JPH01157986A - エチル化アベルメクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は駆虫薬に関し、さらに詳しくはオレアンドロー
スニ糖基の３′位置と３′位置の一方または両方がメト
キシ基ではなくエトキシ基によって置換されている天然
または非天然のアベルメクチンと、それらの製造法に関
する。

米国特許第４，３１０，５１９号と第４．４２９，０４
２号はアベルメクチン、強力な駆虫活性を有する間第３
１２６７号、第３１２７１号及び第３１２７２号の好気
性発酵によるそれらの産生について述べている。上記の
最後の２菌株はＳ、アベルミチリスＡＴＣＣ３１２６７
の紫外線照射によって得られた培養物のそれぞれ凍結バ
イアルと凍結乾燥チューブを表す。

１９８６年７月１６日出願の米国特許出願第８８６８６
７号の対応特許である、１９８７年３月１８日に公開さ
れたヨーロッパ特許第２１４．７３１号は天然のすなわ
ち公知のアベルメクチンに類似するが、２５位置に新規
な置換基を有する多（の化合物（ここでは非天然アベル
メクチンと呼ぶ）、及びある特定カルボン酸またはその
誘導体感しくは前駆体の存在下でのアベルメクチン産生
微生物の発酵によるそれらの製造法を開示している。前
記の新規なＣ２５置換アペルメクペルミチリスＡＴＣＣ
３１２６７，３１２７１，３１２７２及びＮＣｌＢ１２
１２１である。ヨーロッパ特許第２１４．７３１号に述
べられている後から誘導される。半限定培地内で培養す
る場合には新規なＣ２５置換アベルメクチンの収量が改
善される。ＡＴＣＣ３１２６７，３１２７１，３１２７
２及びＮＣｌＢ１２１２１の各々は新規なＣ２５置換誘
導体の他に、２５置換基がイソプロピルまたは（５）　
−８７１６−ブチル（１−メチルプロピル）である公知
のすなわち天然のアベルメクチンも種々な量で産生ずる
。

１９８７年１月２３日出願の米国特許出願第６５１２号
はそれぞれが分枝鎖２−オキソ酸デヒドロゲナーゼ活性
を有さない、Ｓ、アベルミチリス変異株ＡＴＣＣ５３５
６７と５３５６８及びこれらの非天然アベルメクチン製
造への利用を開示している。また、三糖成分にメチル基
の無いアベルメクチンをも含めたＢ、アベルメクチンの
産生量を高めるために前記菌の発酵にシネフンギン、Ｓ
−アデノシル−エチオニン及びＳ−アデノシルホモシス
ティンのようなＯ−メチルトランスフェラーゼ阻害剤を
用いることも開示されている。

アベルメクチンの炭素骨格（下記の式（Ｉ）に示す）は
アセテート及びプロピオネートから誘導され、天然アベ
ルメクチンのＣ“２５置換基はＬ−イソロイシン（Ｒ＝
　（，５）　−ａｇｅ−ブチル）またはＬ−バリン（Ｒ
＝イソプロピル）から誘導される〔フィッシャ（Ｆｉｓ
ｈｅｒ）とムロジク（Ｍｒｏｇｉ＋ｋ）の［マクロライ
ド抗生物質（Ｍａｃｒｏｌｔｄａ　Ａ％ｔｉｂｉｏｔｉ
ｃｓ　）Ｊアカデミツク・プレス（Ａｃａｄｇｔｎｉｃ
　Ｐｒｇｓｓ　）（１９８４）第１４章参照〕。

「公知の」または「天然の」アベルメクチンと３１２７
１及びＡＴＣＣ３１２７２が産生した、２５位置換基が
イソプロピルまたは（Ｓ）　−ｓｅｔ　−ブチル（１−
メチルプロピル）であるようなアベルメクチンを意味す
る。２５位置換基がイソプロピルまたは５ｅｃ−ブチル
（Ｓ−形）以外であるアベルメクチンをここでは新規な
または非天然のアベルメクチンと呼ぶ。

上記米国特許に挙げられたＳ、アベルミチリスの菌株は
Ｃ−７６とそこで一般的に呼ばれているクラスの物質を
産生する。このクラスにはＣ−０７６Ａ１６、Ａｌｂ、
Ａ２ｃｂ、Ａ２ｂ、Ｅｌａ、Ｂｌｂ。

Ｂ　２　ａ、Ｂ２ｂと表される８種類の密接に関係した
化合物が含まれる。化合物のｒ、ＪシリーズはＣ２５置
換基が（Ｓ）ｓａＣ−ブチルである天然アベルメクチン
を表し、「ｂ」シリーズはＣ２５置換基がイソプロピル
である化合物を表す。「Ａ」と「Ｂ」の名称はＣ５を換
基がそれぞれメトキシまたはヒドロキシであるアベルメ
クチンを表す。最後に、数字「１」は２２−２３位置に
２重結合が存在するアベルメクチンを意味し、数字「２
」は２２位置に水素、２３位置にヒドロキシを有するア
ベルメクチンを意味する。

本出願では、非天然アベルメクチンの２５位置換基に関
してこのような識別名称な用いない。識別名称Ａ１、Ａ
２、Ｂ１、Ｂ２は上記天然アベルメクチンの構造特徴に
対応する構造特徴を有する非天然アベルメクチンを表す
ために用いている。

米国特許第４．３７８．３５３号はＣ−０７６関連化合
物と、紫外線照射によって得られた、Ｓ、アベルミチリ
スＡＴＣＣ３１２７２の突然変異株であるＭＡ−５２１
８の培養によるそれらの製造法とを述べている。この突
然変異体はＡＴＣＣ３１７８０と呼ばれる。前記突然変
異体によって産生されるＣ−０７６関連化合物はＣ−０
７６フラン環を有さない。さらに、報告された化合物の
中のある化合物では、オレアンドロース糖成分の一方ま
たは両方が開裂しており、他の化合物では５位置の基が
ケト基に酸化されている。

０−メチル基を有さないアベルメクチンを産生ｊル５．
アベルミチリスの３種類のＯ−メチルトランスフェラー
ゼ突然変異体は、ルｌ：’−（Ｒ％６１）等によって、
１９８５年８月２６〜３０日にハンガリーのデプレツセ
ンで開催された「アクチノマイセテスの生物学（Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ　ｏｆ　Ａｅｔｉｎｏｍｙｅｇ　−ｔ−ａ　）
　Ｊに関する第６回国際シンポジウムで、及びジュール
マン（Ｓａｈ％１ｍａｓ）等によってアンチミー７４７
頁（１９８７）に述べられている。最初の種類の突然変
異体はマクロ環式ラクトン環の０５ヒドロキシルをメチ
ル化できないために、主としてＢアベルメクチンを産生
ずる。第２の種類の突然変異体は３’−０、３’−０−
ビスーデメチルアベルメクチ／（両オレアンドロース単
糖残基の３位置にＯ−メチル置換基を有さないアベルメ
クチン）を産生ずる。これはデメチルアベルメクチンと
呼ばれる。第３の種類の突然変異体はアベルメクチンの
如何なる位置もメチル化することができない。

