JP7846624B2 - ペプチド含有リンカーとの部位特異的抗体－薬物コンジュゲート - Google Patents

ペプチド含有リンカーとの部位特異的抗体－薬物コンジュゲート

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、2020年1月9日に出願された米国仮出願第62/958,916号および2020年6月18日に出願された米国仮出願第63/040,735号の優先権および恩典を主張する。これらの出願の各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
配列表の参照による組み込み
2021年1月6日に作成され、サイズが49KBの「MRSN-029＿001WO＿SeqList.txt」という名称のテキストファイルの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
背景
従来、医薬品は、経口投与される（固体丸剤および液体として）かまたは注射剤として投与される小分子から主になっていた。過去30年間にわたって、製剤（すなわち、薬物送達の経路および/または速度を制御し、それが必要とされる部位での治療剤の送達を可能にする組成物）は、ますます一般的かつ複雑になってきている。それにもかかわらず、新しい治療の開発およびそれらを投与するための機構に関する多くの疑問および課題に、依然として対処しなければならない。例えば、多くの薬物は、一般に、体内の所望の標的に到達する前に部分的に分解され、標的以外の組織に蓄積し、および/または短い半減期を有するため、効力および治療効果が限られているか、またはそうでなければ低下している。
したがって、薬物送達系の分野における1つの目的は、薬物を安定化し、および/または半減期を延長し、生理学的機構もしくは化学的機構のいずれか、またはその両方を利用して治療剤のインビボ移動を制御することができる系を介して、特異的に標的とされた身体の領域にインタクトな薬物を送達することである。
抗体-薬物コンジュゲートは、標的特異的治療剤として開発されてきた。様々な癌細胞表面抗原に対する抗体が、マイクロチューブリン阻害剤（例えば、メイタンシノイド、オーリスタチンおよびタキサン、例えば、米国特許第5,208,020号（特許文献1）、米国特許第5,416,064号（特許文献2）、米国特許第6,333,410号（特許文献3）、米国特許第6,441,163号（特許文献4）、米国特許第6,340,701号（特許文献5）、米国特許第6,372,738号（特許文献6）、米国特許第6,436,931号（特許文献7）、米国特許第6,596,757号（特許文献8）および米国特許第7,276,497号（特許文献9）を参照）およびDNA相互作用治療薬（例えば、カリケアマイシン、ドキソルビシンおよびCC-1065類似体、例えば、米国特許第5,475,092号（特許文献10）、米国特許第5,585,499号（特許文献11）、米国特許第5,846,545号（特許文献12）、米国特許第6,534,660号（特許文献13）、米国特許第6,756,397号（特許文献14）および米国特許第6,630,579号（特許文献15）を参照）を限定されることなく含む様々な細胞傷害剤とコンジュゲートされている。これらの細胞傷害性薬物のいくつかとの抗体-薬物コンジュゲートは、癌治療のために臨床で積極的に検討されている（例えば、Ricart,A.D.,and Tolcher,A.W.,2007,Nature Clinical Practice,4,245-255（非特許文献1）;Krop et al.,2010,J.Clin.Oncol.,28,2698-2704（非特許文献2）を参照）。しかし、既存の抗体-薬物コンジュゲートには限界がある。主な限界は、十分な濃度の薬物を標的部位に送達することができないことであり、その理由は、標的抗原の数が限られているため、ならびに/またはオーリスタチン、メトトレキセート、ダウノルビシン、メイタンシノイド、タキサンおよびビンクリスチンなどの癌薬物の細胞傷害性が比較的中程度であるためである。顕著な細胞傷害性を達成するための1つの手法は、多数の薬物分子を抗体に直接的または間接的に結合することによる。しかし、そのような高度に修飾された抗体は、多くの場合、標的抗原への結合の障害、および/または血流からの迅速なインビボクリアランスを示す。したがって、薬物に関する最大の細胞傷害性が達成されるように、十分な濃度の薬物を標的に送達する能力を改善する必要がある。
共有結合を介して薬物部分を抗体にコンジュゲートすることは、一般に、薬物部分が抗体上のいくつかの部位に結合している、分子の不均一な混合物をもたらす。いくつかの態様では、細胞傷害性薬物は、典型的には、抗体のリジン残基またはシステイン残基を介して抗体にコンジュゲートされ、それによって、不均一な抗体-薬物コンジュゲート混合物が生成されている。反応条件に応じて、不均一な混合物は、典型的には、抗体の様々な部位に結合した0～約8個の薬物部分の分布を含む。コンジュゲーション反応から生じる不均一な混合物内のこれらの抗体-薬物コンジュゲート種分子を分離し、特性評価するには、分析方法および分取方法は不十分である。さらに、コンジュゲーションプロセスは、反応条件の制御が困難であるため、再現不可能である場合がある。したがって、（抗体内のコンジュゲーション部位に関して）部位特異性および/または（抗体と薬物との比に関して）化学量論を有する抗体-薬物コンジュゲートを再現可能に生成する必要がある。
米国特許第5,208,020号 米国特許第5,416,064号 米国特許第6,333,410号 米国特許第6,441,163号 米国特許第6,340,701号 米国特許第6,372,738号 米国特許第6,436,931号 米国特許第6,596,757号 米国特許第7,276,497号 米国特許第5,475,092号 米国特許第5,585,499号 米国特許第5,846,545号 米国特許第6,534,660号 米国特許第6,756,397号 米国特許第6,630,579号
Ricart,A.D.,and Tolcher,A.W.,2007,Nature Clinical Practice,4,245-255 Krop et al.,2010,J.Clin.Oncol.,28,2698-2704
概要
本開示は、部位特異性を有する抗体-薬物コンジュゲートを特徴とする。これらの部位特異的標的指向性部分-薬物コンジュゲートは、制御された薬物負荷量と、標的抗原への強い結合とを示す。いくつかの態様では、標的指向性部分は、タンパク質系認識分子（PBRM）である。本開示はまた、標的指向性部分-薬物コンジュゲートを得るために、PBRM、薬物またはその両方とコンジュゲートするのに有用なペプチド含有足場を特徴とする。
いくつかの局面では、本開示は、式（I’）の抗体-薬物コンジュゲート:
を提供し、
式中、
a2は、1～3の整数であり、
a3は、0～1の整数であり、
a4は、1～約5の整数であり、
a5は、1～3の整数であり、
d13は、1～約12の整数であり、
ANTIBODYは修飾抗体であり、
LP’は、修飾抗体をMPに接続する二価リンカー部分であり、その対応する一価部分LPは、修飾抗体の官能基と共有結合を形成することができる官能基WPを含み、
MPはストレッチャー単位であり、
LMは、結合、または三価リンカーもしくは四価リンカーであり、LMが結合である場合、a2は1であるか、LMが三価リンカーである場合、a2は2であるか、またはLMが四価リンカーである場合、a2は3であり、
L3はカルボニル含有部分であり、
MAは、少なくとも2つのアミノ酸を含むペプチド部分を含み、
T1は親水性基であり、T1とMAとの間の
は、T1とMAとの直接的または間接的な結合を示し、
Dの各存在は、独立して、約5kDa以下の分子量を有する治療剤であり、
LDの各存在は、独立して、DをMAに接続する二価リンカー部分であり、少なくとも1つの切断可能な結合を含み、その結果、結合が切断されると、Dは、その意図された治療効果のために活性形態で放出される。
いくつかの局面では、本開示は、式（XXX）のものである抗体-薬物コンジュゲート:
を提供し、
式中、各RAは
であり、
式中、d13は2であり、
抗体は、コンジュゲートの残部に接続されているN297に、1つまたは複数のアスパラギン基を含む。
本開示はまた、コンジュゲートを含む組成物、それらの調製方法、および、限定されることなく癌を含む様々な障害の治療におけるその使用方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において記載される足場またはコンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物にさらに関する。
いくつかの局面では、本開示は、抗体-薬物コンジュゲートを調製する方法に関する。
いくつかの局面では、本開示は、本明細書において記載される1つまたは複数の工程を含む、抗体-薬物コンジュゲートを調製する方法に関する。
いくつかの態様では、本開示は、約7mg/m2～約162mg/m2の用量で、治療の初日、およびその後3週間ごとまたは4週間ごとに、有効量のコンジュゲートが対象に投与される、コンジュゲートまたは方法に関する。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象の障害（例えば癌）を治療する方法に関する。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象のNaPi2b発現癌を治療する方法に関する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象の障害（例えば癌）を治療するための医薬品の製造における、本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象のNaPi2b発現癌を治療するための医薬品の製造における、本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象の障害（例えば癌）を治療するための、本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象のNaPi2b発現癌を治療するための、本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象の障害（例えば癌）を治療するのに使用するためのコンジュゲートを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象のNaPi2b発現癌を治療するのに使用するためのコンジュゲートを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、障害を有すると疑われる対象の障害を診断する方法に関する。方法は、障害を有すると疑われる対象に本明細書において記載されるコンジュゲートの有効量を投与するか、または対象から得られた試料中の標的抗原/受容体を検出するアッセイを行って、対象が標的抗原もしくは受容体を発現するかどうかを決定する工程を含む。
別段の定義がない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書において、単数形は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、複数形も含む。本明細書において記載されるものと同様または同等の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、好適な方法および材料を以下に記載する。本明細書において言及されるすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、参照により組み入れられる。本明細書において引用される参考文献は、主張される発明の先行技術であるとは認められない。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先される。さらに、材料、方法および実施例は、単なる例示であり、限定することを意図するものではない。
[本発明1001]
式（XXX）のものである抗体-薬物コンジュゲート:
式中、各R A は
であり、
式中、d 13 は2であり、
抗体は、コンジュゲートの残部に接続されているN297に、1つまたは複数のアスパラギン基を含む。
[本発明1002]
式（XXX）のものである、前記本発明のいずれかのコンジュゲート:
式中、各R A は
であり、
式中、d 13 は2であり、
抗体は、コンジュゲートの残部に接続されているN297に、1つまたは複数のアスパラギン基を含む。
[本発明1003]
各R A が
である、前記本発明のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1004]
各R A が
である、前記本発明のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1005]
各R A が
である、前記本発明のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1006]
各R A が
である、前記本発明のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1007]
各R A が
である、前記本発明のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1008]
各R A が
である、前記本発明のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1009]
各R A が
である、前記本発明のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1010]
各R A が
である、前記本発明のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1011]
各R A が
である、前記本発明のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1012]
以下の式のものであるコンジュゲート:
式中、
d 13 は2であり、
ANTIBODYは、
アミノ酸配列
を含むCDRH1と、
アミノ酸配列
を含むCDRH2と、
アミノ酸配列
を含むCDRH3と、
アミノ酸配列
を含むCDRL1と、
アミノ酸配列
を含むCDRL2と、
アミノ酸配列
を含むCDRL3と
を含むNaPi2b抗体であり、
抗体は、コンジュゲートの残部に接続されているN297に、1つまたは複数のアスパラギン基を含み、
はGlcNAcであり、
はFucであり、
はGalNAcである。
[本発明1013]
NaPi2b抗体が、SEQ ID NO:1の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:2の軽鎖アミノ酸配列とを含む、本発明1012のコンジュゲート。
[本発明1014]
以下の式のものであるコンジュゲート：
式中、
d 13 は2であり、
ANTIBODYは、
アミノ酸配列
を含むCDRH1と、
アミノ酸配列
を含むCDRH2と、
アミノ酸配列
を含むCDRH3と、
アミノ酸配列
を含むCDRL1と、
アミノ酸配列
を含むCDRL2と、
アミノ酸配列
を含むCDRL3と
を含むNaPi2b抗体であり、
抗体は、コンジュゲートの残部に接続されているN297に、1つまたは複数のアスパラギン基を含み、
はGlcNAcであり、
はFucであり、
はGalNAcである。
[本発明1015]
NaPi2b抗体が、SEQ ID NO:1の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:2の軽鎖アミノ酸配列とを含む、本発明1014のコンジュゲート。
[本発明1016]
修飾抗体を表Bに記載の足場から選択される足場と反応させ、それによって、部位特異的抗体-薬物コンジュゲートを形成する工程を含む、抗体-薬物コンジュゲートを調製するための方法であって、
抗体と、抗体の部位N297に接続されたコア-GlcNAc部分とを含む糖タンパク質を、エンドグリコシダーゼEndo SHと接触させ、それによって、末端GlcNAc部分を含む中間抗体を形成すること、およびβ-（1,4）-GalNAcT酵素の存在下で中間抗体を4-AzGalNAc-UDPと接触させ、それによって、修飾GlcNAc部分を含む修飾抗体を形成することによって、該修飾抗体が得られ、
工程（a）および（b）が、同時に行われる、方法。
[本発明1017]
前記本発明のいずれかのコンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
[本発明1018]
有効量のコンジュゲートが対象に投与される、癌の治療を必要とする対象の癌を治療するための前記本発明のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1019]
前記本発明のいずれかのコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、癌の治療を必要とする対象の癌を治療する方法。
[本発明1020]
癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、子宮内膜癌、乳頭状腎細胞癌、唾液管癌、乳頭様甲状腺癌、腎明細胞癌、乳癌、腎癌、子宮頸癌および胆管癌から選択されるNaPi2b発現癌である、本発明1019の方法。
[本発明1021]
NaPi2b発現癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、子宮内膜癌、乳頭状腎細胞癌、唾液管癌または乳頭様甲状腺癌である、本発明1020の方法。
[本発明1022]
NaPi2b発現癌が、卵巣癌または非小細胞肺癌（NSCLC）である、本発明1020の方法。
[本発明1023]
コンジュゲートの有効量が、約7mg/m 2 ～約162mg/m 2 の用量で、治療の初日、およびその後3週間ごとまたは4週間ごとに対象に投与される、本発明1020の方法。
[本発明1024]
用量が、約7mg/m 2 ～約162mg/m 2 （例えば、7mg/m 2 、14mg/m 2 、28mg/m 2 、56mg/m 2 、84mg/m 2 、112mg/m 2 、135mg/m 2 または162mg/m 2 である、本発明1020の方法。
[本発明1025]
卵巣癌がプラチナ抵抗性卵巣癌である、本発明1020の方法。
[本発明1026]
卵巣癌が高悪性度漿液性卵巣癌である、本発明1020の方法。
[本発明1027]
卵巣癌がプラチナ抵抗性の高悪性度漿液性卵巣癌である、本発明1020の方法。
[本発明1028]
卵巣癌が、先行する単剤化学療法を受けたことがある、本発明1020の方法。
[本発明1029]
卵巣癌を有する対象が、3ライン以下の先行治療ラインを受けたことがある、本発明1020の方法。
[本発明1030]
卵巣癌を有する対象が、プラチナ含有レジメンの少なくとも1つのラインを含む、3ライン以下の先行治療ラインを受けたことがある、本発明1020の方法。
[本発明1031]
卵巣癌を有する対象が、プラチナ含有レジメンの少なくとも1つのラインの有無にかかわらず、4ライン以下の先行治療ラインを受けたことがある、本発明1020の方法。
[本発明1032]
NSCLCが、腺癌としてサブタイプ分類される、本発明1020の方法。
[本発明1033]
対象が、NSCLCを有し、プラチナベースの化学療法（シスプラチンまたはカルボプラチン）、およびPD-1モノクローナル抗体またはPD-L1モノクローナル抗体による先行治療を受けたことがある、本発明1020の方法。
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
抗体グリカンの異なるグリコフォーム（G0、G1、G2、G0F、GIF、G2FおよびM5）を示すグラフである。 エンドグリコシダーゼの存在下でのグリコフォームG0、G1、G2、G0F、GIF、G2FおよびM5の混合物の脱グリコシル化を示すスキームである。 グリコシルトランスフェラーゼの存在下で、末端GlcNAc部分を含む中間抗体を、アジド修飾されたUDP-GalNAc誘導体分子と反応させる、アジド修飾抗体の調製プロセスを示すスキームである。 アジド修飾抗体を調製するプロセスの一態様を示すスキームである。 アジド修飾抗体が、歪みシクロアルキニル基（strained cycloalkynyl group）を含むリンカー-薬物部分にコンジュゲートされる、抗体-薬物コンジュゲートを調製するプロセスの一態様を示すスキームである。 修飾抗体を示すグラフである。 OVCAR3腫瘍担持マウスモデルにおける、ペイロード単位で0.05mg/kgまたは0.1mg/kgのXMT-1535抗体-薬物コンジュゲート、コンジュゲート11、ペイロード単位で0.025mg/kg、0.05mg/kgまたは0.1mg/kgのコンジュゲート7、およびペイロード単位で0.1mg/kgの非結合対照コンジュゲート10の抗腫瘍効果を示すグラフである。 NSCLC PDX CTG-0852マウスモデルにおける、ペイロード単位で0.025mg/kg、0.05mg/kgまたは0.1mg/kgのXMT-1535抗体-薬物コンジュゲート、コンジュゲート7、およびペイロード単位で0.05mg/kgまたは0.1mg/kgの非結合対照コンジュゲート10の抗腫瘍効果を示すグラフである。 JIMT-1腫瘍担持マウスモデルにおける、ペイロード単位で0.067mg/kgおよび0.199mg/kgのHER2抗体-薬物コンジュゲート、コンジュゲート9およびコンジュゲート13の抗腫瘍効果を示すグラフである。 JIMT-1腫瘍担持マウスモデルにおける、それぞれペイロード単位で0.017mg/kg、0.033mg/kgまたは0.067mg/kgのHER2抗体-薬物コンジュゲート、コンジュゲート8およびコンジュゲート12、ならびにペイロード単位で0.067mg/kgの非結合対照抗体-薬物コンジュゲート、コンジュゲート10の抗腫瘍効果を示すグラフである。 コンジュゲート11またはコンジュゲート7の曝露に応答したラットにおける毒性学的パラメータ（それぞれAST、ALT、ALP、RBC、WBC、好中球、リンパ球およびヘモグロビン）の上昇を示す。 図１１の説明を参照。 図１１の説明を参照。 図１１の説明を参照。 図１１の説明を参照。 図１１の説明を参照。 図１１の説明を参照。 図１１の説明を参照。 コンジュゲート8またはコンジュゲート12の曝露に応答したラットにおける重要な毒性学的パラメータ（それぞれAST、ALTおよびALP）の上昇を示す。 図１９の説明を参照。 図１９の説明を参照。
詳細な説明
本開示は、新規な標的指向性部分-薬物コンジュゲート、コンジュゲートを調製するための足場、コンジュゲートまたは足場を調製するための合成方法、足場および/またはコンジュゲートを含有する薬学的組成物、ならびにそれらの様々な使用を提供する。
定義
いくつかの態様では、本開示の化合物、および特定の官能基の定義がまた、本明細書においてさらに詳細に記載される。本開示の目的のために、Periodic Table of the Elements,CAS version,Handbook of Chemistry and Physics,75th Ed.、内表紙に従って化学元素を同定し、その中に記載されるように特定の官能基を一般に定義する。加えて、有機化学の一般原理、ならびに特定の官能性部分および反応性は、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる"Organic Chemistry",Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito:1999に記載されている。さらに、本明細書において記載される合成方法は、様々な保護基を利用することが当業者には理解されるであろう。
以下の説明および特許請求の範囲の両方における冠詞「1つの（a）」、「1つの（an）」および「その（the）」の使用は、本明細書において別段の指定がない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、単数および複数の両方を網羅すると解釈されるべきである。「化学式のものである」におけるような用語「含む（comprising）」、「有する」、「のものである」、「含む（including）」および「含有する（containing）」は、特に明記しない限り、オープン用語（すなわち、「限定されることなく含む」を意味する）として解釈されるべきであり、追加の要素または工程の包含を許容するが、必要としない。いくつかの態様では、特定の式の足場は、その式に示されるあらゆる成分を含み、その式に示されない追加の成分も含み得る。さらに、「含む（comprising）」または別のオープンエンド用語が態様で使用される場合はいつでも、中間用語「から本質的になる」または限定用語（closed term）「からなる」を使用して、同じ態様がさらに狭く主張され得ることを理解されたい。
本明細書において使用される場合、「A、BまたはCのうちの1つまたは複数」、「1つまたは複数のA、BまたはC」、「A、BおよびCのうちの1つまたは複数」、「1つまたは複数のA、BおよびC」などの表現は、区別なく使用され、A、Bおよび/またはC、すなわち、1つもしくは複数のA、1つもしくは複数のB、1つもしくは複数のC、またはそれらの任意の組合せからの選択をいずれも指す。
用語「約」、「およそ」または「ほぼ」は、数値に関連して使用される場合、値の集合または範囲が含まれることを意味する。例えば、「約X」は、Xの±25％、±20％、±15％、±10％、±5％、±2％、±1％、±0.5％、±0.2％または±0.1％である値の範囲を含み、ここで、Xは数値である。
値の範囲の列挙は、本明細書において別段の指定がない限り、その範囲内に入る各別個の値を個別に参照する簡略方法として役立つことを意図しているにすぎず、各別個の値は、あたかもそれが本明細書において個別に列挙されているかのように本明細書に組み入れられる。本明細書において使用される範囲は、特に明記しない限り、その範囲の2つの限界を含む。例えば、「xは1～6の整数である（x being an integer between 1 and 6）」および「xは1～6の整数である（x being an integer of 1 to 6）」という表現は、いずれも「xは、1、2、3、4、5または6である」を意味し、すなわち、用語「X～Y」および「X～Yの範囲」は、XおよびYならびにそれらの間の整数を含む。
「保護基」:本明細書において使用される場合、保護基という用語は、多官能性化合物の別の反応部位で選択的に反応を行うことができるように、特定の官能性部分、例えば、O、SまたはNが一時的にブロックされることを意味する。本明細書において詳述されるように、酸素保護基、硫黄保護基、窒素保護基および炭素保護基が利用され得る。いくつかの態様では、例示的な酸素保護基が利用され得る。いくつかの態様では、窒素保護基が利用される。いくつかの態様では、例示的な硫黄保護基が利用され得る。さらに、様々な保護基が、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる"Protective Groups in Organic Synthesis" Third Ed.Greene,T.W.and Wuts,P.G.,Eds.,John Wiley＆Sons,New York:1999に記載されている。
「脱離基」は、不均等結合開裂において一対の電子によって脱離する分子フラグメントを指す。脱離基は、アニオンまたは中性分子であり得る。脱離基には、限定されることなく、ハロゲン化物、例えば、Cl-、Br-およびI-、スルホン酸エステル、例えば、パラ-トルエンスルホネート（「トシレート」、TsO-）およびRC（O）O-が含まれ、式中、Rは、H、脂肪族部分、複素脂肪族部分、炭素環式部分またはヘテロシクロアルキル部分である。
「糖」は、単糖、例えば、グルコース（Glc）、ガラクトース（Gal）、マンノース（Man）およびフコース（Fuc）を指す。用語「糖誘導体」は、単糖糖の誘導体、すなわち、置換基および/または官能基を含む単糖糖を指す。糖誘導体の例には、限定されることなく、アミノ糖および糖酸が挙げられる。糖誘導体の例にはまた、S’（F’）X1として示される化合物も挙げられ、式中、S’は糖または糖誘導体であり、F’は官能基であり、x1は官能基の数を示す。
本明細書において使用される用語「コア-GlcNAc部分」は、抗体（例えば、GlcNAcのC1位を介して）に結合したGlcNAc（例えばコア-GlcNAc）を含む単糖部分、多糖部分またはオリゴ糖部分を指す。いくつかの態様では、GlcNAcは、抗体のアスパラギンアミノ酸の側鎖のアミド窒素原子へのN-グリコシド結合を介して抗体に結合している。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、抗体の天然のグリコシル化部位に存在するか、または抗体の異なる部位に導入される。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は単糖である（例えば、コア-GlcNAc部分は末端GlcNAc部分でもある）。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、フコースをさらに含み、例えば、コア-GlcNAc部分は二糖コア-GlcNAc-（α1-6-Fuc）部分（GlcNAc（Fuc）と呼ばれ得る）である。したがって、抗体がコア-GlcNAc部分を含む場合、抗体は、単糖コア-GlcNAc部分または二糖コア-GlcNAc部分を含み得、コア-GlcNAc部分は、フコース（例えば二糖コア-GlcNAc（Fuc）部分）をさらに含み得る。コア-GlcNAc部分がフコースをさらに含む場合、フコースは、コア-GlcNAc部分のα-1,6からO-6に結合され得る。フコースをさらに含むコア-GlcNAc部分は、コア-GlcNAc（Fuc）と呼ばれ得る。
用語「コア-GlcNAc」は、多糖またはオリゴ糖の一部である内部GlcNAcを指し、多糖またはオリゴ糖は、内部GlcNAcを介して抗体に結合している。
本明細書において使用される用語「末端GlcNAc部分」は、抗体に結合し、追加の修飾（例えば、P''-S''-A''の化合物による）に利用可能な末端官能基を有するGlcNAcを含む部分を指す。いくつかの態様では、末端GlcNAc部分は、フコースをさらに含む。いくつかの態様では、末端GlcNAc部分は、糖タンパク質（例えば抗体グリカン）のコア-GlcNAc部分をエンドグリコシダーゼと反応させることによって形成される。
「ヌクレオチド」は、その通常の科学的な意味で使用され、核酸塩基と、5炭素糖（リボースまたは2-デオキシリボースのいずれか）と、1、2または3個のリン酸基とから構成される分子を指す。リン酸基がなければ、核酸塩基と糖とは、ヌクレオシドを構成する。したがって、ヌクレオチドは、ヌクレオシド一リン酸、ヌクレオシド二リン酸またはヌクレオシド三リン酸とも呼ばれ得る。核酸塩基は、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシルまたはチミンであり得る。
「タンパク質」は、その通常の科学的な意味で使用され、約10個以上のアミノ酸を含むポリペプチドを含む。タンパク質は、天然アミノ酸または非天然アミノ酸を含み得る。
「糖タンパク質」は、本明細書において、その通常の科学的な意味で使用され、タンパク質に共有結合した1つまたは複数の単糖鎖またはオリゴ糖鎖（「グリカン」）を含むタンパク質を指す。グリカンは、タンパク質上のヒドロキシル基（O-結合グリカン）、タンパク質上のアミド機能（N-糖タンパク質）、またはタンパク質上の炭素（C-糖タンパク質）に結合していてもよい。糖タンパク質は、複数のグリカンを含み得、1つまたは複数の単糖グリカンと1つまたは複数のオリゴ糖グリカンとの組合せを含み得、N-結合グリカンとO-結合グリカンとC-結合グリカンとの組合せを含み得る。全タンパク質の50％超が何らかの形態のグリコシル化を有し、したがって、糖タンパク質として適格であると推定される。
「グリカン」は、本明細書において、その通常の科学的な意味で使用され、タンパク質に結合された単糖鎖またはオリゴ糖鎖を指す。したがって、グリカンとは、糖タンパク質の炭水化物部分を指す。グリカンは、1つの糖のC-1炭素を介してタンパク質に結合しており、追加の置換を伴わなくてもよいか（単糖）、またはそのヒドロキシル基のうちの1つもしくは複数でさらに置換されていてもよい（オリゴ糖）。天然に存在するグリカンは、典型的には、1～約10個の糖部分を含む。ただし、さらに長い糖鎖がタンパク質に結合されている場合、該糖鎖もグリカンと考えられる。糖タンパク質のグリカンは、単糖であり得る。グリカンは、オリゴ糖であってもよい。糖タンパク質のオリゴ糖鎖は、直鎖状または分岐状であり得る。オリゴ糖では、タンパク質に直接結合している糖は、コア糖と呼ばれる。オリゴ糖では、タンパク質に直接結合しておらず、少なくとも2つの他の糖に結合している糖は、内部糖と呼ばれる。オリゴ糖では、タンパク質に直接結合していないが、単一の他の糖に結合している、すなわち、その他のヒドロキシル基のうちの1つまたは複数に追加の糖置換基を有しない糖は、末端糖と呼ばれる。誤解を避けるために、糖タンパク質のオリゴ糖には複数の末端糖が存在し得るが、コア糖は1つだけである。グリカンは、O-結合グリカン、N-結合グリカンまたはC-結合グリカンであり得る。脱結合された（delinked）グリカンでは、単糖グリカンまたはオリゴ糖グリカンは、タンパク質のアミノ酸のC原子に結合している。
「グリコシルトランスフェラーゼ」は、糖タンパク質および糖脂質上に存在する複雑な炭水化物の合成に関与する酵素のスーパーファミリーを指す。
「N-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ」（GalNAc-T）は、タンパク質へのN-アセチル-D-ガラクトサミンの付加を触媒するN-アセチル-D-ガラクトサミントランスフェラーゼ酵素である。
本明細書において使用される「生体適合性」は、体液または生細胞もしくは組織と接触している間に最小限の破壊的効果または宿主応答効果を発揮する化合物を記載することを意図している。したがって、本明細書において使用される場合、生体適合性基とは、上記および本明細書において定義される生体適合性という用語の定義に含まれる脂肪族部分、シクロアルキル部分、複素脂肪族部分、ヘテロシクロアルキル部分、アリール部分またはヘテロアリール部分を指す。本明細書において使用される用語「生物的適合性」はまた、そのような相互作用が特に望ましい場合を除き、化合物が認識タンパク質、例えば、天然に存在する抗体、細胞タンパク質、細胞、および生物系の他の成分との最小の相互作用を示すことを意味すると解釈される。したがって、上記の最小限の相互作用を引き起こすことを特に意図した物質および官能基、例えば、薬物およびプロドラッグは、生体適合性であると考えられる。いくつかの態様では、化合物は（細胞傷害性であることが意図される化合物、例えば、抗新生物剤などを除いて）、意図された全身インビボ濃度と同様の濃度でそれらをインビトロで正常細胞に加えると、インビボでの化合物の半減期と同等の時間（例えば、インビボで投与された化合物の50％が排除/除去されるのに必要な期間）中に1％以下の細胞死がもたらされ、インビボでそれらを投与すると、最小限の医学的に許容される炎症、異物反応、免疫毒性、化学毒性および/または他のそのような有害作用が誘発される場合、「生体適合性」である。上記の文では、用語「正常細胞」は、試験される化合物によって破壊されることを意図していないか、またはそうでなければ顕著に影響を受けない細胞を指す。
「生分解性」:本明細書において使用される場合、「生分解性」化合物または部分とは、細胞に取り込まれた際に、リソソーム機構もしくは他の化学機構によって、または細胞に対する著しい毒性作用を伴わず細胞が再利用もしくは処理することができる成分への加水分解によって分解され得るものである。本明細書において使用される用語「生体切断性（biocleavable）」は、「生分解性」と同じ意味を有する。いくつかのコンジュゲート（またはそれらの成分、例えば、ペプチド含有足場、および足場と抗体または薬物分子との間のリンカー）の生分解はまた、例えば、動物の身体の低pH領域、例えば、炎症領域、活性化マクロファージ、または分解促進因子を放出する他の細胞のごく近傍では、細胞外で増強され得る。本明細書において開示されるコンジュゲートまたは足場の完全性は、例えば、サイズ排除HPLCまたはLC/MSによって測定され得る。場合により、さらに速い分解が好ましい場合があるが、一般に、本明細書において開示されるコンジュゲートまたは足場は、細胞によるそれらの断片の代謝または排出の速度を超えない速度で細胞内で分解することが比較的望ましい場合がある。いくつかの態様では、本明細書において開示されるコンジュゲートまたは足場の生分解性副生成物は、生体適合性である。
「親水性」:用語「親水性」は、当技術分野におけるこの用語の一般的な意味と本質的に異ならず、イオン化可能な、極性の、もしくは分極可能な原子を含むか、またはそうでなければ水分子によって溶媒和され得る化学部分を意味する。したがって、本明細書において使用される親水性部分または親水性基とは、上記で定義された親水性という用語の定義に含まれる脂肪族部分、シクロアルキル部分、複素脂肪族部分、ヘテロシクロアルキル部分、アリール部分またはヘテロアリール部分を指す。本明細書において開示される化合物（薬物、コンジュゲートおよび足場を含む）の親水性は、水和エネルギーの決定によって直接測定され、2つの液相間の調査、HICクロマトグラフィー、または公知の疎水性を有する固相のクロマトグラフィーによって決定され得る。
「多糖」、「炭水化物」または「オリゴ糖」:用語「多糖」、「炭水化物」または「オリゴ糖」は、当技術分野において公知であり、一般にn＞2である化学式（CH2O）nを有する物質およびそれらの誘導体を一般に指す。炭水化物は、ポリヒドロキシアルデヒドもしくはポリヒドロキシケトンであるか、または加水分解、酸化もしくは還元などの単純な化学変換によってそのような物質に変化する。これらの環状単位（単糖）は、互いに接続して、少数（オリゴ糖）または数個（多糖）の単糖単位を有する分子を形成し得る。多くの場合、単糖単位の明確な数、種類および位置を有する炭水化物はオリゴ糖と呼ばれるのに対して、可変数の分子の混合物および/または単糖単位の位置からなる炭水化物は多糖と呼ばれる。用語「多糖」、「炭水化物」および「オリゴ糖」は、本明細書において区別なく使用される。多糖には、天然糖、および/または天然に存在する糖の誘導体が含まれ得る。
「薬物」:本明細書において使用される場合、用語「薬物」は、生物学的に活性であり、それを必要とする対象への投与後に所望の生理学的効果を提供する化合物（例えば活性薬学的成分）を指す。
「プロドラッグ」:本明細書において使用される場合、用語「プロドラッグ」は、活性薬物の前駆体、すなわち、活性薬物に変換され得る化合物を指す。典型的には、そのようなプロドラッグは、薬物を生理学的に活性な形態に変換する、インビボでのプロセシングを受ける。いくつかの例では、プロドラッグ自体が所望の生理学的効果を有し得る。所望の生理学的効果は、例えば、治療的、細胞傷害性、免疫調節性などであり得る。
「細胞傷害性」:本明細書において使用される場合、用語「細胞傷害性」は、細胞または選択された細胞集団（例えば癌細胞）に対して毒性であることを意味する。毒性作用は、細胞死および/または溶解をもたらし得る。いくつかの態様では、毒性作用は、細胞に対する亜致死的な破壊作用、例えば、細胞増殖の遅延または停止であり得る。細胞傷害効果を達成するために、薬物またはプロドラッグは、とりわけ、DNA損傷剤、微小管破壊剤、または細胞傷害性タンパク質もしくは細胞傷害性ポリペプチドであり得る。
「細胞増殖抑制性」:本明細書において使用される場合、用語「細胞増殖抑制性」は、細胞増殖（cell growth）および/または細胞増殖（cell multiplication）を阻害するかまたは停止させる薬物または他の化合物を指す。
「小分子」:本明細書において使用される場合、用語「小分子」は、天然に存在するか、または人工的に作製されたか（例えば、化学合成を介して）にかかわらず、比較的低い分子量を有する分子を指す。いくつかの態様では、小分子は、動物、（例えば、哺乳動物、ヒト）に対して局所的または全身的な効果をもたらすという点で生物学的に活性である。いくつかの態様では、小分子は薬物であり、小分子は「薬物分子」または「薬物」または「治療剤」と呼ばれる。いくつかの態様では、薬物分子は、約5kDa以下（例えば約1.5kDa以下）のMWを有する。いくつかの態様では、薬物分子は、いずれも参照により本明細書に組み入れられる"Pharmaceutical Substances:Syntheses,Patents,Applications" by Axel Kleemann and Jurgen Engel,Thieme Medical Publishing,1999および"Merck Index:An Encyclopedia of Chemicals,Drugs,and Biologicals",Edited by Susan Budavari et al.,CRC Press,1996に見出される化合物から選択される。いくつかの態様では、本開示において使用される薬物は、標的細胞または標的経路に対する抗増殖（細胞増殖抑制性および/または細胞傷害性）活性を有する治療剤である。
本明細書において使用される「活性形態」は、インビボまたはインビトロで意図された薬学的効果を示す化合物の形態を指す。特に、本開示のコンジュゲートによって送達されることが意図された薬物分子がコンジュゲートから放出される場合、活性形態は、意図された治療特性を示す薬物自体またはその誘導体であり得る。コンジュゲートからの薬物の放出は、薬物を本開示の足場またはコンジュゲートに結合するリンカーの生分解性結合の切断によって達成され得る。
「診断標識」:本明細書において使用される場合、診断標識という用語は、当技術分野において公知の分析方法を使用してインビボまたはエクスビボで検出され得る原子、原子群、部分もしくは官能基、ナノ結晶、または組成物の他の個別の要素を指す。本開示のコンジュゲートと会合する場合、そのような診断標識は、コンジュゲートのインビボでのモニタリングを可能にする。代替的または追加的に、診断標識を含む構築物および組成物を使用して、生物学的機能または生物学的構造をモニタリングすることができる。
「動物」:本明細書において使用される場合、動物という用語は、ヒト、ならびに、例えば、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、虫および単細胞を含む、任意の発達段階の非ヒト動物を指す。いくつかの態様では、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、齧歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、霊長類またはブタ）である。動物は、トランスジェニック動物またはヒトクローンであり得る。用語「対象」は、動物を包含する。
「効率的な量」:用語「効率的な量」は、一般に、活性剤または薬物送達装置を指すことから、所望の生物学的応答を誘発するのに必要な量を指す。当業者には理解されるように、薬剤または装置の効率的な量は、所望の生物学的エンドポイント、送達される薬剤、封入マトリックスの組成、標的組織などの因子に応じて変化し得る。
本明細書において使用される「天然アミノ酸」は、天然に存在するタンパク質またはその立体異性体に見られる一般的な天然に存在するL-アミノ酸のいずれか1つを指す。別段特定されない限り、アミノ酸への言及は、アミノ酸自体およびその立体異性体を含む。
本明細書において使用される「非天然アミノ酸」は、天然アミノ酸ではない任意のアミノ酸を指す。これには、例えば、α-、β-、γ-、D-、L-アミノアシル残基を含むアミノ酸が含まれる。さらに一般的には、非天然アミノ酸は、側鎖Rが天然に存在するアミノ酸側鎖以外である、一般式
