JP2023514162A - ピーナッツアレルギーを検出するためのアッセイ - Google Patents

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Abstract

本開示は、ピーナッツペプチド組成物及びキット、ならびに、ピーナッツアレルギーの診断方法、ピーナッツに対する臨床耐性の発達を検出するための方法、ならびに、ピーナッツアレルゲンに対して乳児を脱感作するための方法を提供する。

Description

本開示は、部分的には、ピーナッツペプチド組成物及びキット、ならびに、ピーナッツアレルギーの診断方法、ピーナッツに対する臨床耐性の発達を検出するための方法、ならびに、ピーナッツアレルゲンに対して乳児を脱感作するための方法に関する。
食物アレルギーは、成人及び子どもに共通の問題であり、症状は、穏やかな口腔掻痒から、場合により命を脅かすアナフィラキシーショックまで、広範囲にまたがり得る。食物アレルギーは現在、プリックテストまたは経口誘発、ならびに、特定のＩｇＥ、及び、場合によっては、ＩｇＧ４などの他の血清抗体の血清レベルの測定により診断される。これらの検査は、臨床反応性の可能性を示しはするものの、異なるフェノタイプの食物アレルギーを区別しない、または、予後情報を提供しない。現在のアレルギー検査はまた、患者にある程度のリスクを伴う。現在のＩｇＥ検査と、患者の実際の臨床感度との関係は、通常、反応感度と、反応を刺激するアレルゲンの量との組み合わせとして定義される、弱いものである。現在の検査の別の制限は、小児患者のアレルギーが小児期の間に強くなるか否かを測定することができないことである。この場合、特定のＩｇＥレベルと、臨床アレルギーの期間とには、正ではあるが弱い相関がある。
より最近では、食物アレルゲンに対する臨床反応性が、エピトープ認識レベルで、アレルゲン特異的ＩｇＥとより良く相関し得ることが示唆されている。持続性、または、より深刻なアレルギー反応を有する患者は、より多くの数のＩｇＥエピトープを認識することが報告されており、このことは、アレルギー診断及び予測のための追加のツールとしてのエピトープマッピングを示唆している。スポットメンブレンベースのイムノアッセイが、エピトープマッピングのために使用されている。本システムでは、ペプチドはメンブレン上で合成され、患者の血清と共にインキュベートされる。本プロセスは多数のペプチドを必要とするため、エラーが起こりやすく、時間を浪費し、労働集約型であり、かつ高価である。本フォーマットでのイムノアッセイはまた、多量の患者血清を必要とする。
食物アレルギーに対する臨床症状の著しい不均質性は、管理及び治療の成功に対して難題を突きつけ、故に、予防を改善し、現在の症例を管理して、食物アレルギーにおける新しい治療法を開始するための精密医療戦略が、非常に妥当である。食物アレルギーのエンドタイプ、進行するアレルギーのリスク、反応の深刻さ、及び治療による予後を測定するための、感受性及び特異的バイオマーカーは、精密医療を目指すにおいて必須要素である（非特許文献１）。過去１０年間で、持続性の食物アレルギーを治療するための、経口免疫療法（ＯＩＴ）の有効性を評価する多数の研究が存在する（非特許文献２）。ピーナッツアレルギーでは、ＯＩＴは、許容される安全性プロファイルを有することが示されており、臨床効果を示している（非特許文献３）。臨床反応性は改善されているにもかかわらず、ＯＩＴは重大な悪影響と関連しており、中には、アナフィラキシーを経験する者もおり、１５％～２０％が、拒絶反応が原因で治療法を中断させられた（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｐｒａｃｔ．，２０１７、非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７、非特許文献８）。拒絶反応に加えて、ＯＩＴに対する応答は、治療法が中断すると通常は維持されない、即ち、患者は一時的に、アレルゲンに対して脱感作されるが、耐性を手に入れはしない（非特許文献２、非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２、及び非特許文献１３）。しかし、進歩がなされており、新しい食物アレルギー治療法がＦＤＡ認可を受けようとしていることは明らかである。これらの治療的アプローチは、診断及び予後検査の恩恵を受け、これは、患者及びその医者が、治療に入る際の疾患の深刻度を理解し、拒絶反応が生じる前に、拒絶反応の進行または開始を評価する治療法において患者を監視し、治療が中断したときに患者の状態を追跡するのに役立つであろう。
ピーナッツタンパク質に対するＩｇＥ抗体の産生は、ピーナッツアレルギーの病因に対して要となる。臨床反応性の９５％を予測する予測曲線を生成して、ピーナッツ特異的ＩｇＥ濃度を同定したものの、ピーナッツＩｇＥは低いＩｇＥレベルでは予測が不十分であり、高いレベルでは読出しがただ二元的であるために、これを使用して、治療法の安全性または有効性を評価するのに役立てるのは難しい。これは、臨床的に関係しないピーナッツの構成成分に対するＩｇＥ抗体の測定が原因であり得る。Ａｒａ ｈ ２に対するＩｇＥは、ピーナッツに対する臨床反応性を予測する（非特許文献１４）が、同様のレベルのＡｒａ ｈ ２を有する個体においては、かなり多くの臨床不均質性が存在する。主要なアレルゲンの、連続したエピトープレパートリー全体を覆う、重なり合ったペプチドで構成されるペプチドマイクロアレイを開発して、エピトープ特異的免疫グロブリン応答が測定されてきた（非特許文献１５、及び非特許文献１６）。ＩｇＥに結合するＡｒａ ｈ １、２、及び３における、ピーナッツエピトープの数は、反応の深刻度を予測する（非特許文献１７）。成分分解診断方法論（ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ）として、ピーナッツ、Ａｒａ ｈ１、Ａｒａ ｈ２、及びＡｒａ ｈ３に対して、ｓＩｇＥが存在することは、「本当の」ピーナッツアレルギーを示し、高リスクの深刻な反応が存在することを示す（例えば、ｓＩｇＥ≧０．３５ｋＵＡ／Ｌのレベルは、アレルギーの診断において、７５～９５％ ＰＰＶ、９０％ ＮＰＶを示す；非特許文献１８）。
Ｓｉｃｈｅｒｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１５，１３５，３５７－６７ Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１６，１３７，１１０３－１１１０ Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｐｒａｃｔ．，２０１７，５，３３５－３４４ Ｋｅｅｔ Ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１２，１２９，４４８－４５５ Ｌｏｎｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００８，１２１，３４３－７ Ｍｅｇｌｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００８，１９，４１２－４１９ Ｓｋｒｉｐａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００８，１２２，１１５４－６０ Ｓｔａｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｌｌｅｒｇｙ，２００７，６２，１２６１－１２６９ Ｂｕｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２０１２，３６７，２３３－２４３ Ｂｕｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００８，１２１，１３４４－１３５０ Ｂｕｒｋｓ，Ａｒｂ．Ｐａｕｌ Ｅｈｒｌｉｃｈ Ｉｎｓｔ．Ｂｕｎｄｅｓｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｉｍｐｆｓｔｏｆｆｅ Ｂｉｏｍｅｄ Ａｒｚｎｅｉｍ Ｌａｎｇｅｎ Ｈｅｓｓ，２０１３，９７，１２２－１２３ Ｇｏｒｅｌｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１５，１３５，１２８３－１２９２ Ｋｅｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１３，１３２，７３７－７３９ Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｐｒａｃｔ．，２０１３，１，７５－８２ Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００９，１２４，３１５－２２ Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１２，１２９，１３２１－１３２８ Ｆｌｉｎｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００８，１２１，７３７－７４３ Ｋｌｅｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１３，１３１，１５７－１６３
本開示は、対象において、ピーナッツアレルギーを診断するための方法であって、固体支持体に結合した２つのピーナッツペプチドを、上記対象から入手した生体試料と、上記生体試料中の１つ以上のアレルギー関連免疫グロブリン（ＡＡＩ）を上記２つのピーナッツペプチドと結合させて、ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成するのに十分な条件下にて接触させることであって、上記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含み、上記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含む、上記接触させることと、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を、ＡＡＩ特異的標識試薬と接触させて、標識試薬－ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成することと、上記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することと、を含み、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、閾値を上回る場合に、上記対象がピーナッツアレルギーであり、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、上記閾値以下である場合に、上記対象がピーナッツアレルギーではない、上記方法を提供する。
本開示は、ピーナッツアレルギーの対象において、ピーナッツに対する臨床耐性の発達を検出するための方法であって、固体支持体に結合した２つのピーナッツペプチドを、上記対象から入手した生体試料と、上記生体試料中の１つ以上のアレルギー関連免疫グロブリン（ＡＡＩ）を上記２つのピーナッツペプチドと結合させて、２つのＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成するのに十分な条件下にて接触させることであって、上記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含み、上記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含む、上記接触させることと、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を、ＡＡＩ特異的標識試薬と接触させて、標識試薬－ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成することと、上記ＡＡＩ－特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することと、上記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を、上記ＡＡＩ特異的標識試薬の、上記対象から以前に入手した生体試料に由来する各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合と比較することと、を含み、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、上記以前に入手した生体試料用の上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合以上である場合に、上記対象がピーナッツに対して臨床耐性を確立しておらず、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、上記以前に入手した生体試料用の上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合未満である場合に、上記対象がピーナッツに対して臨床耐性を確立している、上記方法もまた提供する。