ジュールマン等のフェト・７”　Ｇｌ　り、　（Ｆｅｄ
、　Ｐｒ　−□ （＋６．）４４．９３１頁（１９８５）ｔｉ、Ｓ−アデ
ノシルメチオニンのメチル基のＣ５ヒドロキシ基への転
移を触媒する酵素のアベルメクチンＢ−０−メチルトラ
ンスフェラーゼを阻害する、シネフンギン、Ｓ−アデノ
シルエチオニン及びＳ−アデノシルホモシスティンのよ
うな物質の存在下でＳ、アベルミチリスを発酵させるこ
とによるＢ−アベルメクチンの産生量増加を開示して〜
・る。０−メチルトランスフェラーゼ活性を有さす、ア
ベルメクチンＢ要素の量ヲ増加させるストレプトマイセ
ス・アベルミチリスも開示されており、ジュールマン等
（１９８６）に述べられてＸ、）る。

実際にアベルメクチンアグリコーンＡ１ａとＡ２ａのみ
を産生する突然変異株であるＳ、アベルミチリスＡＱＬ
シー１は、ジュールマン等によってジエイ・アンチパイ
オド（Ｊ、Ａ％ｔｔ６ｓａｔ、）１４９４〜１４９８頁
（１９８５）に報告されている。アペルメクチンアグリ
コーンＢ成分の産生な増加させるシネフンギンの存在下
での５・アベルミチリスＡｇ１ｙ−１の発酵も報告され
ている。同様に、０−メチルトランスフェラーゼの阻害
剤としてのシネフンギンの存在下で発酵するアベルメク
チンの高度産生菌もアグリコーンのＣ５位置とオレアン
ドロースニ糖成分にＯ−メチル基を有さないアベルメク
チンを産生じた。

ジュールマン等はアンチミクロバイアルエイジエントス
　アンド　クモセラピー３１巻７４４−７４７頁（１９
８７）において、アベルメクチンの三糖基の３′位と３
′位のメチル化はシネフンギンによって阻害されるので
、まだ実証されてはいないが、三糖成分のメチル化には
Ｓ−アデノシルメチオニンが関係する確率が高いと述べ
ている。

上記のような天然アベルメクチンは８ａｉ類の密接に関
係する化合物〔式（ＩｌにおいてＲ−イソプロピルと（
Ｓ）　−ａｇｅ−ブチル〕の複雑な混合物として産生さ
れる。これらは実質的に予備成形体で回収されるが（米
国特許第４．４２−９．０４２号参照）、この方法はせ
いぜい実験室的である。

発酵によって産生されるアベルメクチンは天然も非天然
本同様に、全て三糖成分の３′位と３′位　゛にメトキ
シ基を有する。溶解性及び／または極性に影ｉ＃を与え
る、従って生理的及び生物学的性質に影響を与える置換
基を有するアベルメクチン、特に新規なアベルメクチン
の製造が望ましい目的である。さらに望ましい目的は生
成物の数と複雑さを最少にし、このようにすることによ
って特定アベルメクチンの純度を高めて分離方法を簡単
化することが可能であるように、前記アベルメクチンを
製造することである。

アベルメクチンＢＯ−メチルトランスフェラーゼの阻害
剤としてのＳＡＥの使用に関しては開示されているにも
拘らず、三糖基のエチル化剤としてのその価値は開示さ
れていす、ＳＡＥ存在下でのエチル化アベルメクチンの
形成は言及されていない。アベルメクチン・エチル化剤
としてのＳＡＥの使用は予定されていす、理解されてい
す、またエチル化アベルメクチンの製造は以前の研究者
によって知られていなかった。

Ｓ−アデノシルエチオニンの存在下での５．７ベルミチ
リス菌株の発酵によって駆虫性エチル化アベルメクチン
が産生されろことが今回発見された。これらの化合物は
式（Ｉ）： ｔ ＯＲ” 〔式中、２２〜２３位置の破線は任意の二重結合を表す
； ＲＩはヒドロキシであるが、二重結合が存在しない場合
にのみ存在する； Ｒｚ　　し二Ｉ−式　： （ＢｓとＲ４の各々はメチルまたはエチルであるが、Ｒ
３とＲ′の少な（とも一方はＣ，Ｈｓである）で示され
る三糖基である； ＨｓはＢまたはＣＭ、である； ＲはＣ１〜Ｃ８、アルキル（任意にＣ８〜Ｃ４アルキル
基によって置換）、アルケニル、アルキニル、アルコキ
シアルキル、アルキルチオアルキル、アルキル基がＣ１
〜Ｃ，アルキルであるＣ３〜Ｃ８シクロアルキルアルキ
ル基、Ｃ５〜Ｃ，シクロアルキルまたはＣ５〜Ｃ，シク
ロアルケニル基（これらのいずれもメチレンまたは０１
〜Ｃ４アルキル基によって任意に置換される）、または
飽和または完全もしくは不完全不飽和でありＣ１〜Ｃ４
アルキルまたはハロ原子によって任意に置換される、酸
素または硫黄含有三員〜六員複素環である、 但しＲがアルキルである場合１１ＣＲはイソプロピルま
たはＩＣ−ブチルではない〕 によって示される。

Ｒ３またはＲ４の一方がエチルであり、他方が水素であ
る式（Ｉ）の化合物本本発明に含まれる。前記化合物は
比較的少量で産生される及び／または他の発酵生成物に
よって遮へいされるために、下記の実施例の発酵生成物
中でまだ検出されていないが、ＳＡＥの存在下での発酵
中に存在すると考えられる。

エチル化アベルメクチンは、分枝鎖２−オキソ酸デヒド
ロゲナーゼ活性及び／または分枝鎖アミノ酸トランスア
ミナーゼ活性を有さ々いＳ・アベルミチリス菌株をＳ−
アデノシルエチオニン（ＳＡＥ）の存在下で発酵させる
ことによって産生される。

分枝鎖２−オキソ酸デヒドロゲナーゼ活性ン有さないＳ
・アベルミチリス菌株は、Ｓ・アベルミｆ　ＩＪ　、＜
のアベルメクチン産生菌株の突然変異によって、特にＳ
・アベルミチリスＡＴＣＣ３１２６７、ＡＴＣＣ３１２
７１、ＡＴＣＣ３１２’１２またはＮＣＩＢ　１２１２
１の突然変異によって得られる。

突然変異株はイソプロピルまたはａｇｅ−ブチル（Ｓ形
）基を有する脂肪酸またはその前駆体を突然変異株の発
酵培地に加える場合を除いて、天然アベルメクチンを合
成することができない。突然変異菌株は適当なプライマ
ー酸または発酵プロセス中でこれに転化可能な化合物を
含む栄養培地中の水性好気性条件下で発酵させた場合に
は、天然アベルメクチンと非天然アベルメクチンの両方
を産生ずることができる。

分枝鎖２−オキソ酸デヒドロゲナーゼ活性を有さないこ
とヲ特徴とする突然変異株は１４（：Ｑ、分析に基づい
て突然変異誘発コロニーから選択する。

この方法では、［”Ｃ−１）−２−オキソインカプロン
酸または（１４０−１）　−２−オキソ−３−メチル−
吉草酸または（１４Ｃ−１）　−２−オキソ−３−メチ
ル酪酸の基質から透過性コロニーによって１４Ｃ□、発
生の無いことが分枝鎖２−オキソ酸デヒドロゲナーゼ活
性の不存在を示唆する。

ここで用いる「エチル化アベルメクチン」または「エチ
ル化アベルメクチン類」なる用語は、２５位置置換基が
ここに述べるＳ・アベルミチリス突然変異体によって同
位置において同化され得る基であり、三糖基Ｒ２におい
てＲ３またはＲ４の少なくとも一方がエチルであるよう
な、上記式ＴＩＩで示される化合物を意味する。

