JPH01175944A - 虚血性疾患予防及び治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は虚血性疾患予防及び治療剤に関する。

〔従来の技術〕

虚血性疾患は、出血あるいは血液性状の異常によって生
じる病態である。これらの疾患には心筋梗塞、脳血栓症
、狭心症、及び癌、細菌真菌の全身感染、低酸素血症等
によって障害を受けた組織から放出されたトロンボプラ
スチンの活性化による外因性および内因性凝固機転の凡
退が原因である播種性血管向凝固症候群（ＤＩＣ）等が
ある。従来、虚血性疾患の治療としては抗血症剤、ヘパ
リンが使用さているが他には臨床的に有効に使用される
ものはな（、未だ十分ではない。

〔発明が解決すべき問題点〕

近年種々の活性酸素の発生が虚血性疾患発症に関与する
ことが報告されている（代謝、■。

３７９〜３８７．１９８５　）　、この活性酸素の発生
を阻害して種々の臓器を保護する新しい予防及び治療剤
の開発が望まれる０本発明は、虚血性疾患発症に予防効
果を有し、しかも虚血性疾患予防及び治療剤の提供を目
的とする。

〔問題点を解決する為の手段〕

本発明者らは上記目的を達成するために鋭意研究の結果
電気的に中性または陰性の膜を有するＳＯＤ含有リポソ
ームが虚血性疾患に予防及び治療効果を示すことを見い
出し本発明に到達したものである。即ち本発明は電気的
に中性または陰性の膜を有するリポソームに超酸素不均
化酵素（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ、
ＳＯＤ）を保持したＳＯＤ含有リポソームを有効成分と
する虚血性疾患予防及び治療剤に関するものである。

本発明に使用されるＳＯＤは臨床的に用いることができ
るものであれば含有金属種（Ｃｕ−Ｚｎ型。

Ｆｅ型及びＭｎ型）がいずれであってもよい。またヒト
、牛、豚、馬、ラット、マウス等の哺乳類の赤血球、血
清、血漿及び、肺、肝、腎、胎盤などの５ＯＩｌｌ含有
臓器抽出物であれば何れにも限定されるものではない、
さらにＣｕ−Ｚｎ型ではホウレン草などの植物由来、Ｍ
ｎ型では大腸菌、セ゛　ラチア属などの細菌から得られ
るものも利用できる。近年遺伝子操作技術が進歩し、こ
の手法を用いて生産純化された上記ＳＯＤも本発明の予
防及び治療剤として用いることができる。上記ＳＯＤＯ
内ヒトへの予防及び治療剤としては好ましくはヒト由来
のＣｕ−Ｚｎ型（細胞内及び細胞外に分泌される高分子
型）及びヒト由来のＭｎ型が挙げられる。

本発明に使用されるリポソームは公知の方法（例えば、
逆相蒸発法、ポルチクスイング法、超音波法等）に基づ
き調製される。

電気的に中性の膜を有するリポソームを調製するための
脂質としては例えばホスファチジルコリン、ホスファチ
ジルエタノールアミン等の中性のグリセロリン脂質類、
スフィンゴミエリン、セレブロシド等のスフィンゴ脂質
類、また卵黄レシチン、大豆レシチン等の天然レシチン
類があげられる。なおこれらの成分とともにジセチルホ
スフエート等の高級脂肪酸のリン酸エステルを併用する
と電気的に陰性の膜を有するリポソームが得られる。ま
た電気的に陰性の膜を有するリポソームを調製するため
の脂質としては例えばホスファチジルセリン、ホスファ
チジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホ
スファチジン酸、カルシオリピン等の陰性のグリセロリ
ン脂質類があげられる。なおこれらの脂質とともに上記
の電気的に中性の膜を作る成分及び／又は上記のリン酸
エステルを併用しても電気的に陰性の膜を有するリポソ
ームが得られる。また膜の強化のためコレステロール類
等、酸化防止のためα−トコフェロール等が使用できる
。

