JP7484031B1 - 組成物の製造方法及び飲食品の製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
エクオール誘導体、特に5-ヒドロキシエクオールは、抗酸化効果(非特許文献1)や寿命延長効果(非特許文献2)が知られている。
すなわち、本開示は少なくとも以下を含む。
(a)イソフラボン配糖体から、グルコースとイソフラボンアグリコンとを生成する工程;
(b1)エクオール産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオールを産生させる工程;
(b2)エクオール誘導体産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオール誘導体を産生させる工程;及び、
(c)前記グルコースの含有量が、前記組成物中で0g/L以上2.0g/L未満、又は前記組成物の固形分量あたり30g/kg以下となるように前記グルコースを分解する工程
〔2〕 前記(c)工程が、糖資化能を有する微生物を用いた発酵により前記グルコースを分解する工程である、〔1〕に記載の製造方法。
〔3〕 前記糖資化能を有する微生物が酪酸菌、乳酸菌、及び酵母からなる群から選ばれる1種以上の微生物である、〔2〕に記載の製造方法。
〔4〕 前記糖資化能を有する微生物がクロストリジウム(Clostridium)属に属する微生物、ラクトバチルス(Lactobacillus)属に属する微生物、ラクトコッカス(Lactococcus)属に属する微生物、ロイコノストック(Leuconostoc)属に属する微生物、及びサッカロマイシス(Saccharomyces)属に属する微生物からなる群から選ばれる1種以上の微生物である、〔3〕に記載の製造方法。
〔5〕 前記(c)工程が、グルコースを分解する酵素を用いて前記グルコースを分解する工程である、〔1〕に記載の製造方法。
〔6〕 前記グルコースを分解する酵素がグルコースオキシダーゼ、及びグルコース脱水素酵素からなる群から選ばれる1種以上である、〔5〕に記載の製造方法。
〔7〕 前記(b1)工程及び/又は(b2)工程と、前記(c)工程とが同時に行われる、〔1〕~〔6〕のいずれかに記載の製造方法。
〔8〕 前記イソフラボン配糖体がダイジンであり、前記イソフラボンアグリコンがダイゼインである、〔1〕~〔7〕のいずれかに記載の製造方法。
〔9〕 前記(a)工程がイソフラボン配糖体にβ-グルコシダーゼを作用させて、グルコースとイソフラボンアグリコンとを生成する工程である、〔1〕~〔8〕のいずれかに記載の製造方法。
〔10〕 下記(a)工程;(b1)工程及び/又は(b2)工程;(c)工程;並びに(d)工程を含む、飲食品の製造方法。
(a)イソフラボン配糖体から、グルコースとイソフラボンアグリコンとを生成する工程;
(b1)エクオール産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオールを産生させる工程;
(b2)エクオール誘導体産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオール誘導体を産生させる工程;
(c)前記グルコースの含有量が、(a)工程、(b1)工程及び/又は(b2)工程、並びに(c)工程を含む方法により製造される組成物中で0g/L以上2.0g/L未満、又は前記組成物の固形分量あたり30g/kg以下となるように前記グルコースを分解する工程;並びに、
(d)前記(a)工程、(b1)工程及び/又は(b2)工程、並びに(c)工程を含む方法により製造した組成物を用いて飲食品を製造する工程
〔11〕 エクオール及び/又はエクオール誘導体を含み、グルコースを実質的に含まない、発酵組成物。
〔12〕 前記グルコースを実質的に含まないことが、グルコースを0g/L以上2.0g/L未満含むことである、〔11〕に記載の発酵組成物。
〔13〕 エクオール及び/又はエクオール誘導体と、グルコースと、を含み、
前記グルコースの含有量が、前記発酵組成物の固形分量あたり30g/kg以下である、発酵組成物。
〔14〕 飲食品に用いられる、〔11〕~〔13〕のいずれかに記載の発酵組成物。
また、「~」を用いて表される数値範囲は、「~」の前後に記載された数値を下限値及び上限値として含む範囲を意味し、「A~B」は、A以上B以下であることを意味する。