本開示は、乳児を、２つのピーナッツアレルゲンに対して脱感作し、ピーナッツに対して耐性またはノンアレルギーを誘発するための方法であって、２つのピーナッツペプチドを上記乳児に投与することを含み、上記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含み、上記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含む、上記方法もまた提供する。
本開示は、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第１のピーナッツペプチド、及び、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第２のピーナッツペプチドからなる組成物もまた提供する。
本開示は、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第１のピーナッツペプチド、及び、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第２のピーナッツペプチドに結合した固体支持体；ならびに、アレルギー関連免疫グロブリン（ＡＡＩ）特異的標識試薬を含むキットもまた提供する。
認証コホートでの検査結果、加えて、比較のために示す他の診断検査のパフォーマンスを示す。
本明細書に使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のみであり、制限するように意図するものではない。
いくつかの例示的実施形態を説明する前に、実施形態は、以下の説明で記載される構成またはプロセスステップの詳細に限定されないことと理解されるべきである。本明細書に記載する実施形態は変更可能であり、様々な方法で実践または実施可能である。
本開示を通して、「いくつかの実施形態」、またはその派生表現への言及は、実施形態に関連して記載される特定の特徴、構造、材料、または特色が、少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。したがって、本開示を通した様々な場所における、「いくつかの実施形態では」などの語句の出現は、必ずしも、同一実施形態を参照するものではなく、一般的に、任意の他の実施形態に帰属することができる。さらに、特定の特徴、構造、材料、または特色は、１つ以上の実施形態における任意の好適な方法で組み合わせることができる。
本明細書で使用する場合、用語「アレルギー関連免疫グロブリン」及び「ＡＡＩ」とは、ピーナッツアレルゲンに対する過敏症を媒介する、血清中の免疫グロブリンを意味する。これらとしては、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＧ（ＩｇＧ４を含む）のうちの１つ以上が挙げられる。
本明細書で使用する場合、用語「反応性の」、「反応性」、「認識する」などは、アレルギー関連免疫グロブリンが、アレルゲンエピトープ含有ペプチドに結合する能力を意味する。反応性のレベルは、より高いＡＡＩ濃度と関連する高い反応性及びより低いＡＡＩ濃度と関連するより低い反応性を有する、血清または血漿中のＡＡＩの濃度を示す。相対的なＡＡＩ濃度（即ち、相対的な血清または血漿反応性）は、アッセイで検出されるシグナルの量により測定される。アレルゲンエピトープ含有ペプチドに対するＡＡＩの反応性のレベルは、アレルギー反応の強度もまた示す（即ち、高い反応性は、より強いアレルギー反応と関連する）。
本明細書で使用する場合、用語「臨床耐性」とは、アレルゲンへの曝露の結果として、アレルギー対象により発達される、ピーナッツアレルゲンに対する免疫耐性（即ち、免疫療法の結果として発達した耐性）を意味する。
本明細書で使用する場合、用語「自然耐性」とは、生きている間での、または、曝露無しでの、アレルゲンに対する自然曝露の結果のいずれかとして、経時的に生化学的プロセスとして、アレルギー対象により発達される、ピーナッツアレルゲンに対する免疫耐性を意味する。
本開示は、ピーナッツペプチド組成物を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、２つのピーナッツペプチドからなる。いくつかの実施形態では、両方のピーナッツペプチドが、ａｒａ ｈ ２ピーナッツアレルゲンに由来する。
いくつかの実施形態では、組成物中の第１のピーナッツペプチドは、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（ａｒａ ｈ２ ２．００８；配列番号１）を含む。いくつかの実施形態では、組成物中の第１のピーナッツペプチドは、配列番号１に従うが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組成物中の第１のピーナッツペプチドは、配列番号１に従うが、当該配列番号１の中に１個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組成物中の第１のピーナッツペプチドは、配列番号１に従うが、当該配列番号１の中に２個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組成物中の第１のピーナッツペプチドは、配列番号１に従うが、当該配列番号１の中に３個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組成物中の第１のピーナッツペプチドは、配列番号１に従うが、当該配列番号１の中に４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、組成物中の第２のピーナッツペプチドは、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（ａｒａ ｈ２ ２．０１９；配列番号２）を含む。いくつかの実施形態では、組成物中の第１のピーナッツペプチドは、配列番号２に従うが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組成物中の第１のピーナッツペプチドは、配列番号２に従うが、当該配列番号２の中に１個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組成物中の第１のピーナッツペプチドは、配列番号２に従うが、当該配列番号２の中に２個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組成物中の第１のピーナッツペプチドは、配列番号２に従うが、当該配列番号２の中に３個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組成物中の第１のピーナッツペプチドは、配列番号２に従うが、当該配列番号２の中に４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
保存的アミノ酸置換は、アミノ酸構造、及び、その側鎖（Ｒ基）の全般的な化学的特色に基づき、大部分が分類される。例えば、脂肪族アミノ酸としては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンが挙げられ、これらのアミノ酸はそれぞれ、互いに置換可能である。ヒドロキシルまたは硫黄／セレン含有アミノ酸としては、セリン、システイン、セレノシステイン、トレオニン、及びメチオニンが挙げられ、これらのアミノ酸はそれぞれ、互いに置換可能である。芳香族アミノ酸としては、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンが挙げられ、これらのアミノ酸はそれぞれ、互いに置換可能である。塩基性アミノ酸としてはヒスチジン、リジン、及びアルギニンが挙げられ、これらのアミノ酸はそれぞれ、互いに置換可能である。酸性またはアミド含有アミノ酸としては、アスパルテート、グルタメート、アスパラギン、及びグルタミンが挙げられ、これらのアミノ酸はそれぞれ、互いに置換可能である。
いくつかの実施形態では、各ピーナッツペプチドは固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、固体支持体はミクロスフェアビーズ、ガラスアレイ、シリコーンアレイ、メンブレン、またはマイクロタイタープレートである。いくつかの実施形態では、固体支持体はガラスアレイである。いくつかの実施形態では、固体支持体はシリコーンアレイである。いくつかの実施形態では、固体支持体はメンブレンである。いくつかの実施形態では、固体支持体はマイクロタイタープレートである。いくつかの実施形態では、固体支持体はミクロスフェアビーズである。いくつかの実施形態では、ミクロスフェアビーズはアビジン結合ミクロスフェアビーズである。いくつかの実施形態では、ビーズは、Ｍａｇ（商標）Ａｖｉｄｉｎビーズ、またはＬｕｍＡｖｉｄｉｎ（商標）ビーズなどのＬｕｍｉｎｅｘビーズである。いくつかの実施形態では、固体支持体のそれぞれは、単一のピーナッツペプチドに結合する。
いくつかの実施形態では、ピーナッツペプチドのそれぞれは、リンカー－スペーサーにより固体支持体に結合する。いくつかの実施形態では、リンカー－スペーサーは、ビオチン、チオール、ヒドラジン、及びアミンから選択されるリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーはビオチンである。いくつかの実施形態では、リンカーはチオールである。いくつかの実施形態では、リンカーはヒドラジンである。いくつかの実施形態では、リンカーはアミンである。いくつかの実施形態では、リンカー－スペーサーは、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、アルキル基、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基から選択されるスペーサーを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、スペーサーはオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、スペーサーはアルキル基である。いくつかの実施形態では、アルキル基は、Ｃ１－Ｃ１８アルキル基、または、Ｃ３－Ｃ１２アルキル基である。いくつかの実施形態では、スペーサーはＰＥＧ基である。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ基はＰＥＧ１～ＰＥＧ１８である。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ基はＰＥＧ１２である。いくつかの実施形態では、スペーサーはアルキル基、またはＰＥＧ基である。いくつかの実施形態では、ピーナッツペプチドのそれぞれのＣ末端は、リンカー－スペーサーにより固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、ピーナッツペプチドのそれぞれのＮ末端は、リンカー－スペーサーにより固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、ピーナッツペプチドのそれぞれのＣ末端は、ビオチン－ＰＥＧ１２リンカー－スペーサーにより固体支持体に結合している。
いくつかの実施形態では、ピーナッツペプチドは固体支持体に結合可能であり、各構成要素が、一対のクリックケミストリーリンカーの半分を有する。例えば、ピーナッツペプチド及び固体支持体の一方は１つのクリックケミストリーリンカーを有することができる一方で、ピーナッツペプチド及び固体支持体の他方は、対応するクリックケミストリーリンカーを有することができる。クリックケミストリーリンカーペアの例としては、アジド－ＤＢＣＯ、アミン－ＮＨＳエステル、及びチオール－マラミドが挙げられるが、これらに限定されない。
本開示は、対象においてピーナッツアレルギーを診断するための方法もまた提供する。方法は、固体支持体に結合した２つのピーナッツペプチドを、対象から入手した生体試料と接触させることを含む。接触させることは、生体試料中の１つ以上のアレルギー関連免疫グロブリン（ＡＡＩ）を２つのピーナッツペプチドと結合させて、ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成するのに十分な条件下にて生じる。方法は、ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を、ＡＡＩ特異的標識試薬と接触させて、標識試薬－ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成することもまた含む。方法は、ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することもまた含む。ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、閾値を上回る場合に、対象はピーナッツアレルギーである。ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、閾値以下である場合に、対象はピーナッツアレルギーではない。本明細書に記載するステップは、生体試料中で、２つのピーナッツペプチドに特異的なＡＡＩの存在を検出するためのアッセイを含む。
