JP7842822B2 - 抗ｔｒｅｍ２抗体及びその使用方法 - Google Patents

抗ｔｒｅｍ２抗体及びその使用方法

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年２月２０日に出願された米国特許仮出願第６２／８０８，１４１号に対する優先権を主張し、その仮出願の開示は、その全体があらゆる目的で参照により本明細書に組み込まれる。
背景
骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）は、ミクログリアに発現する膜貫通受容体であり、食作用の調節、細胞の生存、及び炎症性サイトカインの産生において機能すると考えられている。ＴＲＥＭ２の突然変異は、アルツハイマー病、那須・ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、及び前頭側頭型認知症を含む神経変性疾患で同定されている。さらに、可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）のレベルの変化が、ＴＲＥＭ２に突然変異を有するアルツハイマー病患者または前頭側頭型認知症患者の脳脊髄液において報告されている。
ＴＲＥＭ２活性またはｓＴＲＥＭ２のレベルを調節する治療剤が依然として求められている。
概要
一態様では、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）ＧＦＳＩＥＤＦＹＩＨ（配列番号２９）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、
（ｂ）Ｗ－Ｉ－Ｄ－Ｐ－Ｅ－β６－Ｇ－β８－Ｓ－Ｋ－Ｙ－Ａ－Ｐ－Ｋ－Ｆ－Ｑ－Ｇ（配列番号４７）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、β６がＮまたはＱであり、かつβ８がＤまたはＥである、ＣＤＲ－Ｈ２配列、
（ｃ）ＨＡＤＨＧＮＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号３１）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、
（ｄ）ＨＡＳＱＨＩＮＶＷＬＳ（配列番号３２）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、
（ｅ）ＫＡＳＮＬＨＴ（配列番号３３）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び
（ｆ）ＱＱＧＱＴＹＰＲＴ（配列番号３４）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列
を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２配列は、配列番号３０、３９、４１、及び４３から選択される。
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、
（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｄ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む。
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号２７、３５、３７、３８、４０、４２、４４、４５、及び４６のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号２７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号２７を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４５を含む。
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号２８または３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号２８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号２８を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号３６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号３６を含む。
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、
（ａ）配列番号２７を含むＶＨ配列、及び配列番号２８を含むＶＬ配列、または
（ｂ）配列番号３５を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｃ）配列番号３７を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｄ）配列番号３８を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｅ）配列番号４０を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｆ）配列番号４２を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｇ）配列番号４４を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｈ）配列番号４５を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｉ）配列番号４６を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列
を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）Ｇ－Ｆ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－α６－Ｆ－Ｙ－Ｍ－Ｓ（配列番号４８）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列であって、α６がＤまたはＮである、ＣＤＲ－Ｈ１配列、
（ｂ）Ｖ－Ｉ－Ｒ－Ｎ－β５－β６－Ｎ－β８－Ｙ－Ｔ－β１１－β１２－Ｙ－Ｎ－Ｐ－Ｓ－Ｖ－Ｋ－Ｇ（配列番号４９）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、β５がＫまたはＲであり、β６がＡまたはＰであり、β８がＧまたはＡであり、β１１がＡまたはＴであり、かつβ１２がＧまたはＤである、ＣＤＲ－Ｈ２配列、
（ｃ）γ１－Ｒ－Ｌ－γ４－Ｙ－Ｇ－Ｆ－Ｄ－Ｙ（配列番号５０）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列であって、γ１がＡまたはＴであり、かつγ４がＴまたはＳである、ＣＤＲ－Ｈ３配列、
（ｄ）Ｑ－Ｓ－Ｓ－Ｋ－Ｓ－Ｌ－Ｌ－Ｈ－Ｓ－δ１０－Ｇ－Ｋ－Ｔ－Ｙ－Ｌ－Ｎ（配列番号５１）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列であって、δ１０がＮまたはＴである、ＣＤＲ－Ｌ１配列、
（ｅ）ＷＭＳＴＲＡＳ（配列番号８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び
（ｆ）Ｑ－Ｑ－Ｆ－Ｌ－Ｅ－φ６－Ｐ－Ｆ－Ｔ（配列番号５２）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列であって、φ６がＹまたはＦである、ＣＤＲ－Ｌ３配列
を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１配列は、配列番号４及び１２のいずれか１つから選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２配列は、配列番号５、１３、及び２５のいずれか１つから選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３配列は、配列番号６、１４、及び１７のいずれか１つから選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１配列は、配列番号７及び２３のいずれか１つから選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３配列は、配列番号９及び１８のいずれか１つから選択される。
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｇ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む。
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、２６、及び７９のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号１５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号１５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号１５を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号２４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号２４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号７９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号７９に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号７９を含む。
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号３、１１、１６、２０、２２、及び６８のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号１６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号１６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号１６を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号２２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号２２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号２２を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号６８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号６８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＬ配列は、配列番号６８を含む。
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、
（ａ）配列番号１５を含むＶＨ配列、及び配列番号１６を含むＶＬ配列、または
（ｂ）配列番号１９を含むＶＨ配列、及び配列番号２０を含むＶＬ配列、または
（ｃ）配列番号２１を含むＶＨ配列、及び配列番号２０を含むＶＬ配列、または
（ｄ）配列番号１９を含むＶＨ配列、及び配列番号２２を含むＶＬ配列、または
（ｅ）配列番号７９を含むＶＨ配列、及び配列番号２２を含むＶＬ配列、または
（ｆ）配列番号２４を含むＶＨ配列、及び配列番号２０を含むＶＬ配列、または
（ｇ）配列番号２６を含むＶＨ配列、及び配列番号２０を含むＶＬ配列、または
（ｈ）配列番号２４を含むＶＨ配列、及び配列番号２２を含むＶＬ配列、または
（ｉ）配列番号２６を含むＶＨ配列、及び配列番号２２を含むＶＬ配列、または
（ｊ）配列番号２を含むＶＨ配列、及び配列番号３を含むＶＬ配列、または
（ｋ）配列番号１０を含むＶＨ配列、及び配列番号１１を含むＶＬ配列、または
（ｌ）配列番号２４を含むＶＨ配列、及び配列番号６８を含むＶＬ配列
を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）配列番号４、１２、及び２９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、
（ｂ）配列番号５、１３、２５、３０、３９、４１、及び４３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、
（ｃ）配列番号６、１４、１７、及び３１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、
（ｄ）配列番号７、２３、及び３２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、
（ｅ）配列番号８及び３３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、ならびに
（ｆ）配列番号９、１８、及び３４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列
を含む。
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、
（ｇ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｈ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｊ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｋ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む。
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、２６、２７、３５、３７、３８、４０、４２、４４、４５、４６、及び７９のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号３、１１、１６、２０、２２、２８、３６、及び６８のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、
（ａ）配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｂ）配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｃ）配列番号１５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｄ）配列番号１９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｅ）配列番号２１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｆ）配列番号１９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｇ）配列番号７９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｈ）配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｉ）配列番号２６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｊ）配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｋ）配列番号２６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｌ）配列番号２７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｍ）配列番号３５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｎ）配列番号３７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｏ）配列番号３８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｐ）配列番号４０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｑ）配列番号４２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｒ）配列番号４４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｓ）配列番号４５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｔ）配列番号４６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｕ）配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列
を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、クローンＣＬ００２０３０６、クローンＣＬ００２０１８８、クローンＣＬ００２０１８８－１、クローンＣＬ００２０１８８－２、クローンＣＬ００２０１８８－３、クローンＣＬ００２０１８８－４、クローンＣＬ００２０１８８－５、クローンＣＬ００２０１８８－６、クローンＣＬ００２０１８８－７、クローンＣＬ００２０１８８－８、クローンＣＬ００２０３０７、クローンＣＬ００２０１２３、クローンＣＬ００２０１２３－１、クローンＣＬ００２０１２３－２、クローンＣＬ００２０１２３－３、クローンＣＬ００２０１２３－４、クローンＣＬ００２０１２３－５、クローンＣＬ００２０１２３－６、クローンＣＬ００２０１２３－７、及びクローンＣＬ００２０１２３－８からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じエピトープを認識する。
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、クローンＣＬ００２０１２３、クローンＣＬ００２０１２３－１、クローンＣＬ００２０１２３－２、クローンＣＬ００２０１２３－３、クローンＣＬ００２０１２３－４、クローンＣＬ００２０１２３－５、クローンＣＬ００２０１２３－６、クローンＣＬ００２０１２３－７、及びクローンＣＬ００２０１２３－８からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じエピトープを認識する。特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号１における以下のエピトープ：（ｉ）アミノ酸残基５５～６３（ＧＥＫＧＰＣＱＲＶ（配列番号７０））、（ｉｉ）アミノ酸９６～１０７（ＴＬＲＮＬＱＰＨＤＡＧＬ（配列番号７１））、及び（ｉｉｉ）アミノ酸残基１２６～１２９（ＶＥＶＬ（配列番号７２））のうちの１つ以上を認識する。別の態様では、本開示は、ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片を特徴とし、この抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１における以下のエピトープ：（ｉ）アミノ酸残基５５～６３（ＧＥＫＧＰＣＱＲＶ（配列番号７０））、（ｉｉ）アミノ酸９６～１０７（ＴＬＲＮＬＱＰＨＤＡＧＬ（配列番号７１））、及び（ｉｉｉ）アミノ酸残基１２６～１２９（ＶＥＶＬ（配列番号７２））のうちの１つ以上を含むかまたはそれらからなるエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、クローンＣＬ００２０１８８、クローンＣＬ００２０１８８－１、クローンＣＬ００２０１８８－２、クローンＣＬ００２０１８８－３、クローンＣＬ００２０１８８－４、クローンＣＬ００２０１８８－５、クローンＣＬ００２０１８８－６、クローンＣＬ００２０１８８－７、クローンＣＬ００２０１８８－８、クローンＣＬ００２０３０７、及びクローンＣＬ００２０３０６からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じエピトープを認識する。特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号１におけるアミノ酸残基１４３～１４９（ＦＰＧＥＳＥＳ（配列番号６９））を認識する。別の態様では、本開示は、ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片を特徴とし、この抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１におけるアミノ酸残基１４３～１４９（ＦＰＧＥＳＥＳ（配列番号６９））を含むかまたはそれからなるエピトープを認識する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗原結合断片は、可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質（ｓＴＲＥＭ２）のレベルを減少させる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗原結合断片は、参照抗体と比較して良好な効力で健常ヒトＣＳＦまたはカニクイザルＣＳＦ中の可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質（ｓＴＲＥＭ２）に結合する。いくつかの実施形態では、参照抗体は、配列番号７３及び７４、配列番号７５及び７６、ならびに配列番号７７及び７８からなる群から選択される配列の組み合わせによって表される。いくつかの実施形態では、効力アッセイは、実質的に実施例１１に記載されているように行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗原結合断片は、ＴＲＥＭ２活性を増強する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、食作用を増強するか、または骨髄細胞、ミクログリア、もしくはマクロファージの遊走、分化、機能、もしくは生存を増強する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、神経炎症を増大させずにミクログリア機能を増強する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｓｙｋリン酸化を増強する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＴＲＥＭ２リガンドの存在下でＳｙｋリン酸化を増強する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、カニクイザルＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗原結合断片は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗原結合断片は、キメラ抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗原結合断片は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗原結合断片は、完全ヒト抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、または二価ｓｃＦｖである。
別の態様では、本開示は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質への結合について、本明細書に開示される単離された抗ＴＲＥＭ２抗体と競合する、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
別の態様では、本開示は、ＴＲＥＭ２に特異的に結合する本明細書に開示される抗体または抗原結合断片と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。
さらに別の態様では、本開示は、ＴＲＥＭ２に特異的に結合する本明細書に開示される抗体もしくは抗原結合断片または抗ＴＲＥＭ２抗体もしくは抗原結合断片を含む医薬組成物と、その使用説明書とを含むキットを提供する。
なお別の態様では、本開示は、対象における神経変性疾患を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体もしくは抗原結合断片または本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体もしくは抗原結合断片を含む医薬組成物を、対象に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、アルツハイマー病、原発性年齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアム筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症複合（ＡＬＳ－ＰＤＣ）、大脳皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ ｐｕｇｉｌｉｓｔｉｃａ）、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、球状グリア性タウオパチー、認知症を伴うグアドループ型パーキンソニズム、グアドループ型ＰＳＰ、ハラーフォルデン・シュパッツ病、スフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋強直性ジストロフィー、那須・ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球橋黒質変性症（ｐａｌｌｉｄｏ－ｐｏｎｔｏ－ｎｉｇｒａｌ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維型老年認知症（ｔａｎｇｌｅ ｏｎｌｙ ｄｅｍｅｎｔｉａ）からなる群から選択される。
さらに別の態様では、本開示は、神経変性疾患を有する対象においてｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体もしくは抗原結合断片または本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体もしくは抗原結合断片を含む医薬組成物を、対象に投与することを含む。
なお別の態様では、本開示は、神経変性疾患を有する対象においてＴＲＥＭ２活性を増強する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体もしくは抗原結合断片または本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体もしくは抗原結合断片を含む医薬組成物を、対象に投与することを含む。
[本発明１００１]
ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、
（ａ）Ｇ－Ｆ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－α６－Ｆ－Ｙ－Ｍ－Ｓ（配列番号４８）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列であって、α６がＤまたはＮである、前記ＣＤＲ－Ｈ１配列、
（ｂ）Ｖ－Ｉ－Ｒ－Ｎ－β５－β６－Ｎ－β８－Ｙ－Ｔ－β１１－β１２－Ｙ－Ｎ－Ｐ－Ｓ－Ｖ－Ｋ－Ｇ（配列番号４９）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、β５がＫまたはＲであり、β６がＡまたはＰであり、β８がＧまたはＡであり、β１１がＡまたはＴであり、かつβ１２がＧまたはＤである、前記ＣＤＲ－Ｈ２配列、
（ｃ）γ１－Ｒ－Ｌ－γ４－Ｙ－Ｇ－Ｆ－Ｄ－Ｙ（配列番号５０）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列であって、γ１がＡまたはＴであり、かつγ４がＴまたはＳである、前記ＣＤＲ－Ｈ３配列、
（ｄ）Ｑ－Ｓ－Ｓ－Ｋ－Ｓ－Ｌ－Ｌ－Ｈ－Ｓ－δ１０－Ｇ－Ｋ－Ｔ－Ｙ－Ｌ－Ｎ（配列番号５１）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列であって、δ１０がＮまたはＴである、前記ＣＤＲ－Ｌ１配列、
（ｅ）ＷＭＳＴＲＡＳ（配列番号８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び
（ｆ）Ｑ－Ｑ－Ｆ－Ｌ－Ｅ－φ６－Ｐ－Ｆ－Ｔ（配列番号５２）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列であって、φ６がＹまたはＦである、前記ＣＤＲ－Ｌ３配列
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１００２]
前記ＣＤＲ－Ｈ１配列が、配列番号４及び１２のいずれか１つから選択される、本発明１００１の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１００３]
前記ＣＤＲ－Ｈ２配列が、配列番号５、１３、及び２５のいずれか１つから選択される、本発明１００１または１００２の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１００４]
前記ＣＤＲ－Ｈ３配列が、配列番号６、１４、及び１７のいずれか１つから選択される、本発明１００１～１００３のいずれかの単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１００５]
前記ＣＤＲ－Ｌ１配列が、配列番号７及び２３のいずれか１つから選択される、本発明１００１～１００４のいずれかの単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１００６]
前記ＣＤＲ－Ｌ３配列が、配列番号９及び１８のいずれか１つから選択される、本発明１００１～１００５のいずれかの単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１００７]
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｇ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、本発明１００１～１００６のいずれかの単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１００８]
配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、２６、及び７９のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む、本発明１００１～１００７のいずれかの単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１００９]
前記ＶＨ配列が、配列番号１５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本発明１００８の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０１０]
前記ＶＨ配列が、配列番号１５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、本発明１００９の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０１１]
前記ＶＨ配列が配列番号１５を含む、本発明１０１０の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０１２]
前記ＶＨ配列が、配列番号２４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本発明１００８の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０１３]
前記ＶＨ配列が、配列番号２４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、本発明１０１２の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０１４]
前記ＶＨ配列が配列番号２４を含む、本発明１０１３の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０１５]
前記ＶＨ配列が、配列番号７９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本発明１００８の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０１６]
前記ＶＨ配列が、配列番号７９に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、本発明１０１５の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０１７]
前記ＶＨ配列が配列番号７９を含む、本発明１０１６の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０１８]
配列番号３、１１、１６、２０、２２、及び６８のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む、本発明１００１～１０１７のいずれかの単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０１９]
前記ＶＬ配列が、配列番号１６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本発明１０１８の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０２０]
前記ＶＬ配列が、配列番号１６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、本発明１０１９の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０２１]
前記ＶＬ配列が配列番号１６を含む、本発明１０２０の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０２２]
前記ＶＬ配列が、配列番号２２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本発明１０１８の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０２３]
前記ＶＬ配列が、配列番号２２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、本発明１０２２の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０２４]
前記ＶＬ配列が配列番号２２を含む、本発明１０２３の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０２５]
前記ＶＬ配列が、配列番号６８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本発明１０１８の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０２６]
前記ＶＬ配列が、配列番号６８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、本発明１０２５の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０２７]
前記ＶＬ配列が配列番号６８を含む、本発明１０２６の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０２８]
（ａ）配列番号１５を含むＶＨ配列、及び配列番号１６を含むＶＬ配列、または
（ｂ）配列番号１９を含むＶＨ配列、及び配列番号２０を含むＶＬ配列、または
（ｃ）配列番号２１を含むＶＨ配列、及び配列番号２０を含むＶＬ配列、または
（ｄ）配列番号１９を含むＶＨ配列、及び配列番号２２を含むＶＬ配列、または
（ｅ）配列番号７９を含むＶＨ配列、及び配列番号２２を含むＶＬ配列、または
（ｆ）配列番号２４を含むＶＨ配列、及び配列番号２０を含むＶＬ配列、または
（ｇ）配列番号２６を含むＶＨ配列、及び配列番号２０を含むＶＬ配列、または
（ｈ）配列番号２４を含むＶＨ配列、及び配列番号２２を含むＶＬ配列、または
（ｉ）配列番号２６を含むＶＨ配列、及び配列番号２２を含むＶＬ配列、または
（ｊ）配列番号２を含むＶＨ配列、及び配列番号３を含むＶＬ配列、または
（ｋ）配列番号１０を含むＶＨ配列、及び配列番号１１を含むＶＬ配列、または
（ｌ）配列番号２４を含むＶＨ配列、及び配列番号６８を含むＶＬ配列
を含む、本発明１００１～１０２７のいずれかの単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０２９]
ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、
（ａ）ＧＦＳＩＥＤＦＹＩＨ（配列番号２９）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、
