JP7738136B2 - グルカゴン様ペプチド－２（ｇｌｐ－２）類似体の製剤 - Google Patents

グルカゴン様ペプチド－２（ｇｌｐ－２）類似体の製剤

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Description

本発明は、グルカゴン様ペプチド－２（ＧＬＰ－２）類似体の製剤、ならびにそれらの医学的使用、例えば、胃腸関連障害の治療および／または予防における使用ならびに化学療法および放射線療法の副作用を改善するための使用に関する。さらに、液体製剤を作製するために有用なグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の酢酸塩を含む固体組成物もまた記載する。
ヒトＧＬＰ－２は、以下の配列を有する３３個のアミノ酸のペプチドである：Ｈｙ－Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ａｓｎ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｓｎ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｓｎ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ｇｌｎ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－ＯＨ。ヒトＧＬＰ－２は、腸の腸内分泌細胞Ｌ細胞において、また脳幹の特定の領域において、プログルカゴンの特異的な翻訳後プロセシングの結果生じる。ＧＬＰ－２は、クラスＩＩグルカゴンセクレチンファミリーに属する１つのＧタンパク質共役型受容体に結合する。
ＧＬＰ－２は、陰窩における幹細胞増殖の刺激を介して、また絨毛におけるアポトーシスの阻害によって、小腸粘膜上皮の著しい成長を誘導することが報告されている（Ｄｒｕｃｋｅｒら、１９９６年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：７９１１～７９１６）。ＧＬＰ－２はまた、結腸への成長効果も有する。さらに、ＧＬＰ－２は、胃内容排出および胃酸分泌を阻害し（Ｗｏｊｄｅｍａｎｎら、１９９９年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８４：２５１３～２５１７ページ）、腸のバリア機能を増強し（Ｂｅｎｊａｍｉｎら、２０００年、Ｇｕｔ ４７：１１２～１１９ページ）、グルコーストランスポーターの上方調節を介して腸のヘキソース輸送を刺激し（Ｃｈｅｅｓｅｍａｎ、１９９７年、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒ１９６５～７１ページ）、腸の血流を増加させる（Ｇｕａｎら、２００３年、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１２５：１３６～１４７ページ）。
当技術分野において、グルカゴン様ペプチド－２受容体類似体が、腸疾患を治療する治療的潜在力を有することが認識されている。しかしながら、３３個のアミノ酸の消化管ペプチドである天然ｈＧＬＰ－２は、ヒトでのその半減期が完全長ＧＬＰ－２では約７分［１～３３］、また切断型ＧＬＰ－２では２７分［３～３３］ときわめて短いため、臨床環境では有用ではない。主に、この短い半減期は、酵素ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－ＩＶ）による分解が原因である。したがって、当技術分野では、より良好な薬物動態的特性を有するＧＬＰ－２受容体アゴニストを開発する試み、特にＧＬＰ－２分子の半減期を改良する試みがなされてきた。例として、置換を有するＧＬＰ－２類似体、例えば、２位にＧｌｙ置換を含むＧＬＰ－２類似体（［ｈＧｌｙ２］ＧＬＰ－２、テデュグルチド）などが提案されており、この置換によって半減期は７分（天然ＧＬＰ－２）から約２時間まで増加する。脂肪酸鎖でのペプチド薬剤のアシル化も、全身循環を延ばすこと、および生物学的能力を妨害することなく酵素の安定性を高めることに有益であることが証明されている。しかしながら、これらの試みによってＧＬＰ－２類似体の薬物動態が改良され、ＧＬＰ－２類似体が当技術分野において「長時間作用型」と記されることもある一方で、この改良は、分オーダーではなく数時間のオーダーの半減期を有する天然ｈＧＬＰ－２との比較であることを心に留めておかなければならない。これは、ひいては、ＧＬＰ－２類似体が、依然として患者に１日当たり１回または複数回、投与される必要があることを意味するものである。
米国特許第５，７８９，３７９号は、注射による投与のためのＧＬＰ－２類似体を開示している。ＧＬＰ－２類似体は、粉末ペプチドとして提供されて、１３０ｍｇ／ｍｌのＧＬＰ－２濃度のｐＨ７．３～７．４での注射に先立ち、リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）と混合された。場合によって、ＧＬＰ－２／ＰＢＳ組成物は、ゼラチンと混合されて、ＰＢＳ／１５％ゼラチン中１３０ｍｇ／ｌのＧＬＰ－２の溶液から形成されたデポ剤を提供する。米国特許第５，７８９，３７９号では、ＧＬＰ－２類似体の安定した水性液体製剤は開示されておらず、ＧＬＰ－２類似体は、一般的に、注射に先立ち、粉末から再構成される。
ＷＯ９７／３９０３１および米国特許第６，１８４，２０１号は、ＧＬＰ－２類似体、［Ｇｌｙ２］ＧＬＰ－２を開示している。ここでは、２位のアラニンをグリシンで置き換えて、ＤＰＰ ＩＶ切断に抵抗性のあるペプチドを作製した。米国特許第５，７８９，３７９号の場合と同様に、ＧＬＰ－２類似体は、粉末ペプチドとして提供されており、注射に先立ち、生理食塩水、ＰＢＳ、または５％デキストロースと混合され、任意選択で溶解促進剤として酢酸が加えられた。
ＷＯ０２／０６６５１１は、インビボでの半減期が延びたＧＬＰ－２類似体、およびこれらのＧＬＰ－２類似体の炎症性腸疾患などの胃腸障害の治療における医薬としての使用を記載している。これらのＧＬＰ－２類似体は、凍結乾燥された形態で保存され、溶媒中で投与されるように、例えば生理食塩水またはＰＢＳを使用して再構成された。
ＷＯ０１／４１７７９は、化学療法によって誘導されるアポトーシスを阻害し、細胞生存を促進するための、前処置としてのｈ［Ｇｌｙ２］ＧＬＰ－２の使用を記載している。ｈ［Ｇｌｙ２］ＧＬＰ－２は、この類似体をＰＢＳ中で再構成させた後、皮下もしくは静脈内注射または輸注によって送達される。
ＷＯ２００１／０４９３１４は、高い温度での保存および／または高い温度への曝露の後に優れた安定性を示す、ＧＬＰ－２ペプチドおよびそれらの類似体の製剤を対象としている。ＧＬＰ－２組成物は、ＧＬＰ－２ペプチドまたはその類似体、リン酸塩緩衝液、Ｌ－ヒスチジン、およびマンニトールを含む。
ＷＯ２００６／１１７５６５は、［ｈＧｌｙ２］ＧＬＰ－２に比べて多数の置換のうちの１つを含み、インビボでの生物学的活性が改良され、かつ／または例えばインビトロでの安定性アッセイで評価した化学的安定性が改良されたＧＬＰ－２類似体を記載している。特に、ＧＬＰ－２類似体は、野生型ＧＬＰ－２配列の８、１６、２４、および／または２８位のうちの１カ所または複数カ所での置換を、任意選択で２位ならびに３、５、７、１０、および１１位のうちの１カ所もしくは複数カ所でのさらなる置換、ならびに／またはアミノ酸３１～３３のうちの１つもしくは複数の欠失と組み合わせて有するものであると記載されている。またこれらの置換は、Ｎ末端またはＣ末端安定化ペプチド配列の付加とも組み合わせてもよい。これらのＧＬＰ－２類似体の１日１回または２回の投与も記載されている。ＷＯ２００６／１１７５６５で開示された分子のうち、グレパグルチド（ＺＰ１８４８）が液体製剤中で安定であるように設計されており、典型的には、ペン型注射器を使用して毎日投薬することによって投与される。
この領域では、ＧＬＰ－２類似体の製剤を改良するという課題、特に、ペプチドの活性のある単量体形態の過度なレベルの物理的または化学的分解がなく長期保存が可能な安定な液体製剤を提供するという課題が残っている。ペプチド薬剤の液体製剤中では、作用し
得る化学的経路に、ペプチドの共有結合した二量体およびオリゴマーの形成があり、これらの共有結合した高分子量のオリゴマー生成物の形成によって、ペプチドの活性のある単量体形態の量が減少する。質量作用の法則によれば、製剤中のペプチド薬剤の濃度が高くなればなるほど、共有結合したオリゴマー生成物の形成の確率が高くなる場合が一般的である。
製剤をプレフィルドシリンジ、注入ポンプ、着用型注射器、または自己注射器などの送達装置中での使用に適切なものにする範囲内で製剤の粘度が制御されている製剤を提供することも、ＧＬＰ－２類似体製剤の領域における目標であると考える。
概して、本発明は、実施例で報告した研究に基づくものであり、これらの研究は、液体として長期保存に適したものにされ、かつ／または薬物送達装置による送達に特に適したものにされるＧＬＰ－２類似体の液体製剤に関して驚くべき知見を導くものであった。
１つめの研究では、発明者らは、ＧＬＰ－２類似体に由来する製剤中に存在する酢酸塩が、製剤の粘度に影響を及ぼすことを明らかにした。これは、酢酸塩濃度を変更および／または制御することによって製剤の粘度を制御する可能性を切り開くものである。低範囲の粘度の液体製剤は、製剤製造中および／または患者の使用中、破損、投薬の失敗、投薬の不正確さ、およびその他の不具合を潜在的に低減させることにより、薬物送達装置の開発および製造において利点をもたらすため、臨床的に有用である。さらに、低い粘度は、より速い注射および／またはより細い口径（すなわち、より高いゲージ）針の使用を可能とし、その結果、注射による不快感を低減する可能性がある。これは、プレフィルドシリンジ、用量調整可能自己注射器、使い捨て自己注射器、着用型注射器、または注入ポンプなどの、薬物送達装置の形態でのＧＬＰ－２類似体の製剤を提供し、これによって、より単純でより安全でより患者に優しい装置を用いた、すぐ使用できる（ｒｅａｄｙ－ｔｏ－ｕｓｅ）製剤を患者に提供する可能性を切り開くものである。製剤をより高い粘度に制御することは、その他の薬物送達装置中で好適となる可能性がある。
２つめの研究では、本発明者らは、ＺＰ１８４８（グレパグルチド）を２～８℃で長期保存する間、共有結合したオリゴマーの形成が濃度依存性であることを明らかにした。ただし、質量作用の法則が、共有結合的オリゴマー形成がペプチド薬剤濃度の上昇に伴って増加することを含意する通常の状況に反して、本発明者らは、オリゴマー形成の濃度依存性が、ＧＬＰ－２類似体の濃度上昇に反比例して依存することを明らかにした。特定の理論に縛られることを望むものではないが、本発明者らは、ＧＬＰ－２類似体の濃度が上昇するに従って共有結合したオリゴマーの形成が低減するのは、ＧＬＰ－２類似体のリジン尾部が、製剤中での共有結合したオリゴマーの形成を妨害する天然ペプチドの自己会合による構造的集合体の形成を促進する結果であると考える。これは、共有結合したオリゴマーが形成される際に起きるように、活性のある種の減少を引き起こすのではなくむしろ、患者に投与した後、弱く自己会合した種が解離して生物学的に活性のある単量体を放出できることを意味する。
３つめの研究では、本発明者らは、本発明の製剤で使用されるＧＬＰ－２類似体は、再構成された粉末または凍結乾燥ＧＬＰ－２組成物に対して従来技術で一般的に使用されるリン酸塩緩衝液と適合性がないことを明らかにした。本研究では、一部の緩衝液のみがこれらのＧＬＰ－２類似体の製剤化に適合性があり、その結果、これらのＧＬＰ－２類似体が液体剤形で長期保存に適していたことを明らかにした。
したがって、第１の態様において、本発明は、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体またはその薬学的に許容される塩もしくは誘導体を含む安定な液体医薬製剤であっ
て、ＧＬＰ－２類似体が、次式、
Ｒ１－Ｚ１－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｘ５－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘ１１－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｚ２－Ｒ２
（式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１～４アルキル（例えばメチル）、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、またはトリフルオロアセチルであり、
Ｘ５は、ＳｅｒまたはＴｈｒであり、
Ｘ１１は、ＡｌａまたはＳｅｒであり、
Ｒ２は、ＮＨ２またはＯＨであり、ならびに
Ｚ１およびＺ２は、独立して、存在しないまたはＬｙｓの１～６個のアミノ酸単位のペプチド配列である）
によって表され、
（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度のＧＬＰ－２類似体と、
（ｂ）約５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する、ヒスチジン緩衝液、メシル酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、グリシン緩衝液、リジン緩衝液、トリス緩衝液、ビス－トリス緩衝液、およびＭＯＰＳ緩衝液からなる群から選択される緩衝液と、
（ｃ）約９０ｍＭ～約３６０ｍＭの濃度の、マンニトール、ショ糖、グリセロール、ソルビトール、およびトレハロースからなる群から選択される非イオン性張性調節剤と、