本明細書に記載する固体支持体のいずれかに結合した２つのピーナッツペプチドのいずれかを使用することができる。例えば、いくつかの実施形態では、２つのピーナッツペプチドのうちの一方は、配列番号１に従ったアミノ酸配列、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、２つのピーナッツペプチドのうちの他方は、配列番号２に従ったアミノ酸配列、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、２つのピーナッツペプチドのうちの一方は、配列番号１に従ったアミノ酸配列を含み、２つのピーナッツペプチドのうちの他方は、配列番号２に従ったアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、これらのピーナッツペプチドはミクロスフェアビーズに結合している。ピーナッツペプチドのそれぞれは、本明細書に記載するリンカー－スペーサーのいずれかにより、固体支持体に結合することができる。ピーナッツペプチドのそれぞれは、本明細書に記載するそのＣ末端またはＮ末端により、固体支持体に結合することができる。
生体試料は、対象から入手される任意の生体試料であることができる。いくつかの実施形態では、生体試料は血清、血漿、唾液、または口腔スワブから選択される。いくつかの実施形態では、生体試料は血清または血漿である。いくつかの実施形態では、生体試料は血清である。いくつかの実施形態では、生体試料は血漿である。いくつかの実施形態では、生体試料は唾液である。いくつかの実施形態では、生体試料は口腔スワブである。
対象由来の生体試料に存在し得るＡＡＩとしては、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、及び／またはＩｇＥのいずれか１つ以上を挙げることができる。いくつかの実施形態では、生体試料中のＡＡＩは、ＩｇＭ、ＩｇＡ、及び／またはＩｇＤである。いくつかの実施形態では、生体試料中のＡＡＩは、ＩｇＧ及び／またはＩｇＥである。いくつかの実施形態では、生体試料中のＡＡＩは、ＩｇＥである。
いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬は、検出可能に標識された抗ヒト抗体である。いくつかの実施形態では、検出可能に標識された抗ヒト抗体は、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＡ抗体である。いくつかの実施形態では、検出可能に標識された抗ヒト抗体は、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＤ抗体である。いくつかの実施形態では、検出可能に標識された抗ヒト抗体は、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＭ抗体である。いくつかの実施形態では、検出可能に標識された抗ヒト抗体は、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、検出可能に標識された抗ヒト抗体は、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＥ抗体である。
いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、フィコエリトリン（ＰＥ）、シアニン染料、蛍光染料、赤外線染料、色原体染料、酵素標識、及び放射能標識から選択される。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、ＰＥである。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、シアニン染料である。いくつかの実施形態では、シアニン染料は、Ｃｙ３またはＣｙ５である。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、蛍光染料である。いくつかの実施形態では、蛍光染料はテキサスレッドまたはアレクサフルオロである。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、赤外線（ＩＲ）染料である。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、色原体染料である。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、酵素標識である。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、放射能標識である。いくつかの実施形態では、酵素標識は、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）またはアルカリホスファターゼである。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、ＨＲＰである。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、アルカリホスファターゼである。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬は、ＰＥ標識された抗ヒトＩｇＥ抗体である。いくつかの実施形態では、単一の検出可能な標識は一般に、あらゆる複合体の普遍的な検出に使用することができる。
いくつかの実施形態では、抗ヒトＡＡＩ抗体を、直接検出可能ではないレポーター部分にコンジュゲートすることができる。それ故に、第２の直接検出可能なレポーター部分の、標識試薬への特異的結合が、結合を分析するために必要である。例えば、ビオチンコンジュゲート化抗ＡＡＩを検出するために、ビオチンコンジュゲート化抗ＡＡＩ抗体を、ストレプトアビジンコンジュゲート化蛍光染料と組み合わせて使用することができる。間接的に検出可能なレポーター部分の例としては、ビオチン、ジゴキシゲニン、及び、直接検出のために標識された、二次抗体（例えば、抗ジゴキシゲニン）または他の結合パートナー（例えば、ストレプトアビジン）の、その後の結合の際に検出可能な、他のハプテンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することは、ポイントオブケアデバイスにより実施される。いくつかの実施形態では、ポイントオブケアデバイスは、多重ペプチド－ビーズフローサイトメトリー分析デバイス、または、ラテラルフローアッセイデバイスである。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、銀染色、量子ドット、または屈折法により観察することができる。
前述の実施形態のいずれかは、マイクロアレイイムノアッセイの形態であることができ、２つのピーナッツペプチドのそれぞれは、マイクロタイタープレートの個別のウェルに結合し、生体試料と反応してＡＡＩに結合する。ピーナッツペプチドは、ラテラルフローイムノアッセイフォーマットでも使用可能であり、各ペプチドは、多孔質またはクロマトグラフ支持体上の個々の領域で固定され、血清または血漿は、支持体を通して吸い上げられて、ＡＡＩをペプチドに結合させるためのペプチドと接触する。本アッセイでは、ＡＡＩ特異的標識試薬は、抗ＡＡＩ抗体にコンジュゲート化した発色団または染料を含むことができる。標識試薬もまた、支持体を通して吸い上げられて、標識試薬を複合体に結合するためのペプチド－ＡＡＩ複合体と接触し、このことは、支持体の各個別の位置において固定されたピーナッツペプチドに対する抗体が、血清または血漿に存在するか、または存在しないかを示す。
前述の実施形態のいずれかは、各ピーナッツペプチドが、ビーズなどのフローサイトメトリーにより、分析に適した、個別に特定可能な固体支持体に結合する、フローサイトメトリーアッセイの形態で存在することもまた可能である。いくつかの実施形態では、結合ペプチドを含むビーズは、対象の生体試料と接触し、ペプチドを介してビーズに結合した、任意のペプチド特異的ＡＡＩと結合することによって、ビーズ上にペプチド－ＡＡＩ複合体を形成する。次に、例えば蛍光性レポーター部分を含むＡＡＩ特異的標識試薬を、ペプチド－ＡＡＩ複合体に結合させ、ビーズをフローサイトメトリーにより、定量的または定性的に分析する。これは、ピーナッツペプチドが結合する各ビーズと関連する、結合した標識試薬からの蛍光を検出する。
いくつかの実施形態では、フローサイトメトリーアッセイは、Ｌｕｍｉｎｅｘにより提供されるものなどの多重アッセイであることができ、これは、ペプチド及びタンパク質の定量化及び検出のために、ミクロスフェアアレイプラットフォームを使用する。ピーナッツペプチドのそれぞれは、同一または異なる分光特性を有する一連のビーズに結合し、これを使用して、フローサイトメトリーにより、ＡＡＩに結合した関連するピーナッツペプチドを定量することができる。次に、一連のビーズを、対象の生体試料と接触させて、ペプチド認識ＡＡＩを各ビーズと結合させて、ビーズ上にペプチド－ＡＡＩ複合体、及び、例えば、複合体のＡＡＩに結合した蛍光性レポーター部分を含むＡＡＩ特異的標識試薬を形成する。各ビーズの分光特性、及び、結合した標識試薬からの、関連する蛍光の量を監視することにより、ビーズを分析する。本プロセスにより、ビーズ上でのペプチドの定量、及び、当該ペプチドに対して反応性であるＡＡＩの有無の定量が可能となる。アッセイの結果を、本明細書で論じるように解釈する。
本明細書に記載の方法のいずれかで使用するのに特に有用な定量アッセイは、ＥＬＩＳＡのハイスループット代替物である、ＬＵＭＩＮＥＸ ｅｘＭＡＰ多重ビーズアッセイなどの、フローサイトメトリー分析のための多重ペプチド－ビーズアッセイである。本アッセイでは、異なる比率の赤色、及び近赤外線フルオロフォアで染色したポリスチレンビーズ（ミクロスフェア）を、固体支持体として使用する。ペプチドは、ビーズ上でコーティングされたペプチド特異的捕捉抗体を通して、化学的に、ビーズに連結、またはビーズに結合することができる。フルオロフォアの比率は、デジタル信号処理を使用するフローサイトメーターにより識別可能な、各ビーズ集団に対する「スペクトルアドレス」を画定する。ビーズに結合した標識試薬のレポーター部分の蛍光強度を測定するために、第３の蛍光色の検出を使用する。各ペプチドを、特定の「スペクトルアドレス」を有するビーズに結合させることにより、複数の検体を同時に検出することができる。ビーズに結合したペプチドに対して特異的なＡＡＩを含有する生体試料を、ビーズと接触させた後で、レポーター部分にコンジュゲート化した抗ヒトＡＡＩ抗体を添加する。いくつかの実施形態では、抗ヒトＡＡＩのレポーター部分はビオチンであり、フィコエリスリン（ＰＥ）コンジュゲート化ストレプトアビジンへの結合により、検出のための蛍光シグナルがもたらされる。標識試薬の結合の後、ビーズを、ＬＵＭＩＮＥＸ ２００またはＢｉｏ－Ｒａｄ ＢＩＯ－ＰＬＥＸ分析器などの、デュアルレーザーフローベース検出機器で分析する。第１のレーザーは、ビーズを分類して、ビーズに結合したペプチドを識別する。第２のレーザーは、レポーターに由来するシグナルの規模を測定し、これは、結合した血清または血漿ＡＡＩの量に正比例する。
いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することは、各ＡＡＩ特異的標識試薬の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定することを含む。ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせたＭＦＩ結合が、閾値を上回る場合に、対象はピーナッツアレルギーである。ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせたＭＦＩが、閾値以下である場合に、対象はピーナッツアレルギーではない。いくつかの実施形態では、ｈ２．００８＋（ｈ２．０１９）／２０が≦０．２０である場合、対象はピーナッツアレルギーではない。いくつかの実施形態では、ｈ２．００８＋（ｈ２．０１９）／２０が＞０．２０である場合、対象はピーナッツアレルギーである。これらの等式において、ｈ２．００８は、標識試薬ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体の較正純ＭＦＩであり、ピーナッツペプチドは配列番号１を含み、ｈ２．０１９は、標識試薬ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体の較正純ＭＦＩであり、ピーナッツペプチドは配列番号２を含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬は、本明細書に記載する、検出可能に標識された抗ヒト抗体のいずれかである。いくつかの実施形態では、各ＡＡＩ特異的標識試薬のＭＦＩは、バックグラウンド減算される。
いくつかの実施形態では、方法は、プリックテスト（ＳＰＴ）及び／または全ピーナッツ特異的ＩｇＥ（ｓＩｇＥ）検査を行うこと、または、行っていることをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＳＰＴを行うこと、または、行っていることをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、ｓＩｇＥ検査を行うこと、または、行っていることをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＳＰＴ≦３ｍｍであり、及び／または、ｓＩｇＥ≦０．１０ｋＵ／Ｌであるとき、対象はピーナッツアレルギーではなく、ＳＰＴ≧１８ｍｍであり、及び／または、ｓＩｇＥ≧１８ｋＵ／Ｌであるとき、対象はピーナッツアレルギーである。