（ｂ）Ｗ－Ｉ－Ｄ－Ｐ－Ｅ－β６－Ｇ－β８－Ｓ－Ｋ－Ｙ－Ａ－Ｐ－Ｋ－Ｆ－Ｑ－Ｇ（配列番号４７）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、β６がＮまたはＱであり、かつβ８がＤまたはＥである、前記ＣＤＲ－Ｈ２配列、
（ｃ）ＨＡＤＨＧＮＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号３１）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、
（ｄ）ＨＡＳＱＨＩＮＶＷＬＳ（配列番号３２）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、
（ｅ）ＫＡＳＮＬＨＴ（配列番号３３）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び
（ｆ）ＱＱＧＱＴＹＰＲＴ（配列番号３４）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０３０]
前記ＣＤＲ－Ｈ２配列が、配列番号３０、３９、４１、及び４３から選択される、本発明１０２９の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０３１]
（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｄ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、本発明１０２９または１０３０の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０３２]
配列番号２７、３５、３７、３８、４０、４２、４４、４５、及び４６のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む、本発明１０２９～１０３１のいずれかの単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０３３]
前記ＶＨ配列が、配列番号２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本発明１０３２の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０３４]
前記ＶＨ配列が、配列番号２７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、本発明１０３３の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０３５]
前記ＶＨ配列が配列番号２７を含む、本発明１０３４の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０３６]
配列番号２８または３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む、本発明１０２９～１０３５のいずれかの単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０３７]
前記ＶＬ配列が、配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本発明１０３６の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０３８]
前記ＶＬ配列が、配列番号２８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、本発明１０３７の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０３９]
前記ＶＬ配列が配列番号２８を含む、本発明１０３８の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０４０]
（ａ）配列番号２７を含むＶＨ配列、及び配列番号２８を含むＶＬ配列、または
（ｂ）配列番号３５を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｃ）配列番号３７を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｄ）配列番号３８を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｅ）配列番号４０を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｆ）配列番号４２を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｇ）配列番号４４を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｈ）配列番号４５を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
（ｉ）配列番号４６を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列
を含む、本発明１０３６の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０４１]
ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、
（ａ）配列番号４、１２、及び２９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、
（ｂ）配列番号５、１３、２５、３０、３９、４１、及び４３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、
（ｃ）配列番号６、１４、１７、及び３１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、
（ｄ）配列番号７、２３、及び３２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、
（ｅ）配列番号８及び３３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、ならびに
（ｆ）配列番号９、１８、及び３４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０４２]
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｇ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｈ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｊ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｋ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、本発明１０４１の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０４３]
配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、２６、２７、３５、３７、３８、４０、４２、４４、４５、４６、及び７９のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む、本発明１０４１または１０４２の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０４４]
配列番号３、１１、１６、２０、２２、２８、及び３６のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、本発明１０４１～１０４３のいずれかの単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０４５]
（ａ）配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｂ）配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｃ）配列番号１５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｄ）配列番号１９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｅ）配列番号２１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｆ）配列番号１９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｇ）配列番号７９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｈ）配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｉ）配列番号２６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｊ）配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｋ）配列番号２６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｌ）配列番号２７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｍ）配列番号３５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｎ）配列番号３７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｏ）配列番号３８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｐ）配列番号４０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｑ）配列番号４２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｒ）配列番号４４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｓ）配列番号４５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｔ）配列番号４６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｕ）配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列
を含む、本発明１０４１～１０４４のいずれかの単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０４６]
ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、クローンＣＬ００２０３０６、クローンＣＬ００２０１８８、クローンＣＬ００２０１８８－１、クローンＣＬ００２０１８８－２、クローンＣＬ００２０１８８－３、クローンＣＬ００２０１８８－４、クローンＣＬ００２０１８８－５、クローンＣＬ００２０１８８－６、クローンＣＬ００２０１８８－７、クローンＣＬ００２０１８８－８、クローンＣＬ００２０３０７、クローンＣＬ００２０１２３、クローンＣＬ００２０１２３－１、クローンＣＬ００２０１２３－２、クローンＣＬ００２０１２３－３、クローンＣＬ００２０１２３－４、クローンＣＬ００２０１２３－５、クローンＣＬ００２０１２３－６、クローンＣＬ００２０１２３－７、及びクローンＣＬ００２０１２３－８からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じエピトープを認識する、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０４７]
クローンＣＬ００２０１２３、クローンＣＬ００２０１２３－１、クローンＣＬ００２０１２３－２、クローンＣＬ００２０１２３－３、クローンＣＬ００２０１２３－４、クローンＣＬ００２０１２３－５、クローンＣＬ００２０１２３－６、クローンＣＬ００２０１２３－７、及びクローンＣＬ００２０１２３－８からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じエピトープを認識する、本発明１０４６の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０４８]
配列番号１における
（ｉ）アミノ酸残基５５～６３（ＧＥＫＧＰＣＱＲＶ（配列番号７０））、
（ｉｉ）アミノ酸９６～１０７（ＴＬＲＮＬＱＰＨＤＡＧＬ（配列番号７１））、及び
（ｉｉｉ）アミノ酸残基１２６～１２９（ＶＥＶＬ（配列番号７２））
のうちの１つ以上を認識する、本発明１０４７の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０４９]
クローンＣＬ００２０１８８、クローンＣＬ００２０１８８－１、クローンＣＬ００２０１８８－２、クローンＣＬ００２０１８８－３、クローンＣＬ００２０１８８－４、クローンＣＬ００２０１８８－５、クローンＣＬ００２０１８８－６、クローンＣＬ００２０１８８－７、クローンＣＬ００２０１８８－８、クローンＣＬ００２０３０７、及びクローンＣＬ００２０３０６からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じエピトープを認識する、本発明１０４６の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０５０]
配列番号１におけるアミノ酸残基１４３～１４９（ＦＰＧＥＳＥＳ（配列番号６９））を認識する、本発明１０４９の単離された抗体または抗原結合断片。
[本発明１０５１]
ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号１における
（ｉ）アミノ酸残基５５～６３（ＧＥＫＧＰＣＱＲＶ（配列番号７０））、
（ｉｉ）アミノ酸９６～１０７（ＴＬＲＮＬＱＰＨＤＡＧＬ（配列番号７１））、及び
（ｉｉｉ）アミノ酸残基１２６～１２９（ＶＥＶＬ（配列番号７２））
のうちの１つ以上を含むかまたはそれらからなるエピトープを認識する、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０５２]
ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号１におけるアミノ酸残基１４３～１４９（ＦＰＧＥＳＥＳ（配列番号６９））を含むかまたはそれからなるエピトープを認識する、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０５３]
可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質（ｓＴＲＥＭ２）のレベルを減少させる、本発明１００１～１０５２のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０５４]
ＴＲＥＭ２活性を増強する、本発明１００１～１０５３のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０５５]
食作用を増強するか、または骨髄細胞、ミクログリア、もしくはマクロファージの遊走、分化、機能、もしくは生存を増強する、本発明１０５４の単離された抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０５６]
神経炎症を増大させずにミクログリア機能を増強する、本発明１０５５の単離された抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０５７]
Ｓｙｋリン酸化を増強する、本発明１０５４の単離された抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０５８]
ＴＲＥＭ２リガンドの存在下でＳｙｋリン酸化を増強する、本発明１０５７の単離された抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０５９]
カニクイザルＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す、本発明１００１～１０５８のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０６０]
前記抗体がモノクローナル抗体である、本発明１００１～１０５９のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０６１]
前記抗体がキメラ抗体である、本発明１００１～１０５９のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０６２]
前記抗体がヒト化抗体である、本発明１００１～１０５９のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０６３]
前記抗体が完全ヒト抗体である、本発明１００１～１０５９のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０６４]
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、または二価ｓｃＦｖである、本発明１００１～１０５９のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０６５]
本発明１００１～１０６４のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合断片と、
薬学的に許容可能な担体と
を含む、医薬組成物。
[本発明１０６６]
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質への結合について、本発明１００１～１０６４のいずれかの単離された抗体と競合する、抗体またはその抗原結合断片。
[本発明１０６７]
本発明１００１～１０６４のいずれかの単離された抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明１０６５の医薬組成物と、
その使用説明書と
を含む、キット。
[本発明１０６８]
対象における神経変性疾患を処置する方法であって、本発明１００１～１０６４のいずれかの単離された抗体もしくはその抗原結合断片または本発明１０６５の医薬組成物を、前記対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明１０６９]
前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、原発性年齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアム筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症複合（ＡＬＳ－ＰＤＣ）、大脳皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ ｐｕｇｉｌｉｓｔｉｃａ）、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、球状グリア性タウオパチー、認知症を伴うグアドループ型パーキンソニズム、グアドループ型ＰＳＰ、ハラーフォルデン・シュパッツ病、スフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋強直性ジストロフィー、那須・ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球橋黒質変性症（ｐａｌｌｉｄｏ－ｐｏｎｔｏ－ｎｉｇｒａｌ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維型老年認知症（ｔａｎｇｌｅ ｏｎｌｙ ｄｅｍｅｎｔｉａ）からなる群から選択される、本発明１０６８の方法。
[本発明１０７０]
神経変性疾患を有する対象においてｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる方法であって、本発明１００１～１０６４のいずれかの単離された抗体もしくはその抗原結合断片または本発明１０６５の医薬組成物を、前記対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明１０７１]
神経変性疾患を有する対象においてＴＲＥＭ２活性を増強する方法であって、本発明１００１～１０６４のいずれかの単離された抗体もしくはその抗原結合断片または本発明１０６５の医薬組成物を、前記対象に投与することを含む、前記方法。
ＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ細胞上の表面ＴＲＥＭ２への例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体の結合を表す、代表的なフローサイトメトリーヒストグラムを含む。 初代ヒトマクロファージ細胞における、例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体によるｐＳｙｋシグナル活性化の代表的な用量反応曲線を含む。塗りつぶした黒丸（●）は、抗ＴＲＥＭ２抗体を表し、白丸（○）はアイソタイプ対照を表す。 例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体により５分間前処理し、続いて脂質小胞を投与して細胞中のリポソーム反応を評価した後の、ヒトｉＰＳＣミクログリア細胞におけるｐＳｙｋシグナル活性化の代表的な用量反応曲線を含む。 例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体により２４時間前処理し、続いて脂質小胞を投与して細胞中のリポソーム反応を評価した後の、ヒトｉＰＳＣミクログリア細胞におけるｐＳｙｋシグナル活性化の代表的な用量反応曲線を含む。 例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体による刺激に応答した、ヒトＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２を発現するＪｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ細胞におけるＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター活性の代表的な用量反応曲線を含む。塗りつぶした黒丸（●）は、抗ＴＲＥＭ２抗体を表し、白丸（○）はアイソタイプ対照を表す。 例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体による処理に応答したヒトマクロファージ細胞における細胞生存の代表的な用量反応曲線を示す。 例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体の抗ＴＲＥＭ２抗体濃度の関数としての、代表的な可溶性ＴＲＥＭ２レベル（ｓＴＲＥＭ２）を示す。 例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したヒトマクロファージにおける細胞あたりの平均ｐＨｒｏｄｏ蛍光強度を示す棒グラフである。 ミエリンで処理し、続いて例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体またはアイソタイプ対照とともにインキュベートした、ｉＰＳＣミクログリアにおける脂質蓄積の代表的な顕微鏡画像である。 図８ＡでイメージングしたｉＰＳＣミクログリアのＮｉｌｅ Ｒｅｄ染色（脂質蓄積を示す）の代表的な棒グラフである。 ミエリンで処理し、続いて例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体とともにインキュベートした、ｉＰＳＣミクログリアにおけるコレステリルエステル種の定量化レベルを示す棒グラフを含む。 ミエリンで処理し、続いて例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体とともにインキュベートした、ｉＰＳＣミクログリアにおけるトリアシルグリセリド脂質種の定量化レベルを示す棒グラフを含む。 ミエリンで処理し、続いて例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体とともにインキュベートした、ｉＰＳＣミクログリアにおけるコレステリルエステル種の定量化レベルを示す棒グラフを含む。例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体とのインキュベーションの前にミエリンウォッシュアウトステップが含まれるｉＰＳＣミクログリアについてのデータを表す。 ミエリンで処理し、続いて例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体とともにインキュベートした、ｉＰＳＣミクログリアにおけるトリアシルグリセリド脂質種の定量化レベルを示す棒グラフを含む。例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体とのインキュベーションの前にミエリンウォッシュアウトステップが含まれるｉＰＳＣミクログリアについてのデータを表す。 例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体の例示的なマウス血漿薬物動態プロファイルを含む。 ＴＲＥＭ２ ｃＤＮＡ ＫＩ（ｈｕＴｒｅｍ２ＫＩ／ＫＩ）マウスに注入した例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体に関する、マウス血漿中の総可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）の変化を示す棒グラフを含む。 ＴＲＥＭ２ ｃＤＮＡ ＫＩ（ｈｕＴｒｅｍ２ＫＩ／ＫＩ）マウスに注入した例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体に関する、マウス血漿中の抗体に結合したＴＲＥＭ２の変化を示す棒グラフを含む。 ヒト化し配列最適化した例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体の、ＨＥＫ細胞中のヒトＴＲＥＭ２に対する用量反応結合曲線を含む。 ヒト化し配列最適化した例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体の、ＨＥＫ細胞中のヒトＴＲＥＭ２に対する用量反応結合曲線を含む。 ヒト化し配列最適化した例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体による、ＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞におけるｐＳｙｋシグナル活性化の用量反応曲線を含む。 ヒト化し配列最適化した例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体による、ＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞におけるｐＳｙｋシグナル活性化の用量反応曲線を含む。 ヒト化し配列最適化した例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体による処理に応答した、ヒトマクロファージ細胞における細胞生存の用量反応曲線を示す。 ヒト化し配列最適化した例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体による処理に応答した、ｉＰＳＣミクログリアにおける脂質クリアランスの用量反応曲線を含む。 ヒト化し配列最適化した例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体による処理に応答した、ｉＰＳＣミクログリアにおける脂質クリアランスの用量反応曲線を含む。
詳細な説明
Ｉ．緒言
ＴＲＥＭ２は、ミクログリア、樹状細胞、マクロファージ、及び破骨細胞の細胞表面に発現する膜貫通受容体である。特定の理論に束縛されるものではないが、リガンド結合後、ＴＲＥＭ２は膜貫通アダプタータンパク質であるＤＮＡＸ活性化タンパク質１２（ＤＡＰ１２）とシグナル伝達複合体を形成し、次に、プロテインキナーゼＳＲＣによってチロシンリン酸化されると考えられている。活性化ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体は、Ｓｙｋキナーゼなどのキナーゼを動員しリン酸化することにより、細胞内シグナル伝達を媒介すると考えられている。ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達は、食作用、細胞の増殖及び生存、炎症性サイトカイン分泌などの活性、ならびにミクログリア及びマクロファージなどの細胞の遊走を調節する。ＴＲＥＭ２は調節された膜内タンパク質分解を受け、膜結合性完全長ＴＲＥＭ２が、メタロプロテアーゼＡＤＡＭ１０によって、細胞からシェディングされるｓＴＲＥＭ２部分と、ガンマセクレターゼによってさらに分解される膜に保持されたＣ末端断片とに切断される。ｓＴＲＥＭ２のレベルの変化が、アルツハイマー病または前頭側頭型認知症を有し、かつＴＲＥＭ２に突然変異を有する患者において報告されている。さらに、ＴＲＥＭ２の突然変異は、食作用の障害及びミクログリア機能の低減などの機能の変化に関連する。
以下の実施例セクションに詳述するように、ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合し、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体の１つ以上の下流の機能を調節する抗体を作製した。したがって、一態様では、本開示は、抗ＴＲＥＭ２抗体及びその抗原結合断片を提供する。したがって、一態様では、本開示は、抗ＴＲＥＭ２抗体及びその抗原結合部分を提供する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２活性を増強する（例えば、食作用を増強するか、または骨髄細胞、ミクログリア、もしくはマクロファージの分化、機能、遊走、もしくは生存を増強する）。したがって、別の態様では、ＴＲＥＭ２活性を、例えば、神経変性疾患を有する対象において増強する方法が提供される。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のシェディングを低減させる。したがって、別の態様では、ｓＴＲＥＭ２のレベルを、例えば、神経変性疾患を有する対象において減少させる方法が提供される。
ＩＩ．定義
本明細書で使用する場合、文脈上明らかに別段に示されている場合を除き、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」という単数形には、複数の指示対象が含まれる。したがって、例えば、「抗体」への言及は、２つ以上のそのような分子などの組み合わせを任意選択的に含む。
本明細書で使用する場合、「約」及び「およそ」という用語は、数値または範囲で指定された量を修正するために使用される場合、その数値及び当業者に公知の値からの妥当な偏差、例えば、±２０％、±１０％または±５％が、記載された値の意図する意味の範囲内であることを示す。
本明細書で使用する場合、「ＴＲＥＭ２タンパク質」という用語は、遺伝子ＴＲＥＭ２によってコードされる骨髄細胞発現トリガー受容体２タンパク質を指す。本明細書で使用する場合、「ＴＲＥＭ２タンパク質」は、任意の脊椎動物、例えば、限定されるものではないが、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）、及び他の哺乳動物の天然の（すなわち、野生型）ＴＲＥＭ２タンパク質を指す。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、ＵｎｉｐｒｏｔＫＢアクセッション番号Ｑ９ＮＺＣ２（配列番号１）に同定される配列を有するヒトＴＲＥＭ２タンパク質である。
本明細書で使用する場合、「抗ＴＲＥＭ２抗体」という用語は、ＴＲＥＭ２タンパク質（例えば、ヒトＴＲＥＭ２）に特異的に結合する抗体を指す。
本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリンフォールドを有するタンパク質であって、その可変領域を介して抗原と特異的に結合する、タンパク質を指す。この用語は、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、一本鎖抗体、二重特異性抗体などの多重特異性抗体、単一特異性抗体、一価抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、及びヒト抗体を包含する。「抗体」という用語はまた、本明細書で使用する場合、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び二価ｓｃＦｖを含むがこれらに限定されない抗体断片であって、その可変領域を介して結合特異性を保持する、抗体断片も含む。抗体は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される軽鎖を含有し得る。抗体は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類される重鎖を含有し得、これらは順に、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥという免疫グロブリンクラスをそれぞれ定義する。
例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。各四量体は、各対が１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）及び１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤ）を有する、２つの同一の対のポリペプチド鎖から構成される。各鎖のＮ末端は、抗原認識を主に担う約１００～１１０個以上のアミノ酸の可変領域を規定する。「可変軽鎖」（ＶＬ）及び「可変重鎖」（ＶＨ）という用語は、これらの軽鎖及び重鎖のそれぞれを指す。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、生殖系列可変（Ｖ）遺伝子、多様性（Ｄ）遺伝子、または結合（Ｊ）遺伝子に由来し（かつ定常（Ｃμ及びＣδ）遺伝子セグメントには由来せず）抗体に抗原と結合する特異性を与える、抗体重鎖または軽鎖中のドメインを指す。通常、抗体可変領域は、３つの超可変「相補性決定領域」が散在する４つの保存された「フレームワーク」領域を含む。
「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域によって構築された４つのフレームワーク領域に割り込む、各鎖中の３つの超可変領域を指す。ＣＤＲは、抗原のエピトープへの抗体結合を主として担っている。各鎖のＣＤＲは、通常、Ｎ末端から順番に付番してＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と称され、通常、特定のＣＤＲが位置する鎖によっても識別される。したがって、ＶＨＣＤＲ３またはＣＤＲ－Ｈ３は、それが見出される抗体重鎖の可変領域に位置し、一方、ＶＬＣＤＲ１またはＣＤＲ－Ｌ１は、それが見出される抗体軽鎖の可変領域に由来するＣＤＲ１である。
異なる軽鎖または重鎖の「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、種内で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域、すなわち構成要素である軽鎖及び重鎖のフレームワーク領域を組み合わせたものは、ＣＤＲを３次元空間に配置し整列させるように機能する。フレームワーク配列は、生殖系列抗体の遺伝子配列を含む公共のＤＮＡデータベースまたは公開されている参照文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、ヒト及びマウス配列に関する「ＶＢＡＳＥ２」生殖系列可変遺伝子配列データベースに見出すことができる。
ＣＤＲ及びフレームワーク領域のアミノ酸配列は、当該技術分野における様々な周知の定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）、ＡｂＭ、及び観察された抗原接触（「Ｃｏｎｔａｃｔ」）を使用して決定され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔ定義に従って決定される。ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２－７４５（１９９６）を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及び／またはＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ定義の組み合わせにより決定される。
