JP7379573B2 - アクチビンＩＩａ型受容体変異体および同変異体を含む医薬組成物 - Google Patents

アクチビンＩＩａ型受容体変異体および同変異体を含む医薬組成物 Download PDF

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Description

本発明は、アクチビンＩＩａ型受容体変異体およびそれらの使用方法に関する。
デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー（ＦＳＨＤ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、筋力低下および筋肉の萎縮、および／または随意筋運動を制御する運動ニューロンが関与する筋疾患の例である。ＤＭＤは、Ｘ連鎖ジストロフィン遺伝子の変異によって引き起こされ、すべての骨格筋における進行性の筋変性およびの筋力低下によって特徴付けられる。ＦＳＨＤは特に顔、肩、上腕、下肢の骨格筋に影響を与える。ＩＢＭは主として大腿部の筋肉並びに指および手首の屈曲を制御する腕の筋肉に作用する炎症性筋疾患である。ＡＬＳは、運動ニューロンの変性による、体全体の筋硬直、筋けいれん、および筋萎縮を特徴とする運動ニューロン疾患である。これらの壊滅的な筋疾患を有する対象の治療および生存を改善するための努力はいまだ成功していない。
米国では、過剰体重が深刻化する問題であり、人口の約２５％が罹患している。内臓および皮下の増加という事実は様々な臓器の機能不全を引き起こす。過剰体重は、肥満、糖尿病（例えば、１型糖尿病および２型糖尿病）、心血管疾患、およびいくつかの形態の癌を含む一連の合併症のリスク因子である。インスリン抵抗性は肥満にも関連しており、膵臓組織が高量のインスリンを必要とするときに起こる。膵臓β細胞がその要求を満たすのに十分なインスリンをもはや産生できなくなると、高血糖症が起こり、そして２型糖尿病を発症する。肥満にて増加する脂肪細胞は、この過程において役割を果たすと考えられている。糖尿病（例えば、１型糖尿病および２型糖尿病）およびインスリン抵抗性などの肥満および代謝性疾患の有病率にもかかわらず、利用可能な治療選択肢はほとんどない。
これらの筋疾患および代謝性疾患に対する新規な治療法が必要とされている。
本発明は、細胞外アクチビンＩＩａ型受容体（ＡｃｔＲＩＩａ：ａｃｔｉｖｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｐｅ ＩＩａ）変異体を含むポリペプチドに関する。いくつかの実施形態において、本発明のポリペプチドは、Ｆｃドメインの単量体または部分のＮ末端またはＣ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含む。そのような部分は、アミノ酸または他の共有結合によって結合されていてもよく、そしてポリペプチドの安定性を増加させる。Ｆｃドメイン単量体に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含むポリペプチドはまた、２つのＦｃドメイン単量体間の相互作用を介して二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成し得る。本発明のポリペプチドは、筋力低下および筋肉の萎縮（ｗｅａｋｎｅｓｓ ａｎｄ ａｔｒｏｐｈｙ ｏｆ ｍｕｓｃｌｅｓ）を含む疾患または病態、例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、顔面肩甲上腕筋ジストロフィー（ＦＳＨＤ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、サルコペニアまたは癌悪液質、を有する対象において筋肉量および強度を増加させるために使用され得る。本発明のポリペプチドはまた、代謝性疾患（例えば、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病）を有するかまたは発症するリスクがある対象において、体重を減少させるため、体脂肪を減少させるため、グルコースクリアランスを増加させるため、インスリン感受性を高めるため、または空腹時インスリンレベルを低下させるために使用され得る。さらに、本発明のポリペプチドはまた、筋力低下および筋肉の萎縮を伴う疾患もしくは病態、或いは代謝性疾患を、発症するリスクを有するかまたはそれを有する対象において、ミオスタチン、アクチビン、および／または骨形成タンパク質９（ＢＭＰ９）シグナル伝達に作用するために使用され得る。
一態様において、本発明は、細胞外アクチビンＩＩａ型受容体（ＡｃｔＲＩＩａ）変異体を含むポリペプチドであって、前記変異体は、
ＧＡＩＬＧＲＳＥＴＱＥＣＬＸ１Ｘ２ＮＡＮＷＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＴＮＱＴＧＶＥＸ７ＣＸ８ＧＸ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＨＣＸ１５ＡＴＷＸ１６ＮＩＳＧＳＩＥＩＶＸ１７Ｘ１８ＧＣＸ１９Ｘ２０Ｘ２１ＤＸ２２ＮＣＹＤＲＴＤＣＶＥＸ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６ＰＸ２７ＶＹＦＣＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫＦＳＹＦＰＥＭＥＶＴＱＰＴＳ（配列番号１）の配列を有し、配列中、Ｘ１はＦまたはＹであり；Ｘ２はＦまたはＹであり；Ｘ３はＥまたはＡであり；Ｘ４はＫまたはＬであり；Ｘ５はＤまたはＥであり；Ｘ６はＲまたはＡであり；Ｘ７はＰまたはＲであり；Ｘ８はＹまたはＥであり；Ｘ９はＤまたはＥであり；Ｘ１０はＫまたはＱであり；Ｘ１１はＤまたはＡであり；Ｘ１２はＫまたはＡであり；Ｘ１３はＲまたはＡであり；Ｘ１４はＲまたはＬであり；Ｘ１５はＦまたはＹであり；Ｘ１６はＫ、Ｒ、またはＡであり；Ｘ１７はＫ、Ａ、Ｙ、Ｆ、またはＩであり；Ｘ１８はＱまたはＫであり；Ｘ１９はＷまたはＡであり；Ｘ２０はＬまたはＡであり；Ｘ２１はＤ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｍ、Ｎ、またはＩであり；Ｘ２２はＩ、Ｆ、またはＡであり；Ｘ２３はＫまたはＴであり；Ｘ２４はＫまたはＥであり；Ｘ２５はＤまたはＥであり；Ｘ２６はＳまたはＮであり；かつ、Ｘ２７はＥまたはＱであり、かつ前記変異体は、配列番号７３の配列を有する野生型細胞外ＡｃｔＲＩＩａまたは配列番号７６～９６の配列のうちいずれか１つを有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有する、
ポリペプチドに関する。
いくつかの実施形態において、変異体は、
ＧＡＩＬＧＲＳＥＴＱＥＣＬＦＸ２ＮＡＮＷＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＴＮＱＴＧＶＥＸ７ＣＸ８ＧＸ９ＫＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＨＣＸ１５ＡＴＷＸ１６ＮＩＳＧＳＩＥＩＶＸ１７Ｘ１８ＧＣＸ１９Ｘ２０Ｘ２１ＤＸ２２ＮＣＹＤＲＴＤＣＶＥＸ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６ＰＸ２７ＶＹＦＣＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫＦＳＹＦＰＥＭＥＶＴＱＰＴＳ（配列番号２）
の配列を有し、配列中、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８、Ｘ１９、Ｘ２０、Ｘ２１、Ｘ２２、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、およびＸ２７は上記と同じように定義される。
いくつかの実施形態では、前記変異体は、
ＧＡＩＬＧＲＳＥＴＱＥＣＬＦＸ２ＮＡＮＷＥＸ４Ｘ５ＲＴＮＱＴＧＶＥＸ７ＣＸ８ＧＸ９ＫＤＫＲＸ１４ＨＣＸ１５ＡＴＷＸ１６ＮＩＳＧＳＩＥＩＶＫＸ１８ＧＣＷＬＤＤＸ２２ＮＣＹＤＲＴＤＣＶＥＸ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６ＰＸ２７ＶＹＦＣＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫＦＳＹＦＰＥＭＥＶＴＱＰＴＳ（配列番号３）
の配列を有し、配列中、Ｘ２、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１８、Ｘ２２、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、およびＸ２７は上記のように定義される。
いくつかの実施形態では、前記変異体は、
ＧＡＩＬＧＲＳＥＴＱＥＣＬＦＸ２ＮＡＮＷＥＸ４ＤＲＴＮＱＴＧＶＥＸ７ＣＸ８ＧＸ９ＫＤＫＲＸ１４ＨＣＸ１５ＡＴＷＸ１６ＮＩＳＧＳＩＥＩＶＫＸ１８ＧＣＷＬＤＤＸ２２ＮＣＹＤＲＴＤＣＶＥＸ２３ＫＸ２５Ｘ２６ＰＸ２７ＶＹＦＣＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫＦＳＹＦＰＥＭＥＶＴＱＰＴＳ（配列番号４）
の配列を有し、配列中、Ｘ２、Ｘ４、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１８、Ｘ２２、Ｘ２３、Ｘ２５、Ｘ２６、およびＸ２７は上記のように定義される。
いくつかの実施形態では、前記変異体は、
ＧＡＩＬＧＲＳＥＴＱＥＣＬＦＸ２ＮＡＮＷＥＸ４ＤＲＴＮＱＴＧＶＥＰＣＸ８ＧＸ９ＫＤＫＲＸ１４ＨＣＦＡＴＷＫＮＩＳＧＳＩＥＩＶＫＸ１８ＧＣＷＬＤＤＩＮＣＹＤＲＴＤＣＶＥＸ２３ＫＸ２５Ｘ２６ＰＸ２７ＶＹＦＣＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫＦＳＹＦＰＥＭＥＶＴＱＰＴＳ（配列番号５）
の配列を有し、配列中、Ｘ２、Ｘ４、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１４、Ｘ１８、Ｘ２３、Ｘ２５、Ｘ２６、およびＸ２７は上記のように定義される。
上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ１はＦまたはＹである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ２はＦまたはＹである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ３はＥまたはＡである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ４はＫまたはＬである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ５はＤまたはＥである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ６はＲまたはＡである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ７はＰまたはＲである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ８はＹまたはＥである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ９はＤまたはＥである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ１０はＫまたはＱである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ１１はＤまたはＡである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ１２はＫまたはＡである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ１３はＲまたはＡである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ１４はＲまたはＬである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ１５はＦまたはＹである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ１６はＫ、Ｒ、またはＡである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ１７はＫ、Ａ、Ｙ、Ｆ、またはＩである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ１８はＱまたはＫである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ１９はＷまたはＡである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ２０はＬまたはＡである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ２１はＤ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｍ、Ｎ、またはＩである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ２２はＩ、Ｆ、またはＡである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ２３はＫまたはＴである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ２４はＫまたはＥである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ２５はＤまたはＥである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ２６はＳまたはＮである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ２７はＥまたはＱである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ２３はＴであり、Ｘ２４はＥであり、Ｘ２５はＥであり、かつ、Ｘ２６はＮである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ２３はＴであり、Ｘ２４はＫであり、Ｘ２５はＥであり、かつ、Ｘ２６はＮである。上述の実施形態のいずれにおいても、Ｘ１７はＫである。
上述の実施形態のいずれにおいても、前記変異体は、配列番号６～７２のうちいずれか１つの配列を有する。
上述の実施形態のいずれにおいても、位置Ｘ２４のアミノ酸は、アミノ酸Ｋで置換可能である。
上述の実施形態のいずれにおいても、位置Ｘ２４のアミノ酸は、アミノ酸Ｅで置換可能である。
上述の実施形態のいずれにおいても、本明細書に記載のポリペプチドは、１以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上のアミノ酸）のＣ末端伸長部をさらに含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、Ｃ末端伸長部は、アミノ酸配列ＮＰである。いくつかの実施形態では、Ｃ末端伸長部は、アミノ酸配列ＮＰＶＴＰＫ（配列番号１５５）である。
前述の実施形態のいずれかにおいて、本明細書に記載のポリペプチドは、ポリペプチドのＣ末端に融合または共有結合した部分をさらに含み得る。いくつかの実施形態において、同部分はポリペプチドの安定性を増大させるかまたは薬物動態を改善する。いくつかの実施形態において、同部分はＦｃドメイン、アルブミン結合ペプチド、フィブロネクチンドメイン、またはヒト血清アルブミンである。
上述の実施形態のいずれにおいても、本明細書に記載のポリペプチドは、リンカーを介してポリペプチドのＣ末端に融合されたＦｃドメイン単量体をさらに含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメイン単量体に融合された本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含むポリペプチドは、２つのＦｃドメイン単量体間の相互作用を介して二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成し得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメイン単量体は、配列番号９７の配列を有する。
上述の実施形態のいずれにおいても、本明細書に記載のポリペプチドは、リンカーを介してポリペプチドのＣ末端に融合されたＦｃドメインをさらに含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、野生型Ｆｃドメインである。いくつかの実施形態では、野生型Ｆｃドメインは、配列番号１５１の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、１以上のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１以上のアミノ酸置換を含むＦｃドメインは、二量体を形成しない。
上述の実施形態のいずれにおいても、本明細書に記載のポリペプチドは、リンカーを介してポリペプチドのＣ末端に融合されたアルブミン結合ペプチドをさらに含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、配列番号１５２の配列を有する。
上述の実施形態のいずれにおいても、本明細書に記載のポリペプチドは、リンカーを介してポリペプチドのＣ末端に融合されたフィブロネクチンドメインをさらに含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、フィブロネクチンドメインペプチドは、配列番号１５３の配列を有する。
上述の実施形態のいずれにおいても、本明細書に記載のポリペプチドは、リンカーを介してポリペプチドのＣ末端に融合されたヒト血清アルブミンをさらに含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、ヒト血清アルブミンは、配列番号１５４の配列を有する。
いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸スペーサーである。いくつかの実施形態では、アミノ酸スペーサーは、ＧＧＧ、ＧＧＧＡ（配列番号９８）、ＧＧＧＧ（配列番号１００）、ＧＧＧＡＧ（配列番号１３０）、ＧＧＧＡＧＧ（配列番号１３１）、またはＧＧＧＡＧＧＧ（配列番号１３２）である。
いくつかの実施形態では、アミノ酸スペーサーは、ＧＧＧＳ（配列番号９９）、ＧＧＧＧＡ（配列番号１０１）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１０２）、ＧＧＧＧＧ（配列番号１０３）、ＧＧＡＧ（配列番号１０４）、ＧＧＳＧ（配列番号１０５）、ＡＧＧＧ（配列番号１０６）、ＳＧＧＧ（配列番号１０７）、ＧＡＧＡ（配列番号１０８）、ＧＳＧＳ（配列番号１０９）、ＧＡＧＡＧＡ（配列番号１１０）、ＧＳＧＳＧＳ（配列番号１１１）、ＧＡＧＡＧＡＧＡ（配列番号１１２）、ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１１３）、ＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡ（配列番号１１４）、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１１５）、ＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡ（配列番号１１６）、およびＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１１７）、ＧＧＡＧＧＡ（配列番号１１８）、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１１９）、ＧＧＡＧＧＡＧＧＡ（配列番号１２０）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１２１）、ＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡ（配列番号１２２）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１２３）、ＧＧＡＧＧＧＡＧ（配列番号１２４）、ＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１２５）、ＧＧＡＧＧＧＡＧＧＧＡＧ（配列番号１２６）、およびＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１２７）、ＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡ（配列番号１２８）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２９）、ＡＡＡＬ（配列番号１３３）、ＡＡＡＫ（配列番号１３４）、ＡＡＡＲ（配列番号１３５）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１３６）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号１３７）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号１３８）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１３９）、ＧＥＮＬＹＦＱＳＧＧ（配列番号１４０）、ＳＡＣＹＣＥＬＳ（配列番号１４１）、ＲＳＩＡＴ（配列番号１４２）、ＲＰＡＣＫＩＰＮＤＬＫＱＫＶＭＮＨ（配列番号１４３）、ＧＧＳＡＧＧＳＧＳＧＳＳＧＧＳＳＧＡＳＧＴＧＴＡＧＴＧＳＧＳＧＴＧＳＧ（配列番号１４４）、ＡＡＡＮＳＳＩＤＬＩＳＶＰＶＤＳＲ（配列番号１４５）、ＧＧＳＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１４６）、ＥＡＡＡＫ（配列番号１４７）、またはＰＡＰＡＰ（配列番号１４８）である。
上述の実施形態のいずれにおいても、本明細書に記載のポリペプチドは、少なくとも７日の血清半減期を有する。
上述の実施形態のいずれにおいても、本明細書に記載のポリペプチドは、２００ｐＭ以上のＫＤでヒト骨形成因子９（ＢＭＰ９）と結合する。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは、アクチビンおよび／またはミオスタチンと結合し、ヒトＢＭＰ９との結合は低い（例えば、弱い）。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは、ヒトＢＭＰ９とは実質的に結合しない。
上述の実施形態のいずれにおいても、本明細書に記載のポリペプチドは、８００ｐＭ以下のＫＤでヒトアクチビンＡと結合する。
上述の実施形態のいずれにおいても、本明細書に記載のポリペプチドは、およそ８００ｐＭ以下のＫＤでヒトアクチビンＢと結合する。
