JPH01258697A - Ｃｇｒｉｄｒｉ配列を含有するジスルフィド架橋環状ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １貝Ｊと１里 本発明は、心脈管系の治療分野に関し、高血圧症の＠御
に有用なペプチドに関する。とくに興味がもたれるのは
、天然または合成の心房性ペプチドに対する平均動脈圧
応答を増強するジスルフィド架橋環状ペプチドである。

発明の背景 強力な水利法およびナトリウム利尿物質を含むラット心
房の粗抽出物が以前、心房性ナトリウム利尿因子と呼ば
れティた（Ａ、Ｊ、ｄｅＢｏｌｄら：　ＬｉｂｅＳＣｉ
、、　２８　：　８９〜９４．１９８１）。これらの物
質はその後、化学的にペプチドであることが決定され、
まとめて心房性ペプチドまたはＡＰと呼ばれるようにな
った。

様々な類似構造のペプチドが単離され、配列が決定され
、様々な程度のナトリウム利尿、水利法および血管弛緩
活性をもつことが明らかにされてきた。とくに興味があ
る一部の心房性ペプチドには、アトリオベプヂンＴ、Ｉ
ＩおよびＩＩＩ　（ＡＰ−Ｉ、ＡＰ−ＩｆおよびＡＰ−
３）として知られたペプチドがあり、これらはたとえば
、Ｃｕｒｒｉｅら：５ｃｉｅｎｃｅ　、　２２３　：　
６７〜６９．１９８４：Ｃｅ１ｌｅｒら　：　　Ｂｉｏ
ｃｈｅ−、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｖｅｕｎ、、
１　２　０（２）：３３３〜３３８．１９８４および米
国特許第４，４９６．５５４号（Ｈｅｅｄｔｅｉａｎ　
）　Ｉｐニー記載されている。これらのペプチドは酸化
型、すなわち環状型で、以下のアミノ酸配列を有する。

アトリオベプチンＩ アトリオベブチン■ アトリオベブチン■ ＡＰ−１１［の各種修飾体についても報告されている。

すなわち、カルジオナトリンエとしても知られている２
８アミノ酸ペプチド５ｅｒ−１ｅｕ−ａｒａ−ａｒａ−
ＡＰ−ｎ［（ＳＬＲＲ−ＡＰ−ＩＩＩ）がヨーロッパ特
許出願第１１６．７８４号（１９８４年８月２９日公告
）に開示されている。２８アミノ酸カルジオナトリン■
の１１０１２がｍｅｔ１２で置換されたヒト類縁体がに
ａｎｇａｗａ　ａＨａｔｓｕｏ　　（Ｂｉｏｃｈｅｓ、
Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｗｍｕｎ、、１　１　８
（１）：１３１〜１３９．１９８４）によって報告され
ている。

心房性ナトリウム利尿因子またはＡＮＦ（８−３３）と
して知られる２６アミノ酸ペプチドａｒｇ−ａｒｐ−Ａ
Ｐ−ｍも、より大きい３３アミノ酸ペプチドのフラグメ
ントとして、５ｅｉｄａｈら（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａ
ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、旦１：２６４０〜４４．１９
８４）によって開示されている。

オーリフリンとしても知られるａｒｇ延長を７ミノ末端
に有するＡＰ−ＩＩＩの２５アミノ酸類縁体が、Ｙａｌ
ａｎａｋａら（Ｎａｔｕｒｅ、　　３０９　：　７１９
〜７２２．１９８４）によって記載されている。

共通の記号“Ａ　Ｐ　”は、心房性ペプチドまたはアト
リオベプ゛チンの一部の任意のペプチドに対して用いら
れている。これらのペプチドはすべて共通のアミノ酸配
列をもっているが、長さは違っている。

心房性ペプチドは、うつ血性心不全および高血圧に対し
て治療活性を有する可能性があり、体液容量および血圧
の調節に重要なことが認められてきた。心房性ペプチド
の一部の生理作用はよく知られている。たとえばＡＰ−
ＩＩＩはナトリウム利尿作用および水利法作用を有し、
数種の薬剤に対する血管平滑筋の収縮応答を阻害する。

また、ＡＰ−ｍは、副腎皮質からのアンギオテンシン■
−刺激アルドステロン分泌を遮断し、レニンの放出を阻
害する。ＡＰ−Ｉｌｌはその標的＊鼎において特異酌量
容体を介して作用する。ＡＰ−ＩＩＩは、粒状グアニる
酸シクラーゼの活性化を誘導し、環状ＧＭＰの生成を増
大させる（　Ｊ、Ｔｒｅｌｂｉａｖら：　ＦＥ８ＳＬｅ
ｔｔ、、１８１　：１７〜２２．１９８５：Ｓ、Ａ。

Ｗａｌｄｌｌａｎら：　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　
２５９　：　１４３３２〜１４３３４．１９８４）。

心房性ペプチドの様々な機能は、多重の、機能的に別個
のＡＰ受容体の存在を示唆している（　Ｄ、Ｂ、５ｈｅ
ｎｃｋら　：　　Ｊ、Ｂｔｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　　２　
６　０　　：　　１　４　８８７〜１４８９０．１９８
５）、実際、アフイニテー標識技術を用いたいくつかの
研究（Ｄ、Ｃ。

では、多ＩＡＰ受容体亜型の存在が示唆されている。し
かしなから、多ｆｆ１ＡＰ受容体と各種生理的機能の間
の関係は、現時点では明らかではない。

最近、ＡＰ受容体には少なくとも２種の異なるクイブが
同定されている（　Ｒ，Ｔａｋａｙａｎａｏ　ｉら：Ｊ
、Ｂｉｏ１．Ｃｈｅｍ、、　　２６２　　：　　１　２
　１　０４　〜１　２　１　１　３゜１９８７）。受容
体のひとつは粒状グアニル酸シクラーゼにカップリング
しくグアニル酸シクラーゼ結合性受容体）、一方第二の
受容体はシクラーゼとカップリングしない（グアニル酸
シクラーゼ非結合性受容体）。２種の受容体の相対的存
在数は組織および種で相違する。ＡＰ−ＩＩＩは両受容
体に等しい親和性で結合する。ＡＰ−Ｉは、アフィニテ
ィー交差連結法および結合実験によって明らかにされた
ようにグアニル酸シクラーゼ非結合性受容体に選択性を
もって結合する（　Ｄ、Ｃ，Ｌｅｉｔｍａｎら　：Ｊ、
Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｇｉ、、　　２−ｑ−１：　　１　１
　６５０〜１　１　６５５．１９８６）が、ＡＰ−ＩＩ
Ｉに比べ１．１〜約５倍親和性が低い（Ｒ，Ｈ，Ｓｃａ
ｒｂｏｒｏｕｇｈら：Ｊ、Ｂｉｏ１．Ｃｈｅｍ、、　Ｌ
ＬＸ：　１２９６０〜１２９６４．１９８６）。その後
の一連の報告では（Ｓｕｚｕｋｉら：２　ｎｄ　Ａｎｎ
ｕａｌ　Ｍｅｅｔｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａ＋＋ｅｒｉ
ｃａｎ　５ｏｃｉｅｔｙｏｆ　１ｌｙｐｅｒｔｅｎｓｉ
ｏｎ、ＡｂｓｔｒａｃｔＢ　６０．１８７．１９８７）
。ＡＰの数種の類縁体は、ウシ大動脈平滑筋ＡＰ受容体
に結合するが、ＣＧＭＰの増加は誘発しないこと、また
５〜１０μｇ／分のＳ度で注入すると５ＬＲＲ−ＡＰ−
Ｉ［１の血行力学作用および腎排泄作用のわずかな増強
が観察されることが報告されている。ＡＰ類縁体の相違
に関する他の報告では、平滑筋細胞および副腎球状帯細
胞におけるＣＧＭＰ応答が受容体亜型の証拠として報告
されティる（　Ｇ、　Ｐ、　Ｂｕｄｚ　ｉ　ｋら：　Ｂ
ｉｏｃｈｅｓ、Ｂｉｏｐｈｙｓ。

Ｒｅｓ、Ｃｏｕ＋ｕｎ、、１　４４　　：　　４２２〜
４３１　　、１　９８７　　：Ｒ，Ｔａｋａｙａｎａｇ
　ｉら：　Ｂ１０Ｃｈｅ１．　ｅｔｏｐｈｙｓ、　Ｒｅ
ｓ、　Ｃ０１ｌｔｌｎ、　。

１４４　：　２４４〜２５０．１９８７＞。

ヨーロッパ特許出願第２２３．１４３号（１９８７年５
月２７日公告）には、大部分がヘンタペブチト配列ａｒ
ｇ−ｉ　１ｅ−ａｓｐ−ａｒｇ−’＋ｌｅを包含するこ
とを特徴とする数百ものペプチドまたはｆ＆飾ペプチド
の大群が記載されている。

これらのペプチドは、心房性ペプチドのクリアランスお
よび除去に関与するウシ大動脈平滑筋受容体部位に高い
親和性を有するといわれる。さらに、これらのペプチド
のｉｎ　　ｖｉｖｏでの作用は、多分、内因性心房性ペ
プチドの結合およびクリアラスに関与する受容体の遮断
を介する、内因性ＡＮＦの作用の増強能によるものであ
ろうと述べられている。

Ｓａｊ！　ｋ研究所のＰＯＴ出願ＵＳ８５１００７４６
号には、グリシンまたはＤ−アラニン残基を介してオリ
ゴペプチドａ１ａ−ａ１ｕ−ｓｅｒに連結したペンタペ
プチド配列ａｒａ−ｔｚｅ−ａｓｐ−ａｒｇ−＋　ｐｅ
を包含することを特徴とする１８〜２４アミノ酸残基を
もつ一部のペプチドが記載されている。これらのペプチ
ドは、利尿性または平滑筋弛緩剤としての機能において
ＡＰ−■またはＡＰ−Ｉよりも強力で持続性の心房性ペ
プチド誘導体として位置づけされている。

発明の説明 式■ （式中、ｘ’　はａｒｇ、ｓｅｒ、ｐｒｏおよびｌｅｕ
から選ばれる１個から約８個までのアミノ酸残基から構
成されるフラグメントであり、ｍはＯから４までの整数
であり ×２はｇｌｙ、１ｅｕ、Ｓｅｒ、ａｌａおよびＱｌｎか
ら選ばれる１個から約６個までのアミノ酸残基から構成
されるフラグメントであり、ｎは０から３までの整数で
あり、 Ｘ３Ｇ；ｔｊＶｓ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｐｈｅ。

ａｒｇ、ｔｙｒおよび　　１−ｔｙｒから選ばれる１個
から約６個までのアミノ酸残基から構成されるフラグメ
ントであり、ｐはＯから４までの整数であり、 Ａはアミノ末端またはその医薬的に許容される塩を表し
、Ｂはカルボキシル末端またはその医薬的に許容される
エステル、アミドもしくは塩を表す。

ただし、このペプチド中の全アミノ酸残基の合計は約１
３から約２５までの範囲の整数である）で示される種類
のジスルフィド架橋環状ペプチド化合物の治療有効量を
高血圧症が疑われる哺乳動物に投与することによって、
高血圧症の治療が達成される。