「抗原結合部分」及び「抗原結合断片」という用語は、本明細書において互換的に使用され、その可変領域を介して抗原（例えば、ＴＲＥＭ２タンパク質）に特異的に結合する能力を保持した１つ以上の抗体の断片を指す。抗原結合断片の例としては、Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片）、Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片から構成される二価断片）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）、ＶＬ（軽鎖可変領域）、ならびにＶＨ（重鎖可変領域）が挙げられるが、これらに限定されない。
「エピトープ」という用語は、抗体のＣＤＲが特異的に結合する抗原の区域または領域を指し、数個のアミノ酸または数個のアミノ酸の一部、例えば、５個または６個以上、例えば、２０個以上のアミノ酸、またはそれらのアミノ酸の一部を含み得る。例えば、標的がタンパク質である場合、エピトープは、連続したアミノ酸（例えば、線状エピトープ）、またはタンパク質フォールディングによって近接するタンパク質の異なる部分からのアミノ酸（例えば、不連続エピトープもしくは立体構造的エピトープ）で構成され得る。いくつかの実施形態では、エピトープは、１つのアミノ酸において（例えば、セリンまたはスレオニン残基において）リン酸化される。
本明細書で使用する場合、「エピトープを認識する」という語句は、抗ＴＲＥＭ２抗体に関して使用する場合、抗体ＣＤＲが、抗原（すなわち、ＴＲＥＭ２タンパク質）と、そのエピトープにおいて、またはそのエピトープを含有する抗原の部分において相互作用するか、またはそれに特異的に結合することを意味する。
本明細書で使用する場合、「多重特異性抗体」という用語は、２つ以上の異なる抗原結合部分を含む抗体を指し、各抗原結合部分は、異なる抗原を認識する異なる可変領域、またはその可変領域を介して２つ以上の異なる抗原に結合する抗体の断片もしくは部分を含む。本明細書で使用する場合、「二重特異性抗体」という用語は、２つの異なる抗原結合部分を含む抗体を指し、各抗原結合部分は、異なる抗原を認識する異なる可変領域、またはその可変領域を介して２つの異なる抗原に結合する抗体の断片もしくは部分を含む。
「モノクローナル抗体」は、細胞の単一クローンまたは単一細胞株より産生され、それらの一次アミノ酸配列と同一の抗体分子からなるか、またはそれから本質的になる抗体を指す。
「ポリクローナル抗体」は、集団中の異なる抗体が抗原の異なるエピトープに結合する、不均一な抗体集団から得られた抗体を指す。
「キメラ抗体」は、定常領域またはその一部が、変化されているか、置換されているか、または交換されており、その結果、抗原結合部位（すなわち、可変領域、ＣＤＲ、またはその一部）が異なるまたは変化されたクラス、エフェクター機能、及び／または種の定常領域に連結しているか、あるいは可変領域またはその一部が、異なるまたは変化された抗原特異性（例えば、異なる種に由来するＣＤＲ及びフレームワーク領域）を有する可変領域によって変化されているか、置換されているか、または交換されている抗体分子を指す。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、ある供給源または種（例えば、マウス）に由来する可変領域と、別の供給源または種（例えば、ヒト）に由来する定常領域とを含むモノクローナル抗体である。キメラ抗体を作製する方法は、当該技術分野において説明されている。
「ヒト化抗体」は、ＣＤＲ外の非ヒト免疫グロブリンに由来する最低限の配列を含有する非ヒト供給源（例えば、マウス）に由来するキメラ免疫グロブリンである。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ（例えば、２つ）の抗原結合可変ドメイン（複数可）を含み、ＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に実質的に対応し、フレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域に実質的に対応する。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常、ヒト免疫グロブリン配列の少なくとも一部を含み得る。抗体ヒト化の方法は、当該技術分野において公知である。
「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」は、典型的にはヒト生殖系列遺伝子に由来する、ヒト重鎖及び軽鎖配列を有する抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト細胞によって、ヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト動物（例えば、ヒト抗体配列を発現するように遺伝子操作されたトランスジェニックマウス）によって、またはファージディスプレイプラットフォームによって産生される。
「特異的に結合する」という用語は、試料中のエピトープまたは標的に対して、別のエピトープまたは非標的化合物（例えば、構造的に異なる抗原）に結合するよりも、より高い親和性で、より高い結合力で、及び／またはより長い持続時間、エピトープまたは標的に結合する分子（例えば、抗体またはその抗原結合部分）を指す。いくつかの実施形態では、エピトープまたは標的に特異的に結合する抗体（またはその抗原結合部分）は、他のエピトープまたは非標的化合物よりも少なくとも５倍高い親和性、例えば、少なくとも６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、２５倍、５０倍、１００倍、１，０００倍、または１０，０００倍以上の親和性で、エピトープまたは標的に結合する抗体（またはその抗原結合部分）である。本明細書で使用する場合、特定のエピトープまたは標的「への特異的な結合」、「に特異的に結合する」または「に特異的である」という用語は、例えば、結合するエピトープまたは標的に対して、例えば、１０－４Ｍ以下、例えば、１０－５Ｍ、１０－６Ｍ、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、または１０－１２Ｍの平衡解離定数ＫＤを有する分子によって示され得る。ある種に由来する標的（例えば、ＴＲＥＭ２タンパク質）に特異的に結合する抗体が、その標的（例えば、ＴＲＥＭ２タンパク質）のオルソログにも特異的に結合し得ることが、当業者には理解されよう。
「結合親和性」という用語は、本明細書では、２つの分子間、例えば、抗体（またはその抗原結合部分）と抗原との間の非共有結合相互作用の強度を指すものとして使用される。したがって、例えば、別途示さない限り、または文脈から明らかでない限り、この用語は、抗体（またはその抗原結合部分）と抗原との間の１：１の相互作用を指し得る。結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）を測定することにより定量化することができ、これは、結合速度定数（ｋａ、時間－１ Ｍ－１）で除した解離速度定数（ｋｄ、時間－１）を指す。ＫＤは、複合体形成及び解離のカイネティクスを、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法（例えばＢｉａｃｏｒｅ（商標）システム）、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）などの結合平衡除外法、及びＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）Ｏｃｔｅｔプラットフォームの使用）を使用して測定することにより決定することができる。本明細書で使用する場合、「結合親和性」は、抗体（またはその抗原結合部分）と抗原との間の１：１の相互作用を反映するような正式な結合親和性のみならず、強力な結合を反映し得るＫＤ値が算出される見かけの親和性をも含む。
「交差反応する」という用語は、本明細書で使用する場合、抗体を産生させた抗原とは別の抗原に結合する、抗体の能力を指す。いくつかの実施形態では、交差反応性は、抗体を産生させた抗原とは別の種に由来する抗原に結合する、抗体の能力を指す。非限定的な例として、ヒトＴＲＥＭ２ペプチドに対して産生された本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体は、異なる種（例えば、サルまたはマウス）に由来するＴＲＥＭ２ペプチドまたはタンパク質との交差反応性を示し得る。
「単離された」という用語は、核酸またはタンパク質（例えば、抗体）に関して使用する場合、核酸またはタンパク質が、その天然状態において会合していた他の細胞成分を本質的に含まないことを示す。純度及び均一性は、通常、電気泳動（例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、高速液体クロマトグラフィー）などの分析化学技法を使用して判定される。いくつかの実施形態では、単離された核酸またはタンパク質（例えば、抗体）は、少なくとも８５％純粋、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、または少なくとも９９％純粋である。
「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸及び合成アミノ酸、ならびに天然アミノ酸と同様の形で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣物を指す。天然アミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるもの、ならびにそれらのアミノ酸が後で修飾されたもの、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタメート、及びＯ－ホスホセリンである。天然α－アミノ酸には、限定されないが、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、及びこれらの組み合わせが含まれる。天然α－アミノ酸の立体異性体には、限定されないが、Ｄ－アラニン（Ｄ－Ａｌａ）、Ｄ－システイン（Ｄ－Ｃｙｓ）、Ｄ－アスパラギン酸（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－Ｇｌｕ）、Ｄ－フェニルアラニン（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｄ－ヒスチジン（Ｄ－Ｈｉｓ）、Ｄ－イソロイシン（Ｄ－Ｉｌｅ）、Ｄ－アルギニン（Ｄ－Ａｒｇ）、Ｄ－リジン（Ｄ－Ｌｙｓ）、Ｄ－ロイシン（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｄ－メチオニン（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｄ－アスパラギン（Ｄ－Ａｓｎ）、Ｄ－プロリン（Ｄ－Ｐｒｏ）、Ｄ－グルタミン（Ｄ－Ｇｌｎ）、Ｄ－セリン（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｄ－スレオニン（Ｄ－Ｔｈｒ）、Ｄ－バリン（Ｄ－Ｖａｌ）、Ｄ－トリプトファン（Ｄ－Ｔｒｐ）、Ｄ－チロシン（Ｄ－Ｔｙｒ）、及びこれらの組み合わせが含まれる。「アミノ酸類似体」とは、天然アミノ酸と同じ基本的化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基及びＲ基に結合している、α炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのような類似体は、修飾Ｒ基（例えば、ノルロイシン）または修飾ペプチド骨格を有するが、天然アミノ酸と同じ基本的化学構造を保持する。「アミノ酸模倣物」とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様の形で機能する化学化合物を指す。アミノ酸は、本明細書では、一般に知られている３文字の記号、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨されている１文字の記号のいずれかにより言及されている場合がある。
「ポリペプチド」及び「ペプチド」という用語は本明細書において互換的に使用され、単一鎖中のアミノ酸残基のポリマーを指す。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然アミノ酸ポリマー及び非天然アミノ酸ポリマーに適用される。アミノ酸ポリマーは、全てがＬ－アミノ酸のもの、全てがＤ－アミノ酸のもの、またはＬ－アミノ酸及びＤ－アミノ酸の混合物を含み得る。
本明細書で使用する場合、「タンパク質」という用語は、単一鎖ポリペプチドの１つのポリペプチドまたは二量体（すなわち、２つ）または多量体（すなわち、３つ以上）のいずれかを指す。タンパク質の単一鎖ポリペプチドは、共有結合（例えば、ジスルフィド結合）または非共有結合相互作用によって連結され得る。
「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、任意の長さのヌクレオチドの鎖を互換的に指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、及び／またはそれらの類似体、あるいはＤＮＡポリメラーゼまたはＲＮＡポリメラーゼにより鎖に組み込むことができる任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。本明細書において企図されるポリヌクレオチドの例としては、一本鎖ＤＮＡ及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＲＮＡ及び二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖ＤＮＡと、二本鎖ＤＮＡと、一本鎖ＲＮＡと、二本鎖ＲＮＡとの混合物を有するハイブリッド分子が挙げられる。
「保存的置換」、「保存的突然変異」という用語は、あるアミノ酸の、類似の特徴を有すると分類され得る別のアミノ酸による置換をもたらす変化を指す。このように定義された保存的アミノ酸グループの分類の例としては、Ｇｌｕ（グルタミン酸またはＥ）、Ａｓｐ（アスパラギン酸またはＤ）、Ａｓｎ（アスパラギンまたはＮ）、Ｇｌｎ（グルタミンまたはＱ）、Ｌｙｓ（リジンまたはＫ）、Ａｒｇ（アルギニンまたはＲ）、及びＨｉｓ（ヒスチジンまたはＨ）を含む「荷電／極性グループ」、Ｐｈｅ（フェニルアラニンまたはＦ）、Ｔｙｒ（チロシンまたはＹ）、Ｔｒｐ（トリプトファンまたはＷ）、及び（ヒスチジンまたはＨ）を含む「芳香族グループ」、ならびにＧｌｙ（グリシンまたはＧ）、Ａｌａ（アラニンまたはＡ）、Ｖａｌ（バリンまたはＶ）、Ｌｅｕ（ロイシンまたはＬ）、Ｉｌｅ（イソロイシンまたはＩ）、Ｍｅｔ（メチオニンまたはＭ）、Ｓｅｒ（セリンまたはＳ）、Ｔｈｒ（スレオニンまたはＴ）、及びＣｙｓ（システインまたはＣ）を含む「脂肪族グループ」を挙げることができる。各グループ内で、サブグループを特定することもできる。例えば、荷電または極性アミノ酸のグループは、Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓで構成される「正に荷電したサブグループ」、Ｇｌｕ及びＡｓｐで構成される「負に荷電したサブグループ」、ならびにＡｓｎ及びＧｌｎで構成される「極性サブグループ」を含むサブグループに細分することができる。別の例では、芳香族または環状のグループは、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ及びＴｒｐから構成される「窒素環サブグループ」、ならびにＰｈｅ及びＴｙｒから構成される「フェニルサブグループ」を含むサブグループに細分することができる。さらなる別の例では、脂肪族グループは、サブグループ、例えば、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ及びＡｌａから構成される「脂肪族非極性サブグループ」、ならびにＭｅｔ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ及びＣｙｓから構成される「脂肪族微極性サブグループ」に細分することができる。保存的突然変異の分類の例としては、前述のサブグループ内のアミノ酸のアミノ酸置換、例えば、限定されないが、正電荷を維持することができるような、Ａｒｇの代わりにＬｙｓまたはその逆；負電荷を維持することができるような、Ａｓｐの代わりにＧｌｕまたはその逆；遊離－ＯＨを維持することができるような、Ｔｈｒの代わりにＳｅｒまたはその逆；及び遊離－ＮＨ２を維持することができるような、Ａｓｎの代わりにＧｌｎまたはその逆、が挙げられる。いくつかの実施形態では、疎水性アミノ酸は、疎水性を保持するために、例えば活性部位中で天然疎水性アミノ酸に対して置換される。
２つ以上のポリペプチド配列との関連における「同一の」またはパーセント「同一性」という用語は、比較ウィンドウにわたって、または配列比較アルゴリズムを使用して、もしくは手動アラインメント及び目視検査により測定される指定領域にわたって、最大限一致するように比較及びアラインメントされる場合に、同じであるかまたは特定のパーセンテージ、例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％以上、特定の領域にわたって同一であるアミノ酸残基を有する、２つ以上の配列または部分配列を指す。
ポリペプチドの配列比較では、通常、１つのアミノ酸配列が参照配列として機能し、これを候補配列と比較する。最大アラインメントを得るために、当業者が利用可能な様々な方法、例えば、視覚的アラインメントまたは公知のアルゴリズムを使用した公的に利用可能なソフトウェアを使用してアラインメントを実施することができる。そのようなプログラムとしては、ＢＬＡＳＴプログラム、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．）またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）が挙げられる。最大アラインメントを得るためのアラインメントに用いられるパラメータは、当業者によって決定され得る。本出願の目的のためのポリペプチド配列の配列比較では、デフォルトパラメータを用いて２つのタンパク質配列をアラインメントするための、ＢＬＡＳＴＰアルゴリズムの標準タンパク質ＢＬＡＳＴを使用する。
本明細書で互換的に使用される「対象」、「個体」及び「患者」という用語は、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス及びモルモット）、ウサギ、雌ウシ、ブタ、ウマならびに他の哺乳動物種を含むがこれらに限定されない哺乳動物を指す。一実施形態では、対象、個体、または患者はヒトである。
本明細書で使用される「処置する」、「処置」などの用語は、一般に、所望の薬理学的及び／または生理学的効果を得ることを意味する。「処置する」または「処置」は、患者の生存における緩和、寛解、向上、生存期間もしくは生存率の増加、症状を減少させることもしくは疾患を患者がより耐えられるものにすること、変性もしくは減退の速度を緩慢にすること、または患者の身体的もしくは精神的幸福を向上させることなどのあらゆる客観的及び主観的パラメータを含む、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病または本明細書に記載の別の神経変性疾患）の処置または改善における成功のあらゆる兆候を指し得る。症状の処置または改善は、客観的または主観的パラメータに基づき得る。処置の効果を、処置を受けていない個体または個体のプールと、または処置前もしくは処置の間の異なる時点での同じ患者と比較することができる。
「薬学的に許容可能な賦形剤」という用語は、限定されないが、緩衝液、担体、または保存剤などの、ヒトまたは動物における使用に生物学的または薬理学的に適合する非活性医薬品成分を指す。
本明細書で使用する場合、薬剤（例えば、本明細書に記載の抗体）の「治療量」または「治療有効量」は、対象における疾患の症状を処置するか、軽減させるか、緩和するか、またはその症状の重症度を低減させる薬剤の量である。薬剤（例えば、本明細書に記載の抗体）の「治療量」は、患者の生存の向上、生存期間もしくは生存率の増加、症状を減少させること、損傷、疾患もしくは状態（例えば、神経変性疾患）をより耐えられるものにすること、変性もしくは減退の速度を緩慢にすること、または患者の身体的もしくは精神的幸福を向上させることが可能である。
「投与する」という用語は、生物学的作用の所望の部位に薬剤、化合物、または組成物を送達する方法を指す。これらの方法としては、局所送達、非経口送達、静脈内送達、皮内送達、筋肉内送達、髄腔内送達、結腸送達、直腸送達、または腹腔内送達が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、静脈内投与される。
「対照」または「対照値」という用語は、基準値またはベースライン値を指す。適切な対照は、当業者により決定され得る。場合によっては、対照値は、同じ対象または実験内のベースラインに対して決定される場合があり、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体による処理前に採取したｓＴＲＥＭ２の測定値は、同じ対象におけるｓＴＲＥＭ２レベルの処理後測定値に対する対照値であり得る。他の場合では、対照値は、対照対象（例えば、健常対照もしくは疾患対照）に対して、または対照対象の集団（例えば、健常対照もしくは疾患対照、例えば、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００以上の対照対象の集団）における平均値に対して決定される場合があり、例えば、ベースライン時または処理後のいずれかの対象のｓＴＲＥＭ２レベルの測定値は、健常対照の値と比較され得る。
ＩＩＩ．抗ＴＲＥＭ２抗体
一態様では、ＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片が提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、他のＴＲＥＭ様受容体（例えば、ＴＲＥＭ１）に比べてＴＲＥＭ２に対して選択的である。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に開示される１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列、重鎖可変領域配列、及び／または軽鎖可変領域配列を含む抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に開示される１つ以上のＣＤＲ配列、重鎖可変領域配列、及び／または軽鎖可変領域配列を含み、本明細書に開示される１つ以上の機能特性、例えば、ＴＲＥＭ２活性を増強する（例えば、食作用を増強するか、または骨髄細胞、ミクログリア、もしくはマクロファージなどの細胞の遊走、分化、機能もしくは生存を増強する）抗体、あるいはｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる抗体をさらに含む。
抗ＴＲＥＭ２抗体配列
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２またはその抗原結合断片は、以下の本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体：クローンＣＬ００２０３０６、クローンＣＬ００２０１８８、クローンＣＬ００２０３０７、及びクローンＣＬ００２０１２３のいずれかに由来する、重鎖配列もしくはその一部、及び／または軽鎖配列もしくはその一部を含む。これらのクローンのＣＤＲ、重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、略式の配列表に記載されている。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒト化及び／または親和性成熟抗体である。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、
（ａ）配列番号４、１２、及び２９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号４、１２、及び２９のいずれか１つのアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）配列、
（ｂ）配列番号５、１３、２５、３０、３９、４１、及び４３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号５、１３、２５、３０、３９、４１、及び４３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）配列、
（ｃ）配列番号６、１４、１７、及び３１のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号６、１４、１７、及び３１のいずれか１つのアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）配列、
（ｄ）配列番号７、２３、及び３２のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号７、２３、及び３２のいずれか１つのアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）配列、
（ｅ）配列番号８及び３３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号８及び３３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）配列、ならびに
（ｆ）配列番号９、１８、及び３４のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号９、１８、及び３４のいずれか１つのアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）配列
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）～（ｆ）のうちの２つ、３つ、４つ、５つまたは６つ全てを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）のＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）のＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）のＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｄ）のＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）のＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）のＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、最大２つのアミノ酸置換を有するＣＤＲは、参照配列に対して１つのアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、最大２つのアミノ酸置換を有するＣＤＲは、参照配列に対して２つのアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、最大２つのアミノ酸置換は、保存的置換である。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、
（ａ）配列番号４、１２、及び２９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、
（ｂ）配列番号５、１３、２５、３０、３９、４１、及び４３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、
（ｃ）配列番号６、１４、１７、及び３１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、
（ｄ）配列番号７、２３、及び３２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、
（ｅ）配列番号８及び３３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、ならびに
（ｆ）配列番号９、１８、及び３４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）～（ｆ）のうちの２つ、３つ、４つ、５つまたは６つ全てを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）のＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）のＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）のＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｄ）のＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）のＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）のＣＤＲ－Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｇ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｈ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｊ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、２６、２７、３５、３７、３８、４０、４２、４４、４５、４６、及び７９のいずれか１つに対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、２６、２７、３５、３７、３８、４０、４２、４４、４５、４６、及び７９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３、１１、１６、２０、２２、２８、３６、及び６８のいずれか１つに対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３、１１、１６、２０、２２、２８、３６、及び６８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、２６、２７、３５、３７、３８、４０、４２、４４、４５、４６、及び７９のいずれか１つに対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号３、１１、１６、２０、２２、２８、３６、及び６８のいずれか１つに対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、２６、２７、３５、３７、３８、４０、４２、４４、４５、４６、及び７９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号３、１１、１６、２０、２２、２８、３６、及び６８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、
（ａ）配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｂ）配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｃ）配列番号１５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｄ）配列番号１９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｅ）配列番号２１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｆ）配列番号１９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｇ）配列番号７９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｈ）配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｉ）配列番号２６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｊ）配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｋ）配列番号２６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｌ）配列番号２７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｍ）配列番号３５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｎ）配列番号３７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｏ）配列番号３８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｐ）配列番号４０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｑ）配列番号４２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｒ）配列番号４４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｓ）配列番号４５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｔ）配列番号４６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｕ）配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶＬ配列
を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に開示されるコンセンサス配列により包含される１つ以上の配列を含む。非限定的な例として、コンセンサス配列は、重鎖配列または軽鎖配列（例えば、ＣＤＲ）を、同じ（または類似の）生殖系列に由来する抗体に対してアラインメントすることにより同定することができる。いくつかの実施形態では、コンセンサス配列は、同じ（または類似の）長さの配列及び／または少なくとも１つの極めて類似したＣＤＲ（例えば、極めて類似したＣＤＲ３）を有する配列を含有する抗体から生成され得る。いくつかの実施形態では、それらの抗体におけるそのような配列は、保存されたアミノ酸またはモチーフ（すなわち、配列における変化がタンパク質機能を変化させ得る場所）及び／または変異が配列に存在する領域（すなわち、配列の変異がタンパク質機能に著しく影響を与える可能性が低い場所）を同定するためにアラインメント及び比較され得る。あるいは、コンセンサス配列は、重鎖配列または軽鎖配列（例えば、ＣＤＲ）を、同じまたは類似の（例えば、重複する）エピトープに結合する抗体に対してアラインメントして、保存されたアミノ酸またはモチーフ（すなわち、配列における変化がタンパク質機能を変化させ得る場所）及び変異が配列のアラインメントに存在する領域（すなわち、配列の変異がタンパク質機能に著しく影響を与える可能性が低い場所）を決定することにより同定され得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のコンセンサス配列は、本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体と同じまたは類似のエピトープを認識する抗体に対して同定され得る。例示的なコンセンサス配列は、配列番号４７～５２を含む。配列番号４７～５２のコンセンサス配列において、大文字は、アラインメントした配列（例えば、アラインメントしたＣＤＲ配列）間で完全に保存されているアミノ酸残基を表しており、一方、「Ｘ」またはギリシア文字（例えば、「α」、「β」、「γ」、「δ」、「ε」、または「φ」）は、アラインメントした配列間で完全には保存されていないアミノ酸残基を表す。「Ｘ」またはギリシア文字によって記された位置に挿入するためにアミノ酸を選択する場合、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、アラインメントした配列中の対応する位置に見られるアミノ酸から選択されることが理解されるであろう。
クローンＣＬ００２０１２３及びＣＬ００２０１２３のバリアント
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）ＧＦＳＩＥＤＦＹＩＨ（配列番号２９）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、
（ｂ）Ｗ－Ｉ－Ｄ－Ｐ－Ｅ－β６－Ｇ－β８－Ｓ－Ｋ－Ｙ－Ａ－Ｐ－Ｋ－Ｆ－Ｑ－Ｇ（配列番号４７）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、β６がＮまたはＱであり、かつβ８がＤまたはＥである、ＣＤＲ－Ｈ２配列、
（ｃ）ＨＡＤＨＧＮＹＧＳＴＭＤＹ（配列番号３１）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、
（ｄ）ＨＡＳＱＨＩＮＶＷＬＳ（配列番号３２）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、
（ｅ）ＫＡＳＮＬＨＴ（配列番号３３）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び
（ｆ）ＱＱＧＱＴＹＰＲＴ（配列番号３４）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列