JCMとの文言から始まる菌株の受託番号は、Japan Collection of Microorganisms(国立研究開発法人理化学研究所バイオリソース研究センター微生物材料開発室、郵便番号:305-0074、住所:茨城県つくば市高野台3-1-1)に保存されている微生物に付与された番号であり、同機関から入手することができる。
FERMとの文言から始まる菌株の受託番号は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター(現 独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター、郵便番号:292-0818、住所:千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8 120号室)に保存されている微生物に付与された番号であり、同機関から入手することができる。
KCCMとの文言から始まる菌株の受託番号は、韓国微生物保存センター(Korean Culture Center of Microorganisms; KCCM)に保存されている微生物に付与された番号であり、同機関から入手することができる。
また、アミノ酸等とは、グルコースとメイラード反応を起こしうる化合物であれば特に限定されず、アミノ基を含む化合物が挙げられる。アミノ基を含む化合物の例として、アミノ酸、ペプチド、及びタンパク質が挙げられる。
(a)イソフラボン配糖体から、グルコースとイソフラボンアグリコンとを生成する工程;
(b1)エクオール産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオールを産生させる工程;
(b2)エクオール誘導体産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオール誘導体を産生させる工程;及び、
(c)前記グルコースの含有量が、前記組成物中0g/L以上2.0g/L未満、又は前記組成物の固形分量あたり30g/kg以下となるように前記グルコースを分解する工程
本実施形態に係る製造方法は、(a)イソフラボン配糖体から、グルコースとイソフラボンアグリコンとを生成する工程を含む。
イソフラボン類は、大豆、葛、レッドクローバー、カンゾウなどのマメ科の植物に多く含まれる。本実施形態におけるイソフラボン類としては、例えば、イソフラボン類を含むマメ科植物由来のイソフラボン類が挙げられる。具体的には、大豆由来のイソフラボン類(当該技術分野及び市場では、「大豆イソフラボン」や「大豆イソフラボン類」などと称されることがあり、本開示では同義として扱う。)、葛由来のイソフラボン類(当該技術分野及び市場では、「葛イソフラボン」や「葛イソフラボン類」などと称されることがあり、本開示では同義として扱う。)、レッドクローバー由来のイソフラボン類(当該技術分野及び市場では、「レッドクローバーイソフラボン」や「レッドクローバーイソフラボン類」などと称されることがあり、本開示では同義として扱う。)、カンゾウ由来のイソフラボン類(当該技術分野及び市場では、「カンゾウイソフラボン」や「カンゾウイソフラボン類」などと称されることがあり、本開示では同義として扱う。)が挙げられる。
また、pHは通常2以上9以下であり、好ましくは3以上7以下であり、より好ましくは4以上6以下である。
例えば、アスペルギルス(Aspergillus)属、ラクトコッカス(Lactococcus)属、ストレプトコッカス(Streptococcus)属、ラクトバチルス属(Lactobacillus)属、ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)属、ペニシリウム(Penicillium)属、ピキア(Pichia)属、シュードモナス(Pseudomonas)属、リゾープス(Rhizopus)属に属する微生物等が挙げられる。
好ましくは、アスペルギルス属、ラクトコッカス属、ストレプトコッカス(Streptococcus)属、ラクトバチルス属(Lactobacillus)属、ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)属に属する微生物が挙げられる。