（ｄ）約６．６～約７．４のｐＨを有する製剤を得るのに適量のアルギニン
とを含む製剤を提供する。
一部の実施形態において、該製剤は、共有結合したオリゴマー生成物の形態のＧＬＰ－２類似体を５％以下含有する。別法としてまたは追加的に、製剤中のＧＬＰ－２類似体から生じる総酢酸塩濃度は、ＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり１１％酢酸塩以下である。別法としてまたは追加的に、ＧＬＰ－２類似体の共有結合したオリゴマーの形成は、製剤中のＧＬＰ－２類似体の濃度に反比例して依存する。
製剤の成分およびそれらの量は、２～８℃での少なくとも１８カ月間の保存で、少なくとも９０％含有量のＧＬＰ－２類似体および１０％未満の化学的分解物を含む製剤を提供するものである。
さらなる態様において、本発明は、本発明の安定な医薬製剤を収納する容器を含む、製品またはキットを提供する。
さらなる態様において、本発明は、本発明のＧＬＰ－２類似体を含む液体製剤を含有する送達装置を提供する。
さらなる態様において、本発明は、治療法において使用するための本発明のグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の製剤を提供する。
さらなる態様において、本発明は、ヒト患者における胃腸関連障害の治療および／または予防方法において使用するための、本発明のグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の製剤を提供する。
さらなる態様において、本発明は、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体またはその薬学的に許容される塩もしくは誘導体を含む安定な液体医薬製剤を製造する方法であって、ＧＬＰ－２類似体が、次式、
Ｒ１－Ｚ１－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｘ５－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘ１１－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｈｒ
－Ｌｙｓ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｚ２－Ｒ２
（式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１～４アルキル（例えばメチル）、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、またはトリフルオロアセチルであり、
Ｘ５は、ＳｅｒまたはＴｈｒであり、
Ｘ１１は、ＡｌａまたはＳｅｒであり、
Ｒ２は、ＮＨ２またはＯＨであり、
Ｚ１およびＺ２は、独立して、存在しないまたはＬｙｓの１～６個のアミノ酸単位のペプチド配列である）
によって表され、
（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度のＧＬＰ－２類似体を、（ｂ）約５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する、ヒスチジン緩衝液、メシル酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、グリシン緩衝液、リジン緩衝液、トリス緩衝液、ビス－トリス緩衝液、およびＭＯＰＳ緩衝液からなる群から選択される緩衝液と、（ｃ）約９０ｍＭ～約３６０ｍＭの濃度で存在する、マンニトール、ショ糖、グリセロール、ソルビトール、およびトレハロースからなる群から選択される非イオン性張性調節剤と、（ｄ）約６．６～約７．４のｐＨを有する製剤を得るための適量のアルギニンと、調合するステップを含む方法であり、
製剤が、共有結合したオリゴマー生成物の形態のＧＬＰ－２類似体を５％以下含有する、方法を提供する。
さらなる態様において、本発明は、２～８℃で保存された場合、２４カ月間安定である液体医薬製剤を提供するための、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体またはその薬学的に許容される塩もしくは誘導体を含む製剤の使用であって、ＧＬＰ－２類似体が、次式
Ｒ１－Ｚ１－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｘ５－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘ１１－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｚ２－Ｒ２
（式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１～４アルキル（例えばメチル）、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、またはトリフルオロアセチルであり、
Ｘ５は、ＳｅｒまたはＴｈｒであり、
Ｘ１１は、ＡｌａまたはＳｅｒであり、
Ｒ２は、ＮＨ２またはＯＨであり、
Ｚ１およびＺ２は、独立して、存在しないまたはＬｙｓの１～６個のアミノ酸単位のペプチド配列である）
によって表され、
製剤が、
（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度のＧＬＰ－２類似体と、
（ｂ）約５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する、ヒスチジン緩衝液、メシル酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、グリシン緩衝液、リジン緩衝液、トリス緩衝液、ビス－トリス緩衝液、およびＭＯＰＳ緩衝液からなる群から選択される緩衝液と、
（ｃ）約９０ｍＭ～約３６０ｍＭの、濃度のマンニトール、ショ糖、グリセロール、ソルビトール、およびトレハロースからなる群から選択される非イオン性張性調節剤と、
（ｄ）約６．６～約７．４のｐＨを有する製剤を得るための適量のアルギニン
とを含む、
使用を提供する。
さらなる態様において、本発明は、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体またはその薬学的に許容される塩もしくは誘導体を含む安定な液体医薬製剤の粘度を調節する
方法であって、ＧＬＰ－２類似体が、次式、
Ｒ１－Ｚ１－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｘ５－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘ１１－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｚ２－Ｒ２
（式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１～４アルキル（例えばメチル）、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、またはトリフルオロアセチルであり、
Ｘ５は、ＳｅｒまたはＴｈｒであり、
Ｘ１１は、ＡｌａまたはＳｅｒであり、
Ｒ２は、ＮＨ２またはＯＨであり、
Ｚ１およびＺ２は、独立して、存在しないまたはＬｙｓの１～６個のアミノ酸単位のペプチド配列である）
によって表され、
方法が、（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度のＧＬＰ－２類似体を、（ｂ）約５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する、ヒスチジン緩衝液、メシル酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、グリシン緩衝液、リジン緩衝液、トリス緩衝液、ビス－トリス緩衝液、またはＭＯＰＳ緩衝液からなる群から選択される緩衝液と、（ｃ）約９０ｍＭ～約３６０ｍＭの濃度で存在する、マンニトール、ショ糖、グリセロール、ソルビトール、およびトレハロースからなる群から選択される非イオン性張性調節剤と、（ｄ）約６．６～約７．４のｐＨを有する製剤を得るための適量のアルギニンと調合するステップを含み、
製剤中のＧＬＰ２類似体から生じる総酢酸塩濃度が、ＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり１１％酢酸塩以下であり、製剤が、２５℃で測定された０．８を超え２．０ｍＰａ／秒以下である粘度を有する、
方法を提供する。
さらなる態様において、本発明は、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体またはその薬学的に許容される塩もしくは誘導体を含む安定な液体医薬製剤中での、ＧＬＰ－２類似体の共有結合したオリゴマー生成物の形成を低減させる方法であって、ＧＬＰ－２類似体は、次式、
Ｒ１－Ｚ１－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｘ５－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘ１１－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｚ２－Ｒ２
（式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１～４アルキル（例えばメチル）、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、またはトリフルオロアセチルであり、
Ｘ５は、ＳｅｒまたはＴｈｒであり、
Ｘ１１は、ＡｌａまたはＳｅｒであり、
Ｒ２は、ＮＨ２またはＯＨであり、
Ｚ１およびＺ２は、独立して、存在しないまたはＬｙｓの１～６個のアミノ酸単位のペプチド配列である）
によって表され、
方法が、（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度のＧＬＰ－２類似体を、（ｂ）約５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する、ヒスチジン緩衝液、メシル酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、グリシン緩衝液、リジン緩衝液、トリス緩衝液、ビス－トリス緩衝液、またはＭＯＰＳ緩衝液からなる群から選択される緩衝液と、（ｃ）約９０ｍＭ～約３６０ｍＭの濃度で存在する、マンニトール、ショ糖、グリセロール、ソルビトール、およびトレハロースからなる群から選択される非イオン性張性調節剤と、（ｄ）約６．６～約７．４のｐＨを有する製剤を得るための適量のアルギニンと、調合するステップを含み、
製剤が、共有結合したオリゴマー生成物の形態のＧＬＰ－２類似体を５％以下含有する、方法を提供する。場合によって、本発明のこの態様において、ＧＬＰ－２類似体の共有結合したオリゴマーの形成は、製剤中のＧＬＰ－２類似体の濃度に反比例して依存する。
さらなる態様において、本発明は、２～８℃で保存された場合、２４カ月間安定である液体医薬製剤において、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体またはその薬学的に許容される塩もしくは誘導体の共有結合したオリゴマー生成物の形成を低減させるための製剤の使用であって、ＧＬＰ－２類似体が、次式
Ｒ１－Ｚ１－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｘ５－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘ１１－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｚ２－Ｒ２
（式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１～４アルキル（例えばメチル）、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、またはトリフルオロアセチルであり、
Ｘ５は、ＳｅｒまたはＴｈｒであり、
Ｘ１１は、ＡｌａまたはＳｅｒであり、
Ｒ２は、ＮＨ２またはＯＨであり、
Ｚ１およびＺ２は、独立して、存在しないまたはＬｙｓの１～６個のアミノ酸単位のペプチド配列である）
によって表され、
製剤が、
（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度のＧＬＰ－２類似体と、
（ｂ）約５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する、ヒスチジン緩衝液、メシル酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、グリシン緩衝液、リジン緩衝液、トリス緩衝液、ビス－トリス緩衝液、およびＭＯＰＳ緩衝液からなる群から選択される緩衝液と、
（ｃ）約９０ｍＭ～約３６０ｍＭの濃度の、マンニトール、ショ糖、グリセロール、ソルビトール、およびトレハロースからなる群から選択される非イオン性張性調節剤と、
（ｄ）約６．６～約７．４のｐＨを有する製剤を得るのに適量のアルギニン
とを含み、
共有結合したオリゴマー生成物の形態のＧＬＰ－２類似体を５％以下含有する、
使用を提供する。場合によって、本発明のこの態様において、ＧＬＰ－２類似体の共有結合したオリゴマーの形成は、製剤中のＧＬＰ－２類似体の濃度に反比例して依存する。