を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３０、３９、４１、及び４３から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２７、３５、３７、３８、４０、４２、４４、４５、及び４６のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２７、３５、３７、３８、４０、４２、４４、４５、及び４６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２８及び３６のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２８及び３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２７に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２７に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号２８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２９、３０、及び３１のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号２７に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３２、３３、及び３４のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号２８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号２９、３０、３１、３２、３３、及び３４のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と競合する、抗体である。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２９、４３、及び３１のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号４２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３２、３３、及び３４のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号２９、４３、３１、３２、３３、及び３４のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と競合する、抗体である。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４５に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４５に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２９、４１、及び３１のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号４５に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３２、３３、及び３４のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号３６に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号２９、４１、３１、３２、３３、及び３４のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と競合する、抗体である。
クローンＣＬ００２０１８８、ＣＬ００２０３０６、ＣＬ００２０３０７、及びＣＬ００２０１８８のバリアント
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）Ｇ－Ｆ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－α６－Ｆ－Ｙ－Ｍ－Ｓ（配列番号４８）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列であって、α６がＤまたはＮである、ＣＤＲ－Ｈ１配列、
（ｂ）Ｖ－Ｉ－Ｒ－Ｎ－β５－β６－Ｎ－β８－Ｙ－Ｔ－β１１－β１２－Ｙ－Ｎ－Ｐ－Ｓ－Ｖ－Ｋ－Ｇ（配列番号４９）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、β５がＫまたはＲであり、β６がＡまたはＰであり、β８がＧまたはＡであり、β１１がＡまたはＴであり、かつβ１２がＧまたはＤである、ＣＤＲ－Ｈ２配列、
（ｃ）γ１－Ｒ－Ｌ－γ４－Ｙ－Ｇ－Ｆ－Ｄ－Ｙ（配列番号５０）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列であって、γ１がＡまたはＴであり、かつγ４がＴまたはＳである、ＣＤＲ－Ｈ３配列、
（ｄ）Ｑ－Ｓ－Ｓ－Ｋ－Ｓ－Ｌ－Ｌ－Ｈ－Ｓ－δ１０－Ｇ－Ｋ－Ｔ－Ｙ－Ｌ－Ｎ（配列番号５１）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列であって、δ１０がＮまたはＴである、ＣＤＲ－Ｌ１配列、
（ｅ）ＷＭＳＴＲＡＳ（配列番号８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び
（ｆ）Ｑ－Ｑ－Ｆ－Ｌ－Ｅ－φ６－Ｐ－Ｆ－Ｔ（配列番号５２）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列であって、φ６がＹまたはＦである、ＣＤＲ－Ｌ３配列
を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４及び１２から選択されるＣＤＲ－Ｈ１配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号５、１３、及び２５から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６、１４、及び１７から選択されるＣＤＲ－Ｈ３配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７及び２３から選択されるＣＤＲ－Ｌ１配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号９及び１８から選択されるＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、２６、及び７９のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、２６、及び７９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３、１１、１６、２０、２２、及び６８のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３、１１、１６、２０、２２、及び６８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
クローンＣＬ００２０１８８及びＣＬ００２０１８８のバリアント
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１６に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号１６に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４、５、及び１７のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号１５に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７、８、及び１８のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号１６に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号５、１７、７、８、及び１８のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と競合する、抗体である。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７９に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７９に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４、５、及び１７のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号７９に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２３、８、及び１８のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号４、５、１７、２３、８、及び１８のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と競合する、抗体である。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４、２５、及び１７のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２３、８、及び１８のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号４、２５、１７、２３、８、及び１８のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と競合する、抗体である。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号６８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４、２５、及び１７のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号６８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号４、２５、１７、７、８、及び９のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と競合する、抗体である。
クローンＣＬ００２０３０６
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号３に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号３に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号４、５、６、７、８、及び９のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と競合する、抗体である。
クローンＣＬ００２０３０７
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号１１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１２、１３、及び１４のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号１１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号１２、１３、１４、７、８、及び９のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と競合する、抗体である。
抗ＴＲＥＭ２抗体の結合特性
いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、細胞（例えば、ヒトマクロファージなどの内在的にＴＲＥＭ２を発現する一次細胞もしくは細胞株、または例えば、以下の実施例セクションに記載されているようなＴＲＥＭ２を発現するように操作されている一次細胞もしくは細胞株）上に発現するＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、精製もしくは組換えＴＲＥＭ２タンパク質もしくはその一部に結合するか、またはＴＲＥＭ２もしくはその一部を含むキメラタンパク質（例えば、ＴＲＥＭ２を含むＦｃ融合タンパク質もしくはＴＲＥＭ２の外部ドメインを含むＦｃ融合タンパク質）に結合する。
いくつかの実施形態では、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、別の種の１つ以上の他のＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す。いくつかの実施形態では、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、カニクイザル（「ｃｙｎｏ」）ＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す。いくつかの実施形態では、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、マウスＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２、ｃｙｎｏ ＴＲＥＭ２、及びマウスＴＲＥＭ２との交差反応性を示す。
結合親和性、結合カイネティクス、及び交差反応性を分析するための方法は、当該技術分野において公知である。これらの方法としては、固相結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ）、免疫沈降法、表面プラズモン共鳴（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ））、結合平衡除外法（例えば、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標））、フローサイトメトリー、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、ＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法（例えば、Ｏｃｔｅｔ（商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ））、及びウエスタンブロット分析が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡを使用して、結合親和性及び／または交差反応性を判定する。ＥＬＩＳＡアッセイを実施するための方法は当該技術分野において公知であり、以下の実施例セクションにも記載されている。いくつかの実施形態では、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、結合親和性、結合カイネティクス、及び／または交差反応性を判定する。いくつかの実施形態では、結合平衡除外法を使用して、結合親和性、結合カイネティクス、及び／または交差反応性を判定する。いくつかの実施形態では、ＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法アッセイを使用して、結合親和性、結合カイネティクス、及び／または交差反応性を判定する。
抗ＴＲＥＭ２抗体によって認識されるエピトープ
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に記載の抗体クローンによって認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。本明細書で使用する場合、「実質的に同じ」という用語は、本明細書に記載の抗体クローンによって認識されるエピトープに関して使用する場合、本明細書に記載の抗体クローンによって認識されるエピトープと同一であるか、そのエピトープ内にあるか、またはそれとほぼ同一であるか（例えば、そのエピトープに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、またはそのエピトープに対して１つ、２つもしくは３つのアミノ酸置換、例えば保存的置換を有する）、あるいはそのエピトープと実質的に重複する（例えば、そのエピトープと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％重複する）エピトープを抗ＴＲＥＭ２抗体が認識することを意味する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、クローンＣＬ００２０３０６、クローンＣＬ００２０１８８、クローンＣＬ００２０３０７、及びクローンＣＬ００２０１２３からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２のストーク領域内のエピトープでヒトＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１の残基１２９～１７２または残基１３１～１６９を含むか、その中にあるか、またはそれらからなるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１の残基１２９～１４８を含むか、その中にあるか、またはそれからなるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１４３～１４９を含むか、その中にあるか、またはそれからなるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（例えば、Ｓｙｋなどのキナーゼのリン酸化を誘導することによって）ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達を活性化し、ＴＲＥＭ２のストーク領域内のエピトープでヒトＴＲＥＭ２に結合するアゴニストである。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２のストーク領域内のエピトープでヒトＴＲＥＭ２に結合し、プロテアーゼ（例えば、ＡＤＡＭ１７）によるＴＲＥＭ２の切断を阻害する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２のＩｇ可変（ＩｇＶ）ドメイン内のエピトープでヒトＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（例えば、Ｓｙｋなどのキナーゼのリン酸化を誘導することによって）ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達を活性化し、ＴＲＥＭ２のＩｇＶドメイン内のエピトープでヒトＴＲＥＭ２に結合するアゴニストである。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、以下：（ｉ）配列番号１のアミノ酸残基５５～６３（ＧＥＫＧＰＣＱＲＶ（配列番号７０））、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸９６～１０７（ＴＬＲＮＬＱＰＨＤＡＧＬ（配列番号７１））、及び（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１２６～１２９（ＶＥＶＬ（配列番号７２））のうちの１つ以上を含むかまたはそれらからなるエピトープでヒトＴＲＥＭ２に結合する。
抗ＴＲＥＭ２抗体の機能特性
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体（例えば、開示されている１つ以上のＣＤＲ配列、重鎖可変領域配列、及び／または軽鎖可変領域配列を有する抗体）は、本明細書に開示される１つ以上のＴＲＥＭ２活性において機能する。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２タンパク質のレベル（例えば、細胞表面から細胞外試料にシェディングされたｓＴＲＥＭ２のレベル）を調節し、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼ（例えば、Ｓｙｋキナーゼ）の動員もしくはリン酸化を調節し、及び／または食作用、細胞増殖、細胞生存、細胞分化、サイトカイン分泌、もしくは細胞遊走などのシグナル伝達複合体の下流の１つ以上の活性を調節する抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体は、参照抗体と比較して良好な効力で健常ヒトＣＳＦまたはカニクイザルＣＳＦ中の可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質（ｓＴＲＥＭ２）に結合する。いくつかの実施形態では、参照抗体は、配列番号７３及び７４、配列番号７５及び７６、ならびに配列番号７７及び７８からなる群から選択される配列の組み合わせによって表される。いくつかの実施形態では、効力アッセイは、実質的に実施例１１に記載されているように行われる。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導される１つ以上のＴＲＥＭ２活性（例えば、本明細書に記載のもの）を増強する。いくつかの実施形態では、リガンドは、脂質リガンドである。ＴＲＥＭ２脂質リガンドの例としては、１－パルミトイル－２－（５’－オキソ－バレロイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＶＰＣ）、２－アラキドノイルグリセロール（２－ＡＧ）、７－ケトコレステロール（７－ＫＣ）、２４（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２４ＯＨＣ）、２５（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２５ＯＨＣ）、２７－ヒドロキシコレステロール（２７ＯＨＣ）、アシルカルニチン（ＡＣ）、アルキルアシルグリセロホスホコリン（ＰＡＦ）、α－ガラクトシルセラミド（ＫＲＮ７０００）、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）、カルジオリピン（ＣＬ）、セラミド、セラミド－１－リン酸（Ｃ１Ｐ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、リン酸コレステロール（ＣＰ）、ジアシルグリセロール３４：１（ＤＧ３４：１）、ジアシルグリセロール３８：４（ＤＧ３８：４）、ジアシルグリセロールピロリン酸（ＤＧＰＰ）、ジヒドロセラミド（ＤｈＣｅｒ）、ジヒドロスフィンゴミエリン（ＤｈＳＭ）、エーテルホスファチジルコリン（ＰＣｅ）、遊離コレステロール（ＦＣ）、ガラクトシルセラミド（ＧａｌＣｅｒ）、ガラクトシルスフィンゴシン（ＧａｌＳｏ）、ガングリオシドＧＭ１、ガングリオシドＧＭ３、グルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｏ）、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）、Ｋｄｏ２－リピドＡ（ＫＬＡ）、ラクトシルセラミド（ＬａｃＣｅｒ）、リゾアルキルアシルグリセロホスホコリン（ＬＰＡＦ）、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、リゾホスファチジルグリセロール（ＬＰＧ）、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、Ｎ－アシル－ホスファチジルエタノールアミン（ＮＡＰＥ）、Ｎ－アシル－セリン（ＮＳｅｒ）、酸化ホスファチジルコリン（ｏｘＰＣ）、パルミチン酸－９－ヒドロキシ－ステアリン酸（ＰＡＨＳＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルエタノール（ＰＥｔＯＨ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、スフィンガニン、スフィンガニン－１－リン酸（Ｓａ１Ｐ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、スフィンゴシン、スフィンゴシン－１－リン酸（Ｓｏ１Ｐ）、及びスルファチドが挙げられるが、これらに限定されない。
ｓＴＲＥＭ２シェディングの調節
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、試料中のｓＴＲＥＭ２タンパク質のレベル、例えば、細胞表面から細胞外試料にシェディングされたｓＴＲＥＭ２のレベルを変化させる。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、処理した試料中のｓＴＲＥＭ２の量が対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％以上減少する場合、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、処理した試料中のｓＴＲＥＭ２の量が対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍以上減少する場合、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる。いくつかの実施形態では、対照値は、無処理試料（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理されていないＴＲＥＭ２発現細胞からの上清、もしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で処理されていない対象からの試料）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理された試料中のｓＴＲＥＭ２の量である。
いくつかの実施形態では、ｓＴＲＥＭ２のシェディングは、体液、例えば、血液、血漿、血清、尿、または脳脊髄液を含む試料を使用して測定される。いくつかの実施形態では、試料は、脳脊髄液を含む。いくつかの実施形態では、試料は、細胞培養物からの上清（例えば、ヒトマクロファージなどの内在的にＴＲＥＭ２を発現する一次細胞もしくは細胞株からの、または例えば、以下の実施例セクションに記載されているようなＴＲＥＭ２を発現するように操作されている一次細胞もしくは細胞株からの上清）を含む。
いくつかの実施形態では、試料中のｓＴＲＥＭ２のレベルは、免疫測定法を使用して測定される。免疫測定法は、当該技術分野において公知であり、限定されないが、酵素多重免疫測定法（ＥＭＩＡ）などの酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、微粒子酵素免疫測定法（ＭＥＩＡ）、免疫組織化学法（ＩＨＣ）、免疫細胞化学法、キャピラリー電気泳動免疫測定法（ＣＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、免疫蛍光法、化学発光免疫測定法（ＣＬ）、及び電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬ）が含まれる。いくつかの実施形態では、ｓＴＲＥＭ２レベルは、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定される。いくつかの実施形態では、ｓＴＲＥＭ２レベルは、以下の実施例セクションに記載されているＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定される。
キナーゼの動員またはリン酸化の調節
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体（例えば、限定されないが、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、ＰＩ３Ｋ、Ｅｒｋ、ＡＫＴ、またはＧＳＫ３ｂ）と相互作用するキナーゼのリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、天然ＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断せずに、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼのリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド（例えば、脂質リガンド）によって誘導されるＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼのリン酸化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ｓｙｋのリン酸化を誘導または増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理した試料中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％以上増加する場合、Ｓｙｋのリン酸化を誘導または増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理した試料中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍以上増加する場合、Ｓｙｋのリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態では、対照値は、無処理試料（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理されていないＴＲＥＭ２発現細胞を含む試料、もしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で処理されていない対象からの試料）、またはＴＲＥＭ２リガンドで処理されているが抗ＴＲＥＭ２抗体では処理されていない試料、または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理された試料中のＳｙｋリン酸化のレベルである。
試料中のリン酸化（例えば、Ｓｙｋリン酸化）を検出及び／または定量化するために、いくつかの実施形態では、免疫測定法が使用される。いくつかの実施形態では、免疫測定法は、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、酵素多重免疫測定法（ＥＭＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、微粒子酵素免疫測定法（ＭＥＩＡ）、免疫組織化学法（ＩＨＣ）、免疫細胞化学法、キャピラリー電気泳動免疫測定法（ＣＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、免疫蛍光法、化学発光免疫測定法（ＣＬ）、または電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬ）である。いくつかの実施形態では、リン酸化は、増幅発光近似均質アッセイ（ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ ａｓｓａｙ）（ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｉｎｃ．）を利用する免疫測定法を使用して検出及び／または定量化される。
いくつかの実施形態では、リン酸化は、１つ以上の細胞、例えば、１つ以上のＴＲＥＭ２発現細胞（例えば、ヒトマクロファージもしくはｉＰＳＣ由来ミクログリアなどの内在的にＴＲＥＭ２を発現する一次細胞もしくは細胞株、または例えば、以下の実施例セクションに記載されているようなＴＲＥＭ２を発現するように操作されている一次細胞もしくは細胞株）を含む試料を使用して測定される。いくつかの実施形態では、試料は、体液、例えば、血液、血漿、血清、尿、または脳脊髄液を含む。いくつかの実施形態では、試料は、組織（例えば、肺、脳、腎臓、脾臓、神経組織、もしくは骨格筋）またはそのような組織からの細胞を含む。いくつかの実施形態では、試料は、（例えば、ヒト対象または非ヒト対象からの）内因性体液、組織または細胞を含む。
食作用の調節
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、死細胞デブリ、組織デブリ、アミロイドベータ粒子、または異物の食作用を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、天然ＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断せずに食作用を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド（例えば、脂質リガンド）によって誘導される食作用を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理した試料中の食作用のレベルが、対照値と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％以上増加する場合、食作用を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理した試料中の食作用のレベルが、対照値と比較して少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍以上増加する場合、食作用を増強する。いくつかの実施形態では、対照値は、無処理試料、ＴＲＥＭ２リガンドで処理されているが抗ＴＲＥＭ２抗体では処理されていない試料、または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理された試料中の食作用のレベルである。
いくつかの実施形態では、食作用は、標識基質を用いた食作用アッセイを使用して測定される。食作用アッセイは、当該技術分野において公知である。いくつかの実施形態では、食作用アッセイは、ＴＲＥＭ２を内在的に発現する細胞、例えば、ヒトマクロファージまたはミクログリアを含む試料で実施される。いくつかの実施形態では、食作用アッセイは、ＴＲＥＭ２を発現するように操作された細胞を含む試料で実施される。いくつかの実施形態では、食作用は、以下の実施例セクションに記載されているヒトマクロファージ食作用アッセイを使用して測定される。
細胞の分化、機能、遊走、及び生存の調節
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、ならびにｉＰＳＣ由来ミクログリア及び疾患関連ミクログリアを含むミクログリアの）細胞遊走、細胞生存、細胞機能、または細胞分化を増強する。疾患関連ミクログリア及び疾患関連ミクログリアを検出する方法は、Ｋｅｒｅｎ－Ｓｈａｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２０１７，１６９：１２７６－１２９０に記載されている。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞タイプ（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞遊走を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞タイプ（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞生存を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞タイプ（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞機能を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞タイプ（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、骨髄細胞の遊走、生存、機能、及び／または分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、マクロファージの遊走、生存、機能、及び／または分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ミクログリアの遊走、生存、機能、及び／または分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ミクログリア活性化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、疾患関連ミクログリアの遊走、生存、機能、及び／または分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、天然ＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断せずに、細胞遊走、細胞生存、細胞機能、または細胞分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド（例えば、脂質リガンド）によって誘導される細胞遊走、細胞生存、細胞機能、または細胞分化を増強する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理した試料中の活性（例えば、遊走、生存、機能、または分化）のレベルが、対照値と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％以上増加する場合、細胞遊走、細胞生存、細胞機能、または細胞分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理した試料中の活性（例えば、遊走、生存、機能、または分化）のレベルが、対照値と比較して少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍以上増加する場合、細胞遊走、細胞生存、細胞機能、または細胞分化を増強する。いくつかの実施形態では、対照値は、無処理試料（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理されていない試料）、ＴＲＥＭ２リガンドで処理されているが抗ＴＲＥＭ２抗体では処理されていない試料、または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理された試料中の活性（例えば、遊走、生存、機能、または分化）のレベルである。