ここに述べる突然変異体はここに開示し例示する方法に
よって非天然アベルメクチンを産生ずるために非常に貴
重である。これらの突然変異体は好ましいエチル化アベ
ルメクチン、すなわちＣ２５置換基がＣ０〜Ｃ４アルキ
ル基によって任意に置換しりＣ４−０６シクロアルキル
またはシクロアルケニル、１−メチルチオエチル、また
は酸素もしくは硫黄含有五員本しくは六員複素環基、特
に３−チエニルまたは３−フリルであるような化合物を
産生することで、特に貴重である。

本発明の化合物は窒素、炭素、無機塩及び式ＲＣＯＯＥ
で示されるプライマー化合物または発酵中に前記化合物
（すなわち前駆体）に転化可能な化合物の同化可能なン
ースを含む水性栄養培地中でのＳ・アベルミチリス好ま
しくは分枝鎖２−オキン酸デヒドロゲナーゼ活性を有さ
ないＳ・アベルミチリスの菌株による好気性発酵によっ
て産生される。酸またはこれに転化可能な化合物は接種
の時点または発酵中のある時点で発酵に加える。

これは−度に全てを加えるまたは発酵中に間隔をおいて
少量ずつ滴加することができる。Ｓ−アデノシル−エチ
オニンも接種時にまたは発酵中のある時点に、１度に全
てまたは発酵中に間隔をおいてもしくは連続的に少量ず
つ加えることができる。

アベルメクチン生成物の産生は発酵からサンプルを取出
し、有機溶媒で抽出し、クロマトグラフィーによって、
例えば高圧液体クロマトグラフィーを用いて生成物の出
現を追跡することによってモニターすることができる。

生成物の収量が最大になるまで、一般には４〜１５日間
インキュベーションを続ける。

プライマー化合物（カルボン酸またはこれに転化可能な
化合物）の各泳加の好ましいレベルは０．０５〜３．０
ｔ／ｌである。プライマー化合物は連続的に、間欠的に
または一度に全てを発酵に加えることができる。酸（Ｒ
ＣＯＯＨ）はこのようなものとして、またはナトリウム
塩、リチウムもしくはアンモニウム塩のような塩として
、または上記で定義したような、酸に転化可能な化合物
として加える。酸は固体である場合には、例えば水また
は（（Ｉ’Ｓ〜Ｃ４）アルコールのような、適当な溶媒
に溶解するのが好ましい。ＳＡＥは０．０１〜０．１０
ｙ７ｔの範囲内のレベルで、好ましくは０．０３〜０．
０６？／ｌのレベルで用いられる。

発酵に用いる培地は、特に０２５置換基がイソプロピル
または（Ｓ）　−５ａｃ−ブチルである場合には、炭素
、窒素及び微量元素の同化可能なソースを含む通常の培
地である。Ｃ２５Ｉｔ換基が非天然基である場合には、
すなわちインプロピルまたは（Ｓ）−ロー−ブチルでな
い場合には、発酵培地は特定成分の存在しない培地また
はＲ基がインプロピルまた“は（Ｓ）−ロー−ブチルで
あるプライマー化合物を最少量のみを含む培地である。

好ましくは２４〜３３℃の範囲内の温度において数日間
発酵させた後、発酵ブイヨンを遠心処理または濾過し、
菌糸体ケーキを好ましくはアセトンかまたはメタノール
で抽出する。溶媒抽出物を濃縮し、生成物を水と混和可
能な有機溶媒（例えば塩化メチレン、酢酸エチル、クロ
ロホルム、ブタノールまたはメチルイソブチルケトン）
中に抽出する。溶媒抽出物を濃縮し、粗生成物を必ｇに
応じてクロマトグラフィーによって、例えば調製用逆相
クロマトグラフィー、高圧液体クロマトグラフィーによ
ってさらに精製する。

エチル化アベルメクチン（式（Ｉ）の化合物）の生合成
に本発明のＳ・アベルミチリスが利用することのできる
化合物は式（Ｕ−Ａ） ＲＣＯＯＨ（ｕ−，４） で示される化合物であジ、発酵プロセス中に（Ｉｆ−４
）に転化可能な化合物を含む。前記化合物はここでは「
プライマー化合物」と呼ぶ。式（ｎ−、（）において、
Ｒはα分枝鎖基であり、−Ｃ００Ｍが付着した炭素原、
子に水素以外の少なくとも２個の他の原子または基が付
着する。この定義は当然、飽和または不飽和の非環式及
び環式基を含み、非環式鎖または環式環の要素として硫
黄または酸素のへテロ原子を任意に有するこのような基
も含む。

さらに詳しく説８Ａｊると、Ｃ２５置換基になるＲはα
分枝Ｃ１−〇、アルキル、アルケニル、アルキニル、ア
ルコキシアルキルまたはアルキルチオアルキル基：アル
キル基がα分枝Ｃ，−Ｃ，アルキル基であるＣ、−Ｃ，
シクロアルキルアルキル基；　ｃｓ−ｃ。

シクロアルキルまたはＣ，−Ｃ，シクロアルケニル基〔
いずれもメチレン基または１個以上のＣ１−Ｃ４アルキ
ル基またはハロ原子（フルオロ、クロロ、ヨードもしく
はブロモ）＆Ｃよって任意に置換可能である〕；または
飽和または完全もしくは不完全に不飽和であり、１個以
上のＣ，−Ｃ，アルキルまたはハロ原子によって任意に
置換可能である、酸素または硫黄含有三員〜六員複素環
基であるが、但しＲがアルキルである場合にＲはイソプ
ロピルまたは５ａＣ−ブチルではない。発酵プロセス中
にＲＣＯＯＨすなわち前駆体に転化可能な化合物は式（
Ｉ［−Ｂ） Ｒ−（Ｃ鵡）、−Ｚ　　　　　（Ｉｔ−Ｂ）で示される
化合物であり、式中Ｒは上記で定義した通りであり、外
は０．２．４または６であジ、ＺバーＣ１ｉ、ＯＡ、　
−ＣＩＩＯ，−Ｃ１ｉ、ＮＨ，、−ＣＯＯＲ６−４たは
−ＣＯＭＥＲ’　（Ｒ６はＢまたはＣ，−Ｃ，アルキル
であり　Ｂｔは水素、Ｃ１’４アルキル、またはアミノ
酸残基、特にアスパラギン酸、グルタミン酸及びメチオ
ニンの残基、例えばそれぞれ−ＣＭ　（Ｃ００Ｍ　）　
ＣＭ、Ｃ００Ｂ　、　−ＣＢ　（ＣＯＯ１ｉ　）　（Ｃ
Ｂ、）、−ＣＯＯＨ，及び−ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＥ、
）、ＳＣＥ、である〕である。

式（Ｉ［−Ａ）化合物の異性体、発酵プロセス中に式（
ｎ−，４）化合物に転化用能な化合物の異性体及びここ
に述べるプロセスへの使用から生ずるＣ２５における異
性体アベルメクチンも本発明に含まれる。

Ｒ基のソース、すなわちＲ基がＲＣＯＯＩｉから直接生
ずるかまたは上記前駆体の１つからまたはいずれかの前
駆体から生ずるかはエチル化アベルメクチンの産生にと
って重要ではない。本発明のエチル化アベルメクチン製
造法にとって重要な要件は、好ましいＲ基が本発明のＳ
、アベルミチリス菌株によって発酵プロセスに用いられ
ることである。