上述の実施形態のいずれにおいても、本明細書に記載のポリペプチドは、およそ５ｐＭ以上のＫＤでヒトＧＤＦ－１１と結合する。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含むポリペプチド）をコードする核酸分子に関する。別の態様では、本発明はまた、本明細書に記載の核酸分子を含むベクターに関する。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のポリペプチドを発現する宿主細胞に関し、その宿主細胞は、前記２つの態様に記載されている核酸分子またはベクターを含み、この核酸分子またはベクターは宿主細胞内で発現される。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のポリペプチドを作製する方法に関し、その方法は、ａ）本明細書に記載の核酸分子またはベクターを含む宿主細胞を提供すること、およびｂ）前記ポリペプチドの形成を可能とする条件下、宿主細胞内で前記核酸分子またはベクターを発現させること、を含む。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のポリペプチド、核酸分子、またはベクターと１以上の薬学上許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物に関する。前記医薬組成物のいくつかの実施形態では、ポリペプチド、核酸分子、またはベクターは治療有効量である。
別の態様では、本発明はまた、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号９７の配列）のＮ末端またはＣ末端に融合された、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体をそれぞれ含む２つの同一のポリペプチドを含む構築物（例えば、ホモ二量体）に関する。これら２つのポリペプチド内の２つのＦｃドメイン単量体は相互作用して、構築物内にＦｃドメインを形成する。
別の態様において、本発明はまた、それぞれが配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体であって、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号９７の配列）のＮ末端またはＣ末端に融合している変異体を含む２つの異なるポリペプチド（例えばヘテロ二量体）を含む構築物に関する。２つのポリペプチド中の２つのＦｃドメイン単量体は相互作用して構築物中にＦｃドメインを形成する。
別の態様において、本発明は、それを必要とする対象において筋肉量を増加させる方法に関する。この方法は、本明細書に記載の治療有効量のポリペプチド、核酸分子、もしくはベクター、または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む。
対象の筋肉量を増加させる方法のいくつかの実施形態において、対象は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、顔面肩甲上腕筋ジストロフィー（ＦＳＨＤ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、サルコペニア、または癌悪液質を有する。
別の態様において、本発明は、筋力低下および筋肉の萎縮を含む疾患または病態を有する対象においてミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９シグナル伝達に作用する（例えば、ミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のそれらの受容体への結合を低減または阻害する）方法に関し、ここで、同方法は、本明細書に記載の治療有効量のポリペプチド、核酸分子、もしくはベクター、または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む。この態様のいくつかの実施形態において、疾患または病態はＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、または癌悪液質である。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の治療有効量のポリペプチド、核酸分子、もしくはベクター、または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することによるＤＭＤを有する対象を治療する方法に関する。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の治療有効量のポリペプチド、核酸分子、もしくはベクター、または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することによるＦＳＨＤを有する対象を治療する方法に関する。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の治療有効量のポリペプチド、核酸分子、もしくはベクター、または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することによるＩＢＭを有する対象を治療する方法に関する。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の治療有効量のポリペプチド、核酸分子、もしくはベクター、または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することによるＡＬＳを有する対象を治療する方法に関する。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の治療有効量のポリペプチド、核酸分子、もしくはベクター、または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することによる、それを必要とする対象の体脂肪を減少させる方法に関する。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の治療有効量のポリペプチド、核酸分子、もしくはベクター、または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することによる、それを必要とする対象の体重を減少させる方法に関する。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の治療有効量のポリペプチド、核酸分子、もしくはベクター、または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することによる、それを必要とする対象の血糖を低下させる方法に関する。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の治療有効量のポリペプチド、核酸分子、もしくはベクター、または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することによる、それを必要とする対象においてインスリン感受性を高める方法に関する。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、対象は代謝性疾患を患っているかまたは発症するリスクがある。いくつかの実施形態において、代謝性疾患は、肥満、１型糖尿病および２型糖尿病を含む群から選択される。
別の態様において、本発明は、代謝性疾患を有するか、又は代謝性疾患を発症させるリスクを有する対象において、ミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９シグナル伝達に作用する（例えば、ミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のそれらの受容体への結合を低減または阻害する）方法であって、本明細書に記載の治療有効量のポリペプチド、核酸分子、もしくはベクター、または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することによる方法に関する。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の治療有効量のポリペプチド、核酸分子、もしくはベクター、または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することによって対象の代謝性疾患を治療および／または予防する方法に関する。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、代謝性疾患は、肥満、１型糖尿病および２型糖尿病を含む群から選択される。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、代謝性疾患は肥満である。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、代謝性疾患は１型糖尿病である。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、代謝性疾患は２型糖尿病である。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は、前記対象の体重および／または体重増加の割合を減少させる。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は前記対象の体脂肪の量および／または体脂肪の割合を減少させる。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は前記対象の食物摂取に対する食欲に影響を及ぼさない。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は前記対象の肥満を軽減する。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は前記対象の精巣上体および腎周囲の脂肪体の重量を減らす。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は、前記対象の皮下脂肪および／または内臓脂肪の量を減らす。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は前記対象の空腹時インスリンのレベルを低下させる。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は前記対象の血糖値を低下させる。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は前記対象のインスリン感受性を高める。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は前記対象のグルコースクリアランス速度を増加させる。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は前記対象の血清脂質プロフィールを改善する。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は除脂肪量を低減しない。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は筋肉量を増加させる。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法はアクチビンおよび／またはミオスタチンのそれらの受容体への結合を低減または阻害する。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、ポリペプチド、核酸、ベクター、または医薬組成物は、筋肉量および／または強度を増大させるのに、対象におけるミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９シグナル伝達に作用するのに、または、アクチビンおよび／またはミオスタチンのそれらの受容体への結合を減少させるかまたは阻害するのに、十分な量で投与される。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、ポリペプチド、核酸、ベクター、または医薬組成物は、体脂肪を減少させる、皮下脂肪の量を減少させる、内臓脂肪の量を減少させる、肥満症を軽減する、精巣上体および腎周囲の脂肪体の重量を減らす、体脂肪率を減少させる、体重を減少させる、体重増加率を減少させる、空腹時インスリンレベルを低下させる、血糖値を低下させる、インスリン感受性を高める、対象においてミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９シグナル伝達に作用する、脂肪細胞の増殖を減少させる、アクチビンおよび／またはミオスタチンのそれらの受容体への結合を減少または阻害する、ＬＤＬを減少させる、トリグリセリドを減少させる、血清脂質プロフィールを改善する、インスリン生合成および／またはβ－細胞からの分泌を調節する、インスリンの必要性を遅延する、延期する、もしくは低減する、或いはグルコースクリアランスを増加させるのに十分な量にて投与される。
本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、その方法は、対象において血管合併症（例えば、血管透過性または漏出の増加）を引き起こさない。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、その方法は、対象において骨塩密度を増加させる。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、変異体は配列番号６９の配列を有する。いくつかの実施形態において、配列番号６９の配列を有する変異体は、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部（例えば、Ｃ末端に１、２、３、４、５、６またはそれ以上のさらなるアミノ酸、例えば、アミノ酸ＮＰまたはＮＰＶＴＰＫ（配列番号１５５））を有する。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の配列番号６９の配列を有する変異体、任意選択にて、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部を有する変異体、或いは同変異体を含有する医薬組成物を対象に投与することによって、それを必要とする対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、または癌悪液質を有する対象）において筋肉量の増加させることまたは筋肉障害を治療すること、対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、癌悪液質、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有するかまたは発症するリスクがある対象）においてミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のシグナル伝達に作用すること、対象（例えば、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有する対象）において体脂肪または体重を減少させること、または対象（例えば、肥満、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有するか、または発症するリスクがある対象）において代謝性疾患を治療および／または予防すること、を含む。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、変異体は配列番号５８の配列を有する。いくつかの実施形態において、配列番号５８の配列を有する変異体は、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部（例えば、Ｃ末端に１、２、３、４、５、６またはそれ以上のさらなるアミノ酸、例えば、アミノ酸ＮＰまたはＮＰＶＴＰＫ（配列番号１５５））を有する。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の配列番号５８の配列を有する変異体、任意選択にて、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部を有する変異体、或いは同変異体を含有する医薬組成物を対象に投与することによって、それを必要とする対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、または癌悪液質を有する対象）において筋肉量の増加させることまたは筋肉障害を治療すること、対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、癌悪液質、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有するかまたは発症するリスクがある対象）においてミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のシグナル伝達に作用すること、対象（例えば、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有する対象）において体脂肪または体重を減少させること、または対象（例えば、肥満、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有するか、または発症するリスクがある対象）において代謝性疾患を治療および／または予防すること、を含む。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、変異体は配列番号６の配列を有する。いくつかの実施形態において、配列番号６の配列を有する変異体は、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部（例えば、Ｃ末端に１、２、３、４、５、６またはそれ以上のさらなるアミノ酸、例えば、アミノ酸ＮＰまたはＮＰＶＴＰＫ（配列番号１５５））を有する。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の配列番号６の配列を有する変異体、任意選択にて、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部を有する変異体、或いは同変異体を含有する医薬組成物を対象に投与することによって、それを必要とする対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、または癌悪液質を有する対象）において筋肉量の増加させることまたは筋肉障害を治療すること、対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、癌悪液質、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有するかまたは発症するリスクがある対象）においてミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のシグナル伝達に作用すること、対象（例えば、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有する対象）において体脂肪または体重を減少させること、または対象（例えば、肥満、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有するか、または発症するリスクがある対象）において代謝性疾患を治療および／または予防すること、を含む。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、変異体は配列番号３８の配列を有する。いくつかの実施形態において、配列番号３８の配列を有する変異体は、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部（例えば、Ｃ末端に１、２、３、４、５、６またはそれ以上のさらなるアミノ酸、例えば、アミノ酸ＮＰまたはＮＰＶＴＰＫ（配列番号１５５））を有する。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の配列番号３８の配列を有する変異体、任意選択にて、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部を有する変異体、或いは同変異体を含有する医薬組成物を対象に投与することによって、それを必要とする対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、または癌悪液質を有する対象）において筋肉量の増加させることまたは筋肉障害を治療すること、対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、癌悪液質、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有するかまたは発症するリスクがある対象）においてミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のシグナル伝達に作用すること、対象（例えば、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有する対象）において体脂肪または体重を減少させること、または対象（例えば、肥満、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有するか、または発症するリスクがある対象）において代謝性疾患を治療および／または予防すること、を含む。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、変異体は配列番号４１の配列を有する。いくつかの実施形態において、配列番号４１の配列を有する変異体は、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部（例えば、Ｃ末端に１、２、３、４、５、６またはそれ以上のさらなるアミノ酸、例えば、アミノ酸ＮＰまたはＮＰＶＴＰＫ（配列番号１５５））を有する。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の配列番号４１の配列を有する変異体、任意選択にて、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部を有する変異体、或いは同変異体を含有する医薬組成物を対象に投与することによって、それを必要とする対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、または癌悪液質を有する対象）において筋肉量の増加させることまたは筋肉障害を治療すること、対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、癌悪液質、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有するかまたは発症するリスクがある対象）においてミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のシグナル伝達に作用すること、対象（例えば、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有する対象）において体脂肪または体重を減少させること、または対象（例えば、肥満、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有するか、または発症するリスクがある対象）において代謝性疾患を治療および／または予防すること、を含む。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、変異体は配列番号４４の配列を有する。