JP7461140B2 - 抗菌性向上剤および抗菌性向上方法 - Google Patents
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Description
この出願は、平成30年12月26日に日本国特許庁に出願された出願番号2018-243574号の優先権の利益を主張する。優先権基礎出願はその全体について、出典明示により本明細書の一部とする。
(1)
酸処理ゼラチンおよび/またはコラーゲンペプチドを含有することを特徴とする、
リゾチーム類および/またはナイシンを含有する抗菌剤の抗菌性向上剤;
(2)
リゾチーム類および/またはナイシンを含有する抗菌剤に、
酸処理ゼラチンおよび/またはコラーゲンペプチドを共存させることを特徴とする、
前記抗菌剤の抗菌性向上方法;
(3)
リゾチーム類および/またはナイシン、ならびに酸処理ゼラチンおよび/またはコラーゲンペプチドを含有する抗菌剤。
酸処理ゼラチンおよび/またはコラーゲンペプチドを含有することを特徴とする、
リゾチーム類および/またはナイシンを含有する抗菌剤の抗菌性向上剤に関する。
リゾチーム類および/またはナイシンを含有する抗菌剤に、
酸処理ゼラチンおよび/またはコラーゲンペプチドを共存させることを特徴とする、
前記抗菌剤の抗菌性向上方法に関する。
リゾチーム類および/またはナイシン、ならびに酸処理ゼラチンおよび/またはコラーゲンペプチドを含有する抗菌剤に関する。
枯草菌(Bacillus subtilis、耐熱性芽胞形成菌)に対する酸処理ゼラチンによる抗菌効果向上作用
一般生菌数測定培地、標準寒天培地(日水製薬(株))(STD)にゼラチン類を添加していない培地およびニッピゼラチンAP-100(酸処理ゼラチン)を添加した培地を調製した。培地は、卵白リゾチームを終濃度が0、0.25、0.5、1、2.5、5、10、30、および50ppmとなるように調製した。培地に菌体を2.2×10^5cfu/シャーレとなるように播種し、35℃で2日培養した。結果を表1に示す。評価は、-:優れた抗菌効果が見られるレベル、±:抗菌効果が見られるレベル、+:多少の抗菌効果が見られるレベル、++:わずかに抗菌効果が見られるレベル、+++:抗菌剤なしと同レベルとして行った。
結果
ゼラチンを0.5%添加した場合、リゾチーム濃度あたりの抗菌効果が10倍以上向上した。ゼラチンを1.0%以上添加した場合、リゾチーム濃度あたりの抗菌効果が50倍近くまで向上した。
実施例2
枯草菌(Bacillus subtilis、耐熱性芽胞形成菌)に対するコラーゲンペプチドによる抗菌効果向上作用
一般生菌数測定培地、標準寒天培地(日水製薬(株))(STD)にコラーゲンペプチドを添加していない培地およびコラーゲンペプチド(ニッピペプタイドFCP-EX)を添加した培地を調製した。培地は、卵白リゾチームを終濃度が0、0.5、1、2.5、5、10、および30ppmとなるように調製した。培地に菌体を1.2×10^5cfu/シャーレとなるように播種し、35℃で2日培養した。結果を表2に示す。評価は、-:優れた抗菌効果が見られるレベル、±:抗菌効果が見られるレベル、+:多少の抗菌効果が見られるレベル、++:わずかに抗菌効果が見られるレベル、+++:抗菌剤なしと同レベルとして行った。
結果
コラーゲンペプチドの濃度に比例して、抗菌効果が向上した。
枯草菌(Bacillus subtilis、耐熱性芽胞形成菌)に対するゼラチン等による抗菌効果向上作用
