JP7526723B2 - ピーナッツアレルギーを検出するためのペプチド及び方法 - Google Patents
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Description
複数の例示実施形態を説明する前に、当然のことながら、実施形態は、以下の説明に記載される詳細な構成またはプロセス工程に限定されない。本明細書中記載される実施形態は、修飾可能であり、様々なやり方で実施または実行することができる。
実施形態によっては、AAI特異的標識化試薬は、検出可能に標識された抗ヒトIgG4抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgM抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgA抗体、及び/または検出可能に標識された抗ヒトIgE抗体である。実施形態によっては、検出可能な標識は、フィコエリトリン、蛍光色素、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)、及びアルカリホスファターゼから選択される。実施形態によっては、標識化試薬は、直接検出可能な第一レポーター部分、例えば、蛍光色素、放射標識、または有色色素と結合している場合がある。実施形態によっては、フィコエリトリン(PE)分子を、抗アレルギー関連免疫グロブリンに直接カップリングさせて、検出に使用することができる。あるいは、第一レポーター部分は、間接的に検出可能(例えば、発色性色素の酵素標識)なレポーター部分の場合があり、第一レポーター部分に特異的な結合パートナーを、直接検出可能な標識に結合させることができる(第二レポーター部分)。例えば、ビオチン結合抗AAI抗体を、ビオチン結合抗AAI検出のためのストレプトアビジン結合蛍光色素と組み合わせて使用することができる。実施形態によっては、検出可能な標識は、銀染色、量子ドット、または屈折手法を介して観察することができる。
実施形態によっては、1種または複数のピーナッツペプチドは、本明細書中記載されるとおりである。実施形態によっては、1種または複数のピーナッツペプチドは、ara h1アレルゲン(配列番号1)、ara h2アレルゲン(配列番号2)、及び/またはara h3アレルゲン(配列番号3)に由来する少なくとも2種のペプチドを含む。
実施形態によっては、AAI特異的標識化試薬は、検出可能に標識された抗ヒトIgG4抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgM抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgA抗体、及び/または検出可能に標識された抗ヒトIgE抗体である。実施形態によっては、検出可能な標識は、フィコエリトリン、蛍光色素、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)、及びアルカリホスファターゼから選択される。実施形態によっては、検出可能な標識は、銀染色、量子ドット、または屈折手法を介して観察することができる。実施形態によっては、検出可能な標識は、本明細書中記載されるとおりである。
実施形態によっては、AAI特異的標識化試薬は、検出可能に標識された抗ヒトIgG4抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgM抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgA抗体、及び/または検出可能に標識された抗ヒトIgE抗体である。実施形態によっては、検出可能な標識は、フィコエリトリン、蛍光色素、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)、及びアルカリホスファターゼから選択される。実施形態によっては、検出可能な標識は、銀染色、量子ドット、または屈折手法を介して観察することができる。実施形態によっては、検出可能な標識は、本明細書中記載されるとおりである。
本明細書中開示される発明の対象をより効率的に理解できるようにするため、実施例を以下に提供する。当然ながら、これらの実施例は、例示のみを目的とし、どのような形でも特許請求される対象を限定するものとして解釈されるべきではない。
背景として、幼い小児でピーナッツアレルギーを予防する最良の戦略を決定するために無作為化比較試験(RCT)(例えば、ピーナッツアレルギーについての早期学習(Learning Early About Peanut Allergy、LEAP))が過去に行われた。LEAP試験は、年齢が4ヶ月~11ヶ月の640人の小児からなり、彼らは、ピーナッツアレルギーのリスクが高いと同定されていた。小児は2つの群に分けられた:回避群及び摂取群(1週間あたり、ピーナッツを含有する軽食を3食超、ピーナッツタンパク質6g)である。この試験の結果は、経口負荷試験(OFC)により判定したところ、5歳までにピーナッツアレルギーを発症した小児の割合が、摂取群に比べて回避群で4倍~6倍高かったことを示した。LEAP試験の結果は、例えば、Toit et al.,N.Engl.J.Med.,2015,372,803-813に開示されている。こうして、試験は、米国におけるピーナッツアレルギー予防のためのガイドラインに変化をもたらした。
個別エピトープ、エピトープ併用、及びエピトープと他の臨床もしくは診断法(例えば、皮膚プリックテスト、ピーナッツ特異的IgE、患者歴、及びピーナッツ構成要素IgE)との併用の重要性を評価するため、LEAP患者コホートのサブセットを、本明細書中記載されるエピトープ試験を用いて、さらに評価した。詳細には、LEAP試験中の時点で、血漿のアリコートを少なくとも2つ追加で有する、プロトコルあたりのLEAP(LEAP Per Protocol)対象341人のサブセットを選択した。341人の対象の診断分類(すなわち、5歳-来院60時点のアレルギー状態)を表1に示す。
試験群(回避者及び摂取者)の間でのIgEエピトープの差異を評価するため、試験開始時のベースライン来院と比較した各試験来院(V12-V1、V30-V1、及びV60-V1)間で、各エピトープ値が何倍変化したかを求めた。結果をエピトープごとにプロットし、図1にまとめる。19種のエピトープで、回避者における変化が摂取者よりも大きかったことが観察された。これらの結果は、IgE系列エピトープ特異的抗体が、5歳(来院60時点)までにピーナッツアレルギーを発症した回避者群の小児で早期に発生したことを示す。系列エピトープ特異的IgE抗体は、主に2つの領域で発生した:Ara h1:008~066及びAra h2:005~040。また、Ara h3:93~115に対して遅発反応があるようである。IgE特異的結合の遅発変化は、主にピーナッツ回避者群におけるものである、それらは、2つの領域に対して特異的であり、またそれらは、持続して経時的に結合を増強させる。摂取者に早期(V12)のIgEのわずかな上昇が観察されたが、アレルギーを発症した対象で見られたものと同じエピトープに対してではなかった。要するに、IgEは、摂取者群で早期に発生することが観察されたが、アレルギーを発症した患者と重複する領域においてではなかった。これらのデータは、ある特定のピーナッツエピトープに対するIgE反応が、天然及び一過性両方の可能性があることを示唆する。まとめると、データは、これらのピーナッツ特異的タンパク質におけるある特定のエピトープが、IgEアレルギー反応を意味している可能性があることを示唆する。
logit(y)~1+x1+x2+x3
分布=二項
分散:1
回帰モデルに対するΧ2検定:25.2、P値=1.42e-05
閾値は、得られる線形回帰モデルの陰性的中率を最適化するように選択される。IgE閾値の単位は、(KU/L)である。1種を超えるエピトープに関する線形回帰モデルの閾値は無次元である。
この同一(LEAP)コホートを用いてIgE及びIgG4エピトープ反応性の診断応用可能性を評価するため、OFCにより最終診断が確定した患者を選択して、アレルギー予測のためのアルゴリズムを開発し、分類器を同定した。
症例及び対照を、それぞれ、OFC確認済みアレルギー性及び非アレルギー性患者と定義した。次いで、全てのIgEエピトープを、アレルギー性であるか非アレルギー性であるかの予測の分類器として個別に評価した。AUCを、成績計量として用いた。成績が上位10位までのエピトープ(アレルギー性エピトープ)を表2に示す。
症例及び対照を、それぞれ、OFC確認済みアレルギー性及び非アレルギー性患者と定義した。IgE及び/またはIgG4エピトープのパネルを、アレルギー性であるか非アレルギー性であるかの予測の分類器として評価した。AUCを、成績計量として用いた。また、他の臨床測定、例えば、SPT結果、特異的ピーナッツIgE(sIgE)測定値、及びピーナッツ全タンパク質構成要素(Ara h2)なども組み込んだパネルの例も含めた。パネルは、標準線形回帰方法を用いることにより形成した。[ABC]という表記を用いて、エピトープのパネル及び/または臨床測定A、B、及びCを線形回帰により1つのパネルに統合したことを示す。因子(ピーナッツペプチド及び/または本明細書中記載される他の因子)の組み合わせを評価するために線形回帰を使用することは、当業者に周知である。そのような組み合わせの代表例として、以下が挙げられるが、それらに限定されない:
[IgE_Ara h2.008、IgG4_Ara h2.021、IgG4_ara h3.152]は、AUC=77%である
[IgE_Ara h2.008、IgG4_Ara h2.021、SPT]は、AUC=81%である
[IgE_Ara h2.008、IgG4_Ara h2.021、IgG4_ara h3.152、sIgE]は、AUC=81%である
[IgE_Ara h2.008、IgG4_Ara h2.021、IgG4_ara h3.152、Ara h2]は、AUC=75%である
一般に、ピーナッツペプチドの任意の組み合わせと任意の他の因子の併用についてAUCが50%未満である場合は、非アレルギー状態を示し、AUCが50%以上である場合は、アレルギー状態を示す。実施形態によっては、ピーナッツペプチドの任意の組み合わせと任意の他の因子の併用についてAUCが55%未満である場合は、非アレルギー状態を示し、AUCが55%以上である場合は、アレルギー状態を示す。実施形態によっては、ピーナッツペプチドの任意の組み合わせと任意の他の因子の併用についてAUCが60%未満である場合は、非アレルギー状態を示し、AUCが60%以上である場合は、アレルギー状態を示す。実施形態によっては、ピーナッツペプチドの任意の組み合わせと任意の他の因子の併用についてAUCが65%未満である場合は、非アレルギー状態を示し、AUCが65%以上である場合は、アレルギー状態を示す。実施形態によっては、ピーナッツペプチドの任意の組み合わせと任意の他の因子の併用についてAUCが70%未満である場合は、非アレルギー状態を示し、AUCが70%以上である場合は、アレルギー状態を示す。
この実施例で使用される方法は、上記のものと同じであるが、ただし、分類が階層的様式で行われることが異なる。最初に、sIgE測定を用いて、非アレルギー性症例を同定する。次いで、sIgEにより分類されない患者について、ロジスティック回帰パネル[IgE_Ara h2.008、IgG4_Ara h2.021、IgG4_ara h3.152]を用いて、残りの患者をアレルギー性または非アレルギー性いずれかであると分類する。sIgE≦0.03kUA/Lならば、対象を「非アレルギー性」とする。[IgE_Ara h2.008、IgG4_Ara h2.021、IgG4_ara h3.152]≦0.20ならば、対象を「非アレルギー性」とする。それ以外は、対象を「アレルギー性」とする。この階層的分類器の閾値は、分類の決定を下すために使用される。因子のこの組み合わせは、本明細書中、例えば、偽陽性を排除するために使用される。これらの組み合わせは、異なる分類結果を得るために変更することができる。提示される実施例において、階層的分類器の感度及び特異性は、それぞれ、90%及び54%である。
