JP7391517B2 - 細胞間接着低下抑制剤 - Google Patents

Description

本発明は、細胞間接着低下抑制剤およびそれを含有する皮膚外用剤、化粧料または医薬部外品等に関する。

ストレス等による肌機能の低下の抑制作用を有する成分が求められており、肌機能の低下の抑制に関する研究が進められている。そのうち、リンパ管細胞は、リンパ管細胞の細胞間接着低下等により、リンパ管細胞から回収される水分が減少すると、肌内部に水分が貯留され、むくみが起こる原因の一つとして考えられることから、肌機能の低下の抑制に関する研究の対象の一つである。

一方、トウニン（桃仁）は、モモ（Prunus persica Batsch）を基源植物とし、その種子が、駆お血、潤腸、排膿等を目的とした漢方生薬として用いられてきた。また、トウニンの種子抽出物を含む肌荒れ予防および改善用皮膚化粧料が知られている（特許文献１）。

特開2002-275044号公報

上記のとおり、肌機能の低下の抑制作用を有する成分が求められている。
本発明は、このような状況下為されたものであり、肌機能の低下の抑制作用を有する成分として、リンパ管細胞の細胞間接着低下を抑制する成分を提供することを課題とする。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、トウニンの抽出物（以下、「エキス」と称することがある）がリンパ管細胞の細胞間接着低下を抑制する作用を有することを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明の要旨は以下に関する。

［１］ トウニン（Prunus persica Batsch）の抽出物からなる、細胞間接着低下抑制剤。
［２］ 細胞がリンパ管細胞である、［１］に記載の細胞間接着低下抑制剤。
［３］ ［１］または［２］に記載の細胞間接着低下抑制剤を含有する、むくみ改善用の皮膚外用剤。
［４］ 化粧料または医薬部外品である、［３］に記載の皮膚外用剤。

本発明によれば、トウニンの抽出物を用いた、細胞間接着低下抑制剤を提供できる。

図１は、皮膚リンパ管微小血管内皮細胞にCortisolを添加した際の免疫組織染色画像（図面代用写真）である。細胞間にZO-1、細胞内に核の存在が確認できる。図１のＡは、Cortisol 0 μg/ml添加の細胞の結果、図１のＢは、Cortisol 5 μg/ml添加の細胞の結果を示す。 図２は、皮膚リンパ管微小血管内皮細胞のタイトジャンクション関連タンパク質であるZO-1の免疫組織染色画像（図面代用写真）である。細胞間にZO-1、細胞内に核の存在が確認できる。図２のＡは、トウニンエキス0 %添加の細胞の結果、図２のＢは、トウニンエキス0.05 %添加の細胞の結果を示す。

＜細胞間接着低下抑制剤＞
本発明の一態様は、トウニンの抽出物からなる、細胞間接着低下抑制剤（以下、「本発明の細胞間接着低下抑制剤」と称することがある）に関する。
上記のとおり、トウニンは漢方生薬として用いられてきたが、細胞間接着低下抑制作用については知られておらず、本発明者等によりその作用が知見され、本発明がなされたものである。

（細胞）
本発明の細胞間接着低下抑制剤が対象とする細胞としては、リンパ管細胞であり、例えば、皮膚リンパ管内皮細胞等が挙げられる。

（トウニンの抽出物）
本発明の細胞間接着低下抑制剤として用いられるトウニンの抽出物の原料としては、基源植物であるモモ（Prunus persica Batsch）自体、これを乾燥、粉砕、細切等加工した加工物等を用いることができる。植物の使用できる部位は特段の限定はないが、漢方生薬の使用部位に準じた部位を使用するのが特に好ましく、種子を特に好ましく用いることができる。起源植物としては、自生若しくは生育された植物、漢方生薬原料等として販売されるもの等を限定されず、用いることができる。

トウニンの抽出物は、植物自体、これを乾燥、粉砕、細切等加工した加工物等を溶媒で抽出した抽出物、抽出物より溶媒を除去した抽出物の溶媒除去物、抽出物またはその溶媒除去物を分画精製した分画精製物またはその溶媒除去物等を用いることができる。抽出物としては、自生若しくは生育された植物、漢方生薬原料等として販売されるものを用いた抽出物、市販されている抽出物等を限定されず、用いることができる。