さらなる態様において、本発明は、２～８℃で保存された場合、２４カ月間安定である液体医薬製剤において、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体またはその薬学的に許容される塩もしくは誘導体を含む液体医薬製剤の粘度を調節するための製剤の使用であって、ＧＬＰ－２類似体が、次式、
Ｒ１－Ｚ１－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｘ５－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘ１１－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｚ２－Ｒ２
（式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１～４アルキル（例えばメチル）、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、またはトリフルオロアセチルであり、
Ｘ５は、ＳｅｒまたはＴｈｒであり、
Ｘ１１は、ＡｌａまたはＳｅｒであり、
Ｒ２は、ＮＨ２またはＯＨであり、
Ｚ１およびＺ２は、独立して、存在しないまたはＬｙｓの１～６個のアミノ酸単位のペプチド配列である）
によって表され、
製剤が、
（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度のＧＬＰ－２類似体と、
（ｂ）約５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する、ヒスチジン緩衝液、メシル酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、グリシン緩衝液、リジン緩衝液、トリス緩衝液、ビス－トリス緩衝液、およびＭＯＰＳ緩衝液からなる群から選択される緩衝液と、
（ｃ）約９０ｍＭ～約３６０ｍＭの濃度の、マンニトール、ショ糖、グリセロール、ソルビトール、およびトレハロースからなる群から選択される非イオン性張性調節剤と、
（ｄ）約６．６～約７．４のｐＨを有する製剤を得るための適量のアルギニン
とを含み、
製剤中のＧＬＰ２類似体から生じる総酢酸塩濃度が、ＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり１１％酢酸塩以下であり、製剤が、２５℃で測定された０．８から２．０ｍＰａ／秒の間の粘度を有する、
使用を提供する。
さらなる態様において、本発明は、次式、
（Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２），ｘ（ＣＨ３ＣＯＯＨ）（式中、ｘは１．０～８．０である）
を有するグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の酢酸塩を含む固体組成物を提供する。
さらなる態様において、本発明は、安定な水性医薬製剤であって、
（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度の本発明の固体組成物と、
（ｂ）約５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する、ヒスチジン緩衝液、メシル酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、グリシン緩衝液、リジン緩衝液、トリス緩衝液、ビス－トリス緩衝液、およびＭＯＰＳ緩衝液からなる群から選択される緩衝液と、
（ｃ）約９０ｍＭ～約３６０ｍＭの濃度の、マンニトール、ショ糖、グリセロール、ソルビトール、およびトレハロースからなる群から選択される非イオン性張性調節剤と、
（ｄ）約６．６～約７．４のｐＨを有する製剤を得るための適量のアルギニン
とを含み、
共有結合したオリゴマー生成物の形態のＧＬＰ－２類似体を５％以下含有し、２５℃で測定された０．８から２．０ｍＰａ／秒の間の粘度を有する製剤を提供する。
本明細書に記載の本発明の態様のすべてにおいて、緩衝液は、ヒスチジン緩衝液、メシル酸塩緩衝液、および酢酸塩緩衝液からなる群から選択してもよい。
本明細書に記載の本発明の態様のすべてにおいて、非イオン性張性調節剤は、マンニトール、ショ糖、グリセロール、およびソルビトールからなる群から選択され得る。
一部の実施形態において、製剤は、共有結合したオリゴマー生成物の形態のＧＬＰ－２類似体を５％以下含有する。別法としてまたは追加的に、製剤中のＧＬＰ－２類似体から生じる総酢酸塩濃度は、ＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり１１％酢酸塩以下である。別法としてまたは追加的に、ＧＬＰ－２類似体の共有結合したオリゴマーの形成は、製剤中のＧＬＰ－２類似体の濃度に反比例して依存する。
さらなる態様において、本発明は、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体またはその薬学的に許容される塩もしくは誘導体を含む安定な液体医薬製剤であって、ＧＬＰ－２類似体が、次式、
Ｒ１－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｘ５－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘ１１－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｙ
ｓ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｚ２－Ｒ２
（式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１～４アルキル（例えばメチル）、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、またはトリフルオロアセチルであり、
Ｘ５は、ＳｅｒまたはＴｈｒであり、
Ｘ１１は、ＡｌａまたはＳｅｒであり、
Ｒ２は、ＮＨ２またはＯＨであり、
Ｚ２は、Ｌｙｓの６アミノ酸単位のペプチド配列である）
によって表され、本明細書で示された本発明の態様のいずれか１つに記載されるような成分を含む製剤に関する。
本発明のこの態様では、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体またはその塩を含む製剤は、潰瘍、消化障害、吸収不良症候群、短腸症候群、盲管症候群、炎症性腸疾患、セリアックスプルー（例えばグルテン過敏性腸症またはセリアック病から生じる）、熱帯性スプルー、低ガンマグロブリン血症性スプルー、腸炎、限局性腸炎（クローン病）、潰瘍性大腸炎、小腸損傷、または短腸症候群（ＳＢＳ）などの胃腸関連障害の治療および／または予防のために使用してもよい。別法としてまたは追加的に、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体は、放射線性腸炎、感染性もしくは感染後腸炎、または毒性物質もしくはその他の化学療法剤に起因する小腸損傷のような、胃腸関連障害の治療および／または予防のために使用してもよい。この場合、ＧＬＰ－２類似体による処置は、任意選択で、１つまたは複数の抗がん療法と組み合わせてもよく、したがって、患者に１種もしくは複数種の化学療法剤を投与するステップ、または放射線療法によって患者を処置するステップを含んでもよい。
本発明の一部の実施形態において、上記式中、Ｘ５はＴｈｒであり、かつ／またはＸ１１はＡｌａである。これらのグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の例としては、以下が挙げられる。
ＺＰ１８４８ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２（配列番号１）
ＺＰ２９４９ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫ－ＯＨ（配列番号２）；
ＺＰ２７１１ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫ－ＯＨ（配列番号３）；
ＺＰ２４６９ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫ－ＯＨ（配列番号４）；
ＺＰ１８５７ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤ－ＮＨ２（配列番号５）；または
ＺＰ２５３０ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤ－ＯＨ（配列番号６）
本発明の一部の実施形態において、上記式中、Ｘ５はＳｅｒであり、かつ／またはＸ１１はＳｅｒである。これらのグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の例としては、以下が挙げられる。
ＺＰ１８４６ Ｈ－ＨＧＥＧＳＦＳＳＥＬＳＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２（配列番号７）、
ＺＰ１８５５ Ｈ－ＨＧＥＧＳＦＳＳＥＬＳＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤ－ＮＨ２（配列番号８）、または
ＺＰ２２４２ Ｈ－ＨＧＥＧＳＦＳＳＥＬＳＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫ－ＯＨ（配列番号９）。
ここで、本発明の実施形態を、添付の図面に照らして非制限的な例として記載する。た
だし、本開示を考慮すると、様々なさらなる態様および本発明の実施形態が当業者には明らかとなるであろう。本明細書において使用する場合、「および／または」は、２つの指定した特徴または要素の各々の、もう一方を含むまたは含まない具体的な開示として用いるものである。例えば、「Ａおよび／またはＢ」は、あたかも本明細書において各々が個々に説明されているかのように、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ、ならびに（ｉｉｉ）ＡおよびＢ、の各々の具体的な開示として用いられるものである。
別段の指示がない限り、上記の特徴の記載および定義は、いかなる本発明の特定の態様または実施形態にも限定されるものではなく、記載されるすべての態様および実施形態に等しく適用する。
ＺＰ１８４８ペプチドからのオリゴマーの分離を示す典型的なクロマトグラムを示す図である。 製剤の製造後、粘度（四角）および流体力学的半径（ｚ－平均）（丸）が、酢酸塩濃度に応じてどのように変化したかを示す図である。データは、１１％酢酸塩を超えると、粘度および流体力学的半径（ｚ－平均）が増加し始めることを示す。 ４０℃で０～３週間、様々な緩衝液を使用した、２０ｍｇ／ｍＬでの安定性の評価（開始時１００％に対して正規化した）を示す図である。 ４０℃で０～３週間、様々な緩衝液を使用した、２ｍｇ／ｍＬでの安定性（開始時１００％に対して正規化した）を示す図である。 ４０℃で０～３週間、様々な等張化剤を使用した、２０ｍｇ／ｍＬでの安定性の評価（開始時１００％に対して正規化した）を示す図である。 ４０℃で０～３週間、様々な等張化剤を使用した、２ｍｇ／ｍＬでの安定性の評価（開始時１００％に対して正規化した）を示す図である。 様々な濃度のＺＰ１８４８酢酸塩、様々な塩形態、様々な等張化剤および様々な緩衝液を使用した、製剤１～５の純度を示す図である。 ２５℃で１３週間、様々な防腐剤と組み合わせた、ペプチドの安定性を示す図である。 ２５℃で検討した製剤のＨＰＬＣ純度を示す図である（加速条件）。
定義
別段の指定がない限り、以下の定義は、上記の記載で使用された特定の用語について示すものである。
記載および特許請求の範囲を通して、天然アミノ酸については、慣用的な一文字および三文字のコードを使用する。本発明のペプチドのすべてのアミノ酸残基は、好ましくはＬ－立体配置のアミノ酸残基であるが、Ｄ－立体配置アミノ酸が存在していてもよい。
好ましい本発明の化合物は、特に腸の成長において、少なくとも１つのＧＬＰ－２生物学的活性を有する。ＧＬＰ－２生物学的活性は、例えば、（例えば）ＷＯ２００６／１１７５６５の実施例に記載されているように、試験動物をＧＬＰ－２類似体で処置したまたはＧＬＰ－２類似体に曝露させた後、腸全体または腸の一部を測定するインビボでのアッセイで評価することができる。
本発明の一部の態様において、ＧＬＰ－２類似体を含む液体製剤は、製剤中、ＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり１１％以下の酢酸塩の総酢酸塩濃度、より好ましくはＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり１０％以下の酢酸塩、より好ましくはＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり９％以下の酢酸塩、より好ましくはＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり８％以下の酢酸塩、より
好ましくはＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり７％以下の酢酸塩、より好ましくはＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり６％以下の酢酸塩、より好ましくはＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり５％以下の酢酸塩、より好ましくはＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり４％以下の酢酸塩、より好ましくはＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり３％以下の酢酸塩、およびより好ましくはＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり２％以下の酢酸塩の総酢酸塩濃度を有する。凍結乾燥された原薬中の酢酸塩濃度は、最終的なクロマトグラフィー工程の間に使用される移動相中の酢酸の濃度を調整することによって制御することができる。これによって、１１％未満の酢酸塩含有量の原薬が得られることとなる。よって、例えば、ＧＬＰ－２類似体を２０ｍｇ／ｍＬ有する製剤の場合、総酢酸塩濃度は３７ｍＭ以下となる。参照として、１０％総酢酸塩濃度は３４ｍＭに相当し、９％は３０ｍＭに、８％は２７ｍＭに、７％は２４ｍＭに、６％は２０ｍＭに相当する。総酢酸塩濃度は、当技術分野で公知の方法、例えばＨＰＬＣを使用して決定してもよい。
下記の実施例において、本発明の液体製剤の粘度は、総酢酸塩濃度に依存することが示されている。好ましくは、該製剤は、２５℃で測定された場合、０．８から２．０ｍＰａ／秒の間の粘度を有する。簡便には、粘度は、ｍｉｃｒｏＶＩＳＣ（商標）を使用することによって測定してもよい。並行して、流体力学的半径を、動的光散乱（ＤＬＳ）プレートリーダー（Ｗｙａｔｔ ＤｙｎａＰｒｏ ＩＩ）を使用して測定してもよい。試料は、６％酢酸塩を含有するＧＬＰ－２類似体の原薬（ＤＳ）を含んで調製し、次いで、７．８～１５％酢酸塩を有するＤＳを模倣するために、酢酸塩を加えた。６．７～１５％まで様々な酢酸塩濃度を有する製剤を製造して得られたデータを、図２において下記に示す。総酢酸塩濃度を制御する効果は、例えば総酢酸塩濃度を下げることによって本発明の製剤の注入性を調節して、より容易に注射できるより低い粘性の製剤を提供することが可能になることである。
本発明による液体製剤は、好ましくは等張液体製剤である。「等張性」は、本発明の製剤が体液と同じまたは同様の浸透圧を有することを意味する。好ましくは、本発明の製剤は、浸透圧計によって測定される場合、約３００±６０ｍＯｓｍの浸透圧重量モル濃度を有する。
追加的にまたは別法として、本発明は、ＧＬＰ－２類似体の共有結合したオリゴマーの形成が、製剤中のＧＬＰ－２類似体の濃度に反比例して依存することを実証するものである。実施例に示すように、共有結合したオリゴマーのこの量は、サイズ排除クロマトグラフィーを使用し、単量体ＧＬＰ－２類似体およびオリゴマーそれぞれについてピーク下面積を決定して、決定することができる。これは、Ｄｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ３０００ ＨＰＬＣシステムを使用して行うことが可能であり、０．５ｍｌ／分の流速の直線勾配を分析のために用いた。移動相は、４５％アセトニトリルおよび５５％Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水中０．１％ＴＦＡからなった。検出には、２１５ｎｍの波長を使用した。これは、本発明の製剤が、約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度の、より好ましくは約１５ｍｇ／ｍＬ～約２５ｍｇ／ｍｌの濃度の、および最も好ましくは約２０ｍｇ／ｍＬの濃度のＧＬＰ－２類似体を、一般的に含有することを意味する。本発明の一部の態様において、ＧＬＰ－２類似体の濃度は、製剤が、好ましくは１８カ月の保存の後に、共有結合したオリゴマー生成物の形態のＧＬＰ－２類似体を、１０％以下、より好ましくは５％以下、より好ましくは４％以下、より好ましくは３％以下、およびより好ましくは２％以下含有するように選択されることが好ましい。例示として、共有結合したオリゴマー生成物の量は、２％から５％の間の範囲、より好ましくは２％から４％の間の範囲、および最も好ましくは２％から３％の間の範囲であってもよい。
場合によって、本発明の製剤は、１日１回または２回の投与計画で使用してもよい。場合によって、本発明の製剤は、週１回または２回の投与計画で使用してもよい。別法とし
てまたは追加的に、本発明のＧＬＰ－２類似体の投与計画は、２日、２．５日、３日、３．５日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、または１２日、期間を隔てた複数回またはコースの投薬を含んでもよい。好ましい実施形態において、投薬は、３日、３．５日、４日、５日、６日、７日、または８日、期間を隔てる。好ましい実施形態において、投薬は、３日、３．５日、４日、または７日、期間を隔てる。当技術分野では理解されるように、投薬間の期間は、ある程度違っていてもよいため、投薬ごとおよびすべての投薬は、正確に同じ期間で隔てられていない。これは、多くの場合、医師の判断下で定められることとなる。よって、投薬は、臨床的に許容できる範囲の期間、例えば、約２日から約１０日間までの、または約３日もしくは４日から約７日もしくは８日までの期間を隔ててもよい。
本発明の製剤は、ＧＬＰ－２類似体の安定な液体医薬製剤である。「安定な」製剤とは、その中のペプチドが、保存中、その物理的安定性および／もしくは化学的安定性ならびに／または生物学的活性を実質的に保持する製剤である。好ましくは、該製剤は、保存中、その物理的および化学的安定性ならびにその生物学的活性を実質的に保持する。保存期間は、一般的に、製剤の所期の有効期間に基づいて選択される。本発明の製剤は、安定な液体製剤、例えば安定な水性液体製剤として提供される。タンパク質の安定性を測定する様々な分析技術が当技術分野で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２４７～３０１ページ、Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、出版（１９９１年）およびＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９～９０ページ（１９９３年）の中で概説されている。本発明において、「安定な」製剤には、２～８℃で少なくとも１８カ月間保存された後に、製剤中、少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、および最も好ましくは少なくとも９９％のＧＬＰ－２類似体が活性である製剤が含まれる。
安定性は、選択した期間のために選択した温度で、例えば、製剤を試験する期間を短くするために温度を上げて測定してもよい。一般的に、２から８℃の間の温度での保存は、通常の冷蔵条件下での保存を意味する。ある実施形態において、製剤は、そのような条件下で、少なくとも１２カ月間、より好ましくは少なくとも１８カ月間、より好ましくは少なくとも２４カ月間、安定である。安定性は、凝集体形成の評価（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、濁度を測定することによって、かつ／または視覚的検査によって）；陽イオン交換クロマトグラフィー、撮像キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）、またはキャピラリーゾーン電気泳動を使用して電荷不均一性を評価することによって；アミノ末端またはカルボキシ末端配列解析；質量分光分析；還元された抗体とインタクトな抗体とを比較するためのＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析；ペプチドマップ（例えばトリプシンまたはＬＹＳ－Ｃによる）分析；抗体の生物学的活性または抗原結合機能の評価などを含む、実に様々な方法で、定性的および／または定量的に評価することができる。不安定性は、凝集、脱アミド化（例えばＡｓｎ脱アミド化）、酸化（例えばＭｅｔ酸化）、異性化（例えばＡｓｐ異性化）、クリッピング／加水分解／断片化（例えばヒンジ領域断片化）、スクシンイミド形成、不対システイン、Ｎ末端伸長、Ｃ末端プロセシング、グリコシル化の違いなどのうちのいずれか１つまたは複数に関係していてもよい。
ペプチドが、例えば、色および／もしくは透明度の視覚的検査で、またはＵＶ光散乱、動的光散乱、円偏光二色性によって、もしくはサイズ排除クロマトグラフィーによって測定される場合に凝集、沈殿、および／または変性の徴候を示さず（またはきわめてわずかな徴候しか示さない）、その生物学的活性をなお保持すると考えられる場合、ペプチドは、医薬製剤中で「その物理的安定性を保持する」。
所与の期間における化学的安定性が、ペプチドが下記に定義したようなその生物学的活性なお保持すると考えられるようなものである場合、ペプチドは、医薬製剤中で「その化学的安定性を保持する」。化学的安定性は、ペプチドの化学的に改変された形態を検出し、定量することによって評価することができる。化学的改変は、例えば、ＨＰＬＣもしくはサイズ排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および／または質量分析を使用して評価することができる、異性化、酸化、サイズ変更（例えばクリッピング）を含んでいてもよい。その他のタイプの化学的改変としては、例えば、ＨＰＬＣもしくはイオン交換クロマトグラフィーまたはｉｃＩＥＦによって評価することができる、電荷改変ｎ（例えば脱アミド化の結果として生じる）が挙げられる。
ＧＬＰ－２類似体
本発明の製剤中に存在するＧＬＰ－２類似体は、天然ＧＬＰ－２と比較して、上記で定義した１つまたは複数のアミノ酸置換、欠失、逆位、または付加を有する。この定義には、同義語のＧＬＰ－２ミメティックおよび／またはＧＬＰ－２アゴニストも含まれる。さらに、本発明の類似体は、そのアミノ酸側基、α－炭素原子、末端アミノ基、または末端カルボン酸基のうちの１つまたは複数の化学的修飾を、追加的に有してもよい。化学的修飾には、化学的部分の付加、新規結合の創出、および化学的部分の除去が含まれるが、それらだけに限定されない。アミノ酸側基における修飾には、リジンε－アミノ基のアシル化、アルギニン、ヒスチジン、またはリジンのＮ－アルキル化、グルタミン酸またはアスパラギン酸のカルボン酸基（ｇｌｕｔａｍｉｃ ｏｒ ａｓｐａｒｔｉｃ ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｇｒｏｕｐ）のアルキル化、およびグルタミンまたはアスパラギンの脱アミド化が含まれるが、限定されない。末端アミノの修飾には、脱アミノ、Ｎ－低級アルキル、Ｎ－ジ－低級アルキル、およびＮ－アシル修飾が含まれるが、限定されない。末端カルボキシ基の修飾には、アミド、低級アルキルアミド、ジアルキルアミド、および低級アルキルエステル修飾が含まれるが、限定されない。好ましくは、本明細書において、低級アルキルは、Ｃ１～Ｃ４アルキルである。さらに、１つまたは複数の側基、または末端基は、当業者であるペプチド化学者に公知の保護基によって保護されていてもよい。アミノ酸のα－炭素は、モノ－またはジ－メチル化されていてもよい。
一部の態様において、本発明の液体製剤は、次式、
Ｒ１－Ｚ１－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｘ５－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘ１１－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｚ２－Ｒ２
（式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１～４アルキル（例えばメチル）、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、またはトリフルオロアセチルであり、
Ｘ５は、ＳｅｒまたはＴｈｒであり、
Ｘ１１は、ＡｌａまたはＳｅｒであり、
Ｒ２は、ＮＨ２またはＯＨであり、ならびに
Ｚ１およびＺ２は、独立して、存在しないまたはＬｙｓの１～６個のアミノ酸単位のペプチド配列である）
によって表されるグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体、またはその薬学的に許容される塩もしくは誘導体を使用する。
本発明の一部の実施形態において、上記式中、Ｘ５はＴｈｒであり、かつ／またはＸ１１はＡｌａである。これらのグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の例としては、以下が挙げられる。
ＺＰ１８４８ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２（配列番号１）
ＺＰ２９４９ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫ－ＯＨ（配列番号２）；
ＺＰ２７１１ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫ－ＯＨ（配列番号３）；
ＺＰ２４６９ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫ－ＯＨ（配列番号４）；
ＺＰ１８５７ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤ－ＮＨ２（配列番号５）；または
ＺＰ２５３０ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤ－ＯＨ（配列番号６）
本発明の実施形態において、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体は、ＺＰ１８４８ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２（配列番号１）である。
