JP7449237B2 - 病理組織検体梱包素材及び組織切片のコンタミネーション防止用袋 - Google Patents
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Description
細胞の透過を防止し、かつ各種溶液を通す素材は、病理組織標本作製の際に必要となるが、これまで、この課題を克服する技術又は情報は存在しなかった。
(1)下記の6つの評価項目のうち少なくとも3つの項目の条件を満たす、組織切片梱包用素材。
網目平均径:5 μm以下
厚み:100 μm以下
薬品耐性:目視にて少なくとも溶解、劣化又は変色の著しい変化なし
透水性:透水係数が10-3以上
保水性:保水率が200%未満
有核細胞の通過度:200~600倍の高倍視野における10視野中に認める細胞が2個以下
(2)100℃から400℃の熱をかけると素材が溶解して素材同士が接着する、(1)に記載の素材。
(3)素材の網目平均径が1μmから5 μmである、(1)に記載の素材。
(4)組織切片が病理組織切片である(1)に記載の素材。
(5)組織切片のコンタミネーション防止用袋であって、少なくとも一部が開口した第1区画室と、前記第1区画室の内部空間よりも小さい内部空間を有するとともに少なくとも一部が開口し組織切片を配置するための第2区画室と、前記第1区画室と前記第2区画室とを連結する連結部とを有し、前記第1区画室の開口部と前記第2区画室の開口部とは対向しており、前記第2区画室を前記第1区画室に向けて折り返したときに、前記第2区画室が前記第1区画室に収容される、前記コンタミネーション防止用袋。
(6)細胞を通さない網目平均径を有する素材で作製された、(5)に記載の袋。
(7)(1)~(4)のいずれか1項に記載の素材で作製された、(5)に記載の袋。
(8)前記第1区画室及び第2区画室が、いずれも矩形である(5)に記載の袋。
(9)前記第1区画室、第2区画室及び連結部が、1枚のシートにより形成されている、(5)に記載の袋。
(10)前記第2区画室に重り装着部が設けられた、(5)に記載の袋。
(11)前記第1区画室及び/又は第2区画室の一部にヒートシール部を設けた、(5)に記載の袋。
(12)(5)~(11)のいずれか1項に記載の袋を用いて、組織切片を固定液又は溶媒に浸漬することを特徴とする組織切片の浸漬方法。
(13)(5)~(11)のいずれか1項に記載の袋を用いて、組織切片を固定液又は溶媒に浸漬することを特徴とする組織切片のコンタミネーション防止方法。
また、従来のナイロンメッシュ袋は、組織レベルの漏出を防いだが、本発明により、細胞断片を含む細胞レベルでのコンタミネーションを防止することが可能となった。本発明の袋を用いることにより、組織切片、例えばゲノム医療に供する材料の質の向上を担保することができる。
本発明の第1の態様として、本発明は、主としてゲノム医療を支える質の高い病理組織標本を作製するための、病理組織梱包用素材を提供する。
本発明においては、細胞を通過させず、かつ各種溶液を容易に通過する素材のスクリーニングを行い、医療及びバイオ分野で使用可能な素材を見出した。
本発明により、細胞断片を含む細胞レベルでのコンタミネーションを防止することが可能となった。本発明の素材により作製された袋を用いることにより、組織切片、例えばゲノム医療に供する材料の質の向上を担保することができる。
本発明のスクリーニング法は、病理検査室におけるコンタミネーション防止対策として使用する素材の検証に用いられる。
本発明に用いられる細胞は、ホルマリン等により固定した細胞であるが、これに限らず、生きた細胞又は組織を用いることもできる。
本発明の素材は、各種試験により以下の性質を有するものである。
厚み:100 μm以下
薬品耐性:目視にて少なくとも溶解、劣化又は変色の著しい変化なし