抽出操作は、常法の植物の抽出物の抽出操作を用いることができる。
抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノール等のアルコール類、1,3-ブタンジオール、ポリプロピレングリコール等の多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル類等の極性溶媒から選択される１種または２種以上が好適なものとして例示することができる。好ましくは、水およびエタノールが挙げられる。

具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位またはその乾燥物1質量部に対して、溶媒を1～30質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却後、所望により不溶物および／または溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられる。
植物由来の極性溶媒による抽出物をろ過後、カラムクロマトグラフィー等にて分画し、有効成分濃度を高め、より効果の高い画分を選択してもよい。

＜皮膚外用剤、化粧料および医薬部外品＞
さらなる本発明の一態様は、本発明の細胞間接着低下抑制剤を含有する、むくみ改善用の皮膚外用剤（以下、「本発明の皮膚外用剤」と称することがある）に関する。
さらなる本発明の一態様は、化粧料または医薬部外品である、本発明の皮膚外用剤（以下、「本発明の化粧料または医薬部外品」と称することがある）に関する。
本発明の皮膚外用剤、化粧料または医薬部外品は、有効成分として、本発明の細胞間接着低下抑制剤を含有する。

本発明の皮膚外用剤は、リンパ管細胞の細胞間接着低下を抑制する機能を有し、リンパ管細胞から回収される水分の減少を抑制し、肌内部の水分貯留を抑制することで、むくみ等を改善すると考えられる。むくみ改善の効果は、常法により確認することができ、例えば、身体の各部位のうち、一般にむくみやすいとされる部位であるふくらはぎや大腿などの脚部、上腕や前腕等の腕部、顔等の周囲長、体積等を、皮膚外用剤の適用前後で測定し、比較すること等によって確認することができる。
なお、後記実施例に示されるとおり、リンパ管内皮細胞はコルチゾールにより、細胞間接着が弱くなることが明らかとなった。リンパ管内皮細胞の細胞間接着が弱まることで、肌機能の低下につながると考えられている。
ここで、本発明の皮膚外用剤は、リンパ管細胞の細胞間接着低下を抑制する機能を有しており、限定されないが、例えばストレス等によるコルチゾールの亢進による細胞間接着低下に起因する肌機能低下を改善する用途に用いることができる。コルチゾールの亢進による肌機能低下による事象としては、限定されないが、例えば、むくみ等が挙げられる。
本発明の皮膚外用剤の使用対象としては、肌機能の低下の抑制が望まれる対象であれば限定されず、例えば哺乳類、具体的にはヒトが挙げられる。対象の年齢、性別等も限定されない。

本発明の皮膚外用剤の投与経路は、特に限定されないが、通常は経皮である。
投与量としては、特に限定されないが、所望の効果と安全性とを考慮して、例えば経皮投与する場合は、有効成分である細胞間接着低下抑制剤の固形物換算で0.0002～0.05 mg／日が好ましい。

本発明の細胞間接着低下抑制剤を、皮膚外用剤として使用する場合、本発明の細胞間接着低下抑制剤は、限定されないが、例えば、皮膚外用剤全量に対し、好ましくは0.0001質量％～10質量％、より好ましくは、0.001質量％～5質量％、さらに好ましくは、0.01質量％～3質量％含有することができる。植物抽出物の溶媒除去物を使用する場合は、皮膚外用剤全量に対し、好ましくは0.0000001質量％～10質量％、より好ましくは、0.0001質量％～5質量％、さらに好ましくは、0.001質量％～3質量％含有することができる。上記下限値以上であれば、本発明の皮膚外用剤の効果が発揮され、上限値以下であれば効果の頭打ちを避けることができると考えられる。

化粧料および医薬部部外品に適用される場合、通常化粧料および医薬部部外品に使用される成分を広く配合することが可能であり、また、その剤形や用途についても、何ら限定されないが、化粧料および医薬部部外品としては特に顔、フェイスライン等に適用されるものに好適である。

以下、化粧料に適用される場合、化粧料中に含有させることができる成分について説明する。例えば、炭化水素類、エステル類、トリグリセライド類、脂肪酸、高級アルコール等の油性成分、アニオン界面活性剤類、両性界面活性剤類、カチオン界面活性剤類、非イオン界面活性剤類等の界面活性剤、多価アルコール類、増粘・ゲル化剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、色剤、防腐剤、粉体等を任意に配合することができる。
また、本発明の細胞間接着低下抑制剤の効果を妨げない限り、本発明の細胞間接着低下抑制剤以外の有効成分を含有してもよい。有効成分としては、限定されないが、美白成分、シワ改善成分、抗炎症成分、動植物由来の抽出物等が挙げられる。

