件、精製方法について検討を行った。 その結果、タンパク質としては、等電点が４．０〜７．
０ にあるもの、好ましくは、カゼイン、オボアルブミ
ン、ウシ血清アルブミンを用い”、還元性を有する糖類
としては、グリセルアルデヒド、グルコース、キシロー
ス、アラビノース、マンノース、デキストラン、あるい
はその誘導体が、利用できることを明らかにした。。 これらの物質を、ｐＩ（５，５〜１２．ｏ、温度２０〜
１２０℃で反応させる。次いで、反応液をｐｒ（３，５
に調節し、生ずる沈澱を回収して ＧＴａｓｅ阻害物質
（以下’ＭＲＰ、と略称）を得る。 この物質を、Ｂｌｏ−Ｇｅ１ Ａ１．５Ｍでゲルろ過し
て、分子ｆｆｉ ６ Ｘ １０” ｋｄ以上の両分を
採ることによりさらに精製が可能である。 ＧＴａｓｅ阻害活性は、ＧＴａｓ ｅ を生産するミュ
ータンス菌 （例えば、歯学研究に一般的に使用される
５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ Ｂ−１３
）の培養Ｆ液から、浜田らの方法（Ｊ、 Ｇｅｎ、 Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌ、、 １１６．５１−５９（１９８
０））により調製した酵素を使用し、不溶性付着性グル
カンの生成量を測定する、古賀らの方法（Ｉｎｆｅｃｔ
、 Ｉｍｍｕｎ、、 ２８．８８２ （１９８２）
）により測定した。 〈実施例〉 以下、本発明の物質ＭＲＰの製造方法、そのＧＴ−ａｓ
ｅ 阻害効果、および う蝕子防剤に配合したときの、
ミュータンス菌に対する歯垢形成阻害の実際を実施例に
より説明する。 実施例１ ０．８ｇ のタンパク質（α５−カゼイン、ウシ血清ア
ルブミン、オボアルブミン、（各米国シク゛マ社製））
および１．０ｇのグルコースをｐＨ７，５の２００ｍＭ
−リン酸カリウムＦ１衡液１００ｍ１ に溶解し、６Ｎ
−苛性ソーダ溶液にて、ｐＨ１０，５に調整後１００℃
にて２時間反応させる０次いでＩＮ−塩酸溶液にて、ｐ
Ｈ１３，５として、生ずる沈澱を、ｐｉ（６，５の ５
０ｍトリン酸カリウム溶液３５ｍ１ に溶解して、同
じ緩衝液で平衡化したＢｌｏ−Ｇｅ１ Ａ１．５Ｍでゲ
ルヂ過を行ない、分子１６Ｘ１０’ ｋｄ以上の範囲を
回収した。 得られた ＭＲＰ には、反応液の５０−のタンパク質
と、７０りのＧＴａｓ ｅ阻害活性が回収された。 原料タンパク質およびＭＲＰの遊離アミン基（リシ゛ン
残基の ε−アミノ基、およびＮ末端アミノ基）をトリ
ニトロベンゼン・スルフオン酸法（Ｉｓｋｌｕｎｄ、
Ｒ。 ｅｔ ａｌ、 ： Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ７
ＵＪ４３４ （１９７６））で測定した結果、ＭＲＰは
原料タンパク質の約１７３に、減少していた。 ＭＲＰ による付着性不溶性グルカンの合成阻害を、第
４図に示す、αＳ−カゼイン、オボアルブミン、ウシ血
清アルブミンから得られたＭＲＰは、０．２μｇ／ｍｌ
で、約５０％の合成阻害を示した。 実施例２゜ 実施例１で用いたタンパク質０．８ｇと、１ｇのグリセ
ルアルデヒド ウム綬街液（ｐ［（ ７．５）に溶解して、１００℃で
２時間反応し、ＩＮ−塩酸溶液でｐｏ３．ｓとして生ず
る沈澱を、ｐｉ（６．５の５０ｍＭ−リン酸カリウム溶
液３５ｍｌに溶解して、同緩衝液で平衡化したＢｉｏ−
Ｇｅｌ Ａ１．５Ｍでゲルｒ遇して、分子ｆｆｉ ６Ｘ
１０” ｋｄ以上の範囲で回収した。 得られたＭＲＰは、反応液の７０にの阻害活性を示した
。 実施例３。 ヒドロ腔内の歯垢形成モデル実験として、プレインハー
ト・インフュージョン・ブロス （Ｂｒａｉｎ−ｔ（ｅ
ａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ｂｒｏｔｈ： Ｄｉｆｃｏ
社製）へ、１０ｍｇ／ｍｌのシュクロースを加えた培地
に、ミュータンス菌を接種し、試験管を角度３０°に傾
斜して３７℃。 １６時間培養し、生ずる不溶性グルカンとともに菌体を
試験管壁に付着させた。 実施例１で得られたＭＲＰを、同培地に０．１〜ｌ、０
ｍｇ／ｍｌ 添加した場合のミュータンス菌の付着阻
害効果を第１表に示した， ＭＲＩ’は０． １ｍｇ／
ｍｌで、５０−以上の付着阻止を示している。
ａｓｅ、と略称）阻害剤、その製造法、およびそれを有
効成分とする、 う蝕子防剤に関する。 ＧＴａｓ ｅは、微生物のストレプトコッカス・ミュー
タンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）
によって生産される酵素で、口腔内で、シュクロースか
ら不溶性でかつ付着性のあるグルカンを合成し、歯垢形
成、さらには う蝕発生の原因となっている。 本発明は、このＧＴａｓｅの活性を阻害する物質を提供
することを一つの目的とし、他の目的は、ＧＴａｓｅ
阻害物質の製造法を提供すること、および該物質を有効
成分とする う蝕子防剤を提供するにある。 〈従来の技術〉 従来よｈ、 う蝕予防の方法の一つとして、ミュータン
ス菌のＧＴａｓｅ を阻害することによｈ、歯垢の形成
を阻止することが考えられている。 各種微生物の生産するＧＴａｓｅ阻害物貰とじては、特
開昭５６−１０３１９３、特開昭５７−９８２１５、特
開昭５７−９９５１８、特開昭６１−１２６０３３、特
公昭６１−４７５１５等があｈ、また植物に含有されて
いるＧＴａｓｅ阻害物質としては、特開昭５８−１２１
２１８、特開昭６０−５４３１２等があげられる。 これらは、有効な阻害物質であるが、発酵法の場合は、
比較的長い培養時間を要し、植物由来の阻害剤も含めて
、概して複雑な精製工程を必要としていた。 〈発明が解決しようとする問題点〉 本発明者らは、微生物の培養のように長時間と多大の光
熱費を必要とせず、また、植物からの抽出のように、有
機溶媒を用いた複雑な工程を経ずに、簡単な精製法によ
って、目的とする ＧＴａｓｅ阻害物質を得るために、
鋭意探索と研究を重ね、本発明を完成した。 〈問題点を解決するための手段〉 本発明者らは、タンパク質と還元性糖類との反応で生ず
るメラノイジン物質の中に、ＧＴａｓｅ阻害作用を有す
るものがあることを発見し、タンパク質および還元性糖
類の種類、反応条件、精製方法について検討を行った。 その結果、タンパク質としては、等電点が４．０〜７．
０ にあるもの、好ましくは、カゼイン、オボアルブミ
ン、ウシ血清アルブミンを用い”、還元性を有する糖類
としては、グリセルアルデヒド、グルコース、キシロー
ス、アラビノース、マンノース、デキストラン、あるい
はその誘導体が、利用できることを明らかにした。。 これらの物質を、ｐＩ（５，５〜１２．ｏ、温度２０〜
１２０℃で反応させる。次いで、反応液をｐｒ（３，５
に調節し、生ずる沈澱を回収して ＧＴａｓｅ阻害物質
（以下’ＭＲＰ、と略称）を得る。 この物質を、Ｂｌｏ−Ｇｅ１ Ａ１．５Ｍでゲルろ過し
て、分子ｆｆｉ ６ Ｘ １０” ｋｄ以上の両分を
採ることによりさらに精製が可能である。 ＧＴａｓｅ阻害活性は、ＧＴａｓ ｅ を生産するミュ
ータンス菌 （例えば、歯学研究に一般的に使用される
５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ Ｂ−１３