本明細書中提示される強力なデータに基づき、ピーナッツエピトープに対するIgE/IgG4の結合パターンが、非常に有益な情報を与えるものであり、患者のアレルギー疾患の重篤度を特性決定する、患者を長期間評価して臨床試験初期及び臨床試験中の投薬を指導する、臨床試験中の有害事象を追跡または予測する(安全性を改善するため)、臨床試験の臨床的終了点において患者のアレルギー状態を確認する、及び患者の治療後をモニタリングして治療反応性を維持するために追加治療が必要であるか/いつ必要になるかを判定するのに有用となることが予想される。
CoFAR2予測小児コホートのピーナッツの非アレルギー性及びアレルギー性患者の血漿試料を分析に使用した。各来院時のアレルギー診断は、以下のとおり定義した:1)アレルギー性(血清学的:ピーナッツsIgE>14kUA/L、確定:OFC+または(確証的履歴+血清学的))、2)非アレルギー性(感作された:耐性であるがピーナッツsIgE>0.35kUA/L、感作されていない:耐性であり、ピーナッツsIgEのエビデンスなし)。3回の来院が計画された:1)ベースライン(約0歳)、2)来院2(約2歳)、及び3)来院5(約4+歳)。ベースラインの情報を表3に示す。
方法
発見:試験法の発見は、LEAP試験の回避群にいた133人の対象(31人がアレルギー性、102人が非アレルギー性)で行った。全ての診断は、年齢5歳でOFCにより確定した。血漿試料は、各対象について2.5歳及び5歳で得た。これらの試料を、上記のBBEA方法を用いて分析し、各対象について2.5歳及び5歳でのIgE及びIgG4エピトープレベルを得た。各対象についてのIgE(IgG4)エピトープレベルを、全てのIgE(IgG4)エピトープ測定値の中央値で正規化した。
検証:試験法の検証は、CoFAR2試験にいた81人の対象(23人がアレルギー性、58人が非アレルギー性)で行った。全ての診断は、年齢5歳時にOFCにより確定した。血漿試料は、各対象について2歳及び5歳時に得た。これらの試料を、上記のBBEA方法を用いて分析し、各対象について2歳及び5歳時のIgE及びIgG4エピトープレベルを得た。各対象についてのエピトープレベルを、全てのIgE(IgG4)エピトープ測定値の中央値で正規化した。診断試験が完全に締め切られるまで、全てのデータは匿名のままであった。
発見:表8は、LEAPコホートにおける上位3位のIgE及び/またはIgG4エピトープの成績を、それら自身及び閾値0.1kU/LのsIgEで格付け後の両方で、示す。データは、2.5歳及び5歳時のものである。
表9に、個別の測定及びsIgEと統合したものの成績を示す。統合した試験(sIgE+h2.008)は、閾値Tの様々な例示の値について表す。
方法
LEAP及びCoFAR2の試料セットで以下の基準に関してIgEエピトープを評価した:1)両試験にまたがり再現性の高い成績(AUC)、及び2)両試験にまたがり、高い成績を与えるサイズ2のエピトープパネルにおける関与の頻度(ロジスティック回帰モデルを使用)。
上記の基準を用いると、以下の表10のエピトープリストが、多重エピトープパネルで良い成績を与える最も再現性の高いエピトープである。一変量予測因子としてのそれらの成績を示してあるが、ロジスティック回帰当てはめを用いてIgE h2.008との組み合わせについても示す。
方法
LEAP及びCoFAR2の試料セットのIgEエピトープを、皮膚プリックテスト(SPT)と組み合わせ、以下の基準に関してピーナッツ特異的IgE(sIgE)を評価した:1)両試験にまたがり再現性の高い成績(AUC)、及び2)高い成績を与えるエピトープパネルにおける関与の頻度(ロジスティック回帰モデルを使用)。SPTは、膨疹の大きさに関して報告した。
使用目的:血液検査の使用目的は、試験された対象がピーナッツアレルギーを有するか否かを、高い可能性で判定することである。
*判定保留例のパーセンテージは、推定である。
方法
CoFAR自然歴試験にいた対象318人からなるコホートを利用して、3~15月齢から8歳までの高リスク乳幼児における連続アレルゲン性ピーナッツエピトープに対するIgE及びIgG4の結合を測定し、臨床的ピーナッツアレルギーの予測にそれらが利用できるかどうか判定した。Ara h1~3で見られる連続エピトープに対するIgE及びIgG4抗体の結合を、Luminexビーズ系アッセイを用いて評価した。318人の対象由来の血清を、ベースライン、2年後、及び5年後に、IgE及びIgG4エピトープ特異的抗体について評価した。ランダムフォレスト及び機械学習アルゴリズムを用いて、エピトープ結合プロファイル(EBP)に基づき対象のアレルギー状態のアウトカムを予測することができるモデルを構築した。モデルの成績を、当該コホートから得られた匿名試料(当初のセットの30%)を用いたリサンプリング法及び検証により評価し、精度、AUC、感度、及び特異性を、信頼区間と合わせて得た。225人の対象を「モデル開発」のために無作為に選択し、93人を「試験」のために選択し、5年後にはそれぞれ、合計122人及び48人のアレルギー性患者を選択した。
年齢無関係モデル及び各年齢に特異的なモデルを用いたところ、後者がより良好な結果をもたらすことがわかった。IgEプロファイルは、OFCアウトカムを予測するのに十分であったが、IgG4のみを用いたモデルでは同じような成績を出せなかった。年齢無関係モデルは、年齢特異的モデルほど正確ではなかった。評価した戦略の中で、ダウンブートストラップリサンプリングを用いるランダムフォレストアルゴリズムが最良の成績を出し、0年目の交差検証で平均AUC>0.87であり、2年後及び5年後に行われたOFCについて0.99及び0.95に到達した。次いで、各年齢群についての最終的なIgEに基づくモデルを、「見えない」試験データで評価した。ベースラインでのアレルギー状態は、76人の患者で正確に予測され(精度82%)、2年後及び5年後ではアレルギー状態がより正確に予測された(それぞれ、91%及び87%)。特異性は、全ての年齢群にまたがり互角であったものの、1年目についてのモデルは、より低い真陽性率を有していた。アレルギー性患者が幼いほど、非直鎖、立体構造エピトープに対する反応性を発生させる傾向があるため、分類器としてピーナッツ特異的IgEを用いたアルゴリズムも開発した。ピーナッツ特異的IgE(sIgE)を含めると、エピトープ単独に比べて、ランダムフォレストアルゴリズムを用いるモデルの劇的な改善が見られた。成績は、以下の表13にまとめるとおりである。
T1エピトープ、BF順:h2.008_IgE、h2.008_IgG4、h1.021_IgE、h1.030_IgE、h1.040_IgE、h3.102_IgE、h1.186_IgG4、h1.015_IgE、h2.010_IgG4、h2.037_IgG4、h3.080_IgE、h1.194_IgE、h1.041_IgE、h3.152_IgG4、h2.017_IgE、T2エピトープ、BF順:h2.008_IgE、h2.008_IgG4、h1.021_IgE、h1.015_IgE、h1.029_IgE、h2.010_IgG4、h1.194_IgE、h1.186_IgG4。
(付記)
上記実施形態及び変更例から把握できる技術的思想について記載する。
[項目1]
ピーナッツに対してアレルギーを有する対象におけるピーナッツに対する臨床的耐性の獲得の検出法であって、以下:
前記対象から得られた血清または血漿中の1種または複数のアレルギー関連免疫グロブリン(AAI)が、1種または複数のピーナッツペプチドと結合することを可能にするのに十分な条件下、前記1種または複数のピーナッツペプチドと前記血清または血漿とを接触させることであって、前記1種または複数のピーナッツペプチドは、固相担体にカップリングされており、1種または複数のAAIペプチド固相担体複合体を形成している、前記接触させること、
AAI特異的標識化試薬を前記AAIペプチド固相担体複合体に結合させること、
各AAIペプチド固相担体複合体に対する前記AAI特異的標識化試薬の結合を検出して、前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドを同定すること、ならびに
前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドで前記同定されたもの、または前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIの前記濃度を、前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドの先行して同定されたパネル、または前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIの先行する濃度と比較すること、
を含み、
ピーナッツに対する臨床的耐性の獲得は、以下:
前記対象の前記血清または血漿中のIgE AAIにより認識されるピーナッツペプチドの前記後続の数、及び/または前記対象の前記血清または血漿中のAAI IgEの前記後続の濃度が、前記対象の前記血清または血漿中のAAI IgEにより認識されるピーナッツペプチドの前記先行して同定された数より少ない、及び/または前記対象の前記血清または血漿中のAAI IgEの前記先行する濃度より低い場合、及び/または
前記対象の前記血清または血漿中のIgG4 AAIにより認識されるピーナッツペプチドの前記後続の数、及び/または前記対象の前記血清または血漿中のAAI IgG4の前記後続の濃度が、前記対象の前記血清または血漿中のAAI IgG4により認識されるピーナッツペプチドの前記先行して同定された数より多い、及び/または前記対象の前記血清または血漿中のAAI IgG4の前記先行する濃度より高い場合、
に示されているものである、前記方法。
[項目2]
前記複数のピーナッツペプチドは、ara h1アレルゲン(配列番号1)、ara h2アレルゲン(配列番号2)、及び/またはara h3アレルゲン(配列番号3)に由来する少なくとも2種のペプチドを含む、項目1に記載の方法。
[項目3]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、以下:
ara h1アレルゲンの8位から66位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h1アレルゲンの103位から152位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h1アレルゲンの176位から195位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h2アレルゲンの5位から40位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h3アレルゲンの93位から115位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h3アレルゲンの30位から75位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、及び/または
ara h3アレルゲンの152位から167位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド
から選択される、項目1に記載の方法。
[項目4]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号4~67のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目1に記載の方法。