の残基を含む。
「アルキル」は、それ自体で、または別の用語の一部として、本明細書において使用される場合、示された数の炭素原子を有する、置換または非置換の直鎖または分岐状、飽和または不飽和炭化水素を指す（例えば、「-C1～8アルキル」または「-C1～10アルキル」は、それぞれ1～8個または1～10個の炭素原子を有するアルキル基を指す）。炭素数が示されない場合、アルキル基は、1～8個の炭素原子を有する。いくつかの態様では、アルキル基は非置換である。アルキル基は、1つまたは複数の基によって置換されていてもよい。いくつかの態様では、アルキル基は飽和であり得る。
「アルキレン」は、それ自体で、または別の用語の一部として、本明細書において使用される場合、親アルカンの同じまたは2つの異なる炭素原子から2つの水素原子を除去することによって得られる2つの一価ラジカル中心を有する、記載された数の炭素原子、典型的には2～10個の炭素原子の置換または非置換の飽和または不飽和分岐鎖または直鎖または環状炭化水素ラジカルを指す。いくつかの態様では、アルキレンは、分岐鎖または直鎖の炭化水素である（すなわち、環状炭化水素ではない）。本明細書において提供される態様のいずれかでは、アルキレンは飽和アルキレンであり得る。
「アリール」は、それ自体で、または別の用語の一部として、本明細書において使用される場合、親芳香環系の単一の炭素原子から1個の水素原子を除去することによって得られる、6～20個の炭素（例えば、6～14個の炭素）原子の置換または非置換の一価の炭素環式芳香族炭化水素ラジカルを意味する。いくつかのアリール基は、例示的な構造では「Ar」として表される。
「アリーレン」は、それ自体で、または別の用語の一部として、本明細書において使用される場合、アリール基の水素原子のうちの1個が結合によって置換されており（すなわち、それは二価である）、オルト、メタまたはパラ配向であり得る上記で定義されたアリール基である。
いくつかの態様では、例えば、多官能性リンカーまたは薬物単位がアリーレンを含む場合、アリーレンは、アリール基の水素原子のうちの1個または2個が結合によって置換されている（すなわち、アリーレンは二価または三価であり得る）上記で定義されたアリール基である。
「複素環」は、それ自体で、または別の用語の一部として、本明細書において使用される場合、特定の数（例えば、3～8個またはC3～8）の炭素原子（環員とも呼ばれる）と、1～4個のヘテロ原子環員N、O、PまたはSとを独立して有し、親環系の環原子から1個の水素原子を除去することによって得られる一価の置換または非置換の芳香族（「ヘテロアリール」）または非芳香族（「ヘテロシクロアルキル」）単環式、二環式、三環式または四環式環系を指す。複素環中の1個または複数個のN原子、C原子またはS原子は、酸化され得る。ヘテロ原子を含む環は、芳香族または非芳香族であり得る。特に明記しない限り、複素環は、任意のヘテロ原子または炭素原子でそのペンダント基に結合しており、それにより、安定な構造がもたらされる。
「ヘテロシクロ」または「ヘテロシクロ-」は、本明細書において使用される場合、複素環の追加の水素原子のうちの1個または複数個が結合によって置換されている（すなわち、それは多価、例えば、二価または三価である）上記で定義された複素環基（例えばC3～8複素環）を指す。いくつかの態様では、親水性基、多官能性リンカーまたはリンカー-薬物部分がヘテロシクロを含む場合、ヘテロシクロは、複素環基の水素原子のうちの1個または2個が結合によって置換されている（すなわち、ヘテロシクロは二価または三価であり得る）上記で定義された複素環基である。
「炭素環」は、それ自体で、または別の用語の一部として、本明細書において使用される場合、親環系の環原子から1個の水素原子を除去することによって得られる、一定数（例えば、3～8個またはC3～8）の炭素原子（環員とも呼ばれる）を有する一価の置換もしくは非置換の芳香族（「アリール」）または飽和もしくは不飽和の非芳香族（「シクロアルキル」）、単環式、二環式、三環式または四環式の炭素環式環系である。炭素環は、3、4、5、6、7または8員であり得る。
「カルボシクロ」または「カルボシクロ-」は、それ自体で、または別の用語の一部として、本明細書において使用される場合、炭素環基の水素原子の別のものが結合によって置換されている（すなわち、それは二価である）上記で定義されたC3～8炭素環基を指す。いくつかの態様では、例えば、親水性基、多官能性リンカーまたはリンカー-薬物部分がカルボシクロを含む場合、カルボシクロは、炭素環基の水素原子のうちの1個または2個が結合によって置換されている（すなわち、カルボシクロは二価または三価であり得る）上記で定義された炭素環基である。
「ヘテロアルキル」は、それ自体で、または別の用語と組み合わせて、本明細書において使用される場合、特に明記しない限り、完全に飽和しているか、または1～3度の不飽和を含み、記載された数の炭素原子および1～10個からなり（例えば、1～3個のヘテロ原子O、N、SiまたはS）、窒素原子および硫黄原子が酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子が四級化されていてもよい、安定な直鎖もしくは分岐鎖炭化水素、またはそれらの組合せを意味する。ヘテロ原子O、NおよびSは、ヘテロアルキル基の任意の内部位置に、またはアルキル基が分子の残部に結合している位置に配置されてもよい。ヘテロ原子Siは、アルキル基が分子の残部に結合している位置を含む、ヘテロアルキル基の任意の位置に配置されてもよい。いくつかの態様では、最大2個のヘテロ原子が連続していてもよい。いくつかの態様では、C1～4ヘテロアルキルまたはC1～4ヘテロアルキレンは、1～4個の炭素原子と、1または2個のヘテロ原子とを有し、C1～3ヘテロアルキルまたはC1～3ヘテロアルキレンは、1～3個の炭素原子と、1または2個のヘテロ原子とを有する。いくつかの態様では、ヘテロアルキルまたはヘテロアルキレンは飽和している。
「ヘテロアルキレン」は、それ自体で、または別の置換基の一部として、本明細書において使用される場合、-CH2-CH2-S-CH2-CH2-および-CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-によって例示されるように、ヘテロアルキルから得られる二価の基を意味する（上記に説明されるように）。ヘテロアルキレン基の場合、ヘテロ原子はまた、鎖末端のいずれかまたは両方を占めることができる。さらに、アルキレン結合基およびヘテロアルキレン結合基の場合、結合基の配向は示唆されない。選択態様では、例えば、親水性基、多官能性リンカーまたはリンカー-薬物部分がヘテロアルキレンを含む場合、ヘテロアルキレンは、ヘテロアルキル基の水素原子のうちの1個または2個が結合によって置換されている（すなわち、ヘテロアルキレンは二価または三価であり得る）上記で定義されたヘテロアルキル基である。
本明細書において使用される場合、「置換されていてもよい」は、化学部分（例えば、アルキル、ヘテロアルキル、炭素環および複素環など）が置換または非置換のいずれかであることを意味する。特に明記しない限り、本明細書において開示される化学部分は、置換されていてもよい。化学部分が置換されている場合、1個または複数個の水素原子は、それぞれ独立して、置換基によって置換されている。典型的な置換基には、限定されることなく、-X’、-R’、-O、-OR’、-SR’、-S-、-N（R’）2、-N（R’）3、＝NR’、-C（X’）3、-CN、-OCN、-SCN、-N＝C＝O、-NCS、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-NR’C（＝O）R’、-C（＝O）R’、-C（＝O）N（R’）2、-SO3 -、-SO3H、-S（＝O）2R’、-OS（＝O）2OR’、-S（＝O）2NR’、-S（＝O）R’、-OP（＝O）（OR’）2、-P（＝O）（OR’）2、-PO3 -、-PO3H2、-AsO2H2、-C（＝O）R’、-C（＝O）X’、-C（＝S）R’、-CO2R’、-CO2 -、-C（＝S）OR’、-C（＝O）SR’、-C（＝S）SR’、-C（＝O）N（R’）2、-C（＝S）N（R’）2または-C（＝NR’）N（R’）2が含まれ、ここで、各X’は、独立して、ハロゲン:-F、-Cl、-Brまたは-Iであり、各R’は、独立して、-H、-C1～20アルキル、-C6～20アリール、-C3～C14複素環、保護基またはプロドラッグ部分である。典型的な置換基には、オキソ（＝O）も含まれる。
本明細書において使用される場合、「リンカー-薬物部分」は、本明細書において開示されるコンジュゲートの非標的指向性（例えば非抗体）部分を指す。リンカー-薬物部分のリンカー成分は、多官能性リンカーと薬物単位との間に介在する、放出可能な集合体単位と呼ばれる放出機構を有する。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分は、コンジュゲートの非抗体（例えば非標的指向性）部分である。
本明細書において使用される「多官能性リンカー」は、1つまたは複数の親水性基、1つまたは複数の薬物単位および標的指向性部分（例えば抗体）を接続して、本明細書において開示されるコンジュゲートまたは足場を形成するリンカーを指す。多官能性リンカーへのこれらの成分の接続は、並列または直列のいずれかであり得る。いくつかの態様では、多官能性リンカーは、標的指向性部分と親水性基との間にペプチド部分を含み、ペプチド部分は、少なくとも2つのアミノ酸を含む。他の態様では、多官能性リンカーは、親水性基がポリアルコールまたはその誘導体である場合、少なくとも2つのアミノ酸のペプチド部分を含む必要はない。他の態様では、多官能性リンカーは、親水性基がグルコシル-アミン、ジ-グルコシル-アミン、トリ-グルコシル-アミンまたはその誘導体である場合、少なくとも2つのアミノ酸のペプチド部分を含む必要はない。
本明細書において使用される「遊離薬物」は、親水性基に、またはリガンド単位の分解産物に直接的または間接的に共有結合していない薬物部分の生物学的に活性な形態を指す。遊離薬物とは、薬物が、リンカー-薬物部分内の放出可能な集合体単位によって提供される放出機構を介して多官能性リンカーから切断された直後に存在するか、またはその後の細胞内変換もしくは代謝まで存在することから、薬物を指し得る。いくつかの態様では、遊離薬物は、形態H-Dを有するか、または荷電部分として存在し得る。いくつかの態様では、薬理学的に活性な種は、親薬物でなくてもよく、その後の細胞内代謝を受けていない標的指向性部分に薬物を接続するリンカーの成分を含み得る。
疎水性は、clogPを使用して測定され得るか、またはclogPは、オクタノール/水分配係数の対数（暗示的水素を含む）として定義され、Chemical Computing group製のプログラムMOE（商標）を使用して計算され得る（clogP値は、Wildman,S.A.,Crippen,G.M.;Prediction of Physiochemical Parameters by Atomic Contributions;J.Chem.Inf.Comput.Sci.39 No.5（1999）868-873を使用して計算される）。
いくつかの態様では、本開示は、標的指向性部分-薬物コンジュゲートの集団を含む標的指向性部分-薬物コンジュゲート組成物を提供する。標的指向性部分-薬物コンジュゲートは、標的指向性部分単位と、それに結合した複数のリンカー-薬物部分とを含む。いくつかの態様では、コンジュゲート内の標的指向性部分1つ当たり、平均して約2～約12個、約2～約10個、約2～約8個、約2～約6個、約2～約4個、または約1～約2個のリンカー-薬物部分（例えば、式（I’）のd13）が存在する。標的指向性部分上の特定の部位への例示的な結合は、アジド基、ケト基またはアルキニル基を含むように標的指向性部分N-グリカンを修飾することによる。
本開示は、本化合物内に存在する原子のあらゆる同位体（例えば、水素の同位体、および炭素の同位体）を含むことを意図する。
本開示の化合物、足場またはコンジュゲートは、複数の異性体形態で存在し得る。化合物、足場またはコンジュゲートが本明細書において記載される場合、本開示は、化合物、足場またはコンジュゲートのあらゆる異性体を指すことが理解される。そのような開示は、適用可能な場合、位置異性体光学異性体および互変異性体を指す。光学異性体には、鏡像異性体およびジアステレオマー、キラル異性体および非キラル異性体が含まれる。光学異性体には、単離された光学異性体、ならびにラセミ混合物および非ラセミ混合物を含む、光学異性体の混合物が含まれる。異性体は、単離された形態であってよい、または1つもしくは複数の他の異性体との混合物であってよい。特に指示しない限り、本明細書において記載される任意の化合物、足場またはコンジュゲートとは、該化合物、足場もしくはコンジュゲートの各異性体、またはそれらの任意の混合物を指すことを意味する。化合物、足場またはコンジュゲートが特定の異性体として示されている場合、本開示は、その特定の異性体に限定されず、任意の態様として特定の異性体を指し得ることが理解される。
本開示の化合物、足場またはコンジュゲートは、シスおよび/またはトランス異性体として存在し得る。特に指示しない限り、本明細書において記載される任意の化合物、足場またはコンジュゲートとは、該化合物、足場またはコンジュゲートのシス異性体またはトランス異性体、ならびにそれらの任意の混合物を指すことを意味する。化合物、足場またはコンジュゲートがシス異性体またはトランス異性体として示されている場合、本開示は、その特定のシス異性体またはトランス異性体に限定されず、任意の態様として特定のシス異性体またはトランス異性体を指し得ることが理解される。
本開示の化合物、足場またはコンジュゲートは、位置異性体として存在し得る。特に指示しない限り、本明細書において記載される任意の化合物、足場またはコンジュゲートとは、該化合物、足場もしくはコンジュゲートの各位置異性体、またはそれらの任意の混合物を指すことを意味する。化合物、足場またはコンジュゲートが特定の位置異性体として示されている場合、本開示は、その特定の位置異性体に限定されず、任意の態様として特定の位置異性体を指し得ることが理解される。特定の立体配置指定を有しないか、またはあらゆるキラル中心よりも少ないキラル中心に関するそのような指定を有する本開示の化合物、足場またはコンジュゲートの列挙または描写は、そのような指定されていないキラル中心について、1つまたは複数の不斉中心の存在に起因してそのような形態が可能である場合、該化合物のラセミ体、ラセミ混合物、各個々の鏡像異性体、ジアステレオ異性体混合物、および各個々のジアステレオマーを包含することを意図する。
抗体-薬物コンジュゲートおよび足場
いくつかの態様では、本開示は、部位特異性を有する抗体-薬物コンジュゲートを提供する。いくつかの態様では、コンジュゲートは、生分解性および生体適合性であり、ならびに/または高い薬物負荷量と、標的抗原への強い結合とを示す。
いくつかの態様では、本開示は、標的指向性部分（例えば抗体）と、1つまたは複数のリンカー-薬物部分とを含む抗体-薬物コンジュゲートであって、標的指向性部分が、1つまたは複数のリンカー-薬物部分に共有結合している抗体-薬物コンジュゲートを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、標的指向性部分（例えば抗体）とコンジュゲートして、本明細書において開示されるコンジュゲートを形成するのに有用な足場を提供する。
いくつかの態様では、標的指向性部分は抗体である。
いくつかの局面では、本開示は、標的指向性部分（例えば抗体）と、標的指向性部分に共有結合した1つまたは複数のリンカー-薬物部分とを含む抗体-薬物コンジュゲートであって、
各リンカー-薬物部分が、各薬物単位について、放出可能な集合体単位の媒介を介して標的指向性部分を1つまたは複数の薬物単位（例えば、1つまたは複数の治療剤（D））に接続し、親水性基を各リンカー-薬物部分の薬物単位に接続する多官能性リンカーを含み、
放出可能な集合体単位が、標的指向性部分によって標的とされた標的部位に近接して遊離薬物を放出することができ、
多官能性リンカーが、標的指向性部分と親水性基との間にペプチド部分を含み、ペプチド部分が、少なくとも2つのアミノ酸を含む抗体-薬物コンジュゲートを提供する。
いくつかの局面では、本開示は、標的指向性部分（例えば抗体）と、標的指向性部分に共有結合した1つまたは複数のリンカー-薬物部分とを含む抗体-薬物コンジュゲートであって、
各リンカー-薬物部分が、各薬物単位について、放出可能な集合体単位の媒介を介して標的指向性部分を1つまたは複数の薬物単位（例えば、1つまたは複数の治療剤（D））に接続し、親水性基を各リンカー-薬物部分の薬物単位に接続する多官能性リンカーを含み、
放出可能な集合体単位が、標的指向性部分によって標的とされた標的部位に近接して遊離薬物を放出することができる抗体-薬物コンジュゲートを提供する。
いくつかの局面では、本開示は、式（I’）の抗体-薬物コンジュゲート:
を提供し、
式中、
a2は、1～3の整数であり、
a3は、0～1の整数であり、
a4は、1～約5の整数であり、
a5は、1～3の整数であり、
d13は、1～約12の整数であり、
ANTIBODYは修飾抗体であり、
LP’は、修飾抗体をMPに接続する二価リンカー部分であり、その対応する一価部分LPは、修飾抗体の官能基と共有結合を形成することができる官能基WPを含み、
MPはストレッチャー単位であり、
LMは、結合、または三価リンカーもしくは四価リンカーであり、LMが結合（すなわち、二価リンカー）である場合、a2は1であるか、LMが三価リンカーである場合、a2は2であるか、またはLMが四価リンカーである場合、a2は3であり、
L3はカルボニル含有部分であり、
MAは、少なくとも2つのアミノ酸を含むペプチド部分を含み、
T1は親水性基であり、T1とMAとの間の
は、T1とMAとの直接的または間接的な結合を示し、
Dの各存在は、独立して、約5kDa以下の分子量を有する治療剤であり、
LDの各存在は、独立して、DをMAに接続する二価リンカー部分であり、少なくとも1つの切断可能な結合を含み、その結果、結合が切断されると、Dは、その意図された治療効果のために活性形態で放出される。
いくつかの局面では、本開示は、式（IV）の抗体-薬物コンジュゲート、または式（II）～（III）および（V）～（VI）のいずれか1つの足場:
を提供し、
式中、
a2は、1～3の整数であり、
a3は、0～1の整数であり、
a4は、1～約5の整数であり、
a5は、1～3の整数であり、
d13は、1～約12の整数であり、
ANTIBODYは修飾抗体であり、
LP’は、修飾抗体をMPに接続する二価リンカー部分であり、その対応する一価部分LPは、修飾抗体の反応性部分と共有結合を形成することができる官能基WPを含み、
MPはストレッチャー単位であり、
LMは、存在する場合、結合、または三価リンカーもしくは四価リンカーであり、LMが結合（すなわち、二価リンカー）である場合、a2は1であるか、LMが三価リンカーである場合、a2は2であるか、またはLMが四価リンカーである場合、a2は3であり、
L3はカルボニル含有部分であり、
MAは、少なくとも2つのアミノ酸を含むペプチド部分を含み、
T1は親水性基であり、T1とMAとの間の
は、T1とMAとの直接的または間接的な結合を示し、
WDの各存在は、存在する場合、独立して、約5kDa以下の分子量を有する治療剤（「D」）の官能基と共有結合を形成することができる官能基であり、
LDの各存在は、独立して、WDまたはDをMAに接続する二価リンカー部分であり、LDは、少なくとも1つの切断可能な結合を含み、その結果、結合が切断されると、Dは、その意図された治療効果のために活性形態で放出される。
いくつかの局面では、本開示は、式（IV’）の抗体-薬物コンジュゲート、または式（II’）～（III’）および（V’）～（VI’）のいずれか1つの足場:
を提供し、
式中、
a2は、1～3の整数であり、
a3は、0～1の整数であり、
a4は、1～約5の整数であり、
a5は、1～3の整数であり、
d13は、1～約12の整数であり、
ANTIBODYは修飾抗体であり、
LP’は、修飾抗体をMPに接続する二価リンカー部分であり、その対応する一価部分LPは、修飾抗体の反応性部分と共有結合を形成することができる官能基WPを含み、
MPはストレッチャー単位であり、
LMは、存在する場合、結合、または三価リンカーもしくは四価リンカーであり、LMが結合（すなわち、二価リンカー）である場合、a2は1であるか、LMが三価リンカーである場合、a2は2であるか、またはLMが四価リンカーである場合、a2は3であり、
L3はカルボニル含有部分であり、
MAは、少なくとも2つのアミノ酸を含むペプチド部分を含み、
T1は親水性基であり、T1とMAとの間の
は、T1とMAとの直接的または間接的な結合を示し、
WDの各存在は、存在する場合、独立して、約5kDa以下の分子量を有する治療剤（「D」）の官能基と共有結合を形成することができる官能基であり、
LDの各存在は、独立して、WDまたはDをMAに接続する二価リンカー部分であり、LDは、少なくとも1つの切断可能な結合を含み、その結果、結合が切断されると、Dは、その意図された治療効果のために活性形態で放出される。
いくつかの局面では、本開示は、式（VII）～（XII）のいずれか1つのペプチド含有足場:
を提供し、
式中、
a2は、1～3の整数であり、
a3は、0～1の整数であり、
a4は、1～約5の整数であり、
a5は、1～3の整数であり、
LPは、修飾抗体の反応性部分と共有結合を形成することができる官能基WPを含む一価リンカー部分であり、
MPはストレッチャー単位であり、
LMは、存在する場合、結合、または三価リンカーもしくは四価リンカーであり、LMが結合（すなわち、二価リンカー）である場合、a2は1であるか、LMが三価リンカーである場合、a2は2であるか、またはLMが四価リンカーである場合、a2は3であり、
L3は、存在する場合、カルボニル含有部分であり、
MAは、少なくとも2つのアミノ酸を含むペプチド部分を含み、
T1は親水性基であり、T1とMAとの間の
は、T1とMAとの直接的または間接的な結合を示し、
WDの各存在は、独立して、約5kDa以下の分子量を有する治療剤（「D」）の官能基と共有結合を形成することができる官能基であり、
LDの各存在は、独立して、WDまたはDをMAに接続する二価リンカー部分であり、LDは、少なくとも1つの切断可能な結合を含み、その結果、結合が切断されると、Dは、その意図された治療効果のために活性形態で放出される。
いくつかの局面では、本開示は、式（VII’）～（XII’）のいずれか1つのペプチド含有足場:
を提供し、
式中、
a2は、1～3の整数であり、
a3は、0～1の整数であり、
a4は、1～約5の整数であり、
a5は、1～3の整数であり、
LPは、修飾抗体の反応性部分と共有結合を形成することができる官能基WPを含む一価リンカー部分であり、
MPはストレッチャー単位であり、
LMは、存在する場合、結合、または三価リンカーもしくは四価リンカーであり、LMが結合である場合、a2は1であるか、LMが三価リンカーである場合、a2は2であるか、またはLMが四価リンカーである場合、a2は3であり、
L3は、存在する場合、カルボニル含有部分であり、
MAは、少なくとも2つのアミノ酸を含むペプチド部分を含み、
T1は親水性基であり、T1とMAとの間の
は、T1とMAとの直接的または間接的な結合を示し、
WDの各存在は、独立して、約5kDa以下の分子量を有する治療剤（「D」）の官能基と共有結合を形成することができる官能基であり、
LDの各存在は、独立して、WDまたはDをMAに接続する二価リンカー部分であり、LDは、少なくとも1つの切断可能な結合を含み、その結果、結合が切断されると、Dは、その意図された治療効果のために活性形態で放出される。
本開示のコンジュゲートおよび足場は、適用可能な場合、以下の特徴のうちの1つまたは複数を含むことができる。
いくつかの態様では、d13は、2～12、2～10、2～8、2～6、2～4、1～2、4～10、4～8、4～6、6～12、6～10、6～8、8～14、8～12または8～10の整数である。
いくつかの態様では、d13は、1～2の範囲の整数である（例えば、d13は、1または2である）。いくつかの態様では、d13は、2～4の範囲の整数である（例えば、d13は、2、3または4である）。いくつかの態様では、d13は、4～6の範囲の整数である（例えば、d13は、4、5または6である）。いくつかの態様では、d13は、6～8の範囲の整数である（例えば、d13は、6、7または8である）。いくつかの態様では、d13は、6～10の範囲の整数である（例えば、d13は、6、7、8、9または10である）。いくつかの態様では、d13は、1または2である。いくつかの態様では、d13は1である。いくつかの態様では、d13は2である。
いくつかの態様では、各L3は、存在する場合、独立して、＊-C1～12アルキル-C（O）-＊＊、＊-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊、または＊-C1～12アルキル-C（O）-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊であり、式中、＊は、存在する場合には別のL3、またはLMへの結合を示し、＊＊は、存在する場合には別のL3、またはMAへの結合を示す。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は、＊-CH2CH2-C（O）-＊＊であるか、または＊-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊であり、式中、＊は、存在する場合には別のL3、またはLMへの結合を示し、＊＊は、存在する場合には別のL3、またはMAへの結合を示す。
いくつかの態様では、a3は2以上であり、少なくとも1つのL3は＊-C1～12アルキル-C（O）-＊＊であり、少なくとも1つのL3は＊-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、（L3）a3は、＊-CH2CH2-C（O）-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊または＊NH-CH2CH2-C（O）-CH2CH2-C（O）-＊＊であり、式中、＊は、LMへの結合を示し、＊＊は、MAへの結合を示す。
いくつかの態様では、a4は1である。いくつかの態様では、a4は2である。いくつかの態様では、a4は3である。
変数LPおよびLP’
いくつかの態様では、LP’は、LPの官能基（例えばWP）と修飾抗体の反応性部分（例えば、＊-GlcNAc-S''-A''の修飾GlcNAc部分）との間の反応によって形成される。
いくつかの態様では、LP’は、LPの官能基（例えばWP）と修飾抗体の反応性部分（例えば、＊-GlcNAc-S''-A''の修飾GlcNAc部分）との間に形成されたトリアゾリルを含む。
いくつかの態様では、各LPは、抗体に接続されていない場合、末端基WPを含む。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
であり、
式中、
R8jは、水素、ハロゲン、C1～24アルキル（例えばC1～6アルキル）、C6～24シクロアルキル、6～24員ヘテロシクロアルキル、C6～24アリール、6～24員ヘテロアリール、-（C1～24アルキル）-（C6～24シクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロシクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（C6～24アリール）、または-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロアリール）であり、
C1～24アルキルは、1つまたは複数のO、NまたはSによって中断されていてもよく、C1～24アルキル（例えばC1～6アルキル）、C6～24シクロアルキル、6～24員ヘテロシクロアルキル、C6～24アリール、6～24員ヘテロアリール、-（C1～24アルキル）-（C6～24シクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロシクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（C6～24アリール）、または-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロアリール）は、1つまたは複数のC1～C12アルキル、C2～C12アルケニル、C2～C12アルキニル、C3～C12シクロアルキル、-O（C1～C12アルキル）、-O（C2～C12アルケニル）、-O（C2～C12アルキニル）、-O（C3～C12シクロアルキル）、ハロゲン、アミノ、オキソまたはシリルによって置換されていてもよく、
C1～C12アルキル、C2～C12アルケニル、C2～C12アルキニル、C3～C12シクロアルキル、-O（C1～C12アルキル）、-O（C2～C12アルケニル）、-O（C2～C12アルキニル）、-O（C3～C12シクロアルキル）は、置換されていてもよく、C1～C12アルキル、C3～C12シクロアルキル、-O（C1～C12アルキル）または-O（C3～C12シクロアルキル）は、1つまたは複数のO、NまたはSによって中断されていてもよく、
R10jは、水素、ハロゲン、C1～24アルキル（例えばC1～6アルキル）、C6～24シクロアルキル、6～24員ヘテロシクロアルキル、C6～24アリール、6～24員ヘテロアリール、-（C1～24アルキル）-（C6～24シクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロシクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（C6～24アリール）、または-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロアリール）であり、
C1～24アルキル（例えばC1～6アルキル）、C6～24シクロアルキル、6～24員ヘテロシクロアルキル、C6～24アリール、6～24員ヘテロアリール、-（C1～24アルキル）-（C6～24シクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロシクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（C6～24アリール）、または-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロアリール）は、置換されていてもよく、
各R11jは、独立して、水素、C1～24アルキル（例えばC1～6アルキル）、C6～24シクロアルキル、6～24員ヘテロシクロアルキル、C6～24アリール、6～24員ヘテロアリール、-（C1～24アルキル）-（C6～24シクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロシクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（C6～24アリール）、または-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロアリール）であり、
各R12jは、独立して、ハロゲン、-OR10j、-NO2、-CN、-S（O）2R10j、C1～24アルキル（例えばC1～6アルキル）、C6～24シクロアルキル、6～24員ヘテロシクロアルキル、C6～24アリール、6～24員ヘテロアリール、-（C1～24アルキル）-（C6～24シクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロシクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（C6～24アリール）、または-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロアリール）であり、
u2は、0～8の範囲の整数である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
である。
いくつかの態様では、各R11jは水素である。いくつかの態様では、u2は0である。いくつかの態様では、R8jは水素である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのR12jは、電子求引基、例えば、ハメット置換基定数σが正値である基である。いくつかの態様では、好適な電子求引基は、当技術分野において公知である。いくつかの態様では、少なくとも1つのR12jは、ハロゲン（例えば、FまたはCl）、-OR10j、-NO2、-CN、-S（O）2R7j、置換C1～C12アルキルまたは置換C6～C12アリールであり、置換基のうちの少なくとも1つは電子求引基である。いくつかの態様では、少なくとも1つのR12jは、フッ素化C1～C12アルキル（例えば-CF3）、フッ素化C5～C12アリール（例えば-C6F5）またはハロアルキル化C5～C12アリール（例えば-［3,5-（CF3）2（C6H3）］）である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
である。
いくつかの態様では、各R11jは水素である。いくつかの態様では、u2は0である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
である。
いくつかの態様では、各WPは、存在する場合、独立して、
である。
いくつかの態様では、各WPは
である。
いくつかの態様では、各LP’は、抗体に接続している場合、結合基WP’を含む。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWP’は
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWP’は
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWP’は
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWP’は
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWP’は
である。
ストレッチャー単位MP
いくつかの態様では、MPは
であり、
式中、＊は、LP’またはLPへの結合を示し、＊＊は、LMまたはMAへの結合を示し、
各R66は、独立して、NHまたはOであり、各R3は、独立して、-C（O）-NR5-または-NR5-C（O）-であり、
各R5は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、C3～8シクロアルキル、COOH、またはCOO-C1～6アルキルであり、
R4は、結合または-NR5-（CR20R21）-C（O）-であり、
各R20およびR21は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、ヒドロキシル化C6～10アリール、ポリヒドロキシル化C6～10アリール、5～12員複素環、C3～8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、または天然アミノ酸もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
各b1は、独立して、0～6の範囲の整数であり、
各e1は、独立して、0～8の範囲の整数であり、
各f1は、独立して、1～6の範囲の整数であり、
各g2は、独立して、1～4の範囲の整数である。
いくつかの態様では、b1は0である。いくつかの態様では、b1は1である。
いくつかの態様では、各f1は、独立して、1または2である。いくつかの態様では、f1は1である。いくつかの態様では、f1は2である。
いくつかの態様では、g2は、1または2である。いくつかの態様では、g2は1である。いくつかの態様では、g2は2である。
MPの態様について、＊は、LP’またはLPへの結合を示し、＊＊は、LMまたはMAへの結合を示すことが理解される。
いくつかの態様では、MPは
である。
いくつかの態様では、MPは
である。
いくつかの態様では、MPは
である。
いくつかの態様では、MPは
である。
いくつかの態様では、MPは
である。
いくつかの態様では、MPは
である。
いくつかの態様では、MPは
である。
いくつかの態様では、MPは
である。
変数LMおよびWM
いくつかの態様では、LMは、結合（すなわち、二価リンカー、または2つのアームを有する）または多アームリンカー（例えば、三価もしくは四価、または3つもしくは4つのアームを有する）であり、各アームは、同じであっても異なっていてもよい。
いくつかの態様では、LMは、結合（すなわち、二価リンカー、または2つのアームを有する）または多アームリンカー（例えば、四価、もしくは4つのアームを有する、または3つのアームを有する三価）であり、各アームは、同じであっても異なっていてもよい。
本明細書において使用される用語「アーム」は、（1）MPに結合しているか、または（2）存在する場合にはL3に結合しているか、もしくはL3が存在しない場合にはMAに結合しているLMの部分を指すことが理解される;
いくつかの態様では、LMは、結合（すなわち、二価リンカー、または2つのアームを有する）である。
いくつかの態様では、LMは多アームリンカー（例えば、三価もしくは四価、または3つもしくは4つのアームを有する）であり、各アームは、同じであっても異なっていてもよい。いくつかの態様では、LMは多アームリンカー（例えば、三価もしくは四価、または3つもしくは4つのアームを有する）である。
いくつかの態様では、LMは、3つのアームを有する三価リンカーであり、各アームは、同じであっても異なっていてもよい。
いくつかの態様では、LMは、4つのアームを有する四価リンカーであり、各アームは、同じであっても異なっていてもよい。
いくつかの態様では、a2は2であり、LMは
であり、
式中、
は、MPへの結合を示し、
Y1は、存在する場合にはL3への結合、またはL3が存在しない場合にはMAへの結合を示し、
R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素、置換されていてもよいC1～6アルキル、置換されていてもよいC2～6アルケニル、置換されていてもよいC2～6アルキニル、置換されていてもよいC3～19分岐アルキル、置換されていてもよいC3～8シクロアルキル、置換されていてもよいC6～10アリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいC1～6ヘテロアルキル、C1～6アルコキシ、アリールオキシ、C1～6ヘテロアルコキシ、C2～6アルカノイル、置換されていてもよいアリールカルボニル、C2～6アルコキシカルボニル、C2～6アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、置換されていてもよいC2～6アルカノイル、置換されていてもよいC2～6アルカノイルオキシ、置換されていてもよいC2～6置換アルカノイルオキシ、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8の各々は、存在する場合、独立して0～10の範囲の整数であり、
d1、d2、d3、d4、d5およびd7の各々は、存在する場合、独立して0～10の範囲の整数である。
いくつかの態様では、a2は2であり、LMは
であり、
式中、
は、MPへの結合を示し、
Y1は、存在する場合にはL3への結合、またはL3が存在しない場合にはMAへの結合を示し、
R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素、置換されていてもよいC1～6アルキル、置換されていてもよいC2～6アルケニル、置換されていてもよいC2～6アルキニル、置換されていてもよいC3～19分岐アルキル、置換されていてもよいC3～8シクロアルキル、置換されていてもよいC6～10アリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいC1～6ヘテロアルキル、C1～6アルコキシ、アリールオキシ、C1～6ヘテロアルコキシ、C2～6アルカノイル、置換されていてもよいアリールカルボニル、C2～6アルコキシカルボニル、C2～6アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、置換されていてもよいC2～6アルカノイル、置換されていてもよいC2～6アルカノイルオキシ、置換されていてもよいC2～6置換アルカノイルオキシ、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8の各々は、存在する場合、独立して0～10の範囲の整数であり、
d1、d2、d3、d4、d5およびd7の各々は、存在する場合、独立して0～10の範囲の整数である。
いくつかの態様では、a2は2であり、LMは
である。
いくつかの態様では、a2は2であり、LMは
である。
いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、存在する場合、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10である。いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、それぞれ独立して、0または1である。いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10である。いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、それぞれ独立して、0、1または2である。いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、それぞれ独立して、0である。いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、それぞれ独立して、1である。いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、それぞれ独立して、2である。
いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、存在する場合、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、0または1である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、1、2、3または4である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、1である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、2である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、3である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、4である。
いくつかの態様では、R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、C3～8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1～6アルキルである。いくつかの態様では、R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素またはC1～6アルキルである。いくつかの態様では、R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素である。いくつかの態様では、R2およびR’2は、それぞれ独立して、C1～6アルキルである。
いくつかの態様では、LMは
