JPH01112159A - 乾式免疫分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は抗原−抗体反応を利用する酵素免疫分析法によ
る免疫学的に有用な乾式免疫分析要素に関する。

〔従来の技術〕

体液などに含有されている生化学物質を定量する方法と
して種々の方法が知られているが、比較的怒度よく測れ
る方法として酵素免疫測定法が知られている。一方、簡
便さ、迅速性の観点から乾式分析要素を用いる方法が開
発されている（例えば、特開昭４９−５３８８８、特開
昭５５−１６４３５６、特開昭５９−１０２３８８）。

両技術を結合することにより乾式分析要素及び酵素免疫
測定法の欠点を互いに克服した乾式免疫分析要素の開発
が望まれていた。そこで、本発明者らは特開昭６１−８
００４９、特開昭６１−８００５０に記載の酵素抗体結
合物の基質として、水に不溶性の高分子物質を使用する
酵素免疫測定法を乾式分析要素に組込むことを試みた。

しかしながら、水に不溶性の高分子物質を乾式分析要素
に組込むのに、しばしば困難が生じた。そのため、その
結果は満足できるものではなかった。

そこで本発明者らは鋭意努力した結果、酵素抗体結合物
の基質として、水可溶性の高分子物質を使用することに
より、前記の諸問題点が著しく改善されることを見出し
、本発明に到達した。

［発明の目的〕 本発明の目的は簡便な操作で高感度の酵素免疫分析法を
実施することができる乾式免疫分析要素を提供すること
である。

〔発明の構成〕

本発明の前記目的は、少なくとも１つの水浸透性層を有
する、検体中のリガンドの測定のための酵素免疫分析法
による乾式免疫分析要素であって、前記水浸透性層中に
、 （Ａ）水溶性高分子物質、及び、 （Ｂ）検体中のリガンドと反応する抗体と前記水溶性高
分子物質に作用しうる酵素との結合物であるところの酵
素抗体結合物、 を含有することを特徴とする乾式免疫分析要素により達
成することができた。

〔発明の構成の詳細な説明〕

本発明の乾式免疫分析要素の測定対象は検体に含まれる
抗原決定基を有するリガンドである。検体の種類は限定
されないが、例えば血液（全血、血漿、血清）、リンパ
液、尿などである。血漿、血清、尿などの場合には、通
常特別な前処理を必要とせず、検体そのままについて測
定を行うことができる。

リガンドは抗原決定基を１又は２以上有しているもので
あり、例としては各種内分泌腺に由来するホルモン類、
免疫グロブリン、アルブミン、フェリチン等の血漿蛋白
質、ＨＢ抗原等のウィルス、バクテリア類、α−フェト
プロティン、癌関連性抗原等の各種臓器あるいは血中、
尿中に存在する抗原などである。本発明の乾式免疫分析
要素は特に高分子量のリガンド、例えば分子量約２万以
上のものの測定に威力を発揮する。

また、本発明に用いる抗体と前記水溶性高分子物質に作
用しうる酵素との結合物のその抗体はリガンドの抗原決
定基と反応するものである。この抗体にはＦ（ａｂ’）
ｚ、Ｆａｂ’、Ｆａｂなどのフラグメントも含まれる。

抗体の製造方法としてはリガンドと蛋白との結合物を兎
、山羊、馬、モルモット、ニワトリなどの溢血動物に体
重１ｋｇあたり０．３〜２■を１〜数回背中皮下、フッ
トパッド、大腿筋等にアジュバントとともに注射して当
該動物の体内に形成させる。この抗体は血清をそのまま
用いてもよく、血清から抗体すなわち免疫グロブリンを
採取する公知の方法によって精製してから用いてもよい
。

一方、この抗体はモノクローナル抗体として取得するこ
ともできる。その場合にはマウスに前記のいずれかの抗
原をアジュバントとともに数回腹腔等に注射し肺臓細胞
を取り出してポリエチレングリコール等を用いてマウス
ミエローマ細胞と融合させる。そして、この融合細胞の
なかから当該抗体を産生ずるものをクローニングによっ
てモノクローン細胞として増殖させ、マウス腹腔中で増
殖させることによって単一抗体、すなわちモノクローナ
ル抗体を大量に製造することができる。