式Ｉの好ましい化合物の第一の亜群は、×１が１個から
８個までのアミノ酸残基から構成されるペプチドフラグ
メントであり、ｍがＯまたは１である化合物である。×
１がｓｅｒ、ａｒｇおよびＪ！ｅｕから選ばれる１個か
ら６個までのアミノ酸残基から構成されるフラグメント
である化合物はさらに好ましい。もつと好ましい化合物
は×１がｓｅｒおよびａｒｇから選ばれる１個から４個
までのアミノ酸残基から構成されるフラグメントである
化合物である。この式■の第一の亜群中で最も好ましい
化合物は、×１が１個または２個のせリン残基から構成
されるフラグメントの化合物である。

好ましい化合物の第二の亜群は　ｘ２が２個から６個ま
でのアミノ酸残基から構成されるフラグメントであり、
ｎが１の化合物である。×２がＱｌ　ｙ−ａｊ！ａ−０
１１”／−１ｅＬＪ、Ｑ１’Ｊ−ｓｅｒ−Ｑｌ　　ｙ−
ｊ！ｅｕ、にＪＩＶ−ａ　１　ａ−Ｑｌｎ−１ｅｕ、　
　Ｑｊｎ−９ｅｒ−ｇｊ！Ｙ　−１ｅｕ　１　ＱＩ　　
ｙ−ａＩ　　ａ−Ｑｌｎ−ｓｅｒ。

Ｑｌｎ−１ｅｕ、　ｇｉＶ−ｓｅｒおよびｑｌｙ−ａｆ
ａから選ばれる２個から４個までのアミノ酸残基から構
成されるフラグメントである化合物がさらに好ましい。

×２が４個のアミノ酸残基から構成されるフラグメント
の場合は、ａｌｙ−ｓｅｒ−ａｊ！ｙ−ＩｅｕおよびＱ
ＪＶ−ａｌａ−ＧｊＶ−１８ｕから選ばれるフラグメン
トであることが最も好ましい。×２が２個のアミノ酸残
基から構成されるフラグメントの場合は、フラグメント
はＣ）ｊＶ−ｊｅｕであることが最も好ましい。

最も好ましいペプチドは×２７ラグメントにグルタミン
が存在しないことを特徴としている。

式１の好ましい化合物の第三の亜群は、×３が１個から
６個までのアミノ酸残基から構成されるペプチドフラグ
メントであり、ｒが０または１の化合物である。×３が
４個または５個のアミノ酸残基から構成されるフラグメ
ントである化合物がさらに好ましい。×３が５個のアミ
ノ酸のフラグメントである場合、フラグメントａｓｎ−
ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒＱ−ｔｙｒが最も好ましい。×３
が４個のアミノ酸残基から構成されるフラグメントであ
る場合、残基はａｓｎ、ｓｅｒ、ｐｈｅおよびａｒｇか
ら選ばれるのが最も好ましい。とくに好ましい４個のア
ミノ酸のフラグメントはａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒ
ｇである。さらに好ましいペプチドはアルギニンアミド
Ｃ末端をもっている。

式Ｉの好ましい化合物の第四の亜群は、×１がａｒｇ−
ａｒｇ、ａｒｇ−ｓｅｒおよび５ｅｒ−６ｅｒから選Ｇ
ｆｔＬ、×２がｇｌｙ−ｓｅｒ−ＱＪＶ−ｊｅｕ、ＱＩ
Ｖ−ａｌａ−にＪＪｌ’ｊ−ｉｅｕ、ｏｔｎ−ｓｅｒ−
１７ＪＶ−ｉｅｕ。

ａｌｙ−ａｌａ−ｇ！ｎ−５ｅｒ、ＱＪＶ−ａｌａ−Ｃ
Ｊｌｎ−１ｅｕ、　　ＱＩ　　ｙ−５ｅ　　ｒｌＱｌｎ
−１ｅｕ、ＣＪＩＶ−ａｉａおよびｇｌｙ−１ｅｕから
選ハレ、Ｘ３はａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ、ａｓｎ−ｓｅ
ｒ−ｐｈｅ−ａｒａ、ｊ！ｙＳ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒ
　ｇ、ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｏ−ｔｙｒ、　　
１ｙｓ　−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒａ−１−ｔｙｒから選
ばれ、ｍはＯまたは１、ｎは１、ｒは０または１の化合
物である。式■の第四の亜群中でさらに好ましい群の化
合物は、×１がａｒｇ−ａｒｇ。

ａｒｇ−ｓｅｒおよび５ｅｒ−ｓｅｒから選ばれ、×２
がＱＩＶ−ｓｅｒ−ｇＩｙ−１ｅｕ、ＱＩＶ−ｓｅｒＳ
Ｑｊ！ｎ−ｊ！ｅｕおよびａｌｙ−ａ１ａカラ選ハレ、
×３がａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、１ｙｓ−ｓｅ
ｒ−ｐｈｅ−ａｒｏ＋ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ
−ｔｙｒおよび１ｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒａ−ｔｙ
ｒから選ばれ、ｍは０または１、ｎは１、ｒはＯまたは
１の化合物である６さらに好ましい化合物は、×１がａ
ｒｇ−ａｒｇ、ａｒｇ−ｓｅｒおよび５ｅｒ−ｓｅｒか
ら選ばれ、×２がａｉｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−１ｅｔｒｒ
あり、×３がａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ
およびｉｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒから選
ばれる化合物である。

とくに好ましい化合物は、式 で示されるペプチドである。

式Ｉの好まし０化合物の第五の亜群は、×１はａｒｑ−
ａｒｃ、ａｒＧ−６ｅｒおよび５ｅｒ−ｓｅｒから選ば
れ、×２は（ＪＩＶ−ｓｅｒ、ｏｉｙ−ｚｅｕ、　ｇｌ
ｎ−ｊ！ｅｕａよびａｌｙ−ａｌａから選ばれ、Ｘ３は
ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、１ｙｓ−ｓｅｒ−ｐ
ｈｅ　−ａｒＱ、ａＳｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｃ　−
ｔｙｒ、ｊｙＳ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒＱ−ｔｙｒ、ａ
ｓｎ−ｓｅｐ−ｐｈｅ−ａｒｐ　−１２５Ｉ−ｉＹｒｊ
３よび１ｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒから選
ばれ、ｍは０か１、ｎ、は１、ｒは１の化合物である。

この第五の亜群中、×３がａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａ
ｒｇおｃ［Ｆｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇから選ば
れる場合には、Ｂ末端が一級アミドまたは低級アルギル
二級もしくは三級アミド基であることがさらに好ましい
。「低級アルキル」の語は１個から約８佃までの炭素原
子を有する直鎖状４または分岐状の基を意味する。式Ｉ
の第五の亜群中の他の好ましい亜群ニハ、×１がａｒｇ
−ａｒｇ、ａｒａ−ｓｅｐオ、にヒｓ　Ｇ　ｒ　−Ｓ　
ｃ、ｒカラ選ハレ、×２がａ、ｅｙ−ｓｅ　ｒ−ｏｊ！
ｙ−、ｅ　ｅｕでａ５＆ｌ）、×３がａＳｎ−ｓｅｒ−
ｐｈｅ−ａｒａおよびｊ！ｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈＧ−ａｒ
ｇから選ばれるペプチドがある。

とくに好ましいペプチドは、式 ％式％ 式１の好ましい化合物の第六の亜群は、×１がａｒｇ−
ａｒｇ、ａｒｇ−ｓｅｒおよび５ｅｒ−６ｅｒから選ハ
レ、×２がｏｚｙ−ｓｅｒ−ｇｌ　ｙ−１ｅｕ、ａｊ！
　ｙ−ａｌａ−ｑｌｙ−′１　ｅｕ、　　ｏｐｎ−ｓｅ
ｒ−ａ　１　ｙ−ｉｅｕ　１ＱＩＶ−ａｌａ−Ｑｌｎ−
９ｅｒ、ＱＪＩ　ｙ−ａｌａ−ＣＪｌｎ−１ｅｕ％　ａ
　１　ｙ−１ｅｕ−１ｇＩＶ−ａｌＦｌ、ＱＪＩＶ−ｓ
ｅｒおよびｇｌｒｌ−１ｅ　ｕ　カら選ばれ、×３がａ
ｓｎ−ｓｅｒ　−ｐｈｅ−ａｒｇおよび１ｙＳ−ｓｅｒ
−ｐｈｅ−ａｒｇから選ばれ、ｍ、ｎおよびｒはそれぞ
れ１の化合物である。式■のこの第六の亜群内の好まし
い化合物群は、×１が５ｅｒ−ｓｅｒであり、×２がａ
ｊｙ−ｓｅｒ−にＪｌｙ−１ｅｕＳＱＩＶ−ａ　１　ａ
−ａ　１　ｙ−ｐｅｕｌ　ｑ　１　ｎ−５ｅｒ　−ｇ１
’／−１ｅｕ、ＣＪＩＶ−ａｌａ−ｏｌｎ　−５ｅｒお
よびＱｌ　ｙ−ａＪａ−ｇＪ！　ｎ−１ｅｕから選ばれ
、×３がａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒａである化合物
である。とくに好ましい化合物は以下のペプチドである
。

ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−聞２； ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−町； ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−８８２； ５ｅｒ−ｐｈｅ−ａｒ（１−Ｎｌ１２：ｓｅｒ−ｐｈｅ
−ａｒｇ−８８２゜ 式１の好ましい化合物の第七の亜群は、×１がａｒｇ−
ａｒｇ、ａｒｇ−ｓｅｒおよび５ｅｒ−５ｅｒから選ば
れ、Ｘ２がｇＪ！ｎ−ｆｅｕ、’　ｏｌｙ−ｓｅｒ、ｏ
ｌｙ−ａｌａおよびｑｉｙ−１ｅｕから選ばれ、×３が
ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐ　ｈ　ｅ　−ａ　ｒ　ｇおよび１　
ｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｐから選ばれ、ｍ、ｎおよ
びはｒはそれぞれ１の化合物である。式Ｉのこの第七の
亜群内のさらに好ましい化合物は、×１が５ｅｒ−ｓｅ
ｐであり、×２がｇｌｎ−１ｅ３ＬＪ、　ｇｊ！Ｖ−ｓ
ｅｒ。

ｇｌｎ−ａｌａおよびＱＩｙ−ｆｌｅＵから選ばれ、ｘ
３がａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇおｃ［Ｆｌｙｓ−
ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇから選ばれる化合物である。と
くに好ましい化合物は以下のペプチドである。

ａｒｐ−ＮＨ，、： ａｒｇ−Ｎｌ１２； ａｒａ−８８２＋ 式Ｉにおいてとくに好ましい種類のペプチドは、ｍが０
または１、ｎが１、ｒが０または１のペプチドである。

この種類の代表的なペプチドを第１表に掲げる。

〜　　〜　　〜　　−−〜　　〜　　１本発明の範囲に
は、式■のペプチドの中間体である化合物も包含される
。これらの中間体化合物は、式■で表される。

式中、Ｘ　はａｒｇ、ｓｅｒ、ｐｒｏおよび１ｅｕから
選ばれる１個から約８個までのアミノ酸残基から構成さ
れるペプチドフラグメントであり、ｍはＯから４までの
整数であり、 Ｘ　はＣＪ１’ｊ、ｊ！ｅＵ、５ｅｒＳａｌａおよびｇ
ｌｎから選ばれる１個から約６個までのアミノ酸残基か
ら構成されるペプチドフラグメントであり、ｎは０から
３までの整数であり、 Ｘ　は！’ｊＳ、ａｓｎＳＳｅｒＳｐｈｅ。