である。
いくつかの態様では、a2は3であり、LMは
であり、
式中、
は、MPへの結合を示し、
Y1は、存在する場合にはL3への結合、またはL3が存在しない場合にはMAへの結合を示し、
R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素、置換されていてもよいC1～6アルキル、置換されていてもよいC2～6アルケニル、置換されていてもよいC2～6アルキニル、置換されていてもよいC3～19分岐アルキル、置換されていてもよいC3～8シクロアルキル、置換されていてもよいC6～10アリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいC1～6ヘテロアルキル、C1～6アルコキシ、アリールオキシ、C1～6ヘテロアルコキシ、C2～6アルカノイル、置換されていてもよいアリールカルボニル、C2～6アルコキシカルボニル、C2～6アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、置換されていてもよいC2～6アルカノイル、置換されていてもよいC2～6アルカノイルオキシ、置換されていてもよいC2～6置換アルカノイルオキシ、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
c1、c2、c3、c4、c5、c6、c7およびc8の各々は、独立して0～10の範囲の整数であり、
d1、d2、d3、d4、d5、d6、d7およびd8の各々は、独立して0～10の範囲の整数であり、
e1、e2、e3、e4、e5、e6、e7およびe8の各々は、独立して0～10の範囲の整数である。
いくつかの態様では、a2は3であり、LMは
であり、
式中、
は、MPへの結合を示し、
Y1は、存在する場合にはL3への結合、またはL3が存在しない場合にはMAへの結合を示し、
R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素、置換されていてもよいC1～6アルキル、置換されていてもよいC2～6アルケニル、置換されていてもよいC2～6アルキニル、置換されていてもよいC3～19分岐アルキル、置換されていてもよいC3～8シクロアルキル、置換されていてもよいC6～10アリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいC1～6ヘテロアルキル、C1～6アルコキシ、アリールオキシ、C1～6ヘテロアルコキシ、C2～6アルカノイル、置換されていてもよいアリールカルボニル、C2～6アルコキシカルボニル、C2～6アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、置換されていてもよいC2～6アルカノイル、置換されていてもよいC2～6アルカノイルオキシ、置換されていてもよいC2～6置換アルカノイルオキシ、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
c1、c2、c3、c4、c5、c6、c7およびc8の各々は、独立して0～10の範囲の整数であり、
d1、d2、d3、d4、d5、d6、d7およびd8の各々は、独立して0～10の範囲の整数であり、
e1、e2、e3、e4、e5、e6、e7およびe8の各々は、独立して0～10の範囲の整数である。
いくつかの態様では、a2は3であり、LMは
である。
いくつかの態様では、a2は3であり、LMは
である。
いくつかの態様では、-LM-（L3）a2-は
である。
アミノ酸単位が2つの結合部位（すなわち、末端薬物単位）を有するいくつかの態様では、上に示す結合部位のうちの1つは、例えば、H、OHまたはC1～3非置換アルキル基によって置換されていてもよい。
いくつかの態様では、LMが多アームリンカーであり、ストレッチャー単位MPにまだ接続されていない場合、WMは、LMの末端であり、WMの各存在は、独立して、水素、保護基、脱離基、または共有結合を形成することによってLMをMPに接続することができる官能基である。
いくつかの態様では、WMはアミン保護基である。いくつかの態様では、WMはBOCである。
いくつかの態様では、WMはアミン保護基であり、LMは
である。
いくつかの態様では、WMはアミン保護基であり、LMは
である。
いくつかの態様では、WMはBOCであり、LMは
である。
いくつかの態様では、WMはアミン保護基であり、LMは
である。
いくつかの態様では、WMはBOCであり、LMは
である。
いくつかの態様では、WMは、アミン基を含む。いくつかの態様では、WMは、-C（O）-（CH2）w-NH2を含み、式中、wは、1～6の整数である。いくつかの態様では、WMは-C（O）-CH2-NH2である。
いくつかの態様では、WMは-C（O）-CH2-NH2であり、LMは
である。
いくつかの態様では、WMは-C（O）-CH2-NH2であり、LMは
である。
いくつかの態様では、WMはHである。
変数L3
いくつかの態様では、各L3は、存在する場合、カルボニル含有部分である。
L3の態様について、＊は、存在する場合には別のL3、またはLMへの結合を示し、＊＊は、存在する場合には別のL3、またはMAへの結合を示すことが理解される。
いくつかの態様では、各L3は、存在する場合、独立して、＊-C1～12アルキル-C（O）-＊＊、＊-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊、または＊-C1～12アルキル-C（O）-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は＊-C1～12アルキル-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は＊-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、L3は＊-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、（L3）a3は＊-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は＊-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は＊-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、L3は＊-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、（L3）a3は＊-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は＊-C1～12アルキル-C（O）-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は＊-CH2CH2-C（O）-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、L3は＊-CH2CH2-C（O）-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、（L3）a3は＊-CH2CH2-C（O）-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、a3は2以上であり、少なくとも1つのL3は＊-C1～12アルキル-C（O）-＊＊であり、少なくとも1つのL3は＊-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、（L3）a3は＊-CH2CH2-C（O）-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、（L3）a3は＊NH-CH2CH2-C（O）-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
変数MA
いくつかの態様では、MAは、1つまたは複数の薬物および1つまたは複数の親水性基をLPまたはLP’に接続することができるリンカー部分である。いくつかの態様では、MAは、少なくとも2つのアミノ酸のペプチド部分を含む。いくつかの態様では、アミノ酸（単数）は、本明細書において「AA」と呼ばれ、アミノ酸（複数）は、本明細書において「AA’s」と呼ばれる。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、-LD-D単位と共有結合を形成することができ、複数の薬物の結合を可能にする部分である。いくつかの態様では、ペプチド部分は、単一のAA単位を含むか、または2つ以上のAA単位（例えば、2～10、2～6、または2、3、4、5もしくは6）を有し、AA単位は、それぞれ独立して、天然アミノ酸もしくは非天然アミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、ジアミン、ポリアミンまたはそれらの組合せである。いくつかの態様では、必要な数の結合を有するために、AA単位のうちの少なくとも1つは、-LD-D単位の結合を提供する官能化側鎖を有する。いくつかの態様では、例示的な官能化AA単位（例えば、アミノ酸、アミノアルコールまたはアミノアルデヒド）には、例えば、アジド官能化AA単位またはアルキン官能化AA単位（例えば、アジド基またはアルキン基を有するように修飾されたアミノ酸、アミノアルコールまたはアミノアルデヒド）が含まれる。いくつかの態様では、アジド基またはアルキン基は、クリックケミストリーを使用する結合のためのものである。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、2～12個のAA単位を有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、2～10個のAA単位を有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、2～6個のAA単位を有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、2、3、4、5または6個のAA単位を有する。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、2個のAA単位を有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、3個のAA単位を有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、4個のAA単位を有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、5個のAA単位を有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、6個のAA単位を有する。
いくつかの態様では、ペプチド部分内の結合、またはコンジュゲート、その中間体もしくは足場の他の成分との結合は、例えば、アミノ、カルボキシ、または他の官能基を介したものであり得る。いくつかの態様では、ペプチド部分の各アミノ酸は、独立して、チオール含有アミノ酸のD異性体またはL異性体であり得る。いくつかの態様では、ペプチド部分の各アミノ酸は、独立して、チオール含有アミノ酸のD異性体であり得る。いくつかの態様では、ペプチド部分の各アミノ酸は、独立して、チオール含有アミノ酸のL異性体であり得る。いくつかの態様では、チオール含有アミノ酸は、例えば、システイン、ホモシステインまたはペニシラミンであり得る。
いくつかの態様では、ペプチド部分を含む各アミノ酸は、独立して、以下のアミノ酸、すなわち、アラニン（β-アラニンを含む）、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、システイン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、メチオニン、セリン、チロシン、トレオニン、トリプトファン、プロリン、オルニチン、ペニシラミン、アミノアルキン酸、アミノアルカン二酸、ヘテロシクロ-カルボン酸、シトルリン、スタチン、ジアミノアルカン酸、その立体異性体、またはその誘導体のL異性体またはD異性体であり得る。
いくつかの態様では、ペプチド部分を含む各アミノ酸は、独立して、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン、オルニチン、リジン、セリン、トレオニン、グリシン、グルタミン、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セレノシステイン、プロリン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、バリン、アラニンまたはその立体異性体である。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、モノペプチド、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドを含む。いくつかの態様では、ペプチド部分は、ペンタペプチドを含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、少なくとも約5個のアミノ酸（例えば、5、6、7、8、9または10個のアミノ酸）を含む。いくつかの態様では、ペプチド部分は、最大約10個のアミノ酸を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分を独立して含む各アミノ酸は、グリシン、セリン、グルタミン酸、リジン、アスパラギン酸およびシステインである。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、少なくとも4個のグリシンおよび少なくとも1個のセリン、例えば、（グリシン）4およびセリンを含み、セリンは、ペプチド鎖に沿った任意の位置、例えば、（セリン）-（グリシン）4;（グリシン）-（セリン）-（グリシン）3;（グリシン）2-（セリン）-（グリシン）2;（グリシン）3-（セリン）-（グリシン）;または（グリシン）4-（セリン）などにある。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）4-（セリン）または（セリン）-（グリシン）4を含む。いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）4-（セリン）を含む。いくつかの態様では、ペプチド部分は、（セリン）-（グリシン）4を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、少なくとも4個のグリシンおよび少なくとも1個のグルタミン酸、例えば、（グリシン）4およびグルタミン酸を含み、グルタミン酸は、ペプチド鎖に沿った任意の位置にある。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グルタミン酸）-（グリシン）4または（グリシン）4-（グルタミン酸）を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）4-（セリン）を含み、セリンは、ペプチド鎖に沿った任意の位置にある。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）4-（セリン）-（グルタミン酸）を含み、セリンは、ペプチド鎖に沿った任意の位置にある。いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）4-（セリン）-（グルタミン酸）を含み、セリンは、ペプチド鎖に沿った任意の位置にある。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）1～4-（セリン）を含み、
ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（セリン）-（グリシン）1～4を含み、
ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
ペプチド部分の態様について、＊は、存在する場合にはL3への、またはL3が存在しない場合にはLMへの結合を示すことが理解される。いくつかの態様では、＊＊は、存在する場合にはT1への、またはT1が存在しない場合には-OHへの結合を示す。いくつかの態様では、＊＊＊は、存在する場合にはLDへの、またはLDが存在しない場合には水素への結合を示す。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）-（セリン）を含み、
ペプチド部分は、グリシンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）-（セリン）を含み、
ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）4-（セリン）を含み、
ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（セリン）-（グリシン）1～4を含み、
ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（セリン）-（グリシン）-4を含み、
ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）1～4-（セリン）を含み、
ペプチド部分は、β-アラニンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）4-（セリン）を含み、
ペプチド部分は、β-アラニンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）1～4-（グルタミン酸）を含み、
ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）-（グルタミン酸）を含み、
ペプチド部分は、グリシンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）4-（グルタミン酸）を含み、
ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グルタミン酸）-（グリシン）1～4を含み、
ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グルタミン酸）-（グリシン）4を含み、
ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グルタミン酸）-（グリシン）を含み、
ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）1～4-（グルタミン酸）を含み、
ペプチド部分は、β-アラニンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）4-（グルタミン酸）を含み、
ペプチド部分は、β-アラニンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）-（グルタミン酸）を含み、
ペプチド部分は、β-アラニンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
を含む。
変数LDおよびWD
いくつかの態様では、LDの各存在は、独立して、DをMAに接続する二価リンカー部分であり、少なくとも1つの切断可能な結合を含み、その結果、結合が切断されると、Dはその意図された治療効果のために活性形態で放出される。
いくつかの態様では、LDは、放出可能な集合体単位の成分である。いくつかの態様では、LDは、放出可能な集合体単位である。いくつかの態様では、LDは、1つの切断可能な結合を含む。いくつかの態様では、LDは、複数の切断可能な部位または結合を含む。
いくつかの態様では、切断可能な結合を形成するための官能基には、例えば、ジスルフィド結合を形成するためのスルフヒドリル基、ヒドラゾン結合を形成するためのアルデヒド基、ケトン基またはヒドラジン基、オキシム結合を形成するためのヒドロキシルアミン基、ペプチド結合を形成するためのカルボキシル基またはアミノ基、エステル結合を形成するためのカルボキシル基またはヒドロキシ基、およびグリコシド結合を形成するための糖が含まれ得る。いくつかの態様では、LDは、ジスルフィド交換によって切断可能なジスルフィド結合、酸性pHで切断可能な、酸に不安定な結合、および/またはヒドロラーゼによって切断可能な結合を含む。いくつかの態様では、LDは、カルバメート結合（すなわち、Rが水素またはアルキルなどである-O-C（O）-NR-）を含む。
いくつかの態様では、LD中の切断可能な結合の構造および配列は、結合が標的部位に存在する酵素の作用によって切断されるようなものであり得る。いくつかの態様では、切断可能な結合は、他の機構によって切断可能であり得る。
いくつかの態様では、LD中の切断可能な結合の構造および配列は、結合が標的部位に存在する酵素の作用によって切断されるようなものであり得る。いくつかの態様では、切断可能な結合は、他の機構によって切断可能であり得る。
いくつかの態様では、切断可能な結合は、腫瘍関連プロテアーゼを含む1つまたは複数の酵素によって酵素的に切断されて、薬物単位またはDを遊離させることができ、本開示のコンジュゲートまたはその中間体もしくは足場は、放出時にインビボでプロトン化されて、薬物単位またはDを提供する。
いくつかの態様では、LDは、1つまたは複数のアミノ酸を含むことができる。いくつかの態様では、LD中の各アミノ酸は、切断可能な結合が存在する限り、天然異性体もしくは非天然異性体および/またはD異性体もしくはL異性体であり得る。いくつかの態様では、LDは、天然または非天然であり得るアルファアミノ酸、ベータアミノ酸またはガンマアミノ酸を含む。いくつかの態様では、LDは、連続した配列内に1～12個（例えば、1～6、または1～4、または1～3、または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11もしくは12個）のアミノ酸を含む。
いくつかの態様では、LDは、天然アミノ酸を含むことができる。いくつかの態様では、LDは、非天然アミノ酸を含むことができる。いくつかの態様では、LDは、天然アミノ酸を含まない。いくつかの態様では、LDは、非天然アミノ酸を含まない。いくつかの態様では、LDは、非天然アミノ酸に結合された天然アミノ酸を含むことができる。いくつかの態様では、LDは、天然アミノ酸のD-異性体に結合された天然アミノ酸を含むことができる。いくつかの態様では、LDは、ジペプチド、例えば、-Val-Cit-、-Phe-Lys-、または-Val-Ala-を含む。
いくつかの態様では、LDは、モノペプチド単位、ジペプチド単位、トリペプチド単位、テトラペプチド単位、ペンタペプチド単位、ヘキサペプチド単位、ヘプタペプチド単位、オクタペプチド単位、ノナペプチド単位、デカペプチド単位、ウンデカペプチド単位またはドデカペプチド単位を含む。
いくつかの態様では、LDは、薬物単位に直接コンジュゲートされた（例えば、1～12個のアミノ酸の）ペプチドを含む。いくつかのそのような態様では、ペプチドは単一アミノ酸である。いくつかのそのような態様では、ペプチドはジペプチドである。
いくつかの態様では、LD中の各アミノ酸は、アラニン、β-アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、セリン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、バリン、システイン、メチオニン、セレノシステイン、オルニチン、ペニシラミン、アミノアルカン酸、アミノアルキン酸、アミノアルカン二酸、アミノ安息香酸、アミノ-ヘテロシクロ-アルカン酸、ヘテロシクロ-カルボン酸、シトルリン、スタチン、ジアミノアルカン酸およびその誘導体から独立して選択される。
いくつかの態様では、各アミノ酸は、アラニン、β-アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、セリン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、バリン、シトルリンおよびその誘導体から独立して選択される。
いくつかの態様では、各アミノ酸は、タンパク質原性アミノ酸および非タンパク質原性アミノ酸から選択される。
いくつかの態様では、LD中の各アミノ酸は、以下のアミノ酸、すなわち、アラニン、β-アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、システイン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、メチオニン、セリン、チロシン、トレオニン、トリプトファン、プロリン、オルニチン、ペニシラミン、アミノアルキン酸、アミノアルカン二酸、ヘテロシクロ-カルボン酸、シトルリン、スタチン、ジアミノアルカン酸、バリン、シトルリンおよびその誘導体のL異性体またはD異性体から独立して選択され得る。
いくつかの態様では、LD中の各アミノ酸は、独立して、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン、オルニチン、リジン、セリン、トレオニン、グリシン、グルタミン、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セレノシステイン、プロリン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、バリン、シトルリンまたはアラニンである。
いくつかの態様では、LD中の各アミノ酸は、以下のアミノ酸、すなわち、アラニン、β-アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、セリン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、トリプトファン、シトルリンおよびバリンのL-異性体から独立して選択される。
いくつかの態様では、LD中の各アミノ酸は、以下のアミノ酸、すなわち、アラニン、β-アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、セリン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、トリプトファン、シトルリンおよびバリンのD-異性体から独立して選択される。
いくつかの態様では、LD中の各アミノ酸は、アラニン、β-アラニン、グルタミン、グルタミン酸、イソグルタミン酸、イソアスパラギン酸、バリンシトルリンまたはアスパラギン酸である。
いくつかの態様では、LDは、β-アラニンを含む。いくつかの態様では、LDは、（β-アラニン）-（アラニン）を含む。いくつかの態様では、LDは、（β-アラニン）と、任意でアラニン、グルタミン酸、グルタミン、イソグルタミン酸、アスパラギン酸、イソアスパラギン酸、バリン、（バリン）-（アラニン）、（アラニン）-（アラニン）、または（バリン）-（シトルリン）とを含む。
いくつかの態様では、LDは、（グルタミン酸）-（アラニン）を含む。
いくつかの態様では、LDは、（β-アラニン）-（グルタミン）を含む。
いくつかの態様では、LDは、（β-アラニン）-（グルタミン））-（アラニン）を含む。
いくつかの態様では、LDは、グルタミン酸と、任意でアラニン、グリシン、イソグルタミン酸、アスパラギン酸、イソアスパラギン酸、バリン、（バリン）-（アラニン）、（アラニン）-（アラニン）、または（バリン）-（シトルリン）とを含む。
いくつかの態様では、LDは、2,3-ジアミノプロパン酸を含む。いくつかの態様では、Wwは、（R）-2,3-ジアミノプロパン酸を含む。いくつかの態様では、Wwは、グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、Wwは、（グルタミン酸）-（アラニン）を含む。いくつかの態様では、LDは、（グルタミン酸）-（グリシン）-（アラニン）を含む。
いくつかの態様では、LDは、L-グルタミン酸、D-グルタミン酸、（L-グルタミン酸）-（L-アラニン）、（L-グルタミン酸）-（D-アラニン）、（D-グルタミン酸）-（L-アラニン）、（D-グルタミン酸）-（D-アラニン）、（L-グルタミン酸）-（グリシン）-（L-アラニン）、D-グルタミン酸）-（グリシン）-（D-アラニン）、（L-グルタミン酸）-（グリシン）-（D-アラニン）、または（D-グルタミン酸）-（グリシン）-（L-アラニン）を含む。いくつかの態様では、LDは、1つまたは複数のアミノ酸に加えてカルバメート結合を含む。
いくつかの態様では、LDは、特定の酵素による酵素的切断の選択性において設計および最適化され得る。いくつかの態様では、特定の酵素は、腫瘍関連プロテアーゼである。いくつかの態様では、LDは、その切断がカテプシンB、CおよびD、またはプラスミンプロテアーゼによって触媒される結合を含む。
いくつかの態様では、LDは、糖切断部位を含む。いくつかの態様では、LDは、酸素グリコシド結合を介して自己犠牲基（self-immolative group）に結合した糖部分（Su）を含む。いくつかの態様では、「自己犠牲基」は、3つの離隔した化学部分（すなわち、糖部分（グリコシド結合を介して）、薬物単位（直接的または間接的）、およびMA（直接的または間接的）を一緒に共有結合することができる三官能性化学部分であり得る。いくつかの態様では、グリコシド結合を標的部位で切断して、薬物の放出をもたらす自己犠牲反応シーケンスを開始することができる。
治療剤、薬物単位またはD
いくつかの態様では、治療剤は、約5kDa以下の分子量を有する（例えば、約4kDa以下、約3kDa以下、約1.5kDa以下または約1kDa以下の分子量を有する）小分子である。
いくつかの態様では、治療剤は、約1nM未満のIC50を有する。いくつかの態様では、治療剤は、1nM未満のIC50を有する。
いくつかの態様では、治療剤は、約1nM超のIC50を有する（例えば、治療剤は、約1～約50nMのIC50を有する）。いくつかの態様では、治療剤は、約1nM超のIC50を有する。いくつかの態様では、治療剤は、1nM超のIC50を有する（例えば、治療剤は、1～50nMのIC50を有する）。いくつかの態様では、治療剤は、1nM超のIC50を有する。
いくつかの態様では、約1nM超のIC50を有するいくつかの治療剤（例えば、「効力の低い薬物」）は、当技術分野において認識されているコンジュゲーション技術を使用した抗体とのコンジュゲーションには適していない。理論に拘束されることを望むものではないが、そのような治療剤は、コンジュゲートの薬物動態学的特性および物理化学的特性を低下させることなく、当技術分野において認識されている技術を使用して十分なコピーの薬物（すなわち、8を超える）をコンジュゲートすることができないことから、従来の技術を使用した標的指向性抗体-薬物コンジュゲートに使用するには不十分な効力を有する。いくつかの態様では、本明細書において記載されるコンジュゲーション戦略を使用して、これらの効力の低い薬物の十分に高い負荷量を達成し、それによって、望ましい薬物動態学的特性および物理化学的特性を維持しながら、治療剤の高い負荷量をもたらすことができる。いくつかの態様では、本開示は、抗体と、足場と、少なくとも8つの治療剤部分とを含む抗体-薬物コンジュゲートであって、治療剤が約1nM超のIC50を有する抗体-薬物コンジュゲートに関する。
いくつかの態様では、薬物は、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第2018/0154018号に記載されているように、（a）オーリスタチン化合物、（b）カリケアマイシン化合物、（c）デュオカルマイシン化合物（d）SN38、（e）ピロロベンゾジアゼピン、（f）ビンカ化合物、（g）チューブリシン化合物、（h）非天然カンプトテシン化合物、（i）メイタンシノイド化合物、（j）DNA結合薬、（k）キナーゼ阻害剤、（l）MEK阻害剤、（m）KSP阻害剤、（n）トポイソメラーゼ阻害剤、（o）DNAアルキル化薬、（p）RNAポリメラーゼ、（q）PARP阻害剤、（r）NAMPT阻害剤、（s）トポイソメラーゼ阻害剤、（t）タンパク質合成阻害剤、（u）DNA結合薬、（v）DNAインターカレーション薬または（w）免疫調節化合物の誘導体である。
いくつかの態様では、本開示において使用される薬物は、オーリスタチンF-ヒドロキシプロピルアミド-L-アラニンである。
いくつかの態様では、オーリスタチンは、式（X）の化合物:
であり、
式中、
R31およびR32の各々は、独立して、水素またはC1～8アルキルであり、R31およびR32のうちの最大1つはHであり、
R33は、水素、C1～8アルキル、C3～8炭素環、C6～10アリール、C1～8アルキル-C6～10アリール、X1-（C3～8炭素環）、C3～8複素環、またはX1-（C3～8複素環）であり、
R34は、水素、C1～8アルキル、C3～8炭素環、C6～10アリール、X1-C6～10アリール、X1-（C3～8炭素環）、C3～8複素環、またはX1-（C3～8複素環）であり、
R35は、水素またはメチルであり、
または、R34およびR35は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、式-（CR55R41）b-を有する炭素環式環を形成し、式中、R55およびR41の各々は、独立して、水素またはC1～8アルキルであり、bは3～7の整数であり、
R36は、水素またはC1～8アルキルであり、
R37は、水素、C1～8アルキル、C3～8炭素環、C6～10アリール、-X1-C6～10アリール、-X1-（C3～8炭素環）、C3～8複素環、または-X1-（C3～8複素環）であり、
各R38は、独立して、水素、OH、C1～8アルキル、C3～8炭素環、またはO-（C1～8アルキル）であり、
R53は、
またはR54であり、
R39は、水素、C1～8アルキル、C6～10アリール、-X1-C6～10アリール、C3～8炭素環、C3～8複素環、-X1-C3～8複素環、-C1～8アルキレン-NH2、または（CH2）2SCH3であり、
各X1は、独立して、C1～10アルキレンまたはC3～10シクロアルキレンであり、
R44は、水素またはC1～8アルキルであり、
R45は、X3-R42またはNH-R19であり、
X3は、OまたはSであり、
R19は、水素、OH、アミノ基、C1～8アルキルアミノ、または-［C（R20R21）］a-R22であり、
R42は、アミノ基、C1～6アルキルアミノ、または-［C（R20R21）］a-R22であり、
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、ヒドロキシル化C6～10アリール、ポリヒドロキシル化C6～10アリール、5～12員複素環、C3～8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、または天然アミノ酸もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
R22は、-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C（O）（CH2）c-C（H）（R23）-N（H）（R23）、-R82-C（O）（CH2）d-（O CH2-CH2）f-N（H）（R23）、または-R82-（C（O）-CH（X2）-NH）d-R77であり、
各R23は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、C3～8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
X2は、天然アミノ酸または非天然アミノ酸の側鎖であり、
R77は、水素またはX2であり、NR77は、窒素含有環状化合物を形成し、
R82は、-NR23または酸素であり、
R54は、-C（R56）2--C（R56）2-C6～10アリール、-C（R56）2--C（R56）2-C3～8複素環、または-C（R56）2--C（R56）2-C3～8炭素環であり、
R56は、独立して、H、OH、C1～8アルキル、C3～8炭素環、-O-C1～8アルキル、-O-C（O）-R29、または-O-R23-O-C1～6アルキル-NH2であり、
R29は、アミノ基、5～12員ヘテロシクロアルキル、-R28-C1～6アルキル-R22、R28-C5～12ヘテロシクロアルキル-C1～6アルキル-R22、-［C（R20R21）］a-R22、もしくは-R28-C1～6アルキル-C6～12アリール-C1～6アルキル-R22であるか、またはR29は本明細書において定義されるR47であり、
R28は存在しないか、NR23または酸素であり、
aは、1～6の整数であり、cは、0～3の整数であり、dは、1～3の整数であり、fは、1～12の整数である。
いくつかの態様では、式（X）のオーリスタチン化合物において:
R39は、ベンジルまたは
であり、R44は水素である。
いくつかの態様では、オーリスタチンは、式（Xa）の化合物:
であり、
式中、
R33～R38、およびR44は、本明細書において定義される通りであり、
R31およびR32の一方は、水素またはC1～8アルキルであり、他方は
であり、
式中、
R83は、水素またはCH3であり、
R84は、C1～6アルキルまたはC6～10アリールであり、
各R12’は、独立して、ハロゲン、-C1～8アルキル、-O-C1～8アルキル、ニトロ、またはシアノであり、
hは、0～4の整数であり、
uは、整数0または1であり、
R53は、
またはR54であり、
R39は、水素、C1～8アルキル、C6～10アリール、-X1-C6～10アリール、C3～8炭素環、C3～8複素環、-X1-C3～8複素環、-C1～8アルキレン-NH2、または（CH2）2SCH3であり、
各X1は、独立して、C1～10アルキレンまたはC3～10シクロアルキレンであり、
R45は、X3-R42またはNH-R19であり、
X3は、OまたはSであり、
R19は、水素、OH、アミノ基、C1～8アルキルアミノ、または-［C（R20R21）］a-R22であり、
R42は、水素、アミノ基、C1～6アルキルアミノ、または-［C（R20R21）］a-R22であり、
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、ヒドロキシル化C6～10アリール、ポリヒドロキシル化C6～10アリール、5～12員複素環、C3～8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、または天然アミノ酸もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
R22は、-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C（O）（CH2）c-C（H）（R23）-N（H）（R23）、-R82-C（O）（CH2）d-（O-CH2-CH2）f-N（H）（R23）、または-R82-（C（O）-CH（X2）-NH）d-R77であり、
各R23は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、C3～8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
X2は、天然アミノ酸または非天然アミノ酸の側鎖であり、
R77は、水素またはX2であり、NR77は、窒素含有環状化合物を形成し、
R82は、-NR23または酸素であり、
R54は、-C（R56）2--C（R56）2-C6～10アリール、-C（R56）2--C（R56）2-C3～8複素環、または-C（R56）2--C（R56）2-C3～8炭素環であり、
R56は、独立して、水素、OH、C1～8アルキル、C3～8炭素環、-O-C1～8アルキル、-O-C（O）-R29、または-O-R23-O-C1～6アルキル-NH2であり、
R29は、アミノ基、5～12員ヘテロシクロアルキル、-R28-C1～6アルキル-R22、R28-C5～12ヘテロシクロアルキル-C1～6アルキル-R22、-［C（R20R21）］a-R22、もしくは-R28-C1～6アルキル-C6～12アリール-C1～6アルキル-R22であるか、またはR29は、本明細書において定義されるR47であり、
R28は存在しないか、NR23または酸素であり、
aは、1～6の整数であり、cは、0～3の整数であり、dは、1～3の整数であり、fは、1～12の整数である。
いくつかの態様では、式（Xa）のオーリスタチン化合物は、式（XIa）または式（XIb）の化合物:
であり、
式中、
R92は、
であり、
R83は、水素またはCH3である。
いくつかの態様では、式（X）のオーリスタチンは、式（XI）、式（XII）または式（XIII）の化合物であり、
ここで、式（XI）の化合物は
であり、
式中、R31は、水素またはCH3であり、R42は、-CH3、または以下の構造のいずれか1つ:
であり、
式中、
aは、1～6の整数であり、cは、0～3の整数であり、gは、2～6の整数であり;
ここで、式（XII）の化合物は
であり、
式中、R31は、水素またはCH3であり、R40は、水素、-OH、-NH2、または以下の構造のいずれか:
であり、
式中、
aは、1～6の整数であり、gは、2～6の整数であり、cは、0～3の整数であり;
ここで、式（XIII）の化合物は
であり、
式中、
R31は、水素またはCH3であり、
R29は、アミノ基、5～12員ヘテロシクロアルキル、-R28-C1～6アルキル-R22、R28-C5～12ヘテロシクロアルキル-C1～6アルキル-R22、-R28-［C（R20R21）］a-R22、もしくは-R28-C1～6アルキル-C6～12アリール-C1～6アルキル-R22であるか、またはR29は、本明細書において定義されるR47であり、
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、ヒドロキシル化C6～10アリール、ポリヒドロキシル化C6～10アリール、5～12員複素環、C3～8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、または天然アミノ酸もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
R22は、-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C（O）（CH2）c-C（H）（R23）-N（H）（R23）、-R82-C（O）（CH2）d-（O CH2-CH2）f-N（H）（R23）、または-R82-（C（O）-CH（X2）-NH）d-R77であり、
各R23は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、C3～8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
X2は、天然アミノ酸または非天然アミノ酸の側鎖であり、
R77は、水素またはX2であり、NR77は、窒素含有環状化合物を形成し、
R82は、-NR23または酸素であり、
R28は存在しないか、NR23または酸素であり、
aは、1～6の整数であり、cは、0～3の整数であり、dは、1～3の整数であり、fは、1～12の整数である。
式（XII）のいくつかの態様では、R40は
である。
いくつかの態様では、式（XII）の化合物は、式（XIIa）、（XIIb）、（XIIc）、（XIId）、（XIIe）、（XIIf）、（XIIg）または（XIIh）の化合物:
である。
式（XIII）の化合物のいくつかの態様では、R29は、-NH2、5員ヘテロシクロアルキル、-R28-C1～6アルキル-R22、R28-C5～12ヘテロシクロアルキル-C1～6アルキル-R22、もしくは-R28-C1～6アルキル-C6～12アリール-C1～6アルキル-R22であるか、またはR29は、本明細書において定義されるR47であり、
R28は、存在しないか、NR23または酸素であり、