一般生菌数測定培地、標準寒天培地(日水製薬(株))にゼラチン類を添加していない培地ならびに酸処理ゼラチン、コラーゲンペプチド、アルカリ処理ゼラチン、コラーゲン、アミノ酸、およびゲル化剤それぞれを添加した培地を調製した。培地は、卵白リゾチームを終濃度が0、0.5、1、2.5、5、および10ppmとなるように調製した。ニッピゼラチンは、(株)ニッピから購入し、ニッピペプタイドは、(株)ニッピから購入し、ROUSSELOT150LP60は、ルスロゼライス(株)から購入し、KAPRO B95 SFは、DCP Ingredientsから購入し、L-リジン塩酸塩は、フロンティアフーズ(株)から購入し、かつゲル化剤は、日水製薬(株)から購入した。表中のゲル化剤は、STD培地に含まれる寒天と同量加え、培地中の寒天の終濃度を3.0%とした。培地に菌体を2.2×10^5cfu/シャーレとなるように播種し、35℃で2日培養した。結果を表3に示す。評価は、-:優れた抗菌効果が見られるレベル、±:抗菌効果が見られるレベル、+:多少の抗菌効果が見られるレベル、++:わずかに抗菌効果が見られるレベル、+++:抗菌剤なしと同レベルとして行った。
結果
いずれの酸処理ゼラチン及びコラーゲンペプチドであっても、抗菌効果の向上が確認できた。いずれもゼラチン類自体には、抗菌効果は確認できなかった。アルカリ処理ゼラチンおよびコラーゲンについては、抗菌効果向上の効果はほとんど確認できなかった。抗菌効果向上は、酸処理ゼラチンが最も高かった。酸処理ゼラチンに近い電荷のリジンには、抗菌向上効果は確認できなかった。寒天によるゲル強度の増加は抗菌性を向上しなかったため、ゼラチンのゲル強度は抗菌効果の向上に関与していないと推定される。
また、それぞれのゼラチン、コラーゲンペプチドおよびコラーゲンの情報について、メーカー提供資料に基づき、以下の表Aにまとめた。
枯草菌(Bacillus subtilis、耐熱性芽胞形成菌)に対するゼラチンによるナイシンの抗菌効果向上作用
一般生菌数測定培地、標準寒天培地(日水製薬(株))にゼラチン類を添加していない培地および2.0%酸処理ゼラチンを添加した培地を調製した。培地は、pHを5.5となるように調製した。培地に菌体を1.8×105cfu/シャーレとなるように播種し、35℃で2日培養した。ナイシンは、食品添加物のナイシンを使用した。結果を表4に示す。評価は、-:優れた抗菌効果が見られるレベル、±:抗菌効果が見られるレベル、+:多少の抗菌効果が見られるレベル、++:わずかに抗菌効果が見られるレベル、+++:抗菌剤なしと同レベルとして行った。
結果
ナイシンにおいても、酸処理ゼラチンによる抗菌効果向上を確認した。
乳酸菌(Lactobacillus brevis、およびLactobacillus plantarum)に対するゼラチンによるリゾチームの抗菌効果向上作用
乳酸菌数測定用培地 BCP加プレートカウントアガール(日水製薬(株))にゼラチン類を添加していない培地および1.0%酸処理ゼラチンを添加した培地を調製した。培地は、pHを6.4となるように調製した。抗菌剤として、リゾチーム、アートフレッシュ50/50(三栄源エフ・エフ・アイ(株))、およびアートフレッシュ101(三栄源エフ・エフ・アイ(株))を使用した。アートフレッシュ50/50は、リゾチーム、およびショ糖脂肪酸エステル製剤を含む製剤であり、アートフレッシュ101は、酢酸(Na)、グリシン、リゾチーム、およびショ糖脂肪酸エステル製剤を含む製剤である。
培地に菌体を以下の表の通り播種し、30℃で2日培養した。結果を表5および6に示す。評価は、-:優れた抗菌効果が見られるレベル、±:抗菌効果が見られるレベル、+:多少の抗菌効果が見られるレベル、++:わずかに抗菌効果が見られるレベル、+++:抗菌剤なしと同レベルとして行った。
結果