本開示は、ピーナッツアレルギーの対象において、ピーナッツに対する臨床耐性の発達を検出するための方法もまた提供する。方法は、固体支持体に結合した２つのピーナッツペプチドを、対象から入手した生体試料と、生体試料中の１つ以上のアレルギー関連免疫グロブリン（ＡＡＩ）を２つのピーナッツペプチドと結合させて、２つのＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成するのに十分な条件下にて接触させることを含む。次に、ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体をＡＡＩ特異的標識試薬と接触させて、標識試薬－ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成する。方法は、ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することを含む。方法は、ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を、ＡＡＩ特異的標識試薬の、対象から以前に入手した生体試料に由来する各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合と比較することもまた含む。ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、以前に入手した生体試料用の上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合以上である場合、対象はピーナッツに対して臨床耐性を確立していない。ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、以前に入手した生体試料用のＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合未満である場合、対象はピーナッツに対して臨床耐性を確立している。
本明細書に記載する固体支持体のいずれかに結合した２つのピーナッツペプチドのいずれかを使用することができる。例えば、いくつかの実施形態では、２つのピーナッツペプチドのうちの一方は、配列番号１に従ったアミノ酸配列、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、２つのピーナッツペプチドのうちの他方は、配列番号２に従ったアミノ酸配列、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、２つのピーナッツペプチドのうちの一方は、配列番号１に従ったアミノ酸配列を含み、２つのピーナッツペプチドのうちの他方は、配列番号２に従ったアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、これらのピーナッツペプチドはミクロスフェアビーズに結合している。ピーナッツペプチドのそれぞれは、本明細書に記載するリンカー－スペーサーのいずれかにより、固体支持体に結合することができる。ピーナッツペプチドのそれぞれは、本明細書に記載するそのＣ末端またはＮ末端により、固体支持体に結合することができる。
生体試料は、対象から入手される任意の生体試料であることができる。いくつかの実施形態では、生体試料は血清、血漿、唾液、または口腔スワブから選択される。いくつかの実施形態では、生体試料は血清または血漿である。いくつかの実施形態では、生体試料は血清である。いくつかの実施形態では、生体試料は血漿である。いくつかの実施形態では、生体試料は唾液である。いくつかの実施形態では、生体試料は口腔スワブである。
対象由来の生体試料に存在し得るＡＡＩとしては、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、及び／またはＩｇＥのいずれか１つ以上を挙げることができる。いくつかの実施形態では、生体試料中のＡＡＩは、ＩｇＭ、ＩｇＡ、及び／またはＩｇＤである。いくつかの実施形態では、生体試料中のＡＡＩは、ＩｇＧ及び／またはＩｇＥである。いくつかの実施形態では、生体試料中のＡＡＩは、ＩｇＥである。
いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬は、検出可能に標識された抗ヒト抗体である。いくつかの実施形態では、検出可能に標識された抗ヒト抗体は、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＡ抗体である。いくつかの実施形態では、検出可能に標識された抗ヒト抗体は、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＤ抗体である。いくつかの実施形態では、検出可能に標識された抗ヒト抗体は、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＭ抗体である。いくつかの実施形態では、検出可能に標識された抗ヒト抗体は、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、検出可能に標識された抗ヒト抗体は、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＥ抗体である。
いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、フィコエリトリン（ＰＥ）、シアニン染料、蛍光染料、赤外線染料、色原体染料、酵素標識、及び放射能標識から選択される。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、ＰＥである。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、シアニン染料である。いくつかの実施形態では、シアニン染料は、Ｃｙ３またはＣｙ５である。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、蛍光染料である。いくつかの実施形態では、蛍光色素は、テキサスレッドまたはアレクサフルオロである。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、ＩＲ染料である。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、色原体染料である。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、酵素標識である。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、放射能標識である。いくつかの実施形態では、酵素標識は、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）またはアルカリホスファターゼである。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、ＨＲＰである。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の検出可能な標識は、アルカリホスファターゼである。いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬は、ＰＥ標識された抗ヒトＩｇＥ抗体である。いくつかの実施形態では、単一の検出可能な標識は一般に、あらゆる複合体の普遍的な検出に使用することができる。
いくつかの実施形態では、抗ヒトＡＡＩ抗体を、直接検出可能ではないレポーター部分にコンジュゲートすることができる。それ故に、第２の直接検出可能なレポーター部分の、標識試薬への特異的結合が、結合を分析するために必要である。例えば、ビオチンコンジュゲート化抗ＡＡＩを検出するために、ビオチンコンジュゲート化抗ＡＡＩ抗体を、ストレプトアビジンコンジュゲート化蛍光染料と組み合わせて使用することができる。間接的に検出可能なレポーター部分の例としては、ビオチン、ジゴキシゲニン、及び、直接検出のために標識された、二次抗体（例えば、抗ジゴキシゲニン）または他の結合パートナー（例えば、ストレプトアビジン）の、その後の結合の際に検出可能な、他のハプテンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することは、ポイントオブケアデバイスにより実施される。いくつかの実施形態では、ポイントオブケアデバイスは、多重ペプチド－ビーズフローサイトメトリー分析デバイス、または、ラテラルフローアッセイデバイスである。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、銀染色、量子ドット、または屈折法により観察することができる。
前述の実施形態のいずれかは、マイクロアレイイムノアッセイの形態であることができ、２つのピーナッツペプチドのそれぞれは、マイクロタイタープレートの個別のウェルに結合し、生体試料と反応してＡＡＩに結合する。ピーナッツペプチドは、ラテラルフローイムノアッセイフォーマットでも使用可能であり、各ペプチドは、多孔質またはクロマトグラフ支持体上の個々の領域で固定され、血清または血漿は、支持体を通して吸い上げられて、ＡＡＩをペプチドに結合させるためのペプチドと接触する。本アッセイでは、ＡＡＩ特異的標識試薬は、抗ＡＡＩ抗体にコンジュゲート化した発色団または染料を含むことができる。標識試薬もまた、支持体を通して吸い上げられて、標識試薬を複合体に結合するためのペプチド－ＡＡＩ複合体と接触し、このことは、支持体の各個別の位置において固定されたピーナッツペプチドに対する抗体が、血清または血漿に存在するか、または存在しないかを示す。
前述の実施形態のいずれかは、各ピーナッツペプチドが、ビーズなどのフローサイトメトリーにより、分析に適した、個別に特定可能な固体支持体に結合する、フローサイトメトリーアッセイの形態で存在することもまた可能である。いくつかの実施形態では、結合ペプチドを含むビーズは、対象の生体試料と接触し、ペプチドを介してビーズに結合した、任意のペプチド特異的ＡＡＩと結合することによって、ビーズ上にペプチド－ＡＡＩ複合体を形成する。次に、例えば蛍光性レポーター部分を含むＡＡＩ特異的標識試薬を、ペプチド－ＡＡＩ複合体に結合させ、ビーズをフローサイトメトリーにより、定量的または定性的に分析する。これは、ピーナッツペプチドが結合する各ビーズと関連する、結合した標識試薬からの蛍光を検出する。
いくつかの実施形態では、フローサイトメトリーアッセイは、Ｌｕｍｉｎｅｘにより提供されるものなどの多重アッセイであることができ、これは、ペプチド及びタンパク質の定量化及び検出のために、ミクロスフェアアレイプラットフォームを使用する。ピーナッツペプチドのそれぞれは、同一または異なる分光特性を有する一連のビーズに結合し、これを使用して、フローサイトメトリーにより、ＡＡＩに結合した関連するピーナッツペプチドを定量することができる。次に、一連のビーズを、対象の生体試料と接触させて、ペプチド認識ＡＡＩを各ビーズと結合させて、ビーズ上にペプチド－ＡＡＩ複合体、及び、例えば、複合体のＡＡＩに結合した蛍光性レポーター部分を含むＡＡＩ特異的標識試薬を形成する。各ビーズの分光特性、及び、結合した標識試薬からの、関連する蛍光の量を監視することにより、ビーズを分析する。本プロセスにより、ビーズ上でのペプチドの定量、及び、当該ペプチドに対して反応性であるＡＡＩの有無の定量が可能となる。アッセイの結果を、本明細書で論じるように解釈する。
本明細書に記載の方法のいずれかで使用するのに特に有用な定量アッセイは、ＥＬＩＳＡのハイスループット代替物である、ＬＵＭＩＮＥＸ ｅｘＭＡＰ多重ビーズアッセイなどの、フローサイトメトリー分析のための多重ペプチド－ビーズアッセイである。本アッセイでは、異なる比率の赤色、及び近赤外線フルオロフォアで染色したポリスチレンビーズ（ミクロスフェア）を、固体支持体として使用する。ペプチドは、ビーズ上でコーティングされたペプチド特異的捕捉抗体を通して、化学的に、ビーズに連結、またはビーズに結合することができる。フルオロフォアの比率は、デジタル信号処理を使用するフローサイトメーターにより識別可能な、各ビーズ集団に対する「スペクトルアドレス」を画定する。ビーズに結合した標識試薬のレポーター部分の蛍光強度を測定するために、第３の蛍光色の検出を使用する。各ペプチドを、特定の「スペクトルアドレス」を有するビーズに結合させることにより、複数の検体を同時に検出することができる。ビーズに結合したペプチドに対して特異的なＡＡＩを含有する生体試料を、ビーズと接触させた後で、レポーター部分にコンジュゲート化した抗ヒトＡＡＩ抗体を添加する。いくつかの実施形態では、抗ヒトＡＡＩのレポーター部分はビオチンであり、フィコエリスリン（ＰＥ）コンジュゲート化ストレプトアビジンへの結合により、検出のための蛍光シグナルがもたらされる。標識試薬の結合の後、ビーズを、ＬＵＭＩＮＥＸ ２００またはＢｉｏ－Ｒａｄ ＢＩＯ－ＰＬＥＸ分析器などの、デュアルレーザーフローベース検出機器で分析する。第１のレーザーは、ビーズを分類して、ビーズに結合したペプチドを識別する。第２のレーザーは、レポーターに由来するシグナルの規模を測定し、これは、結合した血清または血漿ＡＡＩの量に正比例する。