透水性:透水係数が10-3以上
保水性:保水率が200%未満
有核細胞の通過度:200~600倍の高倍視野における10視野中に認める細胞が2個以下
(1)網目平均径
本発明の素材の網目構造は、細胞を通さない限り限定されるものではない。網目の隙間の大きさ(網目平均)は、カタログ値を参照するものとするが、簡易的に偏光顕微鏡にて測定確認する。網目平均径は5μm以下であり、1~5μm、好ましくは1μmである。
本発明の素材の厚みは、病理組織ブロックの作業工程で妨げない限り限定されるのではない。厚さはカタログ値を参照するものとするが、袋加工の折り曲げや折り返し、そして熱溶着を妨げない100 μm以下が好ましい。
薬品耐性は、耐薬品性試験(JIS A 5209:2014)により測定することができる。具体的には以下の通りである。
100%エタノール及び100%キシレンを蓋つきの容器に入れる。試料を半分に切断した後、一方の試料の全体を試験溶液に浸漬し、他方の試料は比較対照とする。
蓋で覆って常温で約8時間保持する。その後試料を水洗及び乾燥させた後、目視で確認する。目視での確認は、薬品による溶解、脆性破壊、劣化(色・艶など)などの著しい変化を指標とする。
確認の結果、目視にて少なくとも溶解、劣化又は変色において明らかな変化なしであれば、ブロック作成過程における有機溶媒に耐えうる梱包素材と判断する。
透水性は、変水位透水試験(JIS A 1218)変法により測定することができる。その範囲は以下の通りである。
そして、透水係数が少なくとも10-3であること、例えば10-3以上であれば、ブロック作成過程における各種溶媒の速やかな交換が可能であると判断する。
保水性は、一般不織布試験方法(JIS 1913:2019)により測定することができる。その内容は以下の通りである。
試料から100mm×100mmの試験片を3枚採取し、その質量を1mgまで測定する。適切な大きさの容器に水を入れ、試験片を15分以上浸漬する。次に、ピンセットで試験片を水中から取り出して1分間以上水をしたたり落とした後、その質量を1mgまで測定する。
m=(m2-m1)/m1×100
m:保水率
m1:試験片の標準状態での質量(mg)
m2:試験片を湿潤し、水をしたたり落とした後の質量(mg)
そして、保水率200%未満であれば、各種溶媒の吸収量が標本作製作業に支障がないと判断する。
有核細胞の通過度は、精密ろ過膜エレメント及びモジュールの細菌捕捉性能の試験方法(JISK3835:1990)の準用により測定することができる。
1000μlマイクロチップ及び200μlマイクロチップの先端を切り落として太い筒と細い筒を作成し、太い筒と細い筒との間にシートを挟んで試験フィルターアセンブリを作製する。これをパラフィルムにて梱包し、ろ過液回収用の1.5mlチューブに装着する。
10%ホルマリン細胞懸濁液600μlを試験フィルターアセンブリに満たす。自然ろ過でろ液を1.5mlチューブに回収する。スライドガラスに100%エタノールを滴下後速やかにろ液15μlを滴下する。自然乾燥後、パパニコロウ染色にて発色させる。シートの目を通過した赤血球と有核細胞の数を、高倍、例えば200倍から600倍、好ましくは400倍の10視野にてカウントする。
そして、有核細胞の通過度:顕微鏡の対物レンズが400倍の高視野で10か所を観察し、有核細胞の合計の数が2個以下であれば、梱包素材として適当な範囲と判断する。
また本発明の素材に100℃から400℃の熱をかけると(素材を100℃から400℃に熱すると)、素材が溶解して素材同士が接着する。
本発明の第2の態様として、本発明は、組織切片のコンタミネーション防止用袋を提供する。本発明のコンタミネーション防止用袋を「μ-filter sheet pocket」と称し、本明細書において「μSP」という。