適当な化合物を次に挙げる： ２．３−ジメチル酪酸、 ２−メチルヘキサン酸 ２−メチルベント−４−エン酸 ２−シクロプロピルピロピオン酸 ４．４−ジフルオロシクロヘキサンカルボン酸リチウム
塩、 ４−メチレンシクロヘキサン・カルボン酸３−メチルシ
クロヘキサン・カルボン酸（シス／トランス） １−シクロペンテン・カルボン酸 １−シクロヘキセン・カルボン酸 テトラヒドロビラン−４−カルボン酸 チオフェン−２−カルボン酸 ３−フロン酸 ２−クロロチオフェン−４−カルボン酸シクロブタン・
カルボン酸、 シクロペンタン・カルボン酸 シクロヘキサン・カルボン酸 シクロヘプタン・カルボン酸 ２−メチルシクロプロパン・カルボン酸３−シクロヘキ
セン−１−カルボン酸 ２−メチルチオ・プロピオン酸 ２−メチル−４−メトキシ酪酸 チオフェン−３−カルボン酸 ヒドロキシメチルシクロペンタン ３−チオフェンカルボキシアルデヒド ３−シクロヘキシル・プロピオン酸 ３−シクロペンチルプロピオン酸 ヒドロキシメチルシクロブタン テトラヒドロチオフェン−３−カルボン散３−シクロペ
ンテルー１−プロパツール３−メチルシクロブタン・カ
ルボン酸リチウム塩３−フルオロシクロブタン・カルボ
ン酸３−メチレンシクロブタン・カルボン酸リチウム２
−メチル−４−メチルチオ酪酸 テトラヒドロチオピラン−４−カルボン酸シクロブチル
メテルアミン エチルシクロブタンカルボキシレート ４−ヒドロキシメチルシクロペンテン ２−（３−チオフェンカルボニル）ピロピオン酸エチル
エステル ５−２−メチルペンタン酸 Ｒ−２−メチルペンタン酸 式（１）の化合物の製造に特に有用なＳ・アベルミチリ
ス突然変異株は、紫外線照射、Ｘ線照射、Ｎ−メチル−
Ｎ’−二トローＮ−ニトロングアニジン、エチルメタン
スルホネート、亜硝酸及び窒素マスタード、例えばＮ−
メチルビス（２−クロロエチル）アミン、等による処理
を含めた種々な突然変異誘発剤のいずれかを用いる公知
の方法に従って、ストレプトマイセス・アベルミチリス
種のアベルメクチン産生菌の突然変異によって得られる
。突然変異誘発は天然アベルメクチンを産生できるＳ、
アベルミチリス（例えばＳ・アベルミチリスＡＴＣＣ３
１２７２）の胞子または栄養培養物に対して行うことが
できる。

当業者に周知の方法に従い、ランダムに突然変異誘発し
た多数のコロニーな（１４Ｃ−１〕−〕２−オキソから
の１４ＣＱ２発生に関して検査する生化学的分析法に基
づいて突然変異誘発コロニーを選択この方法は、適当な
栄養培地上のマイクロタイター・プレートの孔の中で突
然変異株コロニーを増殖させ、細胞ケトルエンによって
透過性化し、次に６孔に（’４Ｃ−１３−２−オキソ酸
（例えば２−オキソインカプロン酸）を加えて発酵上の
雰囲気をＩ４Ｃｏ、　Ｋ関して検査することから成る。

または、（”Ｃ−１：ｌ　−２−オキソイソカプロン酸
の代りに（１４Ｃ−１）　−２−オキソ−３−メチル吉
草酸または（”（１’−１）　−２−オキソ−３−メチ
ル酪酸を用いることができる。１４ＣＱ、の発生は、６
孔の上に湿ったＢ　ａ　（ＯＨ　）を飽和Ｆ紙を置いて
、放出ｌ４ＣＱ、を捕捉し、Ｂ　ａ　Ｉ４ＣＯ，をオー
トラジオグラフィーにより検出することによって便利に
検査することができる。分枝鎖２−オキン酸デヒドロゲ
ナーゼ活性を有さない突然変異体はブランクの非接種対
照のオートラジオグラムと大体一致するオートラジオグ
ラムな示す；すなわち突然変異体によって付加的なりα
ｌ４ＣＱ、は生じない。

ここに述べる突然変異株の形態学的及び培養上の特徴は
米国特許第４．４２９．０４２号に一般的に述べられて
いる。本発明の突然変異株の明確な特徴は分枝鎖２−オ
キン酸デヒドロゲナーゼ活性を有さないことであり、こ
の特徴はここで述べるように検出することができる。前
記活性を有さないために、突然変異株は脂肪酸ＲＣＯＯ
１ｉ　（Ｒはイソプロピルまたは（Ｓ）　−５ａｃ−ブ
チルである）または発酵中に前記ＲＣＯＯＨに転化可能
な化合物を実質的に含まない規定培地上で増殖させた場
合に、天然アベルメクチンを産生することができない。

アメリカン　タイプ　カルチャー　コレクション（Ａｔ
ｒ＋ｇｒｉｃａｓ　　Ｔｙｐｅ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　　
Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）が実施した分類学的研究は、上
記１４（：’Ｏ，分析によって選択した２種類の突然変
異株１−３と１ｉＬ−０２６の特徴が米国特許第４．４
２９．０４２号に述べられた親ＡＴＣＣ３１２７２菌株
の特徴と、例外はあるが、密接な関係乞有することを実
証している。

変異株１−３（ＡＴＣＣ５３５６７）はＡＴＣＣ３１２
７２よりも有意に少ない胞子を形成し、変異株１１　Ｌ
　−０２６（ＡＴＣＣ５３５６８）は気化菌糸を実際に
有さないが、これが形成するごく僅かな胞子はＡＴＣＣ
３１２７２の性質と同じ性質を有する。また、変異株Ｍ
Ｌ　−０２６は単独炭素源としてラフィノースを利用で
きるかどうか不定であるが、親菌株と変異株１−３とは
ラフィノースを利用できる。（田願人による実験では、
ラフィノースはこれらの菌株の増殖を支持するように見
えなかった）。変異株ＭＬ−０２６の他の特徴の１つは
、他の２種類の菌株よりも少なくメラニン色素を形成す
ることであり、チロシン寒天上では独特に全くメラニン
色素を生じない。最後に、米国特許第４．４２９．０４
２号のＡＴＣＣ３１２７２に関する記載とは対照的に、
単独炭素源としてスクロースを用いた場合に変異株また
はＡＴＣＣ３１２７２の増殖が検出されない。

ストレプトマイセス・アベルミチリスＩ−３とＭＬ−０
２６はアメリカン　タイプ　カルチャーコレクション（
メリーランド州、ロツクヴイル）にブタペスト・条約下
に寄託されており、公認保管所が寄託物の永久性ケ保証
し、本出願に特許が付与された場合には、公衆によるそ
れへの容易な接近？可能にする。これらにはそれぞれス
トレプａｖｅｒｍｉｔｉＬｉｓ）ＡＴ（１’ｃ　　５３
５６７とＡＴＣＣ５３５６８の名称が与えられている。

寄託物は本出願の審査中、米国特許庁長官が３７　ＣＦ
Ｒ１，１４及び３５ＵＳＣ１２２の下にならびに本出願
の対応物またはその追加特許を出願する画の特許法に従
って資格があると判断した者に入手可能である。