一方、この結合物を構成している酵素は水溶性高分子物
質に作用しうるものである。使用するにあたっては活性
の測定方法が容易なものがよく、例えばこのような酵素
としてはアミラーゼ、デキストラナーゼ、セルラーゼ、
コラ−ゲナーゼ、マンナーゼ、プロテアーゼ、エラスタ
ーゼ、リパーゼ、グルコアミラーゼなどである。

これらの酵素の作用する水溶性高分子物質としては例え
ば澱粉、アミロース、アミロペクチン、ペプチド等をあ
げることができ、詳しくは丸尾、田宮、監修「酵素ハン
ドブックｊ（朝倉書店、１９８２年）、日本生化学会編
「生化学ハンドブックＪ（丸首、１９８０年）に記載さ
れている。

また、上記高分子物質には直接または間接に検出できる
官能基又は化合物がついていてもよい。

酵素と抗体との結合方法は双方の官能基を考慮して決定
すればよい。官能基は、アミノ基、カルボキシル基、水
酸基、チオール基、イミダゾール基、フェニル基などを
利用することができる。例えばアミノ基相互間を結合さ
せる場合には、ジイソシアネート法、グルタルアルデヒ
ド法、ジフル＝６＝ オワベンゼン法、ベンゾキノン法等数多く知られている
。また、アミノ基とカルボキシル基との間を結合させる
方法としては、カルボキシル基をサクシンイミドエステ
ル化する方法のはかカルボジイミド法、ウッドワード試
薬法等が知られており、アミノ基と糖鎖を架橋する過ヨ
ウ素酸酸化法（Ｎａｋａｎｅ法）もある。チオール基を
利用する場合には、例えばもう一方の側のカルボキシル
基をサクシンイミドエステル化してこれにシスティンを
反応させてチオール基を導入し、チオール基反応性二価
架橋試薬を用いて双方を結合することができる。

フェニル基を利用する方法としてはジアゾ化法、アルキ
ル化法などがある。結合方法はこれらの例示に限られる
ものではなく、このほか例えば団ｅ−ｔｈｏｄ　ｉｎ　
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙｊ　あるいは石川、河合、宮井編「酵素免疫
測定法」（医学書院、１９７８年発行）等の底置に記載
されている方法のなかから適宜選択して利用することが
できる。

反応後はゲル濾過法、イオン交換クロマトグラフィー、
アフィニティークロマトグラフィーなどを適宜組み合せ
て精製を行い、必要により凍結乾燥法等で乾燥する。

一方、結合物の酵素と同種の酵素が検体に含まれている
場合には、この検体中の酵素を阻害する程度が前記の結
合物に結合されている酵素の活性を阻害する程度より大
きい酵素阻害物質を接触させるのがよい。

この酵素阻害物質は検体に含まれている酵素を完全に失
活させかつ結合物に結合されている酵素を全く阻害しな
いものが最も望ましいことはいうまでもないが、実用上
は単に測定時においてブランク値を上昇させなければよ
く、測定後に酵素阻害物質が失活するなどしてこの酵素
活性が回復してもよい。この酵素阻害物質の作用が問題
になるもう一方の、酵素は抗体に結合されている状態の
ものであり、遊離状態では酵素阻害物によって失活する
ものであってもよい。この酵素阻害物質にはこのような
特異生を有する公知の酵素阻害物質を利用すればよいが
、そのほか、検体に含まれている酵素を温血動物に投与
してその抗体を取得し、これを酵素阻害物質として用い
ることもできる。