いくつかの実施形態では、ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することは、本明細書に記載する各ＡＡＩ特異的標識試薬のＭＦＩを測定することを含む。方法は、ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を、ＡＡＩ特異的標識試薬の、対象から以前に入手した生体試料に由来する各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合と比較することもまた含む。ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、以前に入手した生体試料用の上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合以上である場合、対象はピーナッツに対して臨床耐性を確立していない。ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、以前に入手した生体試料用のＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合未満である場合、対象はピーナッツに対して臨床耐性を確立している。いくつかの実施形態では、各ＡＡＩ特異的標識試薬のＭＦＩは、バックグラウンド減算される。
臨床耐性を発達させるために検査を受ける対象の年齢は、約２歳～１７歳であることができる。いくつかの実施形態では、対象は約１歳未満、約２歳未満、約３歳未満、約４歳未満、約５歳未満、または、約６歳未満である。
いくつかの実施形態では、臨床耐性の発達の初期検出を使用して、対象が、アレルギーに対して自然耐性を発達させるか、または、治療法に対して応答性であるかのいずれであるかを予測することができる。いくつかの実施形態では、アレルギーの対象を、初期プロファイルを分析する前に免疫原（免疫療法）に曝露する。後の時点において、初期プロファイルにおける、本明細書に記載する２つのピーナッツペプチドに対する、ＡＡＩ全ての血清濃度が、少なくとも２倍減少している場合、対象が、ピーナッツに対して臨床または自然耐性のいずれかを発達させている可能性が高い。
本開示は、乳児を、２つのピーナッツアレルゲンに対して脱感作し、ピーナッツに対して耐性またはノンアレルギーを誘発するための方法もまた提供する。いくつかの実施形態では、方法は、乳児に２つのピーナッツペプチドを投与することを含む。２つのピーナッツペプチドのうちの一方は、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。２つのピーナッツペプチドのうちの他方は、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。本明細書に記載するピーナッツペプチドのいずれかを使用することができる。いくつかの実施形態では、２つのピーナッツペプチドのうちの一方は、配列番号１に従ったアミノ酸配列を含み、２つのピーナッツペプチドのうちの他方は、配列番号２に従ったアミノ酸配列を含む。これらのペプチドは、個別に、組み合わせて、または、他の治療アプローチと組み合わせて、のいずれかで、ピーナッツアレルギーを脱感作するための特定の実用性を有することができる。
ピーナッツペプチドを経口、舌下、皮内、皮下、吸引、または皮膚上経路を介して投与し、脱感作を誘発することができる。脱感作を受ける対象の年齢は、約１歳未満、約２歳未満、約３歳未満、約４歳未満、約５歳未満、または、約６歳未満であることができる。全ペプチドまたは個々のペプチドの量は、用量当たり約１グラム以下であることができる。
本開示は、本明細書に記載の方法のいずれかを実施するためのキットもまた提供する。いくつかの実施形態では、キットは、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第１のピーナッツペプチド、及び、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第２のピーナッツペプチドに結合した固体支持体を含む。キットは、アレルギー関連免疫グロブリン（ＡＡＩ）特異的標識試薬もまた含む。
本明細書に記載するキットは、追加の成分もまた含んでよい。いくつかの実施形態では、キットは、使用に関する指示をさらに含む。いくつかの実施形態では、キットは、結合緩衝液、洗浄緩衝液、検出緩衝液、非アレルギー対照試料、陰性緩衝液対照試料、及び、アレルギー陽性対照試料のうちの１つ以上をさらに含む。いくつかの実施形態では、ピーナッツタンパク質の非反応性エピトープを含有するペプチドを、陰性対照として使用することができる。
固体支持体に結合したペプチドは、本明細書に記載するピーナッツペプチドのいずれかであることができ、本明細書に記載する手段のいずれかにより、固体支持体に結合することができる。固体支持体は、本明細書に記載する固体支持体のいずれかであることができる。ＡＡＩ特異的標識試薬は、本明細書に記載するＡＡＩ特異的標識試薬のいずれかであることができる。ＡＡＩ特異的標識試薬のいずれかを検出可能な標識は、本明細書に記載する検出可能な標識のいずれかであることができる。
本明細書に記載する主題は、多くの利点を有する。まず、方法は、アレルギー対象及び非アレルギー対象を確実に識別する（例えば、ＰＰＶ＝９５％、及びＮＰＶ＝９２％）。２番目に、方法により、医師が、場合により、不確定な試験結果及び／または不明瞭な病歴を有する、最大６７％の既存の患者を取り除くことができるようになり、偽陽性を最小限に抑えることで、過剰診断を著しく減らし、生活の質の問題（例えば、不安、いじめ、ピーナッツのない環境の必要性）を改善することができるようになり得る。３番目に、方法は、経時的に対象の疾患状態を監視し、経時的にアレルギーの進展を監視し、経時的に疾患状態の定量的測定をもたらすための、より良い方法を提供する。４番目に、方法を使用して、より良い治療ガイダンスを提供することができる。例えば、方法を使用して、食物経口負荷試験（ＯＦＣ）または治療法を行うか行わないかに関する決定を向上させ、ＯＦＣの使用を最適化し、確実に治療法の適切な候補を識別することができる。５番目に、本明細書に記載の方法は、コストを軽減する。例えば、方法は、追加の検査（例えば、ＯＦＣ、ｓＩｇＥ、及び、成分分解診断（ＣＲＤ））の必要性を減らし、誤った診断をした人の標識を外すことで、食物アレルギーに関連するコストを取り除き、標識を外すことで、不必要な免疫療法と関連するコストを取り除くことができ、標識を外した対象は、エピペンの購入及び再補充をする必要がなく、非ピーナッツ食物をさらに購入する必要がなく、例えば、職場で体調が悪い日などに、他のコストを軽減する。
以下に、代表的な実施形態を示す。
実施形態１。対象において、ピーナッツアレルギーを診断するための方法であって、固体支持体に結合した２つのピーナッツペプチドを、上記対象から入手した生体試料と、上記生体試料中の１つ以上のアレルギー関連免疫グロブリン（ＡＡＩ）を上記２つのピーナッツペプチドと結合させて、ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成するのに十分な条件下にて接触させることであって、上記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含み、上記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含む、上記接触させることと、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を、ＡＡＩ特異的標識試薬と接触させて、標識試薬－ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成することと、上記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することと、を含み、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、閾値を上回る場合に、上記対象がピーナッツアレルギーであり、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、上記閾値以下である場合に、上記対象がピーナッツアレルギーではない、上記方法。
実施形態２。上記生体試料が血清、血漿、唾液、または口腔スワブから選択される、実施形態１に記載の方法。
実施形態３。上記生体試料が血清または血漿である、実施形態１に記載の方法。
実施形態４。上記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、配列番号１に従ったアミノ酸配列を含み、上記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、配列番号２に従ったアミノ酸配列を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５。上記ピーナッツペプチドのそれぞれが、リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合する、実施形態１～４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６。上記リンカー－スペーサーが、ビオチン、チオール、ヒドラジン、及びアミンから選択されるリンカー、ならびに、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、アルキル基、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基から選択されるスペーサーを含む、実施形態５に記載の方法。
実施形態７。上記スペーサーがアルキル基またはＰＥＧ基である、実施形態６に記載の方法。
実施形態８。上記アルキル基がＣ１－Ｃ１８アルキル基である、実施形態７に記載の方法。
実施形態９。上記ＰＥＧ基がＰＥＧ１～ＰＥＧ１８である、実施形態７に記載の方法。
実施形態１０。上記ＰＥＧ基がＰＥＧ１２である、実施形態９に記載の方法。
実施形態１１。上記ピーナッツペプチドのそれぞれのＣ末端が、上記リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合している、実施形態５～１０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１２。上記ピーナッツペプチドのそれぞれのＮ末端が、上記リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合している、実施形態５～１０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３。上記ピーナッツペプチドのそれぞれのＣ末端が、ビオチン－ＰＥＧ１２リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合している、実施形態５に記載の方法。
実施形態１４。上記固体支持体がミクロスフェアビーズ、ガラスアレイ、シリコーンアレイ、メンブレン、またはマイクロタイタープレートである、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５。上記固体支持体がミクロスフェアビーズである、実施形態１４に記載の方法。
実施形態１６。上記ミクロスフェアビーズがアビジン結合ミクロスフェアビーズである、実施形態１５に記載の方法。
実施形態１７。上記ＡＡＩがＩｇＭ、ＩｇＡ、及び／またはＩｇＤである、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８。上記ＡＡＩがＩｇＧ及び／またはＩｇＥである、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９。上記ＡＡＩがＩｇＥである、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２０。上記ＡＡＩ特異的標識試薬が、検出可能に標識された抗ヒト抗体である、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２１。上記検出可能に標識された抗ヒト抗体が、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＥ抗体である、実施形態２０に記載の方法。
実施形態２２。上記ＡＡＩ特異的標識試薬の上記検出可能な標識が、フィコエリトリン（ＰＥ）、シアニン染料、蛍光染料、赤外線染料、色原体染料、酵素標識、及び放射能標識から選択される、実施形態２０または実施形態２１に記載の方法。
実施形態２３。上記検出可能な標識がＰＥである、実施形態２２に記載の方法。
実施形態２４。上記ＡＡＩ特異的標識試薬が、ＰＥ標識された抗ヒトＩｇＥ抗体である、実施形態２０に記載の方法。
実施形態２５。上記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することが、ポイントオブケアデバイスにより実施される、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２６。上記ポイントオブケアデバイスが、多重ペプチド－ビーズフローサイトメトリー分析デバイス、または、ラテラルフローアッセイデバイスである、実施形態２５に記載の方法。