R22は、-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C（O）（CH2）c-C（H）（R23）-N（H）（R23）、-R82-C（O）（CH2）d-（O CH2-CH2）f-N（H）（R23）、または-R82-（C（O）-CH（X2）-NH）d-R77であり、
各R23は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、C3～8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
X2は、天然アミノ酸または非天然アミノ酸の側鎖であり、
R77は、水素またはX2であり、NR77は、窒素含有環状化合物を形成し、
R82は、-NR23または酸素であり、
cは、0～3の整数であり、dは、1～3の整数であり、fは、1～12の整数である。
いくつかの態様では、R29は、以下の構造のいずれか1つ:
であり、
式中、
aは、1～6の整数であり、cは、0～3の整数であり、gは、2～6の整数である。
式中、R42は、H、-CH3（m/z＝760）、
式中、R40は、H、
式中、-C（O）-R29は、
である。
いくつかの態様では、Dは
である。
いくつかの態様では、Dは
である。
親水性基またはT1
いくつかの態様では、本開示のコンジュゲートまたは足場に含まれる親水性基は、水溶性かつ実質的に非抗原性のポリマーである。いくつかの態様では、親水性基の例には、限定されることなく、ポリアルコール、ポリエーテル、ポリアニオン、ポリカチオン、ポリリン酸、ポリアミン、多糖、ポリヒドロキシ化合物、ポリリジンおよびその誘導体が挙げられる。いくつかの態様では、親水性基の一端は、それが切断不可能な結合によってまたは切断可能な結合を介して多官能性リンカーまたはMAリンカーに（例えば、MAリンカー中のアミノ酸に）共有結合し得るように官能化され得る。いくつかの態様では、官能化は、例えば、アミン、チオール、NHSエステル、マレイミド、アルキン、アジド、カルボニルまたは他の官能基を介したものであり得る。いくつかの態様では、親水性基の他の末端（terminus）（または末端（termini））は、遊離しており、連結されていない。いくつかの態様では、「連結されていない」とは、親水性基が、Dもしくは薬物単位、放出可能な集合体単位、または本開示のコンジュゲートもしくは足場の他の成分などの別の部分に結合していないことを意味する。いくつかの態様では、親水性基の遊離しており、連結されていない末端には、メトキシ、カルボン酸、アルコールまたは他の好適な官能基が含まれ得る。いくつかの態様では、メトキシ、カルボン酸、アルコールまたは他の好適な官能基は、親水性基の末端（terminus）または末端（termini）のキャップとして作用する。
いくつかの態様では、切断可能な結合とは、血漿中を循環している間は切断に実質的に感受性ではないが、細胞内環境または腫瘍内環境では切断に感受性である結合を指す。いくつかの態様では、切断不可能な結合は、いかなる生物学的環境であっても切断に対して実質的に感受性でない。いくつかの態様では、ヒドラゾンの化学的加水分解、ジスルフィドの還元、およびペプチド結合またはグリコシド結合の酵素的切断が、切断可能な結合の例である。いくつかの態様では、親水性基の例示的な結合は、アミド結合、エーテル結合、エステル結合、ヒドラゾン結合、オキシム結合、ジスルフィド結合、ペプチド結合またはトリアゾール結合を介する。いくつかの態様では、多官能性リンカーまたはMAリンカーへの（例えば、MAリンカー中のアミノ酸への）親水性基の結合は、アミド結合を介する。
本開示のコンジュゲートまたは足場が複数の親水性基を含むいくつかの態様では、複数の親水性基は、同じまたは異なる化学部分であり得る。いくつかの態様では、複数の親水性基は、単一の結合部位または異なる部位で多官能性リンカーまたはMAリンカーに結合することができる。
いくつかの態様では、親水性基の付加は、得られたコンジュゲートの薬物動態に対して、2つの潜在的影響を及ぼし得る。いくつかの態様では、所望の影響は、薬物または薬物-リンカーの曝露された疎水性要素によって誘導される非特異的相互作用の減少から生じる、クリアランスの減少（およびその結果としての曝露の増加）である。いくつかの態様では、望ましくない影響は、コンジュゲートの分子量の増加から生じ得る、体積および分布速度の低下である。いくつかの態様では、親水性基の分子量を増加させると、コンジュゲートの流体力学的半径が増加し、拡散性が低下し、これにより、コンジュゲートが腫瘍に浸透する能力が低下する可能性がある。いくつかの態様では、コンジュゲートクリアランスを減少させ、ひいては血漿曝露を増加させるために、十分に大きいが、その拡散性を大幅に低下させるほど大きくない親水性基が使用され、これにより、コンジュゲートが、意図される標的細胞集団に到達する能力が低下する可能性がある。
いくつかの態様では、親水性基には、限定されることなく、糖アルコール（ポリアルコール、多価アルコール、アルジトールまたはグリシトールとしても知られている）またはその誘導体（例えばアミノポリアルコール）、炭水化物（例えば糖）、ポリビニルアルコール、炭水化物系ポリマー（例えばデキストラン）、ヒドロキシプロピルメタクリルアミド（HPMA）、ポリアルキレンオキシドおよび/またはそのコポリマーが含まれる。
いくつかの態様では、親水性基は、複数のヒドロキシル基、例えば、単糖、オリゴ糖、多糖などを組み込む部分を含む。いくつかの態様では、親水性基は、複数の-（CR58OH）-基を含み、式中、R58は、-HまたはC1～8アルキルである。
いくつかの態様では、親水性基は、式:
の以下の断片のうちの1つまたは複数を含み、式中、n1は、0～約6の整数であり、各R58は、独立して、水素またはC1～8アルキルであり、R60は、結合、C1～6アルキルリンカー、または-CHR59-であり、式中、R59は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルであり、R61は、CH2OR62、COOR62、-（CH2）n2COOR62、または1つもしくは複数のヒドロキシルによって置換されたヘテロシクロアルキルであり、R62は、水素またはC1～8アルキルであり、n2は、1～約5の整数である。
いくつかの態様では、R58は水素であり、R60は、結合またはC1～6アルキルリンカーであり、n1は、1～約6の整数であり、R61は、CH2OHまたはCOOHである。いくつかの態様では、R58は水素であり、R60は-CHR59-であり、n1は0であり、R61は、1つまたは複数のヒドロキシルによって置換されたヘテロシクロアルキル、例えば単糖である。
いくつかの態様では、親水性基は、グルコシル-アミン、ジアミンまたはトリアミンを含む。
いくつかの態様では、親水性基は、以下の断片またはその立体異性体のうちの1つまたは複数:
を含み、
式中、
R59は、水素、C1～8アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルであり、
n1は、1～約6の整数であり、n2は、1～約5の整数であり、n3は、約1～約3の整数である。
本明細書において、親水性基のあらゆる立体化学形態が企図されることが理解される。上記式では、親水性基は、リボース、キシロース、グルコース、マンノース、ガラクトースまたは他の糖に由来し、それらの分子上に存在するペンダントヒドロキシル基およびアルキル基の立体化学的配置を保持し得る。いくつかの態様では、前述の式において、様々なデオキシ化合物も企図されることが理解される。例示的には、適用可能な場合、親水性基について、以下の特徴のうちの1つまたは複数が企図される。
いくつかの態様では、n3は、2または3である。いくつかの態様では、n3は2である。いくつかの態様では、n3は3である。いくつかの態様では、n1は、1、2または3である。いくつかの態様では、n1は1である。いくつかの態様では、n1は2である。いくつかの態様では、n1は3である。いくつかの態様では、n2は1である。
いくつかの態様では、R59はHである。
いくつかの態様では、親水性基は、
を含む。
いくつかの態様では、親水性基は、
を含む。
いくつかの態様では、親水性基は、
を含む。
いくつかの態様では、親水性基は、
を含み、式中、
n4は、1～約25の整数であり、
各R63は、独立して、水素またはC1～8アルキルであり、
R64は、結合またはC1～8アルキルリンカーであり、
R65は、水素、C1～8アルキル、または-（CH2）n2COOR62であり、
R62は、水素またはC1～8アルキルであり、
n2は、1～約5の整数である。
いくつかの態様では、親水性基は、
を含む。
いくつかの態様では、n4は、約2～約20、約4～約16、約6～約12、または約8～約12の整数である。
いくつかの態様では、n4は、約2～約20の整数である。いくつかの態様では、n4は、約4～約16の整数である。いくつかの態様では、n4は、約6～約12の整数である。いくつかの態様では、n4は、約8～約12の整数である。
いくつかの態様では、n4は、6、7、8、9、10、11または12である。
いくつかの態様では、n4は、8または12である。
いくつかの態様では、n4は8である。
いくつかの態様では、T’は
を含み、
式中、n4は、約2～約20、約4～約16、約6～約12、または約8～約12の整数である。
いくつかの態様では、n4は、6、7、8、9、10、11または12である。
いくつかの態様では、n4は、8または12である。
いくつかの態様では、n4は8である。
いくつかの態様では、親水性基は、ポリエーテル、例えばポリアルキレングリコール（PAO）を含む。いくつかの態様では、PAOには、限定されることなく、C1～6アルキレンオキシドのポリマー、特に、エチレンオキシドのポリマーが含まれる。いくつかの態様では、ポリアルキレングリコールはポリエチレングリコール（PEG）である。いくつかの態様では、ポリエチレングリコールはmPEGである。
いくつかの態様では、親水性基は、1つまたは複数のPEG鎖を含むPEG単位を含む。いくつかの態様では、PEG鎖は、例えば、直鎖、分岐または星形の構成で互いに結合することができる。いくつかの態様では、PEG単位は、反復PEGサブユニットを含むことに加えて、非PEG材料も含み得る（例えば、複数のPEG鎖の互いへのカップリングを容易にするために、またはアミノ酸へのカップリングを容易にするために）。
いくつかの態様では、PEG単位は、反応性基を介して多官能性リンカーまたはMAリンカーに（例えば、MAリンカー中のアミノ酸に）共有結合していてもよい。いくつかの態様では、反応性基は、活性化PEG分子が結合し得るもの（例えば、遊離アミノ基またはカルボキシル基）である。いくつかの態様では、N末端アミノ酸およびリジン（K）は、遊離アミノ基を有し、C末端アミノ酸残基は、遊離カルボキシル基を有する。スルフヒドリル基（例えば、システイン残基に見られるように）もまた、PEGを結合させるための反応性基として使用され得る。
いくつかの態様では、PEG単位は、限定されることなく、スクシンイミジルスクシネート（SS）、スクシンイミジルカーボネート（SC）、mPEG-イミデート、パラ-ニトロフェニルカーボネート（NPC）、スクシンイミジルプロピオネート（SPA）および塩化シアヌルを含む様々な反応性部分を有するメトキシ化PEG（「mPEG」）を使用することによって、多官能性リンカーまたはMAリンカーに（例えば、MAリンカー中のアミノ酸に）結合され得る。いくつかの態様では、様々なPEG種を使用することができ、実質的に任意の好適な反応性PEG試薬を使用することができる。いくつかの態様では、反応性PEG試薬は、多官能性リンカーまたはMAリンカーに（例えば、MAリンカー中のアミノ酸に）結合すると、カルバメート結合またはアミド結合を形成する。
いくつかの態様では、PEG単位は、少なくとも6個のサブユニット、少なくとも7個のサブユニット、少なくとも8個のサブユニット、少なくとも9個のサブユニット、少なくとも10個のサブユニット、少なくとも11個のサブユニット、少なくとも12個のサブユニット、少なくとも13個のサブユニット、少なくとも14個のサブユニット、少なくとも15個のサブユニット、少なくとも16個のサブユニット、少なくとも17個のサブユニット、少なくとも18個のサブユニット、少なくとも19個のサブユニット、少なくとも20個のサブユニット、少なくとも21個のサブユニット、少なくとも22個のサブユニット、少なくとも23個のサブユニットまたは少なくとも24個のサブユニットを含む。いくつかの態様では、PEG単位は、約72個以下のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEG単位は、少なくとも6個のサブユニット、少なくとも7個のサブユニット、少なくとも8個のサブユニット、少なくとも9個のサブユニット、少なくとも10個のサブユニット、少なくとも11個のサブユニットまたは少なくとも12個のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEG単位は、少なくとも8個のサブユニット、少なくとも9個のサブユニット、少なくとも10個のサブユニット、少なくとも11個のサブユニットまたは少なくとも12個のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEG単位は、少なくとも6個のサブユニット、少なくとも7個のサブユニットまたは少なくとも8個のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEG単位は、少なくとも6個のサブユニットを含む。いくつかの態様では、PEG単位は、少なくとも7個のサブユニットを含む。いくつかの態様では、PEG単位は、少なくとも8個のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEG単位は、それぞれ少なくとも2個のサブユニット、少なくとも3個のサブユニット、少なくとも4個のサブユニット、少なくとも5個のサブユニット、少なくとも6個のサブユニット、少なくとも7個のサブユニット、少なくとも8個のサブユニット、少なくとも9個のサブユニット、少なくとも10個のサブユニット、少なくとも11個のサブユニット、少なくとも12個のサブユニット、少なくとも13個のサブユニット、少なくとも14個のサブユニット、少なくとも15個のサブユニット、少なくとも16個のサブユニット、少なくとも17個のサブユニット、少なくとも18個のサブユニット、少なくとも19個のサブユニット、少なくとも20個のサブユニット、少なくとも21個のサブユニット、少なくとも22個のサブユニット、少なくとも23個のサブユニットまたは少なくとも24個のサブユニットを有する1つまたは複数の直鎖状PEG鎖を含む。いくつかの態様では、PEG単位は、合計で少なくとも6個のサブユニット、少なくとも8個、少なくとも10個のサブユニットまたは少なくとも12個のサブユニットを含む。いくつかのそのような態様では、PEG単位は、合計で約72個以下のサブユニットを含む。いくつかのそのような態様では、PEG単位は、合計で約36個以下のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEG単位は、合計で4～72、4～60、4～48、4～36、もしくは4～24個のサブユニット、5～72、5～60、5～48、5～36、もしくは5～24個のサブユニット、6～72、6～60、6～48、6～36、もしくは6～24個のサブユニット、7～72、7～60、7～48、7～36、もしくは7～24個のサブユニット、8～72、8～60、8～48、8～36、もしくは8～24個のサブユニット、9～72、9～60、9～48、9～36、もしくは9～24個のサブユニット、10～72、10～60、10～48、10～36、もしくは10～24個のサブユニット、11～72、11～60、11～48、11～36、もしくは11～24個のサブユニット、12～72、12～60、12～48、12～36、もしくは12～24個のサブユニット、13～72、13～60、13～48、13～36、もしくは13～24個のサブユニット、14～72、14～60、14～48、14～36、もしくは14～24個のサブユニット、15～72、15～60、15～48、15～36、もしくは15～24個のサブユニット、16～72、16～60、16～48、16～36、もしくは16～24個のサブユニット、17～72、17～60、17～48、17～36、もしくは17～24個のサブユニット、18～72、18～60、18～48、18～36、もしくは18～24個のサブユニット、19～72、19～60、19～48、19～36、もしくは19～24個のサブユニット、20～72、20～60、20～48、20～36、もしくは20～24個のサブユニット、21～72、21～60、21～48、21～36、もしくは21～24個のサブユニット、22～72、22～60、22～48、22～36、もしくは22～24個のサブユニット、23～72、23～60、23～48、23～36、もしくは23～24個のサブユニット、または24～72、24～60、24～48、24～36個のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEG単位は、合計で4～72、4～60、4～48、4～36、もしくは4～24個のサブユニット、5～72、5～60、5～48、5～36、もしくは5～24個のサブユニット、6～72、6～60、6～48、6～36、もしくは6～24個のサブユニット、7～72、7～60、7～48、7～36、もしくは7～24個のサブユニット、8～72、8～60、8～48、8～36、もしくは8～24個のサブユニット、9～72、9～60、9～48、9～36、もしくは9～24個のサブユニット、10～72、10～60、10～48、10～36、もしくは10～24個のサブユニット、11～72、11～60、11～48、11～36、もしくは11～24個のサブユニット、12～72、12～60、12～48、12～36、もしくは12～24個のサブユニット、13～72、13～60、13～48、13～36、もしくは13～24個のサブユニット、14～72、14～60、14～48、14～36、もしくは14～24個のサブユニット、15～72、15～60、15～48、15～36、もしくは15～24個のサブユニット、16～72、16～60、16～48、16～36、もしくは16～24個のサブユニット、17～72、17～60、17～48、17～36、もしくは17～24個のサブユニット、18～72、18～60、18～48、18～36、もしくは18～24個のサブユニット、19～72、19～60、19～48、19～36、もしくは19～24個のサブユニット、20～72、20～60、20～48、20～36、もしくは20～24個のサブユニット、21～72、21～60、21～48、21～36、もしくは21～24個のサブユニット、22～72、22～60、22～48、22～36、もしくは22～24個のサブユニット、23～72、23～60、23～48、23～36、もしくは23～24個のサブユニット、または24～72、24～60、24～48、24～36個のサブユニットを有する1つまたは複数の直鎖状PEG鎖を含む。
いくつかの態様では、PEG単位は、少なくとも2個のサブユニット、少なくとも3個のサブユニット、少なくとも4個のサブユニット、少なくとも5個のサブユニット、少なくとも6個のサブユニット、少なくとも7個のサブユニット、少なくとも8個のサブユニット、少なくとも9個のサブユニット、少なくとも10個のサブユニット、少なくとも11個のサブユニット、少なくとも12個のサブユニット、少なくとも13個のサブユニット、少なくとも14個のサブユニット、少なくとも15個のサブユニット、少なくとも16個のサブユニット、少なくとも17個のサブユニット、少なくとも18個のサブユニット、少なくとも19個のサブユニット、少なくとも20個のサブユニット、少なくとも21個のサブユニット、少なくとも22個のサブユニット、少なくとも23個のサブユニットまたは少なくとも24個のサブユニットを有する誘導体化された直鎖状の単一PEG鎖である。
いくつかの態様では、PEG単位は、6～72、6～60、6～48、6～36、もしくは6～24個のサブユニット、7～72、7～60、7～48、7～36、もしくは7～24個のサブユニット、8～72、8～60、8～48、8～36、もしくは8～24個のサブユニット、9～72、9～60、9～48、9～36、もしくは9～24個のサブユニット、10～72、10～60、10～48、10～36、もしくは10～24個のサブユニット、11～72、11～60、11～48、11～36、もしくは11～24個のサブユニット、12～72、12～60、12～48、12～36、もしくは12～24個のサブユニット、13～72、13～60、13～48、13～36、もしくは13～24個のサブユニット、14～72、14～60、14～48、14～36、もしくは14～24個のサブユニット、15～72、15～60、15～48、15～36、もしくは15～24個のサブユニット、16～72、16～60、16～48、16～36、もしくは16～24個のサブユニット、17～72、17～60、17～48、17～36、もしくは17～24個のサブユニット、18～72、18～60、18～48、18～36、もしくは18～24個のサブユニット、19～72、19～60、19～48、19～36、もしくは19～24個のサブユニット、20～72、20～60、20～48、20～36、もしくは20～24個のサブユニット、21～72、21～60、21～48、21～36、もしくは21～24個のサブユニット、22～72、22～60、22～48、22～36、もしくは22～24個のサブユニット、23～72、23～60、23～48、23～36、もしくは23～24個のサブユニット、または24～72、24～60、24～48、24～36個のサブユニットを有する誘導体化された直鎖状の単一PEG鎖である。
いくつかの態様では、本明細書において開示されるコンジュゲート、足場および方法に適した親水性基の例は、例えば、その各々の内容全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第8,367,065号第13欄、米国特許第8524696号第6欄、国際公開公報第2015/057699号および国際公開公報第2014/062697号に見出され得る。
抗体
本明細書において使用される用語「抗体」は、特定の抗原を認識し、それに結合することができる、免疫系によって生成されるタンパク質を指す。いくつかの態様では、抗体は糖タンパク質である。いくつかの態様では、抗体は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ラクダ科化単一ドメイン抗体、細胞内抗体（「イントラボディ」）、組換え抗体、抗イディオタイプ抗体、ドメイン抗体、直鎖状抗体、多重特異性抗体、抗体断片（例えば、Fv、Fab、F（ab）2、F（ab）3、Fab’、Fab’-SH、F（ab’）2）、一本鎖可変断片抗体（scFv）、タンデム/ビス-scFv、Fc、pFc’、scFvFc（またはscFv-Fc）、ジスルフィドFv（dsFv）、二重特異性抗体（bc-scFv）、例えばBiTE抗体;ラクダ科抗体、再表面化（resurfaced）抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、単一ドメイン抗体（sdAb、NANOBODY（登録商標）としても知られる）、キメラ抗体、少なくとも1つのヒト定常領域を含むキメラ抗体、二重親和性抗体、例えば二重親和性再標的指向性タンパク質（DART（商標））、限定されることなく、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディまたはトリボディ、テトラボディなどを含む二価（divalent）（または二価（bivalent））一本鎖可変断片（di-scFv、bi-scFv）、および多価抗体を含む様々な形態で存在し得る。
本明細書において使用される用語「抗体断片」は、その標的、すなわち、抗原結合領域に結合する、免疫グロブリン分子の可変領域の少なくとも一部を指す。本明細書において使用される場合、用語「抗体」は、特に明記しない限り、完全長抗体および抗体断片の両方を指す。いくつかの態様では、該用語は、遺伝子操作された抗体、抗体の誘導体、抗体の断片を含み、当技術分野において公知の方法によって得ることができる。いくつかの態様では、抗体は、少なくとも1つの化学反応性基を含むように操作され得る。
いくつかの態様では、コア-N-アセチルグルコサミン置換基（コア-GlcNAc部分）を含む糖タンパク質は、コア-N-アセチルグルコサミン置換基（コア-GlcNAc部分）を含む抗体である。いくつかの態様では、糖タンパク質は、モノクローナル抗体（mAb）IgA抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgG抗体またはIgM抗体である。いくつかの態様では、抗体はIgG抗体である。いくつかの態様では、抗体はIgG1抗体である。いくつかの態様では、該抗体が全抗体である場合、抗体は、各重鎖上に1つまたは複数の（例えば1つの）コア-GlcNAc部分を含み、該コア-GlcNAc部分は、フコシル化されていてもよい。いくつかの態様では、全抗体は、2つ以上（例えば2つ）のフコシル化されていてもよいコア-GlcNAc部分を含む。いくつかの態様では、該抗体が一本鎖抗体または抗体断片、例えば、Fab断片またはFc断片である場合、抗体は、フコシル化されていてもよい1つまたは複数のコア-GlcNAc部分を含む。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分を含む抗体内で、該コア-GlcNAc部分は、該置換基が抗体の抗原結合部位を妨害しない限り、抗体上のどこに位置していてもよい。いくつかの態様では、該コア-GlcNAc部分は、抗体の天然N-グリコシル化部位に存在する。いくつかの態様では、抗体は、少なくとも1つの化学反応性基または化学反応性アミノ酸部分もしくは化学反応性側鎖を含むか、または含むように操作される。
いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを特定の組織、細胞、または細胞内の位置に導くことができる。いくつかの態様では、抗体は、培養物中、もしくは生物全体の中で、またはその両方でコンジュゲートを導くことができる。いくつかの態様では、抗体は、抗体が有効な特異性、親和性およびアビディティーで結合する標的細胞の細胞表面に存在するリガンドを含む。いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを肝臓以外の組織に導く。いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを特定の組織、例えば、肝臓、腎臓、肺または膵臓に導く。いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを標的細胞（例えば癌細胞）、細胞（例えば癌細胞）上に発現される受容体、マトリックス組織、または癌に関連するタンパク質（例えば腫瘍抗原）に導く。いくつかの態様では、腫瘍血管系を含む細胞が標的とされ得る。いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを特定の種類の細胞に導くことができ、例えば、クッパー細胞ではなく肝臓の肝細胞を特異的に標的とすることができる。いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを網状内皮系もしくはリンパ系の細胞、またはマクロファージもしくは好酸球などのプロフェッショナル食細胞に導くことができる。いくつかの態様では、コンジュゲート自体が、特異的標的指向性を必要としない、効果的な送達系である。
いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを細胞内のある位置（例えば、核、細胞質またはエンドソーム）に導くことができる。いくつかの態様では、抗体は、受容体への細胞結合、または核への細胞質輸送、およびエンドソームもしくは他の細胞内小胞からの核進入または核放出を増強する。
いくつかの態様では、コンジュゲートは、Her-2抗体またはNaPi2b抗体を含む。いくつかの態様では、コンジュゲートに適したHer-2抗体は、トラスツズマブである。いくつかの態様では、コンジュゲートに適したHer-2抗体には、その各々全体が参照により本明細書に組み入れられる国際公開公報第2015/195917号およびPCT/US2018/019873に記載されているものが含まれる。
NaPi2b抗体
いくつかの態様では、コンジュゲーションに適したNaPi2b抗体は、SLC34A2の細胞外領域に結合する。いくつかの態様では、本開示は、ナトリウム依存性リン酸輸送タンパク質2Bとしても知られるNaPi2bを特異的に認識するNaPi2b標的指向性モノクローナル抗体を提供する。いくつかの態様では、本明細書において開示されるコンジュゲートに使用されるNaPi2b抗体は、NaPi2bの少なくとも1つの生物学的活性を調節する、例えば、遮断する、阻害する、減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉することができ、NaPi2bの少なくとも1つの生物学的活性を調節する、例えば、遮断する、阻害する、減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉するのに有用である。いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、可溶性NaPi2bに結合する抗体も含む。いくつかの態様では、NaPi2b抗体は、ヒトNaPi2bの細胞外ドメイン（ECD）上のエピトープに特異的に結合する。これらの抗体は、本明細書において、集合的に「NaPi2b」抗体と呼ばれる。
いくつかの態様では、本明細書において提供されるNaPi2b抗体-薬物コンジュゲートは、1μM以下（例えば、100nM以下、10nM以下および1nM以下）の平衡解離定数（KdまたはKD）でNaPi2bエピトープに結合する抗体を含む。いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体-薬物コンジュゲートに使用されるNaPi2b抗体は、約1nM以下～約1pMの範囲のKdを示す。
いくつかの態様では、本明細書において提供されるNaPi2b抗体-薬物コンジュゲートは、NaPi2bの機能活性を調節する、遮断する、阻害する、減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉するのに役立つ抗体を含むことができる。いくつかの態様では、NaPi2bの機能活性には、例えば、経細胞無機ホスフェート（Pi）吸収に関与し、それによって、体内のホスフェート恒常性の維持に寄与することが含まれる。いくつかの態様では、NaPi2b抗体は、経細胞無機ホスフェート吸収を部分的または完全に調節する、遮断する、阻害する、それを減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉することによって、NaPi2b機能活性を完全にまたは部分的に阻害する。
いくつかの態様では、NaPi2b抗体は、NaPi2b抗体の存在下でのNaPi2b機能活性のレベルが、本明細書において記載されるNaPi2b抗体との結合の非存在下でのNaPi2b機能活性のレベルと比較して少なくとも95％、例えば、96％、97％、98％、99％または100％低下した場合、NaPi2b機能活性を完全に調節する、遮断する、阻害する、減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉すると考えられる。いくつかの態様では、NaPi2b抗体は、NaPi2b抗体の存在下でのNaPi2b活性のレベルが、本明細書において記載されるNaPi2b抗体との結合の非存在下でのNaPi2b活性のレベルと比較して95％未満、例えば、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、75％、80％、85％または90％低下した場合、NaPi2b機能活性を部分的に調節する、遮断する、阻害する、減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉すると考えられる。
いくつかの態様では、本明細書において開示される例示的な抗体には、XMT-1535抗体が含まれる。これらの抗体は、ヒトNaPi2bに対する特異性を示し、NaPi2b活性を阻害することが示されている。
NaPi2bヒトモノクローナル抗体またはNaPi2bヒト化モノクローナル抗体XMT-1535は、以下の表1に示されるアミノ酸配列および対応する核酸配列に示されるように、重鎖（HC）、重鎖可変領域（VH）、軽鎖（LC）および軽鎖可変領域（VL）を含む。以下のアミノ酸配列では、各抗体の可変重鎖領域および可変軽鎖領域を網掛けで示す。以下に示されるアミノ酸配列では、重鎖および軽鎖の相補性決定領域（CDR）に下線が引かれている。XMT-1535抗体の相補性決定領域（CDR）を包含するアミノ酸は、E.A.Kabat et al.によって定義されている通りであり（Kabat,E.A.,et al.,Sequences of Protein of immunological interest,Fifth Edition,US Department of Health and Human Services,US Government Printing Office（1991）を参照）、米国特許第8,603,474号に開示されている。
（表１）NaPi2bヒトモノクローナル抗体またはNaPi2bヒト化モノクローナル抗体XMT-1535の配列
本明細書において開示される抗体は、ヒトNaPi2bの細胞外ドメイン（ECD）上のエピトープに特異的に結合する。
いくつかの態様では、当業者であれば、過度の実験を用いることなく、モノクローナル抗体が本明細書において開示されるモノクローナル抗体（例えば、XMT-1535、10H1.11.4B）と同じ特異性を有するかどうかを、後者が天然の結合パートナー、またはNaPi2bと会合することが知られている他の分子に結合するのを前者が妨げるかどうかを確認することによって決定することが可能であることを認識するであろう。本明細書において開示されるモノクローナル抗体による結合の減少によって示されるように、試験されるモノクローナル抗体が本明細書において開示されるモノクローナル抗体と競合する場合、2つのモノクローナル抗体は同じエピトープまたは密接に関連するエピトープに結合する。
モノクローナル抗体が本明細書において開示されるモノクローナル抗体の特異性を有するかどうかを決定するための代替的な方法は、本明細書において開示されるモノクローナル抗体を可溶性NaPi2b（通常はそれと反応性である）とプレインキュベートし、次いで、試験されるモノクローナル抗体を加えて、試験されるモノクローナル抗体では、NaPi2bに結合する能力が阻害されているかどうかを決定することである。試験されるモノクローナル抗体が阻害される場合、ほとんど確実に、それは本明細書において開示されるモノクローナル抗体と同じまたは機能的に等価なエピトープ特異性を有する。
また、例えば、NaPi2b媒介活性を測定し、試験モノクローナル抗体がNaPi2b活性を調節する、遮断する、阻害する、減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉することができるかどうかを決定することによって、本明細書において開示されるモノクローナル抗体のスクリーニングを行うことができる。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:3から選択される配列と少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、SEQ ID NO:4から選択される配列と少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:1のアミノ酸配列と少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:2のアミノ酸配列と少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:3の重鎖可変領域アミノ酸配列と、SEQ ID NO:4の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:1の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:2の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:5のCDRH1アミノ酸配列と、SEQ ID NO:6のCDRH2アミノ酸配列と、SEQ ID NO:7のCDRH3アミノ酸配列と、SEQ ID NO:8のCDRL1アミノ酸配列と、SEQ ID NO:9のCDRL2アミノ酸配列と、SEQ ID NO:10のCDRL3アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、SEQ ID NO:5のアミノ酸配列と少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む、本明細書において開示される抗体;SEQ ID NO:6のアミノ酸配列と少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含むCDRH2;SEQ ID NO:7のアミノ酸配列と少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含むCDRH3;SEQ ID NO:8のアミノ酸配列と少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含むCDRL1;SEQ ID NO:9のアミノ酸配列と少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含むCDRL2;およびSEQ ID NO:10のアミノ酸配列と少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含むCDRL3。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、可変ドメイン配列に1つまたは複数の保存的アミノ酸置換、例えば、可変ドメイン配列に1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15またはそれ以上の保存的置換を含む。いくつかの態様では、これらの保存的アミノ酸置換は、CDR領域内にあり、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15またはそれ以上の保存的置換が全CDRにわたって累積的に行われ、いくつかの特定の態様では、各CDR配列、例えばSEQ ID NO:5～10に最大1つ、最大2つ、最大3つまたは最大4つの保存的アミノ酸置換が存在し得る。
いくつかの態様では、当業者であれば、過度の実験を用いることなく、モノクローナル抗体がモノクローナル抗体XMT-1535と同じ特異性を有するかどうかを、後者が天然の結合パートナー、またはNaPi2bと会合することが知られている他の分子に結合するのを前者が妨げるかどうかを確認することによって決定することが可能であることを認識するであろう。本明細書において開示されるモノクローナル抗体による結合の減少によって示されるように、試験されるモノクローナル抗体が本明細書において開示されるモノクローナル抗体と競合する場合、2つのモノクローナル抗体は同じエピトープまたは密接に関連するエピトープに結合する。
いくつかの態様では、モノクローナル抗体が本明細書において開示されるモノクローナル抗体の特異性を有するかどうかを決定するための代替的な方法は、本明細書において開示されるモノクローナル抗体を可溶性NaPi2b（通常はそれと反応性である）とプレインキュベートし、次いで、試験されるモノクローナル抗体を加えて、試験されるモノクローナル抗体では、NaPi2bに結合する能力が阻害されているかどうかを決定することである。いくつかの態様では、試験されるモノクローナル抗体が阻害される場合、それは本明細書において開示されるモノクローナル抗体と同じまたは機能的に等価なエピトープ特異性を有する。
また、例えば、NaPi2b媒介活性を測定し、試験モノクローナル抗体がNaPi2b活性を調節する、遮断する、阻害する、減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉することができるかどうかを決定することによって、本明細書において開示されるモノクローナル抗体のスクリーニングを行うことができる。
いくつかの態様では、コンジュゲーションに適したNaPi2b抗体は、周知の技術、例えば、その各々全体が参照により本明細書に組み入れられる国際公開公報第2009/097128号、国際公開公報第2017/160754号および米国特許第16/136,706号によって生成および精製され得る。
HER2抗体
いくつかの態様では、コンジュゲーションに適したHER2抗体は、可溶性形態または膜結合（すなわち、細胞表面上で発現される場合）でヒトHER2に結合する。いくつかの態様では、本開示は、HER2に結合し、ヒト化または完全ヒトであるモノクローナル抗体を提供する。いくつかの態様では、本開示は、HER2に特異的に結合するモノクローナル抗体を提供する。これらの抗体は、本明細書において、集合的に「HER2」抗体と呼ばれる。
いくつかの態様では、コンジュゲーションに適したHER2抗体は、1μM以下（例えば、100nM以下;10nM以下;1nM以下）の平衡解離定数（KdまたはKD）でHER2エピトープに結合する。いくつかの態様では、本開示は、HER2に結合し、ヒト化または完全ヒトであるモノクローナル抗体を提供する。例えば、本明細書において提供されるHER2抗体は、約1nM以下～約1pMの範囲のKdを示す。
いくつかの態様では、本明細書において開示されるHER2抗体は、HER2の機能活性を調節する、遮断する、阻害する、減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉するのに役立つ。HER2。いくつかの態様では、HER2の機能活性には、例えば、PI3K-Akt経路活性の調節が含まれる。いくつかの態様では、HER2抗体は、PI3K-Akt経路活性を部分的または完全に調節する、遮断する、阻害する、それを減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉することによって、HER2機能活性を完全にまたは部分的に阻害する。PI3K-Akt経路活性は、限定されることなく、本明細書において開示される抗体または抗原結合断片の存在下および非存在下でのリン酸化Aktのレベルの検出を含む、PI3K-Akt経路活性を検出するための当技術分野において認識されている任意の方法を使用して評価される。
いくつかの態様では、HER2抗体は、HER2抗体の存在下でのHER2機能活性のレベルが、本明細書において記載されるHER2抗体との結合の非存在下でのHER2機能活性のレベルと比較して少なくとも80％、例えば、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％または100％低下した場合、HER2機能活性を完全に調節する、遮断する、阻害する、減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉すると考えられる。いくつかの態様では、HER2抗体は、HER2抗体の存在下でのHER2活性のレベルが、本明細書において記載されるHER2抗体との結合の非存在下でのHER2活性のレベルと比較して95％未満、例えば、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、75％、80％、85％または90％低下した場合、HER2機能活性を部分的に調節する、遮断する、阻害する、減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉すると考えられる。
いくつかの態様では、本明細書において開示される例示的な抗体には、XMT-1519抗体が含まれる。この抗体は、ヒトHER2に対する特異性を示し、インビトロでHER2の機能活性を阻害することが示されている。
HER-2モノクローナル抗体XMT-1519は、以下の表2に示されるアミノ酸配列および対応する核酸配列に示されるように、重鎖（HC）、重鎖可変領域（VH）、軽鎖（LC）および軽鎖可変領域（VL）を含む。以下のアミノ酸配列では、各抗体の可変重鎖領域および可変軽鎖領域を網掛けで示す。以下に示されるアミノ酸配列では、重鎖および軽鎖の相補性決定領域（CDR）に下線が引かれている。相補性決定領域（CDR）を包含するアミノ酸は、E.A.Kabat et al.によって定義されている通りである（Kabat,E.A.,et al.,Sequences of Protein of immunological interest,Fifth Edition,US Department of Health and Human Services,US Government Printing Office（1991）を参照）。
（表２）HER2ヒトモノクローナル抗体またはHER2ヒト化モノクローナル抗体XMT-1519の配列
本明細書において開示される抗体およびその抗原結合断片は、SEQ ID NO:16のアミノ酸配列を含む完全長ヒトHER2受容体上のエピトープに特異的に結合する。
本明細書において開示される抗体およびその抗原結合断片は、SEQ ID NO:31のアミノ酸配列を含むヒトHER2受容体の細胞外ドメイン（ECD）上のエピトープに特異的に結合する。
いくつかの態様では、本開示の抗体は、当技術分野において記載される抗体とは異なるHER2結合特徴を示す。いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、互いにクロスブロック（cross-block）するが、トラスツズマブ、ペルツズマブ、Fab37またはchA21がHER2に結合するのをクロスブロックしないという点で、HER2の異なるエピトープに結合する。さらに、公知の抗体とは対照的に、本明細書において開示される抗体は、細胞増殖を促進することなく、HER2発現細胞に効率的に内在化することができる。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、新規エピトープに結合し、および/または治療的使用のための他の好ましい特性を有する完全ヒトモノクローナル抗体である。いくつかの態様では、例示的な特性には、限定されることなく、高レベルもしくは低レベルでヒトHER2を発現する癌細胞への好ましい結合特性、組換えヒトHER2および組換えカニクイザルHER2への特異的結合、HER2への結合時の効率的な内在化、抗体薬物コンジュゲート（ADC）として投与した場合の高レベルもしくは低レベルのHER2を発現する癌細胞を死滅させる高い能力、HER2発現癌細胞の増殖に対する実質的なアゴニスト作用がないこと、および/またはHER2発現細胞の効果的な抗体依存性細胞傷害性（ADCC）媒介殺傷、ならびに前述の特性の任意の組合せが含まれる。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体にはまた、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインの残基452～531、SEQ ID NO:16の残基474～553、またはSEQ ID NO:31の残基452～531を含む、ヒトHER2受容体のエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が含まれる。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体には、ヒトHER2受容体のドメインIVのN末端の少なくとも一部に結合するが、ヒトHER2受容体のエピトープ4D5に結合する抗体と交差競合しない抗体またはその抗原結合断片が含まれる。いくつかの態様では、本明細書において記載される抗体またはその抗原結合断片は、トラスツズマブがヒトHER2受容体のエピトープ4D5に結合することが知られていることから、ヒトHER2受容体への結合についてトラスツズマブと交差競合しない。本明細書において使用される場合、ヒトHER2受容体のエピトープ4D5という用語は、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインのアミノ酸残基529～627、SEQ ID NO:16の残基551～649、またはSEQ ID NO:31の残基529～627を指す。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片はまた、カニクイザルHER2受容体上の少なくとも1つのエピトープに結合する。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体にはまた、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインの残基452～500、SEQ ID NO:16の残基474～522、またはSEQ ID NO:31の残基452～500を含む、ヒトHER2受容体のエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が含まれる。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体にはまた、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインのアミノ酸残基E521、L525およびR530、例えば、SEQ ID NO:16の残基543、547および552、ならびにSEQ ID NO:31の残基521、525および530から選択されるアミノ酸残基のうちの少なくとも1つを含む、ヒトHER2受容体のエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が含まれる。いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体には、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインのアミノ酸残基E521、L525およびR530から選択される少なくとも2つのアミノ酸残基を含む、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインのエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が含まれる。いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体にはまた、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインの少なくともアミノ酸残基E521、L525およびR530を含む、ヒトHER2受容体のエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が含まれる。いくつかの態様では、これらの抗体またはその抗原結合断片のいずれかまたは全部が、カニクイザルHER2受容体上の少なくとも1つのエピトープにも結合する。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体にはまた、ヒトHER2受容体のドメインIIIの少なくとも一部およびドメインIVのN末端の少なくとも一部に結合するが、Fab37モノクローナル抗体、またはヒトHER2受容体のエピトープ4D5に結合する抗体と交差競合しない抗体またはその抗原結合断片が含まれる。いくつかの態様では、本明細書において記載される抗体またはその抗原結合断片は、ヒトHER2受容体への結合についてFab37モノクローナル抗体および/またはトラスツズマブと交差競合しない。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片はまた、カニクイザルHER2受容体上の少なくとも1つのエピトープに結合する。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体にはまた、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインの残基520～531、SEQ ID NO:16の残基542～553、またはSEQ ID NO:31の残基520～531を含む、ヒトHER2受容体のエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が含まれる。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体にはまた、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインの残基C453、H456、H473、N476、R495、G496、H497およびW499、例えば、SEQ ID NO:16の残基475、478、495、498、517、518、519および521、またはSEQ ID NO:31の残基453、456、473、476、495、496、497および499から選択される少なくとも1つのアミノ酸残基を含む、ヒトHER2受容体のエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が含まれる。いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体には、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインのアミノ酸残基C453、H456、H473、N476、R495、G496、H497およびW499から選択される少なくとも2つのアミノ酸残基、少なくとも3つのアミノ酸残基、少なくとも4つのアミノ酸残基、少なくとも5つのアミノ酸残基または少なくとも6つのアミノ酸残基を含む、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインのエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が含まれる。いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体には、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインの少なくともアミノ酸残基C453、H456、H473、N476、R495、G496、H497およびW499を含む、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインのエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が含まれる。いくつかの態様では、これらの抗体またはその抗原結合断片のいずれかまたは全部が、カニクイザルHER2受容体上の少なくとも1つのエピトープにも結合する。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体にはまた、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインの残基C453、H473、N476、R495、H497およびW499、例えば、SEQ ID NO:16の残基475、495、498、517、519および521、またはSEQ ID NO:31の残基453、473、476、495、497および499から選択される少なくとも1つのアミノ酸残基を含む、ヒトHER2受容体のエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が含まれる。いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体には、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインのアミノ酸残基C453、H473、N476、R495、H497およびW499から選択される少なくとも2つのアミノ酸残基、少なくとも3つのアミノ酸残基、少なくとも4つのアミノ酸残基、少なくとも5つのアミノ酸残基または少なくとも6つのアミノ酸残基を含む、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインのエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が含まれる。いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体には、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインの少なくともアミノ酸残基C453、H473、N476、R495、H497およびW499を含む、ヒトHER2受容体の細胞外ドメインのエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が含まれる。いくつかの態様では、これらの抗体またはその抗原結合断片のいずれかまたは全部が、カニクイザルHER2受容体上の少なくとも1つのエピトープにも結合する。
いくつかの態様では、これらの抗体は、ヒトHER2に対する特異性を示し、リン酸化AKTのレベルを低下させることによって細胞生存を促進するPI3K-Akt経路を調節する、例えば、遮断する、阻害する、減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉することが示されている。いくつかの態様では、これらの抗体は、トラスツズマブまたはそのバイオシミラーが内在化する速度と同じまたは実質的に同様の速度で、HER2発現細胞の細胞表面から内在化する。いくつかの態様では、これらの抗体および抗原結合断片は、時間0で結合した全表面の約50％が4時間までに内在化される内在化速度を有する。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:17から選択される配列と少なくとも80％、少なくとも81％、少なくとも82％、少なくとも83％、少なくとも84％、少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、SEQ ID NO:24から選択される配列と少なくとも80％、少なくとも81％、少なくとも82％、少なくとも83％、少なくとも84％、少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:19のアミノ酸配列と少なくとも80％、少なくとも81％、少なくとも82％、少なくとも83％、少なくとも84％、少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列と少なくとも80％、少なくとも81％、少なくとも82％、少なくとも83％、少なくとも84％、少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％少なくとも98％、少なくとも99％またはそれ以上同一の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:17の重鎖可変領域アミノ酸配列と、SEQ ID NO:24の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:19の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:26の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:20のCDRH1アミノ酸配列と、SEQ ID NO:21のCDRH2アミノ酸配列と、SEQ ID NO:22のCDRH3アミノ酸配列と、SEQ ID NO:27のCDRL1アミノ酸配列と、SEQ ID NO:28のCDRL2アミノ酸配列と、SEQ ID NO:29のCDRL3アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、可変ドメイン配列に1つまたは複数の保存的アミノ酸置換、例えば、可変ドメイン配列に1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15またはそれ以上の保存的置換を含む。いくつかの態様では、これらの保存的アミノ酸置換はCDR領域内にあり、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15またはそれ以上の保存的置換が全CDRにわたって累積的に行われる。いくつかの態様では、各CDR配列、例えば、SEQ ID NO:20～22および27～29に最大1つ、最大2つ、最大3つまたは最大4つの保存的アミノ酸置換が存在し得る。
当業者であれば、過度の実験を用いることなく、モノクローナル抗体がモノクローナル抗体XMT-1519と同じ特異性を有するかどうかを、後者が天然の結合パートナー、またはHER2と会合することが知られている他の分子に結合するのを前者が妨げるかどうかを確認することによって決定することが可能であることを認識するであろう。いくつかの態様では、本明細書において開示されるモノクローナル抗体による結合の減少によって示されるように、試験されるモノクローナル抗体が本明細書において開示されるモノクローナル抗体と競合する場合、2つのモノクローナル抗体は同じエピトープまたは密接に関連するエピトープに結合する。
いくつかの態様では、モノクローナル抗体が本明細書において開示されるモノクローナル抗体の特異性を有するかどうかを決定するための代替的な方法は、本明細書において開示されるモノクローナル抗体を可溶性HER2（通常はそれと反応性である）とプレインキュベートし、次いで、試験されるモノクローナル抗体を加えて、試験されるモノクローナル抗体では、HER2に結合する能力が阻害されているかどうかを決定することである。試験されるモノクローナル抗体が阻害される場合、ほとんど確実に、それは本明細書において開示されるモノクローナル抗体と同じまたは機能的に等価なエピトープ特異性を有する。
いくつかの態様では、例えば、HER2媒介PI3K-Akt経路活性を測定し、試験モノクローナル抗体がPI3K-Akt経路活性を調節する、遮断する、阻害する、減少させる、それに拮抗する、それを中和する、または他の方法でそれに干渉することができるかどうかを決定することによって、本明細書において開示されるモノクローナル抗体のスクリーニングを行うことができる。いくつかの態様では、コンジュゲーションに適したHER2抗体は、周知の技術、例えば、その各々全体が参照により本明細書に組み入れられる国際公開公報第2015/195917号およびPCT/US2018/019873によって生成および精製され得る。
修飾抗体
いくつかの態様では、抗体は修飾抗体である。
修飾抗体のいくつかの態様では、＊は、修飾抗体の残部に対する直接的または間接的な結合を示す。いくつかの態様では、S''は、糖または誘導体化糖である。いくつかの態様では、A''は、リンカー-薬物部分の官能基と共有結合を形成することができる官能基であり、
いくつかの態様では、コンジュゲーション前の修飾抗体は、＊-S''-A''の糖-誘導体部分を含む。
いくつかの態様では、修飾抗体は、領域290～305内にアスパラギン基を（例えば、N297に）含む。いくつかの態様では、糖-誘導体部分は、このアスパラギン基に（例えば、N297に）直接的または間接的に結合される。
いくつかの態様では、コンジュゲーション前の修飾抗体は、修飾GlcNAc部分、＊-GlcNAc-S''-A''を含み、GlcNAcはN-アセチルグルコサミンである。
いくつかの態様では、修飾GlcNAc部分は、GlcNAcのC1位を介して、修飾抗体の残部に接続される。いくつかの態様では、修飾GlcNAc部分は、フコースをさらに含む。
いくつかの態様では、修飾GlcNAc部分は、アスパラギン基に（例えば、N297に）直接的または間接的に結合される。
いくつかの態様では、修飾抗体は、A''とリンカー-薬物部分の官能基との間に形成された共有結合を介して、リンカー-薬物部分にコンジュゲートされる。
いくつかの態様では、本開示の修飾抗体は、
（a）抗体とコア-GlcNAc部分とを含む糖タンパク質（例えば抗体グリカン）をエンドグリコシダーゼと接触させ、それによって、抗体と末端GlcNAc部分とを含む中間抗体を形成する工程であって、任意で、末端GlcNAc部分が、フコースをさらに含む工程、および
（b）中間抗体を、グリコシルトランスフェラーゼの存在下で、P''-S''-A''の構造を有する化合物と接触させ、それによって、抗体と修飾GlcNAc部分、＊-GlcNAc-S''-A''とを含む修飾抗体を形成する工程であって、任意で、修飾GlcNAc部分が、GlcNAcのC1位を介して、修飾抗体の残部に結合される工程、を含むプロセスによって得られ、
GlcNAcはN-アセチルグルコサミンであり、
S''は、糖または誘導体化糖であり、
A''は、アジド、ケトまたはアルキニルであり、
P''は、ウリジン二リン酸（UDP）、グアノシン二リン酸（GDP）またはシチジン二リン酸（CDP）である。
いくつかの態様では、工程（a）および（b）は、連続的に行われる。いくつかの態様では、工程（a）および（b）は、同時に行われる。
いくつかの態様では、抗体グリカンは、グリコフォームG0、G1、G2、G0F、GIF、G2FおよびM5（例えば、図1に示されるグリコフォーム）の混合物を含む。
いくつかの態様では、抗体はモノクローナル抗体（mAb）である。
いくつかの態様では、抗体は、IgA抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgG抗体またはIgM抗体である。
いくつかの態様では、抗体は、IgG抗体、例えば、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体またはIgG4抗体である。いくつかの態様では、抗体はIgG1抗体である。
いくつかの態様では、抗体は完全長抗体であり、抗体グリカンは、1つまたは複数のコア-GlcNAc部分を含む。
いくつかの態様では、抗体は完全長抗体であり、抗体グリカンは、抗体の各重鎖に接続された1つまたは複数のコア-GlcNAc部分を含む。
いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、フコースをさらに含む。
いくつかの態様では、抗体は完全長抗体であり、抗体グリカンは、完全長抗体に接続された2つ以上のコア-GlcNAc部分を含む。
いくつかの態様では、抗体は完全長抗体であり、抗体グリカンは、完全長抗体に接続された2つのコア-GlcNAc部分を含む。
いくつかの態様では、2つ以上のコア-GlcNAc部分のうちの少なくとも1つは、フコースをさらに含む。
いくつかの態様では、2つ以上のコア-GlcNAc部分の各々は、フコースをさらに含む。
いくつかの態様では、抗体は、一本鎖抗体または抗体断片（例えば、Fab断片またはFc断片）であり、抗体グリカンは、抗体に接続された1つまたは複数のコア-GlcNAc部分（任意でフコースをさらに含む）を含む。
いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、抗体のある位置に接続され、コア-GlcNAc部分は、抗体の抗原結合部位を実質的に妨害しない。
いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、抗体のFc断片に接続される。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、CHドメインに接続される。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、抗体のFab断片またはFc断片に接続される。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、抗体のアスパラギンアミノ酸の側鎖のアミド窒素原子へのN-グリコシド結合を介して抗体に接続される。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、抗体の天然N-グリコシル化部位に接続される。
いくつかの態様では、抗体はIgG抗体であり、コア-GlcNAc部分は、IgGの天然N-グリコシル化部位に接続される。
いくつかの態様では、抗体はIgG抗体であり、コア-GlcNAc部分は、IgGの天然N-グリコシル化部位（例えば、IgGのN297 N-グリコシル化部位）に接続される。いくつかの態様では、N297 N-グリコシル化部位は、領域290～305内のアスパラギンにおいて（例えば、N297において）IgG抗体の重鎖の保存されたFc領域に存在する。
いくつかの態様では、中間抗体は、式（XXII）のもの:
であり、
式中、
Abは抗体であり、GlcNAcはN-アセチルグルコサミンであり、Fucはフコースであり、u3は0または1であり、u4は、1～16の範囲の整数である。
いくつかの態様では、u4は、1～10の範囲の整数である。いくつかの態様では、u4は、1、2、3、4、5、6、7または8である。いくつかの態様では、u4は、1、2、3、4、5または6である。いくつかの態様では、u4は、1、2、3または4である。いくつかの態様では、u4は、2または4である。いくつかの態様では、u4は、1または2である。いくつかの態様では、u4は1である。いくつかの態様では、u4は2である。
いくつかの態様では、抗体は、1つのコア-GlcNAc部分を含む（例えば、u4は1である）。いくつかの態様では、抗体は、2つのコア-GlcNAc部分を含む（例えば、u4は2である）。
いくつかの態様では、修飾抗体は、スキーム1に概説されるプロセスによって得られる。以下に示すように、グリコシルトランスフェラーゼの存在下で、1つの末端GlcNAc部分を含む式（XXIII）の中間抗体をP''-S''-A''の構造を有する化合物と接触させると、1つの修飾GlcNAc部分を含む修飾抗体（例えば、式（XXIIIa）の修飾抗体）が得られる。
いくつかの態様では、修飾抗体は、グリコシルトランスフェラーゼの存在下で、2つの末端GlcNAc部分を含む式（XXIV）の中間抗体をP''-S''-A''の構造を有する化合物と接触させることによって得られ、2つの修飾GlcNAc部分を含む修飾抗体（例えば、式（XXIVa）の修飾抗体）を提供する。
スキーム1
式中、u3、Ab、S''、A''およびP''は、本明細書において定義される通りである。
いくつかの態様では、本開示によるプロセスで修飾される抗体グリカンは、グリカンを含み、該グリカンは、コア-GlcNAc部分、すなわち、グリカンの非還元末端に存在するGlcNAc部分を含む。いくつかの態様では、グリカンは、1つまたは複数の糖部分を含み、直鎖状または分岐状であり得る。
いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼと反応させると、末端GlcNAc部分を含む中間抗体（例えば、式（XXIII）または（XXIV）の中間抗体）が形成され得る。
いくつかの態様では、プロセスの工程（a）（脱グリコシル化またはトリミング）は、図2に示す通りであり、ここで、抗体グリコフォームG2F、GIF、G0F、G2、G1、G0およびM5（例えば、図1を参照）ならびに場合により追加のグリコフォーム（例えば三本鎖グリカン）の混合物が、フコースを含んでいてもよい（例えば、u3は、0または1である）末端GlcNAc部分を含む中間抗体に変換される。
いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、エンドグリコシダーゼEndo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo F1、Endo F2、Endo F3またはそれらの組合せである。
いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49またはそれらの組合せである。
いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、Endo SもしくはEndo SH、またはそれらの組合せである。いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼはEndo SHである。
いくつかの態様では、プロセスの工程（b）（修飾抗体の形成）は、図3に示す通りであり、ここで、中間抗体は、モノクローナル抗体（mAb）と、モノクローナル抗体（mAb）の各重鎖上の末端末端GlcNAc部分（フコースを含んでいてもよい（例えば、u3は、0または1である））とを含む。いくつかの態様では、工程（b）において、末端GlcNAc部分が修飾GlcNAc部分に変換される。いくつかの態様では、該変換は、グリコシルトランスフェラーゼの存在下での末端GlcNAc部分とP''-S''-A''の化合物との反応を介して行われ得る。
いくつかの態様では、P''-S''-A''の化合物は、GalNAz-UDP（例えば4-AzGalNAc-UDP）である。いくつかの態様では、末端GlcNAc部分は、＊-GlcNAc-GalNAzまたは＊-GlcNAc（Fuc）-GalNAzであり、ここで、＊は、修飾抗体の残部への結合を表す。
いくつかの態様では、脱グリコシル化/トリミング工程および修飾抗体の形成の工程は、連続的に行われる。
いくつかの態様では、脱グリコシル化/トリミング工程および修飾抗体の形成の工程は、同時に行われる。
いくつかの態様では、修飾抗体を調製するためのプロセスは、好適な緩衝液、例えば緩衝生理食塩水（例えば、リン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水）シトレート、HEPES、トリスおよびグリシン中で行われる。いくつかの態様では、緩衝液は、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）またはトリス緩衝生理食塩水である。いくつかの態様では、緩衝液はリン酸緩衝生理食塩水（PBS）である。
いくつかの態様では、プロセスは、約4～約50℃の範囲の温度で行われる。いくつかの態様では、プロセスは、約10～約45℃の範囲の温度で行われる。いくつかの態様では、プロセスは、約20～約40℃の範囲の温度で行われる。いくつかの態様では、プロセスは、約30～約37℃の範囲の温度で行われる。いくつかの態様では、プロセスは、約30℃の温度で行われる。いくつかの態様では、プロセスは、30℃の温度で行われる。
いくつかの態様では、プロセスは、約5～約9（例えば、約5.5～約8.5、約6～約8、または約7～約8）の範囲のpH値で行われる。いくつかの態様では、プロセスは、約7.4のpH値で行われる。
いくつかの態様では、修飾抗体を調製するためのプロセスは、図4に示す通りである。
いくつかの態様では、修飾抗体を調製するためのプロセスは、
抗体と、抗体の部位N297に接続されたコア-GlcNAc部分とを含む糖タンパク質（例えば抗体グリカン）をエンドグリコシダーゼEndo SHと接触させ、それによって、末端GlcNAc部分を含む中間抗体を形成する工程、および
β-（1,4）-GalNAcT酵素の存在下で中間抗体を4-AzGalNAc-UDPと接触させ、それによって、修飾GlcNAc部分を含む修飾抗体を形成する工程、を含み、
工程（a）および（b）は、同時に行われる。
いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、139kDaの総分子量をもたらす、内部6xHisタグを含むGlyリッチスペーサーによって結合された、2つのエンドグリコシダーゼ、Endo SとEndo Hとの融合物であるEndo SHである。
いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、N末端6xHisタグを含み、45.7kDaの総分子量を有する。いくつかの態様では、N末端6xHisタグを含むβ-（1,4）-GalNAcT酵素は、イラクサギンウワバ（Trichoplusia ni）から誘導される。
いくつかの態様では、プロセスは、PBS緩衝液中、約7.4のpH値および約30℃の温度で行われる。
エンドグリコシダーゼ
エンドグリコシダーゼは、グリカン構造内の内部グリコシド結合を切断し、それによって、グリカン構造を再構築またはトリミングすることができる酵素である。例えば、エンドグリコシダーゼは、保存されたグリカン領域内の予測可能な部位で切断する場合、異種グリカン集団の容易な均質化に使用され得る。エンドグリコシダーゼの1つのクラスは、エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ（EC 3.2.1.96、Endo SまたはENGaseとして一般的に知られている）、（参照によりその全体が本明細書に組み入れられるWong et al.Chem.Rev.2011,111,4259に記載されているように）N,N’-ジアセチルキトビオースコアのβ-1,4-グリコシド結合を加水分解し、単一コアのN結合GlcNAc残基を残すことによって糖タンパク質からN-グリカンを除去する加水分解酵素のクラスを含む。エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼは、パウシマンノースに特異的なEndo D;高マンノースに特異的なEndo AおよびEndo H;高マンノースから二本鎖複合体に及ぶEndo Fサブタイプ;ならびにフコシル化グリカンを除く大部分のN-グリカン構造（高マンノース型/複合型/ハイブリッド型）を切断することができるEndo Mを含む一般的な化学酵素変異体とともに自然界に広く見出され、高マンノース型オリゴ糖の加水分解活性は、複合型およびハイブリッド型のオリゴ糖のそれよりも顕著に高い。いくつかの態様では、これらのENGaseは、遠位N-グリカン構造に対する特異性を示し、遠位N-グリカン構造を提示するタンパク質に対する特異性を示さず、天然条件下で糖タンパク質から大部分のN結合グリカンを切断するのに有用である。
いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼF1、F2およびF3は、天然タンパク質の脱グリコシル化に適している。Endo F1、F2およびF3の結合特異性は、タンパク質を変性させることなく、あらゆるクラスのN結合オリゴ糖を除去し得る、タンパク質の脱グリコシル化のための一般的な戦略を示唆している。いくつかの態様では、二本鎖構造および三本鎖構造は、それぞれエンドグリコシダーゼF2およびF3によって直ちに除去され得る。いくつかの態様では、オリゴマンノースおよびハイブリッド構造が、Endo F1によって除去され得る。
Endo Sは、化膿性連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）から分泌されるエンドグリコシダーゼであり、また、参照によりその全体が本明細書に組み入れられるCollin et al.（EMBO J.,2001,20,3046）によって開示されているように、グリコシドヒドロラーゼファミリー18に属する。上記ENGaseとは対照的に、Endo Sは、さらに明確な特異性を有し、ヒトIgGのFcドメイン内の保存されたN-グリカンのみを切断するために特異的であり（他の基質はこれまで同定されていない）、酵素とIgGとの間のタンパク質-タンパク質相互作用がこの特異性をもたらすことを示唆している。
Endo S2としても知られているEndo S49は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる国際公開公報第2013/037824号に記載されており、化膿性連鎖球菌NZ131から単離され、Endo Sのホモログである。Endo S49は、天然IgGに対して特異的なエンドグリコシダーゼ活性を有し、Endo Sよりも多種多様なFcグリカンを切断する。
Endo SHは、Glyリッチスペーサーによって結合された2つのエンドグリコシダーゼ、Endo SとEndo Hとの融合物である。Endo SHは、グリカン鎖のコア領域内の2つのN-アセチルグルコサミン（GluNAc）部分の間のN結合グリカンを特異的に切断する。
いくつかの態様では、抗体を脱グリコシル化するためのエンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo F1、Endo F2、Endo F3、Endo H、Endo M、Endo Aまたはそれらの組合せである。いくつかの態様では、抗体を脱グリコシル化するためのエンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo F1、Endo F2、Endo F3、Endo Hまたはそれらの組合せである。いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2またはEndo S49である。
いくつかの態様では、トリミングされるグリカンが複合型の二分岐構造である場合、エンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo F1、Endo F2、Endo F3またはそれらの組合せである。
いくつかの態様では、糖タンパク質が抗体であり、トリミングされるオリゴ糖が、複合型の二分岐構造であり、N297におけるIgG保存N-グリコシル化部位に存在する場合、エンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo F1、Endo F2、Endo F3またはそれらの組合せである。いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49またはそれらの組合せである。
いくつかの態様では、糖タンパク質が抗体であり、トリミングされるグリカンが、複合型の二分岐構造であり、N297におけるIgG保存N-グリコシル化部位に存在しない場合、エンドグリコシダーゼは、Endo F1、Endo F2、Endo F3またはそれらの組合せである。
いくつかの態様では、トリミングされるグリカンが高マンノースである場合、エンドグリコシダーゼは、Endo H、Endo M、Endo A、Endo F1またはそれらの組合せである。
いくつかの態様では、糖タンパク質が抗体であり、トリミングされるオリゴ糖が、複合型の二分岐構造を有することに加えて、高マンノースであり、N297におけるIgG保存N-グリコシル化部位に存在する場合、エンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49またはそれらの組合せである。いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、Endo SまたはEndo SHである。いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼはEndo SHである。
いくつかの態様では、本明細書において定義されるエンドグリコシダーゼ酵素は、精製を容易にするためのタグをコードする配列を含む。いくつかの態様では、該タグには、限定されることなく、FLAGタグ、ポリ（His）-タグ、HA-タグ、Myc-タグ、SUMO-タグ、GST-タグ、MBP-タグまたはCBP-タグが含まれる。いくつかの態様では、該タグは6xHisタグである。いくつかの態様では、該タグは、酵素のC末端で、または内部残基で、エンドグリコシド（endoglycoside）酵素に共有結合している。いくつかの態様では、該タグは、酵素のN末端でエンドグリコシド酵素に共有結合している。
いくつかの態様では、Endo SHは、139kDaの総分子量をもたらす、内部6xHisタグを含むGlyリッチスペーサーによって結合された、2つのエンドグリコシダーゼ、Endo SとEndo Hとの融合物である。
グリコシルトランスフェラーゼ
修飾抗体を形成するプロセスは、グリコシルトランスフェラーゼの存在下で、式S''（A''）-P''の化合物を用いて、フコシル化されていてもよい末端N-アセチルグルコサミン（Gal-NAc）部分を有する脱グリコシル化/トリミング抗体を処理して、β-1,4-O-グリコシド結合を介して、GalNAc部分のC1で抗体に結合したGlcNAc-S''（A''）置換基を有する修飾抗体を形成する工程を含む。
いくつかの態様では、グリコシルトランスフェラーゼは、β-1,4-ガラクトシルトランスフェラーゼ（4Gal-T）、β-（1,4）-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（β-（1,4）-GalNAcTまたはGalNAcT）またはそれらの変異種である。
β-（1,4）-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（β-（1,4）-GalNAcTまたはβ-（1,4）-GalNAcT）は、ヒト、エレガンス線虫（Caenorhabditis elegans）（参照によりその全体が本明細書に組み入れられるKawar et al,J.Biol.Chem.2002,277,34924）、キイロショウジョウバエ（Drosophila melanogaster）（参照によりその全体が本明細書に組み入れられるHoskins et al.Science 2007,316,1625）およびイラクサギンウワバ（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるVadaie et al,J.Biol.Chem.2004,279,33501）を含む多数の生物において同定されている。
β-（1,4）-N-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（β-（1,4）-GalNAcT）は当技術分野において公知である。いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcTは、ウリジン二リン酸-GalNAc（GalNAc-UDPとも呼ばれるUDP-GalNAc）から糖タンパク質グリカンの末端GlcNAc部分へのN-アセチルガラクトサミン（GalNAc）の転移を触媒する酵素であり、GalNAc部分のC1は、β-1,4-O-グリコシド結合を介して抗体に結合している。いくつかの態様では、末端GlcNAc部分はフコシル化されている。
いくつかの態様では、本発明のプロセスで使用されるβ-（1,4）-GalNAcT酵素は、無脊椎動物β-（1,4）-GalNAcT酵素であるか、またはそれから誘導され、例えば、無脊椎動物種に由来するβ-（1,4）-GalNAcTであるか、またはそれから誘導される。β-（1,4）-GalNAcT酵素は、当業者に公知の任意の無脊椎動物β-（1,4）-GalNAcT酵素であり得るか、またはそれから誘導され得る。いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、線形動物（Nematoda）門に由来する、例えば、クロマドラ綱（Chromadorea）もしくは双線綱（Secernentea）のクラスなどの、または節足動物（Arthropoda）門の、例えば、昆虫綱（Insecta）のクラスなどのβ-（1,4）-GalNAcT酵素であるか、またはそれから誘導される。いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、エレガンス線虫、カエノラブディティス・レマネイ（Caenorhabditis remanei）、ブリグサ線虫（Caenorhabditis briggsae）、ブタ回虫（Ascaris suum）、イラクサギンウワバ、キイロショウジョウバエ、バンクロフト糸状虫（Wuchereria bancrofti）、ロア糸状虫（Loa loa）、クビレハリアリ（Cerapachys biroi）、ネバダオオシロアリ（Zootermopsis nevadensis）、カンポノツス・フロリダヌス（Camponotus floridanus）、マガキ（Crassostrea gigas）またはオオカバマダラ（Danaus plexippus）、（例えば、エレガンス線虫、ブタ回虫、イラクサギンウワバまたはキイロショウジョウバエ）に由来するβ-（1,4）-GalNAcT酵素であるか、またはそれから誘導される。いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、エレガンス線虫、ブタ回虫またはイラクサギンウワバに由来するβ-（1,4）-GalNAcT酵素であるか、またはそれから誘導される。他の態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、イラクサギンウワバに由来するβ-（1,4）-GalNAcT酵素であるか、またはそれから誘導される。