美白成分としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、４－ｎ－ブチルレゾルシノール、アスコルビン酸グルコシド、３－О－エチルアス
コルビン酸、トラネキサム酸、アルブチン、１－トリフェニルメチルピペリジン、１－トリフェニルメチルピロリジン、２－（トリフェニルメチルオキシ）エタノール、２－（トリフェニルメチルアミノ）エタノール、２－（トリフェニルメチルオキシ）エチルアミン、トリフェニルメチルアミン、トリフェニルメタノール、トリフェニルメタンおよびアミノジフェニルメタン、Ｎ－（p－トルイル）システイン酸、Ｎ－（p－メトキシベンゾイル）システイン酸等が挙げられる。更にその他の美白成分として、Ｎ－ベンゾイル－セリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－エチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－メトキシベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－フルオロベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－トリフルオロメチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（２－ナフトイル）セリン、Ｎ－（４－フェニルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリン メチルエステル、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリン エチルエステル、Ｎ－（２－ナフトイル）セリン メチルエステル、Ｎ－ベンゾイル－Ｏ－メチルセリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）－Ｏ－メチルセリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）－Ｏ－アセチルセリン、Ｎ－（２－ナフトイル）－Ｏ－メチルセリン等があげられる。

これらの美白成分は、既に市販されているものもあれば、合成により入手することもできる。例えば、３－О－エチルアスコルビン酸は、特開平８－１３４０５５号公報に記載の公知の方法で合成することが出来る。市販品（日本精化製「ＶＣエチル」）もあるので、これらを入手して使用することが可能である。１－トリフェニルメチルピペリジン、１－トリフェニルメチルピロリジン、２－（トリフェニルメチルオキシ）エタノール、２－（トリフェニルメチルアミノ）エタノール、２－（トリフェニルメチルオキシ）エチルアミン、トリフェニルメチルアミン、トリフェニルメタノール、トリフェニルメタン、アミノジフェニルメタンは特許文献ＷＯ２０１０／０７４０５２号パンフレットに、Ｎ－（ｏ－トルオイル）システイン酸、Ｎ－（ｍ－トルオイル）システイン酸、Ｎ－（ｐ－トルオイル）システイン酸、Ｎ－（ｐ－メトキシベンゾイル）システイン酸、Ｎ－（４－フェニルベンゾイル）システイン酸、Ｎ－（ｐ－トルオイル）ホモシステイン酸、はＷＯ２０１１－０８７００６号パンフレットに、Ｎ－ベンゾイル－セリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－エチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－メトキシベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－フルオロベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－トリフルオロメチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（２－ナフトイル）セリン、Ｎ－（４－フェニルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリン メチルエステル、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリン エチルエステル、Ｎ－（２－ナフトイル）セリン メチルエステル、Ｎ－ベンゾイル－Ｏ－メチルセリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）－Ｏ－メチルセリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）－Ｏ－アセチルセリン、Ｎ－（２－ナフトイル）－Ｏ－メチルセリン等はＷＯ２０１１／０７４６４３号パンフレットに、それぞれその合成方法が公開されているので、該開示に従い合成することができる。

化粧料における美白成分の含有量は、通常0.001～10質量%であり、0.01～10質量%が好ましく、0.1～5質量%がより好ましい。

シワ改善成分としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、ビタミンAまたはその誘導体が、レチノ－ル、レチナ－ル、レチノイン酸、トレチノイン、イソトレチノイン、レチノイン酸トコフェロ－ル、パルミチン酸レチノ－ル、酢酸レチノ－ルやウルソ－ル酸ベンジルエステル、ウルソール酸リン酸エステル、ベツリン酸ベンジルエステル、ベンジル酸リン酸エステルが挙げられる。化粧料におけるシワ改善成分の含有量は、通常0.01～30質量%であり、0.1～10質量%が好ましく、1～5質量%がより好ましい。