実施形態２７。上記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することが、各ＡＡＩ特異的標識試薬の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定することを含み、ｈ２．００８＋（ｈ２．０１９）／２０が≦０．２０である場合、上記対象はピーナッツアレルギーではなく、ｈ２．００８＋（ｈ２．０１９）／２０が＞０．２０である場合、上記対象はピーナッツアレルギーであり、ｈ２．００８は、上記標識試薬ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体の較正純ＭＦＩであり、上記ピーナッツペプチドが配列番号１を含み、ｈ２．０１９は、上記標識試薬ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体の較正純ＭＦＩであり、上記ピーナッツペプチドが配列番号２を含み、上記ＡＡＩ特異的標識試薬が、検出可能に標識された抗ヒト抗体である、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２８。各ＡＡＩ特異的標識試薬のＭＦＩが、バックグラウンド減算される、実施形態２７に記載の方法。
実施形態２９。プリックテスト（ＳＰＴ）及び／または全ピーナッツ特異的ＩｇＥ（ｓＩｇＥ）検査を行うこと、または、行っていることをさらに含む、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３０。ＳＰＴ≦３ｍｍであり、及び／または、ｓＩｇＥ≦０．１０ｋＵ／Ｌであるとき、上記対象はピーナッツアレルギーではなく、ＳＰＴ≧１８ｍｍであり、及び／または、ｓＩｇＥ≧１８ｋＵ／Ｌであるとき、上記対象はピーナッツアレルギーである、実施形態２９に記載の方法。
実施形態３１。ピーナッツアレルギーの対象において、ピーナッツに対する臨床耐性の発達を検出するための方法であって、固体支持体に結合した２つのピーナッツペプチドを、上記対象から入手した生体試料と、上記生体試料中の１つ以上のアレルギー関連免疫グロブリン（ＡＡＩ）を上記２つのピーナッツペプチドと結合させて、２つのＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成するのに十分な条件下にて接触させることであって、上記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含み、上記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含む、上記接触させることと、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を、ＡＡＩ特異的標識試薬と接触させて、標識試薬－ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成することと、上記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することと、上記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を、上記ＡＡＩ特異的標識試薬の、上記対象から以前に入手した生体試料に由来する各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合と比較することと、を含み、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、上記以前に入手した生体試料用の上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合以上である場合に、上記対象がピーナッツに対して臨床耐性を確立しておらず、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、上記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、上記以前に入手した生体試料用の上記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合未満である場合に、上記対象がピーナッツに対して臨床耐性を確立している、上記方法。
実施形態３２。上記生体試料が血清、血漿、唾液、または口腔スワブから選択される、実施形態３１に記載の方法。
実施形態３３。上記生体試料が血清または血漿である、実施形態３１に記載の方法。
実施形態３４。上記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、配列番号１に従ったアミノ酸配列を含み、上記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、配列番号２に従ったアミノ酸配列を含む、実施形態３１～３３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３５。上記ピーナッツペプチドのそれぞれが、リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合する、実施形態３１～３４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３６。上記リンカー－スペーサーが、ビオチン、チオール、ヒドラジン、及びアミンから選択されるリンカー、ならびに、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、アルキル基、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基から選択されるスペーサーを含む、実施形態３５に記載の方法。
実施形態３７。上記スペーサーがアルキル基またはＰＥＧ基である、実施形態３６に記載の方法。
実施形態３８。上記アルキル基がＣ１－Ｃ１８アルキル基である、実施形態３７に記載の方法。
実施形態３９。上記ＰＥＧ基がＰＥＧ１～ＰＥＧ１８である、実施形態３７に記載の方法。
実施形態４０。上記ＰＥＧ基がＰＥＧ１２である、実施形態３９に記載の方法。
実施形態４１。上記ピーナッツペプチドのそれぞれのＣ末端が、上記リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合している、実施形態３５～４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４２。上記ピーナッツペプチドのそれぞれのＮ末端が、上記リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合している、実施形態３５～４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４３。上記ピーナッツペプチドのそれぞれのＣ末端が、ビオチン－ＰＥＧ１２リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合している、実施形態３５に記載の方法。
実施形態４４。上記固体支持体がミクロスフェアビーズ、ガラスアレイ、シリコーンアレイ、メンブレン、またはマイクロタイタープレートである、実施形態３１～４３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４５。上記固体支持体がミクロスフェアビーズである、実施形態４４に記載の方法。
実施形態４６。上記ミクロスフェアビーズがアビジン結合ミクロスフェアビーズである、実施形態４５に記載の方法。
実施形態４７。上記ＡＡＩがＩｇＭ、ＩｇＡ、及び／またはＩｇＤである、実施形態３１～４６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４８。上記ＡＡＩがＩｇＧ及び／またはＩｇＥである、実施形態３１～４６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４９。上記ＡＡＩがＩｇＥである、実施形態３１～４６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５０。上記ＡＡＩ特異的標識試薬が、検出可能に標識された抗ヒト抗体である、実施形態３１～４９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５１。上記検出可能に標識された抗ヒト抗体が、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＥ抗体である、実施形態５０に記載の方法。
実施形態５２。上記ＡＡＩ特異的標識試薬の上記検出可能な標識が、フィコエリトリン（ＰＥ）、シアニン染料、蛍光染料、赤外線染料、色原体染料、酵素標識、及び放射能標識から選択される、実施形態５０または実施形態５１に記載の方法。
実施形態５３。上記検出可能な標識がＰＥである、実施形態５２に記載の方法。
実施形態５４。上記ＡＡＩ特異的標識試薬が、ＰＥ標識された抗ヒトＩｇＥ抗体である、実施形態５０に記載の方法。
実施形態５５。上記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することが、ポイントオブケアデバイスにより実施される、実施形態３１～５４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５６。上記ポイントオブケアデバイスが、多重ペプチド－ビーズフローサイトメトリー分析デバイス、または、ラテラルフローアッセイデバイスである、実施形態５５に記載の方法。
実施形態５７。上記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することが、各ＡＡＩ特異的標識試薬の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定することを含み、ｈ２．００８＋（ｈ２．０１９）／２０が≦０．２０である場合、上記対象はピーナッツアレルギーではなく、ｈ２．００８＋（ｈ２．０１９）／２０が＞０．２０である場合、上記対象はピーナッツアレルギーであり、ｈ２．００８は、上記標識試薬ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体の較正純ＭＦＩであり、上記ピーナッツペプチドが配列番号１を含み、ｈ２．０１９は、上記標識試薬ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体の較正純ＭＦＩであり、上記ピーナッツペプチドが配列番号２を含み、上記ＡＡＩ特異的標識試薬が、検出可能に標識された抗ヒト抗体である、実施形態３１～５６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５８。各ＡＡＩ特異的標識試薬のＭＦＩが、バックグラウンド減算される、実施形態５７に記載の方法。
実施形態５９。乳児を、２つのピーナッツアレルゲンに対して脱感作し、ピーナッツに対して耐性またはノンアレルギーを誘発するための方法であって、２つのピーナッツペプチドを上記乳児に投与することを含み、上記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含み、上記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含む、上記方法。
実施形態６０。上記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、配列番号１に従ったアミノ酸配列を含み、上記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、配列番号２に従ったアミノ酸配列を含む、実施形態５９に記載の方法。
実施形態６１。アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第１のピーナッツペプチド、及び、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第２のピーナッツペプチドからなる組成物。
実施形態６２。上記第１のピーナッツペプチドが、配列番号１に従ったアミノ酸配列を含み、上記第２のピーナッツペプチドが、配列番号２に従ったアミノ酸配列を含む、実施形態６１に記載の組成物。
実施形態６３。各ピーナッツペプチドが固体支持体に結合している、実施形態６１または実施形態６２に記載の組成物。
実施形態６４。上記ピーナッツペプチドのそれぞれが、リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合する、実施形態６１～６３のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態６５。上記リンカー－スペーサーが、ビオチン、チオール、ヒドラジン、及びアミンから選択されるリンカー、ならびに、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、アルキル基、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基から選択されるスペーサーを含む、実施形態６４に記載の組成物。
実施形態６６。上記スペーサーがアルキル基またはＰＥＧ基である、実施形態６５に記載の組成物。
実施形態６７。上記アルキル基がＣ１－Ｃ１８アルキル基である、実施形態６６に記載の組成物。
実施形態６８。上記ＰＥＧ基がＰＥＧ１～ＰＥＧ１８である、実施形態６６に記載の組成物。
実施形態６９。上記ＰＥＧ基がＰＥＧ１２である、実施形態６８に記載の組成物。