用語「から誘導される」は、例えば、切断型酵素、変異型酵素、精製を容易にするためのタグを含む酵素、またはこれらの修飾の組合せを含む。したがって、から誘導されるとは、天然に存在するβ-（1,4）-GalNAcT酵素から、それぞれ1つまたは複数（例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20またはそれ以上）のアミノ酸を置換、挿入、欠失または付加することによって改変されたアミノ酸配列を有することを指す。β-（1,4）-GalNAcT酵素から誘導されるβ-（1,4）-GalNAcT酵素は、本明細書において、誘導型β-（1,4）-GalNAcT酵素、または改変型β-（1,4）-GalNAcT酵素、またはβ-（1,4）-GalNAcT変異型酵素とも呼ばれる。
いくつかの態様では、誘導型β-（1,4）-GalNAcT酵素は、安定性、溶解度、活性、および/または精製の容易さを増大させるために、追加のN末端アミノ酸もしくはC末端アミノ酸もしくは化学部分を加えることによって、またはN末端アミノ酸もしくはC末端アミノ酸を欠失させることによって修飾される。
いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、N末端細胞質ドメインおよび膜貫通ドメインを欠失させることによって修飾され、切断型酵素と呼ばれる。
1つまたは複数のアミノ酸が置換、付加または欠失されたβ-（1,4）-GalNAcT酵素は、本明細書において、変異型β-（1,4）-GalNAcT酵素または誘導型β-（1,4）-GalNAcT酵素とも呼ばれる。いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、N末端細胞質ドメインおよび膜貫通ドメインを欠失させることによって修飾され、1つまたは複数のアミノ酸を置換することによって変異される。1つまたは複数のアミノ酸の置換は、本明細書において、変異とも呼ばれる。1つまたは複数の置換アミノ酸を含む酵素は、変異型酵素とも呼ばれる。
いくつかの態様では、グリコシルトランスフェラーゼがβ-（1,4）-GalNAcT酵素または切断型β-（1,4）-GalNAcT酵素である場合、該酵素は、1つまたは複数の変異をさらに含む。いくつかの態様では、これらの変異には、限定されることなく、ロイシン（Lとも呼ばれるLeu）、メチオニン（Mとも呼ばれるMet）またはアラニン（Aとも呼ばれるAla）による257位のイソロイシン（Iとも呼ばれるHe）の置換が含まれる。いくつかの態様では、ヒスチジン（Hとも呼ばれるHis）による312位のメチオニン（Mとも呼ばれるMet）の置換も含まれる。本明細書におけるアミノ酸位置のナンバリングは、野生型β-（1,4）-GalNAcT酵素におけるアミノ酸位置のナンバリングに基づく。β-（1,4）-GalNAcT酵素が、例えば切断型酵素である場合、アミノ酸置換の位置を示すために本明細書において使用される番号は、対応する野生型β-（1,4）-GalNAcT酵素におけるアミノ酸位置のナンバリングに対応する。
いくつかの態様では、グリコシルトランスフェラーゼは、変異触媒ドメインを含むβ（1,4）-GalT酵素である。
触媒ドメインは、野生型酵素に見られるようなアミノ酸配列を有してもよい、または野生型配列とは異なるアミノ酸配列を有してもよい。野生型配列とは異なるアミノ酸配列を有する触媒ドメインは、本明細書において、変異触媒ドメインと呼ばれる。いくつかの態様では、変異は、単一のアミノ酸変化（例えば点変異）、または複数のアミノ酸変化（例えば、1～10、または1～6、または1、2、3もしくは4、または1もしくは2個のアミノ酸）、または1つもしくは複数のアミノ酸（例えば、1～10、または1～6、または1、2、3もしくは4、または1もしくは2個の）アミノ酸の欠失もしくは挿入を含み得る。いくつかの態様では、該変異触媒ドメインは、完全長酵素、例えば、β（1,4）-ガラクトシルトランスフェラーゼまたはα（1,3）-N-ガラクトシルトランスフェラーゼに存在し得るが、任意で追加のアミノ酸に結合された該変異触媒ドメインを含むポリペプチド断片または組換えポリペプチドにも存在し得る。
β（1,4）-ガラクトシルトランスフェラーゼIは、本明細書において、GalTと呼ばれる。そのような変異GalT触媒ドメインは、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる国際公開公報第2004/063344号に開示されている。国際公開公報第2004/063344号はまた、GalTのTyr-289変異体およびそれらの調製方法を開示している。これらの変異体は、Y289L、Y289NまたはY289Iと呼ばれる。
いくつかの態様では、GalT変異触媒ドメインは、Y289L、Y289N、Y289I、Y284LまたはR228Kである。いくつかの態様では、GalT変異触媒ドメインはY289Lである。
いくつかの態様では、GalT Y289F変異体、GalT Y289M変異体、GalT Y289V変異体、GalT Y289G変異体、GalT Y289I変異体、GalT Y289A変異体、GalT Y289N変異体およびGalT Y289L変異体は、例えば、国際公開公報第2004063344号、Qasba et al,Prot.Expr.Pur.2003,30,219、およびQasba et al,J.Biol.Chem.2002,277,20833（いずれも参照によりその全体が本明細書に組み入れられる）に記載されている部位特異的変異誘発プロセスを介して生成され得る。GalT Y289Fでは、289位のチロシンアミノ酸（Y）は、フェニルアラニン（F）アミノ酸によって置換され、GalT Y289Mでは、該チロシンは、メチオニン（M）アミノ酸によって置換され、GalT Y289Vでは、バリン（V）アミノ酸によって置換され、GalT Y289Gでは、グリシン（G）アミノ酸によって置換され、GalT Y289Iでは、イソロイシン（I）アミノ酸によって置換され、Y289Aでは、アナリン（analine）（A）アミノ酸によって置換される。
いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、精製を容易にするためのタグをコードする配列を含む。いくつかの態様では、該タグには、限定されることなく、FLAGタグ、ポリ（His）-タグ、HA-タグ、Myc-タグ、SUMO-タグ、GST-タグ、MBP-タグまたはCBP-タグが含まれる。他の態様では、該タグは6xHisタグである。いくつかの態様では、該タグは、酵素のC末端でβ-（1,4）-GalNAcT酵素に共有結合している。いくつかの態様では、該タグは、酵素のN末端でβ-（1,4）-GalNAcT酵素に共有結合している。
いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、N末端6xHisタグを含み、45.7kDaの総分子量を有する。いくつかの態様では、N末端6xHisタグを含むβ-（1,4）-GalNAcT酵素は、イラクサギンウワバから誘導される。
P''-S''-A''の分子
いくつかの態様では、本開示の修飾抗体を調製するプロセスで使用するためのP''-S''-A''の分子は、好適なガラクトシルトランスフェラーゼ触媒の基質である任意の糖誘導体ヌクレオチドであり得る。
いくつかの態様では、S''-A''は糖誘導体部分であり、式中、
S''は、糖または誘導体化糖であり、A''は、リンカー-薬物部分の官能基と共有結合を形成することができる官能基である。
いくつかの態様では、A''は、アジド部分、ケト部分またはアルキニル部分である。いくつかの態様では、A''は、アジド部分またはケト部分である。いくつかの態様では、A''はアジド部分である。いくつかの態様では、A''は-N3である。いくつかの態様では、A''はケト部分である。
いくつかの態様では、A''は、-［C（R8k）2］x2C（O）R9kであり、式中、
R9kは、メチルまたは置換されていてもよいC2～24アルキルであり、
各R8kは、独立して、水素、ハロゲンまたはR9kであり、
x2は、0～24の範囲の整数である。
いくつかの態様では、x2は、0～10の範囲の整数である。いくつかの態様では、x2は、0、1、2、3、4、5または6である。
いくつかの態様では、各R8kは水素である。
いくつかの態様では、A''はアルキニル部分である。いくつかの態様では、A''は、末端アルキニル部分、シクロアルキニル部分またはヘテロシクロアルキニル部分である。いくつかの態様では、A''は末端アルキニル部分である。いくつかの態様では、A''はシクロアルキニル部分である。いくつかの態様では、A''はヘテロシクロアルキニル部分である。
いくつかの態様では、A''は-［C（R8k）2］x2-C≡C-R8k基であり、式中、R8kおよびx2は、本明細書において定義される通りである。いくつかの態様では、A''は-［CH2］x2-C≡CHである。
いくつかの態様では、S''-A''は、糖または誘導体化糖、例えば、アミノ糖または他の誘導体化糖に由来する。いくつかの態様では、糖および誘導体化糖の例には、限定されることなく、ガラクトース（Gal）、マンノース（Man）、グルコース（Glc）、グルクロン酸（Gcu）およびフコース（Fuc）が挙げられる。アミノ糖とは、ヒドロキシル（OH）基がアミン基によって置換された糖であることが理解される。アミノ糖の例には、限定されることなく、N-アセチルグルコサミン（GlcNAc）およびN-アセチルガラクトサミン（GalNAc）が挙げられる。他の方法で誘導体化された糖の例には、限定されることなく、グルクロン酸（Gcu）およびN-アセチルノイラミン酸（シアル酸）が挙げられる。
いくつかの態様では、S''-A''は、ガラクトース（Gal）、マンノース（Man）、N-アセチルグルコサミン（GlcNAc）、グルコース（Glc）、N-アセチルガラクトサミン（GalNAc）、グルクロン酸（Gcu）、フコース（Fuc）またはN-アセチルノイラミン酸（シアル酸）に由来する。いくつかの態様では、S''-A''は、GlcNAc、Glc、GalまたはGalNAcに由来する。いくつかの態様では、S''-A''は、GlcNAcに由来する。いくつかの態様では、S''-A''は、Glcに由来する。いくつかの態様では、S''-A''は、GalまたはGalNAcに由来する。いくつかの態様では、S''-A''は、Galに由来する。いくつかの態様では、S''-A''は、GalNAcに由来する。
いくつかの態様では、官能基A''は、様々な方法でS''に結合され得る。
いくつかの態様では、A''は、S''の糖または誘導体化糖のC2位、C3位、C4位またはC6位の炭素原子に直接結合している（例えば、対応する位置のヒドロキシルの代わりに）。
いくつかの態様では、S''は、任意のヒドロキシルC6位を欠くフコースまたは誘導体化フコースである。いくつかの態様では、A''がフコースまたは誘導体化フコースのC6位に結合している場合、A''は、C6位の炭素原子に直接結合している。
いくつかの態様では、A''はアジド部分であり、A''は、S''の糖または誘導体化糖のC2位、C4位またはC6位に結合している。
いくつかの態様では、A''はアジド部分であり、A''は、S''の糖または誘導体化糖のC2位、C3位、C4位またはC6位の炭素原子に直接結合している（例えば、対応する位置のヒドロキシルの代わりに）。いくつかの態様では、S''-A''は6-アジドフコース（6-AzFuc）である。いくつかの態様では、A''はアジド部分であり、A''は、アミノ糖または誘導体化アミノ糖のN-アセチル部分に結合している（例えば、アセチル部分をアジドアセチル部分によって置換することによって）。いくつかの態様では、S''-A''は、2-アジドアセトアミドガラクトース（GalNAz）、6-アジド-6-デオキシガラクトース（6-AzGal）、6-アジド-6-デオキシ-2-アセトアミドガラクトース（6-AzGalNAc）、4-アジド-4-デオキシ-2-アセトアミドガラクトース（4-AzGalNAc）、6-アジド-6-デオキシ-2-アジドアセトアミドガラクトース（6-AzGalNAz）、2-アジドアセトアミドグルコース（GlcNAz）、6-アジド-6-デオキシグルコース（6-AzGlc）、6-アジド-6-デオキシ-2-アセトアミドグルコース（6-AzGlcNAc）、4-アジド-4-デオキシ-2-アセトアミドグルコース（4-AzGlcNAc）、または6-アジド-6-デオキシ-2-アジドアセトアミドグルコース（6-AzGlcNAz）である。いくつかの態様では、S''-A''は、GalNAz、4-AzGalNAc、GlcNAz、または6-AzGlcNAcである。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVb）、（XXXIVc）もしくは（XXIVd）の化合物またはその塩である。
いくつかの態様では、A''ケトおよびA''は、S''の糖または誘導体化糖のC2位の炭素原子に直接結合している（例えば、対応する位置のヒドロキシルの代わりに）。
いくつかの態様では、A''は、アミノ糖または誘導体化アミノ糖、例えばC2-誘導体化アミノ糖の窒素原子に結合している。いくつかの態様では、誘導体化アミノ糖は、-NC（O）-R9kの部分を含み、式中、R9kは、メチルまたは置換されていてもよいC2～24アルキル（例えばエチル）である。
いくつかの態様では、R9kはエチルである。
いくつかの態様では、S''-A''は、2-デオキシ-（2-オキソプロピル）-ガラクトース（2-ケト-Gal）、2-N-プロピオニル-ガラクトサミン（2-N-プロピオニルGal-NAc）、2-N-（4-オキソペンタノイル）-ガラクトサミン（2-N-Lev-Gal）、または2-N-ブチリル-ガラクトサミン（2-N-ブチリル-GalNAc）である。いくつかの態様では、S''-A''は、2-ケトGalNAc、または2-N-プロピオニル-GalNAcである。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVe）もしくは（XXIVf）の化合物またはその塩である。
いくつかの態様では、A''は、末端アルキニル、シクロアルキニルまたはヘテロシクロアルキニルである。いくつかの態様では、A''は、S''のC2-誘導体化アミノ糖に結合している。
いくつかの態様では、S''-A''は2-（ブタ-3-イン酸アミド）-2-デオキシ-ガラクトースである。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVg）の化合物またはその塩である。いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVd）の化合物またはその塩である。
いくつかの態様では、P''-S''-A''の化合物は、当技術分野において公知の様々な方法に従って合成され得る。いくつかの態様では、化合物は、例えば、その各々全体が参照により本明細書に組み入れられるWang et al.（Chem.Eur.J.16:13343-13345（2010））、Piller et al.（ACS Chem.Biol.7:753（2012））、Piller et al.（Bioorg.Med.Chem.Lett.15:5459-5462（2005）、およびPCT出願公開国際公開公報第2009/102820号に開示されているように、ヌクレオシド一リン酸P''またはヌクレオシド二リン酸P''を糖誘導体S''-A''に結合することによって合成される。
いくつかの態様では、P''は、ヌクレオシド一リン酸またはヌクレオシド二リン酸である。いくつかの態様では、P''は、ウリジン二リン酸（UDP）、グアノシン二リン酸（GDP）、チミジン二リン酸（TDP）、シチジン二リン酸（CDP）またはシチジン一リン酸（CMP）である。いくつかの態様では、P''はウリジン二リン酸（UDP）である。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVb）、（XXIVc）、（XXIVd）、（XXIVe）、（XXIVf）もしくは（XXIVg）の化合物:
またはその塩であり、式中、R9kはC2～24アルキル基である。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は、GalNAz-UDP（例えば式（XXIVb））、6-AzGal-UDP（例えば式（XXIVc））、6-AzGalNAc-UDP（例えば式（XXIVd））、4-AzGalNAz-UDP、6-AzGalNAz-UDP、6-AzGlc-UDP、6-AzGlcNAz-UDP、2-ケトGal-UDP（例えば式（XXIVe））、2-N-プロピオニルGalNAc-UDP（例えば式（XXIVf）、式中、R9kはエチルである）、または2-（ブタ-3-イン酸アミド）-2-デオキシ-ガラクトース-UDP（例えば式（XXIVg））である。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は、GalNAz-UDPまたは4-AzGalNAc-UDPである。いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVb）または（XXIVd）の化合物である。GalNAz-UDP（例えば式（XXIVb））および6-AzGalNAc-UDP（例えば式（XXIVd））の合成は、その各々全体が参照により本明細書に組み入れられるPiller et al.（Bioorg.Med.Chem.Lett.15:5459-5462（2005））、およびWang et al.（Chem.Eur.J.16:13343-13345（2010））に開示されている。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は4-AzGalNAc-UDPである。いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVd）の化合物またはその塩である。2-ケトGal-UDP（XXIVe）の合成は、いずれも参照によりその全体が本明細書に組み入れられるQasba et al.（J.Am.Chem.Soc.125:16162（2003））およびその補足情報に開示されている。
2-（ブタ-3-イン酸アミド）-2-デオキシ-ガラクトース-UDPの合成は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられるPCT出願公開国際公開公報第2009/102820号に開示されている。
抗体薬物コンジュゲート
いくつかの態様では、本開示の抗体-薬物コンジュゲートは、本開示の修飾抗体を、修飾抗体内の修飾GlcNAc部分、＊-GlcNAc-S''-A''の官能基A''と共有結合を形成することができる官能基（例えばWP）を含むリンカー-薬物部分と反応させることによって得ることができる。
いくつかの態様では、WPは、アルキニル、例えばシクロアルキニル、ヘテロシクロアルキニルまたは末端アルキニルを含む。
いくつかの態様では、修飾抗体の官能基A''は、アジド、ケトまたはアルキニルである。いくつかの態様では、修飾抗体の官能基A''はアジドである。いくつかの態様では、修飾抗体のアジド官能基A''は、リンカー-薬物部分のWPのアルキニル（例えば、シクロアルキニル、ヘテロシクロアルキニルまたは末端アルキニル）と反応して、トリアゾール部分を形成する（例えば、環化付加反応を介して）。アジド基とアルキニル基との環化付加反応は、「クリックケミストリー」として当技術分野において公知である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分のWPは、末端アルキニルを含み、環化付加反応は、触媒（例えば、Cu（I）触媒）の存在下で行われ得る。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分のWPは、シクロアルキニルまたはヘテロシクロアルキニル（例えば、歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニル）を含む。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分のWPは、歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルを含み、環化付加反応は、触媒の存在下または非存在下で行われ得る。いくつかの態様では、環化付加反応は、「無金属クリックケミストリー（metal-free click chemistry）」として当技術分野において公知の歪み促進アジド-アルキン環化付加（SPAAC）と呼ばれる反応によって自発的に起こり得る。いくつかの態様では、歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルは、本明細書において記載される通りである。
いくつかの態様では、コンジュゲーション時に、修飾抗体の官能基A''と、リンカー-薬物部分のWPとは、トリアゾール部分を形成する。
いくつかの態様では、コンジュゲーション時に、修飾抗体の官能基A''と、リンカー-薬物部分のWPとは、式（XXXV）:
のトリアゾール部分を形成し、
式中、＊は、修飾抗体の残部への直接的または間接的な結合を表し、＊＊は、Mpへの結合を示す。
いくつかの態様では、本開示のアジド修飾抗体をアルキニル基を含むリンカー-薬物部分と反応させて、環化付加反応を介して抗体-薬物コンジュゲートを形成する場合、抗体-薬物コンジュゲート内の形成されたトリアゾール部分は、加水分解および/または他の分解経路に耐性であり得る。
いくつかの態様では、本開示のアルデヒド修飾抗体またはケトン修飾抗体をヒドロキシルアミンまたはヒドラジンを含むリンカー-薬物部分と反応させる場合、抗体-薬物コンジュゲート内の得られたオキシム部分またはヒドラゾン部分は、中性条件で比較的不活性であり得る。
いくつかの態様では、本開示の抗体-薬物コンジュゲートは、高い安定性を有し得る。
いくつかの態様では、本開示の修飾抗体および抗体-薬物コンジュゲートは、官能基A''（例えば、アジド、ケトまたはアルキニル）を抗体に導入するためのプロセスが容易であり、一般的に適用可能であることから、実用的な合成経路によって合成され得る。
いくつかの態様では、本開示の部位特異的抗体-薬物コンジュゲートは、修飾抗体をリンカー-薬物部分と反応させる工程を含むプロセスによって得られ、
リンカー-薬物部分は、シクロアルキニルまたはヘテロシクロアルキニルを含み、
修飾抗体は、コンジュゲーション前に、抗体と、GlcNAcのC1位を介して抗体に結合した＊-GlcNAc-S''-A''の修飾GlcNAc部分とを含み、GlcNAcはN-アセチルグルコサミンであり、S''は、糖または誘導体化糖であり、A''はアジドである。
いくつかの態様では、A''は、シクロアルキニルまたはヘテロシクロアルキニルである。いくつかの態様では、A''はシクロアルキニルである。いくつかの態様では、A''はヘテロシクロアルキニルである。
いくつかの態様では、A''は、歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルである。いくつかの態様では、A''は、歪みシクロアルキニルである。いくつかの態様では、A''は、歪みヘテロシクロアルキニルである。
いくつかの態様では、本開示の部位特異的抗体-薬物コンジュゲートは、
（a）ガラクトシルトランスフェラーゼの存在下で、式（XXII）の中間抗体であって:
式中、
Abが抗体であり、GlcNAcがN-アセチルグルコサミンであり、Fucがフコースであり、u3が、0または1であり、d13が、1～12の範囲の整数である、中間抗体
を、
化合物P''-S''-A''であって、式中、
S''が、糖または誘導体化糖であり、A''がアジドであり、Pが、ウリジン二リン酸（UDP）、グアノシン二リン酸（GDP）またはシチジン二リン酸（CDP）である、化合物P''-S''-A''
と接触させ、それによって、修飾GlcNAc部分、＊-GlcNAc-S''-A''を含む修飾抗体を形成する工程、（任意で、修飾GlcNAc部分が、GlcNAcのC1位を介して、修飾抗体の残部に結合される）、および
（b）修飾抗体を、歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルを含むリンカー-薬物部分と反応させ、それによって、抗体-薬物コンジュゲートを形成する工程、を含むプロセスによって得られる。
いくつかの態様では、部位特異的抗体-薬物コンジュゲートを調製するためのプロセスは、図5に示される通りである。
いくつかの態様では、抗体の各アミノ酸N297にアジドを含む修飾抗体は、無金属クリックケミストリーによって、歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルを含むリンカー-薬物部分とコンジュゲートされて、本開示の部位特異的抗体-薬物コンジュゲートを形成する。
いくつかの態様では、修飾抗体が少なくとも1つのアジド部分を含み、リンカー-薬物部分が歪みシクロアルキニルを含む場合、修飾抗体内のアジドとリンカー-薬物部分の歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルとの間の環化付加反応に、銅触媒の存在は必要ではない。いくつかの態様では、環化付加反応は、銅触媒の非存在下で進行し、これにより、プロセスに銅触媒を使用することのいくつかの起こり得る欠点が軽減され得る。
いくつかの態様では、Cu（I）触媒は、一般に、抗体のアジド部分と末端アルキン部分との環化付加に必要とされる。いくつかの態様では、効率的な変換のための最適なパラメータを見つけるために、条件の広範囲な最適化と微調整とが必要とされ得る。それにもかかわらず、そのような条件下であっても、活性酸素種の同時形成は常に完全に回避されるとは限らず、これにより、抗体/タンパク質に対する酸化的損傷（例えば、メチオニン、ヒスチジン、システインまたはジスルフィド結合の酸化）が誘発される可能性がある。他のプロトコルは、固定細胞を標識し、糖タンパク質を合成するために、CuBrなどのCu（I）源を使用している。これらの場合、空気中のCu（I）の不安定性は、効率的な反応のために極めて過剰なCu（例えば、4mm超）および配位子を必要とし、これにより、抗体/タンパク質の損傷または沈殿に加えて、精製後の残留金属の存在というリスクが高まる可能性もある。したがって、銅触媒の存在下でのアジド含有抗体と末端アルキンとのコンジュゲーションは、望ましくないアミノ酸酸化による広範囲な副生成物形成をもたらす可能性がある。
いくつかの態様では、（例えば、抗体の各アミノ酸N297に）アジドを含む修飾抗体は、（例えば、無金属クリックケミストリーによって）歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルを含むリンカー-薬物部分とコンジュゲートされる。
いくつかの態様では、コンジュゲーション時に、修飾抗体のアジド部分と、リンカー-薬物部分の歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルとは、式（XXXV）:
のトリアゾール部分を形成し、
式中、＊は、修飾抗体の残部への直接的または間接的な結合を表し、＊＊は、Mpへの結合を示す。
いくつかの態様では、本開示の抗体-薬物コンジュゲートは、Dの1つまたは複数の存在を含み、各Dは独立して治療剤（例えば薬物）であり、Dの1つまたは複数の存在は、同じであっても異なっていてもよい。
いくつかの態様では、抗体の1つまたは複数の特異的部位が、リンカー-薬物部分に結合され、1つまたは複数の特異的部位に結合したリンカー-薬物部分は、同じであっても異なっていてもよい。いくつかの態様では、Dの1つまたは複数の存在を含む1つまたは複数のリンカー-薬物部分が、1つの抗体に結合される。
いくつかの態様では、Dは、（a）オーリスタチン化合物、（b）カリケアマイシン化合物、（c）デュオカルマイシン化合物（d）SN38、（e）ピロロベンゾジアゼピン、（f）ビンカ化合物、（g）チューブリシン化合物、（h）非天然カンプトテシン化合物、（i）メイタンシノイド化合物、（j）DNA結合薬、（k）キナーゼ阻害剤、（l）MEK阻害剤、（m）KSP阻害剤、（n）トポイソメラーゼ阻害剤、（o）DNAアルキル化薬、（p）RNAポリメラーゼ、（q）PARP阻害剤、（r）NAMPT阻害剤、（s）トポイソメラーゼ阻害剤、（t）タンパク質合成阻害剤、（u）DNA結合薬、（v）DNAインターカレーション薬または（w）免疫調節化合物である。
いくつかの態様では、Dは、（a）オーリスタチン化合物、（b）カリケアマイシン化合物、（c）デュオカルマイシン化合物、（d）カンプトテシン化合物、（e）ピロロベンゾジアゼピン化合物、（f）ビンカ化合物またはその類似体である。
いくつかの態様では、オーリスタチン化合物は、オーリスタチン、ドラスタチン、モノメチルオーリスタチンE（MMAE）、モノメチルオーリスタチンF（MMAF）、オーリスタチンF、AF-HPA、MMAF-HPA、またはフェニレンジアミン（AFP）である。
いくつかの態様では、デュオカルマイシンまたはその類似体は、デュオカルマイシンA、デュオカルマイシンB1、デュオカルマイシンB2、デュオカルマイシンC1、デュオカルマイシンC2、デュオカルマイシンD、デュオカルマイシンSA、CC-1065、アドゼレシン、ビセレシンまたはカルゼルシンである。
いくつかの態様では、カンプトテシン化合物は、カンプトテシン、CPT-11（イリノテカン）、SN-38またはトポテカンである。
いくつかの態様では、ピロロベンゾジアゼピン化合物は、ピロロベンゾジアゼピン単量体、対称ピロロベンゾジアゼピン二量体または非対称ピロロベンゾジアゼピン二量体である。
いくつかの態様では、本開示の抗体-薬物コンジュゲートは、約40kDa以上（例えば、約60kDa以上、約80kDa以上、約100kDa以上、約120kDa以上、約140kDa以上、約160kDa以上、約180kDa以上もしくは約200kDa以上、または約40～約200kDa、約40～約180kDa、約40～約140kDa、約60～約200kDa、約60～約180kDa、約60～約140kDa、約80～約200kDa、約80～約180kDa、約80～約140kDa、約100～約200kDa、約100～約180kDa、もしくは約100～約140kDa）の分子量を有する修飾抗体を含む。
いくつかの態様では、修飾抗体は、約40kDa以上（例えば、約60kDa以上、約80kDa以上、約100kDa以上、約120kDa以上、約140kDa以上、約160kDa以上、約180kDa以上もしくは約200kDa以上、または約40～約200kDa、約40～約180kDa、約40～約140kDa、約60～約200kDa、約60～約180kDa、約60～約140kDa、約80～約200kDa、約80～約180kDa、約80～約140kDa、約100～約200kDa、約100～約180kDa、もしくは約100～約140kDa）の分子量を有し、アミノ酸N297で修飾される。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、12以下である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、10以下である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、8以下である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、6以下である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、4以下である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、2以下である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、2である。
いくつかの態様では（例えば、1つまたは複数のリンカー-薬物部分とのコンジュゲーションのために）、修飾抗体は、約140kDa～約180kDaの分子量を有する。1つまたは複数のリンカー-薬物部分とのコンジュゲーションのためのいくつかの態様では、修飾抗体は、140kDa～180kDaの分子量を有する。
いくつかの態様では、この分子量範囲の抗体には、限定されることなく、例えば、IgGまたはIgMなどの完全長抗体が含まれる。
いくつかの態様では、本明細書において記載される修飾抗体、リンカーまたは治療剤は、当技術分野において公知の様々な技術および方法に従って、本開示のコンジュゲートまたは足場に組み込まれ得る。本開示のコンジュゲート、およびコンジュゲートの生成方法は、本明細書において記載される（例えば、非限定的な態様および例によって）。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾抗体との間に形成される結合の総数（または結合点の総数）は、12以下である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は、1:1超12:1以下である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は、約12:1、約11:1、約10:1、約9:1、約8:1、約7:1、約6:1、約5:1、約4:1、約3:1、約2:1または約1:1である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は、2:1～10:1である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は、約10:1、約9:1、約8:1、約7:1、約6:1、約5:1、約4:1、約3:1または約2:1である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は、約2:1～約4:1である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は、約4:1、約3:1または約2:1である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は、約2:1、または1:1である。
いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾抗体との比は、約8:1、約7:1、約6:1、約5:1、約4:1、約3:1、約2:1または約1:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾抗体との比は、約6:1、約5:1、約4:1、約3:1、約2:1または約1:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾抗体との比は、約6:1、約5:1、約4:1または約3:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は1:1であり、治療剤（D）と修飾抗体との比は、約3:1、約2:1または約1:1である。
いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾抗体との比は約8:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾抗体との比は約6:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾抗体との比は約5:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾抗体との比は約4:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾抗体との比は約3:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾抗体との比は約2:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾抗体との比は約1:1である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は約2:1である。
いくつかの態様では、抗体は、官能基A''を含む糖-誘導体部分に結合した領域290～305に（例えば、N297に）アスパラギン基を含み、修飾抗体は、A''とリンカー-薬物部分の官能基との間に形成される共有結合によって、リンカー-薬物部分にコンジュゲートされる。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分は、少なくとも2つの官能基を含み、その各々は、修飾抗体の糖-誘導体部分の官能基A''と共有結合を形成して（例えば、抗体のアミノ酸N297で）、抗体-薬物コンジュゲートを形成することができる。
いくつかの態様では（例えば、リンカー-薬物部分とのコンジュゲートのために）、修飾抗体は、40kDa以上（例えば、60kDa以上、80kDa以上、または100kDa以上、120kDa以上、140kDa以上、160kDa以上または180kDa以上）の分子量を有する。いくつかの態様では、修飾抗体とリンカー-薬物部分との比は、約1:1～約1:2である。
いくつかの態様では、この分子量範囲の抗体には、限定されることなく、完全長抗体（例えば、IgGおよびIgM）が含まれる。
いくつかの態様では（例えば、1つまたは複数のリンカー-薬物部分とのコンジュゲーションのために）、修飾抗体は、60kDa～120kDaの分子量を有する。いくつかの態様では、修飾抗体とリンカー-薬物部分との比は、約1:1～約1:2である。
いくつかの態様では、この分子量範囲の抗体には、限定されることなく、抗体断片（例えば、Fab2、scFcFvおよびラクダ科）が含まれる。
いくつかの態様では（例えば、1つまたは複数のリンカー-薬物部分とのコンジュゲーションのために）、修飾抗体は、40kDa～80kDaの分子量を有する。いくつかの態様では、修飾抗体とリンカー-薬物部分との比は、約1:1～約1:2である。
いくつかの態様では、本開示の抗体薬物コンジュゲートおよび足場は、広範囲なダイアフィルトレーションによって精製され得る（例えば、任意の出発材料を除去するために）。必要に応じて、サイズ排除クロマトグラフィーによる追加の精製を行って、凝集したコンジュゲートを除去することができる。いくつかの態様では、精製されたコンジュゲートまたは足場は、SECによって決定される場合、5％w/w未満（例えば、2％w/w未満）の凝集したコンジュゲート;RP-HPLCによって決定される場合、0.5％w/w未満（例えば、0.1％w/w未満）の遊離（非コンジュゲート）薬物;SECによって決定される場合、1％w/w未満の薬物担持ペプチド含有足場;および/またはHIC-HPLCによって決定される場合、2％w/w未満（例えば、1％w/w未満）の非コンジュゲート抗体を含む。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分は、以下の表Bに記載される足場から選択される。
（表Ｂ）
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、以下の表Cに記載されるコンジュゲートから選択される。
（表Ｃ）
式中、
はGlcNAcであり、
はFucであり、
はGalNAcであり、d13は、本明細書において定義される通りである。
特に指示しない限り、本開示において、
の記号は、GlcNAcを指すと理解される。特に指示しない限り、本開示において、
の記号は、フコースを指すと理解される。特に指示しない限り、本開示において、
の記号は、GalNAcを指すと理解される。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXX）のもの:
であり、
式中、
各RAは
であり、
d13は2であり、
1つまたは複数のリンカー-薬物部分は、抗体のN297のアスパラギン基に結合している。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXX）のもの:
であり、
式中、各RAは
であり、
d13は2であり、
抗体は、コンジュゲートの残部に接続されているN297に、1つまたは複数のアスパラギン基を含む。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXX）のものであり、式中、各RAは
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXX）のものであり、式中、各RAは
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXX）のものであり、式中、各RAは
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXX）のものであり、式中、各RAは
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXX）のものであり、式中、各RAは
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXX）のものであり、式中、各RAは
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXX）のものであり、式中、各RAは
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXX）のものであり、式中、各RAは
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXX）のものであり、式中、各RAは
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXII-1）、（XXXII-2）、（XXXII-3）または（XXXII-4）のもの:
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIII）のもの:
であり、
式中、各RBは
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXII-1）、（XXXII-2）、（XXXII-3）、（XXXII-4）または（XXXIII）のものであり、式中、-LD-Dの部分は
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXII-1）、（XXXII-2）、（XXXII-3）、（XXXII-4）または（XXXIII）のものであり、式中、-LD-Dの部分は
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV）のもの:
であり、
式中、各RAは
である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV）のコンジュゲートであり、式中、各RAは
であり、