本発明で使用するＳＯＤ含有リポソームを調製する際の
ＳＯＤの含量は製剤形態等により広範囲に変えることが
可能であり脂質の量はＳＯ［ｌ　１重量部に対し０．０
５〜１００重量部、好ましくは０．５〜５０重量部であ
る。またリン脂質に対し水性媒体を３〜１０００重量部
、好ましくは２０〜２００重量部使用することが好まし
い。水性媒体としては水、緩衝液、食塩液、糖類水溶液
が使用可能であるが水溶液のｐＨを５〜１０とすること
が好ましい。

また本発明で使用するＳＯＤ含有リポソームの粒径は特
に制限はないが好ましくは１０Ｂｍ以下、さらに好まし
くはｌｕａ以下程度がよい。粒径の均一化にはゲル濾過
、遠心分離、逐次濾過（ポリカーボネイトメンブレン・
フィルター）法等を用いることが可能である。

本発明の製剤は一般的には水性媒体中に分散した形態を
とるが保存安定性を考慮して凍結乾燥、噴霧乾燥等の手
段により固形物の形態としてもよい。また固形物とする
ための賦形剤としては通常医薬用に使用される糖類、ア
ミノ酸類、高分子類等が使用できる。

投与量は投与対象の症状、体重、年齢等により異なり臨
床的には各担当医により決定されるものであるがＳＯＤ
量に換算して成人１人１日当たり２５〜２５００■程度
である。連投を必要とする場合には１日当たりの投与量
を抑えることが望ましい。投与方法は経口、非経口の種
々の投与形態のいずれにしても投与できるが特に静脈内
持続投与が望ましい。

〔作用〕

次に、本発明の虚血性疾患予防及び治療効果・試料 （１）本発明品、電気的に中性の膜を有する５ｏｌ）含
有リポソーム：実施例１に記載の方法で調製した。

（２）本発明品、電気的に陰性の膜を有するＳＯＤ含有
リポソーム：実施例２に記載の方法で調製した。

・実験方法 虚血性疾患の一例であるＤＩＣのモデルを用いた。即ち
ネンブタール麻酔下、９週齢のウィスター系雌ラット（
１６０〜１８０ｇ）の前頚骨静脈内に、大腸菌由来リポ
多Ｆ’類（ＬＰＳ、　Ｅ、ｃｏｌｉ　０５５：Ｂ５）１
００ｍｇ／ｋｇ１５　ｍｌを４時間かけて持続投与した
。

ＳＯＤ含有リポソームはＬＰＳ投与の３０分前から右（
ｕ１１前頚ｔ　静Ｈ内ニ６６．６ｍｇ／ｋｇ／２ｍ１（
７）　ｆａ　度テ４．５時間かけて持続投与した。−群
は４〜６匹とした。ＳＯＤ含有リポソームのＤＩＣ予防
及び治療効果の有無を血小板（ＰＬＴ）　、フィブリノ
ーゲン量（Ｆｂｇ、）、プロトロンビン時間（ＰＴ）の
測定を基準値にしてＳＯＤ含有リポソームを投与しない
群と比較し判定した。

採血は実験開始時、及び４時間後にそれぞれ鎖骨上静脈
より行った。血液９容に対し１容の３．８χクエン酸ナ
トリウムを加えて試料とした。

ＰＬＴは、クエン酸加血を２００Ｏｒｐｍ　、　２０分
間の遠心操作で血漿を調製し、Ｆｂｇ、　　はフィブリ
ノーゲンテストキット（ディト社製）を、ＰＴはプロト
ロンビンキット（オーツ・ダイアグノスティック社製）
を用いて測定した。

・結果 結果を表１に示す。

表１の結果から明らかなように試料（１）、（２）はＤ
ＩＣに対して予防及び治療効果を認めた。

表１．０ＩＣに対する試料（１）　（２）のＰＴＬ、Ｆ
ｂｇ、、ＰＴに及ぼす影響 ＬＰＳ　　　　　　　１４．４　０．０　１８７．７　
　対照ＬＰＳ十試料（１）　　３２．６　３７．３　１
０８．４　　本発明品本数値はＬＰＳ投与直前（０時間
）でのＰＴＬ、　Ｆｂｇ、　。

