JPH01129165A - クレアチニン定量用試験片及びその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、尿や血清等の体液中に存在するクレアチニン
を定量するための試験片及びその製法に関するものであ
る。

［従来技術］ クレアチニンは、クレアチンの脱水物でクレアチンがク
レアチンリン酸となり筋収縮のエネルギー源として利用
される際の最終代謝物である。生成されたクレアチニン
は、腎糸球体で濾過された後、再吸収されることなく尿
中に排泄される。

体液中クレアチニンの定量は、重度の筋疾患、あるいは
腎炎、腎不全等の各種腎疾患の診断に有用である。

更に、１日当りの尿中へのクレアチニン排量量は１食事
内容、運動量、尿量等による影響を受けにくいことが知
られている。したがって随時尿（１日のうち任意の時間
に１回だけ採取した尿）中のクレアチニン量を定量する
ことによって、その随時尿の１日の総置量に対する割合
の推測が可能となる。尿中クレアチニンのこのような特
性を利用することにより、繁雑で被検者に大きな負担を
強いる蓄尿が必要となる蛋白質、電解質、ホルモン、薬
物等の１日当りの尿中総排潰量を、随時尿を試料として
推測することができる。

クレアチニンの定量方法に関しては、米国特許第３，５
５７，０１８号、並びに同第３，７０５，０１３号明細
書にいくつかの従来技術が開示されている。中でもアル
カリ性ピクリン酸とクレアチニンの結合によって生じる
赤−黄橙色のクレアチニンピクレートを比色定量するい
わゆるヤッフェ法【ツアイトシェリフトフユｙ　　フィ
シｈ’）シｘ　　＋ｌ（Ｚ、Ｐｈｙｇｏｌ、Ｃｈｅｍ、
）４１；２２３，１９０４］は、操作が簡便で充分な感
度を有するため現在も繁用されている。

その他にも比色定量法として３，５−ジニトロ安息香酸
を用いるベネジクトーベウア　（Ｂｅｎｅｄｉｃｔ−Ｂ
ｅｈｒｅ　　）　　法　【ジャーナル　オブ　バイオロ
ジカル　ケミストリイ　（Ｊ、Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、）１１４；５１５，１９３６］　、　　１．
４−ナフトキノン−２−スルホネー　ト　法【５ヤーナ
ル　オプ　バイオロジカルケミストリイ　（Ｊ、Ｂｉｏ
ｌ・Ｃｈｅｍ、）２３３；５３０，１９５８］やクレア
チナーゼを利用した酵素法　［クリニｇｈ　　ケミ７、
トｙ−（ＣＩｉｎ、Ｃｈｅｍ、）　　１９　　；６３２
゜１９７３１等が挙げられるが、いずれもヤッフェ法に
比較して感度、操作性、経済性等の点に問題を有するた
め普及していないのが現状である。これらクレアチニン
の定量法については、［臨床検査技術全書・臨床化学検
査Ｉ［Ｊ（石井暢編集・医学書院発行、１９７５）５７
頁に詳しいので参照されたい。

一方、近年体液中成分の測定法として試薬成分を濾紙や
多孔性フィルム等の吸収性担体に担持させてなる試験片
を利用する方法が、試薬の安定性や操作性に優れるため
注目されている。上述のようにヤッフェ法はいくつかの
クレアチニンの定量法の中でも充分な感度や経済性を備
えたものであり、この方法を取り扱いが簡便な試験片に
応用できれば臨床検査等の分野では非常に有用なものと
なる。

ところがヤッフェ法の発色成分であるピクリン酸はＰＨ
ＩＯを超えるアルカリ条件下では非常に不安定で、変色
や反応性の低下を示すことが観察される。したがってア
ルカリ成分とピクリン酸とをただ単に共存させることに
よって試験片へ適用した場合には、著しい安定性の低下
をもたらすものと考えられる。

公表特許間６０−５０２１６８号では、カプセル化によ
ってピクリン酸とアルカリ成分との接触を避ける技術が
開示されている。しかし該公表特許は、使用にあたって
溶解させる必要のある試薬錠剤に関するものであり、そ
のまま試験片に応用することは困難である。

［発明が解決しようとする問題ａ］ 本発明は、ヤッフェ法の試験片への適用において問題と
なるピクリン酸のアルカリ成分による安定性低下防止を
目的とするものである。

［問題を解決するための手段］ 本発明は１弱酸性物質の利用により試験片上でのピクリ
ン酸の安定化を図ったものである。すなわち本発明は、
アルカリ成分とピクリン酸を含むクレアチニン定量用試
験片において、ピクリン酸の安定剤として弱酸性の物質
を含んでなることを特徴とするクレアチニン定量用試験
片、並びに吸収性担体を少なくともアルカリ成分を含む
水系溶媒及び少なくともピクリン酸と弱酸性の物質を含
む有機溶媒に順次浸漬し乾燥することを特徴とするクレ
アチニン定量用試験片の製法である。　　−本発明にお
けるアルカリ成分としては、従来ヤッ７工法に用いられ
ていたものをはじめとする種々の強アルカリを使用する
ことができる。具体的には、水酸化ナトリウム、水酸化
カリウム、水酸化リチウム等が挙げられる。