寄託された微生物の公衆による利用性に関する全ての制
限は、特許付与時に、変更可能に除かれる。

本発明の変異株は、適当なブライマー化合物とＳＡＥを
含む栄養培地中で発酵させた場合に、式（Ｉｌの化合物
（Ｒは使用ブライマー化合物に対応する）または、より
通常の場合には、２種類以上の式（Ｉ）化合物の混合物
を産生する。米国特許第４．４２９．０４２号で用いら
れている名称に従って、Ｒ−アベルメクチンＡ１、Ａ２
、Ｂ１、Ｂ２と簡単に、分り易く名づけらねた１２種類
までの生成物が産生さする。「Ｒ」基は当然、Ｃ２５置
換基を意味する。例えば、Ｒがシクロペンチルである場
合には、考えられるアベルメクチンは下記の４ｆｉ類の
シクロペンチルアベルメクチンの各々の２種類のモノエ
チル化二糖誘導体と１種類のジエチル化二糖誘導体であ
る： 簡易名称　　　　　　　　　ＲＩ　　　　　ＲＳアベル
メクチンＡ２ シクロペンチル　　　　　二重結合　　　Ｈアベルメク
チンＢ１ 非天然アベルメクチンでは、式（１１のＣ２５置換基「
Ｒ」がイソプロピルまたは（，５）　−５ａｃ−ブチル
以外である。

二重結合が存在し、ＯＨが存在しない式（１）化合物は
、ＲＩが０１１であり二重結合が存在しな〜・式（Ｉ）
の対応化合物から脱水反応によって代替的に製造するこ
とができる。反応は最初［５及び４′位置のヒドロキシ
基を例えばｔ−ブチルジメチルシリルオキシアセチル誘
導体として選択的に保護し、次に例えば（４−メチルフ
ェノキシ）チオカルボニルクロリドのような、置換チオ
カルボニルハリドと反応させ、次に例えばトリクロロベ
ンゼンのような高沸点溶媒中で加熱して脱水させること
によって行われる。最後に生成物を脱保護して、不飽オ
ロ化合物を得る。これらの段階は適当な試薬及び反応条
件と共に米国特許第４，３２８．３３５号に述べられて
いる。

ＲｓがＢである式（ＩＩ化合物も、Ｒｓがｃｈ、である
対応化合物から脱メチル化によって製造される。

この反応は５−メトキシ化合物または適当に保護された
その誘導体を酢酸第二水銀によって処理し、生成スる３
−アセトキシエノールエーテルを希酸で加水分解して５
−ケト化合物を得ることによって夫施される。次に、こ
の生成物を例えばホウ水素化ナトリウムによって還元し
て、５−ヒドロキシ訪導体を得る。これらの段階のため
の適当な試薬と反応条件は米国特許第４，４２３．２０
９号に述、　べられている。

Ｒ１がＨであり、二重結合が存在しない式（Ｉｌ化合物
は二重結合が存在し、Ｒ１が存在し危い対応化合物から
、適当な触媒を用いる選択的触媒水素化によって製造す
ることができる。例えば、ヨーロッパ特許出願公開第０
００１６８９号に述べられているように、トリス（トリ
フェニルホスフィン）ロジウム（１１クロリドを用いて
還元を行うことができる。

本発明の化合物は、虫下し、外部寄生虫駆除剤、殺虫剤
及び殺ダニ剤として特に用いられる、非常に活性な駆虫
剤である。

従って、これらの化合物は特に線虫と呼ばわる寄生虫群
によってしばしば惹き起され、ブタ、ヒツジ、ウマ、ウ
シに大きな経済的損失を与え、家畜及び飼鳥類に不利な
影響を与える嬬虫症を含めた、内部寄生虫によって生ず
る種々な症状の治療に効果的である。これらの化合物は
また、例えばｆユ’）ＩＡｃＡロａデｉｍ　）、ストロ
ンギロイテス属繞虫属（Ｅｎｔａｒｏｂｔｓａ）　　の
ような両脇寄生虫を含めたヒトに感染する種々な寄生虫
ならびに例えば糸状虫及びストロンギロイデス属や旋毛
虫属の腸外期のような、血液、その他の組織及び器官に
検出される寄生虫を含めた、様々な動物種に影響を与え
る他の線虫に対しても効果的である。

これらの化合物は、例えばマダニ、ダニ、アタマジラミ
、ノミ、ハエ、刺虫類及びウシやウマに影響する遊走性
双翅類幼虫のような、特に動物及び鳥類の節足動物外部
寄生虫を含めた、外部寄生虫感染症の治療ＶＣＺ要であ
る。

これらの化合物はまた、例えばゴキブリ、衣蛾、カツオ
プシムシ及びイエバエのような家庭内害虫に対して有効
であり、また例えばハダニ、アブラムシ、毛虫のような
、貯蔵穀粒及び農作物の害虫に対して及び例えばイナゴ
のような移動性直翅目に対して有効な殺虫剤でもある。

式（１）化合物は予定された特定の用途に対して、また
処置すべき特定の宿主動物種及び関係する寄生虫または
虫に対して適当な製剤として投与する。

駆虫剤として使用するためには、化合物をカプセル剤、
巨丸剤、錠剤または水薬として経口投与する、または注
射によっであるいは移植物として投与することもできる
。このような製剤は標準的な獣医学的方法に従って慣習
的なやり方で製造する。

従って、カプセル剤、巨丸剤または錠剤は有効成分を適
当な微粉状希釈剤またはキャリヤーと、付加的に例えば
殿粉、ラクトース、メルク、ステアリン酸マグネシウム
等のような崩壊剤及び／または結合剤を含めて、混合す
ることによって製造することができる。水薬製剤は有効
成分を水溶液中に分散剤または湿潤剤等と共に分散させ
ることによって製造することかでき、注射可能な製剤は
、例えば溶液を血液と等張性にするために充分な塩また
はグルコースのような、他の物質を含む無菌浴液として
製造することができる。これらの製剤では治療すべき宿
主動物種、感染症の′ＮＮ変度糎類及び宿主の体重に依
存して、有効成分量を変化させる。一般に経口投与用に
は、単回蓋または分割量として動物体重１Ｋにつき約０
．００１〜１０ＴＢ９量を１〜５日間投与することで充
分であるが、当然これより多いまたは少ない用量範囲が
指示される場合もあり、このような量も本発明の範囲内
である。

代替手段として、本発明の化合物を動物の飼料と共に投
与することもでき、このためには濃縮した飼料添加物ま
たはプレミックスを通常の動物飼料と混合するように調
製することができる。

殺虫剤として使用し、農作物害虫を処置するためには、
これらの化合物をスプレー、ダスト、エマルジョン等と
して標準的な農業的方法罠従って施用する。

の産生 をニュー・パッチ寒天培地（＃ｇｗ　Ｐａｔ６ｈ　Ａｇ
ａｒＭａｄｔｓｔｎ）上で集密的ローン（Ｃｏｓｆｌｓ
ａｓｔ　ｌａｗ％）として３０℃において１２日間増殖
させた。培地の構成は次の通りである： Ｖ−８ジユース”　　　　　　　２００ｍＣａＣ０，３
１ 寒天　　　　　　　　　　　　１５ｆ Ｈ，０１０００ｔｒｄＶＣなるまで補充栄養ブロス　　
　　　　　１．ｏｔ／ｌＣＭ３Ｃ０ＯＮａ　・３Ｅ２０
　　　　１．４　？　／　ｔイソ吉草酸　　　　　　　
５０ｍ９／ｌイソ酪酸　　　　　　　　５０■／Ｌ メチル酪酸　　　　　　　５０η／ｌ インロイシン２５０１１１９／ｌ ロイシン　　　　　　　　　２５０■／ｌバリン　　　
　　　　　２５０■／Ｌ 微量元素溶液′″′″　　　　　１−／を骨８８ＩＩ類
ノ野菜ジュース（トマト、ニンジン、セロリ、ピーラ、
パセリ、レタス、クレソン及びホウレンソウ）、塩、ア
スコルビン酸、クエン酸、及び天然フレーバーの混合物
。キャンペル　スープ・カンパニー　（Ｃａｔｎｐｂａ
ｌｌ　５ｏｕｐ　Ｃｏｍｐａｎｙ　）　（＝ニーシャー
シー州、カムデン）から入手。