いくつかの実施形態において、配列番号４４の配列を有する変異体は、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部（例えば、Ｃ末端に１、２、３、４、５、６またはそれ以上のさらなるアミノ酸、例えば、アミノ酸ＮＰまたはＮＰＶＴＰＫ（配列番号１５５））を有する。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の配列番号４４の配列を有する変異体、任意選択にて、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部を有する変異体、或いは同変異体を含有する医薬組成物を対象に投与することによって、それを必要とする対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、または癌悪液質を有する対象）において筋肉量の増加させることまたは筋肉障害を治療すること、対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、癌悪液質、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有するかまたは発症するリスクがある対象）においてミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のシグナル伝達に作用すること、対象（例えば、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有する対象）において体脂肪または体重を減少させること、または対象（例えば、肥満、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有するか、または発症するリスクがある対象）において代謝性疾患を治療および／または予防すること、を含む。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、変異体は配列番号７０の配列を有する。いくつかの実施形態において、配列番号７０の配列を有する変異体は、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部（例えば、Ｃ末端に１、２、３、４、５、６またはそれ以上のさらなるアミノ酸、例えば、アミノ酸ＮＰまたはＮＰＶＴＰＫ（配列番号１５５））を有する。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の配列番号７０の配列を有する変異体、任意選択にて、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部を有する変異体、或いは同変異体を含有する医薬組成物を対象に投与することによって、それを必要とする対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、または癌悪液質を有する対象）において筋肉量の増加させることまたは筋肉障害を治療すること、対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、癌悪液質、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有するかまたは発症するリスクがある対象）においてミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のシグナル伝達に作用すること、対象（例えば、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有する対象）において体脂肪または体重を減少させること、または対象（例えば、肥満、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有するか、または発症するリスクがある対象）において代謝性疾患を治療および／または予防すること、を含む。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、変異体は配列番号７１の配列を有する。いくつかの実施形態において、配列番号７１の配列を有する変異体は、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部（例えば、Ｃ末端に１、２、３、４、５、６またはそれ以上のさらなるアミノ酸、例えば、アミノ酸ＮＰまたはＮＰＶＴＰＫ（配列番号１５５））を有する。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の配列番号７１の配列を有する変異体、任意選択にて、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部を有する変異体、或いは同変異体を含有する医薬組成物を対象に投与することによって、それを必要とする対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、または癌悪液質を有する対象）において筋肉量の増加させることまたは筋肉障害を治療すること、対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、癌悪液質、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有するかまたは発症するリスクがある対象）においてミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のシグナル伝達に作用すること、対象（例えば、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有する対象）において体脂肪または体重を減少させること、または対象（例えば、肥満、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有するか、または発症するリスクがある対象）において代謝性疾患を治療および／または予防すること、を含む。
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、変異体は配列番号７２の配列を有する。いくつかの実施形態において、配列番号７２の配列を有する変異体は、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部（例えば、Ｃ末端に１、２、３、４、５、６またはそれ以上のさらなるアミノ酸、例えば、アミノ酸ＮＰまたはＮＰＶＴＰＫ（配列番号１５５））を有する。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の配列番号７２の配列を有する変異体、任意選択にて、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮ、および／またはＣ末端伸長部を有する変異体、或いは同変異体を含有する医薬組成物を対象に投与することによって、それを必要とする対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、または癌悪液質を有する対象）において筋肉量の増加させることまたは筋肉障害を治療すること、対象（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、ＡＬＳ、サルコペニア、癌悪液質、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有するかまたは発症するリスクがある対象）においてミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のシグナル伝達に作用すること、対象（例えば、肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を有する対象）において体脂肪または体重を減少させること、または対象（例えば、肥満、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有するか、または発症するリスクがある対象）において代謝性疾患を治療および／または予防すること、を含む。
定義
本明細書で使用する場合、用語「細胞外アクチビンＩＩａ型受容体（ＡｃｔＲＩＩａ）変異体」は、野生型細胞外ＡｃｔＲＩＩａに対して少なくとも１つのアミノ酸置換（例えば、下記に示す配列番号７５の配列の太字部分）を有する１回膜貫通型受容体ＡｃｔＲＩＩａの可溶型細胞外部分または配列番号７６～９６の配列のうちいずれか１つを有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａを含むペプチドを指す。野生型ヒトＡｃｔＲＩＩａ前駆体タンパク質の配列を下記に示し（配列番号７５）、シグナルペプチドを斜体で、細胞外部分を太字で示す。
野生型ヒトＡｃｔＲＩＩａ前駆体タンパク質（配列番号７５）：
細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体は、配列番号１～７２のうちいずれか１つの配列を有し得る。特定の実施形態では、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体は、配列番号６～７２（表２）のうちいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体は、野生型細胞外ＡｃｔＲＩＩａの配列（配列番号７３）と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、またはそれを超える）アミノ酸配列同一性を有し得る。
本明細書で使用する場合、用語「細胞外ＡｃｔＲＩＩｂ変異体」は、野生型細胞外ＡｃｔＲＩＩｂ（例えば、配列番号７４の配列）に対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有する１回膜貫通型受容体ＡｃｔＲＩＩｂの可溶型細胞外部分を含むペプチドを指す。細胞外ＡｃｔＲＩＩｂ変異体は、下記に示す配列番号１４９の配列を有し得る。
細胞外ＡｃｔＲＩＩｂ変異体（配列番号１４９）：
ＧＲＧＥＡＥＴＲＥＣＩＦＹＮＡＮＷＥＫＤＲＴＮＱＳＧＬＥＰＣＹＧＤＱＤＫＲＲＨＣＦＡＳＷＫＮＳＳＧＴＩＥＬＶＫＱＧＣＷＬＤＤＩＮＣＹＤＲＱＥＣＶＡＫＫＤＳＰＥＶＹＦＣＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲＦＴＨＬＰＥＡＧＧＰＥＶＴＹＥＰＰＰＴＡＰＴ
本明細書で使用する場合、用語「リンカー」は、２つの要素、例えば、ペプチドまたはタンパク質ドメインの間の結合を指す。本明細書に記載のポリペプチドは、ある部分に融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含み得る。この部分は、ポリペプチドの安定性を増すか、または薬物動態特性を改善することができる。この部分（例えば、Ｆｃドメイン単量体、野生型Ｆｃドメイン、アミノ酸置換（例えば、二量体形成を低減する１以上の置換）を有するＦｃドメイン、アルブミン結合ペプチド、フィブロネクチンドメイン、またはヒト血清アルブミン）は、リンカーを介してポリペプチドに融合されていてもよい。リンカーは、共有結合またはスペーサーであり得る。用語「結合」は、化学結合、例えば、アミド結合またはジスルフィド結合、または化学反応、例えば、化学共役から作り出されるいずれの種類の結合も指す。用語「スペーサー」は、２つの要素の間に空間および／またはフレキシビリティを設けるために２つの要素、例えば、ペプチドまたはタンパク質ドメインの間に存在する部分（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー）またはアミノ酸配列（例えば、１～２００アミノ酸の配列）を指す。アミノ酸スペーサーは、ポリペプチドの一次配列の一部である（例えば、ポリペプチド主鎖により空間が設けられたペプチドに融合されている）。例えば、Ｆｃドメインを形成する２つのヒンジ領域の間のジスルフィド結合の形成は、リンカーと見なされない。
本明細書で使用する場合、用語「Ｆｃドメイン」は、２つのＦｃドメイン単量体の二量体を指す。Ｆｃドメインは、少なくともＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含むヒトＦｃドメインと少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％の配列同一性）を有する。Ｆｃドメイン単量体は、第２および第３の抗体定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメイン単量体はまた、ヒンジドメインも含む。Ｆｃドメインは、例えば可変ドメインまたは相補性決定領域（ＣＤＲ）など、抗原認識領域として働き得る免疫グロブリンのいずれの部分も含まない。野生型Ｆｃドメインでは、２つのＦｃドメイン単量体は、２つのＣＨ３抗体定常ドメイン間の相互作用、ならびに２つの二量体形成Ｆｃドメイン単量体のヒンジドメイン間で形成する１以上のジスルフィド結合によって二量体を形成する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、「デッドＦｃドメイン」の典型としてエフェクター機能を欠くように変異させてもよい。特定の実施形態では、Ｆｃドメインの各Ｆｃドメイン単量体は、ＦｃドメインとＦｃγ受容体の間の相互作用または結合を低減するようにＣＨ２抗体定常ドメイン内にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメインの二量体形成を低減または阻害する１以上のアミノ酸置換を含む。Ｆｃドメインは、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、またはＩｇＤを含むいずれの免疫グロブリン抗体アイソタイプであってもよい。加えて、Ｆｃドメインは、ＩｇＧサブタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）であってもよい。Ｆｃドメインはまた、非天然Ｆｃドメイン、例えば、組換えＦｃドメインであってもよい。
本明細書で使用する場合、用語「アルブミン結合ペプチド」は、血清アルブミンに対して親和性を有し、血清アルブミンと結合する働きをするアミノ酸１２～１６個のアミノ酸配列を指す。アルブミン結合ペプチドは、例えば、ヒト、マウス、またはラットなど、起源の異なるものであってもよい。いくつかの実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、配列ＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷ（配列番号１５２）を有する。
本明細書で使用する場合、用語「フィブロネクチンドメイン」は、例えば、インテグリンなどの膜貫通受容体タンパク質、ならびにコラーゲンおよびフィブリンなどの細胞外マトリックス成分と結合する、細胞外マトリックスの高分子量糖タンパク質、またはそのフラグメントを指す。いくつかの実施形態では、フィブロネクチンドメインは、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ ＮＯ：Ｐ０２７５１の配列のアミノ酸６１０～７０２を有するフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（配列番号１５３）である。他の実施形態では、フィブロネクチンドメインは、アドネクチンタンパク質である。
本明細書で使用する場合、用語「ヒト血清アルブミン」は、ヒト血漿中に存在するアルブミンタンパク質を指す。ヒト血清アルブミンは、血液中に最も豊富なタンパク質である。ヒト血清アルブミンは、血清タンパク質の約半分を占める。いくつかの実施形態では、ヒト血清アルブミンは、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ ＮＯ：Ｐ０２７６８（配列番号１５４）の配列を有する。
本明細書で使用する場合、用語「融合された」は、化学共役、組換え手段、および化学結合、例えば、アミド結合を含む手段による、２以上の要素、成分、またはタンパク質ドメイン、例えば、ペプチドまたはポリペプチドの組合せまたは結合を表すために使用される。例えば、化学共役、化学結合、ペプチドリンカー、または他のいずれかの共有結合手段を介して２つの単一のペプチドを直列に融合して１つの連続するタンパク質構造、例えばポリペプチドを形成することができる。本明細書に記載のポリペプチドのいくつかの実施形態では、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を、リンカーを介して、ある部分（例えば、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号９７の配列）、野生型Ｆｃドメイン（例えば、配列番号１５１の配列）、アミノ酸置換（例えば、二量体形成を低減する１以上の置換）を有するＦｃドメイン、アルブミン結合ペプチド（例えば、配列番号１５２の配列）、フィブロネクチンドメイン（例えば、配列番号１５３の配列）、またはヒト血清アルブミン（例えば、配列番号１５４の配列））のＮ末端またはＣ末端に直列で融合させてよい。例えば、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を、ペプチドリンカーを介して、ある部分（例えば、Ｆｃドメイン単量体、野生型Ｆｃドメイン、アミノ酸置換（例えば、二量体形成を低減する１以上の置換）を有するＦｃドメイン、アルブミン結合ペプチド、フィブロネクチンドメイン、またはヒト血清アルブミン）に融合させるが、この場合、ペプチドリンカーのＮ末端を、化学結合、例えば、ペプチド結合を介して細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体のＣ末端に融合させ、かつ、ペプチドリンカーのＣ末端を、化学結合、例えば、ペプチド結合を介して、その部分（例えば、Ｆｃドメイン単量体、野生型Ｆｃドメイン、アミノ酸置換（例えば、二量体形成を低減する１以上の置換）を有するＦｃドメイン、アルブミン結合ペプチド、フィブロネクチンドメイン、またはヒト血清アルブミン）のＮ末端に融合させる。
本明細書で使用する場合、用語「Ｃ末端伸長部（ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）」は、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７０（例えば、配列番号６～７０）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドのＣ末端への１以上のアミノ酸の付加を指す。Ｃ末端伸長部は、１～６個のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６またはそれ以上のアミノ酸）であり得る。例示的なＣ末端伸長部は、アミノ酸配列ＮＰ（２個のアミノ酸Ｃ末端伸長部）およびアミノ酸配列ＮＰＶＴＰＫ（配列番号１５５）（６個のアミノ酸Ｃ末端伸長部）である。ポリペプチドの活性を混乱させないいずれのアミノ酸配列も使用可能である。配列番号７１、すなわち、ＮＰのＣ末端伸長部を有する配列番号６９の配列、および配列番号７２、すなわち、ＮＰＶＴＰＫのＣ末端伸長部を有する配列番号６９の配列は、本発明のポリペプチドがＣ末端伸長部を含むように改変され得る可能性のある方法のうちの２つに相当する。
本明細書で使用する場合、用語「同一性パーセント（％）（ｐｅｒｃｅｎｔ（％）ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」は、配列をアラインし、最大同一性パーセントを得るために必要に応じてギャップを導入した後（すなわち、ギャップは、最適なアラインメントのために候補配列と参照配列の一方または両方に導入することができ、比較の目的で非相同配列を無視することができる）、参照配列、例えば、野生型細胞外ＡｃｔＲＩＩａ（例えば、配列番号７３）のアミノ酸（または核酸）残基と同一である、候補配列、例えば、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体のアミノ酸（または核酸）残基のパーセンテージを指す。同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアなどの公開コンピュータソフトウエアを使用するなど、当技術分野の技術の範囲内にある様々な方法で達成することができる。当業者は、比較する配列の全長にわたって最大アラインメントを得るために必要なアルゴリズムを含め、アラインメントを評価するための適当なパラメータを決定することができる。いくつかの実施形態では、所与の参照配列に対する（ｔｏ，ｗｉｔｈ，ｏｒ ａｇａｉｎｓｔ）所与の候補配列のアミノ酸（または核酸）配列同一性パーセント（あるいは、これは所与の参照配列に対して特定のアミノ酸（または核酸）配列同一性パーセントを有するまたは含む所与の候補配列と表現することもできる）は次のように計算される：
１００×（Ａ／Ｂの分数）
式中、Ａは、候補配列と参照配列のアラインメントにおいて同一スコアが与えられたアミノ酸（または核酸）残基の数であり、Ｂは、参照配列のアミノ酸（または核酸）残基の総数である。いくつかの実施形態では、候補配列の長さが参照配列の長さと等しくない場合、参照配列に対する候補配列のアミノ酸（または核酸）配列同一性パーセントは、候補配列に対する参照配列のアミノ酸（または核酸）配列同一性パーセントと等しくないであろう。
特定の実施形態では、候補配列との比較のためにアラインされる参照配列は、候補配列が候補配列の全長または候補配列の連続するアミノ酸（または核酸）残基の選択された部分にわたって５０％～１００％の同一性を示すことを示し得る。比較目的でアラインされる候補配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、例えば、少なくとも４０％、例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％である。候補配列の位置が参照配列の対応する位置と同じアミノ酸（または核酸）残基で占められていれば、それらの分子はその位置において同一である。
本明細書で使用する場合、用語「血清半減期」は、対象に治療タンパク質を投与するという文脈で、その対象においてそのタンパク質の血漿濃度が半分に減少するのに要する時間を指す。タンパク質は、再分布したり、または血流から排除されたり、または例えば、タンパク質分解によって分解されたりすることがある。本明細書に記載されるように、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドは、ヒトにおいて７日の血清半減期を示す。
本明細書で使用する場合、用語「代謝性疾患」は、エネルギーを放出するために食物中の炭水化物、タンパク質、および脂肪を分解し、そして、化学物質を他の物質に変換し、エネルギー利用および／または貯蔵のために細胞内へそれらを輸送することのような、対象の代謝に関連する疾患、障害、または症候群を指す。代謝性疾患のいくつかの症状には、高血清トリグリセリド、高い低密度コレステロール（ＬＤＬ）、低い高密度コレステロール（ＨＤＬ）、および／または空腹時インスリンレベルの上昇、空腹時血漿グルコースの上昇、腹部肥満（中心性肥満）ならびに血圧上昇が含まれる。代謝性疾患は、心血管疾患などの他の疾患を発症するリスクを高める。本発明において、代謝性疾患としては、肥満、１型糖尿病および２型糖尿病が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用する場合、用語「体重増加率（％）」は、以前の時点における対象の以前の体重と比較した、増加した体重の割合（％）を指す。体重増加率（％）は次のように計算できる。
１００×［（後の時点での体重－以前の時点での体重）／（以前の時点での体重）］