[項目5]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、13、16、17、25、27、30、36、39、45、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目1に記載の方法。
[項目6]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39、45、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目1に記載の方法。
[項目7]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、10、13、14、34、36、39、40、42、49、61、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目1に記載の方法。
[項目8]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、9、34、36、39、及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目1に記載の方法。
[項目9]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号29、39、42、44、45、51、及び63のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目1に記載の方法。
[項目10]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、8、29、31、39、45、及び61のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目1に記載の方法。
[項目11]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目1に記載の方法。
[項目12]
各ピーナッツペプチドは、約3つのアミノ酸~約60のアミノ酸、約4つのアミノ酸~約60のアミノ酸、約6つのアミノ酸~約30のアミノ酸、約7つのアミノ酸~約20のアミノ酸、約10のアミノ酸~約16のアミノ酸、または約10のアミノ酸~約15のアミノ酸を含む、項目1から11のいずれか1項に記載の方法。
[項目13]
各ピーナッツペプチドは、15のアミノ酸を含む、項目1から12のいずれか1項に記載の方法。
[項目14]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、少なくとも2種のピーナッツペプチド、少なくとも3種のピーナッツペプチド、少なくとも5種のピーナッツペプチド、少なくとも10種のピーナッツペプチド、少なくとも15種のピーナッツペプチド、少なくとも20種のピーナッツペプチド、少なくとも25種のピーナッツペプチド、少なくとも30種のピーナッツペプチド、少なくとも35種のピーナッツペプチド、少なくとも40種のピーナッツペプチド、少なくとも45種のピーナッツペプチド、少なくとも50種のピーナッツペプチド、少なくとも55種のピーナッツペプチド、少なくとも60種のピーナッツペプチド、または少なくとも64種のピーナッツペプチドを含む、項目1から13のいずれか1項に記載の方法。
[項目15]
対象がピーナッツに対してアレルギーを有するという判定は、さらに、以下:全ピーナッツ特異的IgE(sIgE)、ピーナッツ構成要素ara h1に対するIgE、ピーナッツ構成要素ara h2に対するIgE、ピーナッツ構成要素ara h3に対するIgE、皮膚プリックテスト結果、臨床歴もしくは家族歴、及び/または患者もしくは臨床医質問票からのデータ
の1つまたは複数の結果を考慮に入れる、項目1から14のいずれか1項に記載の方法。
[項目16]
前記ピーナッツペプチドはそれぞれ、前記固相担体とカップリングするためのリンカーを有する、項目1から15のいずれか1項に記載の方法。
[項目17]
前記リンカーは、-PEG12-ビオチンである、項目16に記載の方法。
[項目18]
前記固相担体は、微粒子ビーズ、ガラスアレイ、シリコーンアレイ、膜、またはマイクロタイタープレートである、項目1から17のいずれか1項に記載の方法。
[項目19]
前記AAIは、IgG、IgM、IgA、及び/またはIgEである、項目1から18のいずれか1項に記載の方法。
[項目20]
前記IgGは、IgG4である、項目19に記載の方法。
[項目21]
前記AAI特異的標識化試薬は、検出可能に標識された抗ヒトIgG4抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgM抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgA抗体、及び/または検出可能に標識された抗ヒトIgE抗体である、項目1から20のいずれか1項に記載の方法。
[項目22]
前記検出可能な標識は、フィコエリトリン、蛍光色素、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)、及びアルカリホスファターゼから選択される、項目21に記載の方法。
[項目23]
各AAIペプチド固相担体複合体に対する前記AAI特異的標識化試薬の前記結合の前記検出は、フローサイトメトリー分析用の多重ペプチドビーズアッセイまたはラテラルフローアッセイにより行われる、項目1から22のいずれか1項に記載の方法。
[項目24]
対象におけるピーナッツアレルギー、及び/またはピーナッツアレルギーの重篤度の診断法であって、以下:
前記対象から得られた血清または血漿中の1種または複数のアレルギー関連免疫グロブリン(AAI)が、1種または複数のピーナッツペプチドと結合することを可能にするのに十分な条件下、前記1種または複数のピーナッツペプチドと前記血清または血漿とを接触させることであって、前記1種または複数のピーナッツペプチドは、固相担体にカップリングされており、1種または複数のAAIペプチド固相担体複合体を形成している、前記接触させること、
AAI特異的標識化試薬を前記AAIペプチド固相担体複合体に結合させること、及び
各AAIペプチド固相担体複合体に対する前記AAI特異的標識化試薬の結合を検出して、前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドを同定すること、
を含み、
前記対象の前記血清または血漿中のAAIが少なくとも1種のピーナッツペプチドを認識するということは、前記対象がピーナッツに対してアレルギーを有することを示す、前記方法。
[項目25]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、ara h1アレルゲン(配列番号1)、ara h2アレルゲン(配列番号2)、及び/またはara h3アレルゲン(配列番号3)に由来する、項目24に記載の方法。
[項目26]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、以下:
ara h1アレルゲンの8位から66位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h1アレルゲンの103位から152位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h1アレルゲンの176位から195位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h2アレルゲンの5位から40位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h3アレルゲンの93位から115位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h3アレルゲンの30位から75位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、及び/または
ara h3アレルゲンの152位から167位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド
から選択される、項目24に記載の方法。
[項目27]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号4~67のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目24に記載の方法。
[項目28]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、13、16、17、25、27、30、36、39、45、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目24に記載の方法。
[項目29]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39、45、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目24に記載の方法。
[項目30]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、10、13、14、34、36、39、40、42、49、61、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目24に記載の方法。
[項目31]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、9、34、36、39、及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目24に記載の方法。
[項目32]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号29、39、42、44、45、51、及び63のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目24に記載の方法。
[項目33]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、8、29、31、39、45、及び61のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目24に記載の方法。
[項目34]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目24に記載の方法。
[項目35]
各ピーナッツペプチドは、約3つのアミノ酸~約60のアミノ酸、約4つのアミノ酸~約60のアミノ酸、約6つのアミノ酸~約30のアミノ酸、約7つのアミノ酸~約20のアミノ酸、約10のアミノ酸~約16のアミノ酸、または約10のアミノ酸~約15のアミノ酸を含む、項目24から34のいずれか1項に記載の方法。
[項目36]
各ピーナッツペプチドは、15のアミノ酸を含む、項目24から34のいずれか1項に記載の方法。
[項目37]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、少なくとも2種のピーナッツペプチド、少なくとも3種のピーナッツペプチド、少なくとも5種のピーナッツペプチド、少なくとも10種のピーナッツペプチド、少なくとも15種のピーナッツペプチド、少なくとも20種のピーナッツペプチド、少なくとも25種のピーナッツペプチド、少なくとも30種のピーナッツペプチド、少なくとも35種のピーナッツペプチド、少なくとも40種のピーナッツのペプチド、少なくとも45種のピーナッツペプチド、少なくとも50種のピーナッツペプチド、少なくとも55種のピーナッツペプチド、少なくとも60種のピーナッツペプチド、または少なくとも64種のピーナッツペプチドを含む、項目24から36のいずれか1項に記載の方法。