動植物由来の抽出物としては、一般的に医薬品、化粧料、食品等に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、アケビエキス、アスナロエキス、アスパラガスエキス
、アボガドエキス、アマチャエキス、アーモンドエキス、アルニカエキス、アロエエキス、アロニアエキス、アンズエキス、イチョウエキス、インドキノエキス、ウイキョウエキス、ウドエキス、エイジツエキス、エゾウコギエキス、エンメイソウエキス、オウゴンエキス、オウレンエキス、オタネニンジンエキス、オトギリソウエキス、オドリコソウエキス、オレンジエキス、カキョクエキス、カッコンエキス、カモミラエキス、カロットエキス、カワラヨモギエキス、カンゾウエキス、キウイエキス、キューカンバーエキス、グアバエキス、クジンエキス、クマザサエキス、クララエキス、クルミエキス、グレープフルーツエキス、黒米エキス、クロレラエキス、クワエキス、ケイケットウエキス、ゲットウヨウエキス、ゲンチアナエキス、ゲンノショウコエキス、紅茶エキス、ゴボウエキス、コメエキス、コメ発酵エキス、コメヌカ発酵エキス、コメ胚芽油、コケモモエキス、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンザシエキス、サンシャエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シソエキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、ショウキョウエキス、ショウブ根エキス、シラカバエキス、スギナエキス、ステビアエキス、ステビア発酵物、セイヨウキズタエキス、セイヨウサンザシエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、セージエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ソウハクヒエキス、ダイオウエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タイムエキス、タンポポエキス、チョウジエキス、チンピエキス、甜茶エキス、トウガラシエキス、トウキエキス、トウキンセンカエキス、トウヒエキス、ドクダミエキス、トマトエキス、納豆エキス、ニンジンエキス、ニンニクエキス、ノバラエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、ハスエキス、ハス胚芽エキス、パセリエキス、バーチエキス、ハマメリスエキス、ヒキオコシエキス、ヒノキエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ブッチャーブルームエキス、ブドウエキス、ブドウ種子エキス、ヘチマエキス、ベニバナエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、ボタンエキス、ホップエキス、マツエキス、マロニエエキス、ミズバショウエキス、ムクロジエキス、メリッサエキス、モズクエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユーカリエキス、ユキノシタエキス、ユズエキス、ユリエキス、ヨクイニンエキス、ヨモギエキス、ラベンダーエキス、リンゴエキス、ルイボス茶エキス、レイシエキス、レタスエキス、レモンエキス、レンギョウエキス、レンゲソウエキス、ローズエキス、ローズマリーエキス、ローマカミツレエキス、ローヤルゼリーエキス、ワレモコウエキス等のエキスが好ましいものとして挙げられる。化粧料中における動植物由来抽出物の含有量は、通常0.0001～30質量%であり、0.001～10質量%が好ましく、0.01～5質量%がより好ましい。

抗炎症成分としては、クラリノン、グラブリジン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、パントテニルアルコール等が挙げられ、好ましくは、グリチルリチン酸およびその塩、グリチルレチン酸アルキルおよびその塩、並びに、グリチルレチン酸およびその塩である。
化粧料中における抗炎症成分の含有量は、通常0.01～30質量%であり、0.1～10質量%が好ましく、1～5質量%がより好ましい。

油性成分としては、極性油、揮発性炭化水素油等が挙げられる。
極性油としては、合成エステル油として、ミリスチン酸イソプロピル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸デシル、オレイン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、酢酸ラノリン、ステアリン酸イソセチル、イソステアリン酸イソセチル、１２－ヒドロキシステアリル酸コレステリル、ジ－２－エチルヘキシル酸エチレングリコール、ジペンタエリスリトール脂肪酸エステル、モノイソステアリン酸Ｎ－アルキルグリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ－２－ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ－２－エチルヘキシル酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸ト
リメチロールプロパン、テトラ－２－エチルヘキシル酸ペンタンエリスリトール、トリ－２－エチルヘキシル酸グリセリン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパンを挙げることができる。

さらに、セチル２－エチルヘキサノエート、２－エチルヘキシルパルミテート、トリミリスチン酸グリセリン、トリ－２－ヘプチルウンデカン酸グリセライド、ヒマシ油脂肪酸メチルエステル、オレイン酸オイル、セトステアリルアルコール、オレイルアルコール、ステアリルアルコール、オクチルドデカノール、アセトグリセライド、パルミチン酸２－ヘプチルウンデシル、アジピン酸ジイソブチル、Ｎ－ラウロイル－Ｌ－グルタミン酸－２－オクチルドデシルエステル、アジピン酸ジ－２－ヘプチルウンデシル、エチルラウレート、セバチン酸ジ－２－エチルヘキシル、ミリスチン酸２－ヘキシルデシル、パルミチン酸２－ヘキシルデシル、アジピン酸２－ヘキシルデシル、セバチン酸ジイソプロピル、コハク酸２－エチルヘキシル、酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸アミル、クエン酸トリエチル、オクチル メトキシシンナメート等も挙げられる。