さらに好ましくは、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)、アスペルギルス・オリゼ(Aspergillus oryzae)、アスペルギルス・アクレアタス(Aspergillus aculeatus)、ラクトコッカス・ラクティス(Lactococcus lactis)、ストレプトコッカス・サーモフィラス(Streptococcus thermophilus)、ラクトバチルス・アシドフィラス(Lactobacillus acidophilus)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(Bifidobacterium bifidum)に属する微生物が挙げられる。
イソフラボン配糖体の含有量は、特に限定されないが、通常0.5g/L以上100g/L以下であり、好ましくは1g/L以上50g/L以下であり、より好ましくは2g/L以上20g/L以下である。
無機窒素源の例として、アンモニウム塩、硝酸塩を挙げることができる。無機窒素源として好ましくは、硫安、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、リン酸水素アンモニウム、硝酸カリウム又は硝酸ソーダである。
また、有機窒素源としては、アミノ酸類(グルタミン酸、アルギニン、オルニチンなど)、オレイン酸などの油脂、酵母エキス、ペプトン類(例えばポリペプトンN、大豆ペプトンなど)、肉エキス(例えばエールリッヒカツオエキス、ラブ-レムコ末、ブイヨンなど)、魚介類エキス、肝臓エキス、消化血清末、魚油などを挙げることができる。より好ましくは、アルギニン、システイン、シトルリン、リジン、酵母エキス、ペプトン類(例えばポリペプトンNなど)である。
リン酸二水素カリウム ビオチン
硫酸マグネシウム 葉酸
硫酸マンガン ピリドキシン
塩化ナトリウム チアミン
塩化コバルト リボフラビン
塩化カルシウム ニコチン酸
硫酸亜鉛 パントテン酸
硫酸銅 ビタミンB12
明ばん チオオクト酸
モリブデン酸ソーダ p-アミノ安息香酸
塩化カリウム ビタミンK
ホウ酸等
塩化ニッケル
タングステン酸ナトリウム
セレン酸ナトリウム
硫酸第一鉄アンモニウム
酢酸ナトリウム三水和物
硫酸マグネシウム七水和物
硫酸マンガン四水和物
気相における水素の割合は特に限定されないが、通常0.5%以上100%以下であり、好ましくは1.0%以上20%以下であり、より好ましくは2.0%以上10%以下である。
培養温度は、20℃~45℃、より好ましくは25℃~40℃、さらに好ましくは30℃~37℃が好ましい。
培養器の加圧条件は、生育できる条件であれば特に限定されるものではないが、0.001~1MPaの範囲、好ましくは0.01~0.5MPaを挙げることができる。
培養時間としては、通常8~340時間、好ましくは12~170時間、より好ましくは16~120時間を挙げることができる。
本実施形態に係る製造方法は、(b1)エクオール産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオールを産生させる工程、及び/又は、後述する(b2)工程を含む。
以上の微生物は、属、種、株にかかわらず、単独で用いても2以上を用いてもよい。
このことは、本明細書の他の寄託菌株についても同様に適用される。
本実施形態に係る製造方法は、前記(b1)工程、及び/又は、(b2)エクオール誘導体産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオール誘導体を産生させる工程を含む。エクオール誘導体としては、5-ヒドロキシエクオールが挙げられる。
アドレクラウチア(Adlercreutzia)属に属する微生物としては、アドレクラウチア・エクオリファシエンス(Adlercreutzia equolifaciens)に属する微生物が好ましく、中でも、アドレクラウチア・エクオリファシエンス・サブスピーシズ・エクオリファシエンス(Adlercreutzia equolifaciens subsp. equolifaciens)DSM 19450株又はアドレクラウチア・エクオリファシエンス・サブスピーシズ・セラツス(Adlercreutzia equolifaciens subsp. celatus)DSM 18785株が好ましい。