[項目38]
対象がピーナッツに対してアレルギーを有するという判定は、さらに、以下:全ピーナッツ特異的IgE(sIgE)、ピーナッツ構成要素ara h1に対するIgE、ピーナッツ構成要素ara h2に対するIgE、ピーナッツ構成要素ara h3に対するIgE、全ピーナッツ特異的IgG4(sIgG4)、ピーナッツ構成要素ara h1に対するIgG4、ピーナッツ構成要素ara h2に対するIgG4、ピーナッツ構成要素ara h3に対するIgG4、皮膚プリックテスト結果、臨床歴もしくは家族歴、及び/または患者もしくは臨床医質問票からのデータ
の1つまたは複数の結果を考慮に入れる、項目24から37のいずれか1項に記載の方法。
[項目39]
対象がピーナッツに対してアレルギーを有するという判定は、さらに、以下:ピーナッツ構成要素ara h1に対するIgE、ピーナッツ構成要素ara h2に対するIgE、及び/またはピーナッツ構成要素ara h3に対するIgE
の1つまたは複数の結果を考慮に入れる、項目38に記載の方法。
[項目40]
前記ピーナッツ構成要素ara h1に対するIgEの結果は、配列番号7、13、16、17、25、27、30、及び36から選択されるアミノ酸配列、または配列番号5、6、10、13、14、34、及び36から選択されるアミノ酸配列、または配列番号5、6、9、34、及び36から選択されるアミノ酸配列、または配列番号7、8、29、及び31から選択されるアミノ酸配列、または配列番号29であるアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドでの結果を含み、
前記ピーナッツ構成要素ara h2に対するIgEの結果は、配列番号39から選択されるアミノ酸配列、または配列番号39、40、42、及び49から選択されるアミノ酸配列、または配列番号39及び40から選択されるアミノ酸配列、または配列番号39、42、44、45、及び51から選択されるアミノ酸配列、または配列番号39及び45から選択されるアミノ酸配列、または配列番号39及び40から選択されるアミノ酸配列、または配列番号40から選択されるアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドでの結果を含み、ならびに
前記ピーナッツ構成要素ara h3に対するIgEの結果は、配列番号65から選択されるアミノ酸配列、または配列番号61、65、及び66から選択されるアミノ酸配列、または配列番号63から選択されるアミノ酸配列、または配列番号61から選択されるアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドでの結果を含む、
項目39に記載の方法。
[項目41]
対象がピーナッツに対してアレルギーを有するという判定は、さらに、以下:
配列番号39のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgE、配列番号45のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgG4、及び配列番号66のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgG4、
配列番号39のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgE、配列番号45のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgG4、及び皮膚プリックテスト、
配列番号39のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgE、配列番号45のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgG4、配列番号66のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgG4、及びsIgE、ならびに
配列番号39のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgE、配列番号45のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgG4、配列番号66のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgG4、及びピーナッツ構成要素ara h2、のうちの1つまたは複数の結果を考慮に入れる、項目38に記載の方法。
[項目42]
対象がピーナッツに対してアレルギーを有するという判定は、以下:
前記対象のsIgEが≧0.03kU A /Lであるか、それとも<0.03kU A /Lであるかを特定することであって、≧0.03kU A /Lは、前記対象がピーナッツに対してアレルギーを有する可能性があることを示し、<0.03kU A /Lは、前記対象がピーナッツに対してアレルギーを有さないことを示す、前記特定すること、及び、
前記対象のsIgEが≧0.03kU A /Lである場合に、配列番号39のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgE、配列番号45のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgG4、及び配列番号66のアミノ酸配列を含むピーナッツペプチドに対するIgG4の組み合わせが<0.20であるか、それとも≧0.20であるかを特定することであって、<0.20は、前記対象がピーナッツに対してアレルギーを有さないことを示し、≧0.20は、前記対象がピーナッツに対してアレルギーを有することを示す、前記特定すること、
を含む、項目38に記載の方法。
[項目43]
前記ピーナッツペプチドはそれぞれ、前記固相担体とカップリングするためのリンカーを有する、項目24から42のいずれか1項に記載の方法。
[項目44]
前記リンカーは、-PEG12-ビオチンである、項目43に記載の方法。
[項目45]
前記固相担体は、微粒子ビーズ、ガラスアレイ、シリコーンアレイ、膜、またはマイクロタイタープレートである、項目24から44のいずれか1項に記載の方法。
[項目46]
前記AAIは、IgG、IgM、IgA、及び/またはIgEである、項目24から45のいずれか1項に記載の方法。
[項目47]
前記IgGは、IgG4である、項目46に記載の方法。
[項目48]
前記AAI特異的標識化試薬は、検出可能に標識された抗ヒトIgG4抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgM抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgA抗体、及び/または検出可能に標識された抗ヒトIgE抗体である、項目24から47のいずれか1項に記載の方法。
[項目49]
前記検出可能な標識は、フィコエリトリン、蛍光色素、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)、及びアルカリホスファターゼから選択される、項目48に記載の方法。
[項目50]
各AAIペプチド固相担体複合体に対する前記AAI特異的標識化試薬の前記結合の前記検出は、フローサイトメトリー分析用の多重ペプチドビーズアッセイまたはラテラルフローアッセイにより行われる、項目24から48のいずれか1項に記載の方法。
[項目51]
ピーナッツに対してアレルギーを有する対象におけるピーナッツアレルギーの治療中のアレルギーまたは有害事象の強度の上昇の経時的検出法であって、以下:
前記対象から得られた血清または血漿中の1種または複数のアレルギー関連免疫グロブリン(AAI)が、1種または複数のピーナッツペプチドと結合することを可能にするのに十分な条件下、前記1種または複数のピーナッツペプチドと前記血清または血漿とを接触させることであって、前記1種または複数のピーナッツペプチドは、固相担体にカップリングされていて1種または複数のAAIペプチド固相担体複合体を形成しており、前記1種または複数のピーナッツペプチドは、ara h1アレルゲンの8位から66位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、ara h1アレルゲンの103位から152位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、ara h1アレルゲンの176位から195位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、ara h2アレルゲンの5位から40位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、ara h3アレルゲンの93位から115位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、ara h3アレルゲンの30位から75位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、及び/またはara h3アレルゲンの152位から167位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチドから選択される、前記接触させること、
AAI特異的標識化試薬を前記AAIペプチド固相担体複合体に結合させること、
各AAIペプチド固相担体複合体に対する前記AAI特異的標識化試薬の結合を検出して、前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドを同定すること、ならびに
前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドで前記同定されたもの、または前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIの前記濃度を、前記対象の前記血清中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドの先行して同定されたパネル、または前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIの先行する濃度と比較すること、を含み、
ピーナッツに対する前記アレルギー反応の強度の上昇は、前記対象の前記血清または血漿中のAAIにより認識されるピーナッツペプチドの前記後続の数もしくは反応性パターン、または前記対象の前記血清または血漿中のAAIの前記後続の濃度が、前記対象の前記血清または血漿中のAAIにより認識されるピーナッツペプチドの前記先行して同定された数もしくは反応性パターンより大きい、または前記対象の前記血清または血漿中のAAIの前記先行する濃度より高いことにより示されているものである、前記検出法。
[項目52]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号4~67のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目51に記載の方法。
[項目53]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、13、16、17、25、27、30、36、39、45、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目51に記載の方法。
[項目54]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39、45、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目51に記載の方法。