ＰＴをそれぞれ１００とした時の４時間後の値＊　ＬＰ
Ｓ持続投与によりＰＴＬ、　Ｆｂｇ、は減少しＰＴは延
長した。

＊試料（１）　（２）によりＰＴＬ、　Ｆｂｇ、の減少
、ＰＴの延長は抑制された。

〔発明の効果〕

以上の記載から本発明は掻めて優れたＤＩＣ予防及び治
療効果を示すことがあきらかとなり虚血性疾患の予防及
び治療剤として期待される。

以下、実施例により本発明虚血性疾患予防及び治療剤の
製造法について具体的（こ述べる。

実施例１ ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）５８
．７ｍｇ　、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯ
ＰＣ）　１５．７ｍｇ　、コレステロール（Ｃｈｏｌ）
　９．６ｍｇをジエチルエーテル？、５ｎ＋１に溶解し
た。これにＳＯＤのリン酸緩衝生理食塩液（ｐｈｏｓｐ
ｈａｔｅ−ｂｕｆｆ−ｅｒｅｄ　５ａｌｉｎｅ、Ｐｕ５
）溶液（５０ｓ＋ｇ／ｍｌ）　２．５■ｌを加え種型超
音波分散器で分散しエバポレーターでジエチルエーテル
を留去しゲルを形成させた。このゲルにＰＢＳ　５■ｌ
　を加えエバポレーターで回転させながら分散させてリ
ポソームを得た。このリポソームを遠心分離により洗浄
した。次いで逐次濾過法により孔径０．２μｍのメンブ
レンを通して除菌した。これを無菌のＰＢＳで希釈しＳ
ＯＤ濃度を４．８Ｂ／ｍｌ　としアンプルに充填して製
剤とした。ＳＯＤの保持効率は６５％であった。

実施例２ ＤＰＰＣ５８，７ｍｇ　、　ＤＯＰＣ１５，７ｍｇ　、
　Ｃｈｏｌ　９．６ｍｇ。

ジセチルホスフエー）　（ＤＣＰ）５．５＋ａｇをジエ
チルエーテル７．５■ｌに溶解した。以下、実施例１と
同様に製剤化した。

ｓｏｏ　濃度４．８ｍｇ／ｍｌ 保持効率６４χ 実施例３ 精製卵黄レシチン（ＥＰＣ）　７８．０ｍｇ、　Ｃｈｏ
ｌ　９．６ｍｇをジエチルエーテル７．５ｎ＋１に溶解
した。以下、実施例１と同様にアンプルに充填した後、
凍結乾燥を行い固形製剤とした。

実施例４ ＥＰＣ７８，０ｍｇ、　Ｃｈｏｌ　９．６Ｂ、　ＤＣＰ
　５．５Ｂをジエチルエーテル７．５■ｌに溶解した。

以下、実施例４と同様に固形製剤化した。

実施例５ ＤＰＰＣ５８，７ａ＋ｇ　５ＤＯＰＣ１５，７ｍｇ　、
　Ｃｈｏｌ　９．６ｍｇをクロロホルム１０ｍ１　に溶
解した後クロロホルムをエバポレーター、デシケータ−
減圧下で留去し１膜とした。これにＳＯＤ　のＰＢＳ溶
液（５０ｍｇ／ｍｌ）　５■ｌを加え水浴（４１〜５０
℃）で加熱とポルチクスイングを数回繰り返して分散さ
せリポソームを得た。以下、このリポソームを実施例１
と同様に製剤化した。

ＳＯＯ濃度４．８ｍｇ／ｍｌ 保持効率６１χ

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 電気的に中性または陰性の膜を有するリポソームに超酸
   素不均化酵素（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａ−
   ｓｅ、ＳＯＤ）を保持したＳＯＤ含有リポソームを有効
   成分とする虚血性疾患予防及び治療剤