ａｒｐおよびｔｙｒから選ばれる１個から約６個までの
アミノ酸残基から構成されるペプチドフラグメントであ
り、ｒはＯから４までの整数であり、Ａはアミノ末端ま
たはその医薬的に許容される塩を表し、Ｂはカルボキシ
ル末端またはその医薬的に許容されるエステル、アミド
もしくは塩を表し、 Ｐ′はシスティン残基のスルフヒドリル官能基を保護す
るために用いられた保護基であって、両システィン残塁
は同時に保護されてもまた保護されていなくてもよい。

ただし、このペプチド中の全アミノ酸残基の合計は約１
３から約２５までの範囲の整数である。

好ましい保：［はアセトアミドメル基である。

式■の範囲内の中間体化合物の好ましい群は、Ｘ’　が
ａｒｇ−ａｒｇ、ａｒｇ−ｓｅｒおよび５ｅｒ−ｓｅｒ
から３８ばｔＬ、×２がｑｌｙ−ｓｅｒ−ｇｆｙ−１’
ｅｕＳｇ１ｙ−ａｌａ−０１Ｍｉ／−ｊ！ｅｕ、ＣＪｌ
ｎ−ｓｅｒ−ＱＩＶ−１ｅｕ、にＢｙ−ａｌａ−ｇｌｎ
−ｓｅｒ。

ＣＪ１’ｊ−ａｌａ−Ｑｌｎ−１ｅｕ、Ｑｊ！Ｖ−ｓｅ
ｒ、ａｉｎ−ｉｅｕおよびｇｌｙ−ａｉａからｍ　４．
ｆれ、×３がａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ、１ｙｓ−ｓｅｒ
−ｐｈｅ、ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｃＳｉｙｓ−
ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａ
ｒｇ　−ｔｙｒおよびｚｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ
−ｔｙｒから運ばれ、ｍはＯまたは１、ｎは１、ｒはＯ
または１の化合物である。

式■および■の化合物はすべて、 “ＣＧＲ１０ＲＩ配列“と呼ばれるアミノ酸残基の配列
ｃｙｓ−ａ１ｙ−ａｒｇ−＋　１ｅ−ａｓｐ−ａｒｐ−
ｔｉｅをもつことを特徴とする。式■の化合物はさらに
、ＣＧＲＩＤＲＩ配列を含む環内残基の中に芳香性側鎖
をもつアミノ酸残基を包含しないことを特徴とする。式
■の化合物は×１および×２置換基の間に芳香性アミノ
酸残基をもたないことを特徴とする。これらの化合物は
すべて、長さが約１３から約２５までのアミノ酸残基で
あることをさらに特徴とする。好ましいペプチドは、１
３〜２０個のアミノ酸残基から構成される。

式■および■のペプチドは、Ｄまたはし光学異性体立体
配置のアミノ酸から構成することができるが本発明のペ
プチドは天然の（Ｌ）立体配置のアミノ酸から構成され
ているのが好ましい。

式１および■のペプチドを定義するために用いられた記
号は、ＩＵＰＡＣによって特定された記号である（Ｅｕ
ｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｓ、、　１３８　：　９〜３７　
。

１９８４）、ここには、ペプチド配列中、アミノ基が左
側にカルボキシル基が右側にくるペプチドの慣用表現法
が規定されている。アミノ酸がエナンヂオーマー型であ
る場合、とくに指定がない限り、アミノ酸のＬ型を示し
ている。アミノ酸の構造式中、各残基は一般に、アミノ
酸の通常の名称に相当する下表の一文字または三文字略
号によって表示する。

通常の名称　　　　　　記　号　−文字記号アラニン゛
　　　　　　Ａｌａ　　　　Ａアルギニン　　　　　　
ＡｒＱ　　　　Ｒアスパラギン　　　　　Ａｓｎ　　　
　Ｎアスパラギン酸　　　　Ａｓｐ　　　　Ｄシスティ
ン　　　　　　Ｃｙｓ　　　　Ｃグルタミン　　　　　
　Ｇｉｎ　　　　Ｑグルタミン酸　　　　　Ｇ、１　ｕ
　　　　Ｅグリシン　　　　　　　ＧＪｙ　　　　Ｇヒ
スチジン　　　　　　Ｈｉｓ　　　　Ｈイソロイシン　
　　　　１１ｅ　　　Ｉロイシン　　　　　　　Ｌ−ｅ
　ｕ　　　　Ｌリジン　　　　　　　　Ｌ’／Ｓ　　　
　Ｋメチオニン　　　　　　Ｍｅｔ　　　　Ｍフェニル
アラニン　　　Ｐｈｅ　　　　Ｆプロリン　　　　　　
　　Ｐｒｏ　　　　Ｐセリン　　　　　　　　Ｓｅｒ　
　　　Ｓスレオニン　　　　　　丁ｈｒ　　　　Ｔトリ
プトファン　　　　Ｔｒｐ　　　　Ｗチロシン　　　　
　　　Ｔｙｒ　　　　Ｙバリン　　　　　　　Ｖａｊ　
　　　Ｖ特定されないアミノ酸　Ｘａａ　　　　Ｘ基　
　１−ＴＶｒは放射性モノヨード化チロシン残塁を示し
ている。

第１図は、式１のペプチドの固相合成の一般的操作を示
す工程図であり、 第２図は、粒状ウサギ肺腺プレバレージョンから　　Ｉ
−ＡＰ−ｍの非標識ＡＰ−ＩＩＩおよびペプチドＮｏ、
９による競合的置換をプロットした図であり、 第３図は、粒状ウサギ肺腺ブレバレージョンから　　Ｉ
−ＡＰ−Ｉ［［の非標識ＡＰ−１［［およびペプチドＮ
ｏ、１０による競合的置換をプロットした図であり、 第４図は、粒状ウサギ肺腺ブレバレージョンから　　１
−ＡＰ−１［［の非標識ＡＰ−Ｉ［１およびペプチドＮ
ｏ、１２による競合的置換をプロットした図であり、 第５図は、粒状ウサギ肺腺プレバレージョンから　　Ｉ
−ＡＰ−ＩＩＩの非標１１ＡＰ−ＤＩおよびペプチドＮ
Ｏ，１１による競合的置換をプロットした図であり、 第６図は、ペプチドＮＯ６１を単独に投与した場合にお
ける平均大動脈圧と腎排泄バラメーターの変動の時間経
過を示す図であり、 第７図は、ペプチドＮｏ、１とＡＰ−１［１を共注入し
た場合の平均大動脈圧と腎排泄パラメーターの変動をプ
ロットした図である。

発明の詳細な記述 式■のへブチドは適当な方法、たとえば、完全固相法、
部分固相法、フラグメント縮合法または古典的溶液付加
法によって合成できる。たとえば、完全固相ペプチド合
成（ＳＰＰＳ）法は、参考占”　５ｏｌｉｄ−Ｐｈａｓ
ｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　″、Ｓｔｅ
ｗａｒｔ　＆　Ｙｏｕｎｇ　、第２版、Ｐｉｅｒｃｅ　
Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｃｏｍｐａｎｙ　　（１９８４）に
記載されている。フラグメント縮合による合成方法は、
米国特許箱３，９７２．８５９号に例示されている。非
天然残塁が存在しない場合には、組換えＤＮＡ法を用い
て合成することも可能であり、所望の形の類縁体をコー
ドする構造遺伝子が適当に使用される。合成ペプチドは
、プロモーターおよびオペレーターならびに構造遺伝子
を包含す゛る発現ベクターを用いて微生物を形質転換し
、この形質転換微生物にペプチドを発現させることによ
って得られる。このような構造遺伝子を用いてヒト以外
の動物で遺伝子飼育を行うことによってもペプチドを製
造することができる。この場合、合成ペプチドは血清等
からの抽出により動物から適宜回収することができる。

ペプチドは、Ｈｅｒｒｉｆｉｅｌｄによって記載された
ように（Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、　８５　：　
２１４９．１９６４）、固相合成法を用いてＩ！Ｊ造す
るのが好ましいが、前述のように本技術分野において公
知の他の均等な化学合成法を用いることも【可能である
。固組合或は、ペプチドのカルボキシル末端から、保護
されたアミノ酸を適当な樹脂にカップリングさせること
によって開始する。このような出発原料は、α−アミノ
基が保護されたアミノ酸残基を適当な官能化樹脂に結合
させることによって製造できる。第１図には、固相ペプ
チド合成法の一般的操作を示す。

樹脂は多くのメーカーからの市販品を入手できる。この
種類の置換樹脂は、ｓｔｅｗａｒｔら著ｔ′５ｏｌｉｄ
　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ“
に記載されている。

式■のペプチドの化学的１ｍに際しては、各種゛アミノ
酸残基の側鎖基をその部位に化学反応が起こることから
防止する適当な保護基で、最終的にその基が除去される
まで、保護しておくことが通例である。また、α−アミ
ノ保ＩＩ基による保護も、通常、その位置に次の反応を
行うまで行われている。したがって、合成過程において
は通例、ペプチド鎖における所望の配列にアミノ酸残基
が配置し、これらの各種残基は側鎖保護基を連結してい
る中間体生成物が製造される。ペプチドの合成に用いら
れる特定の側鎖保護基の選択は以下の規則によって行わ
れる。すなわち（２）保護基は、合成の各工程でα−ア
ミノ保護基を除去するために選択される試薬および反応
条件に安定であること、０保護基は、カップリング条件
下にもその保護機能を維持し、切断されないこと、（ロ
）側鎖保護基は、所望のアミノ酸配列の合成完了後、ペ
プチド鎖を変えることなく除去できることである。本明
ｓａ書の記載中、［Ｆ］の記号はアミノ酸官能基の保護
基をＰ′は側鎖官能基の保護基を表す。

［Ｆ］で表されるα−アミノ保護基は、ポリペプチドの
段階的合成技術において有用なことが知られている保護
基である。［Ｆ］で表わされるα−アミノ保護基の種類
には、 （１）　　アシル型保ｍ基たとえばホルミル、トリフル
オロアセチル、フタリル、ｐ−）ルエンスルホニル（Ｔ
Ｏ８）、ベンゼンスルホニル、ニトロフェニルスルフェ
ニル、トリチルスルフェニル、０−二トロフエノキシア
セチル、クロロアセチル、７セチルυよびγ−クロロブ
ヂリル、 （２）　　芳香族ウレタン型保護基たとえばベンジルオ
キシカルボニル＜２＞および置換Ｚたとえばｐ−クロロ
ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、ｐ−ニトロベン
ジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカル
ボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、 （３）脂肪族ウレタン型保護基たとえばｔ−ブチルオキ
シカルボニル（ＢＯＣ）、ジイソブ口ビルメトキシカル
ボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカル
ボニル、アリルオキシカルボニル、 （４）　　シクロアルキルウレタン型保ＩＩたとえばフ
ルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏ　Ｃ）、シ
クロペンチルオキシカルボニル キシカルボニル ルボニル、 （５）　　チオウレタン型保ｍｍたとえばフェニルカル
ボニル、 （６）　　アルキル型保護基たとえばトリフェニルメチ
ル（トリチル）、ベンジル（ＢｚＪり、（７）トリアル
４ルシラン基たとえばトリメチルシラン がある。好ましいαーアミノ保１１は３ｏｃである。