[項目55]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、10、13、14、34、36、39、40、42、49、61、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目51に記載の方法。
[項目56]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、9、34、36、39、及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目51に記載の方法。
[項目57]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号29、39、42、44、45、51、及び63のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目51に記載の方法。
[項目58]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、8、29、31、39、45、及び61のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目51に記載の方法。
[項目59]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目51に記載の方法。
[項目60]
各ピーナッツペプチドは、約3つのアミノ酸~約60のアミノ酸、約4つのアミノ酸~約60のアミノ酸、約6つのアミノ酸~約30のアミノ酸、約7つのアミノ酸~約20のアミノ酸、約10のアミノ酸~約16のアミノ酸、または約10のアミノ酸~約15のアミノ酸を含む、項目51から59のいずれか1項に記載の方法。
[項目61]
各ピーナッツペプチドは、15のアミノ酸を含む、項目51から60のいずれか1項に記載の方法。
[項目62]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、少なくとも2種のピーナッツペプチド、少なくとも3種のピーナッツペプチド、少なくとも5種のピーナッツペプチド、少なくとも10種のピーナッツペプチド、少なくとも15種のピーナッツペプチド、少なくとも20種のピーナッツペプチド、少なくとも25種のピーナッツペプチド、少なくとも30種のピーナッツペプチド、少なくとも35種のピーナッツペプチド、少なくとも40種のピーナッツペプチド、少なくとも45種のピーナッツペプチド、少なくとも50種のピーナッツペプチド、少なくとも55種のピーナッツペプチド、少なくとも60種のピーナッツペプチド、または少なくとも64種のピーナッツペプチドを含む、項目51から61のいずれか1項に記載の方法。
[項目63]
対象がピーナッツに対してアレルギーを有するという判定は、さらに、以下:全ピーナッツ特異的IgE(sIgE)、ピーナッツ構成要素ara h1に対するIgE、ピーナッツ構成要素ara h2に対するIgE、ピーナッツ構成要素ara h3に対するIgE、皮膚プリックテスト結果、臨床歴もしくは家族歴、及び/または患者もしくは臨床医質問票からのデータ
のうち1つまたは複数の結果を考慮に入れる、項目51から62のいずれか1項に記載の方法。
[項目64]
前記ピーナッツペプチドはそれぞれ、前記固相担体とカップリングするためのリンカーを有する、項目51から63のいずれか1項に記載の方法。
[項目65]
前記リンカーは、-PEG12-ビオチンである、項目64に記載の方法。
[項目66]
前記固相担体は、微粒子ビーズ、ガラスアレイ、シリコーンアレイ、膜、またはマイクロタイタープレートである、項目51から65のいずれか1項に記載の方法。
[項目67]
前記AAIは、IgG、IgM、IgA、及び/またはIgEである、項目51から66のいずれか1項に記載の方法。
[項目68]
前記IgGは、IgG4である、項目67に記載の方法。
[項目69]
前記AAI特異的標識化試薬は、検出可能に標識された抗ヒトIgG4抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgM抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgA抗体、及び/または検出可能に標識された抗ヒトIgE抗体である、項目51から68のいずれか1項に記載の方法。
[項目70]
前記検出可能な標識は、フィコエリトリン、蛍光色素、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)、及びアルカリホスファターゼから選択される、項目69に記載の方法。
[項目71]
各AAIペプチド固相担体複合体に対する前記AAI特異的標識化試薬の前記結合の前記検出は、フローサイトメトリー分析用の多重ペプチドビーズアッセイまたはラテラルフローアッセイにより行われる、項目51から69のいずれか1項に記載の方法。
[項目72]
乳幼児を1種または複数のピーナッツアレルゲンに対して感作させることによるピーナッツに対する耐性または非アレルギー性の誘導法であって、前記乳幼児に1種または複数のピーナッツペプチドを投与することを含み、前記1種または複数のピーナッツペプチドは、ara h1アレルゲン(配列番号1)、ara h2アレルゲン(配列番号2)、及び/またはara h3アレルゲン(配列番号3)に由来するものである、前記誘導法。
[項目73]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、以下:
ara h1アレルゲンの8位から66位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h1アレルゲンの103位から152位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h1アレルゲンの176位から195位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h2アレルゲンの5位から40位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h3アレルゲンの93位から115位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h3アレルゲンの30位から75位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、及び/または
ara h3アレルゲンの152位から167位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド
から選択される、項目72に記載の方法。
[項目74]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号4~67のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目72に記載の方法。
[項目75]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、13、16、17、25、27、30、36、39、45、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目72に記載の方法。
[項目76]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39、45、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目72に記載の方法。
[項目77]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、10、13、14、34、36、39、40、42、49、61、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目72に記載の方法。
[項目78]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、9、34、36、39、及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目72に記載の方法。
[項目79]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号29、39、42、44、45、51、及び63のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目72に記載の方法。
[項目80]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、8、29、31、39、45、及び61のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目72に記載の方法。
[項目81]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目72に記載の方法。
[項目82]
各ピーナッツペプチドは、約3つのアミノ酸~約60のアミノ酸、約4つのアミノ酸~約60のアミノ酸、約6つのアミノ酸~約30のアミノ酸、約7つのアミノ酸~約20のアミノ酸、約10のアミノ酸~約16のアミノ酸、または約10のアミノ酸~約15のアミノ酸を含む、項目72から81のいずれか1項に記載の方法。
[項目83]
各ピーナッツペプチドは、15のアミノ酸を含む、項目72から82のいずれか1項に記載の方法。
[項目84]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、少なくとも2種のピーナッツペプチド、少なくとも3種のピーナッツペプチド、少なくとも5種のピーナッツペプチド、少なくとも10種のピーナッツペプチド、少なくとも15種のピーナッツペプチド、少なくとも20種のピーナッツペプチド、少なくとも25種のピーナッツペプチド、少なくとも30種のピーナッツペプチド、少なくとも35種のピーナッツペプチド、少なくとも40種のピーナッツペプチド、少なくとも45種のピーナッツペプチド、少なくとも50種のピーナッツペプチド、少なくとも55種のピーナッツペプチド、少なくとも60種のピーナッツペプチド、または少なくとも64種のピーナッツペプチドを含む、項目72から83のいずれか1項に記載の方法。
[項目85]
ara h1アレルゲン(配列番号1)、ara h2アレルゲン(配列番号2)、及び/またはara h3アレルゲン(配列番号3)に由来する少なくとも2種のペプチドを含む複数のピーナッツペプチドを含む、アレルゲンエピトープ含有ピーナッツペプチドのセット。
[項目86]
前記複数のピーナッツペプチドは、以下:
ara h1アレルゲンの8位から66位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h1アレルゲンの103位から152位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h1アレルゲンの176位から195位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h2アレルゲンの5位から40位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h3アレルゲンの93位から115位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h3アレルゲンの30位から75位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、及び/または