）の培養Ｆ液から、浜田らの方法（Ｊ、 Ｇｅｎ、 Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌ、、 １１６．５１−５９（１９８
０））により調製した酵素を使用し、不溶性付着性グル
カンの生成量を測定する、古賀らの方法（Ｉｎｆｅｃｔ
、 Ｉｍｍｕｎ、、 ２８．８８２ （１９８２）
）により測定した。 〈実施例〉 以下、本発明の物質ＭＲＰの製造方法、そのＧＴ−ａｓ
ｅ 阻害効果、および う蝕子防剤に配合したときの、
ミュータンス菌に対する歯垢形成阻害の実際を実施例に
より説明する。 実施例１ ０．８ｇ のタンパク質（α５−カゼイン、ウシ血清ア
ルブミン、オボアルブミン、（各米国シク゛マ社製））
および１．０ｇのグルコースをｐＨ７，５の２００ｍＭ
−リン酸カリウムＦ１衡液１００ｍ１ に溶解し、６Ｎ
−苛性ソーダ溶液にて、ｐＨ１０，５に調整後１００℃
にて２時間反応させる０次いでＩＮ−塩酸溶液にて、ｐ
Ｈ１３，５として、生ずる沈澱を、ｐｉ（６，５の ５
０ｍトリン酸カリウム溶液３５ｍ１ に溶解して、同
じ緩衝液で平衡化したＢｌｏ−Ｇｅ１ Ａ１．５Ｍでゲ
ルヂ過を行ない、分子１６Ｘ１０’ ｋｄ以上の範囲を
回収した。 得られた ＭＲＰ には、反応液の５０−のタンパク質
と、７０りのＧＴａｓ ｅ阻害活性が回収された。 原料タンパク質およびＭＲＰの遊離アミン基（リシ゛ン
残基の ε−アミノ基、およびＮ末端アミノ基）をトリ
ニトロベンゼン・スルフオン酸法（Ｉｓｋｌｕｎｄ、
Ｒ。 ｅｔ ａｌ、 ： Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ７
ＵＪ４３４ （１９７６））で測定した結果、ＭＲＰは
原料タンパク質の約１７３に、減少していた。 ＭＲＰ による付着性不溶性グルカンの合成阻害を、第
４図に示す、αＳ−カゼイン、オボアルブミン、ウシ血
清アルブミンから得られたＭＲＰは、０．２μｇ／ｍｌ
で、約５０％の合成阻害を示した。 実施例２゜ 実施例１で用いたタンパク質０．８ｇと、１ｇのグリセ
ルアルデヒド ウム綬街液（ｐ［（ ７．５）に溶解して、１００℃で
２時間反応し、ＩＮ−塩酸溶液でｐｏ３．ｓとして生ず
る沈澱を、ｐｉ（６．５の５０ｍＭ−リン酸カリウム溶
液３５ｍｌに溶解して、同緩衝液で平衡化したＢｉｏ−
Ｇｅｌ Ａ１．５Ｍでゲルｒ遇して、分子ｆｆｉ ６Ｘ
１０” ｋｄ以上の範囲で回収した。 得られたＭＲＰは、反応液の７０にの阻害活性を示した
。 実施例３。 ヒドロ腔内の歯垢形成モデル実験として、プレインハー
ト・インフュージョン・ブロス （Ｂｒａｉｎ−ｔ（ｅ
ａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ｂｒｏｔｈ： Ｄｉｆｃｏ
社製）へ、１０ｍｇ／ｍｌのシュクロースを加えた培地
に、ミュータンス菌を接種し、試験管を角度３０°に傾
斜して３７℃。 １６時間培養し、生ずる不溶性グルカンとともに菌体を
試験管壁に付着させた。 実施例１で得られたＭＲＰを、同培地に０．１〜ｌ、０
ｍｇ／ｍｌ 添加した場合のミュータンス菌の付着阻
害効果を第１表に示した， ＭＲＩ’は０． １ｍｇ／
ｍｌで、５０−以上の付着阻止を示している。
菌 株 ＭＲＰ濃度 菌体付着率１・０１
４ 実施例４。 本発明の物質’Ｍ Ｒ １’ は、日常使用される歯磨
剤に配合して、 う蝕の抑制に用いることができる。 湿潤剤、研摩剤、増粘剤、香料、甘味料等の通常の歯磨
剤に使用されているものを、通常の割合で配合すること
ができる．また、研摩剤を含有した水歯みがきとするこ
とも可能である。
４ 実施例４。 本発明の物質’Ｍ Ｒ １’ は、日常使用される歯磨
剤に配合して、 う蝕の抑制に用いることができる。 湿潤剤、研摩剤、増粘剤、香料、甘味料等の通常の歯磨