本発明において、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのような核酸分子を含有するベクターを対象に投与することは、対象の体重増加の割合（％）を減少させる。
本明細書で使用する場合、用語「食物摂取に対する食欲」は、対象の自然な欲求または食物に対する必要性を指す。対象の食物摂取に対する食欲は、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドが投与された後に消費される食物の量を測定することによってモニターすることができる。本発明において、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのような核酸分子を含有するベクターを対象に投与することは、対象の食物摂取に対する食欲には影響を与えることはない。
本明細書中で使用される場合、用語「肥満（ａｄｉｐｏｓｉｔｙ）」は、対象の脂肪組織に貯蔵されている脂肪をいう。本発明において、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのような核酸分子を含有するベクターを対象に投与することは、除脂肪量に影響を及ぼすことなく対象の肥満を軽減する。
本明細書で使用する場合、用語「除脂肪量（ｌｅａｎ ｍａｓｓ）」は、例えば、除脂肪量、体脂肪、および体液を含む身体の組成の成分を指す。通常、除脂肪量は、総体重から体脂肪と体液の重量を引いて計算される。典型的には、対象の除脂肪量は全体重の６０％～９０％の間である。本発明において、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのような核酸分子を含有するベクターを対象に投与することは、除脂肪量に影響を与えることなく対象の肥満（すなわち脂肪）を減少させる。
本明細書中で使用される場合、用語「精巣上体および腎周囲の脂肪体（ｅｐｉｄｉｄｙｍａｌ ａｎｄ ｐｅｒｉｒｅｎａｌ ｆａｔ ｐａｄｓ）」とは、精巣上体および腎臓周辺の密集した脂肪細胞をいう。本発明において、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのような核酸分子を含有するベクターを対象に投与することは、対象の精巣上体および腎周囲の脂肪体の重量を減少させる。
本明細書中で使用される場合、用語「空腹時インスリン」は、対象がある期間（すなわち、１２～２４時間）にわたって食物摂取を全くしていない間の対象のインスリンレベルを指す。空腹時インスリンレベルは代謝性疾患の診断に使用される。空腹時インスリンレベルは、対象が代謝性疾患を発症するリスクがあるかどうかの指標としても使用される。通常、１型糖尿病に罹患している対象において、対象の空腹時インスリンレベルは健康な対象の空腹時インスリンレベルと比較して低い。インスリン抵抗性（すなわち、２型糖尿病）を患っている対象において、対象の空腹時インスリンレベルは、健康な対象のインスリンレベルと比較して高い。本発明において、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのような核酸分子を含有するベクターを対象に投与することは、対象の空腹時インスリンレベルを低下させる。
本明細書で使用する場合、用語「グルコースクリアランス速度」は、グルコースが血液から除去される速度を指す。グルコースクリアランス速度は、ブドウ糖負荷試験（ＧＴＴ）で測定することができる。ＧＴＴにおいて、対象に一定量のグルコースを投与し、その後血液サンプルを採取して、それが血液からどれだけ早く除去されるかを決定する。グルコースクリアランス速度は、肥満、糖尿病、およびインスリン抵抗性などの代謝性疾患を発症するリスクを診断および／または決定する際のパラメータとして使用することができる。
本明細書中で使用される場合、用語「血清脂質プロフィール（ｓｅｒｕｍ ｌｉｐｉｄ
ｐｒｏｆｉｌｅ）」とは、対象の血清中の異なる種類の脂質およびリポタンパク質の分布の測定を指す。そのような測定は、一団の血液検査によって達成することができる。対象の血清中の脂質およびリポタンパク質の種類としては、コレステロール（例えば、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ））、トリグリセリド、および遊離脂肪酸（ＦＦＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。異なる種類の脂質およびリポタンパク質の分布は、肥満、糖尿病、およびインスリン抵抗性などの代謝性疾患を発症するリスクを診断および／または決定する際のパラメータとして使用することができる。高レベルのコレステロール、特に低密度リポタンパク質は、一般に特定の代謝性疾患、またはいくつかの重篤な医学的症例では心血管疾患を発症するための指標またはリスク因子と見なされている。本発明において、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのような核酸分子を含有するベクターを対象に投与することは、コレステロール（特に低密度リポタンパク質）およびトリグリセリドのレベルが低下するように対象の血清脂質プロフィールを改善する。
本明細書で使用する場合、用語「親和性」または「結合親和性」は、２分子間の結合相互作用の強度を指す。一般に、結合親和性は、分子とその結合相手、例えば、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体とＢＭＰ９またはアクチビンＡの間の非共有結合的相互作用の総和の強度を指す。そうではないことが示されない限り、結合親和性は、固有結合親和性を指し、これは結合対のメンバー間の１：１相互作用を表す。２分子間の結合親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）または親和性定数（ＫＡ）によって記載される。互いに低い結合親和性を有する２分子は、一般に、ゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があり、大きなＫＤを示す。互いに高い親和性を有する２分子は、一般に、容易に結合し、結合をより長く維持する傾向があり、小さいＫＤを示す。２つの相互作用分子のＫＤは、例えば、表面プラズモン共鳴などの当技術分野で周知の方法および技術を用いて決定することができる。ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算される。
本明細書で使用する場合、用語「筋肉量（ｍｕｓｃｌｅ ｍａｓｓ）」は、身体の組成の成分を指す。通常、筋肉量は総体重から体脂肪と体液の重量を引いて計算される。筋肉量の割合（％）は、対象の遺伝子構成、年齢、人種、および健康状態などに応じて個人間で大きく異なり得る。通常、対象の筋肉量は、全体重の２０％～５０％であり得る。
本明細書で使用する場合、「ミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９シグナル伝達に作用する（ａｆｆｅｃｔｉｎｇ）」という句は、ミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のそれらの受容体、例えば、ＡｃｔＲＩＩａ、ＡｃｔＲＩＩｂ、およびＢＭＰＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩａ）への結合を変化させることを意味する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含むポリペプチドは、ミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のそれらの受容体、例えば、ＡｃｔＲＩＩａ、ＡｃｔＲＩＩｂ、およびＢＭＰＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩａ）への結合を低減または阻害する。本明細書に記載されるように、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含む本発明のポリペプチドは、ＢＭＰ９に対して弱い結合親和性（例えば、ＫＤ ２００ｐＭ以上）を有し得る。
本明細書で使用する場合、用語「血管合併症」は、血管障害または血管に対するいずれかの損傷、例えば、血管壁に対する損傷を指す。血管壁に対する損傷は、血管透過性または漏出の増加を招き得る。用語「血管透過性または漏出」は、小分子、タンパク質、および細胞を血管に流入させ、血管から流出させる血管壁の能力を指す。血管透過性または漏出の増加は、血管壁に並ぶ内皮細胞間の間隙の増大（例えば、間隙の大きさおよび／もしくは数の増大）ならびに／または血管壁の薄化によって起こり得る。
本明細書で使用する場合、用語「ポリペプチド」は、単量体がアミノ酸残基であり、それらがアミド結合を介して相互に共有結合されている単一のポリマーを表す。ポリペプチドとは、天然型、組換え型、または合成生産されたいずれのアミノ酸配列も包含するものとする。
本明細書で使用する場合、用語「ホモ二量体（ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ）」は、２つの同一の高分子、例えば、タンパク質または核酸によって形成された分子構築物を指す。これら２つの同一の単量体は、共有結合または非共有結合によってホモ二量体を形成し得る。例えば、Ｆｃドメインは、２つのＦｃドメイン単量体が同じ配列を含めば、２つのＦｃドメイン単量体のホモ二量体であり得る。別の例では、Ｆｃドメイン単量体に融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含む本明細書に記載のポリペプチドは、２つのＦｃドメイン単量体の相互作用を介してホモ二量体を形成することができ、これらのＦｃドメイン単量体はホモ二量体においてＦｃドメインを形成する。
本明細書で使用する場合、用語「ヘテロ二量体（ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ）」は、２つの異なる高分子、例えば、タンパク質または核酸によって形成された分子構築物を指す。これら２つの単量体は、共有結合または非共有結合によってヘテロ二量体を形成し得る。例えば、Ｆｃドメイン単量体に融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含む本明細書に記載のポリペプチドは、異なるＡｃｔＲＩＩａ変異体にそれぞれ融合された２つのＦｃドメイン単量体の相互作用を介してヘテロ二量体を形成することができ、これらのＦｃドメイン単量体はヘテロ二量体においてＦｃドメインを形成する。
本明細書で使用する場合、用語「宿主細胞」は、必要な細胞成分、例えば、対応する核酸からタンパク質を発現させるために必要とされる細胞小器官を含む媒体を指す。核酸は一般に、当技術分野で公知の従来技術（形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿法、ダイレクトマイクロインジェクションなど）によって宿主細胞に導入することができる核酸ベクター内に含まれる。宿主細胞は、原核細胞、例えば、細菌細胞、または真核細胞、例えば、哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞）であり得る。
本明細書中で使用される場合、用語「治療有効量」とは、本発明のポリペプチド、核酸、もしくはベクター、または本発明のポリペプチド、核酸、もしくはベクターを含有する医薬組成物の量であって、筋疾患などの疾患、または筋力低下および筋肉の萎縮を伴う疾患または病態のような疾患、例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、顔面頭蓋上腕筋ジストロフィー（ＦＳＨＤ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、サルコペニア、または癌悪液質のような疾患を有する患者を治療する上で、所望の治療効果を達成するのに有効である量を指す。「治療有効量」という用語はまた、本発明のポリペプチド、核酸、もしくはベクターまたは本発明のポリペプチド、核酸、もしくはベクターを含む医薬組成物の量であって、代謝性疾患などの疾患、または過剰体重、過剰体脂肪、高血糖、空腹時インスリンレベルの上昇、またはインスリン抵抗性を伴う病態、例えば肥満、１型糖尿病、または２型糖尿病を治療する上で、所望の治療効果を達成するのに有効である量を指す。特に、治療有効量のポリペプチド、核酸、またはベクターは有害な副作用を回避する。
本明細書で使用する場合、用語「医薬組成物」は、有効成分ならびにその有効成分を投与方法に適したものとできるように賦形剤および希釈剤を含む医薬または医薬製剤を指す。本発明の医薬組成物は、ポリペプチド、核酸、またはベクターと適合する薬学上許容される成分を含む。医薬組成物は経口投与用の錠剤もしくはカプセル剤形であっても、または静脈投与または皮下投与用の水性剤形であってもよい。
本明細書で使用する場合、用語「薬学上許容される担体または賦形剤」は、医薬組成物中の賦形剤または希釈剤を指す。薬学上許容される担体は、その製剤の他の成分と適合し、かつ、レシピエントに有害であってはならない。本発明では、薬学上許容される担体または賦形剤は、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含むポリペプチド、そのポリペプチドをコードする核酸分子、またはそのような核酸分子を含有するベクターに十分な薬学的安定性を提供しなければならない。担体または賦形剤の性質は、投与様式によって異なる。例えば、静脈内投与には、水溶液担体が一般に使用され、経口投与には、固体担体が好ましい。
本明細書で使用する場合、用語「治療するおよび／または予防する」とは、本発明の方法および組成物を使用して、疾患、例えば代謝性疾患（例えば肥満、１型糖尿病および２型糖尿病）または筋疾患（例えば、ＤＭＤ、ＦＳＨＤ、ＩＢＭ、およびＡＬＳ）を治療するおよび／または予防することを指す。一般に、代謝性または筋肉性疾患の治療は、対象が代謝性または筋肉性疾患を発症した後におよび／または対象が代謝性または筋疾患と既に診断された後に行われる。代謝性または筋肉性疾患を予防することは、対象が代謝性または筋肉性疾患を発症するリスクがあるときにとられるステップまたは手順を指す。対象は、代謝性疾患もしくは筋疾患の指標もしくはそれを発症するリスク因子があると医師により判断されるか、または、その代謝性疾患もしくは筋疾患をまだ発症していないが家族歴もしくはその代謝性疾患もしくは筋疾患を発症する遺伝的素因を有すると医師により判断される、徴候もしくは軽度の症状を示し得る。
本明細書で使用する場合、用語「対象」は、哺乳動物、例えば、好ましくは、ヒトを指す。哺乳動物としては、限定されるものではないが、ヒトおよび飼育動物および農用動物、例えば、サル（例えば、カニクイザル）、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、およびウシなどが含まれる。
本発明によれば、アクチビンＩＩａ型受容体変異体および同変異体を含む医薬組成物が提供できた。
図１は、細胞外ＡｃｔＲＩＩａおよびＡｃｔＲＩＩｂの野生型配列ならびにＡｃｔＲＩＩａ変異体のアミノ酸置換を示す配列アラインメントである。 図２Ａおよび２Ｂは、体重についての細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す散布図（ｓｃａｔｔｅｒ ｐｌｏｔｓ）である。マウスは、示されたＡｃｔＲＩＩａ変異体をコードするプラスミド構築物または対照プラスミドの単回のハイドロダイナミックインジェクションを受けている。 図２Ａおよび２Ｂは、体重についての細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す散布図である。マウスは、示されたＡｃｔＲＩＩａ変異体をコードするプラスミド構築物または対照プラスミドの単回のハイドロダイナミックインジェクションを受けている。 図３Ａおよび３Ｂは、筋肉量についての細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す棒グラフである。 図３Ａおよび３Ｂは、筋肉量についての細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す棒グラフである。 図４Ａは、体重についての細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す散布図である。マウスは、示された精製組換えＡｃｔＲＩＩａ変異体またはビヒクル対照の腹腔内注射を週に２回で４週間受けている。 図４Ｂは、組織分析による個々の筋肉重量についての細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す棒グラフである。 図５Ａは、試験の過程における体重についての細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す散布図である。マウスは示されたＡｃｔＲＩＩａ変異体をコードするプラスミド構築物または対照プラスミドの単回のハイドロダイナミックインジェクションを受けている。 図５Ｂは、２８日目の終了時における体重についての細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す棒グラフである。 図６Ａおよび６Ｂは、組織分析による体重についての細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す棒グラフである。 図６Ａおよび６Ｂは、組織分析による体重についての細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す棒グラフである。 図７Ａおよび７Ｂは、体重についての異なる用量の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す散布図である。マウスは、示された精製組換えＡｃｔＲＩＩａ変異体またはビヒクル対照の腹腔内注射を週に２回で４週間受けている。 図７Ａおよび７Ｂは、体重についての異なる用量の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す散布図である。マウスは、示された精製組換えＡｃｔＲＩＩａ変異体またはビヒクル対照の腹腔内注射を週に２回で４週間受けている。 図８Ａおよび８Ｂは、筋肉量（図８Ａ）および脂肪量（図８Ｂ）についての異なる用量の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す棒グラフである。 図８Ａおよび８Ｂは、筋肉量（図８Ａ）および脂肪量（図８Ｂ）についての異なる用量の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果を示す棒グラフである。 図９Ａおよび９Ｂは、組織分析による筋肉量についての細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の異なる用量の影響を示す棒グラフである。 図９Ａおよび９Ｂは、組織分析による筋肉量についての細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の異なる用量の影響を示す棒グラフである。
本発明は、細胞外アクチビンＩＩａ型受容体（ＡｃｔＲＩＩａ）変異体を含むポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドは、ある部分（例えば、Ｆｃドメイン単量体、野生型Ｆｃドメイン、アミノ酸置換（例えば、二量体形成を低減する１以上の置換）を有するＦｃドメイン、アルブミン結合ペプチド、フィブロネクチンドメイン、またはヒト血清アルブミン）に融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含む。Ｆｃドメイン単量体に融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含むポリペプチドはまた、２つのＦｃドメイン単量体間の相互作用を介して二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成し得る。本明細書に記載のＡｃｔＲＩＩａ変異体は、アクチビンおよびミオスタチンに比べて骨形成因子９（ＢＭＰ９）に対して結合親和性が弱いか、または結合親和性を全く持たない。本発明はまた、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含むポリペプチドを対象に投与することによる、対象において、筋肉量および筋力を増加させることによって筋力低下および筋肉の萎縮を伴う疾患および病態を治療する方法、代謝性疾患を治療または予防する方法、またはミオスタチン、アクチビンおよび／またはＢＭＰ９シグナル伝達に作用する方法を含む。
Ｉ．細胞外アクチビンＩＩａ型受容体（ＡｃｔＲＩＩａ）変異体
アクチビンＩＩ型受容体は、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ－β：ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ β）スーパーファミリーのリガンドに対するシグナルを調節する１回膜貫通ドメイン受容体である。ＴＧＦ－βスーパーファミリーのリガンドは、宿主において筋肉成長、血管成長、細胞分化、恒常性、および骨形成などの多くの生理学的プロセスに関与する。ＴＧＦ－βスーパーファミリーのリガンドの例としては、例えば、アクチビン、インヒビン、成長分化因子（ＧＤＦ：ｇｒｏｗｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）（例えば、ＧＤＦ８、ミオスタチンとしても知られる）、および骨形成因子（ＢＭＰ）（例えば、ＢＭＰ９）が挙げられる。ミオスタチンおよびアクチビンは骨格筋成長の調節において役割を果たすことが知られている。例えば、ミオスタチンを備えていないマウスは骨格筋量の大幅な増加を示す。
アクチビンは脂肪組織においても高度に発現されており、肥満マウスの皮下脂肪および内臓脂肪においてミオスタチンレベルおよびアクチビン受容体レベルの上昇が観察されている。さらに、ミオスタチンは肥満およびインスリン抵抗性の女性の骨格筋および血漿中で上昇することが示されており、そしてＩ型およびＩＩ型アクチビン受容体の両方が膵臓機能および糖尿病に関連している。これらのデータは、アクチビンリガンド（例えば、アクチビン、ミオスタチン）の発現の増加またはアクチビン受容体自体の発現の増加のいずれかによるアクチビン受容体を介するシグナル伝達の増加が、肥満並びに、１型糖尿病および２型糖尿病のような代謝障害をもたらし得ることを示唆する。したがって、このシグナル伝達を減少または阻害する方法は、肥満および代謝性障害の治療に使用され得る。
２つのタイプのアクチビンＩＩ型受容体：ＡｃｔＲＩＩａおよびＡｃｔＲＩＩｂが存在する。研究によれば、ＢＭＰ９はＡｃｔＲＩＩａの約３００倍の結合親和性でＡｃｔＲＩＩｂと結合することが示されている（例えば、Ｔｏｗｎｓｏｎ他のＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８７：２７３１３，２０１２参照）。ＡｃｔＲＩＩａは、ＡｃｔＲＩＩｂに比べて長い半減期を有することが知られている。本発明は、ＡｃｔＲＩＩａの有益な生理学的特性および薬物動態特性も維持しつつ、ＡｃｔＲＩＩｂによって与えられる生理学的特性を付与するという目的でＡｃｔＲＩＩａにＡｃｔＲＩＩｂのアミノ酸残基を導入することによって構築される細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を記載する。最適なペプチドは、より長い血清半減期および例えばＢＭＰ９に対して低い結合親和性を保持しつつ、筋肉量の有意な増加を与える。好ましいＡｃｔＲＩＩａ変異体はまた、野生型ＡｃｔＲＩＩａに比べてアクチビンおよび／またはミオスタチンに対する結合の改善を示し、これにより、それらはリガンド結合に関して内因性のアクチビン受容体と競合可能となり、内因性のアクチビン受容体シグナル伝達を低減または阻害することができる。これらの変異体は、アクチビン受容体シグナル伝達が上昇している障害、例えば代謝障害などの障害を治療するために使用することができ、体脂肪、体重、またはインスリン抵抗性の減少（例えば、インスリン感受性の増加）をもたらす。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ９に対する変異体の結合親和性を低減または除去するために細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体にアミノ酸置換を導入することができる。ヒトＡｃｔＲＩＩａおよびＡｃｔＲＩＩｂの細胞外部分の野生型アミノ酸配列を下記に示す。