また、天然油として、アボカド油、アマニ油、エノ油、オリーブ油、カヤ油、牛脂、ゴマ油、小麦胚芽油、コメヌカ油、サザンカ油、サフラワー油、スクワラン、大豆油、茶実油、ツバキ油、シナギリ油、タートル油、ナタネ油、トウモロコシ油、胚芽油、パーシック油、ヒマシ油、ホホバ油、日本キリ油、マカデミアナッツ油、ミンク油、綿実油、椰子油、落花生油、卵黄油、カルナウバワックス、トリグリセリン、トリオクタン酸グリセリン、トリイソパルミチン酸グリセリン等が挙げられる。

炭化水素油としては、例えば、直鎖状または分岐状の炭化水素油が挙げられ、揮発性の炭化水素油であっても不揮発性の炭化水素油であってもよい。炭化水素油の具体例としては、合成スクワラン、植物性スクワラン、スクワレン、流動イソパラフィン、軽質イソパラフィン、水添ポリイソブテン、イソドデカン、ステアリン酸、軽質流動イソパラフィン、イソヘキサデカン、流動パラフィン、プリスタン、α－オレフィンオリゴマー、オゾケライト、セレシン、パラフィン、パラフィンワックス、ポリエチレンワックス、ポリエチレン・ポリプロピレンワックス、（エチレン／プロピレン／スチレン）コポリマー、（ブチレン／プロピレン／スチレン）コポリマー、ポリイソブチレン、マイクロクリスタリンワックス、ワセリン等が挙げられる。

界面活性剤としては、脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル、スルホコハク酸エステルやポリオキシエチレンアルキル硫酸ナトリウム等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド、ジアルキルアンモニウム塩等のカチオン界面活性剤類、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、イミダゾリン系両性界面活性剤（２－ココイル－２－イミダゾリニウムヒドロキサイド－１－カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等） 、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ－ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ－グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等） 、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２－オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・Ｐ
ＯＰ２－デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類、等が挙げられる。

多価アルコールとしては、ポリエチレングリコール、グリセリン、1,3-ブタンジオール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、1,2-ペンタンジオール、2,4-ヘキシレングリコール、1,2-ヘキサンジオール、1,2-オクタンジオール等が挙げられる。

増粘剤としては、グアガム、クインスシード、カラギーナン、ガラクタン、アラビアガム、ペクチン、マンナン、デンプン、キサンタンガム、カードラン、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、グリコーゲン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、トラガントガム、ケラタン硫酸、コンドロイチン、ムコイチン硫酸、ヒドロキシエチルグアガム、カルボキシメチルグアガム、デキストラン、ケラト硫酸、ローカストビーンガム、サクシノグルカン、カロニン酸，キチン、キトサン、カルボキシメチルキチン、寒天、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルキル変性カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ベントナイト等が挙げられる。

粉体類としては、表面を処理されていてもよい、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、表面を処理されていてもよい、ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛の無機顔料類、表面を処理されていてもよい、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類、レーキ化されていてもよい赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類、が挙げられる。

紫外線吸収剤としては、パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤、２－（２'－ヒドロキシ－５'－ｔ－オクチルフェニル)ベンゾトリアゾール、４－メトキシ－４'－ｔ－ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類、等が挙げられる。

また、化粧料および医薬部部外品として適用される場合の剤型は、通常知られているローション剤形、乳液剤形、エッセンス剤形、クリーム剤形、粉体含有剤形等の何れをも取ることができる。

本発明の皮膚外用剤は、本発明の細胞間接着低下抑制剤と上記の様な任意成分を常法により処理することにより調製することができる。

以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の例示であり、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。