ara h3アレルゲンの152位から167位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド
から選択される、項目85に記載のピーナッツペプチドのセット。
[項目87]
前記複数のピーナッツペプチドは、配列番号4~67のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドを含む、項目85に記載のピーナッツペプチドのセット。
[項目88]
前記複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、13、16、17、25、27、30、36、39、45、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドを含む、項目85に記載のピーナッツペプチドのセット。
[項目89]
前記複数のピーナッツペプチドは、配列番号39、45、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドを含む、項目85に記載のピーナッツペプチドのセット。
[項目90]
前記複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、10、13、14、34、36、39、40、42、49、61、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドを含む、項目85に記載のピーナッツペプチドのセット。
[項目91]
前記複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、9、34、36、39、及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドを含む、項目85に記載のピーナッツペプチドのセット。
[項目92]
前記複数のピーナッツペプチドは、配列番号29、39、42、44、45、51、及び63のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドを含む、項目85に記載のピーナッツペプチドのセット。
[項目93]
前記複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、8、29、31、39、45、及び61のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドを含む、項目85に記載のピーナッツペプチドのセット。
[項目94]
前記複数のピーナッツペプチドは、配列番号39及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドを含む、項目85に記載のピーナッツペプチドのセット。
[項目95]
各ピーナッツペプチドは、約3つのアミノ酸~約60のアミノ酸、約4つのアミノ酸~約60のアミノ酸、約6つのアミノ酸~約30のアミノ酸、約7つのアミノ酸~約20のアミノ酸、約10のアミノ酸~約16のアミノ酸、または約10のアミノ酸~約15のアミノ酸を含む、項目85から94のいずれか1項に記載のピーナッツペプチドのセット。
[項目96]
各ピーナッツペプチドは、15のアミノ酸を含む、項目85から95のいずれか1項に記載のピーナッツペプチドのセット。
[項目97]
前記複数のピーナッツペプチドは、少なくとも2種のピーナッツペプチド、少なくとも3種のピーナッツペプチド、少なくとも5種のピーナッツペプチド、少なくとも10種のピーナッツペプチド、少なくとも15種のピーナッツペプチド、少なくとも20種のピーナッツペプチド、少なくとも25種のピーナッツペプチド、少なくとも30種のピーナッツペプチド、少なくとも35種のピーナッツペプチド、少なくとも40種のピーナッツペプチド、少なくとも45種のピーナッツペプチド、少なくとも50種のピーナッツペプチド、少なくとも55種のピーナッツペプチド、少なくとも60種のピーナッツペプチド、または少なくとも64種のピーナッツペプチドを含む、項目85から96のいずれか1項に記載のピーナッツペプチドのセット。
[項目98]
a)ara h1アレルゲン(配列番号1)、ara h2アレルゲン(配列番号2)、及び/またはara h3アレルゲン(配列番号3)に由来する1種または複数のアレルゲンエピトープ含有ピーナッツペプチドであって、各ピーナッツペプチドは、固相担体にカップリングされている、前記1種または複数のアレルゲンエピトープ含有ピーナッツペプチド、ならびに
b)アレルギー関連免疫グロブリン(AAI)特異的標識化試薬、
を含み、まとめてパッケージ化されていて、使用説明書も含む、キット。
[項目99]
さらに、結合緩衝液、洗浄緩衝液、及び検出緩衝液のうち1種または複数を含む、項目98に記載のキット。
[項目100]
さらに、前記AAI特異的標識化試薬と特異的に結合するレポーター部分を含む、項目98に記載のキット。
[項目101]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、以下:
ara h1アレルゲンの8位から66位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h1アレルゲンの103位から152位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h1アレルゲンの176位から195位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h2アレルゲンの5位から40位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h3アレルゲンの93位から115位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、
ara h3アレルゲンの30位から75位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、及び/または
ara h3アレルゲンの152位から167位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド
から選択される、項目98に記載のキット。
[項目102]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号4~67のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目98に記載のキット。
[項目103]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、13、16、17、25、27、30、36、39、45、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目98に記載のキット。
[項目104]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39、45、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目98に記載のキット。
[項目105]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、10、13、14、34、36、39、40、42、49、61、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目98に記載のキット。
[項目106]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、9、34、36、39、及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目98に記載のキット。
[項目107]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号29、39、42、44、45、51、及び63のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目98に記載のキット。
[項目108]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、8、29、31、39、45、及び61のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目98に記載のキット。
[項目109]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、項目98に記載のキット。
[項目110]
各ピーナッツペプチドは、約3つのアミノ酸~約60のアミノ酸、約4つのアミノ酸~約60のアミノ酸、約6つのアミノ酸~約30のアミノ酸、約7つのアミノ酸~約20のアミノ酸、約10のアミノ酸~約16のアミノ酸、または約10のアミノ酸~約15のアミノ酸を含む、項目98から109のいずれか1項に記載のキット。
[項目111]
各ピーナッツペプチドは、15のアミノ酸を含む、項目98から109のいずれか1項に記載のキット。
[項目112]
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、少なくとも2種のピーナッツペプチド、少なくとも3種のピーナッツペプチド、少なくとも5種のピーナッツペプチド、少なくとも10種のピーナッツペプチド、少なくとも15種のピーナッツペプチド、少なくとも20種のピーナッツペプチド、少なくとも25種のピーナッツペプチド、少なくとも30種のピーナッツペプチド、少なくとも35種のピーナッツペプチド、少なくとも40種のピーナッツペプチド、少なくとも45種のピーナッツペプチド、少なくとも50種のピーナッツペプチド、少なくとも55種のピーナッツペプチド、少なくとも60種のピーナッツペプチド、または少なくとも64種のピーナッツペプチドを含む、項目98から111のいずれか1項に記載のキット。
[項目113]
前記ピーナッツペプチドはそれぞれ、前記固相担体とカップリングするためのリンカーを有する、項目98から112のいずれか1項に記載のキット。
[項目114]
前記リンカーは、-PEG12-ビオチンである、項目113に記載のキット。
[項目115]
前記固相担体は、微粒子ビーズ、ガラスアレイ、シリコーンアレイ、膜、またはマイクロタイタープレートである、項目98から114のいずれか1項に記載のキット。
[項目116]
前記AAI特異的標識化試薬は、検出可能に標識された抗ヒトIgG4抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgM抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgA抗体、及び/または検出可能に標識された抗ヒトIgE抗体である、項目98から115のいずれか1項に記載のキット。
[項目117]
前記検出可能な標識は、フィコエリトリン、蛍光色素、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)、及びアルカリホスファターゼから選択される、項目116に記載のキット。
Claims (62)
- ピーナッツに対してアレルギーを有する対象におけるピーナッツに対する臨床的耐性の獲得の検出方法であって、以下:
前記対象から得られた血清または血漿中の1種または複数のアレルギー関連免疫グロブリン(AAI)が、固相担体にカップリングされた1種または複数のピーナッツペプチドと結合することを可能にするのに十分な条件下、前記1種または複数のピーナッツペプチドと前記血清または血漿とを接触させて、1種または複数のAAIペプチド固相担体複合体を形成させること、
AAI特異的標識化試薬を前記AAIペプチド固相担体複合体に結合させること、