ヒトＡｃｔＲＩＩａ細胞外部分（配列番号７３）：
ＧＡＩＬＧＲＳＥＴＱＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤＲＴＮＱＴＧＶＥＰＣＹＧＤＫＤＫＲＲＨＣＦＡＴＷＫＮＩＳＧＳＩＥＩＶＫＱＧＣＷＬＤＤＩＮＣＹＤＲＴＤＣＶＥＫＫＤＳＰＥＶＹＦＣＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫＦＳＹＦＰＥＭＥＶＴＱＰＴＳ
ヒトＡｃｔＲＩＩｂ細胞外部分（配列番号７４）：
ＧＲＧＥＡＥＴＲＥＣＩＹＹＮＡＮＷＥＬＥＲＴＮＱＳＧＬＥＲＣＥＧＥＱＤＫＲＬＨＣＹＡＳＷＲＮＳＳＧＴＩＥＬＶＫＫＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲＱＥＣＶＡＴＥＥＮＰＱＶＹＦＣＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲＦＴＨＬＰＥＡＧＧＰＥＶＴＹＥＰＰＰＴＡＰＴ
本明細書に記載のポリペプチドは、配列番号７３の配列を有する野生型細胞外ＡｃｔＲＩＩａまたは配列番号７６～９６の配列のうちいずれか１つを有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含む。２７箇所の異なる位置の潜在的アミノ酸置換が細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体に導入され得る（表１）。いくつかの実施形態では、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体は、野生型細胞外ＡｃｔＲＩＩａ（配列番号７３）の配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、またはそれを超える）アミノ酸配列同一性を有し得る。細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体は、野生型細胞外ＡｃｔＲＩＩａ（配列番号７３）の配列に対して１以上（例えば、１～２７、１～２５、１～２３、１～２１、１～１９、１～１７、１～１５、１～１３、１～１１、１～９、１～７、１～５、１～３、または１～２；例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、または２７）のアミノ酸置換を有し得る。いくつかの実施形態では、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１の配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）は、表１に挙げられているような２７箇所の位置の全てにアミノ酸置換を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体は、表１に挙げられているような２７箇所の位置のうち複数の位置、例えば、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、または２６箇所にアミノ酸置換を含んでいてもよい。
アミノ酸置換は、本発明のＡｃｔＲＩＩａ変異体の活性および／または結合親和性を低下または向上させ得る。ポリペプチド機能を維持するためには、表１および２に示される配列（配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２））の位置Ｘ１７のリシン（Ｋ）が保持されることが重要である。その位置における置換は、活性の消失をもたらし得る。例えば、
ＧＡＩＬＧＲＳＥＴＱＥＣＬＦＹＮＡＮＷＥＬＥＲＴＮＱＴＧＶＥＲＣＥＧＥＫＤＫＲＬＨＣＹＡＴＷＲＮＩＳＧＳＩＥＩＶＡＫＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲＴＤＣＶＥＴＥＥＮＰＱＶＹＦＣＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫＦＳＹＦＰＥＭＥＶＴＱＰＴＳ（配列番号１５０）
の配列を有するＡｃｔＲＩＩａ変異体はｉｎ ｖｉｖｏにおいて活性が低減され、Ｘ１７におけるリシン（Ｋ）のアラニン（Ａ）での置換が許容されないことを示す。よって、表１および２の変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）を含む本発明のＡｃｔＲＩＩａ変異体）は、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋを保持する。
本発明のＡｃｔＲＩＩａ変異体は好ましくは、ＢＭＰ９に対する結合が低減されているか、弱いか、または実質的に無い。位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＥＥＮを含むＡｃｔＲＩＩａ変異体ならびに位置Ｘ２４にアミノ酸Ｋを維持し、かつ、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６にアミノ酸配列ＴＫＥＮを有する変異体では、ＢＭＰ９結合が低減されている。配列ＴＥＥＮおよびＴＫＥＮは、本発明のＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、表１および２の変異体、例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２））では、ＢＭＰ９結合の低減をもたらすために互換的に使用可能である。
本発明のＡｃｔＲＩＩａ変異体は、Ｃ末端伸長部（例えば、Ｃ末端における付加的アミノ酸）をさらに含み得る。Ｃ末端伸長部には、表１および２（例えば、配列番号１～７０（例えば、配列番号６～７０））に示される変異体のいずれかのＣ末端に１～６個の付加的アミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６またはそれ以上の付加的アミノ酸）を付加することができる。本発明のＡｃｔＲＩＩａ変異体に含まれ得る１つの可能性のあるＣ末端伸長部はアミノ酸配列ＮＰである。例えば、Ｃ末端伸長部を含む配列は、配列番号７１（例えば、Ｃ末端伸長部ＮＰを有する配列番号６９）である。本発明のＡｃｔＲＩＩａ変異体に含まれ得るもう１つの例としてのＣ末端伸長部はアミノ酸配列ＮＰＶＴＰＫ（配列番号１５５）である。例えば、Ｃ末端伸長部を含む配列は、配列番号７２（例えば、Ｃ末端伸長部ＮＰＶＴＰＫを有する配列番号６９）である。
配列番号２の配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体のいくつかの実施形態では、Ｘ３はＥであり、Ｘ６はＲであり、Ｘ１１はＤであり、Ｘ１２はＫであり、Ｘ１３はＲであり、Ｘ１６はＫまたはＲであり、Ｘ１７はＫであり、Ｘ１９はＷであり、Ｘ２０はＬであり、Ｘ２１はＤであり、かつ、Ｘ２２はＩまたはＦである。配列番号１または２の配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体のいくつかの実施形態では、Ｘ１７はＫである。配列番号１～３の配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体のいくつかの実施形態では、Ｘ１７はＫであり、Ｘ２３はＴであり、Ｘ２４はＥであり、Ｘ２５はＥであり、かつ、Ｘ２６はＮである。配列番号１～５のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体のいくつかの実施形態では、Ｘ１７はＫであり、Ｘ２３はＴであり、Ｘ２４はＫであり、Ｘ２５はＥであり、かつ、Ｘ２６はＮである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは、配列番号６～７２（表２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含む。
いくつかの実施形態では、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つ）を含む本発明のポリペプチドは、位置Ｘ１７にアミノ酸Ｋを有する。位置Ｘ１７のアミノ酸を変更すると、活性の低減がもたらされる。例えば、
ＧＡＩＬＧＲＳＥＴＱＥＣＬＦＹＮＡＮＷＥＬＥＲＴＮＱＴＧＶＥＲＣＥＧＥＫＤＫＲＬＨＣＹＡＴＷＲＮＩＳＧＳＩＥＩＶＡＫＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲＴＤＣＶＥＴＥＥＮＰＱＶＹＦＣＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫＦＳＹＦＰＥＭＥＶＴＱＰＴＳ（配列番号１５０）
の配列を有するＡｃｔＲＩＩａ変異体は、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて活性が低減され、Ｘ１７におけるＫのＡでの置換が許容されないことを示す。
いくつかの実施形態では、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６に配列ＴＥＥＮを有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つ）を含む本発明のポリペプチドは、位置Ｘ２４にアミノ酸Ｅのアミノ酸Ｋでの置換を有し得る。いくつかの実施形態では、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６に配列ＴＫＥＮを有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つ）を含む本発明のポリペプチドは、位置Ｘ２４にアミノ酸Ｋのアミノ酸Ｅでの置換を有し得る。位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６に配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮを有するポリペプチドは、ＢＭＰ９に対する結合が低減されているか、または弱い。
いくつかの実施形態では、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７０（例えば、配列番号６～７０）のうちいずれか１つ）を含む本発明のポリペプチドは、Ｃ末端伸長部（例えば、Ｃ末端における付加的アミノ酸）をさらに含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、Ｃ末端伸長部は、アミノ酸配列ＮＰである。例えば、Ｃ末端伸長部を含む配列は、配列番号７１（例えば、Ｃ末端伸長部ＮＰを有する配列番号６９）である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端伸長部は、アミノ酸配列ＮＰＶＴＰＫ（配列番号１５５）である。例えば、Ｃ末端伸長部を含む配列は、配列番号７２（例えば、Ｃ末端伸長部ＮＰＶＴＰＫを有する配列番号６９）である。Ｃ末端伸長部には、Ｃ末端に１～６個の付加的アミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６またはそれ以上の付加的アミノ酸）を付加することができる。
いくつかの実施形態では、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含む本発明のポリペプチドは、ある部分（例えば、Ｆｃドメイン単量体、野生型Ｆｃドメイン、アミノ酸置換（例えば、二量体形成を低減する１以上の置換）を有するＦｃドメイン、アルブミン結合ペプチド、フィブロネクチンドメイン、またはヒト血清アルブミン）をさらに含んでいてもよく、この部分はリンカーをまたは他の共有結合を介して細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体のＮ末端またはＣ末端（例えば、Ｃ末端）に融合させることができる。Ｆｃドメイン単量体に融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含むポリペプチドは、２つのＦｃドメイン単量体間の相互作用を介して二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成することができ、これらのＦｃドメイン単量体は合わさって二量体においてＦｃドメインを形成する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体は、以下の表３に示される配列番号７６～９６のうちいずれの配列も持たない。
さらに、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは、ヒトにおいて少なくとも７日の血清半減期を有する。ポリペプチドは、２００ｐＭ以上のＫＤで骨形成因子９（ＢＭＰ９）と結合し得る。このポリペプチドは、１０ｐＭ以上のＫＤでアクチビンＡと結合し得る。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは、ＢＭＰ９またはアクチビンＡと結合しない。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは、アクチビンおよび／またはミオスタチンと結合し、かつ、ＢＭＰ９に低い（例えば、弱い）結合を示す。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ９に対する結合が低いまたは弱いポリペプチドは、位置Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、およびＸ２６に配列ＴＥＥＮまたはＴＫＥＮを有する。
加えて、いくつかの実施形態では、このポリペプチドは、約２００ｐＭ以上のＫＤ（例えば、約２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、または９００ｐＭ以上のＫＤ、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、または５０ｎＭ以上のＫＤ、例えば、約２００ｐＭ～約５０ｎＭの間のＫＤ）でヒトＢＭＰ９と結合し得る。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは、ヒトＢＭＰ９と実質的に結合しない。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは、約８００ｐＭ以下のＫＤ（例えば、約８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１ｐＭ以下のＫＤ、例えば、約８００ｐＭ～約２００ｐＭの間のＫＤ）でヒトアクチビンＡと結合し得る。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは、８００ｐＭ以下のＫＤ（例えば、約８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１ｐＭ以下のＫＤ、例えば、約８００ｐＭ～約２００ｐＭの間のＫＤ）でヒトアクチビンＢと結合し得る。このポリペプチドは、およそ５ｐＭ以上のＫＤ（例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、または２００ｐＭ以上のＫＤ）で成長および分化因子１１（ＧＤＦ－１１）とも結合し得る。
ＩＩ．Ｆｃドメイン
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは、ポリペプチドの血清半減期を延長するために、免疫グロブリンのＦｃドメイン単量体またはＦｃドメインのフラグメントに融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含み得る。Ｆｃドメイン単量体に融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含むポリペプチドは、２つのＦｃドメイン単量体間の相互作用を介して二量体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体）を形成することができ、これらのＦｃドメイン単量体は二量体においてＦｃドメインを形成する。従来から当技術分野で知られているように、Ｆｃドメインは、免疫グロブリンのＣ末端に見られるタンパク質構造である。Ｆｃドメインは、ＣＨ３抗体定常ドメイン間の相互作用によって二量体を形成する２つのＦｃドメイン単量体を含む。野生型Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩｂ、ＦｃγＲＩＶに結合する最小構造を形成する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、「デッド（ｄｅａｄ）」Ｆｃドメインに典型的に、エフェクター機能を欠くように変異させることができる。例えば、Ｆｃドメインは、ＦｃドメインとＦｃγ受容体の間の相互作用を最小にすることが知られている特定のアミノ酸置換を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ１抗体に由来し、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａを含む。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ１抗体に由来し、アミノ酸置換Ｄ２６５Ａ、Ｋ３２２Ａ、およびＮ４３４Ａを含む。上記のアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））に従って定義される。アミノ酸残基のＫａｂａｔのナンバリングは、所与の抗体に関して、抗体配列の相同性領域を「標準」Ｋａｂａｔナンバリング配列とアラインすることによって決定することができる。さらに、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、いずれの免疫系関連応答も誘導しない。例えば、Ｆｃドメイン単量体に融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含むポリペプチドの二量体におけるＦｃドメインは、ＦｃドメインとＦｃγ受容体の間の相互作用または結合を低減するように改変されてもよい。細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体に融合させることができるＦｃドメイン単量体の配列を下記に示す（配列番号９７）：
ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＶＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＰＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
いくつかの実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ１抗体に由来し、配列番号９７の配列に対してアミノ酸置換Ｌ１２Ａ、Ｌ１３Ａ、およびＧ１５Ａを含む。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ１抗体に由来し、配列番号９７の配列に対してアミノ酸置換Ｄ４３Ａ、Ｋ１００Ａ、およびＮ２１２Ａを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）は、従来の遺伝学的または化学的手段、例えば、化学共役によってＦｃドメイン単量体（例えば、配列番号９７）のＮ末端またはＣ末端に融合させることができる。任意選択にて、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体とＦｃドメイン単量体の間にリンカー（例えば、スペーサー）を挿入することができる。Ｆｃドメイン単量体は、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体のＮ末端またはＣ末端（例えば、Ｃ末端）に融合させることができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは、Ｆｃドメインに融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメインの二量体形成を低減または阻害する１以上のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒンジドメインを含む。Ｆｃドメインは、免疫グロブリン抗体アイソタイプＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、またはＩｇＤのものであり得る。加えて、Ｆｃドメインは、ＩｇＧサブタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）であり得る。Ｆｃドメインはまた、非天然Ｆｃドメイン、例えば、組換えＦｃドメインであってもよい。
二量体形成が低減されたＦｃドメインを作出する方法は当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、立体衝突のために二量体形成を障害するように、ＣＨ３－ＣＨ３二量体界面に大きな側鎖を有する１以上のアミノ酸（例えば、チロシンまたはトリプトファン）を導入してもよい。他の実施形態では、有利な相互作用を除くために、ＣＨ３－ＣＨ３二量体界面に小さい側鎖を有する１以上のアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、またはトレオニン）を導入してもよい。ＣＨ３ドメインに大きなまたは小さな側鎖を有するアミノ酸を導入する方法は、例えば、Ｙｉｎｇ他（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８７：１９３９９－１９４０８，２０１２）、米国特許出願公開第２００６／００７４２２５号明細書、米国特許第８，２１６，８０５号明細書および米国特許第５，７３１，１６８号明細書、Ｒｉｄｇｗａｙ他（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９：６１７－６１２，１９９６）、Ａｔｗｅｌｌ他（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２７０：２６－３５，１９９７）、およびＭｅｒｃｈａｎｔ他（Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：６７７－６８１，１９９８）に記載されており、これらは全て、それらの全内容を本明細書の一部として援用する。