任意で、抗体は、コンジュゲートの残部に接続されているN297に、1つまたは複数のアスパラギン基を含み、任意で、修飾前の抗体は、米国特許出願第15/457,574号に開示されているNaPi2b抗体、XMT-1535である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXV）のコンジュゲート:
であり、
式中、
d13は2であり、
ANTIBODYは、アミノ酸配列
を含むCDRH1と、アミノ酸配列
を含むCDRH2と、アミノ酸配列
を含むCDRH3と、アミノ酸配列
を含むCDRL1と、アミノ酸配列
を含むCDRL2と、アミノ酸配列
を含むCDRL3と、SEQ ID NO:1のアミノ酸配列を含む重鎖と、SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むNaPi2b抗体であり、
リンカー-薬物部分は、抗体のN297でアスパラギン基に結合しており、
はGlcNAcであり、
はFucであり、
はGalNAcである。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXVI）のコンジュゲート:
であり、
式中、
d13は整数2であり、
ANTIBODYは、アミノ酸配列
を含むCDRH1と、アミノ酸配列
を含むCDRH2と、アミノ酸配列
を含むCDRH3と、アミノ酸配列
を含むCDRL1と、アミノ酸配列
を含むCDRL2と、アミノ酸配列
を含むCDRL3と、SEQ ID NO:1のアミノ酸配列を含む重鎖と、SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むNaPi2b抗体であり、
リンカー-薬物部分は、抗体のN297でアスパラギン基に結合しており、
はGlcNAcであり、
はFucであり、
はGalNAcである。
薬学的組成物
本開示のいくつかの態様では、例えば、安定剤、緩衝剤などの許容される担体内に、本明細書において開示される1つまたは複数のコンジュゲートを含む、薬学的組成物が含まれる。いくつかの態様では、安定剤、緩衝剤などの有無にかかわらず、標準的な手段によってコンジュゲートを対象に投与および導入して、薬学的組成物を形成することができる。いくつかの態様では、投与は、静脈内注射もしくは静脈内注入、動脈内注射もしくは動脈内注入、皮下注射もしくは皮下注入、腹腔内注射もしくは腹腔内注入、もしくは筋肉内注射もしくは筋肉内注入を含む非経口投与、または頭蓋内投与、例えば、髄腔内投与もしくは脳室内投与であり得る。いくつかの態様では、コンジュゲートは、注射可能な投与のための滅菌溶液および/もしくは懸濁液;注射/注入前の再構成のための凍結乾燥粉末として;局所用組成物;経口投与のための錠剤、カプセルもしくはエリキシル剤;または直腸投与のための坐剤、ならびに当技術分野において公知の他の組成物として、製剤化および使用され得る。
薬理学的組成物または薬理学的製剤とは、細胞、または例えばヒトを含む対象への投与、例えば全身投与に適した形態の組成物または製剤を指す。好適な形態は、一部には、使用または侵入経路、例えば、経口、吸入、経皮、または注射/注入によるものに依存する。そのような形態は、組成物または製剤が標的細胞（すなわち、薬物が送達されるのに望ましい細胞）に到達するのを妨げてはならない。
「全身投与」とは、血流中のコンジュゲートのインビボ全身吸収または蓄積、続いて全身への分布を意味する。全身吸収をもたらす投与経路には、限定されることなく、静脈内、皮下、腹腔内、吸入、経口、肺内および筋肉内が含まれる。本開示のコンジュゲートの使用は、抗体の特異性を介して、癌細胞などの特定の細胞に薬物送達を局在化させることができる。
「薬学的に許容される製剤」は、それらの所望の活性に最も適した物理的位置におけるコンジュゲートの効果的な分布を可能にする組成物または製剤を意味する。いくつかの態様では、効果的な送達は、細網内皮系によるクリアランス、または効果もしくは毒性の低下をもたらし得るオフターゲット結合の発生の前に生じる。コンジュゲートとの製剤化に適した作用物質の非限定的な例には、CNSへの活性剤の進入を増強することができるP糖タンパク質阻害剤（Pluronic P85など）;脳内移植後の持続放出送達のための生分解性ポリマー、例えばポリ（DL-ラクチド-コグリコリド）ミクロスフェア;および血液脳関門を越えて活性剤を送達することができ、ニューロン取り込み機構を変化させることができる添加されたナノ粒子、例えば、ポリブチルシアノアクリレートから作製されたナノ粒子が挙げられる。
本開示のいくつかの態様では、保存または投与のために、薬学的に許容される担体または希釈剤中に薬学的有効量の所望のコンジュゲートを含む薬学的組成物が調製される。いくつかの態様では、治療的使用のための許容される担体、希釈剤および/または賦形剤は、製薬分野において周知である。いくつかの態様では、緩衝剤、保存剤、増量剤、分散剤、安定剤または染料が提供され得る。いくつかの態様では、酸化防止剤および懸濁化剤が使用され得る。
本明細書において使用される用語「薬学的有効量」は、特定された疾患もしくは病態を治療、改善もしくは予防するための、または検出可能な治療効果もしくは阻害効果を示すための医薬品の量を指す。効果は、当技術分野において公知の任意のアッセイ法によって検出することができる。対象に対する正確な有効量は、対象の体重、サイズおよび健康状態;病態の性質および程度;ならびに投与のために選択された治療薬または治療薬の組合せに依存する。
いくつかの態様では、任意のコンジュゲートについて、薬学的有効量は、例えば新生物細胞の細胞培養アッセイで、または動物モデル、通常、ラット、マウス、ウサギ、イヌもしくはブタのいずれかを対象として最初に推定することができる。いくつかの態様では、動物モデルを使用して、適切な濃度範囲および投与経路を決定してもよい。いくつかの態様では、そのような情報を使用して、ヒトへの投与に有用な用量および経路を決定することができる。いくつかの態様では、治療効果および/または予防効果ならびに毒性は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順、例えば、ED50（集団の50％において治療的に有効な用量）およびLD50（集団の50％に対して致死的な用量）によって決定され得る。いくつかの態様では、毒性効果と治療効果および/または予防効果との間の用量比は、治療指数であり、比LD50/ED50として表すことができる。いくつかの態様では、薬学的組成物は、大きな治療指数を示す。いくつかの態様では、投与量は、使用される剤形、患者の感受性、および投与経路に応じて、この範囲内で変化し得る。
いくつかの態様では、Cell titer Gloを使用して、いくつかの細胞株に対して腫瘍増殖を阻害する能力について、薬物もしくはその誘導体、薬物-コンジュゲート、またはPBRM-薬物コンジュゲートを評価することができる。SoftMax Proソフトウェアを使用して用量応答曲線を生成することができ、4パラメータカーブフィッティングからIC50値を決定することができる。使用される細胞株には、PBRMの標的である細胞株、および試験コンジュゲートに含まれるPBRMの標的ではない対照細胞株が含まれ得る。
いくつかの態様では、コンジュゲートは、従来のカテーテル法技術または注入の使用を含む注射による非経口投与のために製剤化される。いくつかの態様では、注射用製剤は、保存剤を加えられた単位剤形、例えば、アンプルまたは複数回投与容器で提供され得る。いくつかの態様では、コンジュゲートは、滅菌培地中で非経口投与され得る。いくつかの態様では、コンジュゲートは、使用されるビヒクルおよび濃度に応じて、ビヒクル中に懸濁または溶解され得る。いくつかの態様では、アジュバント、例えば、局所麻酔薬、保存剤および緩衝剤が、ビヒクルに溶解され得る。本明細書において使用される用語「非経口」は、経皮注射技術もしくは経皮注入技術、皮下注射技術もしくは皮下注入技術、血管内（例えば静脈内）注射技術もしくは血管内（例えば静脈内）注入技術、筋肉内注射技術もしくは筋肉内注入技術、または髄腔内注射技術もしくは髄腔内注入技術などを含む。さらに、コンジュゲートと薬学的に許容される担体とを含む薬学的製剤が提供される。コンジュゲートのうちの1つまたは複数は、1つまたは複数の非毒性の薬学的に許容される担体および/または希釈剤および/またはアジュバント、ならびに所望であれば他の活性成分と関連して存在し得る。
いくつかの態様では、滅菌注射用調製物はまた、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または滅菌注射用懸濁液であり得る。いくつかの態様では、使用され得る許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶液がある。いくつかの態様では、滅菌固定油が、溶媒または懸濁媒体として従来使用されている。いくつかの態様では、合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドを含む無刺激性の固定油が使用され得る。いくつかの態様では、オレイン酸などの脂肪酸が、注射剤の調製に使用される。
いくつかの態様では、本明細書において記載されるコンジュゲートおよび組成物は、適切な形態で（例えば、非経口または静脈内）投与され得る。
いくつかの態様では、コンジュゲートは、6週間以上にわたって週1回投与され得る。いくつかの態様では、コンジュゲートは、2、3または4週間に1回投与され得る。いくつかの態様では、約5～約10mLのヒト血清アルブミンを加えることができる約50～約400mLの生理食塩水を用いてボーラス用量が投与される。いくつかの態様では、24時間当たり、約25～約50mLのヒト血清アルブミンを加えることができる約250～約500mLの生理食塩水を用いて連続注入が行われる。
いくつかの態様では、治療の約1～約4週間後、患者は第2の治療コースを受けることができる（例えば、治療の約3週間後、または治療の約4週間後）。
いくつかの態様では、治療有効量は、別の規則的なスケジュール、すなわち、連日、毎週、毎月もしくは毎年に従って、または投与日、投与週、投与月などが異なる不規則なスケジュールに従って提供され得る。いくつかの態様では、投与される治療有効量は、様々であり得る。いくつかの態様では、初回用量の治療有効量は、その後の用量のうちの1つまたは複数の治療有効量よりも高い。いくつかの態様では、初回用量の治療有効量は、その後の用量のうちの1つまたは複数の治療有効量よりも低い。いくつかの態様では、同等の投与量が、限定されることなく、約2時間ごと、約6時間ごと、約8時間ごと、約12時間ごと、約24時間ごと、約36時間ごと、約48時間ごと、約72時間ごと、約1週間ごと、約2週間ごと、約3週間ごと、約1ヶ月ごと、および約2ヶ月ごとを含む様々な期間にわたって投与され得る。いくつかの態様では、完了した一連の治療に対応する投与量の数および頻度は、関連する規制機関の勧告、および医療従事者の判断に従って決定される。いくつかの態様では、本明細書において記載される治療有効量は、所与の期間に投与される総量を指す。すなわち、本明細書において記載される複数の異なるコンジュゲートが投与される場合、治療有効量は、投与される総量に対応する。特定の対象に対する特定の用量レベルは、特定のコンジュゲートの活性、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与時間、投与経路および排泄速度、他の活性剤との組合せ、ならびに治療を受けている特定の疾患の重症度を含む様々な因子に依存することが理解される。
いくつかの態様では、本明細書において開示されるコンジュゲートの治療有効量は、一般に、治療目的を達成するために必要とされる量に関する。いくつかの態様では、これは、ある場合には、標的の機能を妨げる、抗体とその標的抗原との間の結合相互作用であり得る。いくつかの態様では、投与されるのに必要な量は、さらに、その特異的抗原に対する抗体の結合親和性に依存し、投与された抗体が、それが投与される他の対象の自由体積から枯渇する速度にも依存する。いくつかの態様では、本明細書において開示されるコンジュゲートの治療的に有効な投与のための範囲は、非限定的な例として、約0.1mg/kg体重～約50mg/kg体重、約0.1mg/kg体重～約100mg/kg体重、または約0.1mg/kg体重～約150mg/kg体重であり得る。いくつかの態様では、投与頻度は、例えば、1日2回～1ヶ月に1回（例えば、1日1回、週1回;隔週1回;3週間に1回、または毎月1回）の範囲であり得る。いくつかの態様では、本明細書において開示されるコンジュゲートは、注入によって（例えば、毎週、2週間ごと、3週間ごと、または4週間ごとの単回用量として）、約0.1mg/kg～約20mg/kg（例えば、0.2mg/kg、0.5mg/kg、0.67mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kgまたは20mg/kg）で静脈内投与され得る。いくつかの態様では、本明細書において開示されるコンジュゲートは、癌を治療するために、約0.1mg/kg～約20mg/kg（例えば、0.2mg/kg、0.5mg/kg、0.67mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、19mg/kgまたは20mg/kg）で（例えば、毎週、2週間ごと、3週間ごと、または毎月の単回用量として）投与され得る。
いくつかの態様では、本明細書において開示されるコンジュゲートは、注入によって（例えば、毎週、2週間ごと、3週間ごと、または4週間ごとの単回用量として）、約7mg/m2～約162mg/m2（例えば、7mg/m2、14mg/m2、28mg/m2、56mg/m2、84mg/m2、112mg/m2、135mg/m2または162mg/m2）で静脈内投与され得る。定期的な経口使用のために医薬品を分配するための多数のパッケージまたはキットが当技術分野において公知である。いくつかの態様では、パッケージは、各期間のためのインジケータを有する。いくつかの態様では、パッケージは、ラベル付きブリスターパッケージ、ダイヤルディスペンサパッケージまたはボトルである。いくつかの態様では、キットの包装手段自体が、シリンジ、ピペット、点眼器または他のそのような装置などの投与用に適合され得、シリンジ、ピペット、点眼器または他のそのような装置から、製剤が身体の患部に適用され得るか、対象に注射され得るか、またはキットの他の成分に適用され、それと混合され得る。
使用方法
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートの治療有効量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象の疾患または障害を治療または予防する方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートの治療有効量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象の疾患または障害を治療する方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象の癌を治療する方法に関する。いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象のNaPi2b発現癌を治療する方法に関する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象の疾患または障害を治療または予防するのに使用するための、本明細書において開示されるコンジュゲートを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象の疾患または障害の治療に使用するための、本明細書において開示されるコンジュゲートを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象の癌を治療するための、本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象のNaPi2b発現癌を治療するための本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象の疾患または障害を治療するための医薬品の製造における、本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象の疾患または障害を治療または予防するための医薬品の製造における、本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象の癌を治療するための医薬品の製造における、本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象のNaPi2b発現癌を治療するための医薬品の製造における本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象の疾患または障害の治療に使用するためのコンジュゲートを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象の疾患または障害を治療または予防するのに使用するためのコンジュゲートを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象の癌を治療するのに使用するためのコンジュゲートを提供する。いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象のNaPi2b発現癌を治療するのに使用するためのコンジュゲートを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、本開示の少なくとも1つのコンジュゲートの効率的な量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象の疾患または障害を治療または予防する方法であって、該コンジュゲートが、生分解時に1つまたは複数の治療剤を放出する方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、本開示の少なくとも1つのコンジュゲートの効率的な量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象の疾患または障害を治療する方法であって、該コンジュゲートが、生分解時に1つまたは複数の治療剤を放出する方法を提供する。
いくつかの態様では、疾患は癌である。
いくつかの態様では、NaPi2b標的指向性抗体-薬物コンジュゲートを含む、本明細書において提供される癌治療は、治療的に有用な効果を発揮するのに十分な量で投与される。典型的には、活性剤は、治療される患者の望ましくない副作用をもたらさない、または観察された副作用を最小限に抑えるもしくは低減する量で投与される。NaPi2b発現癌には、例えば、卵巣癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、子宮内膜癌、乳頭状腎細胞癌、唾液管癌、乳頭様甲状腺癌、腎明細胞癌、乳癌、腎癌、子宮頸癌および胆管癌が含まれる。
対象に投与されるNaPi2b標的指向性ポリマー抗体-薬物コンジュゲートを含む活性剤の正確な量を決定することは、当業者のレベルの範囲内である。例えば、癌および固形腫瘍を治療するためのそのような薬剤および使用は、当技術分野において周知である。したがって、そのような薬剤の投与量は、所与の投与経路の下でその薬剤の標準的な投与レジメンに基づいて選択することができる。
正確な投与量および治療期間は、治療される組織または腫瘍の関数であり、公知の試験プロトコルを使用して経験的に、もしくはインビボもしくはインビトロ試験データからの外挿によって決定され得、および/または特定の薬剤の公知の投与レジメンから決定され得ることが理解される。また、濃度および投与量値は、治療される個体の年齢、個体の体重、投与経路、および/または疾患の程度もしくは重症度、ならびに熟練した医療従事者のレベル内にある考慮すべき他の因子によっても変化し得ることに留意されたい。一般に、投与レジメンは、毒性を制限するように選択される。主治医は、毒性、または骨髄、肝臓もしくは腎臓もしくは他の組織の機能不全に起因して投与量を低下させるために治療を終了、中断または調整する方法および時期を知っていることに留意すべきである。逆に、主治医はまた、臨床的応答が適切でない（毒性副作用を排除する）場合、治療をさらに高いレベルに調整する方法および時期を知っている。任意の特定の対象について、特定の投与レジメンが、個々の必要性、および製剤の投与を管理または監督する者の専門的判断に従って経時的に調整されるべきであり、本明細書において記載される濃度範囲は例示にすぎず、その範囲を限定することを意図するものではないことをさらに理解されたい。
例えば、NaPi2b標的指向性ポリマー抗体-薬物コンジュゲートは、腫瘍体積を減少させるための治療有効量で投与される。
疾患または病態、例えば、癌または固形腫瘍の治療のために投与されるNaPi2b標的指向性ポリマー抗体-薬物コンジュゲートの量は、標準的な臨床技術によって決定され得る。さらに、インビトロアッセイおよび動物モデルを使用して、最適な投与量範囲を特定するのを助けることができる。正確な投与量は、経験的に決定され得、投与経路、治療される疾患の種類、および疾患の重症度に依存し得る。
いくつかの態様では、本明細書において提供されるコンジュゲートは、静脈内投与される。静脈内投与のためのいくつかの態様では、コンジュゲートは、プッシュもしくはボーラスによって、注入によって、またはそれらの組合せによって投与され得る。いくつかの態様では、注入時間は、約1分～約3時間、例えば、約1分～約2時間、もしくは約1分～約60分、または少なくとも10分、少なくとも40分もしくは少なくとも60分であり得る。
いくつかの態様では、投与量は、約7mg/m2～約162mg/m2（例えば、7mg/m2、14mg/m2、28mg/m2、56mg/m2、84mg/m2、112mg/m2、135mg/m2または162mg/m2）である。いくつかの態様では、投与量は、約6.5mg/m2～約7.5mg/m2、約13.5mg/m2～約14.5mg/m2、約27.5mg/m2～約28.5mg/m2、約55.5mg/m2～約56.5mg/m2、約83.5mg/m2～約84.5mg/m2、約111.5mg/m2～約112.5mg/m2、約134.5mg/m2～約135.5mg/m2、または約161.5mg/m2～約162mg/m2）である。いくつかの態様では、投与量は、3週間に1回（すなわち、21日サイクル）または4週間に1回（すなわち、28日サイクル）静脈内投与される。
投与の頻度およびタイミング、ならびに投与量は、所望の長さの時間にわたって活性剤の連続的な効果および/または長期効果を維持するために、投与サイクルにわたって周期的に投与され得る。NaPi2b標的指向性抗体-薬物コンジュゲートの提供される組成物は、1時間ごとに、連日、毎週、毎月、毎年または1回投与され得る。投与サイクルの時間の長さは、経験的に決定することができ、治療される疾患、疾患の重症度、特定の患者、および治療する医師の技術レベル内の他の考慮事項に依存する。本明細書において提供される併用療法による治療の時間の長さは、1週間、2週間、1ヶ月、数ヶ月、1年、数年またはそれ以上であり得る。
いくつかの態様では、NaPi2b標的指向性抗体-薬物コンジュゲートの投与頻度は、1日1回、隔日、週2回、週1回、2週間に1回、3週間に1回、または4週間に1回である。投与量は、治療の経過中に複数の投与サイクルに分割され得る。例えば、NaPi2b標的指向性抗体-薬物コンジュゲートは、約1ヶ月、約2ヶ月、約3ヶ月、約4ヶ月、約5ヶ月、約6ヶ月、約1年またはそれ以上の期間にわたって頻度で投与され得る。投与頻度は、サイクルの期間を通して同じであってよい、または異なっていてもよい。いくつかの態様では、NaPi2b標的指向性抗体-薬物コンジュゲートは、投与サイクルの最初の1週間にわたって、少なくとも週2回投与される。最初の週の後、頻度は、週2回で継続され得るか、週2回を超えて増加し得るか、または週1回以下に減少され得る。投与される特定の投与量、治療される疾患または病態、疾患または病態の重症度、対象の年齢、および他の同様の因子に基づいて特定の投与頻度および投与サイクルを決定することは、当業者のレベルの範囲内である。
いくつかの態様では、中断された治療の非存在下で疾患症状が持続する場合、治療をさらに長期間にわたって継続することができる。治療の経過にわたって、疾患、および/または治療に関連する毒性もしくは副作用の証拠をモニタリングすることができる。
NaPi2b標的指向性抗体-薬物コンジュゲートの投与サイクルは、薬剤への曝露からの休止期間を提供するために、中断された治療期間を追加するように調整され得る。治療の中断のための時間の長さは、所定の時間にわたり得るか、または患者がどのように応答しているかに応じて、もしくは観察された副作用に応じて経験的に決定され得る。例えば、治療は、1週間、2週間、3週間、1ヶ月または数ヶ月にわたって中断され得る。いくつかの態様では、中断された治療期間は、患者に対する投与レジメンのサイクルに組み込まれる。
例示的な投与レジメンは、21日間または28日間の治療サイクルまたは投与サイクルである。いくつかの態様では、投与レジメンは治療サイクルであるか、または投与サイクルは28日間である。いくつかの態様では、本明細書において開示されるNaPi2b標的指向性抗体-薬物コンジュゲートは、1日目に投与され、続いて20日間投与されないか、または1日目に投与され、続いて27日間投与されない。正確な投与サイクルおよび投与スケジュールを決定することは、当業者のレベルの範囲内である。
いくつかの態様では、投与サイクルは、任意の所望の長さの時間にわたり得る（例えば、21日サイクルまたは28日サイクルの投与が、任意の長さの時間にわたって繰り返され得る）。例えば、21日サイクルまたは28日サイクルの投与が、2ヶ月、3ヶ月、4ヶ月、5ヶ月、6ヶ月、7ヶ月、8ヶ月、9ヶ月、10ヶ月、11ヶ月、12ヶ月、1.5年、2年、2.5年、3年またはそれ以上にわたって繰り返され得る。
いくつかの態様では、NaPi2b発現癌には、例えば、卵巣癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、子宮内膜癌、乳頭状腎細胞癌、唾液管癌、乳頭様甲状腺癌、腎明細胞癌、乳癌、腎癌、子宮頸癌および胆管癌が含まれる。
いくつかの態様では、NaPi2b発現癌には、例えば、卵巣癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、子宮内膜癌、乳頭状腎細胞癌、唾液管癌および乳頭様甲状腺癌が含まれる。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象の卵巣癌または非小細胞肺癌（NSCLC）を治療する方法に関する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象の卵巣癌または非小細胞肺癌（NSCLC）を治療するための医薬品の製造における、本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、それを必要とする対象の卵巣癌または非小細胞肺癌（NSCLC）を治療するための、本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象の卵巣癌または非小細胞肺癌（NSCLC）の治療に使用するためのコンジュゲートを提供する。
いくつかの態様では、癌は非小細胞肺癌（NSCLC）である。いくつかの態様では、NSCLCは、腺癌としてサブタイプ分類される（sub-typed）。
いくつかの態様では、卵巣癌はプラチナ抵抗性卵巣癌である。いくつかの態様では、卵巣癌は高悪性度漿液性卵巣癌である。いくつかの態様では、卵巣癌は、プラチナ抵抗性の高悪性度漿液性卵巣癌である。
いくつかの態様では、癌は子宮内膜癌である。いくつかの態様では、癌は乳頭状腎細胞癌である。いくつかの態様では、癌は唾液管癌である。いくつかの態様では、癌は乳頭様甲状腺癌である。
いくつかの態様では、対象は、上皮性卵巣癌、ファロピウス管癌、原発性腹膜癌、プラチナ抵抗性卵巣癌、非扁平上皮NSCLC癌、進行性、放射性ヨウ素抵抗性、局所領域再発性もしくは転移性疾患乳頭様甲状腺癌、または上皮性子宮内膜癌を有する。
いくつかの態様では、上皮性卵巣癌を有する対象は、高悪性度卵巣癌、低悪性度漿液性卵巣癌または明細胞型卵巣癌としてサブタイプ分類される。
いくつかの態様では、卵巣癌を有する対象は、化学療法剤、例えば、ドセタキセル、ドキソルビシン、シクロホスファミド、カルボプラチン、パクリタキセル、nab-パクリタキセル、ゲムシタビンおよびシスプラチンなど;血管新生阻害剤、例えばベバシズマブ（Avastin）など;PARP阻害剤、例えば、ニラパリブ（Zejula）、オラパリブ（Lynparza）およびベリパリブなど;ベバシズマブと組み合わせたオラパリブ（Lynparza）;またはそれらの組合せによる先行治療を受けたことがある。
いくつかの態様では、卵巣癌を有する対象は、例えば、ペグ化リポソームドキソルビシン、パクリタキセルトポテカンゲムシタビン、PARP阻害剤などによる毎週の治療などの先行する単剤化学療法を受けたことがある。
いくつかの態様では、卵巣癌を有する対象は、例えば、化学療法の組合せ、例えば、カルボプラチン＋パクリタキセル;ペグ化リポソームドキソルビシン;パクリタキセル、ドセタキセル、トポテカン、ゲムシタビン、PARP阻害剤などによる毎週の治療などの3ライン以下の先行治療ラインを受けたことがある。
いくつかの態様では、卵巣癌を有する対象は、プラチナ含有レジメンの少なくとも1つのラインを含む、3ライン以下の先行治療ラインを受けたことがある。いくつかの態様では、卵巣癌を有する対象は、プラチナ含有レジメンの少なくとも1つのラインの有無にかかわらず、4ライン以下の先行治療ラインを受けたことがある。
いくつかの態様では、NSCLC癌を有する対象は、腺癌としてサブタイプ分類される。いくつかの態様では、腺癌NSCLC癌を有する対象は、転移性または再発性であり得る。
いくつかの態様では、対象は、NSCLCを有し、例えば、プラチナベースの化学療法（シスプラチンまたはカルボプラチン）、およびPD-1モノクローナル抗体またはPD-L1モノクローナル抗体などによる先行治療を受けたことがある。いくつかの態様では、対象は、NSCLCを有し、カルボプラチン/パクリタキセル、アブラキサンnab-パクリタキセル、ドセタキセル、プレメトレキセド（premetrexed）、ゲムシタビン、またはドセタキセルとラムシルマブとの組合せによる先行治療を受けたことがある。
いくつかの態様では、対象は、NSCLCを有し、化学療法の最大2つの先行するラインを受けたことがある。
いくつかの態様では、対象は、NSCLCを有し、細胞傷害剤による追加の先行治療を受けていないか、または免疫療法を受けていない。別の態様では、NSCLCを有する対象について、承認された治療法がある公知の発癌性変異を有する不耐性または疾患進行（例えば、ALK転座、EGFR変異またはKRAS変異）が実証されている。
いくつかの態様では、NSCLC癌を有する対象は、NaPi2b抗体-薬物コンジュゲートと、PD-1モノクローナル抗体またはPD-L1モノクローナル抗体、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アテゾリズマブまたはアベルマブなどとを用いて治療される。
いくつかの態様では、NSCLC癌を有する対象は、NaPi2b抗体-薬物コンジュゲートと、PD-1モノクローナル抗体またはPD-L1モノクローナル抗体、ペンブロリズマブとを用いて治療される。
いくつかの態様では、対象は、PARP阻害剤、例えば、オラパリブ、ニラパリブ、ルカパリブ、タラゾパリブなど;PD1/PDL-1阻害剤、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブなど;化学療法、例えば、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキシル、シクロホスファミド、ゲムシタビン、トポテカン、プレメトレキセ（premetrexe）など;VEGF阻害剤、例えばベバシズマブ、ラムシルマブなど;チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、ゲフィチニブ、アファチニブ、エルロチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、パゾパニブなど;ALK阻害剤、例えば、アレクチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ（certinib）、ブリガチニブなど;またはBRAF阻害剤、例えば、ダブラフェニブ、トラメチニブなどと組み合わせたNaPi2b抗体-薬物コンジュゲートを用いて治療される。
いくつかの態様では、免疫チェックポイント阻害剤はペンブロリズマブである。
いくつかの態様では、対象は、ペンブロリズマブ、カルボプラチン、ドキシル、ベバシズマブまたはPARP阻害剤と組み合わせたNaPi2b抗体-薬物コンジュゲートを用いて治療される。
いくつかの態様では、対象は、先行するキナーゼ阻害剤療法に対する抵抗性もしくは不耐性を有する乳頭様甲状腺癌を有するか、または低悪性度ホルモン受容体陽性類内膜腺癌の先行治療を受けたことがある。
いくつかの態様では、子宮内膜癌は、間質腫瘍または癌肉腫ではない。いくつかの態様では、対象は、子宮内膜癌を有し、カルボプラチン/パクリタキセルまたは同様のレジメンによる先行治療を受けたことがある。
いくつかの態様では、対象は、主として乳頭状増殖パターンを有する乳頭状腎細胞癌または腎明細胞癌を有する。一態様では、対象は、標準的な全身療法後に進行した唾液管癌の組織学的診断を有する。
いくつかの態様では、対象は、標準的な第一線の化学療法剤を含む化学療法に対して難治性である。
別段の定義がない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書において、単数形は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、複数形も含む。本明細書において記載されるものと同様または同等の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、好適な方法および材料を以下に記載する。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先される。さらに、材料、方法および実施例は、単なる例示であり、限定することを意図するものではない。
本明細書を通して、化合物、足場および組成物が特定の成分を有するか、含む（including）か、または含む（comprising）ものとして記載される場合、組成物はまた、列挙された成分から本質的になるか、またはそれからなることが企図される。同様に、方法またはプロセスが特定のプロセス工程を有するか、含む（including）か、または含む（comprising）ものとして記載される場合、プロセスはまた、列挙された処理工程から本質的になるか、またはそれからなる。さらに、本発明が動作可能なままである限り、特定の動作を実行するための工程順または順序は重要ではないことを理解されたい。さらに、2つ以上の工程または動作が同時に実行され得る。
本明細書において記載されるすべての方法は、本明細書において別段の指定がない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で行うことができる。本明細書において提供されるありとあらゆる例または例示的な文言（例えば「など」）の使用は、単に本発明をさらによく説明することを意図するものであり、明示的に別段の主張がない限り、特許請求の範囲に対する限定として解釈されるべきではない。本明細書におけるいかなる文言も、主張されていないいずれかの要素が主張されているものにとって不可欠であることを示すと解釈されるべきではない。
合成方法
任意の利用可能な技術を使用して、コンジュゲートまたはその組成物、ならびにそれらを作製するのに有用な中間体および成分（例えば足場）を作製することができる。いくつかの態様では、半合成および完全合成の方法が使用され得る。
本明細書において開示されるコンジュゲートまたは足場を生成する一般的な方法は、以下のスキーム2および3、ならびにその開示全体が本明細書に組み入れられる、同時係属中の米国特許第15/819,650号に示されている。これらのスキームでは、変数（例えば、MP、MA、L3、WD、WM、LDおよびLP’など）は、特に明記しない限り、本明細書において記載されるのと同じ定義を有する。
スキーム2
スキーム3
ここで、抗体は、本開示の修飾抗体である。
本開示の合成プロセスは、多種多様な官能基を許容することができる。したがって、様々な置換出発材料を使用することができる。プロセスは、一般に、全体的なプロセスの終了時または終了近くで所望の最終化合物を提供するが、ある場合には、化合物をその薬学的に許容される塩、エステルまたはプロドラッグにさらに変換することが望ましい場合がある。
本開示のコンジュゲートに使用される薬物化合物は、商業的に入手可能な出発材料、文献で公知の化合物を使用して、または容易に調製される中間体から、当業者に公知であるか、もしくは本明細書における教示に照らして当業者に明らかである標準的な合成方法および合成手順を使用することによって、様々な方法で調製され得る。有機分子の調製ならびに官能基の変換および操作のための標準的な合成方法および合成手順は、関連する科学文献から、または当分野の標準的な教科書から得ることができる。いずれか1つまたは複数の情報源に限定されないが、参照により本明細書に組み入れられる古典的な教科書、例えば、Smith,M.B.,March,J.,March’s Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,5th edition,John Wiley＆Sons:New York,2001;およびGreene,T.W.,Wuts,P.G.M.,Protective Groups in Organic Synthesis,3rd edition,John Wiley＆Sons:New York,1999は、当業者に公知の有機合成の有用かつ認識された参考教科書である。合成方法の以下の説明は、本開示の化合物を調製するための一般的な手順を例示するために設計されているが、それに限定されるわけではない。
本開示のコンジュゲート、およびその中に含まれる薬物化合物は、当業者によく知られている様々な方法によって調製され得る。本明細書において記載される式の各々を有する本開示のコンジュゲートまたは化合物は、商業的に入手可能な出発材料、または文献の手順を使用して調製され得る出発材料から、以下の手順に従って調製され得る。これらの手順は、本開示の代表的なコンジュゲートの調製を示す。
上記の方法によって設計、選択および/または最適化されたコンジュゲートは、生成されると、コンジュゲートが生物学的活性を有するかどうかを決定するために、当業者に公知の様々なアッセイを使用して特性評価され得る。いくつかの態様では、コンジュゲートは、それらが予測される活性、結合活性および/または結合特異性を有するかどうかを決定するために、限定されることなく、下記に記載されるアッセイを含む従来のアッセイによって特性評価され得る。
さらに、ハイスループットスクリーニングを使用して、そのようなアッセイを使用する分析を迅速化することができる。ハイスループットスクリーニングを行うための一般的な方法は、例えば、Devlin（1998）High Throughput Screening,Marcel Dekkerおよび米国特許第5,763,263号に記載されている。ハイスループットアッセイでは、限定されることなく、以下に記載されるものを含む1つまたは複数の異なるアッセイ技術が使用され得る。
別段の定義がない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書において記載されるものと同様または同等の方法および材料を本開示の実施または試験に使用することができるが、好適な方法および材料を以下に記載する。本明細書において言及されるすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、参照によりその全体が組み入れられる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先される。さらに、材料、方法および実施例は、単なる例示であり、限定することを意図するものではない。
以下の実施例は、リンカー、薬物分子および抗体または抗体断片、ならびにそれらを調製するための方法の例示である。これらは限定することを意図するものではなく、他の試薬または方法を利用してもよいことが当業者によって容易に理解されるであろう。
略語
以下の略語は、以下の反応スキームおよび合成例で使用される。この一覧は、有機合成の当業者によって容易に理解される追加の標準的な略語として本出願で使用される略語の包括的な一覧であることを意味するものではなく、合成スキームおよび実施例でも使用され得る。
略語:
一般的な情報
特に指示しない限り、試薬はいずれも、関連する提供者から購入した。
XMT-1535（抗NaPi2b抗体）は、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる、2017年3月13日に出願された同時係属出願の米国特許第15/457,574号に開示されている。XMT-1519（抗Her2抗体）は、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる、2017年1月31日に発行された米国特許第9,555,112号および2017年8月22日に発行された米国特許第9,738,720号に開示されている。
Endo SHは、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられるPCT出願国際公開公報第2017137459号に記載されているように調製した。UDP-アジド糖およびGalNAcTは、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第9,988,662号に記載されているように調製した。
処置群と対照群との間の腫瘍体積中央値（MTV）のパーセント差として、腫瘍増殖阻害（％TGI）を定義した。各有効性試験を通して腫瘍サイズを測定して、腫瘍増殖阻害（TGI）を決定した。
Phenomenex Gemini 5μm C18 110Å、250×10mmの半分取カラムを用いてHPLC精製を行った。適用可能な場合、コンジュゲートの薬物含有量を分光光度的に決定し、そうでなければ、薬物含有量の定量決定のためにRP-HPLC、LC/MSまたは1H-NMRを行った。
280nmで分光光度的に、またはELISAによって、抗体-薬物コンジュゲートのタンパク質含有量を決定した。
必要に応じて広範囲のダイアフィルトレーション、HICまたはプロテインAによって、抗体-薬物コンジュゲート、薬物担持足場または抗体足場を精製した（すなわち、残留未反応薬物、非コンジュゲート抗体、酵素または出発材料の除去）。必要に応じて、SECまたはHICによる追加の精製を行って、凝集した抗体-薬物コンジュゲートを除去した。一般に、抗体-薬物コンジュゲートは、精製されると、SECによって決定される場合、5％（w/w）未満（例えば、2％（w/w）未満）の凝集した抗体-薬物コンジュゲート;RP-HPLCおよび/またはLC-MS/MSによって決定される場合、0.5％（w/w）未満（例えば、0.1％（w/w）未満）の遊離（非コンジュゲート）薬物;SECおよび/またはRP-HPLCによって決定される場合、1％（w/w）未満の遊離薬物コンジュゲート;ならびにHIC-HPLCおよび/またはRP-HPLCによって決定される場合、2％（w/w）未満（例えば、1％（w/w）未満）の非コンジュゲート抗体または非コンジュゲート抗体断片を含有した。文献に記載されている手順を使用して、還元抗体または部分還元抗体を調製した。例えば、Francisco et al.,Blood 102（4）:1458-1465（2003）を参照されたい。RP-HPLC、またはCE-SDSによって測定した場合のDARからの逆算によって、総薬物（コンジュゲートおよび非コンジュゲート）濃度を決定した。