いくつかの実施形態では、細胞遊走は、走化性アッセイを使用して測定される。走化性アッセイは、当該技術分野において公知である。いくつかの実施形態では、細胞遊走アッセイ（例えば、走化性アッセイ）は、ＴＲＥＭ２を内在的に発現する細胞、例えば、ヒトマクロファージを含む試料で実施される。いくつかの実施形態では、細胞遊走アッセイ（例えば、走化性アッセイ）は、ＴＲＥＭ２を発現するように操作された細胞を含む試料で実施される。いくつかの実施形態では、細胞遊走は、以下の実施例セクションに記載されているヒトマクロファージ走化性アッセイを使用して測定される。
いくつかの実施形態では、細胞生存は、細胞生存率アッセイを使用して測定される。細胞生存率アッセイは、当該技術分野において公知である。いくつかの実施形態では、細胞生存アッセイ（例えば、細胞生存率アッセイ）は、ＴＲＥＭ２を内在的に発現する細胞、例えば、ヒトマクロファージを含む試料で実施される。いくつかの実施形態では、細胞生存アッセイ（例えば、細胞生存率アッセイ）は、ＴＲＥＭ２を発現するように操作された細胞を含む試料で実施される。いくつかの実施形態では、細胞生存は、以下の実施例セクションに記載されているヒトマクロファージ生存率アッセイを使用して測定される。
いくつかの実施形態では、細胞機能は、その細胞に適した機能アッセイを使用して測定される。例えば、いくつかの実施形態では、マクロファージ細胞機能は、例えば、以下の実施例セクションに記載されているように、食作用アッセイを使用して評価される。
いくつかの実施形態では、細胞分化は、ＴＲＥＭ２を内在的に発現する細胞の分化能力を評価することにより測定される。例えば、いくつかの実施形態では、細胞分化は、例えば、実施例セクションに記載されているように、単球から分化するマクロファージの能力を評価することにより測定される。
いくつかの実施形態では、ミクログリアの活性化は、インビボで測定される。いくつかの実施形態では、ミクログリア活性化は、ＴＳＰＯ－ＰＥＴイメージングを使用して測定される。ＴＳＰＯ－ＰＥＴイメージング法は、当該技術分野において公知である。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、神経炎症を増大させずにミクログリア機能を増強する。神経炎症のレベルは、限定されないが、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－１ｒａ、ＴＧＦβ、ＩＬ－１５、またはＩＦＮ－γなどのサイトカイン（例えば、炎症性サイトカイン）のレベルを測定することにより判定され得る。いくつかの実施形態では、サイトカインレベルは、免疫測定法、例えば、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、酵素多重免疫測定法（ＥＭＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、微粒子酵素免疫測定法（ＭＥＩＡ）、免疫組織化学法（ＩＨＣ）、免疫細胞化学法、キャピラリー電気泳動免疫測定法（ＣＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、免疫蛍光法、化学発光免疫測定法（ＣＬ）、または電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬ）を使用して測定される。
ＩＶ．抗体の調製
いくつかの実施形態では、抗体は、抗体応答を誘導するための抗原または抗原混合物で動物（複数可）（例えば、マウス、ウサギ、またはラット）を免疫化することにより調製される。いくつかの実施形態では、抗原または抗原混合物は、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント）と併せて投与される。初回免疫化後、抗体産生を向上させるために、１回以上の後続する抗原（複数可）の追加免疫注射が投与され得る。免疫化後、抗原特異的Ｂ細胞が、例えば、脾臓及び／またはリンパ組織から回収される。モノクローナル抗体を作製するために、Ｂ細胞を骨髄腫細胞と融合させ、続いて、抗原特異性についてスクリーニングする。抗体を調製する方法は、以下の実施例セクションにも記載されている。
目的の抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子を細胞からクローニングすることができ、例えば、モノクローナル抗体をコードする遺伝子を、ハイブリドーマからクローニングして組換えモノクローナル抗体を産生させるために使用することができる。モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子ライブラリもまた、ハイブリドーマまたは形質細胞から作製される。あるいは、ファージまたは酵母ディスプレイ技術を使用して、選択した抗原に特異的に結合する抗体及びＦａｂ断片を同定することができる。抗体はまた、二重特異性にすることができる。すなわち、２つの異なる抗原を認識することができる。抗体はまた、異種コンジュゲート、例えば、２つの共有結合的に連結した抗体または免疫毒素であり得る。
抗体は、原核生物発現系及び真核生物発現系を含む、任意数の発現系を使用して産生され得る。いくつかの実施形態では、発現系は、哺乳動物細胞の発現、例えば、ハイブリドーマまたはＣＨＯ細胞発現系である。多数のそのような系が、商業的供給元から広く入手可能である。抗体がＶＨ及びＶＬ領域の両方を含む実施形態では、ＶＨ及びＶＬ領域は、例えば、ジシストロン性発現ユニット中で、または異なるプロモーターの制御下で、単一のベクターを使用して発現され得る。他の実施形態では、ＶＨ及びＶＬ領域は、別個のベクターを使用して発現され得る。本明細書に記載のＶＨまたはＶＬ領域は、任意選択で、Ｎ末端にメチオニンを含み得る。
いくつかの実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。キメラ抗体を作製する方法は当該技術分野において公知である。例えば、マウスなどの１つの種の抗原結合領域（重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）が、ヒトなどの別の種のエフェクター領域（定常ドメイン）に融合されたキメラ抗体を作製することができる。別の例として、抗体のエフェクター領域が異なる免疫グロブリンクラスまたはサブクラスのエフェクター領域で置換された、「クラススイッチされた」キメラ抗体を作製することができる。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。一般に、非ヒト抗体は、その免疫原性を低減させるためにヒト化される。ヒト化抗体は、通常、非ヒト（例えば、マウス可変領域配列に由来する）である１つ以上の可変領域（例えば、ＣＤＲ）またはその一部、及び場合により非ヒトであるいくつかのフレームワーク領域またはその一部を含み、ヒト抗体配列に由来する１つ以上の定常領域をさらに含む。非ヒト抗体をヒト化させる方法は、当該技術分野において公知である。トランスジェニックマウス、または他の哺乳動物などの他の生物を使用して、ヒト化抗体またはヒト抗体を発現させることができる。抗体をヒト化させる他の方法としては、例えば、可変ドメインリサーフェイシング（ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）、ＣＤＲグラフティング、特異性決定残基（ＳＤＲ）グラフティング、ガイド選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）、及びフレームワークシャッフリングが挙げられる。
ヒト化の代替として、完全ヒト抗体を作製することができる。非限定的な例として、免疫化時に、内在性免疫グロブリン産生の非存在下で、ヒト抗体の完全なレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生させることができる。例えば、キメラ及び生殖系列突然変異マウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失により、内在性抗体産生が完全に阻害されることが説明されている。そのような生殖系列突然変異マウスへのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの導入により、抗原曝露の際にヒト抗体の産生がもたらされる。別の例として、ヒト抗体は、ヒトモノクローナル抗体を産生する細胞株を作製するための初代ヒトＢ細胞を使用するなどの、ハイブリドーマベースの方法により産生され得る。
ヒト抗体はまた、ファージディスプレイまたは酵母ディスプレイ技術を使用して産生され得る。ファージディスプレイでは、可変重鎖及び可変軽鎖遺伝子のレパートリーは、ファージディスプレイベクター中で増幅され、発現される。いくつかの実施形態では、抗体ライブラリは、ヒト源から増幅された天然のレパートリーである。いくつかの実施形態では、抗体ライブラリは、重鎖配列及び軽鎖配列をクローニングし、組換えて、様々な抗原特異性を有する抗体の大型プールを作製することにより作られた合成ライブラリである。ファージは通常、抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ断片）を提示し、これは、次いで目的の抗原への結合についてスクリーニングされる。
いくつかの実施形態では、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ＶＨ、またはＶＨＨなど）が作製される。抗体断片を産生するための様々な技法が開発されている。従来、これらの断片は、インタクト抗体のタンパク質分解消化により得られていた。しかしながら、これらの断片は、現在、組換え宿主細胞を使用して直接産生され得る。例えば、抗体断片は、抗体ファージライブラリから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’－ＳＨ断片は、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞から直接回収され、化学的にカップリングされてＦ（ａｂ’）２断片を形成し得る。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。抗体断片を産生するための他の技法は、当業者には明らかであろう。
いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片は、インビボでの半減期の延長をもたらすために、別の分子、例えば、ポリエチレングリコールにコンジュゲート（ペグ化）されるか、または血清アルブミンにコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体（またはその抗原結合断片）を含む多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体が提供される。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対して結合特異性を有する抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）は、ＴＲＥＭ２に対する結合特異性を有し、かつ少なくとも１つの他の抗原に対する結合特異性を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）は、２つの異なるＴＲＥＭ２エピトープに結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）は、細胞表面におけるＴＲＥＭ２クラスター化を誘導することができる。共焦点ＦＲＥＴ顕微鏡を使用して受容体クラスター化を測定するための例示的な方法は、Ｗａｌｌｒａｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．，２００３，８５：５５９－５７１に記載されている。多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を作製する方法としては、宿主細胞中での２対の重鎖及び軽鎖の組換え共発現、「ノブイントゥホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）」エンジニアリング、分子内三量体化、ならびに別の抗体のＮ末端またはＣ末端への抗体断片の融合、例えば、タンデム可変ドメインが挙げられるが、これらに限定されない。
Ｖ．核酸、ベクター及び宿主細胞
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体は、組換え法を使用して調製される。したがって、いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体のいずれか（例えば、本明細書に記載のＣＤＲ、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のうちのいずれか１つ以上）をコードする核酸配列を含む単離された核酸；そのような核酸を含むベクター；ならびに抗体をコードする核酸を複製するため及び／または抗体を発現するために使用される核酸が導入された宿主細胞、を提供する。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、単離されたポリヌクレオチド）は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分（例えば、「抗ＴＲＥＭ２抗体配列」の表題で前述のセクションに記載されているもの）をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下の略式の配列表に開示されている１つ以上のアミノ酸配列（例えば、ＣＤＲ配列、重鎖配列または軽鎖配列）をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下の略式の配列表に開示されている配列（例えば、ＣＤＲ配列、重鎖配列、または軽鎖配列）に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、異種核酸、例えば、異種プロモーターに作動可能に連結されている。
本開示の抗体、またはその断片をコードするポリヌクレオチドを含有する好適なベクターには、クローニングベクター及び発現ベクターが含まれる。選択されるクローニングベクターは使用される予定の宿主細胞によって異なり得るが、有用なクローニングベクターは、一般に自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼの単一の標的を有し得、及び／またはベクターを含有するクローンの選択に使用することができるマーカーの遺伝子を保有し得る。例としては、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これら及び他の多くのクローニングベクターが、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商業的供給業者から入手可能である。
発現ベクターは、一般に、本開示の核酸を含有する複製可能なポリヌクレオチドコンストラクトである。発現ベクターは、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの不可分の一部としてのいずれかで宿主細胞内で複製し得る。好適な発現ベクターとしては、プラスミド、ウイルスベクター（アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含む）、及び他の任意のベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、原核細胞または真核細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、原核生物である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト胚腎臓（ＨＥＫ）細胞である。
別の態様では、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体を作製する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、抗体の発現に適した条件下で本明細書に記載の宿主細胞（例えば、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクターを発現する宿主細胞）を培養することを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、その後宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収される。
ＶＩ．抗ＴＲＥＭ２抗体を使用する治療方法
別の態様では、本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体（例えば、前述のセクションＩＩＩに記載されている抗ＴＲＥＭ２抗体）を使用する治療方法が提供される。いくつかの実施形態では、神経変性疾患を処置する方法が提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を（例えば、神経変性疾患を有する対象において）調節する方法が提供される。
いくつかの実施形態では、神経変性疾患を処置する方法が提供される。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、アルツハイマー病、原発性年齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアム筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症複合（ＡＬＳ－ＰＤＣ）、大脳皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、球状グリア性タウオパチー、認知症を伴うグアドループ型パーキンソニズム、グアドループ型ＰＳＰ、ハラーフォルデン・シュパッツ病、スフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋強直性ジストロフィー、那須・ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球橋黒質変性症、パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維型老年認知症からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、アルツハイマー病である。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、那須・ハコラ病である。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、前頭側頭型認知症である。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、パーキンソン病である。いくつかの実施形態では、本方法は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体）、または本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体を含む医薬組成物を、対象に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体（またはその抗原結合部分もしくは医薬組成物）は、ＴＲＥＭ２の突然変異を特徴とする神経変性疾患の処置に使用される。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２の突然変異を特徴とする神経変性疾患は、アルツハイマー病、例えば、ＴＲＥＭ２のＲ４７Ｈ突然変異を特徴とするアルツハイマー病である。
いくつかの実施形態では、対象（例えば、神経変性疾患を有する対象）において１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを調節すること、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼ（例えば、Ｓｙｋキナーゼ）の動員またはリン酸化を調節すること、食作用（例えば、細胞デブリ、アミロイドベータ粒子などの食作用）を調節すること、細胞遊走（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、ミクログリア、及び疾患関連ミクログリアの遊走）を調節すること、及び／または（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、ミクログリア、及び疾患関連ミクログリアの）細胞分化を調節することを含む。いくつかの実施形態では、神経変性疾患を有する対象において１つ以上のＴＲＥＭ２活性を増強する方法が提供される。いくつかの実施形態では、神経変性疾患を有する対象においてｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象において１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する方法は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体もしくはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体）、または本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体を含む医薬組成物を、対象に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、処置される対象は、ヒト、例えば成人ヒトまたは小児ヒトである。
いくつかの実施形態では、神経変性疾患を有する対象においてプラーク蓄積を低減させる方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に記載の抗体または医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、アルツハイマー病を有する。いくつかの実施形態では、対象は、神経変性疾患の動物モデル（例えば、５ＸＦＡＤまたはＡＰＰ／ＰＳ１マウスモデル）である。いくつかの実施形態では、プラーク蓄積は、例えば、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャニングを使用してアミロイドプラークイメージング及び／またはタウイメージングによって測定される。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、ベースライン値（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与前の対象におけるプラーク蓄積のレベル）と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％、プラークの蓄積を低減させる。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、治療有効量または治療有効用量で対象に投与される。約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの１日用量範囲が使用され得る。しかしながら、投与量は、選択した投与経路、組成物の配合、患者の応答、状態の重症度、対象の体重、及び処方医の判断を含む、いくつかの要因によって変化し得る。投与量は、個々の患者による必要に応じて経時的に増加または減少され得る。特定の場合では、患者に最初に低用量を与え、次いで、患者が耐えられる有効な投与量まで増量する。有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体の投与経路は、経口、腹腔内、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、髄腔内、吸入、局所、病巣内、直腸、気管支内、経鼻、経粘膜、腸内、眼もしくは耳への送達、または当該技術分野で公知の他の任意の方法であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、経口投与、静脈内投与、または腹腔内投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体（及び任意選択で別の治療剤）は、長時間にわたり、例えば、少なくとも３０日間、４０日間、５０日間、６０日間、７０日間、８０日間、９０日間、１００日間、１５０日間、２００日間、２５０日間、３００日間、または３５０日間以上対象に投与される。
ＶＩＩ．医薬組成物及びキット
別の態様では、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体を含む医薬組成物及びキットが提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物及びキットは、神経変性疾患の処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、医薬組成物及びキットは、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、例えば、Ｓｙｋリン酸化の調節（例えば、増強または阻害）に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、医薬組成物及びキットは、ｓＴＲＥＭ２レベルの調節（例えば、減少）に使用するためのものである。
医薬組成物
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、前述のセクションＩＩＩに記載されている抗体またはその抗原結合断片である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体を含み、１つ以上の薬学的に許容可能な担体及び／または賦形剤をさらに含む。薬学的に許容可能な担体には、生理学的に適合性があり、活性剤の活性を妨害しないか、またはさもなければ阻害しない任意の溶媒、分散媒またはコーティング剤が含まれる。様々な薬学的に許容可能な賦形剤が、当該技術分野において周知である。
いくつかの実施形態では、担体は、静脈内投与、筋肉内投与、経口投与、腹腔内投与、髄腔内投与、経皮投与、局所投与または皮下投与に適している。薬学的に許容可能な担体は、例えば、組成物を安定化させるように、または活性剤（複数可）の吸収を増大もしくは減少させるように作用する、１つ以上の生理学的に許容可能な化合物（複数可）を含み得る。生理学的に許容可能な化合物としては、例えば、グルコース、スクロースもしくはデキストランなどの炭水化物、アスコルビン酸もしくはグルタチオンなどの抗酸化剤、キレート剤、低分子量タンパク質、活性剤のクリアランスもしくは加水分解を低減させる組成物、または賦形剤または他の安定剤及び／または緩衝液を挙げることができる。その他の薬学的に許容可能な担体及びその製剤は、当該技術分野において周知である。
本明細書に記載の医薬組成物は、当業者に公知の様式で、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、乳化、カプセル化、封入、または凍結乾燥プロセスによって製造することができる。以下の方法及び賦形剤は、単に例示的なものであり、決して限定するものではない。
経口投与のために、抗ＴＲＥＭ２抗体を、当該技術分野で周知の薬学的に許容可能な担体と組み合わせることにより製剤化することができる。そのような担体によって、処置される患者の経口摂取用に、化合物を錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、エマルション、親油性懸濁液及び親水性懸濁液、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁液などとして製剤化することが可能となる。経口使用のための医薬調製物は、化合物と固体賦形剤とを混合し、任意選択で得られた混合物を粉砕し、顆粒の混合物を加工して、所望により適切な助剤を添加後に錠剤または糖衣錠芯を得ることにより、得ることができる。好適な賦形剤としては、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖類などの充填剤；例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース調製物、及び／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）が挙げられる。所望により、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤を添加することができる。
抗ＴＲＥＭ２抗体を、例えば、ボーラス注射または持続注入によるなど、注射による非経口投与用に製剤化することができる。注射の場合、化合物（複数可）を水性または非水性溶媒、例えば、植物性または他の類似の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコールに溶解、懸濁または乳化させることによって、ならびに必要に応じて、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤及び保存剤などの従来の添加剤とともに、調製物に製剤化することができる。いくつかの実施形態では、化合物は、水溶液、例えば、ハンクス液、リンゲル液、または生理食塩水緩衝液などの生理学的に適合性のある緩衝液中で製剤化することができる。注射用製剤は、保存剤を添加した単位剤形、例えばアンプルまたは複数回用量の容器で提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルションなどの形態をとることができ、また、懸濁剤、安定剤、及び／または分散剤などの製剤化剤を含有することができる。
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、例えば、活性剤を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックス中の徐放性製剤、制御放出製剤、持続放出製剤、時限放出製剤または遅延放出製剤での送達用に調製される。様々な種類の徐放性材料が確立されており、当業者に周知である。現在の持続放出製剤には、フィルムコーティング錠剤、多粒子またはペレット系、親水性または親油性の材料を使用したマトリックス技術、及び孔形成性賦形剤を含むワックス基剤の錠剤が含まれる。徐放性送達系は、その設計に応じて、数時間または数日にわたって、例えば、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１６時間、２０時間、または２４時間以上にわたって化合物を放出することができる。一般に、徐放性製剤は、天然または合成ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などのポリマー性ビニルピロリドン；カルボキシビニル親水性ポリマー；メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、及びヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの疎水性及び／または親水性ヒドロコロイド；ならびにカルボキシポリメチレンを使用して調製することができる。
通常、インビボ投与に使用するための医薬組成物は、滅菌されている。滅菌は、当該技術分野において公知の方法、例えば、加熱滅菌、蒸気滅菌、滅菌濾過、または照射によって実現され得る。
本開示の医薬組成物の投与量及び望ましい薬物濃度は、想定される特定の用途に応じて変動し得る。適切な投与量または投与経路の決定は、十分に当業者の技術範囲内である。好適な投与量は、前述のセクションＶＩにも記載されている。
キット
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片を含むキットが提供される。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、前述のセクションＩＩＩに記載されている抗体またはその抗原結合断片である。
いくつかの実施形態では、キットは、１つ以上の追加の治療剤をさらに含む。例えば、いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体を含み、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病の処置に使用するための１つ以上の追加の治療剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、神経変性疾患の認知症状または行動症状の処置に使用するための薬剤（例えば、抗うつ薬、ドパミンアゴニスト、または抗精神病薬）である。いくつかの実施形態では、治療剤は、神経保護剤（例えば、カルビドパ／レボドパ、抗コリン剤、ドパミン作用薬、モノアミンオキシダーゼＢ（ＭＡＯ－Ｂ）阻害剤、カテコール－Ｏ－メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害剤、グルタミン酸作動性薬、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、カンナビノイド、カスパーゼ阻害剤、メラトニン、抗炎症剤、ホルモン（例えば、エストロゲンもしくはプロゲステロン）、またはビタミン）である。
いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ抗体を含み、ｓＴＲＥＭ２レベルを測定するための１つ以上の試薬をさらに含む。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ抗体を含み、ＴＲＥＭ２活性を測定するための（例えば、Ｓｙｋリン酸化を測定するための）１つ以上の試薬をさらに含む。
いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法の実施のための指示書（すなわち、プロトコル）を含む説明用資料（例えば、前述のセクションＶＩに記載されている治療方法のためのキットを使用するための説明書）をさらに含む。説明用資料は通常、書面または印刷物で構成されるが、そのようなものに限定されない。そのような説明書を保管することができ、それらをエンドユーザーに伝達することができる任意の媒体が、本開示により企図される。そのような媒体としては、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、磁気テープ、磁気カートリッジ、磁気チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤ－ＲＯＭ）などが挙げられるが、これらに限定されない。そのような媒体には、そのような説明用資料を提供するインターネットサイトへのアドレスが含まれ得る。
ＶＩＩＩ．実施例
本発明を、具体的な実施例によってより詳細に説明する。以下の実施例は、例証目的で提示されるにすぎず、決して本発明を限定するようには意図されていない。
実施例１．抗ＴＲＥＭ２抗体の作製及び初期特徴付け
マウスＦｃが融合したヒトＴＲＥＭ２ ＥＣＤの組換え発現及び精製
ヒトＴＲＥＭ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ ＩＤ－Ｑ９ＮＺＣ２）の外部ドメイン（残基１９～１７２）を、Ｎ末端領域にマウスＩｇＧカッパ鎖Ｖ－ＩＩＩ、アミノ酸１～２０（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ ＩＤ－Ｐ０１６６１）に由来する分泌シグナル、及びＣ末端領域にマウスＦｃタグ（ＴＲＥＭ２ ＥＣＤとＦｃの間にＧＧＧＧＳ（配列番号６４）を有する）を含めて、ｐＲＫベクターにサブクローニングした。
Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｋｉｔを製造業者の指示に従って使用して、精製したプラスミドをＥｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）にトランスフェクトした。Ｎ－結合型グリカンの成熟を阻害し、グリコシル化の不均一性を低減させるために、高マンノシダーゼＩの阻害剤であるキフネンシン（Ｓｉｇｍａ）をトランスフェクション直後に１μｇ／ｍＬの濃度で培養物に添加した。トランスフェクトした細胞を、オービタルシェーカー（Ｉｎｆｏｒｓ ＨＴ Ｍｕｌｔｉｔｒｏｎ）内で、６％ＣＯ２の湿潤雰囲気中、３７℃、１２５ｒｐｍでインキュベートした。トランスフェクションの１６時間後に、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｒ１及び２を細胞に添加し、培地上清をトランスフェクションの９６時間後に回収した。清澄化した上清にＥＤＴＡ不含プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）を補充して、－８０℃で保管した。