各AAIペプチド固相担体複合体に対する前記AAI特異的標識化試薬の結合を検出して、前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドを同定すること、ならびに
前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドで前記同定されたもの、または前記対象の前記血清または血漿中の前記1種または複数のピーナッツペプチドと結合する前記AAIの濃度を、前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドの先行して同定されたパネル、または前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIの先行する濃度と比較すること、
を含み、
ピーナッツに対する臨床的耐性の獲得は、以下:
前記対象の前記血清または血漿中のIgE AAIにより認識されるピーナッツペプチドの前記後続の数、及び/または前記対象の前記血清または血漿中のAAI IgEの前記後続の濃度が、前記対象の前記血清または血漿中のAAI IgEにより認識されるピーナッツペプチドの前記先行して同定された数より少ない、及び/または前記対象の前記血清または血漿中のAAI IgEの前記先行する濃度より低い場合、及び/または
前記対象の前記血清または血漿中のIgG4 AAIにより認識されるピーナッツペプチドの前記後続の数、及び/または前記対象の前記血清または血漿中のAAI IgG4の前記後続の濃度が、前記対象の前記血清または血漿中のAAI IgG4により認識されるピーナッツペプチドの前記先行して同定された数より多い、及び/または前記対象の前記血清または血漿中のAAI IgG4の前記先行する濃度より高い場合、に示されており、
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、
ara h1アレルゲンの8位から66位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド;
ara h1アレルゲンの103位から152位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド;
ara h1アレルゲンの176位から195位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド;
ara h2アレルゲンの5位から40位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド;
ara h3アレルゲンの93位から115位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド;
ara h3アレルゲンの30位から75位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド;及び/または
ara h3アレルゲンの152位から167位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、から選択される、方法。 - 前記複数のピーナッツペプチドは、ara h1アレルゲン(配列番号1)、ara h2アレルゲン(配列番号2)、及び/またはara h3アレルゲン(配列番号3)に由来する少なくとも2種のペプチドを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号4~67のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、13、16、17、25、27、30、36、39、45、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39、45、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、10、13、14、34、36、39、40、42、49、61、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、9、34、36、39、及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号29、39、42、44、45、51、及び63のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、8、29、31、39、45、及び61のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の方法。
- 各ピーナッツペプチドは、3つのアミノ酸~60のアミノ酸、4つのアミノ酸~60のアミノ酸、6つのアミノ酸~30のアミノ酸、7つのアミノ酸~20のアミノ酸、10のアミノ酸~16のアミノ酸、または10のアミノ酸~15のアミノ酸を含む、請求項1から10のいずれか1項に記載の方法。
- 各ピーナッツペプチドは、15のアミノ酸を含む、請求項1から11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、少なくとも2種のピーナッツペプチド、少なくとも3種のピーナッツペプチド、少なくとも5種のピーナッツペプチド、少なくとも10種のピーナッツペプチド、少なくとも15種のピーナッツペプチド、少なくとも20種のピーナッツペプチド、少なくとも25種のピーナッツペプチド、少なくとも30種のピーナッツペプチド、少なくとも35種のピーナッツペプチド、少なくとも40種のピーナッツペプチド、少なくとも45種のピーナッツペプチド、少なくとも50種のピーナッツペプチド、少なくとも55種のピーナッツペプチド、少なくとも60種のピーナッツペプチド、または少なくとも64種のピーナッツペプチドを含む、請求項1から12のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ピーナッツペプチドはそれぞれ、前記固相担体とカップリングするためのリンカーを有する、請求項1から13のいずれか1項に記載の方法。
- 前記リンカーは、-PEG12-ビオチンである、請求項14に記載の方法。
- 前記固相担体は、微粒子ビーズ、ガラスアレイ、シリコーンアレイ、膜、またはマイクロタイタープレートである、請求項1から15のいずれか1項に記載の方法。
- 前記AAIは、IgG、IgM、IgA、及び/またはIgEである、請求項1から16のいずれか1項に記載の方法。
- 前記IgGは、IgG4である、請求項17に記載の方法。
- 前記AAI特異的標識化試薬は、検出可能に標識された抗ヒトIgG4抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgM抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgA抗体、及び/または検出可能に標識された抗ヒトIgE抗体である、請求項1から18のいずれか1項に記載の方法。
- 前記検出可能な標識は、フィコエリトリン、蛍光色素、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)、及びアルカリホスファターゼから選択される、請求項19に記載の方法。
- 各AAIペプチド固相担体複合体に対する前記AAI特異的標識化試薬の前記結合の前記検出は、フローサイトメトリー分析用の多重ペプチドビーズアッセイまたはラテラルフローアッセイにより行われる、請求項1から20のいずれか1項に記載の方法。
- 対象におけるピーナッツアレルギー、及び/またはピーナッツアレルギーの重篤度の診断を補助する方法であって、以下:
前記対象から得られた血清または血漿中の1種または複数のアレルギー関連免疫グロブリン(AAI)が、固相担体にカップリングされた1種または複数のピーナッツペプチドと結合することを可能にするのに十分な条件下、前記1種または複数のピーナッツペプチドと前記血清または血漿とを接触させて、1種または複数のAAIペプチド固相担体複合体を形成させること、
AAI特異的標識化試薬を前記AAIペプチド固相担体複合体に結合させること、及び
各AAIペプチド固相担体複合体に対する前記AAI特異的標識化試薬の結合を検出して、前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドを同定すること、
を含み、
前記対象の前記血清または血漿中のAAIが少なくとも1種のピーナッツペプチドを認識するということは、前記対象がピーナッツに対してアレルギーを有することを示し、
前記1種または複数のピーナッツペプチドは、
ara h1アレルゲンの8位から66位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド;
ara h1アレルゲンの103位から152位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド;
ara h1アレルゲンの176位から195位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド;
ara h2アレルゲンの5位から40位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド;
ara h3アレルゲンの93位から115位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド;
ara h3アレルゲンの30位から75位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド;及び/または
ara h3アレルゲンの152位から167位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、から選択される、方法。 - 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、ara h1アレルゲン(配列番号1)、ara h2アレルゲン(配列番号2)、及び/またはara h3アレルゲン(配列番号3)に由来する、請求項22に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号4~67のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項22に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、13、16、17、25、27、30、36、39、45、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項22に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39、45、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項22に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、10、13、14、34、36、39、40、42、49、61、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項22に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、9、34、36、39、及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項22に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号29、39、42、44、45、51、及び63のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項22に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、8、29、31、39、45、及び61のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項22に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項22に記載の方法。