［材料］
＜評価サンプル＞
トウニンエキス：トウニン抽出液‐J（丸善製薬株式会社）
＜細胞＞
細胞名：皮膚リンパ管微小血管内皮細胞（HMVEC-dLyAd、ロンザ）
＜培地＞
培地名：EGM（登録商標）-2MV（ロンザ）
＜試薬類＞
・PBS
・0.05 % トリプシン‐EDTA
・4 % パラホルムアルデヒド
・0.5 % TritonX-100/PBS
・10 % ブロックエース
・DAPI Fluoromount-G
＜抗体＞
タイトジャンクション関連タンパク質であるZO-1に対する以下の抗体を用いて免疫組織染色を行った。
一次抗体：Rabbit anti ZO-1（Invitrogen, 61-7300）（10 % ブロックエースで200倍希釈）
二次抗体：Goat anti-Rabbit IgG Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa 488（Life tec., A11008）（10 % ブロックエースで250倍希釈）

＜参考例１＞皮膚リンパ管微小血管内皮細胞にCortisolを添加した際の細胞間接着関連タンパク質ZO-1の発現量変化により、Cortisolのリンパ管細胞の細胞間接着への影響を試験した。
試験は、以下の方法で行った。
［方法］
・凍結HMVECを75 cm²フラスコ3本に播種し（2.5×10⁵ cells/本）、翌日培地交換を実施
・3日後、細胞を回収し4 wellスライドチャンバーへ播種（7.0×10⁴ cells/well）
・2日後、Cortisol含有培地（0, 0.5, 1, 5 μg/ml）を添加し (1 ml/well)、5日あるいは7日培養（37℃）
・PBS(-) で洗浄、0.5 % TritonX-100/PBSを添加し、静置(10min)
・10％ブロックエースを添加し、静置(30 min)、一次抗体を添加し4 ℃で一晩静置
・PBS(-) で洗浄し(5 min×3)、二次抗体を添加し、静置(rt, 30 min)
・PBS(-) で洗浄後(5 min×4)、Milli-Q（登録商標）水で洗浄(2回)
・DAPI Fluoromount（登録商標）-Gで封入して顕微鏡観察

［結果］
観察結果を図１に示す。5 μg/mlのCortisol添加群で、緑色の蛍光が減少したことから、リンパ管細胞にCortisolを添加すると、細胞間接着が弱くなることが明らかとなった。

＜実施例１＞
皮膚リンパ管微小血管内皮細胞にトウニンエキスを添加した際の細胞間接着関連タンパク質ZO-1の発現量変化により、トウニンエキスのリンパ管細胞の細胞間接着への影響を試験した。
試験は、以下の方法で行った。

［方法］
＜細胞起眠～回収＞
・凍結HMVECを75cm²フラスコ3本に播種し（1.9×10⁵ cells/本）、翌日、培地交換を実施した。
・5日後、細胞を回収し4 wellスライドチャンバー3枚へ播種した（6.0×10⁴ cells/well）。
・2日後、トウニンエキス添加培地（トウニンエキス0.05 %、0.1 %、0.125 %の3濃度）への交換を実施した。
・トウニンエキス添加後、37℃で4日培養後回収した（n=3）。
＜固定＞
・PBSで洗浄
・4 %パラホルムアルデヒドで固定（10分）
・PBSで洗浄
＜免疫染色＞
・0.5 % TritonX-100/PBSを添加し、静置（10分）
・10 %ブロックエースを添加し、静置（30分）
・一次抗体を添加し4 ℃一晩静置
・PBSで洗浄（5分×3回）
・二次抗体を添加し、静置（30分）
・PBSで洗浄（5分×4回）
・脱イオン蒸留水で洗浄（2回）
・DAPI Fluoromount（登録商標）-Gで封入
・乾燥
・顕微鏡で観察

［結果］
トウニンエキス添加4日後の結果を図２に示す。トウニンエキスを添加した細胞の方が、無添加（0%）よりも細胞間の染色強度が強く、トウニンエキスは、リンパ管細胞の接着を強化することが明らかとなった。

本発明は、化粧料および医薬部外品等に応用できる。

Claims (2)

1. トウニンの抽出物からなる、細胞間接着低下抑制剤であって、
   前記細胞がリンパ管細胞であり、
   前記トウニンが、モモ（Prunus persica Batsch）の種子であり、
   前記トウニンの抽出物の抽出溶媒が極性溶媒である、細胞間接着低下抑制剤。
2. 前記極性溶媒が水、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、およびブタノールからなる群から選択される１種以上である、請求項１に記載の細胞間接着低下抑制剤。

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