■がＳｅｐのヒト０キシル基の保護基である場合、■は
アセチル（ＡＣ＞、ベンゾイル（Ｂｚ）、ｔｅｒｔ−ブ
チル、トリチル、テトラヒドロピラニル、ベンジルエー
テル（ＢＺＪ）、２、６−ジクロロベンジルおよびＺか
らなる群より選ばれるのが好ましい。最も好ましい保護
基はＢｚｌである。■はＨであってもよい。すなわちヒ
ドロキシル基に保２！１基がなくてもよい。

■がＣｙｓの保護基である場合、■はｐ−メトキシベン
ジル（ＭｅＯＢｚＪ）、ｐ−メチルベンジル、チオエー
テル、アセトアミドメチル、トリチルおよびＢＺＪから
なる群より選ばれるのが好ましい。最も好ましい保護基
はアセトアミドメチルである。ＯはＨであってもよい。

すなわち硫黄に保護基がなくてもよい。

■がａｒｑのグアニジノ基の保護基である場合、ＯはＨ
、ニトロ、ＴＯＳ，Ｚ、アダマンチルオキシカルボニル
およびＢＯＣからなる群より選ばれるのが好ましい。Ｔ
ＯＳはとくに好ましい。

■がＡＳｐのβ−カルボキシル基の保護基の場合には、
■はＨまたはエステル形成基である。

■はＢｚｌ、２，６−ジクロロベンジル（Ｄｃｂ）、Ｃ
ＢＺ、メチルおよびエチルからなる群より選ばれるのが
好ましい。Ｂｚｌはとくに好ましい。

■はＧｊｎまたはＡＳｎのアミド基に対する保護基の場
合、ＯはＨまたは保護基、好ましくはキサンチル（Ｘａ
ｎ）である。

カルボキシル末端に対する保護基は、ＯＨ、ＯＣＨ　　
、アミド、ヒドラジドおよびエステルからなる群より選
択され、また、固体和合成において固体樹脂支持体に連
結されるために用いられるアミド、ベンジルエステルお
よびヒドロキシメチル撃留結合も包含される。このよう
な樹脂支持体の例としては 一ＮＨーベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂支持体、 −　Ｎ　Ｈ−バラメチルベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ
）樹脂支持体、 一ＮＨＮパーメトキシベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）
樹脂支持体、 一ＯーＣＨ２ーポリスチレン樹脂支持体、−Ｏ−ＯＨ２
−ベンジルポリスチレン樹脂支持体、−Ｏ−ＣＨ２−フ
ェニルアセトアミドメチルポリスチレン樹脂支持体およ
び 一ＯーＣＨ２ーフェニルーオキシメチレン樹脂支持体を
挙げることができる。

ポリスチレンポリマーは、スチレンと、架橋剤としての
約０．５〜２％のジビニルベンゼンとの共重合体が好ま
しく、このポリスチレンポリマーはある種の有機溶媒に
全く不溶である。

ペプチド鎖の成長を導く操作は、以下に、アミノ酸のア
ミノ官能基の保ｍｌ基としてｔ−ブトキシカルボニル基
を用いる操作について例示する（第１図のｓｐｐｓの一
般工程図参照）。

ｔ−Ｂｏｃ（ｌｉ！！アミノ酸を樹脂支持体にカップリ
ングさせたのち、α−アミノ保護基をたとえばメチレン
クロリド（ＣＨ２Ｃｌ２）中トリフルオＯ酢１１　（’
ｒＦＡ）　、ＴＦＡｊ！独＊たＬｔジオキサン中ＨＣオ
を用いて除去する。メチシンク０リド中５０容量％のＴ
ＦＡを用いるのが好ましい。脱保護は約０℃から室温ま
での温度で行われる。特定のαーアミノ保ｍ基の除去の
ための他の標準的な切断試薬および条件も、Ｓｃｈｒｏ
ｄｅｒ　ｉ　Ｌｕｂｋｅ著：“Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ
ｓ″、＾ｒａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、ユニ７２〜７５
．１９６５に記載されているように使用できる。

最初のα−アミノ酸のα−アミノ保護基を除去したのち
、残りのα−アミノおよび側鎖保護アミノ酸を所望の順
序に段階的にカップリングして上に定義した中間体化合
物を得る。合成申告アミノ酸を別個に添加する別法とし
て、いくつかのアミノ酸は固相反応器に入れる前にたが
いにカップリングさせておくこともできる。適当なカッ
プリング試薬の選択は本技術分野の熟練者には自明のと
おりである。とくに適当なカップリング剤はＮ。

Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミドＪ３よびＮ．Ｎ
’　−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＧ）である
。

ペプチドの同相合成の通常の操作に使用できる活性化剤
は、ペプチド技術においてよく知られる。

適当な活性化剤の例には、 （１）　　カルボジイミド、たとえばＮ，Ｎ’　−ジイ
ソプロピルカルボジイミド （３−ジメヂＪレアミノブ［〕ビル）カルボジイミド、
（２）　　シアナミド、たとえばＮ．Ｎ’　−ジベンジ
ルシアナミド、 （３）　　ケテンイミン、 （４）　　イソキサゾリウム塩、たとえばＮ−エチル−
５−フェニルイソキサゾリウム−３１−スルホネート、 （５）環内に１個〜４個の窒素原子を含有する単環式含
窒素芳香性アミド、たとえばイミダゾール、ごラゾール
および１．２．４−トリアゾール誘導体；有用な特定の
異項環アミドとしてはＮ．Ｎ’−カルボニＪレジイミダ
ゾール、Ｎ．Ｎ’　−カルボニル−ジー１．２．４−ト
リアゾール、（６）　　アルコキシル化アセチレン、た
とえばエトキシアセチレン、 （７１　　アミノ酸のカルボキシル残基と混合無水物を
形成する試薬、たとえばクロロギ酸エチルおよびり００
ギ酸ブチル、および （８）　　環窒素上に亡ドロキシ基をもつ含窒素異項環
化合物、たとえばＮ−ヒドロキシフタルイミド、Ｎ−ヒ
ドロキシコハク酸イミドおよび１−ヒドロキシベンゾト
リアゾール（ＨＯＢｔ）がある。ペプチドカップリング
における他の活性化剤およびその使用にツイテはＳｃｈ
ｒｏｄｅｒ　＆　Ｌｕｂｋｅ：前出、第３章（前記参照
）およびにａｐｏｏｒ　：　Ｊ．Ｐｈａｒ．Ｓｃｉ．　
。

且：　１　〜２７．１９７０に記載されている。

各保護アミノ酸またはアミノ酸配列は、固相反応器に約
２〜１０倍過剰に加え、カップリングはジメチルホルム
アミド（ＤＭＦ）二ＣＦ１２Ｃ１２（１：１）またはＤ
ＭＦもしくはＣＨ２　Ｃｌ！２単独中で実施する。カッ
プリングを手動で行う場合には、合成の各段階における
カップリング反応の成否は、Ｅ．Ｋａｉｓｅｒら：＾ｎ
ａ１．Ｂｉｏｃｈｅｔ，３　４　：　５　９５、１９７
０に記載されているように、ニンヒドリン反応でモニタ
リングする。カップリング反応が不完全な場合は、次の
アミノ酸のカップリング前のα−アミノ保護基の除去に
先立ってカップリング操作を反復する。カップ・リング
操作はたとえばＡｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ
　Ｉｒｉｅ．　４　３　０　Ａ型ペプチドシンセサイザ
ーを用いて自動的に実施することもできる。

所望のアミノ酸配列が完成したのち、たとえば液体フッ
化水素のような、樹脂からペプチドを切断するだけでな
く残った側鎖保護基もすべて除去する試薬で処理して中
間体ペプチドを樹脂支持体からはずし、線状型のペプチ
ドを得る。環状型のペプチドはヨウ素を用いる酸化（た
とえば８。

Ｋａｍｂｅｒら　：　　Ｈｅｌｖ，　　Ｃｈｉｇ＋．Ａ
ｃｔａ　　、　　６　３　　：　　８　　９　　９　〜
９１５、１９８０に記載されている）もしくは空気酸化
により、またはシスティンのスルフヒドリル機能の保護
に用いられた基の種類に適した他の公知操作に従って得
ることができる。

別法として、中間体ペプチドは樹脂支持体から加アルコ
ール分解によって分離し、得られたカルボキシ末端エス
テルを加水分解して酸に変換してもよい。側鎖保護基が
あれば、次に、前述のようにしてまたは他の公知操作に
より、たとえば接触還元（たとえばＢａＳＯ４上Ｐｄ）
によって切断することができる。切断にフッ化水素を用
いる場合には、反応容器中にスカベンジャーとしてア二
ソールまたは２−メルカプトピリジンを包含させる。無
水ＨＦがペプチドに有害な場合は、合成にもつと不安定
な系を使用する。このような系はとくに、他の樹脂でＢ
ｐｏｃ、Ｆｒｎｏｃまたはｔｌ）Ｓ保護アミノ酸を使用
することにより得られる。

倒−一ユ ペプチドＮｏ、１は、ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（ＢｒＺ
）負荷フェニルアセトアミドメチル樹脂（置換範囲０．
６〜０．８ｍｍｏｊ！／ｇ、Ａ１１ｌ）ｔｉｅｄ　Ｂ１
０３ＶＳｔｅｌＳ　Ｉｎｃより購入）上、固相合成でｙ
Ｊ造した。このペプチドの組立てに用いたアミノ酸誘導
体は以下のリストから選択した。

ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−ｓｅｒ　（Ｂｚｌ ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ、−ＣｙＳ　（Ａｃｍ＞ｔ−Ｂｏａ−Ｌ
−Ｐｈｅ ｔ−３ｏｃ−Ｇβｙ ｔ−ＢＯＣ−Ｌ−ＡｒＧ　（ＴＯ８） ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−ＩＪｅ ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ　（ＯＢｚｆ）ｔ−［３０Ｃ−
Ｌ−Ｌｅｕ ｔ−ＢＯＣ−Ｌ−ＡＳｎ これらはＰｅＤｔｉｄｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
　Ｉｎｃ、および／またはＰｅｎ１ｎｓｕｌａ　Ｌａｂ
ＯｒａｔＯｒｉｅＳおよび／またはＡｐｌ）ｔｉｅｄ　
Ｂ１０３ｌｔｅｌＳ、ＩｎＣから市販品を入手できる。

ペプチドの特性は、アミノ酸分析（Ｂｅｃｌｖａｎ　６
３００ＨＰＡ）、配列決定（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓ
ｙｓｔｅｍｓｐｒｏｔｃｔｎ　５ｅＱｔｌｅｎＣＥＩＳ
　６２０　）およびＦＡＢマススペトロスコビーによっ
て示す。

合成操作 ペプチドＮｏ、１は、Ａ１）ｔｌｌｉｅｄ　Ｂ１０３ｖ
ＳｔｅｌＳｔｎｃ、のシステムソフトウェア・バージョ
ン１．３０に記載の標準プロトコールを用い自動化機械
合成（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｉｓ　Ｉｎ
ｃ、　４３０　Ａ型ペプチドシンセサイザー）によって
合成した。

切断および脱保護操作 乾燥した、ＴＦＡ脱保護ペプチドＩｔ！！（１ｇ、０．
３〜０．５ｍｍｏｆ／ＳＦ）、アニソール（１ｇ）およ
び２−メルカプトピリジン（０，４５Ｆ）を標準テフロ
ン容器中液体ＨＦ（１０〜１５ｊＩｉりに取り、０℃で
１．５時間撹拌した。ＨＦを蒸発させ、残留物をジエチ
ルエーテル（４Ｘ４０ａｅ）、酢酸エチル（４Ｘ４０ａ
ｅ）中で磨砕し、２５〜８０％酢Ｍ　（ＡｃＯＨ）（３
ｘ３０ｄ）で抽出し、濾過した。濾液をロータリーエバ
ポレーターを用い、５〜１０℃、１　ａｍ　ＨＱにおい
て５ｄ容に濃縮した。残留物を０．０５％ＴＥＡ含有水
中に再溶解し、凍結乾燥した。