実施形態７０。上記ピーナッツペプチドのそれぞれのＣ末端が、上記リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合している、実施形態６４～６９のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態７１。上記ピーナッツペプチドのそれぞれのＮ末端が、上記リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合している、実施形態６４～６９のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態７２。上記ピーナッツペプチドのそれぞれのＣ末端が、ビオチン－ＰＥＧ１２リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合している、実施形態６４に記載の組成物。
実施形態７３。上記固体支持体がミクロスフェアビーズ、ガラスアレイ、シリコーンアレイ、メンブレン、またはマイクロタイタープレートである、実施形態６０～７２のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態７４。上記固体支持体がミクロスフェアビーズである、実施形態７３に記載の組成物。
実施形態７５。上記ミクロスフェアビーズがアビジン結合ミクロスフェアビーズである、実施形態７４に記載の組成物。
実施形態７６。アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが、当該配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第１のピーナッツペプチド、及び、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが、当該配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第２のピーナッツペプチドに結合した固体支持体；ならびに、アレルギー関連免疫グロブリン（ＡＡＩ）特異的標識試薬を含むキット。
実施形態７７。使用のための指示をさらに含む、実施形態７６に記載のキット。
実施形態７８。結合緩衝液、洗浄緩衝液、検出緩衝液、非アレルギー対照試料、陰性緩衝液対照試料、及び、アレルギー陽性対照試料のうちの１つ以上をさらに含む、実施形態７６または実施形態７７に記載のキット。
実施形態７９。上記ピーナッツペプチドのそれぞれが、リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合する、実施形態７６～７８のいずれか１つに記載のキット。
実施形態８０。上記リンカー－スペーサーが、ビオチン、チオール、ヒドラジン、及びアミンから選択されるリンカー、ならびに、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、アルキル基、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基から選択されるスペーサーを含む、実施形態７９に記載のキット。
実施形態８１。上記スペーサーがアルキル基またはＰＥＧ基である、実施形態８０に記載のキット。
実施形態８２。上記アルキル基がＣ１－Ｃ１８アルキル基である、実施形態８１に記載のキット。
実施形態８３。上記ＰＥＧ基がＰＥＧ１～ＰＥＧ１８である、実施形態８１に記載のキット。
実施形態８４。上記ＰＥＧ基がＰＥＧ１２である、実施形態８３に記載のキット。
実施形態８５。上記ピーナッツペプチドのそれぞれのＣ末端が、上記リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合している、実施形態７９～８４のいずれか１つに記載のキット。
実施形態８６。上記ピーナッツペプチドのそれぞれのＮ末端が、上記リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合している、実施形態７９～８４のいずれか１つに記載のキット。
実施形態８７。上記ピーナッツペプチドのそれぞれのＣ末端が、ビオチン－ＰＥＧ１２リンカー－スペーサーにより上記固体支持体に結合している、実施形態７９に記載のキット。
実施形態８８。上記固体支持体がミクロスフェアビーズ、ガラスアレイ、シリコーンアレイ、メンブレン、またはマイクロタイタープレートである、実施形態７５～８７のいずれか１つに記載のキット。
実施形態８９。上記固体支持体がミクロスフェアビーズである、実施形態８８に記載のキット。
実施形態９０。上記ミクロスフェアビーズがアビジン結合ミクロスフェアビーズである、実施形態８９に記載のキット。
実施形態９１。上記ＡＡＩ特異的標識試薬が、検出可能に標識された抗ヒト抗体である、実施形態７５～９０のいずれか１つに記載のキット。
実施形態９２。上記検出可能に標識された抗ヒト抗体が、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＥ抗体である、実施形態９１に記載のキット。
実施形態９３。上記ＡＡＩ特異的標識試薬の上記検出可能な標識が、フィコエリトリン（ＰＥ）、シアニン染料、蛍光染料、赤外線染料、色原体染料、酵素標識、及び放射能標識から選択される、実施形態９１または実施形態９２に記載のキット。
実施形態９４。上記検出可能な標識がＰＥである、実施形態９３に記載のキット。
実施形態９５。上記ＡＡＩ特異的標識試薬が、ＰＥ標識された抗ヒトＩｇＥ抗体である、実施形態９１に記載のキット。
実施形態９６。上記ＡＡＩ特異的標識試薬に特異的に結合するレポーター部分をさらに含む、実施形態７５～９５のいずれか１つに記載のキット。
本明細書にて開示する主題をより効率的に理解可能とするために、以下に実施例を記載する。これらの実施例は、単に例示目的であり、いかなる方法でも、特許請求される主題を制限するものとして解釈されるものではないと理解されたい。
実施例１：ピーナッツアレルギー診断の認証
アルゴリズム
以下は、２つのエピトープを分類因子：
ｈ２．００８＋（ｈ２．０１９）／２０≦．２０であれば「アレルギーではない」、そうでなければ「アレルギーである」。
に統合するアルゴリズムの例である。
このアルゴリズムに関して、ｈ２．００８及びｈ２．０１９は、較正された純ＭＦＩとして表され、以下に記載する式を使用して測定される。
Figure 2023514162000002
Ｂｒｎは、所与のバッチでｎ個の緩衝液対照を複製するための、Ｌｕｍｉｎｅｘシステムから報告される緩衝液対照に対するＮｅｔＭＦＩである。
Figure 2023514162000003
Ｐｒｎは、所与のバッチでｎ個の陽性対照を複製するための、Ｌｕｍｉｎｅｘシステムから報告される陽性対照に対するＮｅｔＭＦＩである。
Figure 2023514162000004
Ｓｒｎは、所与のバッチでｎ個の試料を複製するための、Ｌｕｍｉｎｅｘシステムから報告される試料に対するＮｅｔＭＦＩである。
Figure 2023514162000005
定数は、エピトープ特異的補正定数である。
Figure 2023514162000006
追加のＳＰＴ及び／またはｓＩｇＥ検査もまた、アルゴリズムに組み込むことができ、これにより、３つの検査のうちのいずれかが、対象の、ピーナッツに対するアレルゲン状態を確認することができる。
ＳＰＴ≦３ｍｍ、またはｓＩｇＥ≦０．１０ｋＵ／Ｌである場合、「アレルギーでない」。停止。
ＳＰＴ≧１８ｍｍ、またはｓＩｇＥ≧１８ｋＵ／Ｌである場合、「アレルギーである」。停止。
ＳＰＴに関して、単位はｍｍである。ｓＩｇＥに関して、単位はｋＵ／Ｌである。
方法
ＬＥＡＰ検査の回避群からの１３３名の対象（３１名がアレルギー、１０２名がアレルギーでない）で、検査を行った。全ての診断を、５歳の年齢にてＯＦＣで測定した。血漿試料を、各対象の２．５歳及び５歳の時点で入手した。ＢＢＥＡ方法論を使用してこれらの試料を分析し、各対象に関して２．５歳及び５歳の時点での、ＩｇＥ及びＩｇＧ４エピトープレベルを入手した。各対象に対するＩｇＥ（ＩｇＧ４）エピトープレベルを、ＩｇＥ（ＩｇＧ４）エピトープ測定の全ての中央値により正規化した。
５歳の時点でデータを分析し、アレルギー及び非アレルギー対象を分離するための、最も性能を発揮するＩｇＥまたはＩｇＧ４エピトープを測定した。具体的には、最も性能を発揮するＩｇＥまたはＩｇＧ４エピトープは、０．１ｋＵ／Ｌを下回るピーナッツ特異的ＩｇＥ（ｓＩｇＥ）レベルにより、対象の初期トリアージの後で、これらの対象をアレルギーまたは非アレルギーと分析するための、最良のＡＵＣを備えたものである。次に、この同じＩｇＥまたはＩｇＧ４エピトープは、２．５歳の時点で最も性能を発揮するエピトープでもあったことが確認された。最も性能を発揮するエピトープ、及び決定閾値の識別の後、診断検査を完了し、その後、認証を行った。
簡潔に述べると、ピーナッツペプチド（ＣＳ Ｂｉｏ，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ，ＵＳＡ）をＬｕｍＡｖｉｄｉｎビーズ（Ｌｕｍｉｎｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）に結合し、ＰＢＳ－ＴＢＮ緩衝液（１×ＰＢＳ＋０．０２％ Ｔｗｅｅｎ２０＋０．１％ ＢＳＡ）に保管した。ペプチド結合ビーズのマスターミックスをＰＢＳ－ＴＢＮ緩衝液で調製し、１００μＬのビーズマスターミックスをフィルタープレート添加した。ビーズの洗浄後、１００μＬの対象の結晶（１：１０で希釈）を、３通りにウェルに添加した。プレートを２時間、３００ｒｐｍにて室温で、振盪器でインキュベートした。過剰な血漿を取り除き、プレートを洗浄した。５０μＬ／ウェルのマウス抗ヒトＩｇＥ－ＰＥ（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｐｉｅｒｃｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｌｏｎｅ ＢＥ５，ＰＢＳ－ＴＢＮ中で１：５０に希釈）、または、マウス抗ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ－ＰＥ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ，Ｃｌｏｎｅ ＨＰ６０２５，ＰＢＳ－ＴＢＮ中に１：４０で希釈）二次抗体を添加し、プレートを３０分間インキュベートした。最初の洗浄の後、１００μＬのＰＢＳ－ＴＢＮ緩衝液を各ウェルに添加して、ビーズを再懸濁し、次にこれを、固定底９６ウェル読み取りプレートに移し、Ｌｕｍｉｎｅｘ２００機器（Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）１００／２００（商標）Ｓｙｓｔｅｍ，Ｌｕｍｉｎｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）で定量した。
試料は全て、３通りで処理した。バックグラウンド強度を取り除くために、緩衝液試料（ＰＢＳ－ＴＢＮ緩衝液）もまた、各プレートで３通りで処理した。各エピトープ及び試料に対するＭＦＩを、Ｌｕｍｉｎｅｘリーダーの出力から直接入手した。
検証
検査の検証を、ＸｏＦＡＲ２検査の８１名の対象（２３名がアレルギー、５８名が非アレルギー）で実施した。全ての診断を、５歳の年齢にてＯＦＣで測定した。血漿試料を、各対象の２歳及び５歳の時点で入手した。ＢＢＥＡ方法論を使用してこれらの試料を分析し、各対象に関して２歳及び５歳の時点での、ＩｇＥ及びＩｇＧ４エピトープレベルを入手した。Ｌｕｍｉｎｅｘデータを、対象試料全て、加えて、陰性（緩衝液）及び陽性対照に対して３通りで収集した。データを以下の方法で処理した：
１）複製を、メジアン関数を使用して単一の値にマージした；
２）対象、緩衝液、及び陽性対照の値を全て、ｌｏｇ変換した；
３）緩衝値を、対象全て、及び陽性対照値から取り除くことにより、バックグラウンド除去を行った；ならびに
４）中央陽性対照値を各プレートに対して測定し、これを使用して、自身の陽性対照値に従い、各プレートで対象の値全てを較正した。
所定の仮説及び閾値を使用して、診断検査の検証を行った。まず、ｓＩｇＥに対する閾値０．１Ｋｕ／Ｌを、及び、最適ＩｇＥ（ＩｇＧ４）エピトープに対する閾値０．３０を使用する、診断検査の性能は、５歳の時点での対象の関連に対して、Χ２乗検定を使用すると、統計的に有意であった。同様に、２歳の時点での対象に対する診断検査の性能を評価した。データ分析は全て、Ｍａｔｌａｂ Ｒ２０１５ｂを使用して行った。
結果
検証コホートでの検査結果を図１に示す。他の診断検査の性能を、比較のために表示する。検証コホートからの、１０名のアレルギー、及び１０名の非アレルギー対象の結果を、下表１に表す。
Figure 2023514162000007
エピトープアッセイから入手した生データを、ＭＦＩとして報告した。データを全て、上述のとおりに処理した。
本明細書に記載するものに加えて、記載する主題の様々な修正が、前述の説明から当業者には明白となろう。そのような修正はまた、添付の特許請求の範囲内に入ることが意図される。本出願に引用される各参考文献（ジャーナル記事、米国及び非米国特許、特許出願公報、国際特許出願公報、遺伝子バンクの寄託番号など）は、その全体が本明細書に参照により組み込まれる。

Claims (20)

  1. 対象においてピーナッツアレルギーを診断するための方法であって、