■　微量元素溶液の組成： １１ＣＬｓ・６Ｅ、０　　　　２．７Ｓ’Ｍ％ＳＯ，・
Ｅ、０　　　　　４．２？Ｃ襲ＳＯ，・５１１，０　　
　　０．５９Ｃ（ＬＣ４１１，Ｏｆ ｌｌ、Ｂｏ、　　　　　　　　　　　　０．６２　ｒＣ
ｏＣｌ、・６１１，０　　　　　　０．２４　ｆＺｎＣ
ｌｔ　　　　　　　　　　　　Ｏ，６８ｔＮａ、Ｍｏｂ
、　　　　　　　　　　０．２４１上記成分を０．Ｉ　
Ｎ　ＨＣｌ　ｌ　を中に溶解する。

このようなプレート３枚から胞子を回収し、０．０５Ｍ
）リス−マレイン酸緩衝液（ｐＨ９，０）２０ｍｔ中に
懸濁させる。

ＲＮ２−　　Ｎ−メｆルーＮ’−ニトローＮ−二トロン
−グアニジン（ＮＴＧ）　１０１ｎ９’に含むバイアル
に胞子懸濁液１０−を加えた。バイアルをインキュベー
トし、２８℃において６０分間振と５し、次に胞子を１
％Ｎａ　ＣＬ浴溶液よって充分に洗浄した。

段階３．洗浄した胞子を１％ＮＧＣｔ中に懸濁させ、等
量の８０％エチレングリコールと混合した。この懸濁液
を一２０℃で保存して突然変異体の有無を検査する細胞
ソースとして用いた。これは発芽時に約１０４コロニー
／ｆＩｔｙｘ生じた。

この胞子ストック？：ＹｐＤプレートに拡げて、約１０
０コロニー／プレートになるようにした（Ｙ’ｐＤ培地
は酵母エキス、バクトペプトン１（Ｂａｃｔｏ　ｐｇｐ
ｔｏｎａ　）及びデキストロースの各１０ｙ７ｔと、バ
クト寒天（Ｂａｃｔｏ　ａｇａｒ　）　１５　？　／　
Ｌとから成り、オートクレーブ処理前にアＢ６．９に調
節）。星印をつけた成分はデイフコ　ラボラトリーズ（
Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　）　（ミシガ
ン州、デトロイト４８２３８　）から入手。

段階４．２８℃においで２〜３週間増殖させた後に独立
コロニーをプレートから採取して、標準９６孔マイクロ
タイター・プレートの６孔に装入した。また、少量のコ
ロニーを新しい寒天培地に貼布し、突然変異体を確認す
る場合に生存細胞として用いる。

段階５．６孔に、グルコース１％、カサミノ酸０．１％
、イソ吉草酸、イソ酪酸、２−メチル配酸各０．０１％
を含む液体Ｍ９塩培地約７５μｔｌ加えた。２８℃にお
いて数日間インキュベートした後に、分枝鎖２−オキソ
酸デヒドロゲナーゼの有無に関して細胞を分析した。（
Ｍ９塩培地各１ｔはＮａｔＨＰＯａ　６　ｔ、ＫＨ＊Ｐ
Ｏａ　３９　、　ＮａＣ２０，５を及ヒＮｌ１４ＣＬ　
１　ｆを含有する。培地をオートクレーブ処理し、滅菌
したｌ　Ｍ　ＭｇＳＯ４と０．　Ｉ　Ｍ　ＣａＣＬ。

の各１−を無菌添加する） 段階６１Ｍ９塩培地中５％トルエンのミクロ懸濁液は、
この混和不能な混合物を短時間超音波処理することによ
って調製した。この懸濁液２５−に、（１４Ｃ−１）−
２−オキソ−イソカプロン酸、２．５マイクロキューリ
ー／−及び１０．０マイクロキユ一リー／ミクロモルを
含む溶液１．２ｍ’＆加えた。

この線混合物５０μｔ′？：被分析コロニーを含むマイ
クロタイタープレートの６孔に加えた。

段階７．６孔から発生する１４ＣＯ１を捕捉し、ターポ
アー等が［多重サンプル中の１４　ＣＱ　、の簡易検出
方法：突然変異体の迅速検量への応用（Ｃ，％ｖａｎ−
ｉａｓｔ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｆａｒ　Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ
　１４ＣＯ，ｉｎＭｔｂｌｔｉｐｌａ　Ｓａｍｐｌｅｓ
　：　Ａｐｐｌｔｅａｔｔｏｓ　ｔｏ　ＲａｐｉｄＳｃ
ｒｍａｓｉｍｇ　ｆｏｒ　−Ｍｓｔａｓｔｓ　）　Ｊな
るタイトルでジエイ、バクト、１２８．４８５〜４８６
頁（１９７６）に述べている方法によって可視化した。

活性な分枝鎖２−オキソ酸デヒドロゲナーゼを有さない
突然変異体は、対照で観察された以上にはＢａｌ４ＣＯ
，を産生しない。

Ｅａ”ＣＯ，形成の結果としてのオートラジオグラム上
の培地スポットによって示される１４ＣＱ、の陽性分析
とスポット無しまたは非常に明色のスポットによって示
される陰性分析との対照を明確にした改良方法は、下記
の修正検査方法を含む。

独立コロニー（上記段階４参照〕を７〜１４日間増殖さ
せた後（２〜３週間の増殖ではなく、上記段階６と７に
よって直接分析）、寒天培地から採取した。上記方法の
段階５は省略する。

１４Ｃ（）、放出に関してさらに定量的な性質である、
より改良された分析方法では、上記検査方法によって検
出した突然変異株を、グルコース１％と［ジンカサ（Ｓ
ｙｎｅａａａ）−ｂｃａａ　Ｊ　０．１％を含むＭ９塩
培地から成る適当な培地上で増殖させる。

「ジンカサ−ｂｃａａ」とは市販カサミノ酸の適当な組
成物を含むが、Ｌ−バリン、Ｌ−イソロイシン及びＬ−
ロイシン馨含まないＬ−アミノ酸の混金物を意味する。

下記参照。） 高細胞密度にまで増殖させた後、細胞をＭ９塩培地中で
洗浄し、トルエンの乳白色分散液を形成するように超音
波処理した１ｅもトルエン含有冷・「９塩培地中に再懸
濁させた。細胞を透過性化するために、細胞／緩衝液／
トルエン懸濁液を３０℃において４０分間インキュベー
トした。次に透過性化細胞をＭ９塩培地中で洗浄し、最
後ＫＪ１９培地緩衝液の初期蓋のイに再懸濁させた。１
回の分析につきこの懸濁液１８０μｔを用いた。

３００μｔの反応量はトルエン化細胞、チアミンピロホ
スフェートＣＴＰＰ）０．４ｍＭ、袖酢素Ａ（ｃｏ、４
）０．１１　ｒｎＭ、　＝コチンアミドアデニンジヌク
レオチド（ＮＡ＃）０．６８ｍＭ、ジチオスレイトール
（ＤＴＴ）２．６惧Ｍ　、　ＭＱ（、’ｔ、　４．１溝
Ｍ、　トリス−ＥＣ１６０ｍＡｆ、　　トリス−ＢＣＬ
６０ｍＭ。