いずれの乳酸菌種に対しても、リゾチームの抗菌効果向上を確認した。リゾチーム単体だけでなく、製剤についても同様の効果を確認できた。
Lactobacillus brevisに対するゼラチンによるナイシンの抗菌効果向上作用
一般生菌数測定培地、標準寒天培地(日水製薬(株))にゼラチン類を添加していない培地および2.0%酸処理ゼラチンを添加した培地を調製した。培地は、pHを6.0となるように調製した。培地に菌体を9.5×10^4cfu/シャーレとなるように播種し、30℃で2日培養した。結果を表7に示す。評価は、-:優れた抗菌効果が見られるレベル、±:抗菌効果が見られるレベル、+:多少の抗菌効果が見られるレベル、++:わずかに抗菌効果が見られるレベル、+++:抗菌剤なしと同レベルとして行った。
結果
ナイシンに関しても乳酸菌に対して、リゾチーム同様の抗菌効果向上作用を示した。
Bacillus subtilisに対するゼラチンによる様々な抗菌剤の抗菌効果向上作用
一般生菌数測定培地、標準寒天培地(日水製薬(株))にゼラチン類を添加していない培地および1.0または2.0%酸処理ゼラチンの培地を調製した。培地は、pHを6となるように調製した。培地に菌体を1.5×10^5cfu/シャーレとなるように播種し、35℃で2日培養した。抗菌剤として、ε-ポリリジン(JNC(株))、キトサン((株)キミカ)、酢酸ナトリウム(日本合成化学工業(株))、グリシン(有機合成薬品工業(株))、およびグリセリンエステル(太陽化学(株))を使用した。結果を表8に示す。評価は、-:優れた抗菌効果が見られるレベル、±:抗菌効果が見られるレベル、+:多少の抗菌効果が見られるレベル、++:わずかに抗菌効果が見られるレベル、+++:抗菌剤なしと同レベルとして行った。
結果
ゼラチンの添加により抗菌効果が大きく上昇した抗菌剤は確認できなかった。
中華丼を用いた微生物活性測定試験(卵白リゾチーム)
表9に示されるように市販レトルト中華丼(江崎グリコ株式会社)にゼラチンを添加し、沸騰水中で10分間加熱処理した後、室温まで冷却した。リゾチーム(1%溶液)と被検菌原液(Bacillus subtilis)を表9に示される量になるように添加し中華丼サンプルとした。調製した中華丼サンプルの内容を表9に示した。それぞれの中華丼サンプルを微生物活性計測システムLeonis(アドバンス理工株式会社)にセットし、25℃で45時間微生物活性を測定した。1.0%ゼラチンは中華丼の風味に変化を与えなかった。結果を図1に示した。実線はゼラチン添加試験区を示し、破線はゼラチン無添加試験区を示す。ゼラチン添加区で菌の生育が遅延することを確認した。
ホワイトソースを用いた微生物活性測定試験(リゾチーム製剤)
表10に示されるように市販ホワイトソース(ハインツ製)にゼラチンとアートフレッシュ(AF)NO.101を添加し、沸騰水中で10分間加熱処理した後、室温まで冷却した。被検菌原液(Bacillus subtilis)を表10に示される量になるように添加しホワイトソースサンプルとした。調製したホワイトソースサンプルの内容を表10に示した。それぞれのホワイトソースサンプルを微生物活性計測システムLeonis(アドバンス理工株式会社)にセットし、25℃で42時間微生物活性を測定した。1.0%ゼラチンはホワイトソースの風味に変化を与えなかった。結果を図2に示した。実線はゼラチン添加試験区を示し、破線はゼラチン無添加試験区を示す。ゼラチン添加区で菌の生育が遅延することを確認した。
焼き肉のたれを用いた保存試験(リゾチーム製剤)