スラッキア(Slackia)属に属する微生物としては、スラッキア・イソフラボニコンベテンス(Slackia isoflavoniconvertens)に属する微生物、スラッキア・エクオリファシエンス(Slackia equolifaciens)に属する微生物、スラッキア・エスピー(Slackia sp.)に属する微生物が挙げられる。
本実施形態に係る製造方法は、(c)前記グルコースの含有量が、前記組成物中0g/L以上2.0g/L未満、又は前記組成物の固形分量あたり30g/kg以下となるように前記グルコースを分解する工程を含む。グルコースを分解する、とは、グルコースをより炭素数が少ない化合物に変化させることを指す。
(c)工程は、糖資化能を有する微生物を用いた発酵により前記グルコースを分解する工程であってよく、グルコースを分解する酵素を用いて前記グルコースを分解する工程であってもよい。
ラクトバチルス(Lactobacillus)属に属する微生物としては、ラクトバチルス・ブレビス(Lactobacillus brevis)DSM 20054株等が挙げられる。
ラクトコッカス(Lactococcus)属に属する微生物としては、ラクトコッカス・ラクティス(Lactococcus lactis)DSM 20481株等が挙げられる。
ロイコノストック(Leuconostoc)属に属する微生物としては、ロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシズ・メセンテロイデス(Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides)DSM 20343株等が挙げられる。
グルコースを分解する際のpHは特に限定されないが、通常4以上9以下であり、好ましくは4以上7以下であり、より好ましくは5以上6以下である。
(b1)工程及び/又は(b2)工程と、(c)工程とが同時に行われる態様として具体的には、グルコースと、イソフラボンアグリコンと、エクオール産生能を有する微生物と、を含む培地中にグルコースを分解する酵素を添加する態様、エクオール産生能を有する微生物と糖資化能を有する微生物をグルコース及びイソフラボンアグリコンを含む培地で共培養する態様、エクオール産生能及び糖資化能を有する微生物をグルコース及びイソフラボンアグリコンを含む培地で培養する態様等が挙げられる。
グルコースの含有量を上記範囲とするには、培養条件やグルコースを分解する酵素の処理条件を適宜調整すればよい。例えば、培養時間や処理時間を長くするなどが挙げられる。
グルコースの含有量は、電極法により測定することができる。
組成物が固形状など水を含まない場合は、組成物に水を加え、グルコースを水に溶解させた上で測定し、固形分量あたりのグルコース含有量を測定することができる。
本実施形態の製造方法は、例えば、得られたエクオール及び/又はエクオール誘導体を定量する工程を含んでもよい。その方法は常法に従うことができる。たとえば、培養液の一部を採取して適宜希釈し、よく撹拌した後、ポリテトラフルオロエチレン(PTFE)膜などの膜を使用して濾過し、不溶物を除去したものを高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で定量することなどが挙げられる。
本実施形態に係る製造方法により製造された組成物は、そのままで又は追加のアミノ酸等の存在下で、加熱されてもメイラード反応が進行せず褐変しないため、飲食品に好適に含ませることができる。なお、本明細書において、飲食品はサプリメントを含む。
すなわち、本開示の別の実施形態は、下記(a)工程;(b1)工程及び/又は(b2)工程;(c)工程;並びに(d)工程を含む、飲食品の製造方法である。
(a)イソフラボン配糖体から、グルコースとイソフラボンアグリコンとを生成する工程;
(b1)エクオール産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオールを産生させる工程;
(b2)エクオール誘導体産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオール誘導体を産生させる工程;
(c)前記グルコースの含有量が、(a)工程、(b1)工程及び/又は(b2)工程、並びに(c)工程を含む方法により製造される組成物中で0g/L以上2.0g/L未満、又は前記組成物の固形分量あたり30g/kg以下となるように前記グルコースを分解する工程;並びに、