さらに他の実施形態では、２つのＦｃドメイン間でＣＨ３－ＣＨ３界面を構成するＣＨ３ドメインの１以上のアミノ酸残基を、正電荷を有するアミノ酸残基（例えば、リシン、アルギニン、もしくはヒスチジン）または負電荷を有するアミノ酸残基（例えば、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸）で置換し、その相互作用が、導入された特定の電荷のアミノ酸によって静電気的に不利となるようにする。二量体形成に不利となるように、または二量体形成を妨げるようにＣＨ３ドメインに電荷アミノ酸を導入する方法は、例えば、Ｙｉｎｇ他（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８７：１９３９９－１９４０８，２０１２）、米国特許出願公開第２００６／００７４２２５号明細書、米国特許出願公開第２０１２／０２４４５７８号明細書、および米国特許出願公開第２０１４／００２４１１１号明細書に記載されており、これらは全て、それらの全内容を本明細書の一部として援用する。
本発明のいくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１の配列に対し以下のアミノ酸置換：Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｖ、Ｌ３５１Ｔ、Ｌ３５１Ｈ、Ｌ３５１Ｎ、Ｌ３５２Ｋ、Ｐ３５３Ｓ、Ｓ３５４Ｄ、Ｄ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｒ、Ｄ３５６Ｓ、Ｅ３５７Ｋ、Ｅ３５７Ｒ、Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ａ、Ｔ３６６Ｅ、Ｌ３６８Ｔ、Ｌ３６８Ｙ、Ｌ３６８Ｅ、Ｋ３７０Ｅ、Ｋ３７０Ｄ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３９２Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｔ３９４Ｎ、Ｐ３９５Ｎ、Ｐ３９６Ｔ、Ｖ３９７Ｔ、Ｖ３９７Ｑ、Ｌ３９８Ｔ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｎ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｈ、Ｆ４０５Ｒ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ｈ、Ｙ４０７Ｉ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ４０９Ｔ、およびＫ４０９Ｉの１以上を含む。特定の一実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１の配列に対してアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含む。野生型Ｆｃドメインの配列を配列番号１５１に示す。
ＩＩＩ．アルブミン結合ペプチド
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは、血清タンパク質結合ペプチドに融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含み得る。血清タンパク質ペプチドとの結合は、タンパク質薬の薬物動態を改善することができる。
一例として、本明細書に記載の方法および組成物において使用可能なアルブミン結合ペプチドは一般に当技術分野で公知である。一実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、配列ＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷ（配列番号１５２）を含む。
本発明では、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の血清半減期を延長するために、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）のＮ末端またはＣ末端（例えば、Ｃ末端）にアルブミン結合ペプチドを連結することができる。いくつかの実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体のＮ末端またはＣ末端に直接またはリンカーを介して連結する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）は、従来の遺伝学的または化学的手段、例えば、化学共役によってアルブミン結合ペプチド（例えば、配列番号１５２）のＮ末端またはＣ末端に融合させることができる。所望により、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体とアルブミン結合ペプチドの間にリンカー（例えば、スペーサー）を挿入することができる。理論に縛られるものではないが、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体にアルブミン結合ペプチドが含まれると、その血清アルブミンへの結合を介して治療タンパク質の保持の延長がもたらされ得ると思われる。
ＩＶ．フィブロネクチンドメイン
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは、フィブロネクチンドメインに融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含み得る。フィブロネクチンドメインとの結合は、タンパク質薬の薬物動態を改善することができる。
フィブロネクチンドメインは、例えば、インテグリンなどの膜貫通受容体タンパク質、ならびにコラーゲンおよびフィブリンなどの細胞外マトリックス成分と結合する細胞外マトリックスの高分子量糖タンパク質、またはそのフラグメントである。本発明のいくつかの実施形態では、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の血清半減期を延長するために、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）のＮ末端またはＣ末端（例えば、Ｃ末端）にフィブロネクチンドメインが連結される。フィブロネクチンドメインは、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体のＮ末端またはＣ末端に直接またはリンカーを介して連結することができる。
一例として、本明細書に記載の方法および組成物において使用可能なフィブロネクチンドメインは一般に当技術分野で公知である。一実施形態では、フィブロネクチンドメインは、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ ＮＯ：Ｐ０２７５１の配列のアミノ酸６１０～７０２を有するフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（配列番号１５３）である。別の実施形態では、フィブロネクチンドメインは、アドネクチンタンパク質である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）は、従来の遺伝学的または化学的手段、例えば、化学共役によってフィブロネクチンドメイン（例えば、配列番号１５３）のＮ末端またはＣ末端に融合させることができる。所望により、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体とフィブロネクチンドメインの間にリンカー（例えば、スペーサー）を挿入することができる。理論に縛られるものではないが、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体にフィブロネクチンドメインが含まれると、そのインテグリンならびにコラーゲンおよびフィブリンなどの細胞外マトリックス成分への結合を介して治療タンパク質の保持の延長がもたらされ得ると思われる。
Ｖ．血清アルブミン
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは、血清アルブミンに融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含み得る。血清アルブミンとの結合は、タンパク質薬の薬物動態を改善することができる。
血清アルブミンは、哺乳動物において最も豊富な血液タンパク質である球状のタンパク質である。血清アルブミンは、肝臓で生産され、血清タンパク質の約半分を占める。血清アルブミンは血液中では単量体で可溶型である。血清アルブミンの最も重要ないくつかの機能として、体内におけるホルモン、脂肪酸、およびその他のタンパク質の輸送、ｐＨの緩衝、ならびに血管と身体組織の間の体液の適正な分布に必要とされる浸透圧の維持が挙げられる。好ましい実施形態では、血清アルブミンは、ヒト血清アルブミンである。本発明のいくつかの実施形態では、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の血清半減期を延長するために、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）のＮ末端またはＣ末端（例えば、Ｃ末端）にヒト血清アルブミンが連結される。ヒト血清アルブミンは、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体のＮ末端またはＣ末端に直接またはリンカーを介して連結することができる。
一例として、本明細書に記載の方法および組成物において使用可能な血清アルブミンは一般に当技術分野で公知である。一実施形態では、血清アルブミンは、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ ＮＯ：Ｐ０２７６８（配列番号１５４）の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）は、従来の遺伝学的または化学的手段、例えば、化学共役によってヒト血清アルブミン（例えば、配列番号１５４）のＮ末端またはＣ末端に融合させることができる。所望により、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体とヒト血清アルブミンの間にリンカー（例えば、スペーサー）を挿入することができる。理論に縛られるものではないが、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体にヒト血清アルブミンが含まれると、治療タンパク質の保持の延長がもたらされ得ると思われる。
ＶＩ．リンカー
本明細書に記載のポリペプチドは、リンカーを介してある部分に融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含み得る。いくつかの実施形態では、その部分は、ポリペプチドの安定性を高める。例としての部分には、Ｆｃドメイン単量体、野生型Ｆｃドメイン、アミノ酸置換（例えば、二量体形成を低減する１以上の置換）を有するＦｃドメイン、アルブミン結合ペプチド、フィブロネクチンドメイン、またはヒト血清アルブミンが含まれる。本発明では、ある部分（例えば、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号９７の配列）、野生型Ｆｃドメイン（例えば、配列番号１５１）、アミノ酸置換（例えば、二量体形成を低減する１以上の置換）を有するＦｃドメイン、アルブミン結合ペプチド（例えば、配列番号１５２）、フィブロネクチンドメイン（例えば、配列番号１５３）、またはヒト血清アルブミン（例えば、配列番号１５４））と細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）の間のリンカーは、１～２００個のアミノ酸を含むアミノ酸スペーサーであり得る。好適なペプチドスペーサーは当技術分野で公知であり、例えば、グリシン、アラニン、およびセリンなどのフレキシブルなアミノ酸残基を含むペプチドリンカーを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＧＡ、ＧＳ、ＧＧ、ＧＧＡ、ＧＧＳ、ＧＧＧ、ＧＧＧＡ（配列番号９８）、ＧＧＧＳ（配列番号９９）、ＧＧＧＧ（配列番号１００）、ＧＧＧＧＡ（配列番号１０１）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１０２）、ＧＧＧＧＧ（配列番号１０３）、ＧＧＡＧ（配列番号１０４）、ＧＧＳＧ（配列番号１０５）、ＡＧＧＧ（配列番号１０６）、またはＳＧＧＧ（配列番号１０７）のモチーフ、例えば、多重または反復モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＧＡまたはＧＳ、例えば、ＧＡ、ＧＳ、ＧＡＧＡ（配列番号１０８）、ＧＳＧＳ（配列番号１０９）、ＧＡＧＡＧＡ（配列番号１１０）、ＧＳＧＳＧＳ（配列番号１１１）、ＧＡＧＡＧＡＧＡ（配列番号１１２）、ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１１３）、ＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡ（配列番号１１４）、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１１５）、ＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡ（配列番号１１６）、およびＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１１７）のモチーフを含む２～１２個のアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＧＧＡまたはＧＧＳ、例えば、ＧＧＡ、ＧＧＳ、ＧＧＡＧＧＡ（配列番号１１８）、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１１９）、ＧＧＡＧＧＡＧＧＡ（配列番号１２０）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１２１）、ＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡ（配列番号１２２）、およびＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１２３）のモチーフを含む３～１２個のアミノ酸を含み得る。さらにいくつかの実施形態では、スペーサーは、ＧＧＡＧ（配列番号１０４）、ＧＧＳＧ（配列番号１０５）、例えば、ＧＧＡＧ（配列番号１０４）、ＧＧＳＧ（配列番号１０５）、ＧＧＡＧＧＧＡＧ（配列番号１２４）、ＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１２５）、ＧＧＡＧＧＧＡＧＧＧＡＧ（配列番号１２６）、およびＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１２７）のモチーフを含む４～１２個のアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＧＧＧＧＡ（配列番号１０１）またはＧＧＧＧＳ（配列番号１０２）、例えば、ＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡ（配列番号１２８）およびＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２９）のモチーフを含み得る。本発明のいくつかの実施形態では、ある部分（例えば、Ｆｃドメイン単量体、野生型Ｆｃドメイン、アミノ酸置換（例えば、二量体形成を低減する１以上の置換）を有するＦｃドメイン、アルブミン結合ペプチド、フィブロネクチンドメイン、または血清アルブミン）と細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）の間のアミノ酸スペーサーは、ＧＧＧ、ＧＧＧＡ（配列番号９８）、ＧＧＧＧ（配列番号１００）、ＧＧＧＡＧ（配列番号１３０）、ＧＧＧＡＧＧ（配列番号１３１）、またはＧＧＧＡＧＧＧ（配列番号１３２）であり得る。
いくつかの実施形態では、スペーサーはまた、グリシン、アラニン、およびセリン以外のアミノ酸、例えば、ＡＡＡＬ（配列番号１３３）、ＡＡＡＫ（配列番号１３４）、ＡＡＡＲ（配列番号１３５）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１３６）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号１３７）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号１３８）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１３９）、ＧＥＮＬＹＦＱＳＧＧ（配列番号１４０）、ＳＡＣＹＣＥＬＳ（配列番号１４１）、ＲＳＩＡＴ（配列番号１４２）、ＲＰＡＣＫＩＰＮＤＬＫＱＫＶＭＮＨ（配列番号１４３）、ＧＧＳＡＧＧＳＧＳＧＳＳＧＧＳＳＧＡＳＧＴＧＴＡＧＧＴＧＳＧＳＧＴＧＳＧ（配列番号１４４）、ＡＡＡＮＳＳＩＤＬＩＳＶＰＶＤＳＲ（配列番号１４５）、またはＧＧＳＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１４６）も含み得る。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＥＡＡＡＫ（配列番号１４７）のモチーフ、例えば、多重または反復モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、スペーサーは、（ＸＰ）ｎ（ここで、Ｘは、任意のアミノ酸（例えば、Ａ、Ｋ、またはＥ）であってもよく、ｎは１～５である）、およびＰＡＰＡＰ（配列番号１４８）などのプロリンリッチ配列のモチーフ、例えば、多重または反復モチーフを含み得る。
使用するペプチドスペーサーおよびアミノ酸の長さは、関与する２つのタンパク質および最終的なタンパク質融合ポリペプチドに求められるフレキシビリティの程度によって調節することができる。スペーサーの長さは、適正なタンパク質折り畳みを確保し、凝集の形成を避けるように調節することができる。
ＶＩＩ．ベクター、宿主細胞、およびタンパク質生産
本発明のポリペプチドは、宿主細胞から生産することができる。宿主細胞とは、必要な細胞成分、例えば、対応する核酸から本明細書に記載のポリペプチドおよび融合ポリペプチドを発現させるために必要とされる細胞小器官を含む媒体を指す。これらの核酸は、当技術分野で公知の従来技術（例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿法、ダイレクトマイクロインジェクション、または感染など）によって宿主細胞に導入することができる核酸ベクター内に含まれていてもよい。核酸ベクターの選択は、一部は使用する宿主細胞によって異なる。一般に、好ましい宿主細胞は真核生物（例えば、哺乳動物）または原核生物（例えば、細菌）起源である。
核酸ベクターの構築および宿主細胞
本発明のポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸配列は、当技術分野で公知の様々な方法によって作製することができる。これらの方法には、限定されるものではないが、オリゴヌクレオチド媒介（または部位指定）突然変異誘発およびＰＣＲ突然変異誘発が含まれる。本発明のポリペプチドをコードする核酸分子は、例えば、遺伝子合成などの標準技術を用いて得ることができる。あるいは、野生型細胞外ＡｃｔＲＩＩａをコードする核酸分子は、例えば、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（商標）突然変異誘発などの当技術分野における標準技術を用いて、特定のアミノ酸置換を含むように変異させることができる。核酸分子は、ヌクレオチド合成装置またはＰＣＲ技術を用いて合成することができる。
本発明のポリペプチドをコードする核酸配列は、原核生物または真核生物の宿主細胞で核酸分子を複製および発現することができるベクターに挿入することができる。当技術分野では多くのベクターが利用可能であり、本発明の目的において使用できる。各ベクターは種々の成分を含んでいてもよく、これらの成分は特定の宿主細胞と適合するように調節および最適化することができる。例えば、ベクター成分としては、限定されるものではないが、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位、シグナル配列、目的タンパク質をコードする核酸配列、および転写終結配列が含まれる。
いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞を本発明の宿主細胞として使用することができる。哺乳動物細胞種の例としては、限定されるものではないが、ヒト胎児腎（ＨＥＫ）（例えば、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｆ）細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＰＣ３細胞、Ｖｅｒｏ細胞、ＭＣ３Ｔ３細胞、ＮＳ０細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＶＥＲＹ細胞、ＢＨＫ細胞、ＭＤＣＫ細胞、Ｗ１３８細胞、ＢＴ４８３細胞、Ｈｓ５７８Ｔ細胞、ＨＴＢ２細胞、ＢＴ２０細胞、Ｔ４７Ｄ細胞、ＮＳ０細胞（免疫グロブリン鎖を内因的に生産しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ細胞、およびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられる。いくつかの実施形態では、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞も本発明の宿主細胞として使用可能である。大腸菌株としては、限定されるものではないが、大腸菌２９４（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，４４６）、大腸菌λ１７７６（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，５３７）、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）（ＡＴＣＣ（登録商標）ＢＡＡ－１０２５）、および大腸菌ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，６０８）が挙げられる。異なる宿主細胞は、翻訳後プロセシングおよびタンパク質産物の修飾（例えば、グリコシル化）に特徴的かつ特異的な機構を有する。適当な細胞株または宿主系は、発現されるポリペプチドの適正な修飾およびプロセシングを確保するために選択することができる。上記の発現ベクターは、当技術分野における従来技術、例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿法、およびダイレクトマイクロインジェクションを用いて適当な宿主細胞に導入することができる。タンパク質生産用のためにベクターが宿主細胞に導入されれば、プロモーターを誘導する、形質転換体を選択する、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために必要に応じて修飾された従来の栄養培地で宿主細胞を培養する。治療タンパク質の発現のための方法は当技術分野で公知であり、例えば、Ｐａｕｌｉｎａ Ｂａｌｂａｓ，Ａｒｇｅｌｉａ Ｌｏｒｅｎｃｅ（ｅｄｓ．）、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ｒｅｖｉｅｗｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；第２版（２００４年）、およびＶｌａｄｉｍｉｒ ＶｏｙｎｏｖおよびＪｕｓｔｉｎ Ａ．Ｃａｒａｖｅｌｌａ（ｅｄｓ．）、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；第２版（２０１２年）が参照される。