本発明の一部の実施形態において、上記式中、Ｘ５はＳｅｒであり、かつ／またはＸ１１はＳｅｒである。これらのグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の例としては、以下が挙げられる。
ＺＰ１８４６ Ｈ－ＨＧＥＧＳＦＳＳＥＬＳＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２（配列番号７）、
ＺＰ１８５５ Ｈ－ＨＧＥＧＳＦＳＳＥＬＳＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤ－ＮＨ２（配列番号８）、または
ＺＰ２２４２ Ｈ－ＨＧＥＧＳＦＳＳＥＬＳＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫ－ＯＨ（配列番号９）
本発明の実施形態において、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体は、ＺＰ１８４６ Ｈ－ＨＧＥＧＳＦＳＳＥＬＳＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２（配列番号７）である。
本発明のペプチド（原薬）は、塩またはその他の誘導体の形態でも提供される可能性があることを理解されたい。塩には、酸付加塩および塩基性塩などの、薬学的に許容される塩が含まれる。酸付加塩の例としては、塩酸塩、クエン酸塩、塩化物塩、および酢酸塩が挙げられる。好ましくは、塩は酢酸塩である。一般的に、塩は、塩化物塩ではないことが好ましい。塩基性塩の例としては、カチオンが、ナトリウムおよびカリウムなどのアルカリ金属、カルシウムなどのアルカリ土類金属、およびアンモニウムイオン＋Ｎ（Ｒ３）３（Ｒ４）（式中、Ｒ３およびＲ４は、独立して、場合によって置換されているＣ１～６－アルキル、場合によって置換されているＣ２～６－アルケニル、場合によって置換されているアリール、または場合によって置換されているヘテロアリールを表わす）から選択される塩が挙げられる。薬学的に許容される塩のその他の例は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第１７版、Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｒｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９８５年、およびそれ以降の版、ならびにＥｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉａ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙに記載されている。
好ましい実施形態において、本発明のＧＬＰ－２類似体の酢酸塩は、ＺＰ１８４８－酢酸塩、ＺＰ２９４９－酢酸塩、ＺＰ２７１１－酢酸塩、ＺＰ２４６９－酢酸塩、ＺＰ１８５７－酢酸塩、ＺＰ２５３０－酢酸塩、ＺＰ１８４６－酢酸塩、ＺＰ１８５５－酢酸塩、およびＺＰ２２４２－酢酸塩からなる群から選択される。本文脈において、「ＺＰ１８４８－酢酸塩」という用語は、酢酸塩の形態であるＺＰ１８４８分子を指す。ＧＬＰ－２類似体の酢酸塩は、次式、（ＧＬＰ－２類似体），ｘ（ＣＨ３ＣＯＯＨ）（式中、ｘは１．０～８．０であり、すなわち、式中、ｘは１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６
．０、７．０、または８．０である）によって表わすことができる。ＧＬＰ－２類似体の酢酸塩のいかなる組成物でも、異なる数の酢酸塩分子を有する分子が存在する可能性があるため、ｘは必ずしも整数ではない。場合によって、ｘは、４．０から８．０であり、ｘは６．０から８．０であり、またはｘは４．０から６．５である。場合によって、ｘは４．０から６．０であり、ｘは２．０から７．０であり、ｘは３．０から６．０であり、ｘは４．０から６．０であり、またはｘは４．０から８．０である。
好ましい実施形態において、ＧＬＰ－２類似体は、ＺＰ１８４８－酢酸塩、またはＨ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２酢酸塩（配列番号１）もしくは（Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２），ｘ（ＣＨ３ＣＯＯＨ）（式中、ｘは１．０～８．０である）である。
したがって、さらなる態様において、本発明は、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の酢酸塩を含む固体組成物を提供する。固体組成物は、本発明の液体製剤を作製するために使用される賦形剤との調合に有用である。一実施形態において、本発明は、次式、
（Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２），ｘ（ＣＨ３ＣＯＯＨ）（式中、ｘは１．０～８．０である）
を有するグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の酢酸塩を含む固体組成物を提供する。
ＧＬＰ－２類似体当たり８．０酢酸塩分子という上限は、１１％未満の酢酸塩という酢酸塩含有量に相当し、これを調合して、２５℃で測定された０．８から２．０ｍＰａ／秒の間の粘度を有することが可能である。
ＧＬＰ－２類似体の各分子に結合した酢酸塩分子の数の範囲が、製剤のこの成分の分子量範囲を定める。例えば、ＺＰ１８４８の酢酸塩の場合、ＧＬＰ－２類似体の各分子に結合した酢酸塩分子の数の範囲が、ＺＰ１８４８－酢酸塩の分子量範囲を定める。例として、ＺＰ１８４８の各分子と１酢酸塩当量とでは、分子量＝４３１６＋６０＝４３７６Ｄａとなる。したがって、ＺＰ１８４８に酢酸塩当量を増していく場合の分子量は、１酢酸塩当量＝４３７６Ｄａ、２酢酸塩当量＝４４３６Ｄａ、３酢酸塩当量＝４４９６Ｄａ、４酢酸塩当量＝４５５６Ｄａ、５酢酸塩当量＝４６１６Ｄａ、６酢酸塩当量＝４６７６Ｄａ、７酢酸塩当量＝４７３６Ｄａ、および８酢酸塩当量＝４７９６Ｄａである。これによって、次いで、分子量範囲は、１～８酢酸塩当量＝４３７６Ｄａ～４７９６Ｄａ；４～８酢酸塩当量＝４５５６Ｄａ～４７９６Ｄａ、および６～８酢酸塩当量＝４６７６Ｄａ～４７９６Ｄａと定められる。
本発明のＧＬＰ－２類似体のその他の誘導体には、Ｍｎ２＋およびＺｎ２＋などの金属イオン、インビボで加水分解性のエステルなどのエステル、遊離酸もしくは塩基、水和物、プロドラッグ、または脂質を有する、配位化合物が含まれる。エステルは、当技術分野で公知の技術を使用して、化合物中に存在するヒドロキシルまたはカルボン酸基と適切なカルボン酸またはアルコール反応パートナーとの間で形成することができる。化合物のプロドラッグとしての誘導体は、インビボまたはインビトロで、親化合物のうちの１つに転換可能である。典型的には、化合物の生物学的活性のうちの少なくとも１つは、化合物のプロドラッグ形態では低減されることとなり、プロドラッグの転換によって活性化されて、化合物またはその代謝産物を放出することができる。プロドラッグの例としては、生体内の本来の場所で除去され活性化合物を放出することができる、またはインビボで薬剤の排除を阻害するよう作用することができる保護基の使用が挙げられる。
Ｚ１およびＺ２は、独立して存在し、かつ／もしくは存在せず、またはＬｙｓの１～６個のアミノ酸単位のペプチド配列、すなわち、１、２、３、４、５、または６個のＬｙｓ残基である。Ｌｙｓ残基は、Ｄ－またはＬ－立体配置のどちらかを有してもよいが、Ｌ－立体配置を有する。特に好ましい配列は、Ｚは４、５、または６個の連続したリジン残基、および特に６個の連続したリジン残基の配列である。例示的な配列Ｚが、ＷＯ０１／０４１５６に示されている。ある実施形態において、Ｚ１は存在しない。そのような場合、Ｚ２は存在しても存在していなくてもよい。
ＧＬＰ－２類似体の製剤
ＧＬＰ－２類似体の製剤は、すぐ使用できる製剤である。本明細書において使用される「すぐ使用できる」という用語は、指定の投与経路による使用の前に、所定の量の希釈剤、例えば、注射用の水、またはその他の好適な希釈剤による構成または希釈を必要としない製剤を指す。
本明細書に記載したように、本発明のＧＬＰ－２類似体の液体製剤は、緩衝液、非イオン性張性調節剤、および最終製剤のｐＨを得るための適量のアルギニンを含む。通常の製薬慣行に従い、本発明の製剤は、滅菌済であり、かつ／または還元剤を含まない。場合によって、本発明の液体製剤は、水性の液体製剤である。場合によって、本発明の液体製剤は、非水性の液体製剤である。
本明細書において使用される「緩衝液」という用語は、医薬製剤のｐＨを安定化する薬学的に許容される賦形剤を意味する。好適な緩衝液は、当技術分野では公知であり、文献でみつけることができる。実施例におけるスクリーニング実験は、ヒスチジン緩衝液、メシル酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、グリシン緩衝液、リジン緩衝液、トリス緩衝液、ビス－トリス緩衝液、およびＭＯＰＳ緩衝液から選択される緩衝液がＧＬＰ－２類似体を溶解し、粘性にせず、濁らせず、またはペプチド薬剤を沈殿させない安定な製剤をもたらしたため、本発明の製剤がこれらの緩衝液を含むことが好ましいことを示している。好ましい実施形態において、緩衝液は、ヒスチジン緩衝液、例えばＬ－ヒスチジンである。一般的に、緩衝液は、約５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度、より好ましくは約５ｍＭ～約２５ｍＭの濃度、および最も好ましくは約１５ｍＭの濃度で存在することとなる。本出願における実験に基づくと、緩衝液は、リン酸塩緩衝液、クエン酸塩緩衝液、クエン酸塩／トリス緩衝液、および／またはコハク酸塩緩衝液ではないことが好ましい。
本明細書において使用される「張性調節剤」という用語は、製剤の張性を調節するために使用される薬学的に許容される等張化剤を意味する。本発明の製剤は好ましくは等張性であり、すなわち、本発明の製剤は、ヒト血清と実質的に同じである浸透圧を有する。製剤中で使用される張性調節剤は、好ましくは非イオン性張性調節剤であり、好ましくはマンニトール、ショ糖、グリセロール、ソルビトール、およびトレハロースからなる群から選択される。好ましい非イオン性張性調節剤は、マンニトール、例えばＤ－マンニトールである。張性調節剤の濃度は、特に製剤が等張であることが意図される場合、その他の製剤の成分の濃度に依存することとなる。典型的には、非イオン性張性調節剤は、約９０ｍＭ～約３６０ｍＭの濃度、より好ましくは約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭの濃度、および最も好ましくは約２３０ｍＭの濃度で使用されることとなる。
一般的に、本発明の液体製剤の成分および量は、約６．６～約７．４のｐＨ、より好ましくは約６．８～約７．２のｐＨ、および最も好ましくは約７．０のｐＨを有する製剤が得られるように選択される。所望のｐＨ範囲内となるように、アルギニンを適量（ｑ．ｓ．）加えてｐＨを調整してもよい。実施例に示した実験に基づくと、ｐＨ調整は塩酸または水酸化ナトリウムを使用して行わないことが好ましい。
一実施形態において、本発明の液体製剤は、約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度
のＧＬＰ－２類似体と、約５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する、ヒスチジン緩衝液、メシル酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、グリシン緩衝液、リジン緩衝液、トリス緩衝液、ビス－トリス緩衝液、およびＭＯＰＳ緩衝液からなる群から選択される緩衝液と、約９０ｍＭ～約３６０ｍＭの濃度のマンニトール、ショ糖、グリセロール、ソルビトール、およびトレハロースからなる群から選択される非イオン性張性調節剤と、約６．６～約７．４のｐＨを得るための適量のアルギニンとからなる。
一実施形態において、本発明の液体製剤は、約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度のＧＬＰ－２類似体と、約５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する、ヒスチジン緩衝液、メシル酸塩緩衝液、および酢酸塩緩衝液からなる群から選択される緩衝液と、約９０ｍＭ～約３６０ｍＭの濃度のマンニトール、ショ糖、グリセロール、およびソルビトールからなる群から選択される非イオン性張性調節剤と、約６．６～約７．４のｐＨを得るための適量のアルギニンとからなる。
さらなる実施形態において、本発明の液体製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度のＧＬＰ－２類似体、約１５ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液、約２３０ｍＭの濃度のマンニトール、および約７．０のｐＨを得るための適量のアルギニンを含む。
さらなる実施形態において、本発明の液体製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度のＧＬＰ－２類似体、約１５ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液、約２３０ｍＭの濃度のマンニトールを含み、ｐＨが約７．０である。
