JP7399507B2 - 乾癬を治療又は予防する薬物の製造におけるアネモシドb4の用途 - Google Patents
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Description
1.1 薬物及び試薬
アネモシドB4(実験室で抽出)、イミキモドクリーム(四川明欣薬業有限責任公司製品、ロット番号101112)、アシトレチンカプセル(重慶華邦只要有限責任公司、医薬品製造承認番号20010126)、注射用生理食塩水(四川科倫薬業股▲フン▼有限公司、ロット番号:L219012211)。ELISA試薬キットは欣博盛社より購入し、CD3、CD4、CD8抗体はBD社より購入した。
SPFグレード、体重約180gの健康なオスのSDラット(6~8週齢)60匹が北京維通利華実験動物技術有限公司から提供された。動物合格証番号:SCXK京2016-0006。
1/1000精密天秤(梅特勒-托利多(メトラー・トレド)儀器上海有限公司、型番:ME204E)、低温高速遠心分離機(エッペンドルフ(Eppendorf)社、型番:5425R)、病理画像アナライザ(日本オリンパス社、型番:BX-60)、組織破砕装置(傑霊儀器制造天津有限公司、型番:TP-24)。
オスのSDラットをブランク対照群、モデル対照群、アネモシドB4 5mg/kg胃内投与群、アネモシドB4 10mg/kg胃内投与群、アネモシドB4 20mg/kg胃内投与群、及びアシトレチン 5mg/kg胃内投与群の6群に分けた。各群のマウスの背部剃毛面積は2.5cm×3cmの領域とした。ブランク対照群を除くその他の5群については、5%イミキモドクリーム62.5mgを毎日投与して乾癬を誘発し、連続8日間にわたりモデル作製を行った。そして、モデル作製に成功したと判断したあと、7日間連続で投薬を行った。アネモシドB4群については、胃内投与によって対応投与量のアネモシドB4溶液を与え、アシトレチン陽性対照薬群については、胃内投与によってアシトレチン溶液を与えた。また、モデル対照群にはワセリン62.5mgを塗布し、ブランク対照群にはワセリン62.5mgを塗布した。投薬は連続7日間行った。
2.1 PASIスコア
各群のマウスの乾癬様皮膚病変面積及び疾病重症度(PASI)スコアについて、皮膚のモデル作製部位を撮影記録した。また、PASIスコアの基準に基づき、マウスの皮膚病変箇所における紅斑、鱗屑及び浸潤・肥厚度合に0~4点を付与し、これらの点数を加算して合計点を取得した。PASIスコアの基準は、0:なし、1:軽症、2:中等症、3:重症、4:極めて重症、であった。
投薬終了後、腹部大動脈から採血し、赤血球溶解バッファを加えて遠心分離によりT細胞を収集した。また、4℃でCD4、CD3、CD8抗体を20min培養し、バッファで1回洗浄した。そして、遠心分離にかけて細胞を収集し、フローサイトメトリーによりT細胞のサブセット比率を測定した。
GraphPad Prism 8.4.3ソフトウェアを用いて統計を行った。データはいずれもmean±SDで表した。一元配置分散分析(ANOVA)を実施して群間の差の有意性を評価したところ、統計学的に有意であった(***P<0.001、###P<0.001)。
3.1 乾癬皮膚病変に対するアネモシドB4の影響
図3に示すように、ブランク対照群と比較して、モデル対照群のマウス血清中のM-CSF、VEGF、IL-6及びIL-17レベルはいずれも顕著に増加した。一方、アネモシドB4の各投与量群及びアシトレチン群では、血清中のM-CSF、VEGF、IL-6及びIL-17レベルが顕著に低下した。なお、図中のAはM-CSFレベル、BはVEGFレベル、CはIL-6レベル、DはIL-17レベルを示している。(注:ブランク対照群と比較して、###P<0.001、モデル対照群と比較して、**P<0.01、***P<0.05であった)。以上の結果より、アネモシドB4は、血清中のM-CSF、VEGF、IL-6及びIL-17レベルを低下させることで乾癬治療作用を発揮すると思われる。
図4に示すように、ブランク対照群と比較して、モデル対照群は、マウス血清中のCD4+、CD3+及びCD4+/CD8+比がいずれも顕著に低下した。一方、アネモシドB4の各投与量群及びアシトレチン群では、血清中のCD4+、CD3+及びCD4+/CD8+比がいずれも顕著に上昇した。なお、図中のAはCD4+比率、BはCD3+比率、CはCD4+/CD8+を示している(注:ブランク対照群と比較して、###P<0.001、モデル対照群と比較して、**P<0.01、***P<0.05であった)。以上の結果より、アネモシドB4は、血清中のCD4+、CD3+及びCD4+/CD8+レベルを上昇させることで乾癬治療作用を発揮すると思われる。
アネモシドB4群は、乾癬に対し一定の治療作用を有する。ブランク対照群と比較して、モデル対照群のマウスの皮膚病変には、多くの紅斑、小さな鱗屑、皮膚病変の浸潤・肥厚が認められた。一方、アネモシドB4の各投与量群及びアシトレチン群の皮膚病変症状はモデル群に比べ軽減した。また、モデル群のPASIスコアは上昇したが、アネモシドB4投与群ではPASIスコアを顕著に低下させることができた。また、モデル群のM-CSF、VEGF、IL-6及びIL-17レベルは上昇したが、アネモシドB4の各投与量群では、投薬後にM-CSF、VEGF、IL-6及びIL-17レベルが低下した。また、ブランク対照群と比較して、モデル対照群は、血清中のCD3+(%)、CD4+(%)及びCD4+/CD8+比が顕著に低下した。一方、アネモシドB4群は、CD3+(%)、CD4+(%)及びCD4+/CD8+レベルを顕著に上昇させることができた。以上の結果より、アネモシドB4は、乾癬に対する治療作用を有し、その作用メカニズムは、炎症反応の抑制、免疫機能の調節、血管新生の抑制に関連すると思われる。
Claims (7)
- 乾癬を治療又は予防する薬物の製造におけるアネモシドB4の使用。
- 前記薬物は、治療有効量のアネモシドB4と、薬学的に許容可能なベクターを含有することを特徴とする請求項1に記載の使用。
- 前記薬物は、治療有効量のアネモシドB4の塩酸塩、過塩素酸塩、メタンスルホン酸塩、リン酸塩、クエン酸塩又は硫酸塩と、薬学的に許容可能なベクターを含有することを特徴とする請求項1に記載の使用。
- 薬学的に許容可能なベクターは、希釈剤、可溶化剤、共溶媒、崩壊剤、分散剤、滑沢剤、矯味剤、酸化防止剤、結合剤、吸収剤、湿潤剤、緩衝剤、架橋剤を含むことを特徴とする請求項2又は3に記載の使用。
- 前記薬物は、薬学的に許容される剤形に製造されることを特徴とする請求項4に記載の使用。
- 前記剤形には、丸剤、タブレット、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、滴丸、滴剤、スプレー剤、注射剤、懸濁液、膏剤、ゲル剤、座薬が含まれることを特徴とする請求項5に記載の使用。
- アネモシドB4の投与量は5mg/kg・d以上とすることを特徴とする請求項1に記載の使用。
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