本発明のμSPは、少なくとも一部が開口した第1区画室と、前記第1区画室の内部空間よりも小さい内部空間を有するとともに少なくとも一部が開口した第2区画室と、前記第1区画室と前記第2区画室とを連結する連結部とを有する。
前記第2区画室は、その内部空間に組織切片を配置するための区画室である。
前記第1区画室の開口部と前記第2区画室の開口部とは対向しており、前記第2区画室を前記第1区画室に向けて折り返したときに、前記第2区画室が前記第1区画室に収容される。
図1において、本発明のμSP1は、第1区画室10、第2区画室20、及び第1区画室10と第2区画室20とを連結する連結部30により構成される。
図1において、第1区画室10及び第2区画室20の形状はいずれも矩形であり、その一部が開口している。但し、第1区画室10及び第2区画室20の形状は特に限定されるものではなく、矩形のほか、円形、楕円形のいずれでもよい。
連結部30は、第1区画室10の開口部50aから第2区画室20の開口部50bまでの間を連結する領域であり、組織切片を収容した第2区画室を包み込むために所定の長さを有する。
また、図1において、本発明のμSP1には、第1区画室10の開口部50a部分に、はみ出し部40を形成させることができる。
本発明のμSP1を用いて、組織切片70を第2区画室20に収容する態様を以下に説明する。
第2区画室20の開口部50bから第2区画室20の内部空間に組織切片70を挿入した後、組織切片70を谷折りして数回折り畳んで、組織切片を包み込む。組織切片70を包み込んだ第2区画室20を、第1区画室10の内部空間にスライドさせて収納する。
図5は、第2区画室に重り装着部80及びヒートシール部90を設けた図であり、図6は図5の展開図である。図7は、組織切片70を第2区画室に収容し、重り収容部80に重り81を収容した図である。
ヒートシール部90は、該当部分に接着剤を使用せず同質の熱可塑性樹脂シート同士を熱融着する。ヒートシール部を設けることにより、キシレン等の溶媒に浸しても耐えうる構造を獲得する効果が得られる。
例えば、本発明において使用するμSPの素材は、ナイロン製、ポリエステル製、ポリフルオロエチレン製、又はこれらの組合せの複合合成シートなどが挙げられる。
本発明のμSPの網目構造は、細胞を通さない限り限定されるものではなく、網目の隙間の大きさは1μm~5μmである。
試験フィルタアセンブリは以下の通り作製した(図8)。
1000μlマイクロチップ1個、200μlチップ2個を用意し、ハサミでカットして、1000μlマイクロチップ2.5cm(ア)と、その残りの先端部分(イ)、200μlチップ2cm(ウ)、200μlチップ3cm(エ)を用意した。なお、1000μlの先端部分(イ)はシートの厚さ調整に用いた。
エ→ウ→イの順にチューブをしっかり挿入し(図8パネルA)、イの余分な部分を切り落とした(図8パネルBの矢印)。
空気のトラップを防止するために、(ア)をろ過用シートの固定位置に合わせ、余分な部分を切り落とした(パネルCの矢印)。
液漏れ防止のためにパラフィルムを巻き(図8パネルD)、試験フィルタを作製した。
このように作製したフィルタを、所定の試験に使用した。
試作袋の作製
本実施例では、少なくとも一部が開口した第1区画室と、前記第1区画室の内部空間よりも小さい内部空間を有するとともに少なくとも一部が開口した第2区画室と、前記第1区画室と前記第2区画室とを連結する連結部とを有する袋を作製した(図1)。
図2に示す型紙を作製し、第1区画室の短辺が70mmで長辺(谷折り部分の長さ)が90mm、第2区画室の短辺(谷折り部分の長さ)が70mm、長辺が75mmのμSPを作製した。第1区画室に設けるはみ出し部は短辺を30mm、長辺を90mmとした。
網目平均径:2 μm
厚み:75 μm
薬品耐性:溶解、劣化又は変色の著しい変化なし
透水性:透水係数が6.5x10-3cm/s