抗体の取得方法は前述のリガンドに対する抗体の取得方
法と同様でよい。

本発明は更にリガンドによる酵素活性の低下が不充分な
場合には、リガンドの他の決定基を認識し得る第２抗体
の使用が好ましい。第２抗体としては例えば、抗原をマ
ウス免疫して、モノクローナル抗体を取得し、その中で
お互いに異なる２種以上の抗原決定基に反応する抗体を
得、この異なる一方の抗体を第２抗体として用いること
もできる。

本発明は公知の多種の乾式分析要素と同様の層構成とす
ることができる。要素は多孔性層、後述する試薬層のほ
か、支持体、展開層、検出層、光遮蔽層、接着層、濾過
層、吸水層、下塗り層その他の層を含む多重層の構成を
有してもよい。かような分析要素として、米国特許第３
，９９２，１５８号、同４．０４２．３５３号および特
開昭５５−１６４３５６号各明細書定量示されたものが
ある。

光透過性水不透過性支持体を用いる場合、来光明の乾式
免疫分析要素は、実用的に次のような構成を採りうる。

もちろん本発明はこれに限定されるわけではない。

（１）支持体上に試薬層、その上に展開層を有するもの
。

（２）支持体上に検出層、試薬層、展開層をこの順に有
するもの。

（３）支持体上に試薬層、光反射層、展開層をこの順に
有するもの。

（４）支持体上に検出層、試薬層、光反射層、展開層を
この順に有するもの。

（５）支持体上に検出層、光反射層、試薬層、展開層を
この順に有するもの。

（６）支持体上に第二試薬層、光反射層、第一試薬層、
展開層をこの順に有するもの。

（７）支持体上に検出層、第二試薬層、光反射層、第一
試薬層、展開層をこの順に有するもの。

上記（１）ないしく５）において試薬層は異なる複数の
層から成ってもよい。また、試薬層は免疫反応しうる成
分を含む免疫試薬層であってもよい。支持＝１０− 体と試薬層または検出層との間には吸水層を設けてもよ
い。上記（１）ないしく３）と（６）において試薬層と
検出層または展開層の間に濾過層を設けてもよい。

上記（３）ないしく７）において光反射層と検出層、試
薬層または展開層との間、試薬層と検出層との間または
試薬層と展開層との間に、さらに濾過層を設けてもよい
。試薬層が複数層から成る場合に、試薬層と試薬層の間
にさらに濾過層を設けてもよい。

光透過性水不透過性支持体の材料として好ましいものは
ポリエチレンテレフタレート、ボリスヂレンである。親
水性層を強固に接着させるため通常、下塗り層を設ける
か、親水化処理を施す。

支持体としては光反射性又は光不透過性（不透明）で水
不透過性の支持体も用いることができる。

光反射性又は不透明支持体の例として、二酸化チタン微
粒子又は硫酸バリウム微粒子を分散含有させた白色又は
乳白色不透明ポリエチレンテレフタレートがある。

本発明の乾式分析要素の水浸透性層としては、親水性ポ
リマーを結合剤とする実質的に均一の層のほか、例えば
特開昭５８−７０１６３５号、特開昭６１−４９５９号
、特願昭６０−２５６４０８号、同６０−２７９８５９
号、同６゜−２７９８６０号、同６０−２７９８６１号
等に記載されたような多孔性層も好適である。親水性ポ
リマーとして例えば、ゼラチンおよびこれらの誘導体（
例えばフタル化ゼラチン）、セルロース誘導体（例えば
ヒドロキシメチルセルロース）、アガロース、アクリル
アミド共重体、メタアクリルアミド共重体、アクリルア
ミドまたはメタアクリルアミドと各種ビニル性モノマー
との共重合体等が利用できる。

多孔性層を構成する材料としては、例えば濾紙、不織布
、織物生地（例えば平織生地）、編物生地（例えば、ト
リコット編）、ガラス繊維濾紙等を用いることができる
。展開層としては、これらのうち織物、編物等が好まし
い。織物等は特開昭５７−６６３５９号に記載されたよ
うなグロー放電処理をしてもよい。展開層には、展開面
積、展開速度等を調節するため、特開昭６０−２２２７
７０号、特願昭６１−１２２８７５号、６１−１２２８
７６号、６１−１４３７５４号に記載したような親水性
高分子あるいは界面活性剤を含有してもよい。