ｐＥ７．５、及び（”Ｃ−１：）−２−オキソイソカプ
ロニー）６０００ｃｐｍ（マイクロキューリー／ミクロ
モル）を含有した。計数効率は７３％であった。反応は
バイアルのネジ込みキャップ中にホワットマン（Ｗｈａ
ｔｍｅＬｎ　）　＋　４方形戸紙２×２ｃＩｒＬを押込
ンタ１５ｒＩＸｔシンチレーション・バイアル中で実施
した。この紙は１Ｍヒアミンヒドロキシド（Ｉｉｙａｍ
ｉｎａ　Ｈｙｄｒｏｙａｉｄｅ）　　（メタノール中メ
テルペンズエトニムヒドロキシドの１Ｍ溶液、シグマケ
ミカル社（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｇｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）　
　ミズリー州、セントルイス、６３１７８から入手可能
）３０μＬを含み、反応中に発生する１４（’０．を捕
捉する。２時間インキュベートした後に、紙ｔペックマ
ンアクアゾルｌ　［Ｂａｃｋｍａｎ　Ａｑｓａａｏｌ　
ｎ　）　（ユニバーサルＣＵｒ４ｖａｒｓａＬ　）　Ｌ
ＳＣ（液体シフｆＶ−ジョンカウンター）、ニューイン
グランド　ヌクレアー　リサーチ　プロダクツ（Ｎｅｗ
　Ｅｎｇｌａ％ｄＮｕｃｌｅａｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　
Ｐｒｏｄｓｃｔａ　）　　マサチュセツツ州ボストン０
２１１８から入手可能〕１〇−中に浸せきし、この溶媒
中で４時間以上平衡させた後に、　放射能”ｖ液体シン
ナレーションカウンター中で計数した。ブランク対照反
応（すなわち、細胞含まず）は約５０〜３００　ｃｐｓ
を示す。

変異株１−３とこれに似た他の変異株はブランク対照反
応以下のカウントを示したが、親菌株はブランク対照値
よりも数倍高−・カウントを示した。

単離 Ｓ・アベルミチリスＩ−３（ＡＴＣＣ５３５６７）を栄
養寒天プレート上で画線培養した。比較的高い発生率で
自然変異体が出現し、その幾つかは３０℃における４日
間インキュベーション時に気化菌糸を有さなかった。こ
のような変異体の幾つかを単離し、シクロペンクンカル
ボン酸を加えたＡＰ−５１＠地上で発酵させた時に非天
然アベルメクチンを産生するか否かを試験した。多くが
天然アベルメクチンｌ含まない非天然アベルメクチンを
産生じた単離物から、フラスコ実験で親のＳ・アベルミ
チリスｌ−３（ＡＴＣＣ５３５６７）よりも高〜・労働
のアベルメクチンを産生じた菌株に確認番号ＥＬ−０２
６（ＡＴＣＣ５３５６Ｂ）Ｙ割当てた。

７ｔ Ｌ−アラニン　　　　　　　　　　　３Ｌ−アルギニン
　　　　　　　　　　４Ｌ−アスパラギン酸　　　　　
　　　６Ｌ−システィン　　　　　　　　　　　ＩＬ−
グルタミン酸　　　　　　　　　２０グリシン　　　　
　　　　　　　　　ＩＬ−ヒスチジン　　　　　　　　
　　２Ｌ−リシン　　　　　　　　　　　　７Ｌ−メチ
オニン　　　　　　　　　　３Ｌ−フェニルアラニン　
　　　　　　６Ｌ−プロリン　　　　　　　　　　　１
０Ｌ−セリン　　　　　　　　　　　６ Ｌ−スレオニン　　　　　　　　　　４Ｌ−チロシン　
　　　　　　　　　　４Ｌ−）リブトファン　　　　　
　　　１混合物をｐＨ７に調節し、無−濾過する。！ｌ
縮物１′ｊｊｋを培地９９量に加えて、標準使用濃度を
得る。

以下で用いる培地の組成を下記に示す。

Ａｓ−７培地 ｙ７を 希釈殿粉’　　　　　　　　　　　　　　　２０アルダ
ミン（Ａｒｄａｍ４ｓ）ｐＨｂ５ファーマメディア（Ｐ
ｈａｒｍａｍａ　ｄｔａ　）　’　　　　１５ＣａＣ０
，２ 〔ノボエンザイムス（＃ｏｗａ　Ｅｎｇｙ艶ｌ〕コネチ
カット州ウィルトンから入手可能、商標「ターマミル（
Ｔａｒ惰αｍｙＤＪ　　で販売〕による殿粉から４０％
±５％に等しいデキストロースへの加水分解によって調
製。

ｂ　イースト・プロダクツ社（Ｙｅａｓｔ　Ｐｒｏｄｕ
ｃｔｓ。

Ｉ％ｅ、）　にュージャーシー州りリフトン、０７０１
２）製。

ｃ　トレイダースプロティン（Ｔｒａｄｅｒｓ　Ｐｒｏ
ｔａ−ｉ％）（テネシー州メンフイス３８１０８）製。

Ｎａ０ＭによりｐＥ’１７．２に調節 ＡＰ−５培地 ？／１ 希釈殿粉　　　　　　　　　　　８０ アルダミンｐＨ５ に、ＨＰＯ４１ Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ，ＯＩ Ｎ　ａ　ＣＬ　　　　　　　　　　　　　　ＩａＣＯｓ
７ ＦｅＳＯ４・７Ｅ、ＯＯ，０１ ＭｎＣＬ、・７Ｂ、０　　　　　　　　　０．００１：
１ｓＳ０４・７Ｂ　、０　　　　　　　　　０．　ＯＯ
ＩＰ−２０００（消泡剤）′Ｌ１ｍ／！／ｌα　ダウケ
ミカル社（Ｔｈｅ　Ｄｏｗ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、
）（ミシガン州ミツドランド４８６４０）製。

２５％Ｎａ０Ｅ　Ｋよりｐｌｉを６．９に調節。

移動相： 水１５０ｔｎｔ アセトニトリル　７０ｍ メタノールで全量を１ｔに−ｊる。

カラム： ’Ｚル）　ラス７：ｒ−７（Ｕｌｔｒａａｐｈａｒａ）
ＯＤＳ　２５儂〔ベックマン　インストルーメンツ（Ｂ
ａｅｋ−ｍａ％Ｉ＊ａｔｒｘｍａｎｔａ＋　　カリホル
ニア州フラートン９２６３４−３１００） 流速度：　　０．７５ｍ１／分 検出：　　２４〇九倶におけるＵＶ 減衰：　　４（近似） サンプル希釈剤（Ｄ）ニ アセトニトリル３５−＋メタノール３９０ｓｄサンプル
： １、充分に振とうしたブイヨン４ｄを取り、スピンダウ
ンさせる。