環化操作 １：４水：酢酸混合物２０Ｏｄ中２００＃ｊのヨウ素溶
液に、電磁撹拌しなから、前工程で得られた物質２００
１ｇ部分を加えた。２５℃で１〜６時間撹拌したのち、
脱イオン水２００ｍを加え、生成した混合物を５００ｄ
のクロロホルムで２回、５００ｄのエーテルで１回抽出
した。水相をロータリーエバポレーターにより５〜ｂ ＨＱで１０１ｄ容量に濃縮した。残留物を精製のため０
．０５％ＴＦへ含有の水５０ｍに再溶解した。

精製操作 上記溶液を−ｈａｔｓａｎ　９３４　Ａ　Ｈガラス繊維
フィルターを通して濾過し、ｖｙｄａｃ　Ｃ１８シリカ
（Ｖｙｄａｃ　２１８ＴＰＢ１５−２０；孔径３０ｒｒ
Ｌμ）２００ｇを充填したクロマトグラフィーカラムに
適用した。カラムは８ｍ／分の流速で、最初０．０５％
ＴＦＡ含有水中５％アセトニトリにより、ついで０．０
５％ＴＥＡ含有水中５〜４０％アセトニトリル勾配によ
り２時間溶出し、この間分画を集めた。生成物は５ａｋ
ａＯｕＣｈｉ反応による分画のモニタリング（Ｇ、Ｂｏ
ｒｉｎら：　Ｉｎｔ、Ｊ、ＲｅＥ）。

Ｐｒ０ｔ、　Ｒｅｄ、　、工０：２７〜３８．１９７７
）によって示されるように、通常、勾配置時間後に溶出
した。ペプチド含有分画を分析ＨＰ　Ｌ　Ｃで解析した
。

純度８５％以上と定量された分画を合した。ペプチドは
、Ｖｙｄａｃ　Ｃｉ　ａカラム（２１８ＴＰ５１０、ｉ
、ｄ、１０履、長さ２５１、粒子径５ミクロン）上、０
．０５％トリフルオロ酢酸中１５〜３５％アセトニトリ
ル直線勾配を用い、流速４ｍ／分で半製造ＨＰ　Ｌ、　
Ｃに付し、均一な形で得られた。捕集された分画の均一
性は分析ＨＰＬＣで測定した。

を有するペプチドＮｏ、１は上述の操作で製造した。そ
の構造は アミノ酸分析（理論値、分析値）： ＡＳＩ）、Ａｓｎ（２，２，０５）；５ｅｒ（４，３，
１９）　、Ｇ１１／（４，３，９０）。

１１ｅ（２，１，７７）　、Ｌｅｕ（１，１，０５）　
、Ｔｙｒ（１，０，７９）、Ｐｈｅ　（１，１，０）　
、八ｒｌＪ（３，２，６７）。

ＦＡ８質量分析ニアイソトープパターン（Ｍ＋、Ｈ）ク
ラスターは期待された理論値２１４６／２１４７に測定
される。

ペプチドＮｏ、２〜Ｎｏ、１２ ペプチドＮ０８２〜Ｎｏ、１２は０．３〜０．５１０Ｑ
／９のｔ−［３０Ｃ−Ｌ−ＡｒＧ（Ｔｏｓ）で置換され
た４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（ｐ−ＭＢＨＡ
：、１％架橋ポリスチレン／ジビニルベンゼン’、２０
０〜４００メツシユ）上で固相合成により製造した。ペ
プチド鎖の組立てに用いたアミノ酸誘導体には、Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ［ｎｔｅｒｎａｔｉＯｎａｌ　Ｉｎｃ、および
／またはＰｅｎ１ｎｓｕｌａｔａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
ｔｌよび／またはＡｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ
ｓＩｎｃ、から市販されているｔ−１３ｏｃ−ｓｅｒ（
Ｂｚｊり　、ｔ−Ｂｏｃ−Ｃｙｓ　（Ａｃｍ）　、ｔ−
３ｏｃ−Ｐｈｅ、ｔ−Ｂｏｃ−ＧＩＶ、ｔ−Ｂｏｃ−Ａ
ｒＱ　（Ｔｏｓ）、ｔ−Ｂｏｃ−１ｆｅ。

ｔ−Ｂｏｃ−Ａｓｐ　（ＯＢｚＪり、ｔ−［３ｏｃ−Ａ
！ａ、ｔ−Ｂｏａ−Ｇｌｎ　（Ｘａｎ）、ｔ−Ｂｏｃ−
Ｇｌｎ％ｔ−１３ｏｃ−１ｅｕ、ｔ−Ｂｏｃ−Ａｓｎ、
ｔ−３ｏｃ−Ａｓｎ　（Ｘａｎ）が包含される。すべて
の試薬および溶媒はへＣ３特級または米国薬局方に定め
られたＵＳＰ標準に一致したものである。脱保護、環化
および精製操作は、ペプチドＮ００１について上述した
操作と一般に同じであった。

合成操作 ペプチドは自動機械合成または手動合成によって合成し
た。自動機械合成の場合には、ＡｐＤｌｉｅｄＢｉＯｓ
ｙＳｔｅｌＳ　ＩｎＣ，ペプチドシンセサイザー（４３
ＯＡ型）を用い、合成工程はＡ（ｌｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅａｓＩｎｃ、システムソフトウェア◆バージ
ョン１．３０に記載された標準プロトコールに従って“
実施した。

手動合成の場合には、以下の３操作の反復に基づく操作
によってペプチド鎖を組立てた（必要な場合には多重カ
ップリングを実施した）。

ペプチド　Ｎｏ、２ 式 を有するペプチドＮＯ１２は、ペプチド合成の項に記載
した自動操作を用いて合成した。ＦＡＢ質量スペクトル
：アイソトープバーン（Ｍ＋Ｈ）クラスターは期待値１
３０４／１３０５で測定される。

アミノ酸分析（理論値、分析値）： ａｓｐ（１，１，０４）　、５ｅｒ（１，０，９２）　
、Ｖ（４，３，８１）、１ｌｅ（２，１，８６）　、Ｉ
ｅｕ（１，１，０３）　、ａｒａ（２，２，１４）ベプ
チζ　Ｎｏ、３ 式 を有するペプチドＮ００３は、ペプチド合成の項に上述
した手動操作を用いて合成した。配列解析の結果は正し
い配列をもつペプチドが単離されたことを示している。

アミノ酸分析（理論値、分析値）： ａｓＤ、ａｓｎ（２，２，１６）　、５ｅｒ（４，３，
５９）、ｇｌｎ（１，１，０３）　、０ＩＶ（３，３，
１２）　、１ｌｅ（２，１，９１）、Ｉｅｕ（１，１，
０７）　、ｐｈｅ　（１，１，０２）、ａｒＯ（３，３
，０９）。

を有するペプチドＮ００４は、ペプチド合成の項に述べ
た手動操作を用いて合成した。配列解析の結果は正しい
配列をもつペプチドが単離されたことを示している。

アミノ酸分析（理論値、分析値）： ａｓＥ）、　ａｓｎ（２，１，９３）　、５ｅｔ（３，
２，０９）、ｇｌｎ（１，１，００）　、（ＩＩＶ（３
，２，９３）　、１ｌｅ（２，１，７７）、１ｅｕ（１
，０，９０）、ｐｈｅ（１，０，９３）、ａｒｌｌｌ（
３，２，７０）。

ペプチドＮｏ、５ 式 を有するペプチドＮ００５は、ペプチド合成の項に上述
に手動操作を用いて合成した。配列解析の結果は正しい
配列をもつペプチドが単離されたことを示している。

アミノ酸分析（理論値、分析値）： ａｓｌｌ、ａｓｎ（２，２，２４）、５ｅｒ（４，３，
６３）、ｏｌｎ（１，１，１０）。

ｇｌｙ（３，３，２３）、ａｌａ（１，１，１７）、　
１ｌｅ（２，１，８７）、ｐｈｃ（１，１，０１）、ａ
ｒｇ（３，２，７３）。

を有するペプチドＮ００６は、ペプチド合成の項に上述
した手動操作を用いて合成した。

アミノ酸分析（理論値、分析値）： ａｓｐ、ａｓｎ（２，２，２０）、５ｅｔ（３，２，３
５）、ｇｌｎ　（１，１，００）。

ａｌｙ（２，２，０６）、１ｌｅ（２，１，７０）、１
ｅｕ（１，１，０２）。

ｐｈｅ（１，１，００）、ａｒｇ（３，２，６２）。

ｐｈｅ＝何−Ｎｌ２ を有するペプチドＮ００７は、ペプチド合成の項に上述
した手動操作を用いて合成した。

アミノ酸分析（理論値２分析値）： ａｓｐ、ａｓｎ（２，２，１９）、５ｅｒ（４，３，４
７）、１ＪＩＶ（３，３，１３）。

１１ｅ（２，１，７Ｂ、　ｐｈｅ（１，１，００）、ａ
ｒｇ（３，２，６４）。

ペプチドＮｏ、８ 式 を有するペプチドＮ０９８は、ペプチド合成の項に上述
した手動操作を用いて合成した。

アミノ酸配列（理論値、分析値）： ａｓｐ、ａｓｎ（２，１，９８）、５ｅｒ（２，１，７
１）、０１ｙ（４，３，８７）。

ｉ　ｆｅ（２，１，６８）、　１ｅｕ（１，１，０３）
、　ｐｈｅ（１，１，００）。

ａｒｏ　（３，２，６４）。

±１工旦旦旦−１ 式 を有するペプチドＮ００９は゛、ペプチド合成の項に上
述した手動操作を用いて合成した。配列解析の結果は、
正しい配列のペプチドが単離されたことを示している。

アミノ酸分析（理論値、分析ｖ１）： ａｓｐ、ａｓｎ（２，２，０９）、５ｅｒ（４，３，６
１）、＋２Ｉｙ（４，４，３９）。

１ｔｅ（２，１，８２）、　１ｅｕ（１，１，００）、
ｐｈｅ（１，０，９６）。

ａｒ（１（３，３，１４）。

を有するペプチドＮｏ、１０は、ペプチド合成の項に上
述した手動操作を用いて合成した。配列解析の結果は、
正しい配列のペプチドが単離されたことを示している。

アミノ酸分析（理論値、分析値）： ａｓｐ、ａｓｎ（２，２，１９）、５ｅｒ（３，２，７
５）、＜ＩＩＶ（４，４，２４）。

ａｌａ（１，１，２６）、　１ｌｅ（２，１，８７）、
　１ｅｕ（１，１，０６）。

ｐｈｅ（１，１，０１）、ａｒｏ（３，２，５５）。

ペプチドＮｏ、１１ 式 を有するペプチドＮｏ、１１は、ペプチド合成の項に上
述した手動操作を用いて合成した。

アミノ酸分析（理論値、分析値）： ａｓｐ、ａｓｎ（２，１，９８）、５ｅｒ（２，１，７
１）、Ｑｌｙ（４，３，８７）。

ｉ　１ｅ（２，１，６８）、　１ｅｕ（１，１，０３）
、　ｐｈｅ（１，１，００）。

ａｒａ（３，２，６４）。

ペプチドＮｏ、１２ 式 を有するペプチドＮｏ、１２は、ペプチド合成の項に上
述した手動操作を用いて合成した。

アミノ酸分析（理論値、分析値）： ａｓｐ、　ａｓｎ（２，２，０４）、　５ｅｒ（３，２
，７１）、　ａ　１ｙ（３，２，９３）。

ｉ　Ｉｅ（２，１，８６）、　１ｅＬ１（１，１，０３
）、　Ｉ）ｈａ（１，１，００）。

ａｒｇ（３，２，７１）。

生物学的評価 ペプチドＮｏ、１〜Ｎ０．１２について、その生物学的
活性を評価した。これらの化合物を評価するために使用
した生物学的検定は次のとおりで、その詳細は後述する
。