免疫反応試薬層は、本発明の分析要素の主要な免疫反応
試薬組成物の成分である （八）水溶性高分子物質、及び、 （Ｂ）検体中のリガンドと反応する抗体と前記水溶性高
分子物質に作用しうる酵素との結合物であるところの酵
素抗体結合物、所望により更には第２抗体の一部又は全
部を含有する水浸透性層である。

免疫反応試薬層は、複数の層からなりたっていてもよい
。この場合、上記の各成分は複数の層にわかれて含有さ
れていてもよい。

さらに詳しくは、本発明の乾式分析要素において、酵素
抗体結合物（Ｌ）、水溶性高分子物質（Ｓ）は下表に記
載のような組合せで乾式免疫分析要素に含有されてもよ
い。

Ｏの中の数字は分析要素の１６を示す番号である。

■ いずれの態様においても、試薬層の支持体と反対側に展
開層を設けてもよいし、試薬層が展開層をかねていても
よい。また上記■〜■において、Ｌ、Ｓ以外の試薬（例
、呈色試薬）を含有する試薬層をさらに設けてもよい。

本発明の分析要素の試薬層に含有させることができる緩
衡剤の例としては、炭酸塩、ホウ酸塩、燐酸塩やｒ　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ　、　５　（２）　、　４６
７−４７７（１９６６）に記載されているＧｏｏｄの緩
衡剤などを挙げることができる。これらの緩衡剤は「蛋
白質・酵素の基礎実験法Ｊ（堀尾武−ほか著、南江堂、
１９８１年）、前記ｒＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｊ等
の文献を参考にして選択することができる。

多孔性層を展開層として利用する場合、液体計量作用（
メータリング作用）を有する層であることが好ましい。

液体計量作用とは、その表面に点着供給された液体試料
を、その中に含有している成分を実質的に偏在させるこ
となく面の方向上に単位面積当たりほぼ一定量の割合で
広げる作用である。

多孔性層を接着し積層するための接着層を試薬層、光反
射層、濾過層、吸水層、検出層等の層の上に設けてもよ
い。接着層は水で膨潤したときに多孔性層を接着するこ
とができるような親水性ポリマー、例えばゼラチン、ゼ
ラチン誘導体、ポリアクリルアミド、澱粉等からなるこ
とが好ましい。

光反射層は、検出層、試薬層等に生じた検出可能な変化
（色変化、発色等）を光透過性を有する支持体側から反
射測定する際に、展開層に点着供給された被検液の色、
特に試料が全血である場合のヘモグロビンの赤色等を遮
蔽するとともに背景層としても機能する。光反射層は、
親水性ポリマーをバインダーとして、二酸化チタン、硫
酸バリウム等の光反射性微粒子が分散された水浸透性の
層であることが好ましい。バインダーとしてはゼラチン
、ゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド、澱粉等からな
ることが好ましい。

分析要素には、光反射層を設ける代わりに、またはそれ
と同時に、展開層、試薬層、検出層等に二酸化チタン等
の光反射粒子を含有させてもよい。

本発明の乾式免疫分析要素は前述の諸特許明細書に記載
の公知の方法により調製することができる。

本発明の分析要素は一辺約１５ｍｍから約３０順の正方
形またはほぼ同サイズの円形等の小片に裁断し、特公昭
５７−２８３３１、実開昭５６−１４２４５４、特開昭
５７−６３４５２、実開昭５８−３２３５０、特表昭５
８−５０１１４４等に記載のスライド枠に収めて免疫ス
ライドとして用いることが、製造、包装、輸送、保存、
測定操作等諸種の観点で好ましい。使用目的によっては
、長いテープ状でカセットまたはマガジンに収めて用い
ること、または小片を開口のあるカードに添付または収
めて用いることなどもできる。