一方本発明における弱酸性の物質としては、特に検体の
浸透性の調整が可能な高分子物質が好ましい９本発明に
使用しうる弱酸性の物質は、例えばポリビニルピロリド
ン、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコ
ール、ポリウレタン、ポリエチレングリコール、ポリ酢
酸ビニル、ポリアクリル酸メチル、ポリエチレンオキサ
イド等である。

本発明によるクレアチニン定量用試験片は、後述するそ
の製法によって得ることができる。その他フィルム形成
剤とアルカリ成分、ピクリン酸及び弱酸性の物質とを混
和し、適当な支持体に塗布後固化させることによって調
製することも可能である。

本発明によるクレアチニン定量用試験片は、その呈色の
程度を反射率測定によって読み取り予め作成しておいた
検量線と比較してクレアチニンの定量を行なうことがで
きる。また呈色程度を予め作成しておいたカラーチャー
トと肉眼的に比較することによって、半定量を行なうこ
ともできる。

つづいて本発明にかかるクレアチニン定量用試験片の製
法について述べる０本発明の製法における一つの特徴は
２種類の溶媒を利用している点であり、もう一つの特徴
はピクリン酸奢含有する有機溶媒に弱酸性の物質を添加
している点である。

本発明の製法中における有機溶媒は、ピクリン酸と所望
の弱酸性の物質とを溶解しうるものであればあればよい
、特に好ましいものとしては、各種アルコール類、ベン
ゼン、及びエーテル類等が挙げられる。

本発明の製法における弱酸性物質の使用量は、検体中の
予想されるクレアチニン濃度や使用するピクリン酸の量
、並びに弱酸性物質のピクリン酸安定化能等によって左
右されるが、−数的には有機溶媒中０．５〜２０重量％
程度が好ましい。

又本発明で使用する２種類の溶媒には、必要に応じて安
定剤や湿潤剤を加えることもできる。

更に、本発明による製法に用いられる吸収性担体として
は、濾紙、不織布、綿、ガラス繊維等が挙げられるが、
特に濾紙が好ましい、これら吸収性担体を利用した本発
明のクレアチニン定量用試験片の調製の一例を、更に具
体的に述べると以下のとおりである。

すなわち、まずアルカリ成分を含む水溶液に吸収性担体
を浸漬後５０〜８０℃で乾燥させ１次いで得られた吸収
性担体をピクリン酸と弱酸性の物質を含むアルコールに
再度浸漬した後４０〜５０℃で乾燥させるのである・ このようして得られた吸収性担体は、それ自体試験片と
して用いることもできるし、又適当な支持体上に貼着す
ることにより取り扱いが容易な形態とすることもできる
。

［発明の作用１ 本発明における弱酸性の物質は、試験片上において特に
乾燥時にピクリン酸の安定剤として作用する。更に詳し
くは、アルカリ成分とピクリン酸とを分離する層を形成
することにより安定剤としての作用を奏するのである。

又弱酸性の物質として前記のような弱酸性高分子物質を
利用した場合には、試験片内における検体の浸透性を調
整する作用をも有する。すなわち検体の浸透性を制御す
ることによって、特に低濃度域での急速な発色反応を抑
え、結果として検量線の直線性を向上させるのである。

以下実施例に基づき１本発明を更に詳細に説明する。

［実施例］ 実施例１ 下記の第１含浸液にグロマトグラフィー用を紙（ワット
マン社製、３ＭＭ）を浸漬後６０℃で６０分間乾燥し１
次いで得られた濾紙を下記の第２含浸液に浸漬し５０℃
で２０分間乾燥させて弱酸性物質としてヒドロキシプロ
ピルセルロースＨを含む本発明によるクレアチニン定量
用試験紙を得た。この試験紙をプラスチック智の板に両
面テープで貼着した後、短冊状に裁断して巾５１長さ８
０層鳳のプラスチック片よりなる支持体の一端に５×５
濡鳳の試験紙が貼着された本発明によるクレアチニン定
量用試験片ｌ（以下本発明品ｌとする）とした。

一第１含浸液− 無水マレイン酸 一イソブチレン共重合体拳　１５．２ｇ水酸化ナトリウ
ム　　　　　　　　７．８　ｇを蒸留水１００１で溶解
する。

一第２含浸液− ピクリン酸　　　　　　　　　　　　１．２　　ｇヒド
ロキシプロピルセルロースＨ１，Ｏｇをエタノール１０
０ｇ＋１で溶解する。

牢りラレイソプレンケミカル■製、イソパン（商品名） 実施例２゜ 実施例１の第２含浸液に弱酸性の物質としてヒドロキシ
プロピルセルロースＨにかえてポリビニルピロリドンに
−９０をｌ　、　Ｏｇ／ｄｉとなるように加えた他は実
施例１と同一の操作により、本発明によるクレアチニン
定量用試験片２（以下本発明品２とする）を得た。