タンパク質生産、回収および精製
本発明のポリペプチドを生産するために使用される宿主細胞は、当技術分野で公知であり、選択された宿主細胞の培養に好適な培地で増殖させることができる。哺乳動物宿主細胞に好適な培地の例としては、最小必須培地（ＭＥＭ：Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）、ダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ：Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）、Ｅｘｐｉ２９３（商標）発現培地、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ：ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）を添加したＤＭＥＭ、およびＲＰＭＩ－１６４０が挙げられる。細菌宿主細胞に好適な培地の例としては、選択薬剤、例えば、アンピシリンなどの必要な添加を行ったＬｕｒｉａ ｂｒｏｔｈ（ＬＢ）が挙げられる。宿主細胞は、好適な温度、例えば、約２０℃～約３９℃、例えば、２５℃～約３７℃、好ましくは、３７℃、および５～１０％などのＣＯ２レベルで培養する。培地のｐＨは、主として宿主生物に応じて、一般に、約６．８～７．４、例えば、７．０である。本発明の発現ベクターでは誘導プロモーターが使用され、プロモーターの活性化に好適な条件下でタンパク質発現が誘導される。
いくつかの実施形態では、使用する発現ベクターおよび宿主細胞に応じて、発現されるタンパク質を宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）から細胞培養培地へ分泌させることができる。タンパク質の回収は、細胞残渣を除去するために細胞培養培地を濾過することを含み得る。これらのタンパク質をさらに精製してもよい。本発明のポリペプチドは、タンパク質精製の技術分野で公知の任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、およびサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解度、またはタンパク質精製のための他のいずれかの標準技術によって、精製することができる。タンパク質は、例えば、プロテインＡカラム（例えば、ＰＯＲＯＳプロテインＡクロマトグラフィー）などのアフィニティーカラムを適切に選択し、クロマトグラフィーカラム（例えば、ＰＯＲＯＳ ＨＳ－５０陽イオン交換クロマトグラフィー）、濾過、限外濾過、塩析および透析法と組み合わせることによって単離および精製することができる。
他の実施形態では、宿主細胞は、発現されたタンパク質を回収するために、例えば、浸透圧ショック、音波処理、または溶解によって破壊することができる。細胞が破壊されれば、細胞残渣を遠心分離または濾過によって除去することができる。場合によっては、精製を容易にするためにポリペプチドをペプチドなどのマーカー配列に結合させることもできる。マーカーアミノ酸配列の例は、ヘキサヒスチジンペプチド（Ｈｉｓタグ）であり、これはマイクロモルの親和性で、ニッケル官能基を有するアガロースアフィニティーカラムに結合する。精製に有用な他のペプチドタグとしては、限定されるものではないが、血球凝集素「ＨＡ」タグが含まれ、これはインフルエンザ血球凝集素タンパク質に由来するエピトープに相当する（Ｗｉｌｓｏｎ他、Ｃｅｌｌ ３７：７６７，１９８４）。
あるいは、本発明のポリペプチドは、例えば、遺伝子療法において、本発明のポリペプチドをコードする核酸分子を含むベクター（例えば、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルスベクター、例えば、変異ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ：Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｖａｃｃｉｎｉａ Ａｎｋａｒａ））、アデノ随伴ウイルスベクター、およびアルファウイルスベクター））を投与することにより、対象（例えば、ヒト）の細胞によって生産することができる。ベクターは、対象の細胞内にあれば（例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿法、ダイレクトマイクロインジェクション、感染など）、ポリペプチドの発現を促進し、これは次に細胞から分泌される。疾患または障害の治療が所望の転帰である場合には、それ以上の作用は必要とされないと思われる。タンパク質の採集が望まれる場合には、対象から血液を採取し、当技術分野で公知の方法によって血液からタンパク質を精製することができる。
ＶＩＩＩ．医薬組成物および製剤
本発明は、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド）を含む医薬組成物に関する。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、治療タンパク質として、Ｃ末端伸長部（例えば、１、２、３、４、５、６またはそれ以上の付加的アミノ酸）を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７０（例えば、配列番号６～７０）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、治療タンパク質として、ある部分（例えば、Ｆｃドメイン単量体、またはその二量体、野生型Ｆｃドメイン、アミノ酸置換（例えば、二量体形成を低減する１以上の置換）を有するＦｃドメイン、アルブミン結合ペプチド、フィブロネクチンドメイン、または血清アルブミン）に融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のうちいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドを含む本発明の医薬組成物は、療法において、他の薬剤（例えば、治療生物製剤および／または小分子）または組成物と併用することができる。治療有効量のポリペプチドに加え、医薬組成物は１種類以上の薬学上許容される担体または賦形剤を含んでいてもよく、当業者に公知の方法によって調剤することはできる。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明のポリペプチドをコードする核酸分子（ＤＮＡもしくはＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）、またはそのような核酸分子を含有するベクターを含む。
医薬組成物の許容される担体および賦形剤は、使用される用量および濃度でレシピエントに無毒である。許容される担体および賦形剤は、リン酸塩、クエン酸塩、ＨＥＰＥＳ、およびＴＡＥなどのバッファー、アスコルビン酸およびメチオニンなどの酸化防止剤、塩化ヘキサメトニウム、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、レゾルシノール、および塩化ベンザルコニウムなどの保存剤、ヒト血清アルブミン、ゼラチン、デキストラン、および免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、ヒスチジン、およびリシンなどのアミノ酸、ならびにグルコース、マンノース、スクロース、およびソルビトールなどの炭水化物を含み得る。本発明の医薬組成物は、注射製剤の形態で非経口的に投与することができる。注射用医薬組成物は、無菌溶液または任意の薬学上許容される液体をビヒクルとして用いて調剤することができる。薬学上許容されるビヒクルとしては、限定されるものではないが、無菌水、生理食塩水、および細胞培養培地（例えば、ダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、α－改変イーグル培地（α－ＭＥＭ）、Ｆ－１２培地）が挙げられる。調剤方法は当技術分野で公知であり、例えば、Ｂａｎｇａ（ｅｄ．）、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ， Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（第３版）、Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ Ｇｒｏｕｐ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２０１５）が参照される。
本発明の医薬組成物は、ヒドロキシルメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセルなどのマイクロカプセル中に調製してもよい。本発明の医薬組成物はまた、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、およびナノカプセルなどの他の薬物送達システム中に調製してもよい。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２２版（２０１２年）に記載されている。ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用される医薬組成物は無菌でなければならない。これは無菌濾過膜を介した濾過によって容易に達成される。
本発明の医薬組成物はまた、徐放性製剤として調製してもよい。徐放性製剤の好適な例としては、本発明のポリペプチドを含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられる。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリアクチド（ｐｏｌｙａｃｔｉｄｅｓ）、Ｌ－グルタミン酸とγエチル－Ｌ－グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン－酢酸ビニル、分解性乳酸－グリコール酸コポリマー（例えば、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標））、およびポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が挙げられる。一部の徐放性製剤は、数ヶ月、例えば、１～６か月にわたって分子の放出を可能とするが、他の製剤は本発明の医薬組成物をより短い期間、例えば、数日～数週間で放出する。
医薬組成物は、必要であれば、単位剤形で形成することができる。医薬製剤中に含まれる有効成分、例えば、本発明のポリペプチドの量は、指定の範囲内で適切な用量が提供されるような量（例えば、０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内の用量）である。
遺伝子療法用の医薬組成物は許容される希釈剤中にあってよく、または遺伝子送達ビヒクルが包埋された緩徐放出マトリックスを含み得る。送達方法としてハイドロダイナミックインジェクションが使用される場合には、本明細書に記載のポリペプチドをコードする核酸分子またはその核酸分子を含有するベクター（例えば、ウイルスベクター）を含有する医薬組成物は、大きな液量で静脈内に容易に送達される。ｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子送達ビヒクルとして使用可能なベクターとしては、限定されるものではないが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルスベクター、例えば、変異ワクシニアアンカラ）、アデノ随伴ウイルスベクター、およびアルファウイルスベクターが挙げられる。
ＩＸ．経路、用量、および投与
治療タンパク質として本発明のポリペプチドを含む医薬組成物は、例えば、静脈内投与、非経口投与、皮下投与、筋肉内投与、動脈内投与、くも膜下腔内投与、または腹腔内投与向けに調剤されてよい。医薬組成物はまた、経口投与、鼻腔投与、噴霧投与、エアロゾル投与、直腸、もしくは膣投与用に調剤し、またはそれらを介して投与することができる。注射製剤に関しては、種々の有効な医薬担体が当技術分野で知られている。例えば、ＡＳＨＰ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｎ Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｄｒｕｇｓ，Ｔｏｉｓｓｅｌ，第１８版（２０１４）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドをコードする核酸分子またはそのような核酸分子を含有するベクターを含む医薬組成物は、遺伝子送達によって送達することができる。遺伝子送達の方法は、当業者に周知である。ｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子送達および発現に使用可能なベクターとしては、限定されるものではないが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルスベクター、例えば、変異ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ））、アデノ随伴ウイルスベクター、およびアルファウイルスベクターが挙げられる。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドをコードするｍＲＮＡ分子を直接対象に投与してもよい。
本発明のいくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドをコードする核酸分子またはそのような核酸分子を含有するベクターは、ハイドロダイナミックインジェクションプラットフォームを用いて投与することができる。ハイドロダイナミックインジェクション法では、本明細書に記載のポリペプチドをコードする核酸分子を、操作したプラスミド（例えば、ウイルスプラスミド）内の強力なプロモーターの制御下に置く。プラスミドは多くの場合、大きな液量で静脈内に容易に送達される。ハイドロダイナミックインジェクションは、大きな液量の迅速な注入から得られる高圧が静脈からの流体およびプラスミドの管外遊出をもたらすように細胞透過性を高めるために、静脈内で、制御された流体力学的圧力を使用する。核酸分子の発現は、主として肝臓によって駆動される。マウスでは、ハイドロダイナミックインジェクションは、多くの場合、プラスミドの尾静脈への注射によって行われる。特定の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドをコードするｍＲＮＡ分子は、ハイドロダイナミックインジェクションを用いて投与することができる。
本発明の医薬組成物の用量は、投与経路、治療される疾患、および対象の身体的特徴、例えば、年齢、体重、健康状態を含む因子によって決まる。本発明の医薬組成物は、０．０１～５００ｍｇ／ｋｇの範囲（例えば、０．０１、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００ｍｇ／ｋｇ）、より具体的な実施形態では、約０．１～約３０ｍｇ／ｋｇ、より具体的な実施形態では、約０．３～約３０ｍｇ／ｋｇの用量の本発明のポリペプチドを含み得る。用量は、対象の疾患の程度および種々のパラメータなどの従来の因子に従って医師が適合させることができる。
医薬組成物は、その剤形に適した様式で、症状の改善または修復をもたらすために治療有効量で投与される。医薬組成物は、様々な剤形、例えば、静脈内剤形、皮下剤形、および経口剤形（例えば、摂取可能な溶液、薬物放出カプセル）で投与される。一般に、治療タンパク質は、０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、１～５０ｍｇ／ｋｇで投与される。本発明のポリペプチドを含む医薬組成物は、それを必要とする対象に、例えば、毎日、毎週、隔週、毎月、隔月、四半期毎、半年毎、１年毎、または医学的に必要に応じて１回以上（例えば、１～１０回以上）投与することができる。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドを含む医薬組成物は、それを必要とする対象に、毎週、隔週、毎月、隔月、または四半期毎に投与することができる。用量は単回または複数回の投与計画で提供することができる。投与間のタイミングは、医学的状態が改善すると減らすことができ、または患者の健康が減退すると増やすことができる。
Ｘ．治療方法
本発明は、ＡｃｔＲＩＩｂの細胞外部分からＡｃｔＲＩＩａの細胞外部分へアミノ酸を置換すると、特性が改善されたＡｃｔＲＩＩａ変異体が得られるという発見に基づく。ＡｃｔＲＩＩｂからＡｃｔＲＩＩａに残基を導入することによって作出されたＡｃｔＲＩＩａ変異体は、より長い血清半減期およびＢＭＰ９に対する低い結合親和性などのＡｃｔＲＩＩａの有益な特性を保持し、かつ、アクチビンＡおよびＢに対する結合の増強（表４参照）および筋肉量を増加させる能力（実施例１～３および５～６を参照）のようなＡｃｔＲＩＩｂの有益な特性のいくつかを獲得する。これらのＡｃｔＲＩＩａ変異体特性は、リガンド結合に関して内因性のアクチビン受容体と競合し得る有用な治療性（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）を作出する。ＡｃｔＲＩＩａ変異体は受容体の細胞外部分を含むので、それらは可溶型であり、かつ、細胞内シグナル伝達経路を活性化することなく、リガンド（例えば、アクチビンＡおよびＢ、ミオスタチン、ＧＤＦ１１）と結合してそれらを隔離する（ｓｅｑｕｅｓｔｅｒ）ことができる。よって、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体は、アクチビンシグナル伝達の上昇が関連付けられている疾患または病態（例えば、アクチビン受容体またはアクチビン受容体リガンドの発現の増加に関連する疾患または病態）を治療するために使用することができる。例えば、ミオスタチンの喪失は骨格筋の筋肉量を増加させることが示されており、ミオスタチンが骨格筋の成長を阻害することを示唆している。その結果、ミオスタチンに結合して内因性受容体との相互作用を減少させる治療薬による治療は、筋肉量を増加させるための実行可能なアプローチとなり得ることになる。実際、本発明の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体はマウスの筋肉量を増加させる（実施例１～３および５～６を参照）。これらのデータは、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体が筋肉量を増加させ、筋力低下または筋肉の萎縮をもたらす疾患または病態を有する対象を治療するために使用できることを示している。
さらに、これらのデータは、本発明の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を用いてアクチビン受容体またはアクチビン受容体リガンドの発現上昇に関連する他の疾患または病態、例えば代謝性疾患（例えば、肥満、１型糖尿病および２型糖尿病）を治療することができる説得力のある理由を提示する。筋肉量を増やすことが体脂肪および／または体重を減らす一つの方法であることを多くの研究が示しており、これは本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を使用して、筋肉量を増やすことによって間接的に代謝性疾患（例えば肥満、１型糖尿病および２型糖尿病）を治療できることを示している。しかしながら、肥満マウスおよびヒトにおいてアクチビン受容体およびアクチビン受容体リガンドが増加することが示されているので、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を使用して、（例えば、内因性のアクチビン受容体リガンド、例えばアクチビンおよびミオスタチンと結合し、それらを隔離することによって）アクチビン受容体シグナル伝達の上昇を減少させることによって肥満を治療することができる。
本発明は、それを必要とする対象において筋肉量および強度を増加させるために使用することができる組成物および治療方法を提供する。いくつかの実施形態において、対象は、筋力低下または筋肉の萎縮（例えば、骨格筋の筋力低下または萎縮）を引き起こす疾患を有していてもよい。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、筋力低下および筋肉の萎縮を伴う疾患または病態を有する対象においてミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９シグナル伝達に作用することに関する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含むポリペプチドは、ミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のそれらの受容体（例えばＡｃｔＲＩＩａ、ＡｃｔＲＩＩｂ、およびＢＭＰＲＩＩ（例えばＡｃｔＲＩＩａ））への結合を低減または阻害する。いくつかの実施形態において、ミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９シグナル伝達に作用する（例えば、ミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のそれらの受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩａ、ＡｃｔＲＩＩｂ、およびＢＭＰＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩａ））への結合を低減または阻害する）ことにより、対象の筋肉量が増加する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド）は、筋肉量を増加させるために、または対象におけるミオスタチン、アクチビンおよび／またはＢＭＰ９シグナル伝達に作用するために、対象に投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、対象の骨塩密度を高める。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、血管透過性の増加または漏出のような対象における血管合併症を引き起こさない。本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態において、対象は、筋力低下および筋肉の萎縮を伴う疾患または病態（例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、顔面頭蓋上腕筋ジストロフィー（ＦＳＨＤ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）サルコペニア、または癌悪液質）を有する。
本発明はまた、対象に本明細書に記載のポリペプチド（例えば、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド）を投与することによって、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー（ＦＳＨＤ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、サルコペニア、または癌悪液質を有する対象を治療する方法を含む。