本発明の分析要素は前述の諸特許明細書等に記載の操作
により液体試料中のアナライトであるリガンドの分析を
実施できる。例えば、約５μεから約３０μｅ、好まし
くは約８μｐから約１５μｅの範囲の全血、血漿、血清
、リンパ液、尿等の水性液体試料滴を展開層に点着し１
分から１０分の範囲で、約２０°Ｃから約４０°Ｃの範
囲の実質的に一定の温度で、好ましくは３７°Ｃ近傍の
実質的に一定の温度でインクベーションし、要素内の発
色又は変色を可視光又は紫外光の吸収極大波長またはそ
の近傍の波長の光を用いて光透過性支持体から反射測光
し、予め作成した検量線を用いて比色測定法の原理によ
り液体試料中のリガンドの含有量を求めることができる
。あるいは、要素内の蛍光の強度を測定し、予め作成し
た検量線を用いて液体試料中のリガンド含有量を求める
ことができる。点着する液体試料の量、インクベーショ
ン時間及び温度を一定にすることによりリガンドの定量
分析を高精度で実施できる。光反射性又は不透明支持体
を用いる態様においては、分析要素内の発色又は変色を
支持体と反対側の最外層側から反射測定する。

測定操作は特開昭６０−１２５５４３、特開昭６０−２
２０８６２、特開昭６１−２９４３６７、特開昭５８−
１６１８６７等に記載の化学分析装置により極めて容易
な操作で高精度の定量分析を実施できる。

（合成例） （１）酵素抗体結合物の合成 ■ＣＨＭ化アミラーゼの作製 バチルス・サブチリスアミラーゼ５■をｐＨ６，３の０
．１Ｍグリセロ燐酸１戚に溶かし、ＣＨＭＳ２■／ｄの
ＤＭＦ溶液１００μｅを加えて室温で１時間放置して反
応させた。この反応液をセファデックスＧ−２５のカラ
ムに入れ、ｐ）１６．３の０．１Ｍグリセロ燐酸を流し
てゲル濾過を行ない、素通り分画を分取した。

■抗ヒトフェリチンヤギＩ　ｇＧ　Ｆ　（ａｂ’）ｚの
作製抗ヒトフェリチンヤギＩｇＧ１０■（０，１Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ４，２）　２蔵にペプシン０．５■を加え
、３７°Ｃ−夜撹拌し、０．１１１−ＮＡＯＨを加えて
ｐＨを７．０に調節した。この反応液を予め０．１Ｍ燐
酸緩衡１ｍＭＥＤＴＡ溶液（ｐＨ７，０）で平衡化した
ＡＣＡ−４４分子量約１０万付近に溶出されたピークの
部分を集めて１ｄに濃縮し、目的の抗ヒトフェリチンヤ
ギＩ　ｇＧ　Ｆ　（ａｂ’）ｚを得た。

■α−アミラーゼー抗ヒトフェリチンヤギＦ　ａｂ’結
合物の作製 抗ヒトフェリチンヤギＦ（ａｂ’）ｚ６■を含む１ｍＭ
ＥＤＴＡ含有０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７，０）　ｍｆ
ｌに０．１Ｍ２−メルカプトエチルアミン塩酸塩水溶液
１００μｅを加え、３７゛Ｃで２時間インキュベーショ
ンした。

この反応液を予め０．１Ｍグリセロ燐酸水溶液（ｐＨ７
，０）で平衡化したセファデックスＧ−２５のカラムで
分離しＦａｂ’−ＳＨ５ｍｇを分取した。このＦａｂ’
　−３Ｈ溶液に上記ＣＨＭアミラーゼ０．６２■加え、
４°Ｃ１−夜装置した。Ｐ　Ｅ　Ｃ−２０００でｌ　ｒ
ａに濃縮後、予め０．１Ｍ酢酸緩衝液（５ｍＭ塩化カル
シウム含有ｐＨ７，０）で平衡化したセファクリルＳ−
３００カラムでゲル濾過し、分子量２０−３０万ダルト
ン前後のタンパク分画を分取し、目的の結合物を得た。