市販の焼き肉のたれ(pH5.5、水分活性0.95)に、ゼラチン、および製剤を添加した。アルミパウチに入れ、沸騰水中で10分間加熱処理し、ゼラチンを溶解させた。冷却後、B.subtillis芽胞液をそれぞれ約100cfu/g播種し、30℃で所定の期間保存した。検体を滅菌イオン交換水で10倍に希釈し、標準寒天培地に混合し、30℃で2日間培養し、その後生菌数を測定した。結果を以下の表11および12に示した。
結果
試験区1:アートフレッシュ(登録商標)50/50(AF50/50)を添加した場合
静菌剤を添加しない場合、焼肉のたれは保存7日目で被検菌数が>10^5を超えた。AF50/50のみのを添加した場合、保存7日目でも保存可能であったが、35日後には被検菌数が増加した。AF50/50および酸処理ゼラチンを添加した場合、35日後でも被検菌数は増加しなかった。
試験区2:アートフレッシュ(登録商標)NO.101(A101)を添加した場合
AF101添加のみの添加により、保存7日目でも保存可能であったが、10日後には被検菌が増加した。AF101および酸処理ゼラチンを添加した場合、10日後でも被検菌数の増加はごく僅かであった。一方で、AF101およびアルカリ処理ゼラチンを添加した場合、保存性向上は認められなかった。
リゾチーム、塩化リゾチームの枯草菌(耐熱性芽胞形成菌)に対する、静菌効果
STD培地にゼラチンを添加していない培地および2.0%ニッピゼラチンAP-100を添加した培地を調製した。培地は、pHを6.0となるように調製した。培地に菌体を100cfu/シャーレとなるように播種し、35℃で2日培養した。結果を以下の表13に示す。リゾチームをキユーピー株式会社、三菱ケミカルフーズ株式会社から購入し(それぞれリゾチームAおよびBとする)、塩化リゾチームを富士フィルム和光純薬株式会社から購入した。培地はリゾチーム類を表13に記載の終濃度となるように調製した。評価は、-:優れた抗菌効果が見られるレベル、±:抗菌効果が見られるレベル、+:多少の抗菌効果が見られるレベル、++:わずかに抗菌効果が見られるレベル、+++:抗菌剤なしと同レベルとして行った。
結果
いずれのメーカーで購入したリゾチームも、酸処理ゼラチンの添加により抗菌効果向上作用を示した。また、塩化リゾチームにおいても酸処理ゼラチンの添加により抗菌効果向上作用を示した。
Claims (3)
- 酸処理ゼラチンおよび/またはコラーゲンペプチドを含有することを特徴とする、
リゾチーム類および/またはナイシンを含有する抗菌剤の抗菌性向上剤であって、酸処理ゼラチンの平均分子量が40000~150000であり、コラーゲンペプチドの平均分子量が250~10000である、抗菌性向上剤。 - リゾチーム類および/またはナイシンを含有する抗菌剤に、
酸処理ゼラチンおよび/またはコラーゲンペプチドを共存させることを特徴とする、
前記抗菌剤の抗菌性向上方法であって、酸処理ゼラチンの平均分子量が40000~150000であり、コラーゲンペプチドの平均分子量が250~10000であり、抗菌対象物に対する酸処理ゼラチンとコラーゲンペプチドの合計の添加量が0.025~6.0重量%であり、抗菌対象物に対するリゾチーム類とナイシンの合計の添加量が0.000025~3.0重量%である、抗菌性向上方法。 - リゾチーム類および/またはナイシン、ならびに酸処理ゼラチンおよび/またはコラーゲンペプチドを含有する抗菌剤であって、酸処理ゼラチンの平均分子量が40000~150000であり、コラーゲンペプチドの平均分子量が250~10000であり、酸処理ゼラチンとコラーゲンペプチドの合計含有量が0.025~6.0重量%であり、リゾチーム類とナイシンの合計含有量が0.000025~3.0重量%である、抗菌剤(ただし、酸化亜鉛を含むものを除く)。
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