保水性:保水率が112 %
有核細胞の通過度:200~600倍の高倍視野における10視野中に認める細胞が2個以下
図10に示すように、本発明のμSPを使用した場合は、使用しない場合あるいは従来のメッシュ袋と比較して、細胞のコンタミを防止することができた。本実験では、μSPを使用した場合、作成した15枚全ての標本で細胞一個の混入も認めなかった。
また、上記袋を用いて、細胞の通過試験を行い、通過試験にてカウントした細胞像を図11に示す。図11より、細繊維の素材を用いたシートは、3重にして使用すると細胞の通過をほとんど防止できることが示された。
5つの組織切片梱包用素材を用いた試作袋を使用すると標本作製に支障がないことが確認された。
<実施例3>
本実施例では、重り収容部及びヒートシール部を設けた袋を、実施例2に準じて作製した。
実際に作製した袋を図12に示す。
図12(A)は、重りと組織切片を区画室に収容した図であり、(B)は、区画室を折り畳んだ図である。ヒートシール部は、100℃から400℃の熱をかけることにより溶着させた。
40:はみ出し部、50a:開口部、50b:開口部、60:接着しろ、70:組織切片
80:重り装着部、81:重り、90:ヒートシール部
Claims (15)
- 下記の3つの評価項目の条件を満たす、組織切片梱包用素材。
網目平均径:5 μm以下
薬品耐性:耐薬品性試験(JIS A 5209:2014)により測定した場合に目視にて少なくとも溶解、劣化又は変色の著しい変化なし
有核細胞の通過度:200~600倍の高倍視野における10視野中に認める細胞が2個以下 - さらに、以下の3つの評価項目の条件を満たす、請求項1に記載の組織切片梱包用素材。
厚み:100 μm以下
透水性:透水係数が10 -3 以上
保水性:保水率が200%未満 - 100℃から400℃の熱をかけると素材が溶解して素材同士が接着する、請求項1又は2に記載の素材。
- 素材の網目平均径が1μmから5μmである、請求項1~3のいずれか一項に記載の素材。
- 素材の網目平均径が1μmから2μmである、請求項1~3のいずれか一項に記載の素材。
- 組織切片が病理組織切片である請求項1~5のいずれか一項に記載の素材。
- 組織切片のコンタミネーション防止用袋であって、少なくとも一部が開口した第1区画室と、前記第1区画室の内部空間よりも小さい内部空間を有するとともに少なくとも一部が開口し組織切片を配置するための第2区画室と、前記第1区画室と前記第2区画室とを連結する連結部とを有し、前記第1区画室の開口部と前記第2区画室の開口部とは対向しており、前記第2区画室を前記第1区画室に向けて折り返したときに、前記第2区画室が前記第1区画室に収容され、請求項1~6のいずれか1項に記載の素材で作製された、前記コンタミネーション防止用袋。
- 1~5μmの網目平均径を有する素材で作製された、請求項7に記載の袋。
- 前記第1区画室及び第2区画室が、いずれも矩形である請求項7又は8に記載の袋。
- 前記第1区画室、第2区画室及び連結部が、1枚のシートにより形成されている、請求項7~9のいずれか一項に記載の袋。
- 前記第2区画室に重り装着部が設けられた、請求項7~10のいずれか一項に記載の袋。
- 前記第1区画室及び/又は第2区画室の一部にヒートシール部を設けた、請求項7~11のいずれか一項に記載の袋。
- 請求項7~12のいずれか1項に記載の袋を用いて、組織切片を固定液又は溶媒に浸漬することを特徴とする組織切片の浸漬方法。
- 請求項7~12のいずれか1項に記載の袋を用いて、組織切片を固定液又は溶媒に浸漬することを特徴とする組織切片のコンタミネーション防止方法。
- 組織切片を梱包するための、請求項1~6のいずれか1項に記載の素材の使用。
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