実施例１ ゼラチン下塗層が設けられている厚さ１８０μｍの無色
透明ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）シート（支
持体）の上に下記の被覆量になるように架橋剤含有吸水
吸水層を水溶液を用いて塗布し、乾燥して設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　６．６ｍｇ／ｒｒｉ
ノニルフェノキシポリグリシドール （平均１０グリシド一ル単位含有）３３０■／ｒｒｆビ
ス〔（ビニルスルホニルメチルカルボニル）アミノコメ
タン　　　　　　　　　３８０■／ボ架橋剤含有吸水層
の上に下記の被覆量になるようにして検出層を水分散液
を用いて塗布し、乾燥して設けた。

酸処理ゼラチン　　　　　　　　　　１０ｇ／ボ重合体
水性ラテックス（１） （固形分含有量１０％）　　　　　　　　　３ｇ／ｎ（
ノニルフェノキシポリグリシドール （平均１０グリシド一ル単位含有）　　　　２ｇ／ｒｒ
ｒ検出層の上に下記の被覆量で乾燥層厚７ｐになるよう
にして光遮蔽層を水分散液を用いて塗布し、乾燥して設
けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　２．９ｇ／ｒｒｆル
チル型二酸化チタン微粒子　　　　１３　ｇ　／　ｒｒ
ｒノニルフェノキシポリグリシドール （平均１０グリシド一ル単位含有）４００■／ボ光遮蔽
層の上に下記の被覆量で乾燥層厚５叩になるようにして
接着層を水分散液を用いて塗布し、乾燥して設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　６．７ｇ／ｒｒｆノ
ニルフェノキシポリグリシドール （平均１０グリシド一ル単位含有）　　　６００ｍｇ／
ｒｒｆついで接着層の表面に水を３０ｇ／％の割合でほ
ぼ一様に供給して湿潤させ、その上に５０デニール相当
のＰＥＴ紡績糸３６ゲージ編した厚さ約２５０ｕＩＩｌ
のトリコツＩ−Ｗ物布地をほぼ一様に軽く圧力かけてラ
ミネート接着して多孔性展開層を設けた。

次に、下記の被覆量になるように基質及び免疫反応試薬
組成物を塗布、乾燥した。

ダイアミル−Ｌ（商品名）　　　　　３．５ｇ／ボα−
アミラーゼ抗ヒトフェリチンヤギＦａｂ’結合物（合成
例）　　　　　　　　　　　　　１■／■γノニルフエ
ノキシポリエトキシエタノール（平均４０オキシ工チレ
ン単位含有）　　　５００ｎ＋ｇ／ｍこれを一辺１５ｍ
ｍの正方形チップに裁断し、特開昭５８−３２３５０に
記載のスライドの枠に収めて、フェリチン分析用多層免
疫スライド（１）を完成した。

性能評価試験 前記のフェリチン分析用多層免疫スライド（１）の展開
層に、既知量のフェリチンを含有するｐ）１７の５０ｍ
Ｍグリセロ燐酸緩衝溶液ｉｏｐｇ滴下した。３７°Ｃで
３０分間反応後、支持体側より５４０ｎｍの反射光学濃
度を測定した。結果は第１図に示す。

第１図の検量線より、本発明のフェリチン分析用乾式免
疫分析要素はフェリチンの定量が精度よ〈実施できるこ
とがわかる。

実施例２ ゼラチン下塗層が設けられている厚さ１８０ｐの無色透
明ポリエチレンテレフタレー１−（ＰＥＴ）シート（支
持体）の上に下記の被覆量になるように架橋剤含有吸水
層を水溶液を用いて塗布し、乾燥して設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　６．６■／ボノニル
フエノキシボリグリシドール （平均１０グリシド一ル単位含有）　　　３３０ｍｇ／
ｒｄビス〔（ビニルスルホニルメチルカルボニル）アミ
ノコメタン　　　　　　　　　３８０ｍｇ／ｒｒｉ’架
橋剤含有吸水層の上に下記の被覆量になるようにして検
出層を水分散液を用いて塗布し、乾燥して設けた。