Ａ）粒状ウサギ肺腺ブレバレージョンを用いる競合的結
合 Ｂ）単離ラット大動脈におけるＣＧＭＰ産生Ｃ）無麻酔
ラットにおける平均動脈血圧、尿流速および尿中ナトリ
ウム排泄 Ａ　ｗｌ　　　肺腺における競合的結合実験ウサギ肺腺
の調製 この操作は４℃において実施した。凍結したウサギ肺膜
（Ｐｅｌ−Ｆｒｅｅｚ、Ｒｏｂｅｒｓ、ＡＲ）を綱切し
、ついｒｏ、２５Ｍ庶糖、３ｍＭＭａＣ１，１ｍＭＥＤ
ＴＡおよび５ｍＭＴｒ　ｉ　Ｓ、ＤＨ７，５を含有する
溶液５溶中、Ｂｒ１ｔ＋１ｖａｎｎ　Ｐｏ１ｙｔｒｏｎ
で３０秒問ホモジナイズした。ホモジネートをチーズ布
で濾過し、脂肪および結合組織を除去し、濾液を５゜０
００×グで２０分間遠心分離した。上澄液を１００．０
００ｘｙで９０分間遠心分離した。洗浄したベレットを
５０ｍＭ　　Ｔｒ　ｔ　Ｓ　　ｐ８７．５に最終濃度４
η／ｄになるように懸濁した。Ｂｉｏｒａｄタンパク質
検定キットを用いて膜タンパク質を測定した。ウサギ肺
腺プレバレージョンを適宜分けて一８０℃で保存した。

このプレバレージョンは少なくとも２力間安定であった
。結合実験には、５０ｍＭ　　Ｔｒ　ｉ　ｓ　　ｐｔ１
７．５．０．１％ウシ血清アルブミン、１００μ９の膜
タンパク買および１２５１−ＡＰ−Ｉ［［（２〜３Ｘ１
０’ｃｐ■、比活性的７４００ｉ／ｍｍｏ７＞を含有す
る溶液０．２５ｄを、非標識ペプチドの非存在下または
存在下に使用した。反応は膜の添加によって開始させ、
２５℃で３０分間インキュベーションした。

インキュベーションは氷冷５０ｍＭＴｒ　ｉ　ｓ、Ｐｈ
７．５で終結させ、混合物をＰＨＤＩＩ胞ハーベスタ−
（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｇｙ、Ｉｎｃ、
、Ｍａｓｓ　）を用いて濾過し、遊離リガンドから膜結
合標識ペプチドを分離した。インキュベーション管とフ
ィルターは氷冷ｍ耐液で洗浄した。濾液についてＨｉｃ
ｒｏ醜ｅｄｉｃガンマカウンターで放射能を測定した。

非特異的結合は１０’Ｍ非櫟識ＡＰ−ＩＩ！の存在下に
おける結合として定義した。特異的結合は膜結合から非
特異的結合を差引いて計算した。結合データは非線型最
小自乗法カーブフィッティングプログラムによって解析
した。

Ｉｌｉ型５ｃａｔｃｈａｒｄプロットから明らかなよう
に（Ｇ、Ｈ，０ｌｉｎｓら：　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　ａ＋
ｏｐｈｙｓ、　ＲｅＳ、Ｃ０ＩＩＩｕｎ、　。

１４０　：　３０２〜３０７．１９８７）、ウサギ肺が
ＡＰ−１［［に対する多数の特異的結合部位を含有し、
これは単一種の高親和性受容体からなるものと考えられ
ることがすでにわかっていた。しかしなから、本発明の
ペプチドは、全心房性ペプチド結合部位のサブセットに
選択的に結合することが明らかにされた。本発明の選択
的ペプチドを用いて得られた結果から、ＡＰ−ＩＩＩは
等しい親和性を有する少なくとも２つの結合部位に結合
する非選択的リガンドであることが示唆される。競合的
結合実験から、式１の選択的ペプチドは、第２図〜第５
図に示すように、これらの部位の７３％のみみに結合す
る。すなわち、２種の心房性ペプチド結合部位は３：１
の割合で存在することがわかる。

新鮮な肺組織からまた凍結した肺組織から得られた膜い
ずれにおいても、類似の結果が得られた。

データは第２表に示す。ＡＰ受容体に対する親和性の定
量的測定結果を示す絶対阻害定数（Ｋｉ。

ｎＭ＞に加えて、選択ファクター（血管弛緩部位のに１
と非血管弛緩部位のに１の比）を各化合物について掲載
する。

第２図〜第５図は、放射性ヨード化ＡＰ−ＩＩＩと本発
明のペプチドのウサギ肺腺に対する競合的結合を示して
いる。第２図〜第５図は、Ｂ／Ｂｏ比を非標識ペプチド
のモル濃度の負対数に対してプロットした結合データで
ある。Ｂ／Ｂｏ比は、非標識ペプチドの非存在下（ＢＯ
）または各種濃度での存在下（Ｂ）における放射標識リ
ガンドの特異的結合の割合を示している。膜は、７０ｐ
Ｍ１２５１−　Ａ　Ｐ　−Ｉ［［および本発明の非標識
ペプチドの各種濃度で平衡化したもので、　　Ｉ−ＡＰ
−Ｉ［［ｖｓ、ＡＰ−Ｉ［［：ｖｓ、ペプチドＮｏ、９
　（第２図）：ＶＳペプチドＮｏ、１０（第３図）；■
Ｓ、ペプチドＮｏ、１２（第４図）；およびＶＳ。

ペプチドＮｏ、１１（第５図）である。

第　　２　　表 第２表は、ウサギ肺腺の心房性ペプチドアニルシクラー
ゼ結合および非グアニルシクラーゼ結合受容体部位に対
する本発明の選択的ペプチドの阻害定数（Ｋｉ、ｎＭ）
を比較した表である。

受容体部位のＫｉと非血管弛緩（グアニルシクラーゼ非
結晶）受容体部位のＫｉとの比である。

単離ラット大動脈セグメントをＡＰ−ＩＩＩ　（２０ｎ
Ｍ）とともに、ｃＧＭＰＤ産生に最大の応答を生じる条
件下にインキュベーションした。非カップリングＡＰ結
合部位に選択的に結合するペプチドＮｏ、１をコントロ
ールと同じ条件下、７００ｎＭでインキュベーションし
た。３個の異なる大動脈セグメントを用いて２回反復し
て行った実験の結果を第３表に示す。ＡＰ−１！［の存
在下にｃＧＭＰの平均４．５倍の産生を生じる条件下で
、グアニル酸シクラーゼ活性の刺激はほとんどまたは全
く認められなかった。

ラット大動脈組織での環状ＧＭＰの生成には以下のプロ
トコールを使用した。ｃＧＭＰレベルは放射線免疫検定
キットを用いて測定した。雄性ｓｐｒａｇｕｅ−ｏａｗ
＋ｏｙラットの頚部大動脈を外科的に取り出し、酸素を
通じたクレブス重炭酸塩！１ｉＩ液ｐＨ７，４のビーカ
ー中に入れた。組織から脂肪族と血液を除き、大動脈は
それぞれ２個の１１０１Ｉ１セグメントに切断した。こ
れらの１０ａｍセグメントをそれぞれ縦に切開し、頚部
大動脈から４個のセグメントを得た。各駒６００〜８０
０μびの大動脈セグメントを、３ｄＦｉ！素飽和クレブ
ス！■炭酸塩緩衝液、２ｘ１０−５ｍＭノルエピネフリ
ン、０．１ｍＭ［ＢＭＸ（イソブチルメチルキサンチン
）含有の小ベトリ血中で３０分間ブレインキュベーショ
ンした。

インキュベーションはすべて、ＦＯｒｌａインキュベー
ター中、９５％０　および５％Ｃ０２気相下、３７℃で
実施した。ブレインキュベーション後、適当なセグメン
トに２０ｎＭＡＲ−ＩＩ［を加え、本発明の試験ペプチ
ドは比較セグメントに添加した。

各ラットからの４個のセグメントの１個をコントロール
として、１個を櫟準２０ｎＭＡＰ−１［１１，：、２個
を式Ｉの試験ペプチドに使用した。ＡＰ−１［［の存在
下における環状ＧＭＰの刺激のためのインキュベーショ
ン時間は３０分とした。

インキュベーション後、組織セグメントを取り出し、ド
ライアイス上で凍結し、ついでセグメントを秤量して試
験管に入れ、無水エタノールで抽出した。組織をポリト
ロンでホモジナイズし、ついで３．０００ｒｕ＋　、４
℃で１５分間遠心分離した。上澄液を別の試験管に注ぎ
、真空オープン中で蒸発乾固した。試験管を乾燥させた
のち、サンプルを０．０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ
６，２゜２Ｉｄに取った。各抽出液１００μｌを放射線
免疫検定（ＮＥＮＲＩＡキット、　　　Ｉトレーサー）
による定量に用いた。

第３表 単離ラット大動脈のｃＧＭＰレベルに対するペプチドＮ
０１１の作用 ラット　　　　処　　置　　　　産生ＣＧＭＰＡ９１１
　　　　　　　　対　　照　　　　　　　　　　　１．
３２ＡＰＩＩＩ　（２０ｎＨ）　　　　　　　　　　　
１１．５４ペプチドＩ　１（７００ｎＨ）　　　　１．
６６ベブチド番１（７００ｎＨ）　　　　＜０．５６Ｂ
９１１　　　　　　　　対　　照　　　　　　　　　　
　１，１９＾ＰＩ［［（２０ｎＨ）　　　　　　　　　
　　　　５．６７ベブチド＋　１（７００ｎＨ）　　　
　１．２３ペプチドＩ　１（７００ｎＨ）　　　　２．
５９八９１８　　　　　　　　対　　照　　　　　　　
　　　　５．７５ＡＰＩＩＩ　　（２０ｎＨ）　　　　
　　　　　　ｔ９．７２ペプチド＃　１（７００ｎＨ）
　　　　３．３６ベプチドＩ　１（７００ｎＨ）　　　
　１０．９２ｃ）　　　＊　ＬＥ４２Ｒ１ｉａ、にｔＦ
ｆＨ−＋ｔ−ｊＪり〜ム１ＡＰのグアニルシクラーゼ・
フリー受容体に選択的に結合するペプチドＮ０７１は環
状ＧＭＰ産生を増加させない。多くの研究から環状ＧＭ
Ｐレベルの増大は心房性ペプチドの作用を仲介すると考
えられているので（Ｒ，Ｊ、ＷｉｎｑｕｉＳｔら：　Ｐ
ｒ０Ｃ。

Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　、８１　：　７
６６１〜７６６４．１９８４：Ｈ，Ｓａｔら：　Ｈｙｐ
ｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、　８　：　７６２〜７７１．１９
８６）、無麻酔ラットに本発明のペプチドを注入する研
究を、このペプチドの内因性アトリオベブチンに対する
作用（尿流量および尿中ナトリウム排泄のモニタリング
による）およびＡＰ−ＩＩＩの作用持続の増強と延長に
対する作用を検討した。

メトヘキシタール麻酔下に、カテーテルを頚部静脈、頚
動脈および膀胱に植え込んだ。手術から２〜４時間後、
無麻酔下ラットに、食塩水の注入を３０μｍ／分の速度
で開始し、実験期間中を通じ同速度で注入を続けた。１
時間の平衡化および安定化期間を設けたのち、第４表に
示すように６回の２０分間実験採取期間を設けた。最初
の採集はコントロール期間（Ｃ１）、次の３回は実験化
合物の注入期間（Ｅｌ、Ｅ２．Ｅ３）、最後の２期間は
回復期間（Ｒ，Ｒ２）とした。４群について検討した。

群ＩにはＡＰ受容体に結合せず、生物学的応答が知られ
ていない対照ペプチドを注入した。この群は他群の時間
コントロールとしての役目を果した。群■にはＥｌ、Ｅ
２およびＥ３期にペプチドＮ００１を注入した。群■に
は、Ｅｌ、Ｅ２およびＥ３期にＡＰ−ＩＩＩを注入した
。群ＩＶにはペプチドＮｏ、１を時間０から実験終了時
までとＡＰ−Ｉ［［をＥｌ、Ｅ２およびＥ３期に投与し
た。

第　　４　　表 ＣＩ　ＥＩ　Ｅ２　Ｅ３　ＲＩ　Ｒ２ 時　　間　１１１１１１１１ （分）　　０　６０　８０　１００　１２０　１４０　
１６０　１８０対照ペプチド １６．０μｇ／υ ０．０５μｇ／に９７分 １６．０μ’ｊ／Ｋｇ／分 １　２リ　　　」 ０．０５μｆＪ　／に９／分 第６図には、時間コントロール群の平均動脈圧、尿流量
および尿中ナトリウム排泄が安定していたことを示して
いる。ペプチドＮ００１は単独に投与した場合、平均動
脈圧には全く影響しなかったが、緩和な水利体およびナ
トリウム利尿を示した。

第７図には、ペプチドＮ００１がＡＰ−［［に対する降
圧応答を増強することを示している（水利体およびナト
リウム利尿は増強しない）。ペプチドＮ００１によるグ
アニルシクラーゼ・フリー受容体の薬理学的遮断は、尿
流量および尿中ナトリウム排泄の基底値にはわずかじか
影響せずに、平均動脈圧への作用を増強する。

式Ｉのペプチドが、ＡＰ−ＩＩＩの単一種の受容体部位
に高い選択性をもって高い親和性を有することが明らか
にされた。この特定な種類の受容体部位は血漿中の遊離
心房性ペプチドのレベルに影響するものと考えることが
できる。式■のペプチドに認められたこのｉｎ　　ｖｉ
ｖｏ作用は、この特定の受容体部位との相互作用による
ものである。