さらなる実施形態において、本発明の液体製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度のＺＰ１８４８－酢酸塩またはＨ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２酢酸塩（配列番号１）、約１５ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液、約２３０ｍＭの濃度のマンニトール、および約７．０のｐＨを得るための適量のアルギニンを含む。
さらなる実施形態において、本発明の液体製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度のＺＰ１８４８－酢酸塩またはＨ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２酢酸塩（配列番号１）、約１５ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液、約２３０ｍＭの濃度のマンニトールを含み、ｐＨが約７．０である。
さらなる実施形態において、本発明の液体製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の、次式、（Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２），ｘ（ＣＨ３ＣＯＯＨ）（式中、ｘは１．０～８．０である）を有するグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の酢酸塩、約１５ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液、約２３０ｍＭの濃度のマンニトールを含み、ｐＨが約７．０である。
さらなる実施形態において、１日１回または２回の投与計画において、本発明の液体製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の、次式、
（Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２），ｘ（ＣＨ３ＣＯＯＨ）（式中、ｘは１．０～８．０である）を有するグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の酢酸塩、約１５ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液、約２３０ｍＭの濃度のマンニトールを含み、ｐＨが約７．０である。
さらなる実施形態において、週１回または２回の投与計画において、本発明の液体製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の、次式、
（Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２），ｘ（ＣＨ３ＣＯＯＨ）（式中、ｘは１．０～８．０である）を有するグ
ルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の酢酸塩、約１５ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液、約２３０ｍＭの濃度のマンニトールを含み、ｐＨが約７．０である。
さらなる実施形態において、本発明の液体製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度のＺＰ１８４６ Ｈ－ＨＧＥＧＳＦＳＳＥＬＳＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２（配列番号７）、約１５ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液、約２３０ｍＭの濃度のマンニトール、および約７．０のｐＨを得るための適量のアルギニンを含む。
さらなる実施形態において、本発明の液体製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度のＺＰ１８４６ Ｈ－ＨＧＥＧＳＦＳＳＥＬＳＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２（配列番号７）、約１５ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液、約２３０ｍＭの濃度のマンニトールを含み、ｐＨが約７．０である。
場合によって、本発明の液体製剤は、防腐剤をさらに含む。場合によって、防腐剤は、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、メチルパラベンおよびソルビン酸カリウムからなる群から選択される防腐剤である。一般的に、防腐剤は、最終製剤量の約０．１％～約１％の濃度で存在する。
さらなる実施形態において、液体製剤は、水性液体製剤、様々な親水性または疎水性溶媒中液体製剤、乳剤、および液体懸濁剤からなる群から選択される。好ましい実施形態において、液体製剤は、水性液体製剤である。
例として、本発明の液体製剤は、ＧＬＰ－２類似体の原液、緩衝液、非イオン性張性調節剤、および任意選択で防腐剤を水で混合するステップ、任意選択で、得られた溶液を希釈するステップならびに目標のｐＨに調整するステップによって調製してもよい。簡便には、各賦形剤の所望の濃度を得るために、緩衝液および非イオン性張性調節剤の溶液をはじめに混合してもよい。次いで、ＧＬＰ－２類似体の溶液を加え、必要に応じて、例えば酢酸／０．５Ｍ Ｌ－アルギニンを使用してｐＨ調整してもよい。最終液量に達するまで水を加えた。
好ましくは、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体は、非経口的に、好ましくは注射によって、最も典型的には皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射、または腹腔内注射によって患者に投与される。皮下注射による投与が好ましい。注射は、医師、看護師、もしくはその他の医療従事者が行ってもよく、または患者が自己投与してもよい。本明細書に記載したように、一部の態様において、本発明の製剤は、製剤のプレフィルドシリンジ、注射型ペンまたはその他の注射器装置への充填を容易にする粘度を有する。これは、例えば複数回使用するバイアルから計量する必要性なく、患者に投与する製剤の用量が事前に決定しているという利点を有し得る。したがって、その他の態様において、本発明は、安定な、例えば、本発明によるＧＬＰ－２類似体の水性の安定な医薬製剤、または本発明によるＧＬＰ－２類似体を含む水性液体製剤を含有するプレフィルドシリンジもしくは注射器装置もしくはペン型注射器などを、収納する容器を含む、製品またはキットを提供する。
病状
本発明のＧＬＰ－２類似体製剤は、有効量のＧＬＰ－２類似体または本明細書に記載したようなその塩を投与することによって食道の上部消化管を含む胃腸障害を患う個人を予防または処置する医薬品として有用である。胃腸関連障害には、あらゆる病因の潰瘍（例えば、消化性潰瘍、薬剤誘発潰瘍、感染またはその他の病原体に関連した潰瘍）、消化障害、吸収不良症候群、短腸症候群、盲管症候群、炎症性腸疾患、セリアックスプルー（例えば、グルテン過敏性腸症またはセリアック病から生じる）、熱帯性スプルー、低ガンマグロブリン血症性スプルー、腸炎、潰瘍性大腸炎、小腸損傷、および化学療法に誘発され
た下痢／粘膜炎（ＣＩＤ）が挙げられる。
上述のように、一般的に、小腸量の増大ならびにこの結果としての小腸粘膜構造および機能の正常化、ならびに／または正常な小腸粘膜構造および機能の維持から利益を得ると考えられる個人が、本ＧＬＰ－２類似体による処置の候補である。ＧＬＰ－２類似体で処置され得る特定の状態には、様々な形態のスプルー：加熱によるα－グリアジンに対する中毒反応に起因し、グルテン性腸症またはセリアック病の結果であることもあり、小腸の絨毛の著しい喪失を特徴とするセリアックスプルー；感染に起因し、絨毛の部分的扁平化を特徴とする熱帯性スプレー；分類不能型免疫不全症または低ガンマグロブリン血症を有する患者において一般に認められ、絨毛高の著しい減少を特徴とする低ガンマグロブリン血症性スプレーなどが挙げられる。ＧＬＰ－２類似体処置の治療有効性は、絨毛形態を調べる腸の生検によって、栄養吸収の生化学的評価によって、患者の体重増加によって、またはこれらの状態に伴う症状の改善によってモニタリングしてもよい。
本発明のＧＬＰ－２類似体で処置され得る、またはＧＬＰ－２類似体が治療的および／または予防的に有用であり得る別の特定の状態は、短腸（ｓｈｏｒｔ ｂｏｗｅｌ）症候群（ＳＢＳ）、別名、短腸（ｓｈｏｒｔ ｇｕｔ）症候群または単純短腸（ｓｉｍｐｌｙ
ｓｈｏｒｔ ｇｕｔ）であり、これは、外科的切除、先天性欠損、もしくは疾患に関連した腸の吸収の低下の結果、次いで患者が通常の食事において体液平衡、電解質平衡、および栄養バランスを維持することができないことに起因する。一般的には切除の２年後に順応するにもかかわらず、ＳＢＳ患者では、食物摂取量が低下し、体液が減少している。
本発明のＧＬＰ－２類似体で処置され得る、またはＧＬＰ－２類似体が予防的に有用であり得るその他の状態には、上述の状態に加えて、放射線性腸炎、感染性または感染後腸炎、およびがん化学療法剤または毒性薬剤に起因する小腸損傷が挙げられる。
ＧＬＰ－２類似体は、栄養失調、例えば悪液質および食欲不振の治療にも使用してもよい。
本発明の特定の実施形態は、腸の損傷および機能障害の予防および／または治療のために本ペプチドを使用することに関する。そのような損傷および機能障害は、がん化学療法の処置の周知の副作用である。化学療法の適用は、粘膜炎、下痢、細菌移行、吸収不良、腹部疝痛、胃腸出血、および嘔吐などの胃腸系に関連した望まない副作用を頻繁に伴う。これらの副作用は、腸管上皮の構造的および機能的損傷の臨床的帰結であり、しばしば化学療法の投与量および頻度を減らさざるを得なくなる。
本ＧＬＰ－２ペプチド類似体の投与は、腸陰窩における栄養作用を増強し、化学療法によって損傷した腸管上皮に取って代わる新しい細胞を迅速にもたらし得る。本ペプチドの投与によって達成される究極の目標は、がんの治療のための最適な化学療法計画を創出すると同時に、化学療法処置を受ける患者の胃腸損傷関連の罹患率を低下させることである。放射線療法を受けているまたは受けようとしている患者に、本発明に従って予防的または治療的処置を併用して提供してもよい。
小腸粘膜の幹細胞は、増殖速度が速いため、化学療法の細胞傷害性作用に特に影響を受けやすい（Ｋｅｅｆｅら、Ｇｕｔ、４７：６３２～７ページ、２０００年）。小腸粘膜に対する化学療法誘発性損傷は、臨床的に胃腸粘膜炎と呼ばれることが多く、小腸の吸収およびバリア機能障害を特徴とする。例えば、広範に使用される化学療法剤、５－ＦＵ、イリノテカン、およびメトトレキサートは、げっ歯類の小腸において、アポトーシスを増加させ、その結果、絨毛萎縮および陰窩形成不全をもたらすことが示されている（Ｋｅｅｆｅら、Ｇｕｔ ４７：６３２～７ページ、２０００年；Ｇｉｂｓｏｎら、Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．９月号；１８（９）：１０９５～１１００ページ、
２００３年；Ｔａｍａｋｉら、Ｊ．Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．３１（１）：６～１６ページ、２００３年）。ヒトでは、化学療法剤は、投与後２４時間で腸陰窩においてアポトーシスを増加させ、次いで、化学療法の３日後に、絨毛面積、陰窩長、陰窩当たりの有糸分裂数、および腸細胞高を減少させることが示されている（Ｋｅｅｆｅら、Ｇｕｔ、４７：６３２～７ページ、２０００年）。このように、小腸内の構造的変化が、直接的に、腸機能障害、および場合によって下痢をもたらす。
がん化学療法の後の胃腸粘膜炎は、さらに大きな問題であり、徐々に緩和するもののいったん確立すると本質的に治療不能である。一般に使用される細胞分裂抑制性がん薬剤、５－ＦＵおよびイリノテカンを用いて行われた研究では、これらの薬剤による有効な化学療法は、主として小腸の構造的完全性および機能に影響を与え、一方で結腸はさほど影響を受けず、主に粘液形成の増加に反応することが実証された（Ｇｉｂｓｏｎら、Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．９月号；１８（９）：１０９５～１１００ページ、２００３年；Ｔａｍａｋｉら、Ｊ Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．３１（１）：６～１６ページ、２００３年）。
ＧＬＰ－２類似体を含む本発明の製剤は、胃腸損傷および化学療法剤の副作用の予防および／または治療において有用であり得る。この潜在的に重要な治療的適用は、現在使用されている化学療法剤、例えば、これらに限定されるものではないが、５－ＦＵ、アルトレタミン、ブレオマイシン、ブスルファン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クリサンタスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、リポソームドキソルビシン、ロイコボリン、ロムスチン、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、ストレプトゾシン、テガフール－ウラシル、テモゾロミド、チオテパ、チオグアニン（Ｔｉｏｇｕａｎｉｎｅ）／チオグアニン（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）、トポテカン、トレオスルファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ブレオマイシン、ブスルファン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クリサンタスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、リポソームドキソルビシン、ロイコボリン、ロムスチン、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、ストレプトゾシン、テガフール－ウラシル、テモゾロミド、チオテパ、チオグアニン／チオグアニン、トポテカン、トレオスルファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、およびビノレルビンなどに対して適用することができる。