剤に使用されているものを、通常の割合で配合すること
ができる．また、研摩剤を含有した水歯みがきとするこ
とも可能である。
以下に配合例の一例を示す。
グリセリン ２０部
無水ケイ酸 ２゜
カルネ０キシメチルセルロース・Ｎａ塩
０．５カラギーナン １ ソルビトール ３０ 甘味剤 ０．５ Ｎａ・モノフルオロホスフェート
０．５香料 Ｉ ＭＲＰ ０．５合計
１００部 本組成物の一部を採ｈ、Ｍ ＲＰ活性を測定したところ
、添加したＭＲＰの５０にの活性が、１回の抽出で回収
された。 〈発明の効果〉 本発明によｈ、等電点が４．０〜７．０のタンパク質と
還元性を有する糖類およびその誘導体の、メイラード反
応生成物から得られるＭＲＰが、ＧＴａｓｅ阻害活性を
示すことが明らがとなった。 また、本発明によｈ、新規なＧＴユｓｅ阻害物質ＭＲＰ
、およびその製造方法、さらにこれを有効成分とする
う蝕子防剤の提供が可能となった。
０．５カラギーナン １ ソルビトール ３０ 甘味剤 ０．５ Ｎａ・モノフルオロホスフェート
０．５香料 Ｉ ＭＲＰ ０．５合計
１００部 本組成物の一部を採ｈ、Ｍ ＲＰ活性を測定したところ
、添加したＭＲＰの５０にの活性が、１回の抽出で回収
された。 〈発明の効果〉 本発明によｈ、等電点が４．０〜７．０のタンパク質と
還元性を有する糖類およびその誘導体の、メイラード反
応生成物から得られるＭＲＰが、ＧＴａｓｅ阻害活性を
示すことが明らがとなった。 また、本発明によｈ、新規なＧＴユｓｅ阻害物質ＭＲＰ
、およびその製造方法、さらにこれを有効成分とする
う蝕子防剤の提供が可能となった。
第１図は、本発明の物質ＭＲＰの紫外線吸収スペクトル
を示す。 第２図は、本発明の物質ＭＲＰの赤外線吸収スペクトル
を示す。 第３図は、本発明の物質ＭＲＰの蛍光スペクトルを示す
。 第４図は、本発明の物質ＭＲＰ濃度と、付着性不溶性グ
ルカンの生成量の関係を示す。 以 上
を示す。 第２図は、本発明の物質ＭＲＰの赤外線吸収スペクトル
を示す。 第３図は、本発明の物質ＭＲＰの蛍光スペクトルを示す
。 第４図は、本発明の物質ＭＲＰ濃度と、付着性不溶性グ
ルカンの生成量の関係を示す。 以 上
Claims (4)
- （１）等電点が４．０〜７．０であるタンパク質と還元
性を有する糖類またはその誘導体を反応させて得られ、
以下の物理化学的性質を有するグルコシルトランスフェ
ラーゼ阻害物質。 ａ、分子量：約１０万以上（ゲルクロマトグラフィー法
） ｂ、等電点：４．０付近（等電点電気泳動法） ｃ、紫外線吸収スペクトル：（第１図） ｄ、赤外線吸収スペクトル：（第２図） ｅ、蛍光分光学的性質 励起スペクトル：３４０〜３５０ｎｍに極大値 蛍光スペクトル：４４０ｎｍに極大値（第３図） ｆ、タンパク質および糖含有量 タンパク質：９０〜９６％（フォリン・ローリー法） 糖：１〜２％（フェノール硫酸法） ｇ、溶解性：水に易溶、メタノール、エタノール、アセ
トン、クロロホルム、酢酸エチルに不溶 ｈ、呈色反応：ビュレット反応、キサントプロテイン反
応、フォリン反応、フェノール硫酸反応に、いずれも陽
性 ｉ、作用：シュクロースを基質とする、グルコシルトラ
ンスフェラーゼによる、水不溶性グルカンの生成を阻害
する作用を有する ｊ、ｐＨ安定性： ｐＨ２〜１０で安定（温度：１００℃） ｋ、熱安定性： １００℃、４時間の加熱に対し安定（ｐＨ７．０） ｌ、化学処理に対する安定性： 酸化剤（過ヨウ素数、オゾン、次亜塩素酸等）による酸
化、および還元剤（亜硫酸、ＮａＢＨ＿４等）による還
元に対し安定 ｍ、融点：明確な融点を示さない ｎ、塩基性、酸性、中性の別： 水溶液は、弱酸性を示す ｏ、物質の色：淡褐色 - （２）タンパク質が、カゼイン、オボアルブミン、およ