    固体支持体に結合した２つのピーナッツペプチドを、前記対象から入手した生体試料と、前記生体試料中の１つ以上のアレルギー関連免疫グロブリン（ＡＡＩ）を前記２つのピーナッツペプチドと結合させてＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成するのに十分な条件下にて接触させることであって、前記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが前記配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含み、前記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが前記配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含む、前記接触させることと、
    前記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を、ＡＡＩ特異的標識試薬と接触させて、標識試薬－ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成することと、
    前記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することと、を含み、
    前記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、前記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、閾値を上回る場合に、前記対象がピーナッツアレルギーであり、前記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、前記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、前記閾値以下である場合に、前記対象がピーナッツアレルギーではない、前記方法。
  2. 前記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、配列番号１に従ったアミノ酸配列を含み、前記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、配列番号２に従ったアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記固体支持体がミクロスフェアビーズ、ガラスアレイ、シリコーンアレイ、メンブレン、またはマイクロタイタープレートである、請求項１または請求項２に記載の方法。
  4. 前記ＡＡＩがＩｇＧ及び／またはＩｇＥである、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  5. 前記ＡＡＩ特異的標識試薬が、検出可能に標識された抗ヒト抗体である、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
  6. 前記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することが、ポイントオブケアデバイスにより実施される、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
  7. 前記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することが、各ＡＡＩ特異的標識試薬の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定することを含み、
    ｈ２．００８＋（ｈ２．０１９）／２０が≦０．２０である場合、前記対象はピーナッツアレルギーではなく、
    ｈ２．００８＋（ｈ２．０１９）／２０が＞０．２０である場合、前記対象はピーナッツアレルギーであり、
    ｈ２．００８は、前記標識試薬－ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体の較正純ＭＦＩであり、前記ピーナッツペプチドは配列番号１を含み、ｈ２．０１９は、前記標識試薬ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体の較正純ＭＦＩであり、前記ピーナッツペプチドは配列番号２を含み、
    前記ＡＡＩ特異的標識試薬は、検出可能に標識された抗ヒト抗体である、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
  8. プリックテスト（ＳＰＴ）及び／または全ピーナッツ特異的ＩｇＥ（ｓＩｇＥ）検査を行うこと、または、行っていることをさらに含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
  9. ＳＰＴ≦３ｍｍであり、及び／または、ｓＩｇＥ≦０．１０ｋＵ／Ｌであるとき、前記対象はピーナッツアレルギーではなく、ＳＰＴ≧１８ｍｍであり、及び／または、ｓＩｇＥ≧１８ｋＵ／Ｌであるとき、前記対象はピーナッツアレルギーである、請求項８に記載の方法。
  10. ピーナッツアレルギーの対象において、ピーナッツに対する臨床耐性の発達を検出するための方法であって、
    固体支持体に結合した２つのピーナッツペプチドを、前記対象から入手した生体試料と、前記生体試料中の１つ以上のアレルギー関連免疫グロブリン（ＡＡＩ）を前記２つのピーナッツペプチドと結合させて２つのＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成するのに十分な条件下にて接触させることであって、前記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが前記配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含み、前記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが前記配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含む、前記接触させることと、
    前記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を、ＡＡＩ特異的標識試薬と接触させて、標識試薬－ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体を形成することと、
    前記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することと、
    前記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を、前記ＡＡＩ特異的標識試薬の、前記対象から以前に入手した生体試料に由来する各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合と比較することと、を含み、
    前記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、前記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、前記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、前記以前に入手した生体試料用の前記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合以上である場合に、前記対象がピーナッツに対して臨床耐性を確立しておらず、前記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、前記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合が、前記ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体中の各ピーナッツペプチドに対する、前記以前に入手した生体試料用の前記ＡＡＩ特異的標識試薬への組み合わせた結合未満である場合に、前記対象がピーナッツに対して臨床耐性を確立している、前記方法。
  11. 前記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、配列番号１に従ったアミノ酸配列を含み、前記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、配列番号２に従ったアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の方法。
  12. 前記ＡＡＩがＩｇＧ及び／またはＩｇＥである、請求項１０または請求項１１に記載の方法。
  13. 前記ＡＡＩ特異的標識試薬が、検出可能に標識された抗ヒト抗体である、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の方法。
  14. 前記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することが、ポイントオブケアデバイスにより実施される、請求項１０～１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 前記ＡＡＩ特異的標識試薬の、各ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体への結合を測定することが、各ＡＡＩ特異的標識試薬の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定することを含み、
    ｈ２．００８＋（ｈ２．０１９）／２０が≦０．２０である場合、前記対象はピーナッツアレルギーではなく、
    ｈ２．００８＋（ｈ２．０１９）／２０が＞０．２０である場合、前記対象はピーナッツアレルギーであり、
    ｈ２．００８は、前記標識試薬－ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体の較正純ＭＦＩであり、前記ピーナッツペプチドは配列番号１を含み、ｈ２．０１９は、前記標識試薬－ＡＡＩ－ペプチド－固体支持体複合体の較正純ＭＦＩであり、前記ピーナッツペプチドは配列番号２を含み、
    前記ＡＡＩ特異的標識試薬は、検出可能に標識された抗ヒト抗体である、請求項１０～１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. 乳児を、２つのピーナッツアレルゲンに対して脱感作し、ピーナッツに対して耐性またはノンアレルギーを誘発するための方法であって、２つのピーナッツペプチドを前記乳児に投与することを含み、前記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが前記配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含み、前記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが前記配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列、を含む、前記方法。
  17. 前記２つのピーナッツペプチドのうちの一方が、配列番号１に従ったアミノ酸配列を含み、前記２つのピーナッツペプチドのうちの他方が、配列番号２に従ったアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の方法。
  18. アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが前記配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第１のピーナッツペプチド、及び、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが前記配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第２のピーナッツペプチドからなる組成物。
  19. 前記第１のピーナッツペプチドが、配列番号１に従ったアミノ酸配列を含み、前記第２のピーナッツペプチドが、配列番号２に従ったアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の組成物。
  20. アミノ酸配列ＷＥＬＱＧＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１）、または、配列番号１を含むが前記配列番号１の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第１のピーナッツペプチド、及び、アミノ酸配列ＤＳＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱＤＰＹ（配列番号２）、または、配列番号２を含むが前記配列番号２の中に１～４個の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、第２のピーナッツペプチドに結合した固体支持体、ならびに
    アレルギー関連免疫グロブリン（ＡＡＩ）特異的標識試薬
    を含むキット。
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