酸処理ゼラチン　　　　　　　　　　１０ｇ／ボ重合体
ラテックス（１）　　　　　　　　　３ｇ／ボノニルフ
エノキシボリグリシドール （平均１０グリシド一ル単位含有）　　２■／ボ検出層
の上に下記の被覆量で乾燥層厚７頗になるようにして光
遮蔽層を水分散液を用いて塗布し、乾燥して設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　２．９ｇ／ｒｒｆル
チル型二酸化チタン微粒子　　　　１３ｇ／ｎｆノニル
フェノキシポリグリシドール （平均１０グリシド一ル単位含有）　　　４００ｍｇ／
ｒｄ光遮蔽層の上に下記の被覆量で乾燥層厚５ｔＩｍに
なるようにして接着層を水分散液を用いて塗布し、乾燥
して設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　６．７ｇ／ｒｒｒノ
ニルフェノキシポリグリシドール （平均１０グリシド一ル単位含有）６００■／、７つい
で、接着層の表面に水を３０ｇ／　ｒｒｒの割合でぼぼ
一様に供給して湿潤させ、その上に公称孔径３．０４、
厚さ約１４０ｎのセルロースアセテートメンブランフィ
ルタ−をラミネート接着し、多孔性試薬層とした。

次に、下記塗布量となるように試薬を塗布乾燥した。

ダイアミル−Ｌ（商品名）　　　　　３．５ｇ／ボッニ
ルフェノキシポリエトキシエタノール（平均１０オキシ
工チレン単位含有）１００■／ボついで多孔性試薬層の
上に、下記組成の免疫反応用試薬組成物を含有させた、
５０デニール相当のＰＥＴ紡績糸３６ゲージ編した厚さ
約２５０１Ｍのトリコット編物布地をラミネート接着し
て多孔性展開層を設けた。

α−アミラーゼ−抗ヒトフェリチンヤギＦａｂ’結合物
（合成例）　　　　　　　　　２■／ボツニルフエノキ
シポリエトキシエタノール５００■／ボ これを−辺１５ｍｍの正方形チップに裁断し、特開昭５
８−３２３５０記載のスライドの枠に収めてフェリチン
分析用多層分析スライド（２）とした。

性能評価実験 実施例２のフェリチン分析用多層分析スライド（２）を
用いて、実施例１の性能評価実験と同様の手法によりフ
ェリチンを測定すると、第２図のようになった。

第２図の検量線から、本発明のフェリチン分析用乾式免
疫分析要素はフェリチンの定量が精度よ〈実施できるこ
とが明らかになった。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１のフェリチン分析用乾式免疫分析要素
の検量線を示す図である。 第２図は実施例２のフェリチン分析用乾式免疫分析要素
の検量線を示す図である。 特許出願人　富士レビオ株式会社 同　　　富士写真フィルム株式会社 代理人　　　弁理士　日中　政情　はか１名第１図 ７エリチン　（μ３／牟βン 第２図 フェリチン　（μ３　ｋ−１）

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）少なくとも１つの水浸透性層を有する、検体中の
   リガンドの測定ための酵素免疫分析法による乾式免疫分
   析要素であって、前記水浸透性層中に、（Ａ）水溶性高
   分子物質、及び、 （Ｂ）検体中のリガンドと反応する抗体と前記水溶性高
   分子物質に作用しうる酵素との結合物であるところの酵
   素抗体結合物、 を含有することを特徴とする乾式免疫分析要素。
2. （２）一体化された少なくとも２つの水浸透性層を有し
   、そのうちの少なくとも１層が多孔性層である特許請求
   の範囲第１項に記載の免疫分析要素。
3. （３）他の決定基を認識し得る第２抗体を用いることか
   らなる、特許請求の範囲第１項に記載の免疫分析要素。