生物学的試料中の遊離AF-HPA薬物の濃度を決定するために、ACNを用いて酸性化試料を処理した。遊離薬物を抽出し、ACN上清を分析した。非臨床試料中のコンジュゲートAF-HPAの濃度を決定するために、試料を、抗IgG1抗体によってコーティングされた磁気ビーズを使用して免疫捕獲に供し、続いて徹底的な塩基性加水分解に供した。LC-MS/MSによって、放出されたAF-HPA薬物を含有するACN上清を分析した。トリプシン消化後の抗体に固有のペプチド配列の検出を介して抗IgG1抗体を使用した免疫捕獲後のLC-MS/MSによって、非臨床試料中の総抗体濃度を測定した。臨床試料については、抗イディオタイプ抗体を免疫捕獲に使用して内因性抗体の干渉を回避することを除いて、同じ手順に従うことができた。
C4カラム、ACN勾配およびUV検出を使用するRP-HPLCによって、遊離AFおよび遊離AF-HPAの分析を行った。ピーク面積を統合し、AF標準およびAF-HPA標準と比較する。方法は、血漿ホモジネートおよび組織ホモジネート中のAFおよびAF-HPAについて定量的であり、0.1ng/mL～150ng/mLの濃度範囲にわたって線形である。1ng/mL～5,000ng/mLのダイナミックレンジを有する同じ条件下で、NaOH（水溶液）による加水分解後に放出された総薬物（AF-HPA）を測定した。総抗体標準は、0.1μg/mL～100μg/mLの範囲である。
ダイオードアレイ検出器（DAD）を備えたShimadzu Prominence HPLCシステムを用いたHIC-HPLCによって、抗体-薬物コンジュゲートの疎水性を決定した。これらの分析のために、TSKゲルブチル-NPRカラム（2.5μm粒径）を35℃に保持した。移動相Aは1.5M硫酸アンモニウム、25mMリン酸ナトリウム、pH7.0であり、移動相Bは25mMリン酸ナトリウム、10％イソプロピルアルコール、pH7.0であった。分離は、移動相Bの0～100％の直線勾配を用いて、25分間にわたって行った。流速は1mL/分であった。試料注入は約10μg～100μgの範囲であった。
抗体-薬物コンジュゲートを徹底的な塩基加水分解に供することによって、薬物対抗体比（DAR）を決定した。次いで、RP-HPLCを用いて、標準曲線から、放出されたAF-HPAを定量した。測定されたAF-HPA濃度を抗体含有量と相関させて、DARを決定した。
実施例1:足場6の合成
工程1。化合物3
化合物1（548mg、0.165mmol、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第15/819,650号に記載されているように調製した）、水（14mL）、NMP（1.4mL）、EDC（158mg、0.824mmol）およびHOAt（112mg、0.824mmol）を氷浴中で撹拌し、1N NaHCO3（水溶液）を用いてpHを約6.5に調整した。化合物2（696mg、0.577mmol）を加えた後、pHを約6.5に調整した。得られた混合物を低温で3時間撹拌した。追加のEDC、HOAtおよび化合物2（198mg、0.164mmol）を加え、撹拌を一晩続けた。10％～50％～90％v/vのACN/H2O（0.1％TFA）のACN/H2O（0.1％TFA）の段階勾配を用いて、C18カートリッジ（275g）上で反応混合物を精製した。所望の画分を凍結乾燥して、化合物3を白色アモルファス固体として得た（825mg、収率76％）。MS:2120.04（3＋）,1590.27（4＋）,1272.41（5＋）。
工程2。化合物4
ガラスParrボトル内の化合物3（825mg、0.126mmol）、EtOH（90mL）および水（9.00mL）の混合物に、酢酸（0.288mL、5.04mmol）を加えた。アルゴンを混合物に通過させてバブリングさせ、その後、Pd/C（134mg、0.126mmol）を加えた。ボトルを水素化装置に取り付け、次いで、連続的に真空圧送し、アルゴンを充填し、次いで、水素（0.762mg、0.378mmol）を30psiまで充填し、混合物を一晩激しく撹拌した。反応混合物をシリカゲルのプラグを通して濾過し、油状物に濃縮した。油状物をACN/H2O（0.1％TFA）に溶解し、凍結乾燥して、白色アモルファス固体（790mg、収率100％）として化合物4を得た。MS:2094.65（3＋）,1570.98（4＋）,1257.18（5＋）。
工程3。化合物5
THF（1.5mL）および水（1.5mL）に溶解した化合物4（100mg、0.016mmol）の氷冷溶液に、ギ酸（4.5mL、117mmol）を加えた。溶液を15分間冷却撹拌し、次いで、室温で一晩撹拌した。THFを除去し、得られた混合物を水で希釈し、移動相としてACN/H2O（0.1％TFA）を使用してC18カートリッジ（150g）上で精製した。所望の画分を凍結乾燥して、化合物5を白色アモルファス固体として得た（71mg、収率72％）。MS:2060.97（3＋）,1545.98（4＋）,1236.99（5＋）。
工程4。足場6
化合物5（71mg、0.011mmol）のDCM（5mL）およびDMF（0.500mL）氷冷溶液に、（（1R,8S,9s）-ビシクロ［6.1.0］ノナ-4-イン-9-イル）メチル（2,5-ジオキソピロリジン-1-イル）カーボネート（5.02mg、0.017mmol）およびDIPEA（0.018mL、0.103mmol）、最終pH約8～約9を加えた。18時間後、DMF（1.5mL）を反応混合物に加え、混合物を室温で2時間撹拌し、次いで、濃縮し、移動相としてACN/H2O（0.1％AcOH）を使用する分取HPLCを用いて精製した。所望の画分を凍結乾燥して、足場6を白色アモルファス固体として得た（34mg、収率47％）。MS:2120.04（3＋）,1590.27（4＋）,1272.41（5＋）。
実施例2:足場6のXMT-1535薬物コンジュゲート（コンジュゲート7、DAR 6.0）の合成
式中、
はGlcNAcであり、
はFucであり、
はGalNAcである。
工程1。アジド修飾XMT-1535抗体
XMT-1535抗体（910.6mg、6.22μmole）のTBS、pH7.6溶液に、TBS（249μL、pH7.6）、Endo SH（9.10mg、0.065μmole）、GalNAcT（77.9mg、1.69μmole）、UDP-アジド糖（144mg、227μmole）およびMnCl2（76mg、604μmole）の順序でこれらを加えて、15g/Lの最終抗体濃度を達成した。反応物を30rpmで30℃で一晩撹拌した。粗アジド修飾XMT-1535抗体をプロテインAクロマトグラフィーおよび透析によって精製して、アジド修飾XMT-1535抗体（880mg、収率97％）を得た。
工程2。足場6のXMT-1535薬物コンジュゲート（コンジュゲート7、DAR 6.0）
アジド修飾XMT-1535抗体（300mg、2.05μmole）のPBS、pH7.4（5.5mL）溶液と、足場6（127.2mg、20.0μmole）の水溶液とを穏やかに混合し、次いで、振盪または揺動することなく30℃で20時間放置した。粗生成物をUF/DFおよびHICによって精製して、コンジュゲート7を得（132mg、収率44％）、コンジュゲート7は、加水分解とそれに続くRP-HPLCによって決定される場合、6.6のDARを有した。
実施例3:足場6のXMT-1519コンジュゲート（コンジュゲート8、DAR 7.3）の合成
式中、
はGlcNAcであり、
はFucであり、
はGalNAcである。
アジド修飾XMT-1535抗体の代わりに工程2でアジド修飾XMT-1519（400mg、2.78μmole）を使用したことを除いて、実施例2に記載したようにコンジュゲート8を合成した。精製されたコンジュゲート8（163mg、収率41％）は、加水分解とそれに続くRP-HPLCによって決定される場合、7.3の薬物対DARを有した。
実施例4:足場6のトラスツズマブコンジュゲート（コンジュゲート9、DAR 7.3）の合成
式中、
はGlcNAcであり、
はFucであり、
はGalNAcである。
コンジュゲート9は、アジド修飾XMT-1535抗体の代わりにアジド修飾トラスツズマブ（35mg、0.239μmol）を工程2で使用したことを除いて、実施例2に記載した通りであった。精製されたコンジュゲート9は、加水分解とそれに続くRP-HPLCによって決定される場合、7.3のDARを有した。
実施例5:足場6のリツキシマブコンジュゲート（コンジュゲート10、DAR 6.8）の合成
式中、
はGlcNAcであり、
はFucであり、
はGalNAcである。
アジド修飾XMT-1535抗体の代わりに工程2でアジド修飾リツキシマブ（40mg、0.28μmole）を使用したことを除いて、実施例2に記載したようにコンジュゲート10を調製した。精製されたコンジュゲート10は、加水分解とそれに続くRP-HPLCによって決定される場合、6.8の薬物対DARを有した。
実施例6:XMT-1535コンジュゲート11（DAR 6.5）の合成
XMT-1535（200mg、1.37μmol）の＋4℃の酢酸ナトリウム緩衝液（25mM、pH5.5、21.1mL）溶液に、TEAA（水溶液、50mM）およびEDTA（1mM、pH7.0、18.95mL）を加えた。NaHCO3（水溶液、1.0M）を使用して、得られた混合物のpHをpH7.0に調整した後、TCEP（1.37mg、4.77μmole）のTEAA（水溶液、50mM）およびEDTA（1mM、pH7.0）溶液を加えた。90分後、酢酸（水溶液、1.0M）を使用して、反応混合物のpHをpH6.0に調整した。足場6（79.8mg、12.3μmol、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第15/819,650号に記載されているように調製した）のマレイミド足場のTEAA（水溶液、50mM、9.5mL）およびEDTA（1mM、pH7.0）溶液を加え、得られた混合物を＋4℃で2時間撹拌した。2時間後、L-システイン（8.28mg、68.3μmole）を加えることによって、反応をクエンチした。UF/DFおよびHICによって粗生成物を精製して（75.2mg、収率38％）、推測的コンジュゲート11を得た。精製されたコンジュゲート11は、加水分解とそれに続くRP-HPLCによって決定される場合、6.5のDARを有した。
実施例7:XMT-1519コンジュゲート12（DAR 6.6）の合成
XMT-1535抗体の代わりにXMT-1519抗体（500mg、3.47μmole）を使用したことを除いて、実施例6に記載したようにコンジュゲート12を合成した。精製された推測的コンジュゲート12は、加水分解とそれに続くRP-HPLCによって決定される場合、6.6のDARを有した。
実施例8:トラスツズマブコンジュゲート13（DAR 6.4）の合成
XMT-1535抗体の代わりにトラスツズマブ（40mg、0.273μmole）を使用し、還元を室温で行ったことを除いて、実施例6に記載したようにコンジュゲート13を合成した。精製された推測的コンジュゲート13は、加水分解とそれに続くRP-HPLCによって決定される場合、6.4のDARを有した。
実施例9:ELISAによるNaPi2bペプチドへのNaPi2b抗体-薬物コンジュゲートの結合
ペプチド（PBS中1μg/mL）との＋4℃での一晩のインキュベーションによって、96ウェルプレートの各ウェルの表面に、ヒトNaPi2b由来ペプチド
をコーティングした。次いで、BSA（0.1％Tween 20を含有するPBS（PBST）中3％）と室温で1時間インキュベートすることによって、ウェルをブロッキングした。次いで、試験物（XMT-1535、コンジュゲート7またはコンジュゲート11）の一定範囲の希釈物（0.017nM～1μM;3％BSAのPBS溶液で3倍段階希釈）を各ウェルに加え、プレートを穏やかに揺動させながら室温で1時間インキュベートした。PBST（3回）を用いて洗浄することによって、未結合の試験物を除去した。HRPにコンジュゲートした二次抗ヒトIgG（PBST中0.16μg/mL）を各ウェル内で1時間インキュベートした。PBST（3回）を用いて洗浄することによって、未結合の二次抗体を除去した。HRP基質、TMBを各ウェルに加え、青色が見えるまでインキュベートした。硫酸（0.2N、100μL）を加えることによって、反応をクエンチした。プレートリーダー（Molecular Devices、Spectramax M5）で450nmでの吸光度を測定した。GraphPad Prismソフトウェアを使用して、値をプロットした。4パラメータカーブフィッティングによってEC50値を決定した。表Iに結合値（EC50）を要約する。
（表Ｉ）
表Iに示すように、XMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11は、同等のEC50値を示す。示される結果は、コンジュゲート7およびコンジュゲート11に関する3回の反復実験の平均EC50値および標準偏差、ならびにXMT-1535に関する2回の反復実験の平均EC50値である。
実施例9A:ELISAによるNaPi2bペプチドへのNaPi2b抗体-薬物コンジュゲートの結合
に由来するNaPi2b由来ペプチドを使用したことを除いて、実施例9に記載したように、NaPi2b由来ペプチドへのNaPi2b抗体-薬物コンジュゲートの結合を行った。表IAに結合値（EC50）を要約する。
（表ＩＡ）
表IAに示すように、XMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11は、ヒト、カニクイザル、ラットおよびマウス由来のNaPi2bペプチドへの結合について同等のEC50値を示す。示される結果は、各試験物に関する2回の反復実験の平均EC50値である。
実施例10:ELISAによる組換えHER2タンパク質へのHer2標的指向性抗体-薬物コンジュゲートの結合
PBS中1μg/mLで＋4℃で一晩インキュベートすることによって、96ウェルプレートの各ウェルの表面に、組換えヒトHER2（Acro Biosystems）をコーティングした。次いで、PBSTと室温で1時間インキュベートすることによって、ウェルをブロッキングした。次いで、試験物（XMT-1519、コンジュゲート8またはコンジュゲート12）の一定範囲の希釈物（9.54×10-5nM～100nM、1％BSAのPBS溶液で4倍段階希釈）を各ウェルに加え、プレートを穏やかに揺動させながら室温で1時間インキュベートした。PBST（3回）を用いて洗浄することによって、未結合の試験物を除去した。HRPにコンジュゲートした二次抗ヒトIgG（PBST中0.16μg/ml）を各ウェル内で1時間インキュベートした。PBST（3回）を用いて洗浄することによって、未結合の二次抗体を除去した。HRP基質、TMBを各ウェルに加え、青色が見えるまでインキュベートした。硫酸（0.2N、100μL）を加えることによって、反応をクエンチした。プレートリーダー（Molecular Devices、Spectramax M5）で450nmでの吸光度を測定した。GraphPad Prismソフトウェアを使用して、値をプロットした。4パラメータカーブフィッティングによってEC50値を決定した。表IIに平均結合値（EC50）を要約する。
（表ＩＩ）
表IIに示すように、XMT-1519、コンジュゲート8およびコンジュゲート12は、同等のEC50値を示す。結果は、各試験物に関する2回の反復実験の平均EC50値である。
実施例11:NaPi2b由来ペプチドに対する抗体-薬物コンジュゲートの結合親和性
Biolayer Interferometry（BLI;Octet;ForteBio）によって、固定化されたNaPi2b由来ペプチド抗原に対するXMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11の結合動態を決定した。標準的なOctet手順（ForteBio）を使用して、XMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11の結合定数を決定した。ビオチン化NaPi2b由来ペプチド
を動態緩衝液（10倍）中のストレプトアビジンオクテットセンサに固定化した。次いで、ビオチン（50μg/mL）を含む動態緩衝液（10倍）中でセンサをブロッキングした。次いで、漸増濃度のXMT-1535、コンジュゲート7またはコンジュゲート11を、動態緩衝液（10倍）中の固定化ペプチドと会合させた。
表IIIに、NaPi2b由来ペプチドに対するXMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11の25℃でのKd（平衡解離定数）、kon（会合速度）およびkoff（解離速度）を要約する。
（表ＩＩＩ）
表IIIに示すように、XMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11は、NaPi2b由来ペプチドへのそれらの結合について同等のKd値を示す。示される結果は、各試験物に関する4回の反復実験の平均値および標準偏差値である。
実施例12:Fc受容体への抗体-薬物コンジュゲートの結合親和性
25℃でBiolayer Interferometry（BLI;ForteBio Octet QKe）によって、Fc受容体（FcRn、FcγRI、FcγRIIA（H167）およびFcγRIIIA（V176）に対するXMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11の結合動態を決定した。Fcγ受容体への結合を試験するために、XMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11を動態緩衝液（1倍）で1μg/mLに希釈し、抗ヒトFab-CH1（FAB2G）バイオセンサ上で10分間捕捉した。希釈およびベースライン測定はいずれも、動態緩衝液（1倍）中で行った。各捕捉工程の前後61分でベースライン測定を行った。様々なFc受容体に対する会合測定を7つの濃度（1μM～100nM、2倍段階希釈）で5分間行った。解離を15分間行った。結合定数は、1:1モデルを使用してトレースの大域的な適合平均を用いて計算した。標準的なOctet手順（ForteBio）を使用して、Fc受容体に対するXMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11の結合定数を決定した。Octetソフトウェア（ForteBio）を使用して動態パラメータを計算した。
FcRn受容体への結合を試験するために、Fab-CH1（FAB2G）バイオセンサへのXMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11の会合を上記のように行った。会合後、センサをFcRn結合緩衝液（Boston Bioproducts;100mM NaH2PO4、0.05％Tween 20、pH6.0に希釈）中で5分間洗浄した。会合工程および解離工程をFcRn結合緩衝液中で行った。FcRnタンパク質（Immunitrack）に対する会合測定を7つの濃度（1μM～100nM、2倍段階希釈）で5分間測定した。解離を15分間行った。結合定数は、1:1モデルを使用してトレースの大域的な適合平均を用いて計算した。
表IV～VIIに、各試験物に関するヒトFcRn（表IV）、FcγRI（表V）、FcγRIIA H167（表VI）およびFcγRIIIA V167（表VII）のKd（平衡解離定数）、kon（会合速度）およびkoff（解離速度）を要約する。
（表ＩＶ）
表IVに示すように、XMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11は、同等のFcRn Kd値を示す。示される結果は、コンジュゲート7およびコンジュゲート11に関する5回の反復実験の平均値および標準偏差値、ならびにXMT-1535抗体に関する2回の反復実験の平均値である。
（表Ｖ）
表Vに示すように、コンジュゲート7は、コンジュゲート11およびXMT-1535よりも大きいFcγRI Kdおよび高いkoff値を示す。示される結果は、コンジュゲート7およびXMT-1535に関する3回の反復実験の平均値および標準偏差値、ならびにコンジュゲート11に関する2回の反復実験の平均親和性値である。
（表ＶＩ）
表VIに示すように、コンジュゲート7はFcγRIIAに結合しないが、コンジュゲート11およびXMT-1535は、FcγRIIAへの結合について同様のKdを有する。示される結果は、コンジュゲート7およびXMT-1535に関する3回の反復実験の平均値および標準偏差値、ならびにコンジュゲート11に関する2回の反復実験の平均値である。
（表ＶＩＩ）
表VIIに示すように、コンジュゲート7はFcγRIIIAに結合しないが、コンジュゲート11およびXMT-1535は、FcγRIIIAへの結合について同様のKdを有する。示される結果は、各試験物に関する2回の反復実験の平均値である。
実施例13:NaPi2b抗体-薬物コンジュゲートに関する細胞結合アッセイ
MACSQuantフローサイトメーター（Miltenyi Biotec、Bergisch Gladbach,Germany）を使用して、培養したOVCAR3ヒト卵巣癌細胞に対するXMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11の細胞表面結合を評価した。Accutase細胞剥離液（Innovative Cell Technologies）を用いて処理することによって、FBS（20％、ATCC）および1％ペニシリン/ストレプトマイシン（1％）を含むRPMI-1640培地（ATCC）中で増殖させたOVCAR3細胞を剥離した。剥離した細胞を培地中で粉砕し、培地（75μL）中50,000細胞の密度で96ウェルU底プレートに播種した。6％ヤギ血清を含む100μLのRPMI-1640の総体積中、様々な濃度（1μM～0.5nM;3倍段階希釈）の試験物（XMT-1535、コンジュゲート7またはコンジュゲート11）とともに、氷上で3時間細胞をインキュベートした。細胞を氷冷PBS（3回）を用いて洗浄し、各洗浄工程の合間に1,000×RCFでペレット化し、2％ヤギ血清（100μL）および二次蛍光標識抗体Alexa Fluor（登録商標）647標識ヤギ抗ヒトIgG（5μg/mL、Life Technologies）を含むRPMI-1640に氷上で1時間再懸濁した。細胞を氷冷PBS（3回）を用いて洗浄し、1％パラホルムアルデヒド（100μL）を含む氷冷PBSに再懸濁した。フローサイトメーターを用いて各処理について5,000個の細胞を分析することによって、細胞1個当たりの蛍光を決定した。各処理の蛍光中央値をプロットし、Graphpad Prismソフトウェアを用いて4パラメータカーブフィッティングによってEC50値を計算した。
表VIIIに、OVCAR3細胞の細胞表面上のNaPi2bへの結合に関するXMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11のEC50値を要約する。
（表ＶＩＩＩ）
表VIIIに示すように、XMT-1535、コンジュゲート7およびコンジュゲート11は、同等のEC50値を示す。結果は、各試験物に関する2回の反復実験の平均値である。
実施例14:HER2抗体-薬物コンジュゲートの細胞結合アッセイ
MACSQuantフローサイトメーター（Miltenyi Biotec、Bergisch Gladbach,Germany）を使用して、JIMT-1細胞への抗体-薬物コンジュゲートの細胞表面結合を評価した。Accutase細胞剥離液（Innovative Cell Technologies、San Diego,CA）を用いて処理することによって、FBS（10％、ATCC）を含むDMEM培地（ATCC）中で増殖させたJIMT-1細胞を剥離した。剥離した細胞を培地中で粉砕し、75μLの培地中50,000細胞の密度で96ウェルU底プレートに播種した。6％ヤギ血清（100μL）を含むDMEM中、様々な濃度（1μM～0.5nM;3倍段階希釈）の試験物（XMT-1519、コンジュゲート8、コンジュゲート9、コンジュゲート12またはコンジュゲート13）とともに、氷上で3時間細胞をインキュベートした。細胞を氷冷PBSを用いて3回洗浄し、各洗浄工程の合間に1,000×RCFでペレット化し、2％ヤギ血清（100μL）および二次蛍光標識抗体Alexa Fluor（登録商標）647標識ヤギ抗ヒトIgG（5μg/mL、Life Technologies）を含むDMEMに氷上で1時間再懸濁した。細胞を氷冷PBS（3回）を用いて洗浄し、1％パラホルムアルデヒド（100μL）を含む氷冷PBSに再懸濁した。フローサイトメーターを用いて各処理について5,000個の細胞を分析することによって、細胞1個当たりの蛍光の量を決定した。各処理の蛍光中央値をプロットし、Graphpad Prismソフトウェアを用いて4パラメータカーブフィッティングによってEC50値を計算した。
表IXに、JIMT-1細胞の細胞表面上のHER2への結合に関する抗体-薬物コンジュゲートおよびXMT-1519抗体のEC50値を要約する。
（表ＩＸ）
表IXに示すように、XMT-1519、コンジュゲート8、コンジュゲート9、コンジュゲート12およびコンジュゲート13は、狭い範囲内のEC50値を示す。示される結果は、XMT-1519、コンジュゲート8およびコンジュゲート12に関する2つの反復実験の平均値、ならびにコンジュゲート9およびコンジュゲート13に関する単一の実験から得られたEC50値である。
実施例15:NaPi2b-抗体-薬物コンジュゲートに関する細胞傷害性アッセイ
CellTiter-Glo（登録商標）（Promega Corp）を使用してインビトロで腫瘍細胞株OVCAR3における抗増殖特性について、コンジュゲート7およびコンジュゲート11を評価した。細胞を5,000細胞/ウェルの密度で白壁（体積）96ウェルプレートに播種し、5％CO2の加湿雰囲気下、37℃で一晩接着させた。漸増濃度の試験物（コンジュゲート7もしくはコンジュゲート11、または対照コンジュゲート10）とともに細胞をインキュベートした。3日後、CellTiter-Glo（登録商標）試薬を室温でウェルに加えた。SpectraMax M5プレートリーダー（Molecular Devices）を使用して、10分後に発光シグナルを測定した。Graphpad Prismソフトウェアを使用して用量応答曲線を作成した。4パラメータカーブフィッティングからEC50値を決定した。表Xに、6日間の処理後のコンジュゲート7、コンジュゲート11および対照コンジュゲート10のEC50値を要約する。
（表Ｘ）
表Xに示すように、コンジュゲート7およびコンジュゲート11は同等の効力を示したが、対照抗体-薬物コンジュゲート、コンジュゲート10は、コンジュゲート7およびコンジュゲート11の200分の1の効力であった。示される結果は、各試験物に関する2回の反復実験の平均値である。
実施例16:HER2-抗体-薬物コンジュゲートの細胞生存性アッセイ
CellTiter-Glo（登録商標）（Promega Corp）を使用して、腫瘍細胞株JIMT-1における抗増殖特性についてコンジュゲート8、コンジュゲート10およびコンジュゲート12を評価し、インビトロでの腫瘍細胞株JIMT-1およびSKBR3における抗増殖特性についてコンジュゲート9およびコンジュゲート13を評価した。細胞を5,000細胞/ウェルの密度で白壁（体積）96ウェルプレートに播種し、5％CO2の加湿雰囲気下、37℃で一晩接着させた。漸増濃度の試験物（コンジュゲート8、コンジュゲート9、コンジュゲート10、コンジュゲート12またはコンジュゲート13）とともに細胞をインキュベートした。コンジュゲート9およびコンジュゲート13については3日後、またはコンジュゲート8、コンジュゲート12および対照抗体-薬物コンジュゲート、コンジュゲート10については6日後、CellTiter-Glo（登録商標）試薬を室温でウェルに加えた。SpectraMax M5プレートリーダー（Molecular Devices）を使用して、10分後に発光シグナルを測定した。Graphpad Prismソフトウェアを使用して用量応答曲線を作成した。4パラメータカーブフィッティングからEC50値を決定した。
表XIに、6日間の処理後のコンジュゲート8、コンジュゲート12および対照抗体-薬物コンジュゲート、コンジュゲート10のEC50値を要約する。
（表ＸＩ）
表XIに示すように、コンジュゲート8およびコンジュゲート12は、同等の効力を示した。コンジュゲート8およびコンジュゲート12はともに、対照抗体-薬物コンジュゲート、コンジュゲート10の25倍超の効力であった。結果は、各試験物に関する3回の反復実験の平均である。
表XIIに、3日間の処理後のコンジュゲート9およびコンジュゲート13のEC50値を要約する。
（表ＸＩＩ）
表XIIに示すように、コンジュゲート9およびコンジュゲート13は、JIMT-1細胞株およびSKBR3細胞株の両方において同等の効力を示した。結果は、各試験物に関する単一の実験の値である。
実施例17:NaPi2b抗体-薬物コンジュゲートの投与後のマウスにおける血漿曝露
雌性無胸腺ヌードマウスに、OVCAR3細胞を皮下接種した（各群n＝4）。1日目に単回用量として（1群当たり174～176mm3の平均腫瘍サイズ;126～257mm3の範囲）、ペイロード単位で0.05mg/kg用量で、コンジュゲート7、コンジュゲート11またはビヒクルを静脈内投与した。投与の10分後、24時間後、96時間後、168時間後、336時間後および504時間後に血漿を採取した。表XIIIに要約したように、LC-MS/MS分析によって、血漿中のコンジュゲートAF-HPA濃度を決定した。
（表ＸＩＩＩ）
表XIIIに示すように、コンジュゲート7は、コンジュゲート11と比較して、コンジュゲートAF-HPAの高いAUCおよび短いt1/2、ならびに低いClobsおよびVolss（分布体積）を示した。コンジュゲート7およびコンジュゲート11では、Cmax値およびt1/2値はほぼ同等であった。
実施例18:NaPi2b抗体-薬物コンジュゲートの投与後のマウスにおける組織分布
雌性無胸腺ヌードマウスに、OVCAR3細胞を皮下接種した。腫瘍担持マウス37匹（平均腫瘍体積418.5mm3;204～698mm3の範囲）に、0.05mg/kgペイロードでコンジュゲート7の単回用量を投与した。1、24、48、72、96、168、336、504（マウス4匹/群）および672時間後（マウス5匹）に、血漿、腫瘍組織、脾臓、肺、肝臓および腎臓を採取した。さらに、腫瘍担持マウス4匹（平均腫瘍体積653.7mm3;589～687mm3の範囲）にビヒクル対照を投与し、1時間後に採取した。組織をホモジナイズし、次いで、LC-MS/MS分析によって総薬物濃度、遊離AF-HPA濃度および遊離AF濃度を決定した。［総薬物-（遊離AF-HPA＋遊離AF）］によって、コンジュゲート薬物の濃度を計算した。組織分布の結果を表XIVに要約する。
（表ＸＩＶ）
NC＝計算不能。BQL＝定量限界未満。
実施例19:NaPi2b抗体-薬物コンジュゲートの投与後のラットにおける血漿曝露
雌のSprague-Dawleyラットに、ペイロード単位で0.34mg/kgの用量で、コンジュゲート7またはコンジュゲート11を尾静脈内にIVボーラス接種した（各群n＝4）。投与の10分後、24時間後、96時間後、168時間後、336時間後および504時間後に血漿を採取した。表XVに要約したように、LC-MS/MS分析によって、血漿中のコンジュゲートAF-HPA濃度を決定した。
（表ＸＶ）
表XVに示すように、コンジュゲート7は、コンジュゲート11と比較して、コンジュゲートAF-HPAの高いAUC inf、低いCmax、短いt1/2、低いClobsおよび低いVolssを示した。
実施例20:NaPi2b抗体-薬物コンジュゲートの投与後のカニクイザルにおける血漿曝露
雌のカニクイザルに、抗体単位で1mg/kgで、IV注入により30分間かけてコンジュゲート7またはコンジュゲート11を静脈内注射した（各群n＝2）。投与の1時間後、8時間後、24時間後、48時間後、96時間後、168時間後、240時間後、288時間後、336時間後、456時間後および504時間後に血漿を採取した。表XVIに要約したように、LC-MS/MS分析によって、血漿中のコンジュゲートAF-HPA濃度を決定した。
（表ＸＶＩ）
表XVIに示すように、コンジュゲート7は、コンジュゲート11と比較して、コンジュゲートAF-HPAの長いt1/2、大きいAUCinf、ならびに低いClobsおよびVolssを有した。2つのコンジュゲートでは、Cmax値はほぼ同等であった。
実施例21:NaPi2b抗体-薬物コンジュゲートの投与後のカニクイザルにおける血漿曝露
カニクイザル（n＝3雄;n＝3雌）に、抗体単位で1.86、3.72または5.60mg/kgで、IV注入により45分間かけてコンジュゲート7を静脈内注射した。投与前、ならびに投与の1時間後、6時間後、24時間後、96時間後、168時間後、240時間後、336時間後および504時間後に血漿を採取した。表XVIIに要約したように、LC-MS/MS分析によって、血漿中のコンジュゲートAF-HPA濃度を決定した。
（表ＸＶＩＩ）
表XVIIに、コンジュゲート7のクリアランス、半減期およびAUCinfを要約する。
実施例22:OVCAR3におけるNaPi2b抗体-薬物コンジュゲートの投与に対する腫瘍増殖応答。
雌性無胸腺ヌードマウスに、OVCAR3細胞を皮下接種した（各群n＝8）。1日目に単回用量として（1群当たり167～168mm3の平均腫瘍サイズ;85～297mm3の範囲）、コンジュゲート7、コンジュゲート11、対照コンジュゲート10またはビヒクルを静脈内投与した。デジタルキャリパーを使用して、図7に示す時間に腫瘍サイズを測定した。腫瘍体積を計算し、腫瘍増殖の遅延を決定するために使用した。腫瘍が1500mm3以上のサイズに達した際に、マウスを殺処分した。腫瘍体積は、各群の平均±SEMとして報告する。
図7は、ペイロード単位で0.025mg/kg、0.05mg/kgもしくは0.1mg/kgのコンジュゲート7、コンジュゲート11もしくは対照コンジュゲート10、またはビヒクルを1日目に単回用量としてIV投与した後の、OVCAR3細胞を皮下接種したマウス（各群n＝8）における腫瘍応答の結果を提供する。
コンジュゲート10を除く試験物はいずれも、33日目に60％以上の腫瘍増殖阻害（TGI）をもたらした。コンジュゲート10処置は、43％のTGIをもたらした。0.1mg/kgおよび0.05mg/kgのコンジュゲート7ならびに0.1mg/kgのコンジュゲート11による処置では、100mm3未満の群平均腫瘍体積と、33日目までに大部分の腫瘍の退縮とをもたらすことによって最も顕著な効果が実証された。0.1mg/kgのコンジュゲート7による処置では、完全退縮を達成した3つの腫瘍を含め、試験最終日である102日目までの長期の腫瘍増殖阻害によって証明されるように、OVCAR3腫瘍に対する最大の効果が示された。他の群ではいずれも、試験が進行するにつれて腫瘍再増殖が認められた。
実施例23:CTG-0852におけるNaPi2b抗体-薬物コンジュゲートの投与に対する腫瘍増殖応答
無胸腺マウスに、CTG-0852肺腺癌細胞を皮下接種した（各群n＝8）。1日目に単回用量として（1群当たり150～300mm3の平均腫瘍サイズ;85～297mm3の範囲）、コンジュゲート7（ペイロード単位で0.025mg/kg、0.05mg/kgまたは0.1mg/kgで）、対照コンジュゲート10（ペイロード単位で0.05mg/kgまたは0.1mg/kg）またはビヒクルを静脈内投与した。腫瘍体積を計算し、腫瘍増殖の遅延を決定するために使用した。腫瘍が1500mm3以上のサイズに達した際に、マウスを殺処分した。図8は、各群の平均±SEMとして報告される腫瘍体積を示す。
図8は、コンジュゲート7（ペイロード単位で0.025mg/kg、0.05mg/kgまたは0.1mg/kgで）、対照コンジュゲート10（ペイロード単位で0.05mg/kgまたは0.1mg/kg）またはビヒクルを1日目に単回用量としてIV投与した後の、CTG-0852肺腺癌細胞（各群n＝8）を皮下接種したマウスにおける腫瘍応答の結果を提供する。
コンジュゲート7は、全用量レベルで用量依存的、標的依存的な腫瘍増殖阻害（TGI）を示した（図8）。0.1mg/kgペイロードの用量で、コンジュゲート7は、118％のTGIを示し、49日目まで持続的な腫瘍退縮を誘発し、その後、平均腫瘍体積はゆっくりと増加した。0.05mg/kgペイロードでは、コンジュゲート7は、102％のTGIを示し、28日目まで腫瘍退縮を誘発し、その後、平均腫瘍体積は増加した。コンジュゲート7は、0.025mg/kgペイロードで腫瘍増殖阻害を誘発した（TGI＝77％）。コンジュゲート10処置は、ペイロード単位で0.1mg/kg用量で28％、およびペイロード単位で0.05mg/kg用量で51％のTGIをもたらした。
実施例24:HER2抗体-薬物コンジュゲートの投与に対する腫瘍増殖応答
雌のCB.17 SCIDマウスに、JIMT-1細胞を皮下接種した。1日目に単回用量として（腫瘍体積＝150～200mm3）、コンジュゲート8、コンジュゲート9、コンジュゲート12、コンジュゲート13、コンジュゲート10またはビヒクルを静脈内投与した。デジタルキャリパーを使用して、図9および図10に示す時間に腫瘍サイズを測定した。腫瘍体積を計算し、腫瘍増殖の遅延を決定するために使用した。腫瘍が1000mm3以上のサイズに達した際に、マウスを殺処分した。腫瘍体積は、各群の平均±SEMとして報告する。
図9は、コンジュゲート9またはコンジュゲート13（各群n＝10）を投与したJIMT-1腫瘍担持マウスにおける腫瘍応答の結果を提供する。コンジュゲート9およびコンジュゲート13を用いて処置したマウスはいずれも、試験した両用量（ペイロード単位で0.067mg/kgおよび0.199mg/kg）で、長期の腫瘍増殖阻害を示し、両抗体-薬物コンジュゲートで腫瘍再増殖は示されなかった。
図10は、ビヒクル、またはペイロード単位で0.017mg/kg、0.033mg/kgまたは0.067mg/kgのコンジュゲート8、コンジュゲート12もしくは対照コンジュゲート10（各群n＝8）を1日目に単回用量としてIV投与した後の、JIMT-1細胞（各群n＝8）を皮下接種したマウスにおける腫瘍応答の結果を提供する。0.033mg/kgおよび0.067mg/kgのコンジュゲート8ならびに0.067mg/kgのコンジュゲート12による処置では、50mm3未満の群平均腫瘍体積と、19日目までに大部分の腫瘍の退縮とをもたらすことによって最も顕著な効果が実証された。0.067mg/kgのコンジュゲート8による処置では、全腫瘍について退縮が示されたことから、試験最終日である109日目までの長期の腫瘍増殖阻害によって証明されるように、JIMT-1に対する最大の効果が示された。他の群ではいずれも、試験が進行するにつれて腫瘍再増殖が認められた。
実施例25:ラットにおける抗体-薬物コンジュゲートの毒性評価
抗体-薬物コンジュゲートの毒性をラット試験で評価した。雌のSprague-Dawleyラット（各群n＝5）の尾静脈に、ペイロードに基づいて0.17mg/kg、0.34mg/kgまたは0.51mg/kgの抗NaPi2b抗体-薬物コンジュゲート（コンジュゲート7またはコンジュゲート11）、もしくは抗HER2抗体-薬物コンジュゲート（コンジュゲート8またはコンジュゲート12）、またはビヒクルを投与した。投与の8日後、血液学的分析および毒物学的分析のために、各動物から血液を採取した。
図11～図18は、実施例18に記載される試験から計算された結果に基づいて、コンジュゲート7またはコンジュゲート11への曝露に応答した重要な毒性学的パラメータの上昇を示す。コンジュゲート7は、コンジュゲート11と比較して、重要な毒性学的パラメータAST、ALT、ALP、WBC、好中球、リンパ球、毒性学的パラメータRBCおよびヘモグロビンの低い曝露依存的上昇を示した。
図19～図21は、実施例18に記載される試験から計算された結果に基づいて、コンジュゲート8またはコンジュゲート12の曝露に応答した重要な毒性学的パラメータの上昇を示す。コンジュゲート8は、コンジュゲート12と比較して、重要な毒性学的パラメータAST、ALTおよびALPの低い曝露依存的上昇を示した。
均等物
本発明の1つまたは複数の態様の詳細は、上記の添付の説明に記載されている。本明細書において記載されるものと同様または同等の任意の方法および材料を本開示の実施または試験に使用することができるが、ここで方法および材料を説明する。本開示の他の特徴、目的および利点は、説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、複数の言及を含む。別段の定義がない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を一般に有する。本明細書において引用されるすべての特許および刊行物は、参照により組み入れられる。
前述の説明は、例示のみを目的として提示されており、開示された正確な形態に本発明を限定することを意図するものではなく、添付の特許請求の範囲によって限定することを意図している。

Claims (9)

  1. 以下の式の抗体－薬物コンジュゲート、またはその光学異性体:
    式中、
    はGlcNAcであり、
    はFucであり、
    はGalNAcであり、
    d13は2であり、
    抗体は、抗体の重鎖のアミノ酸290～305の領域内の1つまたは複数のアスパラギン残基でコンジュゲートの残部に接続されている。
  2. 抗体が、アミノ酸配列
    を含むCDRH1と、
    アミノ酸配列
    を含むCDRH2と、
    アミノ酸配列
    を含むCDRH3と、
    アミノ酸配列
    を含むCDRL1と、
    アミノ酸配列
    を含むCDRL2と、
    アミノ酸配列
    を含むCDRL3と
    を含むNaPi2b抗体である、請求項1記載のコンジュゲート。
  3. NaPi2b抗体が、SEQ ID NO:1の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:2の軽鎖アミノ酸配列とを含む、請求項2記載のコンジュゲート。
  4. 修飾抗体を、以下:
    であるか、またはその光学異性体である足場と反応させ、それにより部位特異的抗体－薬物コンジュゲートを形成する工程を含む、請求項1～3のいずれか一項記載のコンジュゲートを調製するための方法であって、
    修飾抗体は、
    (a) 抗体と抗体の重鎖のアミノ酸290-305の領域内のアスパラギン残基に接続されているコア-GlcNAc部分とを含む糖タンパク質を、エンドグリコシダーゼEndo SHと接触させ、それにより末端GlcNAc部分を含む中間抗体を形成する工程、および
    (b) β-（1,4）-GalNAcT酵素の存在下で中間抗体を4-AzGalNAc-UDPと接触させ、それにより修飾GlcNAc部分を含む修飾抗体を形成する工程
    によって得られ、
    工程(a)と工程(b)が同時に行われる、前記方法。
  5. 請求項1～3のいずれか一項記載のコンジュゲート、またはその光学異性体と、1つまたは複数の薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
  6. 対象の癌を治療するための、請求項5記載の薬学的組成物。
  7. 対象の癌を治療するための医薬品の製造における使用のための、請求項5記載の薬学的組成物。
  8. 癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、子宮内膜癌、乳頭状腎細胞癌、唾液管癌、乳頭様甲状腺癌、腎明細胞癌、乳癌、腎癌、子宮頸癌、および胆管癌から選択される、請求項6または7記載の薬学的組成物。
  9. 非小細胞肺癌が、腺癌としてサブタイプ分類される（sub-typed）、請求項8記載の薬学的組成物。
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