ｒｈＴＲＥＭ２－Ｆｃの単離のために、清澄化した培地上清をＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティーカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）にロードし、２００ｍＭのアルギニン及び１３７ｍＭのコハク酸塩緩衝液（ｐＨ５．０）で洗浄した。融合タンパク質を、ｐＨ３．０の１００ｍＭ ＱＢクエン酸塩緩衝液及び５０ｍＭ ＮａＣｌ中に溶出させた。溶出直後に、ｐＨ８．０の１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液をタンパク質溶液に添加してｐＨを中和した。Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）でのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって、タンパク質凝集体を分離した。ＳＥＣ移動相の緩衝液を、タンパク質保存緩衝液でもあるｐＨ８．０の２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１００ｍＭ ＮａＣｌ及び５０ｍＭアルギニンで保持した。全てのクロマトグラフィーステップを、ＡＫＴＡ ｐｕｒｅシステムまたはＡＫＴＡ Ａｖａｎｔシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）により実施した。
Ｈｉｓタグ付きＴＲＥＭ２ ＥＣＤの組換え発現及び精製
ＴＲＥＭ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＮＺＣ２）の外部ドメイン（残基１９～１７２）を、Ｎ末端領域にマウスＩｇカッパ鎖Ｖ－ＩＩＩ、アミノ酸１～２０（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ ＩＤ－Ｐ０１６６１）に由来する分泌シグナル、及びＣ末端領域に６Ｘ－Ｈｉｓタグ（配列番号６５）を含めて、ｐＲＫベクターにサブクローニングした。配列決定によって挿入を確認し、マキシプレッププラスミド精製を実施した。
Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｋｉｔを製造業者の指示に従って使用して、精製したプラスミドをＥｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）にトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞を、オービタルシェーカー（Ｉｎｆｏｒｓ ＨＴ Ｍｕｌｔｉｔｒｏｎ）内で、６％ＣＯ２の湿潤雰囲気中、３７℃、１２５ｒｐｍでインキュベートした。トランスフェクションの１６時間後に、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｒ１及び２を細胞に添加し、培地上清をトランスフェクションの９６時間後に回収した。
回収した培地にｐＨ８．０の１Ｍイミダゾールを１０ｍＭの最終濃度まで補充し、孔径０．４ミクロンのＮａｌｇｅｎｅ（商標）Ｒａｐｉｄ－Ｆｌｏｗ（商標）使い捨てフィルターユニット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して濾過した。ＨｉｓＰｕｒ（商標）Ｎｉ－ＮＴＡ Ｒｅｓｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）をＭＱ水で洗浄し、ロード緩衝液（ｐＨ８．０の２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、及び１０ｍＭイミダゾール）で平衡させた。グラビティフロー（ｇｒａｖｉｔｙ ｆｌｏｗ）法を使用してアフィニティー精製を実施した。回収した培地を樹脂にロードし、非特異的に結合したタンパク質を５０ｍＭ及び１００ｍＭイミダゾールを補充したロード緩衝液で洗浄した。結合したＨｉｓタグ付きＴＲＥＭ２外部ドメインをｐＨ８．０の２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、及び２００ｍＭイミダゾールで溶出させた。溶出したタンパク質をＡｍｉｃｏｎ １０ｋＤａコンセントレータを使用して濃縮し、濃縮したタンパク質をＡＫＴＡ Ａｖａｎｔシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用したゲル濾過クロマトグラフィーでさらに精製した。このタンパク質を、１×ＰＢＳで平衡させたＨｉＬｏａｄ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ １６／６００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）カラムにロードし、１×ＰＢＳを泳動用緩衝液として使用して溶出させ分画した。溶出画分を、変性及び天然条件下でのポリアクリルアミド（ＰＡＧＥ）ゲルでの電気泳動によって分析した。溶出画分を、分析用サイズ排除クロマトグラフィー及びインタクトタンパク質質量測定によりさらに特徴付けた。ＰＡＧＥ及び分析的特徴付けからの結果を使用して、高度にグリコシル化されたタンパク質画分をプールし、これらを分取して－８０℃で保管した。
抗体の作製
げっ歯類（マウス及びラット）を、ｒｈＴＲＥＭ２－Ｆｃ免疫原または完全長Ｔｒｅｍ２受容体を発現するＢＷＺ細胞を用いた標準プロトコルを使用して免疫化した。様々な時点で採取した血清を使用して、免疫化全体を通して力価を測定した。抗原特異的免疫応答の検出を、ｒｈＴＲＥＭ２－Ｆｃ免疫原及び完全長ＴＲＥＭ２を発現するＢＷＺ生細胞を用いたフローサイトメトリーを使用して実施した。候補抗体の選択基準には、フローサイトメトリーで検出したげっ歯類抗体の産生及びＴＲＥＭ２への結合の特異性を含めた。抗体分泌細胞を、脾臓、リンパ節、及び骨髄を含む動物の免疫組織から単離した。
単一細胞懸濁液を分析し、分泌された抗体の結合特性を判定した。抗体分泌細胞をマイクロ流体デバイスにロードし、ナノリットル容量の反応チャンバー中に単離し、蛍光及び明視野画像ベースの顕微鏡アッセイを使用して分泌された抗体の検出を可能にした（例えば、米国特許第９，１８８，５９３号を参照されたい）。抗原をコートしたマイクロビーズに結合する抗体の検出、ビーズ上に固定化した抗体に結合する可溶性蛍光標識抗原の検出、及び細胞表面発現抗原に結合する抗体の検出を含む、結合アッセイを実施した。細胞表面発現抗原には、細胞表面に提示された組換え型と天然型の両方の抗原が含まれた。
画像分析を使用して、所望の特性を有する抗体を産生する単一細胞の存在を示している陽性の蛍光シグナルを呈するチャンバーを同定し、チャンバーの内容物を回収して、３８４ウェルプレート中で溶解した（例えば、米国特許第１０，０８７，４０８号を参照されたい）。次いで、単一細胞溶解物をＲＴ－ＰＣＲに供し、重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を増幅した。次いで、得られたアンプリコンを配列決定し、選択した単一細胞から対形成した重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のｃＤＮＡ配列を決定した。得られた配列を手動で検査及び分析して、配列多様性及び体細胞超変異を判定した。スクリーニングデータ及び配列多様性に基づいて、発現のために配列を選択した。発現した抗体を試験して、抗原結合特異性を確認した。
抗ＴＲＥＭ２抗体の一次スクリーニング
抗体の一次スクリーニングを、ＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ２９３細胞、野生型ｉＰＳＣ、及びＴＲＥＭ２ノックアウトｉＰＳＣで以下の通り実施した。
１．ＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ細胞におけるＴＲＥＭ２結合に関するスクリーニング
ヒトＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２を安定して発現するＨＥＫ２９３細胞株を、野生型ヒトＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２を発現するベクター、ならびにＤＡＰ１２のみを発現するベクターでそれぞれ細胞をトランスフェクトすることにより作製した。安定発現クローンを選択し、細胞表面ＴＲＥＭ２の発現をフローサイトメトリーで評価した。ＡＰＣコンジュゲートラット抗ヒト／マウス－ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号ＭＡＢ１７２９１）を使用して、表面ＴＲＥＭ２の発現を検出した。最も高い野生型ＴＲＥＭ２の発現レベルを示すクローンを選択し、「ＨＥＫ２９３－Ｈ６」と命名した。ＤＡＰ１２を安定して発現しているクローンをウエスタンブロットにより分析し、選択したクローンを「ＨＥＫ２９３－ＤＡＰ１２＃１」と命名した。
ヒトＴＲＥＭ２を高発現するＨＥＫ２９３（ＨＥＫ２９３－Ｈ６）及びＧＦＰを高発現するＨＥＫ２９３（Ｂ５）を０．０５％トリプシンにより回収し、３７℃で２時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を遠心分離し、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ）で２回洗浄した。混合細胞を、ヒトＴｒｕｓｔａｉｎ ＦｃＸ溶液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２２３０２）を含むＦＡＣＳ緩衝液に、細胞株あたり１０６／ｍＬの密度で再懸濁させた。混合した細胞株を９６ウェル丸底プレートにウェルあたり２００，０００細胞で播種し、室温で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を遠心分離し、約０～２００ｎＭの用量設定の抗ＴＲＥＭ２抗体とともに氷上で４５分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を遠心分離し、ＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄した。次いで、細胞を二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号１０９－６０６－０８８、１：８００希釈）とともに、氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させ、フローサイトメトリー（ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）により分析し、各試料につき３０，０００事象を得た。細胞あたりの平均蛍光強度をＦｌｏｗＪｏソフトウェアで算出し、用量反応結合曲線の作成に使用した。
図１は、ＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞の細胞表面受容体ＴＲＥＭ２に結合する例示的な抗体の代表的な結果を示す。
ＴＲＥＭ２依存性ｐＳｙｋシグナル伝達の活性化の評価
ＴＲＥＭ２依存性ｐＳｙｋシグナル伝達の活性化を、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒの市販のＡｌｐｈａＬｉｓａアッセイを使用して、ヒトマクロファージ細胞中またはＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞中で測定した。
７０％ＤＯＰＣ及び３０％ＰＯＰＳを含有する脂質小胞の使用を含む全ての実験では、脂質小胞を実験から２週間以内に次のように調製した：７ｍｇのＤＯＰＣ（１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）及び３ｍｇのＰＯＰＳ（１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン）をガラスバイアル内のクロロホルム中に合わせ、Ｎ２ガス流下で１～２時間、または完全に乾燥するまで乾燥させた。脂質混合物を１ｍＬ ＨＢＳＳに（最終脂質濃度が約１０ｍｇ／ｍＬになるように）再懸濁させ、２～３分間ボルテックスした。続いて、脂質懸濁液を、１つの１００ｎｍ孔径の膜で構成されたＡｖａｎｔｉミニエクストルーダを使用して押し出し、１０ｍｇ／ｍＬで小さな単層小胞を形成した。
１．細胞への抗体の投与
アッセイの前日、ヒトマクロファージ細胞またはＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞を、ポリ－Ｄ－リジンでコーティングした９６ウェルプレートに、それぞれ１００，０００細胞／ウェルまたは４０，０００細胞／ウェルで播種した。抗体をＰＢＳで３００ｎＭから希釈を開始し、段階間で３倍に希釈した１０段階の段階希釈の用量設定を行った。アンタゴニストの用量反応曲線については、７０％のＤＯＰＣ及び３０％のＰＯＰＳを最終濃度１ｍｇ／ｍＬで含有する脂質小胞も抗体／ＰＢＳ混合物に含めた。Ｂｉｏｔｅｋ４０５／４０６プレート洗浄機を使用して細胞をＨＢＳＳで３回洗浄した後、Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｎｉｍｂｕｓリキッドハンドラーを使用してウェルあたり５０μＬの抗体／ＰＢＳ（小胞を含むかまたは含まない）溶液を添加した。次いで、細胞プレートを３７℃のインキュベータに５分間移した。プレートをはじいてリポソーム／抗体溶液を除去し、リキッドハンドラーを使用して１μＭのＰＭＳＦを含有する４０μＬの溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＣＳＴ）を添加した。次いで、溶解物を－８０℃で凍結するか、またはＡｌｐｈａＬｉｓａアッセイで直ちにアッセイした。
ヒトマクロファージ細胞を以下の通りアッセイ用に調製した。ヒト単球を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒト単球濃縮カクテルプロトコル（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、参照＃１５０６８）に従って新鮮血液から単離した。単離した単球を洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）で洗浄し、１０ｍＬのＡＣＫ溶解緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ１０４９２）に再懸濁させ、赤血球を溶解させた。２０ｍＬの洗浄緩衝液を添加して細胞溶解を停止させ、試料を遠心分離し、培地（ＲＰＭＩ、１０％Ｈｙｃｌｏｎｅ ＦＢＳ、１％ピルビン酸ナトリウム、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％非必須アミノ酸、及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン）でもう一度洗浄した。次いでヒト単球を、２５０ｍＬフラスコで、５０ｎｇ／ｍＬのヒト組換えＭ－ＣＳＦ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号ＰＨＣ９５０１）の存在下の培地中でマクロファージ細胞に分化させた。新鮮ヒトＭ－ＣＳＦを３日目に添加し、続いてヒトマクロファージを５日目に回収してアッセイに使用した。
２．ＡｌｐｈａＬｉｓａアッセイ
Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ｐＳｙｋ ＡｌｐｈａＬｉｓａキットの標準プロトコルを使用して、細胞溶解物をｐＳｙｋについてアッセイした。簡潔に述べると、１０μＬのライセート／ウェルを不透明な白色の３８４ウェルＯｐｔｉｐｌａｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に移した。次に、５μＬのＡｃｃｅｐｔｏｒ Ｍｉｘ（アクセプタービーズの使用溶液（ｗｏｒｋｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を含有する）をウェルごとに添加し、続いてプレートをホイルシールで密封し、室温で１時間インキュベートした。続いて、５μＬのＤｏｎｏｒ Ｍｉｘ（ドナービーズの使用溶液を含有する）を、減光条件下で各ウェルに添加した。プレートを再度密封し、室温で１時間インキュベートした。最後に、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーでＡｌｐｈａＬｉｓａの設定を使用してプレートを読み取った。
図２は、初代ヒトマクロファージ細胞におけるｐＳｙｋシグナル活性化に関する代表的な抗ＴＲＥＭ２抗体の用量反応曲線を示す。塗りつぶした黒丸（●）は、抗ＴＲＥＭ２抗体を表し、白丸（○）はアイソタイプ対照を表す。各曲線は３つの独立した実験の平均値を表しており、ＥＣ５０値を以下の表１に示す。結果は、抗ＴＲＥＭ２抗体が初代ヒトマクロファージのＴＲＥＭ２－ＤＡＰ１２ ＩＴＡＭシグナル伝達を活性化することができることを示す。
ｉＰＳＣミクログリアにおけるリポソーム反応アッセイ
ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体及びホスホチジルセリン含有（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）リポソームは、ＴＲＥＭ２を介してｐＳｙｋを活性化する。リポソーム存在下でのＳｙｋシグナル伝達に対する抗ＴＲＥＭ２抗体の作用を理解するために、ｉＰＳＣミクログリアを抗ＴＲＥＭ２抗体で前処理した後、細胞内のリポソーム反応を評価した。
アッセイの前に、ｉＰＳＣをまず、市販のキット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＳＴＥＭｄｉｆｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｋｉｔ）を使用して、造血前駆細胞（ＨＰＣ）に分化させた。ＨＰＣを初代ヒトアストロサイトを含有するプレートに移し、１４～２１日間共培養した。共培養物中の浮遊細胞が主に（＞８０％）成熟ミクログリアであると同定してから、ミクログリアをアッセイに使用した。
アッセイの２日前、ヒトｉＰＳＣミクログリアを、ポリ－Ｄ－リジンでコーティングした９６ウェルプレートに３０，０００細胞／ウェルで播種した。ＩＭＤＭ、１０％Ｈｙｃｌｏｎｅ ＦＢＳ、及び１％Ｐｅｎ－ｓｔｒｅｐを含有する培地で抗体を１００ｎＭに希釈し、抗体溶液を３７℃で２４時間または５分間細胞に投与した。続いて、細胞をＨＢＳＳで１回洗浄し、次いで、７０％のＤＯＰＣ及び３０％のＰＯＰＳを１ｍｇ／ｍＬで含有する脂質小胞を３７℃で５分間投与した。プレートをはじいてリポソーム溶液を除去し、１μＭのＰＭＳＦを含有する３０μＬの溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＣＳＴ）を添加した。次いで、溶解物を－８０℃で凍結するか、またはＡｌｐｈａＬｉｓａアッセイで直ちにアッセイした。Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ｐＳｙｋ ＡｌｐｈａＬｉｓａキットの標準プロトコルを使用して、細胞溶解物を前述の通りにｐＳｙｋについてアッセイした。
図３Ａ及び図３Ｂは、抗ＴＲＥＭ２抗体とインキュベートし続いて脂質小胞を投与して細胞中のリポソーム反応を評価した、ヒトｉＰＳＣミクログリアにおけるｐＳｙｋシグナルの活性化を示す。白色バーは、対照としての、脂質小胞の代わりにＰＢＳとのインキュベーションを示す。データは、２～７回の独立した実験の平均値及び標準誤差を表す。図３Ａは、抗体で５分間で前処理したｉＰＳＣミクログリアのデータを示し、図３Ｂは、抗体で２４時間前処理したｉＰＳＣミクログリアのデータを示す。結果は、ヒトｉＰＳＣミクログリアを抗ＴＲＥＭ２抗体で前処理することにより、リポソームにより誘発されるホスホＳｙｋシグナルがアイソタイプ対照と比較して増大することを示しており、これは、抗ＴＲＥＭ２抗体が、細胞内のｐＳｙｋシグナル伝達の脂質活性化を妨げるのではなく、代わりに増強することを示す。
ヒトＴＲＥＭ２ ＮＦＡＴレポーターアッセイ
ヒトＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２を発現するＪｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ細胞株を以下の通りに作製した。Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴレポーター細胞をヒトＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２のレンチウイルスベクター発現に感染させ、１０％ＨｙＣｌｏｎｅ ＦＢＳ及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩで培養した。安定発現クローンを、ピューロマイシン及びゼオシンの存在下で選択した。細胞表面ＴＲＥＭ２の発現を、ビオチン化抗ＴＲＥＭ２抗体（配列番号６６及び６７）を使用してフローサイトメーターによって評価した。最も高い野生型ＴＲＥＭ２の発現レベルを示したクローンを選択し、以下に記載されるアッセイのために、ｈＴｒｅｍ２／ＮＦＡＴ Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞と命名した。
アッセイの前日、９６ウェルプレートに抗ＴＲＥＭ２抗体またはアイソタイプ対照を、０～５００ｎＭの用量設定（４５μＬ／ウェル、合計１２段階）で予めコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。一晩インキュベートした後、予めコーティングしたプレートをＰＢＳで２回洗浄し、次いで２００μＬの新鮮培地（１０％Ｈｙｃｌｏｎｅ ＦＢＳ及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ）中のｈＴｒｅｍ２／ＮＦＡＴ Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞（１０６細胞／ウェル）をプレートにロードした。プレートを３７℃で２４時間インキュベートした後、５０μＬ／ウェルのｑｕａｎｔｌｕｃｉａ溶液を各ウェルに添加して十分に混合した。分析のために、２０μＬの溶液を各ウェルから取り出し、ルミノメーター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）でシグナルを測定するために３８４ウェルの白プレートに移した。
図４は、レポーター遺伝子ルシフェラーゼの検出によって測定されたＮＦＡＴの活性化に関する代表的な抗ＴＲＥＭ２抗体の用量反応曲線を含んでおり、活性化のＥＣ５０値を以下の表１に示す。図４の結果は、アイソタイプ対照と比較して、候補抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＮＦＡＴ活性化と、転写応答を活性化するのに十分な下流シグナル伝達とを誘導することが可能であったことを示す。
ヒトマクロファージ細胞における生存アッセイ
ヒト単球を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒト単球濃縮カクテルプロトコル（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１５０６８）に従って単離した。単離した単球を洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）で洗浄し、１０ｍＬのＡＣＫ溶解溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ１０４９２）に再懸濁させ、赤血球を溶解させた。２０ｍＬの洗浄緩衝液を添加して溶解を停止させた。細胞懸濁液を遠心分離し、培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ＋ペニシリン／ストレプトマイシン）で１回洗浄した。細胞を１０６細胞μＬ／ｍＬの密度で培地に再懸濁させ、以下に記載する生存アッセイに使用した。
アッセイの前日、９６ウェルプレートに抗ＴＲＥＭ２抗体またはアイソタイプ対照を、０～２００ｎＭの用量設定（４５μＬ／ウェル、合計１２段階）で予めコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。一晩インキュベートした後、予めコーティングしたプレートをＰＢＳで２回洗浄し、次いで低濃度のヒトＭ－ＣＳＦ（５ｎｇ／ｍＬ、Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号ＰＨＣ９５０１）の存在下で、ヒト単球（１０５細胞／ウェル）をプレートにロードした。３７℃で５日後、培地を吸引し、１００μＬ ＰＢＳ＋１００μＬ Ｃｅｌｌｔｉｔｅｒ－ｇｌｏ培地（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７１）を各ウェルに添加した。１０分間のインキュベーション後、細胞培地をルミノメーターの使用に適合したマルチウェルプレートに移し、細胞生存率に関する発光を記録した。
図５は、低Ｍ－ＣＳＦ条件下でのヒトマクロファージ細胞における細胞生存の代表的な抗ＴＲＥＭ２抗体の用量反応曲線を示しており、生存に関するＥＣ５０値を以下の表１に示す。結果は、ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体が、低Ｍ－ＣＳＦ条件下で、細胞機能を調節してヒトマクロファージ細胞の生存を促進するための転写応答を誘導するのに十分な、受容体活性化能力を有することを示す。
抗体のＢｉａｃｏｒｅカイネティック測定
表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）８Ｋ機器）を使用して、ヒト及びカニクイザルＴＲＥＭ２ ＥＣＤについて抗ＴＲＥＭ２抗体の親和性を測定した。抗ＴＲＥＭ２抗体を、Ｈｕｍａｎ Ｆａｂ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｋｉｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号２８９５８３２５）を使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号２９１４９６０４）上で捕捉した。組換えヒトＴＲＥＭ２または組換えカニクイザルＴＲＥＭ２の３倍段階希釈液を、３０μＬ／分の流量で注入した。抗体の結合を３００秒間モニタリングした後、ＨＢＳ－ＥＰ＋泳動用緩衝液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号ＢＲ１００６６９）中で６００秒以上抗体の解離をモニタリングした。結合応答は、空のフローセルからＲＵ値を差し引くことによって補正した。カイネティクス分析には、ｋｏｎ及びｋｏｆｆの同時フィッティングの１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを使用した。ＫＤ結合値を以下の表１に示す。
（表１）抗体のインビトロ特性
ＮＢ：結合の検出なし
ＮＤ：未測定
実施例２．ヒトマクロファージ細胞における可溶性ＴＲＥＭ２レベル及び食作用挙動の調節
ヒトマクロファージにおける可溶性ＴＲＥＭ２用量反応アッセイ
ヒトマクロファージ細胞を前述の通りに作製した。アッセイの前日、ヒトマクロファージ細胞を、ポリ－Ｄ－リジンでコーティングした９６ウェルプレートに１００，０００細胞／ウェルで播種した。抗体を、ヒトマクロファージ培地（ＲＰＭＩ、１０％Ｈｙｃｌｏｎｅ ＦＢＳ、１％ピルビン酸ナトリウム、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％非必須アミノ酸、及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン）で３００ｎＭから希釈を開始し、段階間で３倍に希釈した１０段階の段階希釈の用量設定を行った。細胞に抗体を投与して２４時間インキュベートした。抗体とのインキュベーション後、プレートをスピンダウンしてデブリを除去し、可溶性ＴＲＥＭ２の測定のために上清を採取した。
可溶性ＴＲＥＭ２を以下の通り測定した。簡潔に述べると、ＭＳＤスモールスポットストレプトアビジンプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を、ビオチン化抗ｈＴＲＥＭ２ポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で４℃で一晩コーティングした。次いで、プレートを室温で１時間、３％ＢＳＡ／ＴＢＳＴでブロッキングした。試料及び標準物質を、ＳＤＳ含有緩衝液中で５分間、９５℃に加熱することにより調製した。調製した試料及び標準物質を、ブロッキング後、アッセイプレートにおいて３％ＢＳＡ／ＴＢＳＴで１：１０に希釈した。３％ＢＳＡ／ＴＢＳＴで希釈したＴＲＥＭ２－Ｈｉｓタンパク質を、絶対定量の標準物質として使用した。室温で２時間インキュベートした後、プレートをＴＢＳＴで洗浄した。一次検出抗体であるスルホタグ付きヤギ抗ヒトＴＲＥＭ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を３％ＢＳＡ／ＴＢＳＴで希釈し、プレートに添加して、室温で１時間インキュベートした。ＴＢＳＴで洗浄後、２×ＭＳＤ読み取り用緩衝液Ｔを使用してＭＳＤプレートを発色させ、続いてＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒプレートリーダーを使用して検出した。Ｐｒｉｓｍ７．０ソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ）を使用して標準曲線をフィッティングすることにより、ＭＳＤ値をｓＴＲＥＭ２の絶対定量に変換した。ＴＲＥＭ２シェディングの調節を、培地中で特定の抗ＴＲＥＭ２抗体を含まずに培養した細胞からの可溶性ＴＲＥＭ２に対して正規化した、抗ＴＲＥＭ２試験抗体とともにインキュベートした細胞からの可溶性ＴＲＥＭ２の比として表した。
図６は、抗ＴＲＥＭ２抗体濃度の関数としての、代表的な可溶性ＴＲＥＭ２レベル（ｓＴＲＥＭ２）を示す。結果は、抗ＴＲＥＭ２抗体が、一晩の処理後にヒトマクロファージ細胞中のｓＴＲＥＭ２レベルを用量依存的に減少させることができることを示す。
ヒトマクロファージにおける食作用アッセイ
ヒトマクロファージ細胞を前述の通りに作製した。アッセイの２日前、ヒトマクロファージ細胞を、ポリ－Ｄ－リジンでコーティングした９６ウェルプレートに８０，０００細胞／ウェルで播種した。ＲＰＭＩ、１０％Ｈｙｃｌｏｎｅ ＦＢＳ、１％ピルビン酸ナトリウム、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％非必須アミノ酸、及び１％ペニシリン－ストレプトマイシンを含有する培地中に、抗体を１００ｎＭで希釈した。次いで、３７℃で２４時間、細胞に抗体溶液を投与した。次に、細胞核及び細胞膜を１０分間染色した後、ｐＨｒｏｄｏ－ミエリンを５μｇ／ｍＬで添加した。続いて細胞を３７℃で４時間インキュベートした。ｐＨｒｏｄｏ蛍光を、ハイコンテント共焦点顕微鏡（Ｏｐｅｒａ Ｐｈｏｅｎｉｘ）で細胞ごとに測定し、蛍光強度を機器ソフトウェアで定量化した。
ｐＨｒｏｄｏ－ミエリンを、Ｓａｆａｉｙａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６，Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １９（８）：９９５－９９８）に記載されている方法を使用して、野生型Ｃ５７Ｂｌ／６マウス脳（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）からミエリンを精製することによって調製した。精製後、ミエリンをＰＢＳに再懸濁させ、ＤＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ２（ＢｉｏＲａｄ、カタログ番号５０００１１２）を使用して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度に調整した。マイクロスケール標識キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ｐ３５３６３）を製造業者の指示に従って使用して、ｐＨｒｏｄｏ－ｒｅｄでミエリンをタグ付けした。ミエリンを１０，０００ｇで５分間ペレット化して上清を除去し、これらのステップを３～５回繰り返すことにより、過剰な標識を除去した。
図７は、ヒトマクロファージ細胞における食作用アッセイの代表的な結果を示す。ＴＲＥＭ２処理マクロファージ細胞の顕微鏡画像中でｐＨｒｏｄｏ蛍光を検出し定量化して、測定値をアイソタイプ対照の測定値と比較することによってミエリンの食作用を測定した。結果は、例示的なＴＲＥＭ２アゴニスト抗体で処理したヒトマクロファージが、アイソタイプ対照と比較してｐＨｒｏｄｏ－ミエリン食作用を増大させることを示しており、これは、抗ＴＲＥＭ２抗体が細胞中のミエリンデブリの有益なクリアランスを可能にすることができることを示す。
実施例３．ｉＰＳＣミクログリアにおける脂質蓄積の調節
脂質貯蔵アッセイ
アッセイの前に、ｉＰＳＣをまず、市販のキット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＳＴＥＭｄｉｆｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｋｉｔ）を使用して、造血前駆細胞（ＨＰＣ）に分化させた。ＨＰＣを初代ヒトアストロサイトを含有するプレートに移し、１４～２１日間共培養した。共培養物中の浮遊細胞が主に（＞８０％）成熟ミクログリアであると同定してから、ミクログリアをアッセイに使用した。
細胞（ｉＰＳＣミクログリア、３０，０００細胞／ウェル）を、完全血清培地入りのＰＤＬコーティング９６ウェルプレートに播種した。３７℃で２４時間後、精製した非標識ミエリン（最終濃度５０μｇ／ｍＬ、Ｓａｆａｉｙａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６，Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １９（８）：９９５－９９８）に記載されている方法を使用して野生型Ｃ５７Ｂｌ／６マウス脳（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）から精製した）をウェルに添加した。３７℃で２４時間脂質処理した後、抗ＴＲＥＭ２抗体またはＲＳＶ対照を１００ｎＭの最終濃度までウェルに添加した。細胞を３７℃でさらに４８～７２時間インキュベートしてから、細胞を採取またはイメージングした。ミエリンウォッシュアウト実験では、２４時間のインキュベーション期間後にミエリンを除去し、その後の２４～４８時間のインキュベーションのために抗体含有培地と交換した。
Ｎｉｌｅ Ｒｅｄイメージングでは、上清を除去し、１μＭのＮｉｌｅ Ｒｅｄ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ｎ１１４２）及び１滴／ｍＬのＮｕｃｂｌｕｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ｒ３７６０５）を含有する生細胞イメージング緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ａ１４２９１ＤＪ）中で、細胞を３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション期間後、染色溶液を除去し、細胞を４％パラホルムアルデヒドで固定した。次いで、Ｏｐｅｒａ Ｐｈｏｅｎｉｘハイコンテント共焦点イメージャーでＡｌｅｘａ５６８及びＤＡＰＩ照射設定を使用して、細胞をイメージングした。機器に付属のＨａｒｍｏｎｙソフトウェアのスポット検出アルゴリズムを使用して、脂質スポットを分析した。図８Ａは、ビヒクルまたはミエリン（最終濃度５０μｇ／ｍＬ）のいずれかで２４時間処理した後、アイソタイプ対照または例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体（ＣＬ００２０１２３）と７２時間インキュベートしたｉＰＳＣミクログリアの代表的な顕微鏡画像を含む。図８Ｂは、図８Ａの顕微鏡画像で使用したものと同じ抗ＴＲＥＭ２抗体の代表的な棒グラフである。細胞ごとの総スポット強度によってＮｉｌｅ Ｒｅｄ染色の定量化を実施し、データを、同じ顕微鏡試料の異なる視野における３回の技術的反復試験の平均値及び標準偏差として示す。
リピドミック分析のために、細胞を氷上に保持しながらＰＢＳで１回洗浄した。１：１００の内部標準物質を含有する７０μＬ容量の９：１メタノール：水溶液を、９６ウェルプレート中の細胞に添加した。プレートを振盪器で４℃、１２００ｒｐｍで２０分間撹拌した後、３００×ｇで５分間遠心分離した。上清の５０μＬ試料をＬＣＭＳバイアルに移し、機器で分析するまで－８０℃で保持した。