２、ペレットを妨害することな（、できるかぎり多くの
上清を取出す。

３、希釈剤４−をペレットに加え、ミックスを撹流して
分散させる。

４、スピンダウンさせ、上清を回収する。

５、上清を濾過し、ｌ１ＰＬＣにかける。

例　　　１゜ エチル化シクロペンチルアベルメクチンＳ、アベルミチ
リスＨＬ−０２６（ＡＴＣＣ５３５６８）の凍結バイア
ルを用いて、５０〇−じゃま板付きフラスコ（ｂｕｆｆ
ｌａｄ　ｆｌａｓｋ　）中のＡｓ−７培地１００ｒｎｌ
に接種し、２８〜３０℃において振とうしながら２４〜
２８時間インキュベートした。次に、この培養物１１１
１／”ｉ＆用いてＡＰ−５（ＮａＣＬ　？：減じてグル
タミン酸０．６ｆ／ｌを添加）培地４０ｍ１−含む３０
０−フラスコに接種した。２８〜３０℃において振とう
しながら約９６時間インキュベートした後、シクロペン
タンカルボン酸（Ａ’ａ塩）０．４Ｙ／ｌと５ＡＥ０．
０３ｔ／ｌを加えた。３１２時間サンプルのＨｐＬＣク
ロマトグラフィーはエチル化シクロペンチルアベルメク
チンＢ２、Ａ２、Ｂ１が対応するシクロペンチルアベル
メクチンに対して下記の保持時間比を有して存在するこ
とを示した。

モノエチル　ＣＰ−Ｂ２／ＣＰ−Ｂ２＝１．１０ジエチ
ル　　ＣＰ−Ｂ２／ＣＰ−Ｂ２＝１．２３モノエチル　
Ｃ’　Ｐ−Ａ　２　／ＣＰ　　ｚｌ　２＝　１．１０ジ
エチル　　Ｃｐ−Ａ２／Ｃｐ−Ａ２＝１．２６モノエチ
ル　ＣＰ−Ｂ　１／ＣＰ−Ｂ　１＝１．１０ジエチル　
　Ｃｐ−ＢＬ／ＣＰ−Ｂ１＝１．２４ｃｐ＝シクロペン
チル。

例　　　２゜ エチル化シクロヘキシルアベルメクチンＳ・アベルミチ
リスＭＬ−０２６（ＡＴＣＣ５３５６８）の凍結バイア
ルを用いて、５００ｓｓｔじやま板付きフラスコ中のＡ
ｓ−７培地１０〇−に接種し、これを２８〜３０℃にお
いて振とうしながら２４〜２８時間インキュベートした
。次に、この培養物１７！を用いてＡ　Ｐ　−５（ＶＶ
ｃＬＣｔを減じてグルタミン酸０．６ｆ／ｌ’ｌ（添加
）培地４０−を含む３００ｍｅフラスコに接種した。２
８〜３０℃において振とうしながら約９６時間インキュ
ベートした後、シクロヘキサンカルボン酸（＃ｇ塩）０
．２ｙ７を及び５ＡＥ０．０３ｆ／Ｌｋ加えた。約１６
８時開目に、ＳＡＥをさらに０．０３ｔ／を加えた。

３１２時間サンプルの１ｉＰＬｃクロマトグラフイーは
エチル化シクロヘキシルアベルメクチンＢ２、Ａ２、Ｂ
１が対応シクロヘキシル・アベルメクチンに対して次の
保持時間比を有して存在することを示した。

モノエチル　ＣＭ　−Ｂ　２／ｌ’Ｈ−Ｂ　２＝　１．
１１ジエチル　　Ｃ１ｉ　−Ｂ　２／Ｃ１ｉ　−Ｂ　２
＝　１．２５モノエチル　Ｃ１ｉ　−Ａ　２／ＣＭ−Ａ
　２＝　１．１１モノエチル　ＣＭ−Ａ　２／Ｃ１ｉ　
−Ａ　２＝　１．１３ジエチル　　ＣＭ　−Ｂ　１／Ｃ
１ｉ　−Ｂ　１＝　１．２５Ｃ１ｉ−シクロヘキシル。

代　理　人　弁理士　　湯　浅　恭　三（外４名）

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. （１）式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、２２〜２３位置の破線は任意の二重結合を表す
   ； Ｒ＾１は二重結合が存在しない場合に、ＯＨであり、二
   重結合が存在する場合には、Ｒ＾１は存在しない；Ｒ＾
   ２は式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾３とＲ＾４はそれぞれＣＨ＿３またはＣ＿
   ２Ｈ＿５であるが、Ｒ＾３とＲ＾４の少なくとも一方は
   Ｃ＿２Ｂ＿５である）で示される二糖基であり； Ｒ＾５はＨまたはＣＨ＿３であり； Ｒは炭素数３ないし８の、アルキル（任意にＣ＿１−Ｃ
   ＿４アルキル基で置換している）、アルケニル、アルキ
   ニル、アルコキシアルキル、アルキルチオアルキル；ア
   ルキル基がＣ＿２−Ｃ＿５アルキルであるＣ＿５−Ｃ＿
   ８シクロアルキルアルキル基；いずれも任意にメチレン
   またはＣ＿１−Ｃ＿４アルキル基によつて置換されてい
   てもよい、Ｃ＿３−Ｃ＿８シクロアルキルまたはＣ＿５
   −Ｃ＿８シクロアルケニル基；または飽和または完全も
   しくは部分的に不飽和であり、任意にＣ＿１−Ｃ＿４ア
   ルキル基またはハロゲン原子によつて置換されていても
   よい、酸素または硫黄含有三員〜六員複素環であるが、
   Ｒがアルキルである場合にＲはイソプロピルまたはｓｅ
   ｃ−ブチルではないものとする〕で示される化合物。
2. （２）Ｒがアルキルである請求項１記載の化合物。
3. （３）Ｒがシクロアルキルである請求項１記載の化合物
   。
4. （４）Ｒが三員〜六員の酸素または硫黄含有複素環であ
   る請求項１記載の化合物。
5. （５）Ｒがシクロヘキシルであり、Ｒ＾１が存在せず、
   Ｒ＾５がＨである請求項３記載の化合物。
6. （６）Ｒがシクロペンチルであり、Ｒ＾１がＯＨであり
   、Ｒ＾５がＨである請求項３記載の化合物。
7. （７）Ｒが３−チエニルであり、Ｒ＾１が存在しない請
   求項４記載の化合物。
8. （８）Ｒが３−フリルであり、Ｒ＾１がＯＨである請求
   項４記載の化合物。
9. （９）二糖基Ｒ＾２のＲ＾３とＲ＾４の各々がエチルで
   ある請求項５記載の化合物。
10. （１０）二糖基Ｒ＾２のＲ＾３とＲ＾４の各々がエチル
    である請求項６記載の化合物。
11. （１１）Ｒが３−チエニルであり、二糖基においてＲ＾
    ３がエチル、Ｒ＾４がエチルであり、Ｒ＾５がＨである
    請求項７記載の化合物。
12. （１２）Ｒが３−フリルであり、Ｒ＾５がＨであり、二
    糖基においてＲ＾３とＲ＾４の各々がエチルである請求
    項８記載の化合物。
13. （１３）請求項１記載の化合物を不活性な希釈剤または
    キャリヤーと共に含む、ヒト及び動物の寄生虫感染症の
    治療と予防用の組成物。
14. （１４）水薬または経口製剤または注射可能な製剤とし
    ての請求項１３記載の組成物。
15. （１５）動物飼料に添加するための動物飼料成分、プレ
    ミツクスもしくは補足物としての請求項１３記載の組成
    物。
16. （１６）寄生虫感染症または寄生虫侵入の原因となる寄
    生虫あるいは該寄生虫のいる局所を請求項１記載の化合
    物の駆虫量と接触させることから成る寄生虫感染症また
    は寄生虫侵入を撲滅する方法。