本発明について、以上の特定の実施態様により説明した
が、これらの態様の詳細は本発明を限定するものではな
い。本発明の精神および範囲から逸脱することなく多く
の均等、変化および修飾が存在することは自明であり、
これらの均等な態様は本発明の埴囲内に包含されるもの
であることを理解すべきである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、式Ｉのペプチドの固相合成の一般的操作を示
す工程図であり、 第２図は、粒状ウサギ柿膜ブレバレージョンから　　Ｉ
−ＡＰ−Ｉｌｌの非標識ＡＰ−ＩＩＩおよびベブ・チド
Ｎｏ、９による競合的置換をプロットした図であり、 第３図は、粒状ウサギ数校プレバレージョンから　　１
−ＡＰ−１１１の非標識ＡＰ−ＩＩＩおよびペプチドＮ
ｏ、１０による競合的置換をプロットした図であり、 第４図は、粒状ウサギ肺腺・プレバレージョンから１２
５Ｉ−ＡＰ−ＩＩＩの非標識ＡＰ−Ｉ［およびペプチド
Ｎｏ、１２による競合的置換をプロットした図であり、 第５図は、粒状ウサギ肺腺ブレバレージョンから　　Ｉ
−ＡＰ−１１の非標１１ＡＰ−１１！およびペプチドＮ
ｏ、１１による競合的置換をプロットした図であり、 第６図は、ペプチドＮｏ、１を単独に投与した場合にお
ける平均大動脈圧と腎排泄パラメーターの変動の時間経
過を示す図であり、 第７図は、ペプチドＮ００１とＡＰ−ｍと共注入した場
合の平均大動脈と腎排泄パラーターの変動を７０ツトし
た図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘ＾１はａｒｇ、ｓｅｒ、ｐｒｏおよびｌｅｕ
   から選ばれる１個から約８個までのアミノ酸残基から構
   成されるフラグメントであり、ｍは０から４までの整数
   であり Ｘ＾２はｇｌｙ、ｌｅｕ、ｓｅｒ、ａｌａおよびｇｌｎ
   から選ばれる１個から約６個までのアミノ酸残基から構
   成されるフラグメントであり、ｎは０から３までの整数
   であり、 Ｘ＾３はｌｙｓ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｐｈｅ、ａｒｇ、ｔ
   ｙｒおよび＾１＾２＾５ I −ｔｙｒから選ばれる１個
   から約６個までのアミノ酸残基から構成されるフラグメ
   ントであり、ｐは０から４までの整数であり、 Ａはアミノ末端またはその医薬的に許容される塩を表し
   、Ｂはカルボキシル末端またはその医薬的に許容される
   エステル、アミドもしくは塩を表す。 ただし、このペプチド中の全アミノ酸残基の合計は約１
   ３から約２５までの範囲の整数である）で示されるペプ
   チド （２）Ｘ＾１は１個から８個までのアミノ酸残基から構
   成されるフラグメントであり、ｍは０または１である特
   許請求の範囲第１項のペプチド （３）Ｘ＾１はｓｅｒ、ａｒｇおよびｌｅｕから選ばれ
   る４個または６個のアミノ酸残基から構成されるペプチ
   ドフラグメントである特許請求の範囲第２項のペプチド （４）Ｘ＾１はｓｅｒおよびａｒｇから選ばれる２個か
   ら４個までのアミノ酸残基から構成されるフラグメント
   である特許請求の範囲第３項のペプチド （５）Ｘ＾１は１個または２個のセリン残基から構成さ
   れるフラグメントである特許請求の範囲第４項のペプチ
   ド （６）ｍは０である特許請求の範囲第１項のペプチド （７）Ｘ＾２２個から６個までのアミノ酸残基から構成
   されるフラグメントであり、ｎは１である特許請求の範
   囲第１項のペプチド （８）Ｘ＾２は２個から４個までのアミノ酸残基から構
   成されるペプチドフラグメントである特許請求の範囲第
   ７項のペプチド （９）Ｘ＾２は ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｎ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｓｅｒ、 ｇｌｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｓｅｒおよび ｇｌｙ−ａｌａ． から選ばれる特許請求の範囲第８項のペプチド（１０）
   Ｘ＾２は４個のアミノ酸残基から構成されるフラグメン
   トである特許請求の範囲第８項のペプチド （１１）Ｘ＾２は ｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕおよび ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｙ−ｌｅｕ． から選ばれる特許請求の範囲第１０項のペプチド（１２
   ）Ｘ＾２は２個のアミノ酸残基から構成されるフラグメ
   ントである特許請求の範囲第８項のペプチド （１３）Ｘ＾２はｇｌｙ−ｌｅｕである特許請求の範囲
   第１２項のペプチド （１４）ｎは１である特許請求の範囲第１項のペプチド （１５）Ｘ＾３は１個から６個のアミノ酸残基から構成
   されるペプチドフラグメントであり、ｐは０または１で
   ある特許請求の範囲第１項のペプチド（１６）Ｘ＾３は
   ４個または５個のアミノ酸残基から構成されるフラグメ
   ントである特許請求の範囲第１５項のペプチド （１７）Ｘ＾３はａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔ
   ｙｒである特許請求の範囲第１６項のペプチド（１８）
   Ｘ＾３はａｓｎ、ｓｅｒ、ｐｈｅおよびａｒｇから選ば
   れる４個のアミノ酸残基から構成されるフラグメントで
   ある特許請求の範囲第１６項のペプチド （１９）Ｘ＾３はａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇであ
   る特許請求の範囲第１８項のペプチド （２０）ｒは０である特許請求の範囲第１項のペプチド （２１）Ｘ＾１は ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれ、Ｘ＾２は ｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｎ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｓｅｒ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｓｅｒ、 ｇｌｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａおよび ｇｌｙ−ｌｅｕ から選ばれ、Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ、 ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、 ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、 ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ｌｙｓ−ｓ
   ｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈ
   ｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｒｙおよびｌｙｓ−
   ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒか
   ら選ばれ、ｍは０または１、ｎは１、ｐは０または１で
   ある特許請求の範囲第１項のペプチド（２２）Ｘ＾１は ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれ、Ｘ＾２は ｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｓｅｒ、 ｇｌｎ−ｌｅｕおよび ｇｌｙ−ａｌａ から選ばれ、Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、 ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、 ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ｌｙｓ−ｓ
   ｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈ
   ｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒおよびｌｙｓ−
   ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒか
   ら選ばれる特許請求の範囲第２１項のペプチド （２３）Ｘ＾１は ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれ、Ｘ＾２はｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ
   であり、 Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ｌｙｓ−ｓ
   ｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈ
   ｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒおよびｌｙｓ−
   ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒか
   ら選ばれる特許請求の範囲第２２項のペプチド （２４）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第２３項のペプチド （２５）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第２３項のペプチド （２６）Ｘ＾１は ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれ、Ｘ＾２は ｇｌｙ−ｓｅｒ、 ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｎ−ｌｅｕおよび ｇｌｙ−ａｌａ から選ばれ、Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、 ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、 ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ｌｙｓ−ｓ
   ｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈ
   ｅ−ａｒｇ＾１＾２＾５ I −ｔｙｒおよびｌｙｓ−ｓ
   ｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒから
   選ばれる特許請求の範囲第２２項のペプチド（２７）Ｘ
   ＾３が ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇおよび ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ から選ばれる場合、Ｂ末端は一級アミド基または低級ア
   ルキル二級もしくは三級アミド基である特許請求の範囲
   第２６項のペプチド （２８）Ｘ＾１が ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれ、Ｘ＾２がｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ
   であり、Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇおよび ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ から選ばれる特許請求の範囲第２２項のペプチド（２９
   ）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第２８項のペプチド（３０）
   Ｘ＾１は ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれる、Ｘ＾２は ｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｎ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｓｅｒ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ、 ｇｌｙ−ｓｅｒおよび ｇｌｎ−ｌｅｕ から選ばれ、Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇおよび ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ から選ばれ、ｍ、ｎおよびｐはそれぞれ１である特許請
   求の範囲第２１項のペプチド （３１）Ｘ＾１はＳｅｒ−Ｓｅｒであり、Ｘ＾２はｇｌ
   ｙ−ａｌａ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｎ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｓｅｒおよび ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｌｅｕ から選ばれ、Ｘ＾３はａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ
   である特許請求の範囲第３０項のペプチド（３２）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第３１項のペプチド（３３）
   式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第３１項のペプチド（３４）
   式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第３１項のペプチド（３５）
   式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第３１項のペプチド（３６）
   式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第３１項のペプチド（３７）
   Ｘ＾１は ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれ、Ｘ＾２は ｇｌｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｓｅｒ、 ｇｌｙ−ａｌａおよび ｇｌｙ−ｌｅｕ から選ばれ、Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇおよび ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ から選ばれ、ｍ、ｎおよびｐはそれぞれ１である特許請
   求の範囲第３０項のペプチド （３８）Ｘ＾１はＳｅｒ−Ｓｅｒであり、Ｘ＾２はｇｌ
   ｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｓｅｒ、 ｇｌｎ−ａｌａおよび ｇｌｙ−ｌｅｕ （３９）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第３８項のペプチド（４０）
   式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第３８項のペプチド（４１）
   式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第３８項のペプチド（４２）
   式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第３８項のペプチド（４３）
   式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘ＾１はａｒｇ、ｓｅｒ、ｐｒｏおよびｌｅｕ
   から選ばれる１個から約８個までのアミノ酸残基から構
   成されるフラグメントであり、ｍは０から４までの整数
   であり、 Ｘ＾２はｇｌｙ、ｌｅｕ、ｓｅｒ、ａｌａおよびｇｌｎ
   から選ばれる１個から約６個までのアミノ酸残基から構
   成されるフラグメントであり、ｎは０から３までの整数
   であり、 Ｘ＾３はｌｙｓ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｐｈｅ、ａｒｇ、ｔ
   ｙｒおよび＾１＾２＾５ I −ｔｙｒから選ばれる１個
   から約６個までのアミノ酸残基から構成されるフラグメ
   ントであり、ｐは０から４までの整数であり、 Ａはアミノ末端またはその医薬的に許容される塩を表し
   、Ｂはカルボキシル末端またはその医薬的に許容される
   エステル、アミドもしくは塩を表す。 ただし、このペプチド中の全アミノ酸残基の合計は約１
   ３から約２５までの範囲の整数である）で示されるペプ
   チドの治療有効量を含有する高血圧治療医薬組成物 （４４）Ｘ＾１は１個から８個までのアミノ酸残基から
   構成されるフラグメントであり、ｍは０または１である
   特許請求の範囲第４３項の組成物 （４５）Ｘ＾１はｓｅｒ、ａｒｇおよびｌｅｕから選ば
   れる４個または６個のアミノ酸残基から構成されるペプ
   チドフラグメントである特許請求の範囲第４４項の組成
   物 （４６）Ｘ＾１はｓｅｒおよびａｒｇから選ばれる２個
   から４個までのアミノ酸残基から構成されるフラグメン
   トである特許請求の範囲第４５項の組成物 （４７）Ｘ＾１は１個または２個のセリン残基から構成
   されるフラグメントである特許請求の範囲第４６項の組
   成物 （４８）ｍは０である特許請求の範囲第４３項の組成物 （４９）Ｘ＾２は２個から６個までのアミノ酸残基から
   構成されるフラグメントであり、ｎは１である特許請求
   の範囲第４３項の組成物 （５０）Ｘ＾２は２個から４個までのアミノ酸残基から
   構成されるペプチドフラグメントである特許請求の範囲
   第４９項の組成物 （５１）Ｘ＾２は ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｎ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｓｅｒ、 ｇｌｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｓｅｒおよび ｇｌｙａｌａ． から選ばれる特許請求の範囲第５０項の組成物（５２）
   Ｘ＾２は４個のアミノ酸残基から構成されるフラグメン
   トである特許請求の範囲第４９項の組成物 （５３）Ｘ＾２は ｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕおよび ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｙ−ｌｅｕ から選ばれる特許請求の範囲第５２項の組成物（５４）
   Ｘ＾２は２個のアミノ酸残基から構成されるフラグメン
   トである特許請求の範囲第４９項の組成物 （５５）Ｘ＾２はｇｌｙ−ｌｅｕである特許請求の範囲
   第５４項の組成物 （５６）ｎは１である特許請求の範囲第４３項の組成物 （５７）Ｘ＾３は１個から６個のアミノ酸残基から構成
   されるペプチドフラグメントであり、ｐは０または１で
   ある特許請求の範囲第４３項の組成物（５８）Ｘ＾３は
   ４個または５個のアミノ酸残基から構成されるフラグメ
   ントである特許請求の範囲第５７項の組成物（５９）Ｘ
   ＾３はａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒである
   特許請求の範囲第５８項の組成物（６０）Ｘ＾３はａｓ
   ｎ、ｓｅｒ、ｐｈｅおよびａｒｇから選ばれる４個のア
   ミノ酸残基から構成されるフラグメントである特許請求
   の範囲第５８項の組成物 （６１）Ｘ＾３はａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇであ
   る特許請求の範囲第６０項の組成物 （６２）ｒは０である特許請求の範囲第４３項の組成物 （６３）Ｘ＾１は ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれ、Ｘ＾２は ｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｎ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｓｅｒ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｓｅｒ、 ｇｌｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａおよび ｇｌｙ−ｌｅｕ から選ばれ、Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ、 ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、 ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、 ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ｌｙｓ−ｓ
   ｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈ
   ｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒおよびｌｙｓ−
   ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒか
   ら選ばれ、ｍは０または１、ｎは１、ｐは０または１で
   ある特許請求の範囲第４３項の組成物（６４）Ｘ＾１は ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれ、Ｘ＾２は ｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｓｅｒ、 ｇｌｎ−ｌｅｕおよび ｇｌｙ−ａｌａ から選ばれ、Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、 ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、 ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ｌｙｓ−ｓ
   ｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈ
   ｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒおよびｌｙｓ−
   ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒか
   ら選ばれる特許請求の範囲第６３項の組成物（６５）Ｘ
   ＾１は ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれ、Ｘ＾２はｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ
   であり Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ｌｙｓ−ｓ
   ｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈ
   ｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒおよびｌｙｓ−
   ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒか
   ら選ばれる特許請求の範囲第６４項の組成物（６６）ペ
   プチドは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第６５項の組成物（６７）ペ
   プチドは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第６５項の組成物（６８）Ｘ
   ＾１は ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれ、Ｘ＾２は ｇｌｙ−ｓｅｒ、 ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｎ−ｌｅｕおよび ｇｌｙ−ａｌａ から選ばれ、Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、 ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、 ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ｌｙｓ−ｓ
   ｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒ、ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈ
   ｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒおよびｌｙｓ−
   ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−＾１＾２＾５ I −ｔｙｒか
   ら選ばれる特許請求の範囲第６４項の組成物（６９）Ｘ
   ＾３が ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇおよび ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ から選ばれる場合、Ｂ末端は一級アミド基または低級ア
   ルキル二級もしくは三級アミド基である特許請求の範囲
   第６８項の組成物 （７０）Ｘ＾１が ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれ、Ｘ＾２がｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ
   であり、 Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇおよび ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ から選ばれる特許請求の範囲第６４項の方法（７１）ペ
   プチドは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第７０項の組成物（７２）Ｘ
   ＾１は ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれ、Ｘ＾２は ｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｎ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｓｅｒ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ、 ａｌｙ−ｓｅｒおよび ｇｌｎ−ｌｅｕ から選ばれ、Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇおよび ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ から選ばれ、ｍ、ｎおよびｐはそれぞれ１である特許請
   求の範囲第６３項の組成物 （７３）Ｘ＾１はＳｅｒ−Ｓｅｒであり、Ｘ＾２はｇｌ
   ｙ−ａｌａ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｎ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｓｅｒおよび ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｌｅｕ から選ばれ、Ｘ＾３はａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ
   である特許請求の範囲第７２項の組成物（７４）ペプチ
   ドは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第７３項の組成物（７５）ペ
   プチドは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第７３項の組成物（７６）ペ
   プチドは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第７３項の組成物（７７）ペ
   プチドは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第７３項の組成物（７８）ペ
   プチドは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第７３項の組成物（７９）Ｘ
   ＾１は ａｒｇ−ａｒｇ、 ａｒｇ−ｓｅｒおよび ｓｅｒ−ｓｅｒ から選ばれ、Ｘ＾２は ｇｌｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｓｅｒ、 ｇｌｙ−ａｌａおよび ｇｌｙ−ｌｅｕ から選ばれ、Ｘ＾３は ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇおよび ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ から選ばれ、ｍ、ｎおよびｐはそれぞれ１である特許請
   求の範囲第７２項の組成物 （８０）Ｘ＾１はＳｅｒ−Ｓｅｒであり、Ｘ＾２はｇｌ
   ｎ−ｌｅｕ、 ｇｌｙ−ｓｅｒ、 ｇｌｎ−ａｌａおよび ｇｌｙ−ｌｅｕ （８１）ペプチドは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第８０項の組成物（８２）ペ
   プチドは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第８０項の組成物（８３）ペ
   プチドは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第８０項の組成物（８４）ペ
   プチドは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第８０項の組成物（８５）式 ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、Ｘ＾１はａｒｇ、ｓｅｒ、ｐｒｏおよびｌｅｕ
   から選ばれる１個から約８個までのアミノ酸残基から構
   成されるペプチドフラグメントであり、ｍは０から４ま
   での整数であり、 Ｘ＾２はｇｌｙ、ｌｅｕ、ｓｅｒ、ａｌａおよびｇｌｎ
   から選ばれる１個から約６個までのアミノ酸残基から構
   成されるペプチドフラグメントであり、ｎは０から３ま
   での整数であり、 Ｘ＾３はｌｙｓ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｐｈｅ、ａｒｇおよ
   びｔｙｒから選ばれる１個から約６個までのアミノ酸残
   基から構成されるペプチドフラグメントであり、ｒは０
   から４までの整数であり、Ａはアミノ末端またはその医
   薬的に許容される塩を表し、Ｂはカルボキシル末端また
   はその医薬的に許容されるエステル、アミドもしくは塩
   を表し、 ■はシステイン残基のスルフヒドリル官能基を保護する
   ために用いられた保護基であつて、両システイン残基は
   同時に保護されてもまた保護されていなくてもよい。 ただし、このペプチド中の全アミノ酸残基の合計は約１
   ３から約２５までの範囲の整数である）で示されるペプ
   チド （８６）Ｘ＾１はａｒｇ−ａｒｇ、ａｒｇ−ｓｅｒおよ
   びｓｅｒ−ｓｅｒから選ばれ、Ｘ＾２はｇｌｙ−ｓｅｒ
   −ｇｌｙ−ｌｅｕ、ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、
   ｇｌｎ−ｓｅｒ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、ｇｌｙ−ａｌａ−ｇ
   ｌｎ−ｓｅｒ、ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｎ−ｌｅｕ、ｇｌ
   ｙ−ｓｅｒ、ｇｌｙ−ｌｅｕ、ｇｌｎ−ｌｅｕおよびｇ
   ｌｙ−ａｌａから選ばれ、Ｘ＾３はａｓｎ−ｓｅｒ−ｐ
   ｈｅ、ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ、ａｓｎ−ｓｅｒ−ｐｈ
   ｅ−ａｒｇ、ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ、ａｓｎ
   −ｓｅｒ−ｐｈｅ−ａｒｙ−ｔｙｒおよびｌｙｓ−ｓｅ
   ｒ−ｐｈｅ−ａｒｇ−ｔｙｒから選ばれ、ｍは０または
   １であり、ｎは１であり、ｒは０または１であり、■は
   アセトアミドメチル基である特許請求の範囲第８５項の
   ペプチド