(d)前記(a)工程、(b1)工程及び/又は(b2)工程、並びに(c)工程を含む方法により製造した組成物を用いて飲食品を製造する工程
本開示の一実施形態に係る組成物の製造方法により、グルコースの量が低減されており、そのままで又は追加のアミノ酸等の存在下で、加熱されてもメイラード反応が進行しない、エクオール及び/又はエクオール誘導体を含む組成物を得ることができる。
すなわち、本開示の別の実施形態は、エクオール及び/又はエクオール誘導体を含み、グルコースを実質的に含まない、発酵組成物である。あるいは、本開示の別の実施形態は、エクオール及び/又はエクオール誘導体を含み、前記グルコースの含有量が、前記発酵組成物の固形分量あたり30g/kg以下である、発酵組成物である。エクオール誘導体としては、5-ヒドロキシエクオールが挙げられる。
また、本実施形態に係る発酵組成物は、そのままで又は追加のアミノ酸等の存在下で、加熱されてもメイラード反応が進行せず褐変しないため、飲食品に好適に含ませることができる。すなわち、上記発酵組成物は、飲食品に用いることができる。
グルコースの含有量は、電極法により測定することができる。
発酵組成物が固形状など水を含まない場合は、発酵組成物に水を加え、グルコースを水に溶解させた上で測定し、固形分量あたりのグルコース含有量を測定することができる。
エクオール及び/又はエクオール誘導体の含有量は、上述のHPLCにより測定することができる。
測定対象の液1mLを分取し、遠心分離により菌体を沈降させた。上清を0.45μmフィルターでろ過した後に、ろ液を下記条件で分析した。測定レンジ(10mg/dL~600mg/dL)を超える場合は、ろ液をミリQ水で希釈し、分析した。
検査装置:株式会社三和化学研究所製グルテストNeoアルファ
チップ:株式会社三和化学研究所製グルテストNeoセンサー
固形分量あたりの含有量(g/kg)は、電子式水分計(島津製作所製MOC-120H)を用いて測定対象の液の固形分濃度(kg/L)を測定し、上記グルコース濃度(g/L)を固形分濃度で除して算出した。
測定対象の液20μLを分取し、エタノール:ミリQ水=70:30(v/v)からなる希釈液で50倍希釈した。希釈液を0.45μmフィルターでろ過した後に、ろ液を下記HPLC条件で分析した。
エクオール標準品としては、富士フィルム和光純薬株式会社製(S)-エクオールを、5-ヒドロキシエクオール標準品としては、トロントリサーチケミカルズ社製5-ヒドロキシエクオールを使用した。
{HPLC条件}
カラム:Phenomenex SYNERGI, 4μm, POLAR-R, 150mm×4.6mm
溶出液:蒸留水/メタノール=55/45(v/v)
温度:40℃
検出波長:280nm
流速:1.0mL/min
注入:10μL
時間:30min
(前培養培地の調製)
Thermo scientific社製Anaerobe Basal Broth (ABB)培地35.4gを1Lの水に溶解して前培養培地を調製した。前培養培地10mLを試験管に分注し、ブチルゴム栓をした。窒素ガスでガス置換した後にオートクレーブで滅菌した。
大豆胚軸抽出物(ダイジン、グリシチン、ゲニスチン等イソフラボン配糖体を80%含む)16g/Lに、ペクチナーゼGアマノ(天野エンザイム社製)0.16g/Lを加え、撹拌しながら50℃で一晩保持することで、イソフラボン配糖体から、糖を遊離させた。
酵素処理液に、終濃度として、ABB培地35.4g/L、アルギニン1g/L、β-シクロデキストリン16g/Lとなるように添加し、2L容量のミニジャーに1Lずつ分注した。窒素ガスで置換した後にオートクレーブ滅菌した。
前培養培地に、表1に示す組み合わせで微生物を植菌した後、嫌気性ガスで置換し、37℃、200spmで2日間培養した。
エクオール産生能を有する微生物として、アドレクラウチア・エクオリファシエンス・サブスピーシズ・セラツス(Adlercreutzia equolifaciens subsp. celatus)DSM 18785株(表中ACと表記)、アドレクラウチア・エクオリファシエンス(Adlercreutzia equolifaciens)DSM 19450株(表中AEと表記)のいずれかを用いた。これらはエクオール誘導体(特に、5-ヒドロキシエクオール)産生能も有する。