エレクトロスプレー質量分析法（ＱＴＲＡＰ ６５００＋Ｓｃｉｅｘ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）と連結した液体クロマトグラフィー（Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ Ｘ２システム、Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ，Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＭＤ，ＵＳＡ）によって、脂質レベルを分析した。各分析のために、試料５μＬを、５５℃で０．２５ｍＬ／分の流量を用いてＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ、２．１×１００ｍｍカラム（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）に注入した。陽イオン化モードの場合、移動相Ａを１０ｍＭギ酸アンモニウム＋０．１％ギ酸を含む６０：４０のアセトニトリル／水（ｖ／ｖ）で構成し、移動相Ｂを１０ｍＭギ酸アンモニウム＋０．１％ギ酸を含む９０：１０のイソプロピルアルコール／アセトニトリル（ｖ／ｖ）で構成した。陰イオン化モードの場合、移動相Ａを１０ｍＭ酢酸アンモニウムを含む６０：４０のアセトニトリル／水（ｖ／ｖ）で構成し、移動相Ｂを１０ｍＭ酢酸アンモニウムを含む９０：１０のイソプロピルアルコール／アセトニトリル（ｖ／ｖ）で構成した。勾配を、０．０～８．０分で４５％Ｂから９５％Ｂへ、８．０～９．０分を９９％Ｂで、９．０～９．１分で４５％Ｂへ、９．１～１０．０分を４５％Ｂ、のようにプログラムした。エレクトロスプレーイオン化を、次の設定：カーテンガス：３０、コリジョンガス：中等度に設定、イオンスプレー電圧：５５００（陽性モード）または４５００（陰性モード）、温度：２５０℃（陽性モード）または６００℃（陰性モード）、イオン源ガス１：５０、イオン源ガス２：６０、を適用して陽イオンモードまたは陰イオンモードのいずれかで実施した。Ａｎａｌｙｓｔ １．６．３（Ｓｃｉｅｘ）を、多重反応モニタリングモード（ＭＲＭ）で使用して、以下のパラメータ：滞留期間（ｍｓｅｃ）及びコリジョンエネルギー（ＣＥ）、デクラスタリング電位（ＤＰ）：８０、エントランス電位（ＥＰ）：１０（陽性モード）または－１０（陰性モード）、及びコリジョンセルイグジット電位（ＣＸＰ）：１２．５（陽性モード）または－１２．５（陰性モード）を用い、データ取得を実施した。非内在性の内部標準物質の混合物を使用して、脂質を定量化した。脂質を、それらの保持時間及び市販の参照標準物質（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ，ＵＳＡ）のＭＲＭ特性に基づいて同定した。
図８Ｃ及び図８Ｄは、２４時間のミエリン処理後に例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体で７２時間処理したｉＰＳＣミクログリア細胞の細胞溶解物中で質量分析によって検出された、コレステロールエステル（ＣＥ）（図８Ｃ）及びトリアシルグリセリド（ＴＡＧ）脂質種（図８Ｄ）のレベルを示す。図８Ｅ及び図８Ｆは、例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体を用いたミエリンウォッシュアウト実験に供したｉＰＳＣミクログリア細胞の細胞溶解物中で質量分析によって検出された、コレステロールエステル（ＣＥ）（図８Ｅ）及びトリアシルグリセリド（ＴＡＧ）脂質種（図８Ｆ）のレベルを示す。図８Ｃ～８Ｆで生成されたＬＣ／ＭＳデータを、ＣＥデータについては内部標準物質に対して正規化し、ＴＡＧデータについては個々の脂質種ごとにミエリン＋アイソタイプ対照に対して正規化した。
ｉＰＳＣミクログリアにおける脂質蓄積はミエリン処理によって誘導され、これは、中性脂質染色（Ｎｉｌｅ Ｒｅｄ）の増大によって、及び細胞溶解物中の特定の脂質種を検出するためのＬＣ／ＭＳによって反映される。図８Ａ～８Ｆに示すデータは、細胞中の中性脂質染色の減少によって、ならびにＬＣ／ＭＳで測定したＣＥ及びＴＡＧ脂質種レベルの減少によって示されるように、例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体を用いたミエリン曝露後のｉＰＳＣミクログリア細胞の処理が、脂質種の蓄積を低減させたことをまとめて示している。抗体処理の結果としての脂質レベルの低減は、２４時間～７２時間の範囲の様々な時点で観察された。脂質レベルの低減が脂質取り込みの遮断によって引き起こされる可能性を排除するために、抗ＴＲＥＭ２抗体の添加前にミエリンを除去するミエリンウォッシュアウト実験を実施した。図８Ｆは、抗ＴＲＥＭ２抗体がアイソタイプ対照と比較して、抗体処理前にミエリンウォッシュアウトしたｉＰＳＣミクログリアの脂質レベルも低減させたことを示す。
実施例４．抗体の機能的エピトープビニング
ＴＲＥＭ２抗体エピトープビンを、ＴＲＥＭ２タンパク質上の競合結合によって決定した。エピトープビニング実験を、古典的なサンドイッチエピトープビニング構成方法を使用して、Ｃａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡ機器で２５℃で実施した。全ての試験抗体を、アミンカップリングによってＨＣ３０Ｍチップ上に固定化した。次いで、試験抗体について複数のサイクルのサンドイッチ競合結合を実施した。各サイクルを、抗原（Ｈｉｓタグ付きＴＲＥＭ２ ＥＣＤ）の注入と、それに続く固定化抗体への分析物抗体の注入で構成した。各サイクルの終わりに、１．２５Ｍ ＮａＣｌを含有する低ｐＨ緩衝液（ｐＨ＝３）を注入することにより固定化抗体の表面を再生した。エピトープ結合データをＣａｒｔｅｒｒａソフトウェアによって評価し、競合マトリックス及びエピトープビンを作成した。結果を表２に示す。
抗ＴＲＥＭ２抗体のエピトープビニングによって、（１）ストーク結合アゴニスト、及び（２）ＩｇＶドメイン結合アゴニストの２つのアゴニストビンを同定した。同じビン内の抗体は同じ機能、例えば、脂質リガンドによるＴＲＥＭ２－ＤＡＰ１２ ｐＳｙｋ活性化の阻害（アンタゴニスト抗体）、抗体のみによるｐＳｙｋの活性化（ストーク結合アゴニスト、ＩｇＶドメイン結合アゴニスト）を示す。
（表２）機能的クラスによって注釈を付した抗ＴＲＥＭ２抗体ビン
実施例５．ＴＲＥＭ２ストークペプチドへの抗体結合
ヒト及びマウスＴＲＥＭ２ストーク領域ペプチドへの結合について、ＴＲＥＭ２抗体を評価した。試験したペプチドには、（１）完全長ストーク領域（ヒトＴＲＥＭ２のアミノ酸１２９～１７２、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ９ＮＺＣ２；マウスＴＲＥＭ２のアミノ酸１３１～１６９、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ９９ＮＨ８）、及び（２）ＡＤＡＭ１０／１７切断部位を含有するトランケートされたストークペプチド（ヒト／マウスＴＲＥＭ２のアミノ酸１４９～１６３）が含まれた。ＴＲＥＭ２ストークペプチドへの抗体結合を、標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡを使用して検出した。簡潔に述べると、９６ウェルハーフエリアＥＬＩＳＡプレートを、４℃で一晩、ストレプトアビジンでコーティングした。翌日、１％ＢＳＡ／ＰＢＳで希釈したビオチン化ＴＲＥＭ２ストークペプチドをプレートに添加し、１時間インキュベートした。次いで、１％ＢＳＡ／ＰＢＳで希釈した抗体を添加して１時間インキュベートした。ペプチドに結合した抗体を、１％ＢＳＡ／ＰＢＳで希釈した抗ヒトカッパ－ＨＲＰ二次抗体（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）で検出した。プレートを、検出試薬（Ｏｎｅ－ｓｔｅｐ ＴＭＢ Ｕｌｔｒａ、Ｔｈｅｒｍｏ）との反応、及び標準的な分光光度測定装置（ＢｉｏＴｅｋ（登録商標））による４５０ｎｍでの吸光度（Ａ４５０）の測定によってアッセイした。結果を以下の表３に示す。データを正規化した値として示す（バックグラウンドに対する倍率、バックグラウンド＝アイソタイプ対照）。
（表３）ＴＲＥＭ２ストークペプチドへの抗ＴＲＥＭ２抗体の結合
表３は、表２のエピトープビニングデータを裏付けるヒト及びマウスストーク領域のペプチド－抗体結合相互作用を示す。表３のデータに基づくと、特定の抗ＴＲＥＭ２抗体が結合すると思われる部位は、ＴＲＥＭ２細胞外ストーク領域中のアミノ酸１２９～１４８に対応する。
ＡＤＡＭ１７によるＴＲＥＭ２ストークペプチド切断を阻害する抗ＴＲＥＭ２抗体の能力もまた、蛍光偏光アッセイを使用して分析した。まず、ＴＲＥＭ２ストークペプチドを、ストレプトアビジンを含むアッセイ緩衝液（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．５、２．５μＭ ＺｎＣｌ２、０．００５％ Ｂｒｉｊ－３５）中に調製した。次いで、抗ＴＲＥＭ２抗体を、室温で３０分間ＴＲＥＭ２ストークペプチドとプレインキュベートした。プレインキュベーション期間後、ＡＤＡＭ１７（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号９３０－ＡＤＢ）を添加して、３７℃で２０時間ペプチドとインキュベートした。翌日、試料をアッセイ緩衝液でさらに希釈し、不透明な黒色の３８４ウェルプレートに移した。続いて、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーで蛍光偏光を測定した。抗ＴＲＥＭ２抗体とプレインキュベートしたＴＲＥＭ２ストークペプチドの蛍光偏光を、完全長ＴＲＥＭ２ストークペプチド及び酵素対照（ＡＤＡＭ１７を含む完全長ＴＲＥＭ２ストークペプチド）の蛍光偏光と比較した。
ＴＲＥＭ２ストーク結合抗体は蛍光偏光を著しく増大させ、ＡＤＡＭ１７によるストークペプチド切断の部分的阻害が実証された（クローンＣＬ００２０１４１、ＣＬ００２０１８８、ＣＬ００２０３１３、ＣＬ００２０３０８）。ＩｇＶ結合抗体ＣＬ００２０１０７は、ＴＲＥＭ２ストーク領域ペプチドに結合しなかったため、蛍光偏光アッセイにおいてペプチド切断に対する影響を示さなかった。
実施例６．抗ＴＲＥＭ２抗体の薬物動態分析
抗ＴＲＥＭ２抗体の薬物動態プロファイルを、マウスで評価した。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ストック番号０００６６４）から２ヶ月齢で購入し、７日間の薬物動態（ＰＫ）試験及び標的結合試験に使用した。ヒトＴｒｅｍ２ ｃＤＮＡ ＫＩホモ接合マウス（ｈｕＴｒｅｍ２ＫＩ／ＫＩ）を、３ヶ月齢で、２４時間の標的結合試験に使用した。ヒトＴｒｅｍ２ ｃＤＮＡ ＫＩマウスの作製及び繁殖について、以下に説明する。
ヒトＴＲＥＭ２ ｃＤＮＡ ＫＩマウスモデルの作製
ヒトＴＲＥＭ２ ｃＤＮＡ ＫＩマウス（ｈｕＴｒｅｍ２ＫＩ／ＫＩ）を、以下の通りに作製した。ヒトＴｒｅｍ２ ｃＤＮＡ－ｐＡ配列をマウスＴｒｅｍ２内在性ＡＴＧ開始部位に挿入した。ヒトＴｒｅｍ２ ｃＤＮＡ－ｐＡの挿入によりマウスＴｒｅｍ２のエクソン１配列が置換され、これにより、内在性マウスプロモーターによって駆動されるヒトＴｒｅｍ２ ｃＤＮＡの発現、及び内在性マウスＴｒｅｍ２の発現の破壊が可能となる。ｈｕＴｒｅｍ２ＫＩ／ＫＩマウスを、相同組換えを使用してＣ５７ＢＬ／６遺伝的背景で作製した。
ｈｕＴｒｅｍ２ＫＩ／ＫＩ標的化ベクターの場合、長い相同性アーム（ＬＡ）は、ヒトＴｒｅｍ２ ｃＤＮＡ－ｐＡ配列の５’末端の約３．６ｋｂ上流に伸長し、短い相同性アーム（ＳＡ）は３’の約２．３ｋｂ下流からＦＲＴ隣接Ｎｅｏカセットまで伸長する。長い相同性アームと短い相同性アームの両方をＣ５７ＢＬ／６ ＢＡＣクローン（ＲＰ２３：３５８Ｇ２２）から増幅し、次いでアンピシリン選択カセットを含有する約２．４ｋｂのｐＳＰ７２（Ｐｒｏｍｅｇａ）バックボーンベクターにサブクローニングした。ｈＵＢＳ－ｇｂ２ ＦＲＴに隣接するネオマイシンカセットをｈＴｒｅｍ２－ｐＡカセットのすぐ下流に挿入することにより、約１３．６ｋｂのサイズの標的化ベクターを得た。１０μｇの標的化ベクターを制限酵素ＮｏｔＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）で線状化し、次いでエレクトロポレーションによってＦＬＰ Ｃ５７Ｂｌ／６（Ｂ６）胚性幹（ＥＳ）細胞にトランスフェクトした。Ｇ４１８抗生物質で選択した後、生存クローンをＰＣＲ分析用に増殖して、陽性組換えＥＳクローンを同定した。ＰＣＲスクリーニング用のプライマー配列（配列番号５３＝５’－ＡＧＧ ＡＡＴ ＧＴＧ ＧＧＧ ＡＧＣ ＡＣＧ ＧＡＧ－３’及び配列番号５４＝５’－ＴＧＣ ＡＴＣ ＧＣＡ ＴＴＧ ＴＣＴ ＧＡＧ ＴＡＧ ＧＴＧ－３’）により、ｂｇｈｐＡエレメントから３’領域の外側の短い相同性アーム（ＳＡ）の下流までの領域を含有する２．８１ｋｂの断片を増幅した。５つのクローンを陽性として同定し、さらなる増殖のために選択した。Ｎｅｏカセットを、ＥＳクローン増殖中にＦｌｐ導入遺伝子によって除去した。
５つの陽性クローンから抽出したゲノムＤＮＡを、まず、シーケンシング解析によって特徴付けた。１．１９ｋｂの産物を、プライマー（配列番号５５＝５’－ＡＣＣ ＣＴＡ ＧＴＣ ＣＴＧ ＡＣＴ ＧＴＴ ＧＣＴ Ｃ－３’、配列番号５６＝５’－ＴＡＴ ＡＧＧ ＡＡＣ ＴＴＣ ＧＣＧ ＡＣＡ ＣＧＧ ＡＣＡ Ｃ－３’）により増幅および配列決定し、５’ゲノム／ｎｅｏカセット接合部及び３’ＫＩカセット接合部を確認した。シーケンシングの結果により、５つのクローン全てにヒトＴｒｅｍ２ ｃＤＮＡ－ｐＡ配列が挿入されていることを確認した。
５つの陽性クローンを、短いアーム及び長いアームを標的としたプローブを使用したサザンブロッティング分析によってさらに特徴付けた。Ｓｓｐ Ｉ及びＢａｍ ＨＩで消化したＥＳ細胞ゲノムＤＮＡを、短いアームのプローブ及び長いアームのプローブとそれぞれハイブリダイズさせた。５つのＥＳクローン全てが、長いアームと短いアームの両方で正しい相同組換え事象を保持していることを確認した。短いアームのプローブ（６５８ｂｐ）の増幅用のプライマー配列は、（配列番号５７＝５’－ＡＣＡ ＧＧＡ ＧＧＧ ＡＣＣ ＴＡＣ ＣＴＴ ＣＡＧ３’、配列番号５８＝５’－ＧＣＣ ＴＧＣ ＣＴＴ ＴＣＡ ＧＡＧ ＡＣＣ ＴＣＡ ＧＴＣ－３）である。長いアームのプローブ（６８１ｂｐ）増幅用のプライマー配列は、（配列番号５９＝５’－ＣＣＴ ＣＴＣ ＣＧＧ ＣＴＧ ＣＴＣ ＡＴＣ ＴＴＡ ＣＴＣ－３’、配列番号６０＝５’－ＧＴＣ ＴＣＴ ＣＡＧ ＣＣＣ ＴＧＧ ＣＡＧ ＡＧＴ ＴＴＧ－３’）である。
次いで、５つのＥＳ細胞クローン全てをＣ５７ＢＬ／６胚盤胞に注入した。１つのクローンからの子を、ＰＣＲジェノタイピングによる生殖細胞系列伝達で確認した。ジェノタイピング用のプライマーは、（配列番号６１＝ｐｒ１：５’－ＣＧＣ ＣＴＡ ＣＣＣ ＴＡＧ ＴＣＣ ＴＧＡ ＣＴＧ ＴＴＧ－３’、配列番号６２＝ｐｒ２：５’－ＡＡＡ ＧＣＣ ＴＡＣ ＡＧＣ ＡＴＣ ＣＴＣ ＡＣＣ ＴＣ－３’、及び配列番号６３＝ｐｒ３：５’－ＧＣＡ ＴＣＡ ＴＧＧ ＧＧＴ ＴＧＴ ＡＧＡ ＴＴＣ ＣＧ－３’）である。野生型のｐｒ１／ｐｒ２のＰＣＲ産物は、６５８ｂｐである。ＫＩ対立遺伝子のｐｒ１／ｐｒ３のＰＣＲ産物は、４６９ｂｐである。
抗体投与及び血漿／ＣＳＦの採取
ＰＫ分析のために、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに抗ＴＲＥＭ２抗体または対照ＩｇＧを１０ｍｇ／ｋｇで静脈内（ＩＶ）尾静脈注射により投与した（投与容量は約２００μＬ／マウス、各群ごとにｎ＝３）。血液試料を、投与の１時間後、２４時間後、４日後、及び７日後に採取した。最初の３つの時点での血液試料は、３ｍｍランセット（ＧｏｌｄｅｎＲｏｄ動物用ランセット）を使用して顎下出血によって採取した。７日目の最終の終末血液試料は、心臓穿刺によって採取した。血液をＥＤＴＡチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅ ５００ Ｋ３Ｅ、カタログ番号２０１３４１１０２）に採取し、ゆっくりと反転させて混合し、４℃で遠心分離した。血漿（最上）層を１．５ｍＬエッペンドルフチューブに移し、分析まで－８０℃で保管した。
２４時間の標的結合試験では、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを使用してマウス代替抗ＴＲＥＭ２抗体を試験し、ｈｕＴｒｅｍ２ＫＩ／ＫＩマウスを使用してヒト抗ＴＲＥＭ２抗体を試験した。マウスに抗ＴＲＥＭ２抗体または対照ＩｇＧを１００ｍｇ／ｋｇで静脈内（ＩＶ）尾静脈注射により投与した（投与容量は約２００μＬ／マウス、各群ごとにｎ＝５）。ＴＲＥＭ２のベースラインレベルを判定するために、投与の２４時間前に血液試料を採取した。末端血液及びＣＳＦ試料を投与２４時間後に採取した。血漿調製物を前述の通りに調製した。ＣＳＦ試料を採取するために、頭蓋骨後方に矢状切開を行い、皮下組織及び筋肉を分離して大槽を露出させた。予め引き伸ばしたガラスキャピラリーチューブを使用して、大槽を穿刺し、ＣＳＦ試料を採取した。次いで、ＣＳＦを４℃で遠心分離して血液残渣を除去し、ＣＳＦ上清を０．５ｍＬのＬｏｗ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＬｏＢｉｎｄエッペンドルフチューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、カタログ番号０２２４３１０６４）に移し、分析まで－８０℃で保管した。
インビボ抗ＴＲＥＭ２抗体の血漿レベルの分析
抗ＴＲＥＭ２抗体のＰＫ分析では、一般的なヒト抗ＦｃサンドイッチＥＬＩＳＡを使用して、マウス血漿中の総抗体濃度を定量化した。３８４ウェルＭａｘｉＳｏｒｐプレートを、１μｇ／ｍＬの抗ｈｕＦｃロバポリクローナル（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）で一晩コーティングした。アッセイ緩衝液（ＰＢＳＴ、１％ＢＳＡ）中で１：２，０００または１：２０，０００に希釈した血漿とインキュベートした後、ＨＲＰにコンジュゲートした抗ｈｕＦｃロバ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を検出試薬として添加した。５パラメータロジスティック回帰を使用して、個々の抗体ごとに３倍希釈を使用して２ｎＭから２．７ｐＭまでの標準曲線を作成した。
図９は、特定の抗ＴＲＥＭ２抗体の代表的なマウスＰＫプロファイルを示す。抗体クリアランス速度（ＣＬ［ｍＬ／日／ｋｇ］）を、表した各抗体について７日間にわたって示しており、通常のエフェクターレスアイソタイプ対照と比較する。図９に示す各抗体は、アイソタイプ対照と比較して同等のクリアランス速度を示した。
インビボ標的結合：ｓＴＲＥＭ２の血漿レベル
可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）の血漿レベルを測定するために、ヒトＴｒｅｍ２ ｃＤＮＡ ＫＩマウス（ｈｕＴｒｅｍ２ＫＩ／ＫＩ）を採血し、次いで１００ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２試験抗体またはアイソタイプ対照で静脈内処置した。投与の２４時間後にマウスから採血した。血漿を血液試料から得て、以下のように実施したＭＳＤアッセイで評価した。ＭＳＤ ＳＥＣＴＯＲプレートを、ＰＢＳで希釈した１μｇ／ｍＬの捕捉抗体（Ｒ＋Ｄ抗ＴＲＥＭ２抗体、カタログ番号ＭＡＢ１７２９１－１００）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。試料ウェルを未希釈のＭＳＤ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａで１時間ブロッキングした。血漿試料を０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０（ＴＢＳＴ）を含有するＴｒｉｓ緩衝生理食塩水中の２５％ＭＳＤブロッカーＡで１：２０に希釈し、プレート上の各試料ウェルに添加し、次に、これを室温で２時間インキュベートした。続いて、検出抗体（ＭＳＤスルホタグ付きヤギ抗ヒト、カタログ番号Ｒ３２ＡＪ－１、１：１０００）を各試料ウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。Ｂｉｏｔｅｋプレート洗浄機を用いて各試料ウェルについてＴＢＳＴ洗浄を実施した。検出試薬（ＭＳＤ読み取り用緩衝液）を添加し、ＭＳＤ Ｍｅｓｏ ＳｅｃｔｏｒＳ６００リーダーを使用して測定して、抗体へのｓＴＲＥＭ２結合の結果を得た。
図１０Ａ及び１０Ｂは、例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体に関する、ｈｕＴｒｅｍ２ＫＩ／ＫＩ血漿中の総ｓＴＲＥＭ２レベル（図１０Ａ）及び抗体に結合したｓＴＲＥＭ２のレベル（図１０Ｂ）を示す。総ｓＴＲＥＭ２アッセイ及び結合したｓＴＲＥＭ２のアッセイについて、データを投与前のｓＴＲＥＭ２のベースラインレベルに対して正規化した。結果は、抗体による２４時間の処置後のアイソタイプ対照と比較して、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置したマウス間で総循環ｓＴＲＥＭ２レベルが著しく変化しなかったことを示しており、これは、総循環ｓＴＲＥＭ２レベルが抗体投与後の初期の時点で影響を受けないことを示唆する。対照的に、抗体に結合したｓＴＲＥＭ２のレベルは、アイソタイプ対照と比較して抗ＴＲＥＭ２抗体を注射したマウスで高かった。
実施例７．抗ＴＲＥＭ２抗体の配列最適化及びヒト化
例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体を配列最適化し、ヒト化してから、結合カイネティクス及び結合特異性について特徴付けした。
配列最適化を、化学修飾を受けやすい残基（例えば、アスパラギン脱アミド化モチーフ（ＮＧ）、アスパラギン酸異性化モチーフ（ＤＳ））、ならびに酸化される可能性のある残基（トリプトファン（Ｗ）及びメチオニン（Ｍ））のＣＤＲ配列内を探索することにより、ならびにそのような配列の傾向を取り除くために保存的及び生殖系列残基によってアミノ酸置換することにより行った。次いで、ヒト化し配列最適化した抗ＴＲＥＭ２抗体のバリアントを、Ｂｉａｃｏｒｅ及びＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞への用量設定した細胞結合を使用して、結合カイネティクスについて分析した（代表的なプロトコルについては、実施例１を参照されたい）。
ヒト化し配列最適化した抗体ＣＬ００２０１８８のバリアントの結合特性の分析結果を表４に示す。ＣＬ００２０１８８ ＣＤＲ－Ｈ２配列（配列番号５）及びＣＤＲ－Ｌ１配列（配列番号７）中のＮＧモチーフを修飾し、ヒトフレームワーク領域上にグラフティングして分析した。表４は、ＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞における、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定したＫＤ値、及び用量設定した結合アッセイによって測定したＥＣ５０値を示す。
（表４）配列最適化しヒト化したＣＬ００２０１８８のバリアントの結合特性
３ｍ＝ＶＨにおけるＡ２４Ｇ／Ｌ４５Ｐ／Ｖ４８Ｌ
表４に示すように、ヒト化し配列最適化したＣＬ００２０１０８８のクローンは、Ｂｉａｃｏｒｅで測定した場合、親抗体（ＫＤ＝９．５ｎＭ）と比較してｈＴＲＥＭ２に対して同様の親和性値を示した。これは、表４に示すＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞の細胞結合の結果と一致していた。親抗体（ＥＣ５０＝０．４４ｎＭ）と比較して、ヒト化し配列最適化したクローンは、ＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞中で発現したＴＲＥＭ２に対して同等かつナノモル以下の親和性を示した。総合すると、結果は、親抗体と、ヒト化し配列最適化したバリアントとの間の同等の結合カイネティクスを示す。
ヒト化し配列最適化した抗体ＣＬ００２０１２３のバリアントの結合特性の分析結果を表５に示す。ＣＬ００２０１２３ ＣＤＲ－Ｈ２配列（配列番号３０）中のＮＧ及びＤＳモチーフを修飾し、ヒトフレームワーク領域上にグラフティングして分析した。表５は、ＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞における、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定したＫＤ値、及び用量設定した結合アッセイによって測定したＥＣ５０値を示す。
（表５）配列最適化しヒト化したＣＬ００２０１２３のバリアントの結合特性
１ｍ＝ＶＨにおけるＲ７１Ａ
２ｍ＝ＶＨにおけるＶ６７Ａ／Ｒ７１Ａ
親抗体（ＫＤ＝０．１０ｎＭ）と比較して、ヒト化し配列最適化したクローンは、Ｂｉａｃｏｒｅで測定した場合、ｈＴＲＥＭ２への結合について約４倍高いＫＤ値を示した。一方、ＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞における用量設定した細胞結合アッセイでは、ヒト化し配列最適化したクローンは、ＴＲＥＭ２に対して同等かつナノモル以下の親和性を示した。
実施例８．配列最適化しヒト化した抗ＴＲＥＭ２抗体のインビトロ特徴付け
配列最適化しヒト化した例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体（実施例７）を、実施例１及び３に記載のインビトロ法によって評価した。ＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ細胞におけるＴＲＥＭ２結合、ＨＥＫ－Ｈ６細胞におけるＴＲＥＭ２依存性ｐＳｙｋシグナル伝達、ヒトマクロファージ細胞の生存を促進する能力、及びｉＰＳＣミクログリアにおける脂質蓄積を調節する能力に関して、抗体を評価した。図１１～１４は、代表的な抗ＴＲＥＭ２抗体の結果を示す。抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２を発現するＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞を用いたアッセイにおいて良好な細胞結合を示した（ＥＣ５０値は０．３４ｎＭ（図１１Ａ）及び０．０８ｎＭ（図１１Ｂ））。抗ＴＲＥＭ２抗体はまた、ＴＲＥＭ２を発現するＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞におけるｐＳｙｋシグナル伝達も活性化させた（図１２Ａ及び１２Ｂ）。さらに、抗ＴＲＥＭ２抗体は、マクロファージの生存を誘導し、ＣＬ００２０１８８バリアント抗体でより良好な生存活性が観察された（図１３）。最後に、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ミエリン処置したｉＰＳＣミクログリアにおける脂質蓄積を低減させる能力を示した（図１４Ａ及び１４Ｂ）。
実施例９．配列最適化しヒト化した抗ＴＲＥＭ２抗体のマウスＰＫ
配列最適化しヒト化した特定の抗ＴＲＥＭ２抗体（実施例７）の薬物動態プロファイルを、実施例６に記載したものと同様の７日間の薬物動態（ＰＫ）試験について野生型マウスで評価した。各投与群にはｎ＝３マウスを含めた。表６は、配列最適化しヒト化した例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体（実施例７）のＰＫ特性を示す。
（表６）抗ＴＲＥＭ２抗体のマウスＰＫ特性
実施例１０．配列最適化しヒト化した抗ＴＲＥＭ２抗体のｃｙｎｏ ＰＫ
抗ＴＲＥＭ２抗体の薬物動態プロファイルを、ナイーブカニクイザルで評価した。２～４年齢のナイーブカニクイザル（体重およそ２～３ｋｇ）に、静脈内ボーラス注射により抗ＴＲＥＭ２抗体を注射した。投与用量には３ｍｇ／ｋｇ及び２５ｍｇ／ｋｇを含め、用量群あたりｎ＝３匹のサルを用いた。血液試料（約１ｍＬ）を、投与前、ならびに投与の１０分後、３０分後、１時間後、６時間後、１２時間後、及び２４時間後、ならびに３日後、７日後、１０日後、１４日後、１７日後、２１日後、２４日後、及び２８日後に採取した。試料を約５℃で冷却してから遠心分離して血漿を得て、分析まで－７０℃で保管する前に、得られた血漿をドライアイス上に維持した。血漿試料を、以下の通り抗ＴＲＥＭ２抗体レベルについて分析した。
抗ＴＲＥＭ２抗体ＰＫ分析では、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プラットフォームで、一般的な抗ヒト＿ＩｇＧサンドイッチ電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）を使用して、サル血漿中の総抗体濃度を定量化した。簡潔に述べると、１％のカゼインベースのＰＢＳブロッキング緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＭＡ）をＭＳＤ ＧＯＬＤ ９６ウェルスモールスポットストレプトアビジンコーティングマイクロタイタープレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ＭＤ）に添加し、およそ１時間インキュベートした。プレートのブロッキング及び洗浄ステップに続いて、０．５μｇ／ｍＬの使用溶液中のビオチン化抗ヒト＿ＩｇＧヤギ抗体（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ，ＡＬ）をアッセイプレートに添加し、１～２時間インキュベートさせた。インキュベーション及び洗浄ステップに続いて、血漿試験試料（すなわち、抗ＴＲＥＭ２ヒト化抗体を含む試料）をアッセイプレートに添加し、１～２時間インキュベートした。アッセイプレートに添加する前に、試験試料を０．５％カゼインベースのＰＢＳアッセイ緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＭＡ）中で１：１００のアッセイ最小希釈倍率（ｍｉｎｉｍｕｍ－ｒｅｑｕｉｒｅｄ－ｄｉｌｕｔｉｏｎ）（ＭＲＤ）で希釈する必要があり、その結果、１％の最終血漿マトリックスとなることに留意されたい。抗ＴＲＥＭ２抗体分析物の捕捉及び洗浄ステップに続いて、０．４μｇ／ｍＬの使用溶液で二次ルテニル化（ｒｕｔｈｅｎｙｌａｔｅｄ）（ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ）抗ヒトＩｇＧヤギ抗体（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ＭＤ）をアッセイプレートに添加し、およそ１時間インキュベートした。最後に、インキュベーション及び洗浄ステップに続いて、アッセイ読み取り用緩衝液（１×ＭＳＤ読み取り用緩衝液Ｔ）をアッセイプレートに添加し、アッセイ試料シグナルを生成した。ＭＳＤプレートリーダーからの試料シグナルの読み取りは、電気化学発光（ＥＣＬ）シグナルの形式であり、ＥＣＬ単位（ＥＣＬＵ）で表された。前述の全てのアッセイ反応ステップは、周囲温度で、（必要に応じて）プレートシェーカーで振盪しながら行った。このアッセイは、１９．５～２５００ｎｇ／ｍＬ（または１：１００のＭＲＤ後では０．１９５～２５ｎｇ／ｍＬ）の動的な較正標準範囲を有しており、１：２で段階希釈した８つの標準的段階に加え、ブランク血漿試料を用いた。血漿試料濃度を、重み付けした４パラメータ非線形ロジスティック回帰にフィッティングさせたアッセイ較正標準曲線から逆算した。表７は、配列最適化しヒト化した例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体（実施例７）の薬物動態（ＰＫ）特性を示す。
（表７）抗ＴＲＥＭ２抗体のカニクイザルＰＫ特性
ＣＬ００２０１８８バリアントは、カニクイザルにおいて、異なる用量レベル間で類似した低クリアランスレベル、及び線形の薬物動態プロファイルを示した。さらに、カニクイザルへのバリアントの投与に関連する臨床病理所見は認められなかった（データは示さず）。
実施例１１．抗ＴＲＥＭ２抗体の比較
ヒトＴＲＥＭ２及びカニクイザルＴＲＥＭ２に対する抗ＴＲＥＭ２抗体の親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した（実施例１に記載）。抗ＴＲＥＭ２抗体の効力を、ＭＳＤアッセイにより、健常ヒト志願者のＣＳＦ試料（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）及び健常カニクイザルのＣＳＦ試料（Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ Ｐｒｉｍａｔｅｓ）において測定した。各抗体の効力を、そのＥＣ５０によって判定した。簡潔に述べると、捕捉抗体（ビオチン化ヤギ抗ヒトＴＲＥＭ２、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＢＡＦ１８２８）でコーティングしたＭＳＤ ＧＯＬＤ ９６ウェルスモールスポットストレプトアビジンプレート（ＭＳＤ、カタログ番号Ｌ４５ＳＡ）を、アッセイ緩衝液（２５％（ｖ／ｖ）ＭＳＤ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａ（ＭＳＤ、カタログ番号Ｒ９３ＢＡ－Ａ）、７５％（ｖ／ｖ）ＴＢＳＴ）で１：３に希釈した生体液試料とともに、室温で１時間インキュベートした。ウェルをＴＢＳＴですすいだ後、スルホタグ付き抗ＴＲＥＭ２抗体を段階希釈（１１段階にわたり４倍希釈）でプレートのウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。ウェルをＴＢＳＴで洗浄し、ＭＳＤ読み取り用緩衝液（ＭＳＤ、カタログ番号Ｒ９２ＴＣ－３）をウェルに添加した。ＭＳＤ Ｍｅｓｏ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ６００装置を使用して、試料からのシグナルを測定した。各抗体のＥＣ５０値を、４パラメータ可変勾配非線形回帰によって決定した。参照抗体＃１及び＃２は、ＷＯ２０１８／１９５５０６に記載されている４Ｃ５及び６Ｅ７に対応する。参照抗体＃３は、ＷＯ２０１９／０２８２９２に記載されているＡＬ２ｐ－５８に対応する。参照抗体＃１の可変領域を、配列番号７３及び７４に表す。参照抗体＃２の可変領域を、配列番号７５及び７６に表す。参照抗体＃３の可変領域を、配列番号７７及び７８に表す。結果を表８に示す。
表８に示すように、本明細書に開示されるＣＬ００２０１８８バリアント及びＣＬ００２０１２３バリアントは、参照抗体と比較してヒトＴＲＥＭ２に対してより強い親和性を有し、健常ヒト志願者対象から単離されたＣＳＦ試料においてｓＴＲＥＭ２により強力に結合する。さらに、ＣＬ００２０１８８バリアントは、参照抗体と比較してカニクイザルＴＲＥＭ２に対してより強い親和性を有し、健常カニクイザル対象から単離されたＣＳＦ試料においてｓＴＲＥＭ２により強力に結合する。これは、同じ条件下で所定量のｓＴＲＥＭ２に結合するための半数効果濃度（ＥＣ５０）に到達するために必要な抗体の相対量によって実証される。表８に示すように、ＣＬ００２０１８８及びＣＬ００２０１２３抗体と比較すると、ＥＣ５０を達成するには、より高い相対量の参照抗体＃１、＃２、及び＃３が必要である。
（表８）抗ＴＲＥＭ２抗体の特性比較
実施例１２．抗ＴＲＥＭ２抗体のエピトープマッピング
ペプチドレベルで抗ＴＲＥＭ２抗体のエピトープを同定するために、水素重水素交換（ＨＤＸ）質量分析を使用した。組換えヒトＴＲＥＭ２を単独で、または抗ＴＲＥＭ２抗体と混合して、酸化ジュウテリウム標識緩衝液（５０ｍＭリン酸ナトリウム、１００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．０）とともに、２０℃で０秒間、６０秒間、６００秒間、及び３６００秒間インキュベートした。水素／重水素交換を、等量の４Ｍ塩酸グアニジン、０．８５Ｍ ＴＣＥＰ緩衝液（最終ｐＨ２．５）を添加することによりクエンチした。次いで、クエンチした試料をペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ消化及びＬＣ－ＭＳ分析に供した。簡潔に述べると、クエンチした試料を、２０℃に保持したペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ充填カラム（２．１×３０ｍｍ）に注入し、得られたペプチドを、Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ（商標）ＨＦ－Ｈｙｂｒｉｄ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）と連結させたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で構成したＵＰＬＣ－ＭＳシステムを使用して分析した。ペプチドを、－６℃に保持した５０ｍｍ×１ｍｍのＣ８カラムで、２％から３１％の溶媒Ｂ（溶媒Ｂ：アセトニトリル中の０．２％ギ酸、溶媒Ａ：水中の０．２％ギ酸）の１６．５分の勾配を使用して分離させた。質量スペクトルをＭＳのみのモードで記録した。ＨＤＸ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ（Ｐａｓｃａｌ ｅｔ ａｌ．２０１２．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ２３：１５１２－１５２１）を使用して、未加工のＭＳデータを処理した。重水素レベルを、重水素化ペプチドとその天然型との間のｔ０での平均質量差を使用して算出した。Ｍａｓｃｏｔ ｓｏｆｔｗａｒｄ（Ｍａｔｒｉｘ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いてヒトＴＲＥＭ２配列に対するＭＳ／ＭＳデータを検索することにより、ペプチドの同定を実施した。プリカーサーイオン及びプロダクトイオンの質量許容差は、それぞれ１０ｐｐｍ及び０．０２Ｄａであった。
ＨＤＸ質量分析の結果に基づくと、ＣＬ００２０１８８及びＣＬ００２０１８８のバリアントは、アミノ酸残基１４３～１４９（ＦＰＧＥＳＥＳ（配列番号６９））でヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）に結合するが、他方、ＣＬ００２０１２３及びＣＬ００２０１２３のバリアントは、（ｉ）アミノ酸残基５５～６３（ＧＥＫＧＰＣＱＲＶ（配列番号７０））、（ｉｉ）アミノ酸９６～１０７（ＴＬＲＮＬＱＰＨＤＡＧＬ（配列番号７１））、及び（ｉｉｉ）アミノ酸残基１２６～１２９（ＶＥＶＬ（配列番号７２））でヒトＴＲＥＭ２に結合する。
ＩＸ．略式の配列表
配列情報
SEQUENCE LISTING
<110> DENALI THERAPEUTICS INC.
<120> ANTI-TREM2 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
<150> US 62/808,141
<151> 2019-02-20
<160> 83
<170> PatentIn version 3.5