- 各ピーナッツペプチドは、3つのアミノ酸~60のアミノ酸、4つのアミノ酸~60のアミノ酸、6つのアミノ酸~30のアミノ酸、7つのアミノ酸~20のアミノ酸、10のアミノ酸~16のアミノ酸、または10のアミノ酸~15のアミノ酸を含む、請求項22から31のいずれか1項に記載の方法。
- 各ピーナッツペプチドは、15のアミノ酸を含む、請求項22から31のいずれか1項に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、少なくとも2種のピーナッツペプチド、少なくとも3種のピーナッツペプチド、少なくとも5種のピーナッツペプチド、少なくとも10種のピーナッツペプチド、少なくとも15種のピーナッツペプチド、少なくとも20種のピーナッツペプチド、少なくとも25種のピーナッツペプチド、少なくとも30種のピーナッツペプチド、少なくとも35種のピーナッツペプチド、少なくとも40種のピーナッツペプチド、少なくとも45種のピーナッツペプチド、少なくとも50種のピーナッツペプチド、少なくとも55種のピーナッツペプチド、少なくとも60種のピーナッツペプチド、または少なくとも64種のピーナッツペプチドを含む、請求項22から33のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ピーナッツペプチドはそれぞれ、前記固相担体とカップリングするためのリンカーを有する、請求項22から34のいずれか1項に記載の方法。
- 前記リンカーは、-PEG12-ビオチンである、請求項35に記載の方法。
- 前記固相担体は、微粒子ビーズ、ガラスアレイ、シリコーンアレイ、膜、またはマイクロタイタープレートである、請求項22から36のいずれか1項に記載の方法。
- 前記AAIは、IgG、IgM、IgA、及び/またはIgEである、請求項22から37のいずれか1項に記載の方法。
- 前記IgGは、IgG4である、請求項38に記載の方法。
- 前記AAI特異的標識化試薬は、検出可能に標識された抗ヒトIgG4抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgM抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgA抗体、及び/または検出可能に標識された抗ヒトIgE抗体である、請求項22から39のいずれか1項に記載の方法。
- 前記検出可能な標識は、フィコエリトリン、蛍光色素、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)、及びアルカリホスファターゼから選択される、請求項40に記載の方法。
- 各AAIペプチド固相担体複合体に対する前記AAI特異的標識化試薬の前記結合の前記検出は、フローサイトメトリー分析用の多重ペプチドビーズアッセイまたはラテラルフローアッセイにより行われる、請求項22から40のいずれか1項に記載の方法。
- ピーナッツに対してアレルギーを有する対象におけるピーナッツアレルギーの治療中のアレルギーまたは有害事象の強度の上昇の経時的検出方法であって、以下:
前記対象から得られた血清または血漿中の1種または複数のアレルギー関連免疫グロブリン(AAI)が、固相担体にカップリングされた1種または複数のピーナッツペプチドと結合することを可能にするのに十分な条件下、前記1種または複数のピーナッツペプチドと前記血清または血漿とを接触させて、1種または複数のAAIペプチド固相担体複合体を形成させることであって、前記1種または複数のピーナッツペプチドは、ara h1アレルゲンの8位から66位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、ara h1アレルゲンの103位から152位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、ara h1アレルゲンの176位から195位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、ara h2アレルゲンの5位から40位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、ara h3アレルゲンの93位から115位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、ara h3アレルゲンの30位から75位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチド、及び/またはara h3アレルゲンの152位から167位の中の少なくとも3連続するアミノ酸を有するペプチドから選択される、こと、
AAI特異的標識化試薬を前記AAIペプチド固相担体複合体に結合させること、
各AAIペプチド固相担体複合体に対する前記AAI特異的標識化試薬の結合を検出して、前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドを同定すること、ならびに
前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドで前記同定されたもの、または前記対象の前記血清または血漿中の前記1種または複数のピーナッツペプチドと結合する前記AAIの濃度を、前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIと結合した1種または複数のピーナッツペプチドの先行して同定されたパネル、または前記対象の前記血清または血漿中の前記AAIの先行する濃度と比較すること、を含み、
ピーナッツに対する前記アレルギー反応の強度の上昇は、前記対象の前記血清または血漿中のAAIにより認識されるピーナッツペプチドの前記後続の数もしくは反応性パターン、または前記対象の前記血清または血漿中のAAIの前記後続の濃度が、前記対象の前記血清または血漿中のAAIにより認識されるピーナッツペプチドの前記先行して同定された数もしくは反応性パターンより大きい、または前記対象の前記血清または血漿中のAAIの前記先行する濃度より高いことにより示されているものである、方法。 - 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号4~67のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項43に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、13、16、17、25、27、30、36、39、45、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項43に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39、45、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項43に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、10、13、14、34、36、39、40、42、49、61、65、及び66のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項43に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号5、6、9、34、36、39、及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項43に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号29、39、42、44、45、51、及び63のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項43に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号7、8、29、31、39、45、及び61のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項43に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、配列番号39及び40のうちの任意の1種または複数から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項43に記載の方法。
- 各ピーナッツペプチドは、3つのアミノ酸~60のアミノ酸、4つのアミノ酸~60のアミノ酸、6つのアミノ酸~30のアミノ酸、7つのアミノ酸~20のアミノ酸、10のアミノ酸~16のアミノ酸、または10のアミノ酸~15のアミノ酸を含む、請求項43から51のいずれか1項に記載の方法。
- 各ピーナッツペプチドは、15のアミノ酸を含む、請求項43から52のいずれか1項に記載の方法。
- 前記1種または複数のピーナッツペプチドは、少なくとも2種のピーナッツペプチド、少なくとも3種のピーナッツペプチド、少なくとも5種のピーナッツペプチド、少なくとも10種のピーナッツペプチド、少なくとも15種のピーナッツペプチド、少なくとも20種のピーナッツペプチド、少なくとも25種のピーナッツペプチド、少なくとも30種のピーナッツペプチド、少なくとも35種のピーナッツペプチド、少なくとも40種のピーナッツペプチド、少なくとも45種のピーナッツペプチド、少なくとも50種のピーナッツペプチド、少なくとも55種のピーナッツペプチド、少なくとも60種のピーナッツペプチド、または少なくとも64種のピーナッツペプチドを含む、請求項43から53のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ピーナッツペプチドはそれぞれ、前記固相担体とカップリングするためのリンカーを有する、請求項43から54のいずれか1項に記載の方法。
- 前記リンカーは、-PEG12-ビオチンである、請求項55に記載の方法。
- 前記固相担体は、微粒子ビーズ、ガラスアレイ、シリコーンアレイ、膜、またはマイクロタイタープレートである、請求項43から56のいずれか1項に記載の方法。
- 前記AAIは、IgG、IgM、IgA、及び/またはIgEである、請求項43から57のいずれか1項に記載の方法。
- 前記IgGは、IgG4である、請求項58に記載の方法。
- 前記AAI特異的標識化試薬は、検出可能に標識された抗ヒトIgG4抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgM抗体、検出可能に標識された抗ヒトIgA抗体、及び/または検出可能に標識された抗ヒトIgE抗体である、請求項43から59のいずれか1項に記載の方法。
- 前記検出可能な標識は、フィコエリトリン、蛍光色素、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)、及びアルカリホスファターゼから選択される、請求項60に記載の方法。
- 各AAIペプチド固相担体複合体に対する前記AAI特異的標識化試薬の前記結合の前記検出は、フローサイトメトリー分析用の多重ペプチドビーズアッセイまたはラテラルフローアッセイにより行われる、請求項43から60のいずれか1項に記載の方法。
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