また、糖資化能を有する微生物には、クロストリジウム・アスパラギフォルメ(Clostridium asparagiforme)DSM 15981株(表中CAと表記)、クロストリジウム・ボルテアエ(Clostridium bolteae)JCM 12243株(表中CBと表記)、ラクトバチルス・ブレビス(Lactobacillus brevis)DSM 20054株(表中LBと表記)、ラクトコッカス・ラクティス(Lactococcus lactis)DSM 20481株(表中LLと表記)、ロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシズ・メセンテロイデス(Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides)DSM 20343株(表中LMと表記)を使用した。
本培養培地に上記前培養培地から植菌した後、嫌気性ガスを0.22μmのフィルターを介して通気しながら、37℃、500rpmで2日間培養した。
培養後、エクオール濃度、5-ヒドロキシエクオール濃度及びグルコース濃度を測定した。結果を表1に示す。なお、「g/kg」で表されるグルコース濃度は固形分量あたりのグルコース含有量を示す。
(前培養培地の調製)
試験例1と同様に前培養培地を調製した。
大豆胚軸抽出物(ダイジン、グリシチン、ゲニスチン等イソフラボン配糖体を80%含む)16g/Lに、ペクチナーゼGアマノ0.16g/Lを加え、撹拌しながら50℃で一晩保持することで、イソフラボン配糖体から、糖を遊離させた。
酵素処理液に、終濃度として、ABB培地35.4g/L、アルギニン1g/L、β-シクロデキストリン16g/Lとなるように添加し、バイアルに50mLずつ分注し、ブチルゴム栓で封をした。窒素ガスで置換した後にオートクレーブ滅菌した。
前培養培地に、表2に示すエクオール産生能を有する微生物を植菌した後、嫌気性ガスで置換し、37℃、200spmで2日間培養した。
本培養培地に上記前培養から植菌した後、嫌気性ガスで置換し、37℃、200spmで3日間培養した。
上記の通り培養したものを比較例3及び4とし、エクオール濃度、5-ヒドロキシエクオール濃度及びグルコース濃度を測定した。
比較例3及び4に、培養液100mLあたり1gのパン酵母(株式会社日清製粉ウェルナ製スーパーカメリアドライイースト)を加え、30℃で一晩保存したものをそれぞれ実施例7、8とした。
比較例3、4、実施例7、8のエクオール濃度、5-ヒドロキシエクオール濃度及びグルコース濃度の測定結果を表2に示す。
比較例3、実施例7の液を遠心分離し、菌体及び不溶成分を除去し、上清を回収した。上清の420nmでの吸光度を測定した。また、80℃、2時間加熱した後、同様に吸光度を測定した。結果を表3に示す。
比較例3、実施例7の液に、グリシンを2g/Lとなるように加えた後、遠心分離し、菌体及び不溶成分を除去し、上清を回収した。上清の420nmでの吸光度を測定した。また、同様に比較例3、実施例7の液にグリシンを2g/Lとなるように加えた後、80℃、2時間加熱し、同様に吸光度を測定した。結果を表4に示す。
試験例2と同様に、本培養まで行った。培養後、HPLC分析により、エクオール及び5-ヒドロキシエクオール産生を確認し、グルコース濃度を測定した。グルコースが残存していることを確認後、市販のグルコースオキシダーゼ(天野エンザイム株式会社)及びペルオキシダーゼ(富士フィルム和光純薬株式会社製)を加え、30℃で一晩保存した。その後、エクオール濃度、5-ヒドロキシエクオール濃度及びグルコース濃度を測定した。酵素添加処理前の培養液を比較例5、6とし、酵素添加処理後の培養液を実施例9、10として表5に示す。
(前培養培地の調製)
試験例1と同様に前培養培地を調製した。
(酵素処理)
大豆胚軸抽出物(ダイジン、グリシチン、ゲニスチン等イソフラボン配糖体を44%含む)16g/Lに、ペクチナーゼGアマノ(天野エンザイム社製)0.16g/Lを加え、撹拌しながら50℃で一晩保持することで、イソフラボン配糖体から、糖を遊離させた。
酵素処理液に、終濃度として、ABB培地35.4g/L、アルギニン1g/L、β-シクロデキストリン16g/Lとなるように添加し、2L容量のミニジャーに1Lずつ分注した。窒素ガスで置換した後にオートクレーブ滅菌した。
前培養培地に、表5に示す組み合わせで微生物を植菌した後、嫌気性ガスで置換し、37℃、200spmで2日間培養した。使用した微生物は試験例1と同様である。
(本培養)