製剤の送達
一部の態様において、本発明は、非経口投与を目的とし、例えばバイアル、プレフィルドシリンジ、注入ポンプ、着用型注射器、使い捨て自己注射器、または用量調整可能自己注射器中での使用に好適である、ＧＬＰ－２類似体のすぐ使用できる製剤に関する。
下記の実施例は、本発明の好ましい態様を例示するためのものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。本明細書に記載の投与計画に従って投与されるＧＬＰ－２類似体は、内容が全体として参照により明らかに組み込まれるＷＯ２００６／１
１７５６５に記載されている固相ペプチド合成などの方法によって調製してもよい。
実施例１
ＺＰ１８４８－酢酸塩および類似のＧＬＰ－２類似体の合成
ＺＰ１８４８－酢酸塩ペプチドを、標準的なカップリング条件のＦｍｏｃ固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）手法を使用して合成した。合成が完了した後、ペプチド配列を脱保護し、固形支持体から切断し、分取用逆相ＨＰＬＣを使用して粗ペプチドを精製した。適切な濃度の酢酸を含む最終クロマトグラフィー工程の間、このペプチドを、移動相にかけ、続いて凍結乾燥することによって所望の酢酸塩の形態に転換した。得られた原薬生成物は、１１％未満の酢酸塩含有量または８当量未満の酢酸塩を有した：バッチ１（６％酢酸塩、４．６当量の酢酸塩）、バッチ２（７％酢酸塩、５．４当量の酢酸塩）、およびバッチ３（６％酢酸塩、４．６当量の酢酸塩）。この合成および精製プロトコールは、本発明の製剤中で使用されるその他のＧＬＰ－２類似体を作製するために改変してもよい。
実施例２
ＧＬＰ－２類似体ＺＰ１８４８－酢酸塩の医薬製剤中での共有結合したオリゴマーの形成の調査
材料および方法
共有結合したオリゴマーの検出には、Ｄｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ３０００ ＨＰＬＣシステムを０．５ｍｌ／分の流速の直線勾配で使用して分析した。移動相は、４５％アセトニトリルおよび５５％Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水中０．１％ＴＦＡから構成した。検出には２１５ｎｍの波長を使用した。注入量は、４μｇペプチドとした。共有結合型ペプチドの分離用に使用するカラムは、４μｍ粒径および３００＊４．６ｍｍの寸法のＴＳＫｇｅｌ
ＳｕｐｅｒＳＷ２０００（ＴＳＫ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）とした。全実行時間は２５分とした。ペプチド単量体の化学的安定性評価には、酸性移動相およびアセトニトリル勾配のＣ１８カラムを使用した。
水（Ｍｉｌｌｉ－Ｑ）で、マンニトール（７００ｍＭ）、Ｌ－ヒスチジン（２００ｍＭ）、およびＺＰ１８４８ペプチド（酢酸塩；６０ｍｇ／ｍＬ）の原液を調製した。マンニトールおよびヒスチジン溶液を適切な量で混合して、２３０ｍＭマンニトールおよび１５ｍＭヒスチジンを得た。ペプチド原液を、０．２、２、および２０ｍｇ／ｍＬの最終濃度までそれぞれ加えた。水を、最終量の９０％まで加えた。必要に応じて、１Ｍ酢酸／０．５Ｍ Ｌ－アルギニンを使用して、ｐＨをｐＨ７に調整した。水を、最終量に達するまで加えた。
結果および考察
液体製剤中のペプチドまたはタンパク質薬剤の濃度を上げると、より高い確率で共有結合反応をもたらす質量作用効果の結果として二量体、三量体、およびより高次のオリゴマーの濃度が上がることは、当技術分野では既知である（ｖａｎ Ｍａａｒｓｃｈａｌｋｅｒｗｅｅｒｄら、Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃａｌｌｙ Ｄｉｓｏｒｄ．Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．２０１５年；３（１）：ｅ１０７１３０２を参照されたい）。よって、共有結合した高分子量分解物（ｃＨＭＷＤＰ）の形成は、原薬濃度に応じて増加し、製剤中で利用可能な生物学的に活性である単量体ペプチドの量を低減させる作用を有する。したがって、このことを、ＧＬＰ－２類似体の製剤であるＺＰ１８４８－酢酸塩中で検討した。
ＺＰ１８４８－酢酸塩単量体からのオリゴマーの分離について、典型的なクロマトグラムを図１に示す。ＺＰ１８４８－酢酸塩のオリゴマーは、ＺＰ１８４８－酢酸塩単量体から十分に分離され、すべて１つピークとして集約している。ピークの面積百分率を使用して、オリゴマー、特に共有結合した二量体および三量体の量を定量化した。
同じ製剤で０．２、２、および２０ｍｇ／ｍＬ ＺＰ１８４８を含有する製剤を、２～
８℃で２４カ月保存した後に分析した。主に二量体（共有結合した２つのＺＰ１８４８－酢酸塩分子）が形成しているが、三量体もある程度ある（ＬＣ－ＭＳにより検証）。０．２ｍｇ／ｍＬを含有する製剤はオリゴマーを２．６％有しており、２ｍｇ／ｍＬでは１．９１％有し、２０．０ｍｇ／ｍＬでは１．３５％有する。オリゴマー量の初期値は、０．１％未満であった。
驚くべきことに、ＺＰ１８４８－酢酸塩（グレパグルチド）を２～８℃で長期保存する間、共有結合したオリゴマーの形成は濃度依存性であるが、一般の予想に反して、オリゴマー形成の濃度依存はＧＬＰ－２類似体の濃度の上昇に反比例して依存することが明らかとなった。特定の理論に縛られることを望むものではないが、本発明者らは、薬物濃度の上昇に従った共有結合したオリゴマーの形成の減少は、ＧＬＰ－２類似体のリジン尾部が、ＧＬＰ－２類似体分子が共有結合するのではなく弱くまとまって会合しているより高次の種の形成をもたらす競争反応を促進する結果であると考える。このことは、これらの弱く会合した種が、共有結合したオリゴマーが形成する際に起こるように活性のある種の減少を引き起こすのではなく、生物学的に活性のある単量体を放出するために解離することができることを意味する。
実施例３
ＧＬＰ－２類似体ＺＰ１８４８酢酸塩の製剤用の緩衝液のスクリーニング
ＺＰ１８４８－酢酸塩（４ｍｇ／ｍＬ）製剤の安定性に対する様々な緩衝液塩の影響を調べるために研究を行った。製剤中の全緩衝液濃度は２０ｍＭとした。
材料および方法
下記の表２に記載した緩衝液を調製した。緩衝液のｐＨは、１Ｍ ＨＣｌ／１Ｍ ＮａＯＨで調整した。ＺＰ１８４８ペプチド（酢酸塩）を、最終製剤で４ｍｇ／ｍＬとなるように、最終試料液量の８０％で当該緩衝液に溶解した。必要に応じて、次いで、２００ｍＭ酢酸または１００ｍＭ Ｌ－アルギニンのいずれかを使用して、ｐＨを所望の製剤ｐＨに調整した。緩衝液を、最終液量に達するまで加えた。各製剤を、安定性試験用に、適切なバイアル（１ｍｌ／バイアル）に充填した。
結果および考察
外観から、クエン酸塩緩衝液、クエン酸塩／トリス緩衝液、またはコハク酸塩緩衝液を含有するすべての製剤が、粘性および／または濁りがあることが示された（表２を参照されたい）。酢酸塩緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ５）、メシル酸塩緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ６）、ヒスチジン緩衝液（１５ｍＭ、ｐＨ７）、およびヒスチジン－アルギニン（１５＋５ｍＭ、ｐＨ７）では、透明および非粘性であるとして視覚的検査に合格した製剤が得られた。
実施例４
リン酸塩緩衝液のＧＬＰ－２類似体ＺＰ１８４８－酢酸塩との不適合性
材料および方法
水（Ｍｉｌｌｉ－Ｑ）で、マンニトール（７００ｍＭ）、リン酸塩緩衝液（２００ｍＭ）、およびＺＰ１８４８－酢酸塩ペプチド（６０．２ｍｇ／ｍＬ）の原液を調製した。原液を適切な量で混合して、下記の表３に示した製剤を得た。水を、最終液量の９０％まで加えた。必要に応じて、次いで、１Ｍ酢酸／０．５Ｍ Ｌ－アルギニンを使用して、ｐＨを所望の製剤ｐＨに調整した。水を、最終液量に達するまで加えた。室温で２４時間後、試料容器を、透明度および粘度について視覚的に検査した。
結果および考察
視覚的検査から、２０～５０ｍＭリン酸塩緩衝液を含有する、ｐＨ６．５～７．５の２０ｍｇ／ｍＬのＺＰ１８４８－酢酸塩の製剤は、室温で２４時間後、濁りがあり、かつ／または高度に粘性であったことが示された。したがって、リン酸塩緩衝液は、これらの製剤中では、ＺＰ１８４８－酢酸塩と適合性がないと判断された。
実施例５
ＧＬＰ－２類似体ＺＰ１８４８－酢酸塩の製剤の粘度に対する酢酸塩含有量の影響
ＺＰ１８４８－酢酸塩製剤の粘度に対する酢酸塩含有量の影響を確かめるために研究を行った。
材料および方法
試料は、６％酢酸塩を含有するＧＬＰ－２類似体ＺＰ１８４８－酢酸塩の原薬（ＤＳ）を使用して調製した。酢酸塩を加えて７．８～１５％酢酸塩の範囲で酢酸塩含有量を増加させた影響を探索した（表４を参照されたい）。
Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水で、マンニトール（７００ｍＭ）、酢酸（１０００ｍＭ）、ヒスチジン（２００ｍＭ）、およびＺＰ１８４８－酢酸塩ペプチド（６０ｍｇ／ｍｌ）の原液を調製した。原液を適切な量で混合して、下記の表４に示した製剤を得た。水を、最終液量の９０％まで加えた。必要に応じて、次いで、２５０ｍＭアルギニンを使用して、ｐＨを所望の製剤ｐＨに調整した。水を、最終液量に達するまで加えた。各製剤を、安定性試験用に適切なバイアルに充填した。
バイアルを、透明度および粘度について視覚的に検査した。粘度は、マイクロＶＩＳＣ（商標）粘度計を使用して測定した。流体力学的半径は、Ｗｙａｔｔ ＤｙｎａＰｒｏ ＩＩ動的光散乱（ＤＬＳ）プレートリーダーを使用して測定した。プレートに載せる試料のサイズは、１７０μｌとした。
結果および考察
様々な酢酸塩濃度を有する製剤の粘度および流体力学的半径を、図２に示す。結果は、ＺＰ１８４８－酢酸塩製剤の粘度が、より高い酢酸塩濃度では予想外に非線形で高まるこ
とを実証している。したがって、製剤中の総酢酸塩濃度がＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり１１％酢酸塩以下であることは、薬物送達装置の形態でのＧＬＰ－２類似体の製剤を提供する可能性を切り開くため、製剤中の総酢酸塩濃度がこの場合、低い／不変のレベルでの粘度の制御に有利である。
実施例６
２および２０ｍｇ／ｍＬのＧＬＰ－２類似体ＺＰ１８４８－酢酸塩の製剤の安定性に対する緩衝液塩の影響
ＺＰ１８４８－酢酸塩（２および２０ｍｇ／ｍＬ）製剤の安定性に対する様々な緩衝塩の影響を調べるために研究を行った。緩衝液はすべて、１５ｍＭ濃度とした。
材料および方法
水（Ｍｉｌｌｉ－Ｑ）で、マンニトール（７００ｍＭ）、Ｌ－ヒスチジン（２００ｍＭ）、グリシン（４００ｍＭ）、リジン（２００ｍＭ）、トリス（２００ｍＭ）、ビス－トリス（２００ｍＭ）、ＭＯＰＳ（１００ｍＭ）、コハク酸（２００ｍＭ）、ＭＥＳ（２－（Ｎ－モルフォリノ）エタンスルホン酸）（２００ｍＭ）、メシル酸塩（２００ｍＭ）、リン酸塩（２００ｍＭ）、およびＺＰ１８４８ペプチド（酢酸塩；約５０ｍｇ／ｍｌ）原液を調製した。賦形剤溶液を適切な量で混合して、下記の表５および表６に示した製剤を得た。すべての製剤に、２３０ｍＭマンニトールおよび１５ｍＭの緩衝剤を含有させた。ペプチド原液を加えた。水を、最終液量の９０％まで加えた。必要に応じて、１Ｍ酢酸／０．５Ｍ Ｌ－アルギニンを使用して、ｐＨをｐＨ７に調整した。水を、最終液量に達するまで加えた。製剤をバイアルに充填し、４０℃での安定性試験に配置した。
結果および考察
観察された結果によれば、緩衝剤については、１５ｍＭ濃度のヒスチジン、グリシン、リジン、トリス、ビス－トリス、ＭＯＰＳ、メシル酸塩、およびＭＥＳが、２ｍｇ／ｍＬおよび２０ｍｇ／ｍＬペプチドならびにｐＨ７．０のＺＰ１８４８－酢酸塩製剤中での使用に許容されるものであった。
共有結合したオリゴマーの形成を、様々な緩衝液について評価した（表６）。２０ｍｇ／ｍＬでは、コハク酸が１週間後にゲルを形成し、２および３週間では安定性を評価することができなかった。同じ緩衝液では、共有結合したオリゴマーの形成率は、２ｍｇ／ｍＬの方が有意に高かった（２．１％）。全体的な傾向として、３週間の４０℃での加速保存の後、共有結合したオリゴマーの形成率は、２ｍｇ／ｍＬ製剤の方が２０ｍｇ／ｍＬと比較して高かった。
リン酸塩緩衝液およびコハク酸塩緩衝液は、これらの製剤中で２および２０ｍｇ／ｍＬのＺＰ１８４８－酢酸塩と適合性がなかった。
ペプチド単量体の安定性は、４０℃での３週間の安定性についてＨＰＬＣ純度を決定することによって評価した。結果を図３および表７に示す。コハク酸は、先に述べたゲル形成により、２０ｍｇ／ｍＬでは最初の時点の評価しかできなかった。２ｍｇ／ｍＬでは、３週間の試験について結果を得ることができた。評価した緩衝液間では、軽微な、有意ではない差異しか検出されなかった。よって、緩衝液の選択は、ペプチド単量体の安定性に影響を与えないと思われる。
実施例７
２および２０ｍｇ／ｍＬのＧＬＰ－２類似体ＺＰ１８４８－酢酸塩の製剤の安定性に対する張性調節剤の影響
ＺＰ１８４８－酢酸塩（２および２０ｍｇ／ｍＬ）製剤の安定性に対する様々な張性調節剤の影響を調べるために研究を行った。