<210> 1
<211> 230
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
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85 90 95
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100 105 110
Leu His Gly Ser Glu Ala Asp Thr Leu Arg Lys Val Leu Val Glu Val
115 120 125
Leu Ala Asp Pro Leu Asp His Arg Asp Ala Gly Asp Leu Trp Phe Pro
130 135 140
Gly Glu Ser Glu Ser Phe Glu Asp Ala His Val Glu His Ser Ile Ser
145 150 155 160
Arg Ser Leu Leu Glu Gly Glu Ile Pro Phe Pro Pro Thr Ser Ile Leu
165 170 175
Leu Leu Leu Ala Cys Ile Phe Leu Ile Lys Ile Leu Ala Ala Ser Ala
180 185 190
Leu Trp Ala Ala Ala Trp His Gly Gln Lys Pro Gly Thr His Pro Pro
195 200 205
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polypeptide"
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Ala Gly Tyr Asn Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Leu Thr Tyr Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115

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Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe
85 90 95
Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110

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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115

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Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Thr Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
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Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe
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Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Val Lys Gly

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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe
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Leu Val Thr Val Ser Ser
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Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Ala
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Ile Glu Asp Phe
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Gly

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His Ala Ser Gln His Ile Asn Val Trp Leu Ser
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Ile Glu Asp Phe
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Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln His Ile Asn Val Trp
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Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Ile Glu Asp Phe
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Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly

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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Glu Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly

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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Ile Glu Asp Phe
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Gly Trp Ile Asp Pro Glu Gln Gly Glu Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120

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<211> 17
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Trp Ile Asp Pro Glu Gln Gly Glu Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly

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<211> 120
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Ile Glu Asp Phe
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Gly Trp Ile Asp Pro Glu Gln Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
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<400> 45
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Ile Glu Asp Phe
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Ile Glu Asp Phe
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<221> SITE
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preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
<400> 47
Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly

<210> 48
<211> 10
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<220>
<221> SITE
<222> (1)..(10)
<223> /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
<400> 48
Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe Tyr Met Ser
1 5 10

<210> 49
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<222> (1)..(19)
<223> /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
<400> 49
Val Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Ala Gly Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly

<210> 50
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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peptide"
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<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
<400> 50
Ala Arg Leu Thr Tyr Gly Phe Asp Tyr
1 5

<210> 51
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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peptide"
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<221> VARIANT
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<220>
<221> SITE
<222> (1)..(16)
<223> /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
<400> 51
Gln Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15

<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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peptide"
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)..(6)
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<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
<400> 52
Gln Gln Phe Leu Glu Tyr Pro Phe Thr
1 5

<210> 53
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer"
<400> 53
aggaatgtgg ggagcacgga g 21

<210> 54
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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primer"
<400> 54
tgcatcgcat tgtctgagta ggtg 24

<210> 55
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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primer"
<400> 55
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Trp Met His Trp Val Lys Gln Ser Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Arg Ser Asp Pro Thr Thr Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
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Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Pro Ser Ser Thr Ala Tyr
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
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Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
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Gln Gly Glu Ser
1

Claims (19)

  1. ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、
    （ａ）Ｇ－Ｆ－Ｓ－Ｉ－Ｅ－Ｄ－Ｆ－Ｙ－Ｉ－Ｈ（配列番号２９）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、
    （ｂ）Ｗ－Ｉ－Ｄ－Ｐ－Ｅ－β６－Ｇ－β８－Ｓ－Ｋ－Ｙ－Ａ－Ｐ－Ｋ－Ｆ－Ｑ－Ｇ（配列番号４７）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、β６がＮまたはＱであり、かつβ８がＤまたはＥである、前記ＣＤＲ－Ｈ２配列、
    （ｃ）Ｈ－Ａ－Ｄ－Ｈ－Ｇ－Ｎ－Ｙ－Ｇ－Ｓ－Ｔ－Ｍ－Ｄ－Ｙ（配列番号３１）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、
    （ｄ）Ｈ－Ａ－Ｓ－Ｑ－Ｈ－Ｉ－Ｎ－Ｖ－Ｗ－Ｌ－Ｓ（配列番号３２）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、
    （ｅ）Ｋ－Ａ－Ｓ－Ｎ－Ｌ－Ｈ－Ｔ（配列番号３３）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び
    （ｆ）Ｑ－Ｑ－Ｇ－Ｑ－Ｔ－Ｙ－Ｐ－Ｒ－Ｔ（配列番号３４）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列
    を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
  2. 前記ＣＤＲ－Ｈ２配列が、配列番号３０、３９、４１、及び４３から選択される、請求項１に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
  3. （ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
    （ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
    （ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
    （ｄ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
    を含む、請求項１または２に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
  4. 配列番号２７、３５、３７、３８、４０、４２、４４、４５、及び４６のいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
  5. 以下である、請求項４に記載の単離された抗体または抗原結合断片：
    （ａ） 前記ＶＨ配列が、配列番号２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；
    （ｂ） 前記ＶＨ配列が、配列番号２７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；
    （ｃ） 前記ＶＨ配列が配列番号２７を含む。
  6. 配列番号２８または３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
  7. 以下である、請求項６に記載の単離された抗体または抗原結合断片：
    （ａ） 前記ＶＬ配列が、配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；
    （ｂ） 前記ＶＬ配列が、配列番号２８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；
    （ｃ） 前記ＶＬ配列が配列番号２８を含む。
  8. （ａ）配列番号２７を含むＶＨ配列、及び配列番号２８を含むＶＬ配列、または
    （ｂ）配列番号３５を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
    （ｃ）配列番号３７を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
    （ｄ）配列番号３８を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
    （ｅ）配列番号４０を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
    （ｆ）配列番号４２を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
    （ｇ）配列番号４４を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
    （ｈ）配列番号４５を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列、または
    （ｉ）配列番号４６を含むＶＨ配列、及び配列番号３６を含むＶＬ配列
    を含む、請求項６に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
  9. （ａ） 前記抗体またはその抗原結合断片が、可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質（ｓＴＲＥＭ２）のレベルを減少させる；
    （ｂ） 前記抗体またはその抗原結合断片が、ＴＲＥＭ２活性を増強する；および/または
    （ｃ） 前記抗体またはその抗原結合断片が、カニクイザルＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す、
    請求項１～８のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  10. 以下である、請求項１～９のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片：
    （ａ） 前記抗体がモノクローナル抗体である；
    （ｂ） 前記抗体がキメラ抗体である；
    （ｃ） 前記抗体がヒト化抗体である；または
    （ｄ） 前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、または二価ｓｃＦｖである。
  11. 請求項１～１０のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片と、
    薬学的に許容可能な担体と
    を含む、医薬組成物。
  12. 請求項１～１０のいずれか１項に記載の単離された抗体もしくはその抗原結合断片、または請求項１１に記載の医薬組成物と、
    その使用説明書と
    を含む、キット。
  13. 対象における神経変性疾患を処置するための、請求項１～１０のいずれか１項に記載の単離された抗体もしくはその抗原結合断片または請求項１１に記載の医薬組成物を含む、医薬組成物。
  14. 神経変性疾患を有する対象においてｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる、またはＴＲＥＭ２活性を増強するための、請求項１～１０のいずれか１項に記載の単離された抗体もしくはその抗原結合断片または請求項１１に記載の医薬組成物を含む、医薬組成物。
  15. 前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、原発性年齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアム筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症複合（ＡＬＳ－ＰＤＣ）、大脳皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ ｐｕｇｉｌｉｓｔｉｃａ）、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、球状グリア性タウオパチー、認知症を伴うグアドループ型パーキンソニズム、グアドループ型ＰＳＰ、ハラーフォルデン・シュパッツ病、スフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋強直性ジストロフィー、那須・ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球橋黒質変性症（ｐａｌｌｉｄｏ－ｐｏｎｔｏ－ｎｉｇｒａｌ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維型老年認知症（ｔａｎｇｌｅ ｏｎｌｙ ｄｅｍｅｎｔｉａ）からなる群から選択される、請求項１３または１４に記載の医薬組成物。
  16. 請求項１～１０のいずれか１項に記載の単離された抗体もしくはその抗原結合断片をコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド。
  17. 請求項１６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  18. 請求項１６に記載のポリペプチド、または請求項１７に記載のベクターを含む宿主細胞。
  19. 抗体の発現に適した条件下で、請求項１８に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗ＴＲＥＭ２抗体を作製する方法。
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