実施例３゜ 実施例１の第２含浸液に弱酸性の物質としてヒドロキシ
プロピルセルロースＨにかえてポリアクリル酸をｌ　、
　Ｏｇ／ｄｉとなるように加えた他は実施例１と同一の
操作により１本発明によるクレアチニン定量用試験片３
（以下本発明品３とする）を得た。

実施例４゜ 実施例１の第２含浸液に弱酸性の物質としてヒドロキシ
プロピルセルロースＨにかえてポリアクリル酸メチルを
１　、０ｇ／ｄｉとなるように加えた他は実施例１と同
一の操作により１本発明によるクレアチニン定量用試験
片４（以下本発明品４とする）を得た。

実施例５゜ 実施例１の第２含浸液に弱酸性の物質としてヒドロキシ
プロピルセルロースＨにかえてポリエチレングリコール
２０００を１　、０ｇ／ｄｌとなるように加えた他は実
施例１と同一の操作により１本発明によるクレアチニン
定量用試験片５（以下本発明品５とする）を得た。

比較例！。

次に示す含浸液に実施例と同じｒ紙を浸漬した後５０℃
で４５分間乾燥させる他は実施例１と同一の操作により
、弱酸性物質を含まずかつ１種類の溶媒のみを用いて調
製した比較用試験片ｌ（以下比較量ｌとする）を得た。

一含浸液一 無水マレイン酸 一イソブチレン共重合体傘　１５．２ｇ水酸化ナトリウ
ム　　　　　　　　７．８ｇピクリン酸　　　　　　　
　　　　　１．２　ｇを蒸留水１００１で溶解する。

比較例２゜ 実施例１の第２含浸液における弱酸性の物質であるヒド
ロキシプロピルセルロースＨを除いた他は実施例１と同
一の操作により１弱酸性の物質を含まない比較用試験片
２（以下比較量２とする）を得た。

本比較試験。

本発明品１〜６、並びに比較品１〜２を６０℃で１．３
．６、及び９日間放置し、その安定性を反応性と外観色
の変化から比較した。

反応性の変化は、クレアチニン水溶液（２００ｍｇ／ｄ
１）　１０３ＬＩを試験紙上に滴下し３７℃で２分間イ
ンキュベートした後１色差計を用いて４９５ｎｓでの呈
色を反射率（Ｒ−）測定によって読み取り、製造直後の
同じ操作によって得られた値を１００として比較した。

結果は第１表に示すとおりである。

又外観色の変化は、明度（Ｌ）、彩度（ａ）、色相（ｂ
）、という３つの尺度からなる色立方の空間的な位置に
よって決定される色座標の距離で表わされる外観色に関
与する数値を色差計で読み取って、各試験片の放置前と
放置後の差（ΔＥ）を調査した。結果は第２表に示すと
おりである。

第　　１　　表 以下余白 第　　２　　表 ［発明の効果］ 本発明のクレアチニン定量用試験片並びにその製法によ
れば、ピクリン酸の安定性を飛躍的に向上させることが
できる。比較量ｌと本発明品の反応性の変化を示すデー
タによれば、弱酸性の物質による反応性の低下抑制効果
は著しい。

他方比較量２は、弱酸性の物質を含んでいないのにもか
かわらず反応性の低下が認められない。

これは、第２表かられかるように試験片自体が次第に変
色していったため反応とは無関係な着色によって測定値
に正誤差を与えたことに起因するもので、試験片が安定
化されたことを示すものではない。

以上のように１本発明は非常に保存性が高い安定なりレ
アチニン定量用試験片とそれを容易に製造しうる製法を
提供するものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）アルカリ成分とピクリン酸を含むクレアチニン定量
   用試験片において、ピクリン酸の安定剤として弱酸性の
   物質を含んでなることを特徴とするクレアチニン定量用
   試験片 ２）弱酸性の物質が、ポリビニルピロリドン、ヒドロキ
   シプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリウ
   レタン、ポリエチレングリコール、ポリ酢酸ビニル、ポ
   リアクリル酸メチル、及びポリエチレンオキサイドから
   なる群から選択されることを特徴とする特許請求の範囲
   第１項に記載のクレアチニン定量用試験片 ３）吸収性担体を少なくともアルカリ成分を含む水系溶
   媒及び少なくともピクリン酸と弱酸性の物質を含む有機
   溶媒に順次浸漬し乾燥することを特徴とするクレアチニ
   ン定量用試験片の製法