材料および方法
水（Ｍｉｌｌｉ－Ｑ）で、Ｌ－ヒスチジン（２００ｍＭ）、ショ糖（７３０ｍＭ）、グリセロール（９７７ｍＭ）、Ｄ－ソルビトール（８０１ｍＭ）、無水Ｄ－（＋）トレハロース（５００ｍＭ）、Ｄ－マンニトール（７００ｍＭ）、およびＺＰ１８４８－酢酸塩ペプチド（酢酸塩；約５０ｍｇ／ｍｌ）の原液を調製した。賦形剤溶液を適切な量で混合して、下記の表８に示した製剤を得た。すべての製剤は、１５ｍＭヒスチジンを含有した。必要に応じてペプチド原液を加えて、表８に示したペプチド含有量を得た。水を、最終液量の９０％まで加えた。必要に応じて、１Ｍ酢酸／０．５Ｍ Ｌ－アルギニンを使用して、ｐＨをｐＨ７に調整した。水を、最終液量に達するまで加えた。各製剤をバイアルに充填し、４０℃での安定性試験に配置した。試料容器を、透明度および粘度について視覚的に検査し、ＤＬＳ（動的光散乱）分析によって流体力学的半径を分析した。
結果および考察
表８に示した観察された結果によれば、マンニトール、ショ糖、グリセロール、ソルビトール、およびトレハロースは、２ｍｇ／ｍＬおよび２０ｍｇ／ｍＬのｐＨ７．０のＺＰ１８４８－酢酸塩を含むこれらの製剤中での使用に許容されるものであった。
共有結合のオリゴマーの形成を、製剤１～１０について、４０℃で３週間まで測定した。結果を表９に示す。１０個の製剤の共有結合のオリゴマーの形成の差異は、安定性試験の１週間後に既にみられる。さらに、割合（勾配）は、試験期間を通してほぼ一定であった。製剤３（２０ｍｇ／ｍＬ－グリセロール）、製剤７（２ｍｇ／ｍＬ－ショ糖）、製剤８（２ｍｇ／ｍＬ－グリセロール）、製剤９（２ｍｇ／ｍＬ－ソルビトール）は、その他の錠剤より共有結合したオリゴマーの形成率が有意に高かった。マンニトールは、最も低い共有結合したオリゴマーの形成率を示した。全体的な傾向としては、検討したすべての等張化剤で、２ｍｇ／ｍＬの方が２０ｍｇ／ｍＬと比較して共有結合したオリゴマーの形成率が高かった。
ペプチド単量体の安定性を、４０℃での３週間の安定性についてＨＰＬＣ純度を決定することによって評価した。共有結合したオリゴマーと同様に、グリセロールを使用した場合の化学的安定性は不十分であり、その他の等張化剤から逸脱している。結果を図５および図６に示す。
実施例８
ＧＬＰ－２類似体ＺＰ１８４８－酢酸塩の製剤のｐＨ調整のために使用した酸および塩基の物理的安定性の影響
材料および方法
水中マンニトール、ヒスチジン、およびＺＰ１８４８－酢酸塩ペプチドの原液を調製した。マンニトールおよびヒスチジンの原液を水に加え、混合し、１０ｍｇ／ｍＬの最終ペプチド含有量が得られるようにペプチド溶液を加えた。水を、最終液量の９０％まで加えた。次いで、２５０ｍＭアルギニン／１Ｍ ＡｃＯＨまたは１Ｍ ＮａＯＨ／１Ｍ ＨＣｌを使用して、ｐＨをｐＨ７に調整した（表１０を参照されたい）。水を、最終液量に達するまで加えた。各製剤を安定性試験用にバイアルに充填し、５℃、２５℃、および４０℃での安定性試験に配置した。試料容器を、透明度および粘度について視覚的に検査した。
結果および考察
表１０に示した結果は、ｐＨ調整のための１Ｍ ＮａＯＨ／１Ｍ ＨＣｌの使用は、ＺＰ１８４８－酢酸塩製剤の物理的安定性に対し有害作用を及ぼすことを示している。
実施例９
ＧＬＰ－２類似体ＺＰ１８４８ペプチドの製剤のための、ＺＰ１８４８ペプチド酢酸塩およびＺＰ１８４８ペプチド塩化物塩の使用
選択したＺＰ１８４８製剤中でＺＰ１８４８ペプチド酢酸塩およびＺＰ１８４８ペプチド塩酸塩を使用して、塩の影響を調べる研究を行った。４０℃での加速保存の後に、塩の種類、濃度、緩衝液、および張性調節剤の影響を調べた。ＺＰ１８４８ペプチドナトリウム塩の合成を試みたが、可能であることはわらなかった。
材料および方法
Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水で、マンニトール（７００ｍＭ）、ヒスチジン（２００ｍＭ）、ソルビトール（７００ｍＭ）、メシル酸塩（２００ｍＭ）、およびＺＰ１８４８ペプチド溶液（塩化物塩；約５０ｍｇ／ｍＬ）の原液を調製した。賦形剤溶液を適切な量で混合して、下記の表１１および表１２に示した製剤を得た。ペプチド原液を加えて、所望の最終ペプチド含有量を得た。水を、最終液量の９０％まで加えた。必要に応じて、１Ｍ酢酸／０．５Ｍ Ｌ－アルギニンを使用して、ｐＨを所望の製剤ｐＨに調整した。水を、最終液量に達するまで加えた。各製剤をバイアルに充填し、４０℃での安定性試験に配置した。試料容器は、透明度および粘度について視覚的に検査し、ＤＬＳによって流体力学的半径を分析した。
結果および考察
表１１および１２に示した結果は、外観およびＤＬＳによって評価した場合、４０℃で３週間後、製剤１、２、３、および４のＺ－平均、粘度、および外観は安定性が変化しなかったことを示す。製剤５は、Ｚ－平均、粘度、および外観によって評価した場合、経時的に安定性が変化したことが示された。
製剤１～５の化学的安定性を、４０℃で４週間まで追跡した。得られた純度は、放出時を１００％として正規化した。結果を図に示す。製剤１、２、４、および５については、ペプチド単量体の化学的安定性に有意差はみられなかった。製剤３は、４週間後にわずかに低下したが許容される化学的安定性を示し、これは、この製剤の濃度が低いことが原因であると思われる。
共有結合したオリゴマーの形成を、製剤１～５について、４０℃で４週間まで測定した。結果を表１３に示す。５つの製剤の共有結合したオリゴマーの形成の差異は、安定性試験の１週間後でも認められた。さらに、割合（勾配）は、試験期間を通してほぼ一定であった。製剤１（２０ｍｇ／ｍＬ、ＺＰ１８４８の酢酸塩、等張化剤としてヒスチジン）が最も安定な製剤であり、４０℃で４週間の安定性の後、共有結合したオリゴマーの形成は約１．１％であった。製剤５（２０ｍｇ／ｍＬ、ＺＰ１８４８の塩化物塩、等張化剤とし
てメシル酸塩）が２番目に安定な製剤であり、４０℃で４週間の安定性の後、共有結合したオリゴマーの形成率は約２．１％であった。３番目に安定であったのは製剤３（２ｍｇ／ｍＬ、ＺＰ１８４８の塩化物塩、等張化剤としてヒスチジン）であった。４番目に安定なのは製剤２（２０ｍｇ／ｍＬ、ＺＰ１８４８の塩化物塩、等張化剤としてヒスチジン）である。最も安定性が低い製剤は、製剤４（２０ｍｇ／ｍＬ、ＺＰ１８４８の塩化物塩、等張化剤としてソルビトール）である。
ＺＰ１８４８の酢酸塩について、ソルビトールを使用した場合、４０℃で３週間後の安定性は、マンニトールと比較してわずかに低い傾向があることを先に認めた（マンニトールで０．９％、ソルビトールで１．１％）。実施例７を参照されたい。ソルビトール含有とマンニトール含有の製剤間での差異は、酢酸塩と、塩化物塩、すなわち塩化物塩およびソルビトールを含有する２０ｍｇ／ｍＬの製剤の共有結合したオリゴマーの形成率が約３．９％である塩化物塩とを比較した場合、より顕著である。この塩化物塩の２ｍｇ／ｍＬ製剤と２０ｍｇ／ｍＬ製剤とを比較した場合、４０℃で４週間後、共有結合したオリゴマーの形成は、２ｍｇ／ｍＬでは２．４％（１週あたり０．５３％の増加）であり、２０ｍｇ／ｍＬでは３．３％（１週あたり０．７５％の増加）であった。これは酢酸塩では観察されないことであるため、これは驚くべきことである。２０ｍｇ／ｍＬの酢酸塩では、４０℃で３週間後、共有結合したオリゴマーの形成は０．９％（１週あたり０．２１％の増加）であったのに対し、２ｍｇ／ｍＬでは１．２％（１週あたり０．２７％の増加）である。このように酢酸塩の濃度が低いほど共有結合したオリゴマーの形成率が高いことは、長期安定性の間に認められることとも一致する。しかしながら、塩化物塩の場合は、状況は逆であり、ＺＰ１８４８濃度の上昇に従い、共有結合したオリゴマーの形成率は高くなった。
実施例１０
２０ｍｇ／ｍＬのＧＬＰ－２類似体ＺＰ１８４８ペプチドの製剤のための、ＺＰ１８４８ペプチド酢酸塩および防腐剤の使用
ＺＰ１８４８ペプチド酢酸塩と一般的に使用される防腐剤との適合性を調べるために研究を行った。防腐剤および温度の影響を、加速保存の後に調べた。
材料および方法
Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水で、マンニトール（７００ｍＭ）、ヒスチジン（２００ｍＭ）、およびＺＰ１８４８ペプチド溶液（酢酸塩；約５０ｍｇ／ｍＬ）の原液を調製した。ペプチドの最終濃度は２０ｍｇ／ｍＬとし、マンニトールは２３０ｍＭ、ヒスチジンは１５ｍＭとした。防腐剤溶液を適切な量で混合して、下記の表１４に示した製剤を得た。ペプチド原液を加えて、所望の最終ペプチド含有量を得た。水を、最終液量の９０％まで加えた。必要に応じて、次いで、１Ｍ酢酸／０．５Ｍ Ｌ－アルギニンを使用して、ｐＨを所望の製
剤ｐＨに調整した。水を、最終液量に達するまで加えた。各製剤をバイアルに充填した。試料容器を、透明度および粘度について視覚的に検査し、共有結合したオリゴマーをＳＥＣによって、またペプチド単量体の安定性をＨＰＬＣによって分析した。
結果および考察
本研究からの結果を表１４、表１５、および図８に記す。その製剤は、防腐剤を加えない製剤１と比較して、防腐剤の添加によって影響を受けないように思われる。
化学的安定性は、共有結合したオリゴマーおよびペプチド単量体の安定性（純度）を決定することによって評価した。製剤４（ソルビン酸カリウム）は、共有結合したオリゴマーの形成率がより高かったが、許容される範囲内である。その他の製剤はすべて、同様の量の共有結合したオリゴマーを有する。２５℃で１３週間の後の正規化した純度は、ＺＰ１８４８－酢酸塩はやはり同様の安定性を有し、製剤４でわずかに低下しているが許容される純度を有することを示している。
実施例１１
２および２０ｍｇ／ｍＬのＧＬＰ－２類似体ＺＰ１８４８ペプチド製剤のための、ＺＰ１８４８ペプチド酢酸塩および防腐剤の使用
材料および方法
Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水で、マンニトール（７００ｍＭ）、ヒスチジン（２００ｍＭ）、およびＺＰ１８４８ペプチド溶液（酢酸塩；約５０ｍｇ／ｍＬ）の原液を調製した。ペプチドの最終濃度は２０および２ｍｇ／ｍＬとし、マンニトールは２３０ｍＭ、およびヒスチジンは１５ｍＭとした。防腐剤溶液（ｍ－クレゾールおよびフェノール）を適切な量で混合して、下記の表１４に示した製剤を得た。水を、最終液量の９０％まで加えた。必要に応じて、次いで、１Ｍ酢酸／０．５Ｍ Ｌ－アルギニンを使用して、ｐＨを所望の製剤ｐＨ
（７．０）に調整した。水を、最終液量に達するまで加えた。各製剤をバイアルに充填した。試料容器を、透明度および粘度について視覚的に検査し、ペプチド単量体の安定性についてＨＰＬＣによって分析した。
結果および考察
本研究からの結果を、下記の表１６に記す。すべての製剤を、５℃での５２週間の長期安定性について試験した。試験溶液はすべて、検討期間を通して透明かつ非粘性のままであった。
２５℃での加速安定の後のＺＰ１８４８－酢酸塩の、ＨＰＬＣによる評価を図９に示す。フェノールを含有する製剤では、化学的安定性のわずかな低下がみられ、ｍ－クレゾールでは、防腐処理していない製剤と同様の化学的安定性が得られた。５℃での長期安定性については、１２カ月の安定の後、試料間の明らかな差異はみられず、すべての試料で、正規化したＺＰ１８４８－酢酸塩純度が９４％を超えている（データ非表示）。よって、検討した製剤はすべて、少なくとも５２週間の長期安定性について安定である。
上記の実施形態とともに本発明を記載してきたが、本開示により、数多くの等価の修正および変形が当業者には明らかとなるであろう。したがって、記載された本発明の実施形態は、例示的であって限定的なものではないとみなされる。記載した実施形態に対する様々な変更は、本発明の精神と範囲から逸脱することなく行うことができる。本明細書に引用されたすべての文書は、あらゆる目的のために全体として参照により明らかに組み込まれる。

Claims (7)

  1. 安定な水性医薬製剤であって、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）類似体の薬学的に許容される酢酸塩を含み、該ＧＬＰ－２類似体が：
    ＺＰ１８４８ Ｈ－ＨＧＥＧＴＦＳＳＥＬＡＴＩＬＤＡＬＡＡＲＤＦＩＡＷＬＩＡＴＫＩＴＤＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２（配列番号１）
    であり、
    該製剤が：
    約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度のＧＬＰ－２類似体の薬学的に許容される酢酸塩；
    １５ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液；
    ９０ｍＭ～３６０ｍＭの濃度のマンニトール；および
    約７．０のｐＨを得るための適量のアルギニン
    を含み、
    製剤中の総酢酸塩濃度が、ＧＬＰ－２類似体１ｍｇ当たり１１％以下の酢酸塩である、
    前記製剤。
  2. アルギニンがＬ－アルギニン／酢酸である、請求項１に記載の製剤。
  3. マンニトールがＤ－マンニトールである、請求項１または請求項２に記載の製剤。
  4. 注射によって対象に投与されるための、請求項１～３のいずれか一項に記載の製剤。
  5. 注射が、皮下注射である、請求項４に記載の製剤。
  6. ２～８℃で少なくとも６カ月間、少なくとも１２カ月間、少なくとも１８カ月間、または少なくとも２４カ月間、安定である、請求項１～５のいずれか一項に記載の製剤。
  7. 製剤中のＧＬＰ－２類似体が、２～８℃での１８カ月の保存の後、その生物学的活性の少なくとも９０％を保持している、請求項６に記載の製剤。
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