びウシ血清アルブミンのうちより選ばれたものであり、
還元性を有する糖類が、グリセルアルデヒド、グルコー
ス、マンノース、キシロース、アラビノース、ラクトー
ス、およびデキストランのうちより選ばれたものである
、特許請求の範囲第１項記載のグルコシルトランスフェ
ラーゼ阻害物質。 - （３）等電点が４．０〜７．０であるタンパク質と還元
性を有する糖類またはその誘導体を、ｐＨ５．５〜１２
．０、温度２０〜１２０℃にて反応させて、特許請求の
範囲第１項記載の物理化学的性質を有するグルコシルト
ランスフェラーゼ阻害物質を生成せしめ、反応液中より
該物質を採取することを特徴とする、グルコシルトラン
スフェラーゼ阻害物質の製造法。 - （４）等電点が４．０〜７．０であるタンパク質と還元
性を有する糖類またはその誘導体を反応させて得られ、
特許請求の範囲第１項記載の物理化学的性質を有するグ
ルコシルトランスフェラーゼ阻害物質を有効成分とする
う蝕予防剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63118184A JP2696172B2 (ja) | 1988-05-17 | 1988-05-17 | グルコシルトランスフェラーゼ阻害組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63118184A JP2696172B2 (ja) | 1988-05-17 | 1988-05-17 | グルコシルトランスフェラーゼ阻害組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01290700A true JPH01290700A (ja) | 1989-11-22 |
| JP2696172B2 JP2696172B2 (ja) | 1998-01-14 |
Family
ID=14730225
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63118184A Expired - Fee Related JP2696172B2 (ja) | 1988-05-17 | 1988-05-17 | グルコシルトランスフェラーゼ阻害組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2696172B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002068970A (ja) * | 2000-08-25 | 2002-03-08 | Ajinomoto Co Inc | 新規な抗う蝕剤及び非う蝕性素材 |
-
1988
- 1988-05-17 JP JP63118184A patent/JP2696172B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002068970A (ja) * | 2000-08-25 | 2002-03-08 | Ajinomoto Co Inc | 新規な抗う蝕剤及び非う蝕性素材 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2696172B2 (ja) | 1998-01-14 |
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Legal Events
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