本培養培地に上記前培養培地から植菌した後、嫌気性ガスを0.22μmのフィルターを介して通気しながら、37℃、500rpmで2日間培養した。
(結果)
培養後、エクオール濃度、5-ヒドロキシエクオール濃度、グルコース濃度を測定した。結果を表6に示す。
比較例7及び8に、市販のグルコースオキシダーゼ(天野エンザイム株式会社)及びペルオキシダーゼ(富士フィルム和光純薬株式会社製)を加え、30℃で一晩保存した。その後、エクオール濃度、5-ヒドロキシエクオール濃度及びグルコース濃度を測定した。
酵素添加処理後の培養液を実施例17、18とし、比較例7、8及び実施例17、18のエクオール濃度、5-ヒドロキシエクオール濃度及びグルコース濃度の測定結果を表7に示す。
比較例7及び実施例17の液を遠心分離し、菌体及び不溶成分を除去し、上清を回収した。上清の420nmでの吸光度を測定した。また、80℃、2時間加熱した後、同様に吸光度を測定した。結果を表8に示す。
Claims (10)
- 下記(a)工程;(b1)工程及び/又は(b2)工程;並びに(c)工程を含む、組成物の製造方法。
(a)イソフラボン配糖体から、グルコースとイソフラボンアグリコンとを生成する工程;
(b1)エクオール産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオールを産生させる工程;
(b2)エクオール誘導体産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオール誘導体を産生させる工程;及び、
(c)前記グルコースの含有量が、前記組成物中0g/L以上2.0g/L未満、又は前記組成物の固形分量あたり30g/kg以下となるように前記グルコースを分解する工程 - 前記(c)工程が、糖資化能を有する微生物を用いた発酵により前記グルコースを分解する工程である、請求項1に記載の製造方法。
- 前記糖資化能を有する微生物が酪酸菌、乳酸菌、及び酵母からなる群から選ばれる1種以上の微生物である、請求項2に記載の製造方法。
- 前記糖資化能を有する微生物がクロストリジウム(Clostridium)属に属する微生物、
ラクトバチルス(Lactobacillus)属に属する微生物、ラクトコッカス(Lactococcus)属に属する微生物、ロイコノストック(Leuconostoc)属に属する微生物、及びサッカロマ
イシス(Saccharomyces)属に属する微生物からなる群から選ばれる1種以上の微生物で
ある、請求項3に記載の製造方法。 - 前記(c)工程が、グルコースを分解する酵素を用いて前記グルコースを分解する工程である、請求項1に記載の製造方法。
- 前記グルコースを分解する酵素がグルコースオキシダーゼ、及びグルコース脱水素酵素からなる群から選ばれる1種以上である、請求項5に記載の製造方法。
- 前記(b1)工程及び/又は(b2)工程と、前記(c)工程とが同時に行われる、請求項1~6のいずれか1項に記載の製造方法。
- 前記イソフラボン配糖体がダイジンであり、前記イソフラボンアグリコンがダイゼインである、請求項1~6のいずれか1項に記載の製造方法。
- 前記(a)工程がイソフラボン配糖体にβ-グルコシダーゼを作用させて、グルコースとイソフラボンアグリコンとを生成する工程である、請求項1~6のいずれか1項に記載の製造方法。
- 下記(a)工程;(b1)工程及び/又は(b2)工程;(c)工程;並びに(d)工程を含む、飲食品の製造方法。
(a)イソフラボン配糖体から、グルコースとイソフラボンアグリコンとを生成する工程;
(b1)エクオール産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオールを産生させる工程;
(b2)エクオール誘導体産生能を有する微生物に、前記イソフラボンアグリコンからエクオール誘導体を産生させる工程;
(c)前記グルコースの含有量が、(a)工程、(b1)工程及び/又は(b2)工程、並びに(c)工程を含む方法により製造される組成物中で0g/L以上2.0g/L未満、又は前記組成物の固形分量あたり30g/kg以下となるように前記グルコースを分解する工程;並びに、
(d)前記(a)工程、(b1)工程及び/又は(b2)工程、並びに(c)工程を含む方法により製造した組成物を用いて飲食品を製造する工程
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