本明細書に記載の組成物および方法はまた、代謝性疾患、例えば肥満および糖尿病（１型糖尿病および２型糖尿病）などの医学的状態を治療および／または予防するためにも使用することができる。いくつかの実施形態において、対象は肥満を引き起こす疾患を患っていてもよい。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、肥満、糖尿病（１型糖尿病および２型糖尿病）、または肥満をもたらす疾患または病態を有する対象においてミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９シグナル伝達に作用することに関する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体を含むポリペプチドは、ミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のそれらの受容体（例えばＡｃｔＲＩＩａ、ＡｃｔＲＩＩｂ、およびＢＭＰＲＩＩ（例えばＡｃｔＲＩＩａ））への結合を低減または阻害する。いくつかの実施形態において、ミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９シグナル伝達に作用する（例えば、ミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９のそれらの受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩａ、ＡｃｔＲＩＩｂ、およびＢＭＰＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩａ））への結合を低減または阻害する）ことにより、対象の体脂肪（例えば、体脂肪量または体脂肪率）の減少、対象の体重または体重増加の減少、空腹時インスリンレベルの低下、グルコースクリアランスの増加、またはインスリン感受性の増加（例えば、インスリン抵抗性の低下）をもたらす。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド）は、（例えば、肥満を発症するリスクがある患者（例えば、太りすぎの患者、肥満の家族歴がある患者、または肥満のリスク増加に関連する他の医学的症状または遺伝的リスク因子がある患者）において）肥満の発症を予防するために、および／または既に肥満と診断された患者を治療するために、対象に投与され得る。例えば、対象への細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）の投与は、脂肪の量を減らすことによって、対象の体重を減らすことに役立ち得る。いくつかの実施形態において、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体は、除脂肪量を維持または増加させながら脂肪の量を低減する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド）は、糖尿病（例えば、１型糖尿病および２型糖尿病）の発症を予防するため、および／またはすでに糖尿病と診断された患者を治療するために使用され得る。糖尿病を発症する可能性が高い患者（例えば、遺伝的素因、糖尿病の家族歴、前糖尿病（ｐｒｅｄｉａｂｅｔｅｓ）、他の自己免疫疾患との関連、または他の代謝性疾患を有する個体）には、予防的に本明細書に記載のポリペプチド（例えば、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド）が投与されてもよく、それにより、細胞外ＡｃｔＲＩＩａポリペプチドが、β－細胞の正常機能および健全な状態を維持するとともにβ－細胞に対する自己免疫性炎症性の損傷を予防または遅延し得る。他の実施形態において、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド）は、糖尿病（例えば、１型糖尿病および２型糖尿病）と診断される前に、または糖尿病の臨床症状（例えば、高血糖値、高空腹時インスリンレベル、インスリン抵抗性、多尿症、多飲、多食症）と診断される前に、個体に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、細胞外ＡｃｔＲＩＩａポリペプチドは、患者がインスリンを必要とする前に患者に投与することができる。さらに他の実施形態において、細胞外ＡｃｔＲＩＩａポリペプチドの投与は、糖尿病患者におけるインスリン治療の必要性を遅らせるかまたは延期することができる。例えば、本発明の細胞外ＡｃｔＲＩＩａポリペプチドの対象への投与は、血液からのグルコースクリアランス速度を増加させるのを助け得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド）は、肥満または糖尿病（例えば、１型糖尿病および２型糖尿病）の患者の発症を予防および／または治療するために、あるいはミオスタチン、アクチビン、および／またはＢＭＰ９シグナル伝達に作用するため（例えば、アクチビン、ミオスタチン、および／またはＢＭＰ９のそれらの受容体への結合を低減または阻害するため）に、対象に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、体脂肪を減少させる（例えば、皮下脂肪および／または内臓脂肪の量を減少させる、肥満症を減少させる、精巣上体および腎周囲脂肪体の重量を減少させる、または体脂肪率を減少させる）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、体重を減少させるかまたは体重増加を減少させる（例えば、体重増加の割合を減少させる）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は脂肪細胞の増殖を減少させる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法はＬＤＬを低下させる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法はトリグリセリドを減少させる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、対象の血清脂質プロフィールを改善する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、除脂肪量を減少させることなく（例えば、除脂肪量に影響を与えず、または除脂肪量を増加させないで）体脂肪を減少させる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は体脂肪を減少させ、筋肉量を増加させる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、血糖値（例えば、空腹時血糖値）を低下させる、および／またはグルコースクリアランスを上昇させる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、空腹時インスリンレベルを低下させるおよび／またはインスリン感受性を改善する（例えば、インスリン抵抗性を低下させる）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、インスリン生合成および／またはβ－細胞からの分泌を調節する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、食物摂取に対する食欲に影響を及ぼさない。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、血管透過性の増加または漏出のような対象における血管合併症を引き起こさない。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチド）は、筋肉量を増やすことによって、体脂肪を低減する、体重を低減する、或いはインスリン感受性および／またはグルコースクリアランスを増加させる。
本明細書に記載の方法のいずれにおいても、細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７１（例えば、配列番号６～７１）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドであってさらに、１～６個のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６個またはそれ以上のアミノ酸）のＣ末端伸長部を含むポリペプチドが治療用タンパク質として使用され得る。本明細書に記載の方法のいずれにおいても、ある部分（例えば、Ｆｃドメイン単量体、野生型Ｆｃドメイン、アミノ酸置換（例えば、二量体形成を低減する１以上の置換）を有するＦｃドメイン、アルブミン結合ペプチド、フィブロネクチンドメイン、またはヒト血清アルブミン）に融合された細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（例えば、配列番号１～７２（例えば、配列番号６～７２）のいずれか１つの配列を有する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体）を含むポリペプチドの二量体（例えばホモ二量体またはヘテロ二量体）は、治療用タンパク質として使用されてもよい。本明細書に記載のポリペプチドをコードする核酸、または該核酸を含有するベクターもまた、本明細書に記載の方法のいずれかに従って投与され得る。本明細書に記載の方法のいずれにおいても、ポリペプチド、核酸、またはベクターは医薬組成物の一部として投与することができる。
実施例１：細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の体重に及ぼす効果
Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに、以下の６つのポリペプチドのうちの１つをコードするプラスミド構築物の単回のハイドロダイナミックインジェクション（ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）を行った（ｎ＝１０／群）。
（１）ヒトＦｃ（ｈＦｃ）、
（２）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩａ（配列番号７３）、
（３）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩｂ（配列番号７４）、
（４）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（配列番号６９）、そして
（５）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩｂ変異体（配列番号１４９）。
１００μｇのプラスミド構築物を５～８秒間かけて体重の１０％の容量で送達した。高容量かつ短時間の注入は、プラスミドが発現されるであろう肝細胞にプラスミドを導入するのに必要な圧力を提供し、特に目的のタンパク質（ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒｅｓｔ）は強力かつ遍在するプロモーターの下で発現される。目的のタンパク質は肝細胞の内因性機構（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｍａｃｈｉｎｅｒｙ）の下で分泌され、自由に循環する。マウスを週２回３０日間秤量し、測定値をグラム単位の絶対体重（ＢＷ）およびベースライン測定値からの体重変化のパーセントとして記録した（それぞれ図２Ａおよび２Ｂ）。
実施例２：細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の筋肉量に及ぼす効果
マウスに、以下の６つのポリペプチドのうちの１つをコードするプラスミド構築物の単回のハイドロダイナミックインジェクションを行った（ｎ＝１０／群）。
（１）ヒトＦｃ（ｈＦｃ）、
（２）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩａ（配列番号７３）、
（３）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩｂ（配列番号７４）、
（４）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体（配列番号６９）、そして
（５）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩｂ変異体（配列番号１４９）。
１００μｇのプラスミド構築物を５～８秒間かけて体重の１０％の容量で送達した。高容量かつ短時間の注入は、プラスミドが発現されるであろう肝細胞にプラスミドを導入するのに必要な圧力を提供し、特に目的のタンパク質は強力かつ遍在するプロモーターの下で発現される。目的のタンパク質は肝細胞の内因性機構の下で分泌され、自由に循環する。試験の０日目（ベースライン）、１４日目および２８日目に、マウスを、ＭｉｎｉＳｐｅｃ ＬＦ９０ ＮＭＲ分析器（Ｂｒｕｋｅｒ（テキサス州ウッドランズ所在））を使用して、除脂肪量の決定のためにＮＭＲ分析にかけた。ベースラインからの除脂肪量の変化率を１４日目および２８日目に記録した（図３Ａおよび３Ｂ）。
実施例３：精製組換えタンパク質として投与した場合の細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の体重に及ぼす効果
雌Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ニューヨーク州ハドソン所在））は、トリス緩衝生理食塩水ビヒクルまたは以下の５つの精製組換えポリペプチドのうちの１つを１０ｍｇ／ｋｇの用量で４週間にわたり週２回腹腔内注射した（ｎ＝１０／群）。
（１）トリス緩衝生理食塩水、
（２）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩａ（配列番号７３）、
（３）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩｂ（配列番号７４）、
（４）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩａ／ｂ変異体（配列番号６９）、
（５）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩａ／ｂ９Δ９変異体（配列番号５８）、そして
（６）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した細胞外ＡｃｔＲＩＩａ／ｂΔ９ｍｉｎ変異体（配列番号６）。
精製組換えタンパク質を、ＨＥＫ２９３細胞における一過性発現によって作製し、プロテインＡセファロースクロマトグラフィーを使用して馴化培地から精製した。
４週間の投与後、マウスを人道的に屠殺し、剖検を行った。剖検には、全身、ならびに腓腹筋、胸筋、および大腿四頭筋に対する重量の収集が含まれた。筋肉／体重データの統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（カリフォルニア州ラホヤ所在））で行った（それぞれ図４Ａおよび４Ｂ）。
実施例４：表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によるＡｃｔＲＩＩａ変異体結合親和性の評価
ＡｃｔＲＩＩａ変異体とリガンドであるアクチビンＡ、アクチビンＢ、成長分化因子１１（ＧＤＦ１１）、およびＢＭＰ－９との間の相互作用の動態を測定するためにＢｉａｃｏｒｅ ３０００を使用した。ＡｃｔＲＩＩａ変異体を実施例３に記載の方法に従って発現および精製した。ＡｃｔＲＩＩａ変異体を、適正な配向を確保するためにフローセル２～４において捕捉抗体（ＧＥＧＥからの抗マウス）を用いてチップ（ＣＭ４またはＣＭ５）に固定した。フローセル１は非特異的結合およびバルク効果を差し引くために参照セルとして使用した。ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ（商標）からのＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液をランニング緩衝液として使用した。物質移動効果を避けるために４０μｌ／分にて、一定の濃度系で各リガンドを流した。各相互作用のＫＤを計算するため、ＢｉｏＬｏｇｉｃ（商標）ソフトウエアによりＳｃｒｕｂｂｅｒ２を用いてデータを解析した（表４）。
実施例５：細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の体重および筋肉重量に及ぼす効果
Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに、以下の１２のポリペプチドのうちの１つをコードするプラスミド構築物の単回のハイドロダイナミックインジェクションを行った（ｎ＝１０／群）。
（１）ビヒクル、
（２）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合したｐＬＥＶ１１３－ＡｃｔＲＩＩａ（１９～１２７）（配列番号７３）、
（３）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合したｐＬＥＶ１１３－ＡｃｔＲＩＩｂ（４１～１５５）（配列番号７４）、
（４）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合したｐＬＥＶ１１３－ＡｃｔＲＩＩａ／ｂ（配列番号６９）、
（５）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合したｐＬＥＶ１１３－ＡｃｔＲＩＩｂ／ａ（配列番号１４９）、
（６）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合したｐＬＥＶ１１３－ＡｃｔＲＩＩａ／ｂ＋（配列番号１５０）、
（７）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合したｐＬＥＶ１１３－ＡｃｔＲＩＩａ／ｂ－デルタ９ｍ２（配列番号３８）、
（８）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合したｐＬＥＶ１１３－ＡｃｔＲＩＩａ／ｂ－デルタ９ｍ３（配列番号４１）、
（９）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合したｐＬＥＶ１１３－ＡｃｔＲＩＩａ／ｂ－デルタ９ｍ４（配列番号４４）、
（１０）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合したｐＬＥＶ１１３－ＡｃｔＲＩＩａ／ｂｍａｘ１（配列番号７０）、
（１１）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合したｐＬＥＶ１１３－ＡｃｔＲＩＩａ／ｂｍａｘ２（配列番号７１）、そして
（１２）ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合したｐＬＥＶ１１３－ＡｃｔＲＩＩａ／ｂｍａｘ１（配列番号７２）。
１００μｇのプラスミド構築物を５～８秒間かけて体重の１０％の容量で送達した。高容量かつ短時間の注入は、プラスミドが発現されるであろう肝細胞にプラスミドを導入するのに必要な圧力を提供し、特に目的のタンパク質は強力かつ遍在するプロモーターの下で発現される。目的のタンパク質は肝細胞の内因性機構の下で分泌され、自由に循環する。マウスを週２回３０日間秤量し、測定値をグラム単位の絶対体重（ＢＷ）およびベースライン測定値からの体重変化のパーセントとして記録した（それぞれ図５Ａおよび５Ｂ）。試験終了時に筋肉も秤量し、測定値をグラムで記録した（図６Ａおよび６Ｂ）。
実施例６：細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の体重、筋肉重量、および筋肉量に及ぼす用量効果（ｄｏｓｅ ｅｆｆｅｃｔ）
８週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６マウスを９群に体重を合わせた（ｎ＝１０／群）。群に５ｍＬ／ｋｇのビヒクル（Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４）または４つの濃度のＡｃｔＲＩＩＡ／Ｂ－Ｆｃ（ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した配列番号６９）またはＡｃｔＲＩＩＡ／ＢΔ９－Ｆｃ（ＧＧＧリンカーを介してｈＦｃのＮ末端に融合した配列番号５８）のうちの１つのいずれかを投与した。評価された用量は、２０ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇであった。処置は、週に２回で４週間（８回）腹腔内（ＩＰ）投与し、そして試験は試験２８日目に終了した。試験中、投与日（図７Ａおよび７Ｂ）に体重を記録し、試験終了時に、除脂肪および脂肪の質量分析のために群をＮＭＲイメージングし（図８Ａおよび８Ｂ）、胸筋および腓腹筋の筋肉重量を回収して秤量した（図９Ａおよび９Ｂ）。
実施例７：肥満に対する細胞外ＡｃｔＲＩＩａ変異体の効果
成体雄のＣ５７ＢＬ／６マウスを体重が一致した処置群に割り当てた（ｎ＝１０／群）。全ての動物は、通常の固形飼料（Ｃｈｏｗ；Ｐｕｒｉｎａ ＬａｂＤｉｅｔ５００１（ミズーリ州セントルイス所在））または高脂肪食（ＨＦＤ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ（登録商標）Ｄ１２３３１（ニュージャージー州ニューブランズウィック所在））で維持した。固形飼料を摂取している群およびＨＦＤを摂取している群を、さらに週に２回、ＡｃｔＲＩＩ変異体またはビヒクルのいずれかを６０日間投与される群に分けた。体重は処置時に週に２回測定する。ベースライン時（治療剤の投与およびＨＦＤへの移行前）にＭｉｎｉＳｐｅｃ ＬＦ５０を使用して、次いで試験終了時まで隔週で体組成を測定する。試験終了日に、目的の組織（血清、血漿、筋肉および脂肪蓄積物）を外科的に取り出し、そして秤量する。続いて、血清サンプルを肥満のバイオマーカーについて評価し、血漿をＨｂａ１ｃレベルについて評価した。
その他の実施形態
本発明をその特定の実施形態に関して記載してきたが、さらなる改変が可能であり、本願は、一般に本発明の原理に従う本発明のいずれの変形形態、使用、または適応も包含することが意図され、本開示からのそのような逸脱を含むことは、本発明が属する技術分野内の既知または関連の実施の範囲内にあり、以上に示す本質的特徴に該当し得ることが理解されるであろう。
各個の刊行物、特許、および特許出願の全内容が本明細書の一部として援用されることが具体的かつ個々に示される場合と同等に、全ての刊行物、特許、および特許出願の全内容は本明細書の一部として援用される。
他の実施形態も以下の特許請求の範囲内にある。
以下に、上記実施形態から把握できる技術思想を付記として記載する。
［付記１］
細胞外アクチビンＩＩａ型受容体（ＡｃｔＲＩＩａ）変異体を含み、
前記変異体は
ＧＡＩＬＧＲＳＥＴＱＥＣＬＸ１Ｘ２ＮＡＮＷＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＴＮＱＴＧＶＥＸ７ＣＸ８ＧＸ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＨＣＸ１５ＡＴＷＸ１６ＮＩＳＧＳＩＥＩＶＸ１７Ｘ１８ＧＣＸ１９Ｘ２０Ｘ２１ＤＸ２２ＮＣＹＤＲＴＤＣＶＥＸ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６ＰＸ２７ＶＹＦＣＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫＦＳＹＦＰＥＭＥＶＴＱＰＴＳ（配列番号１）の配列を有し、配列中、Ｘ１はＦまたはＹであり；Ｘ２はＹであり；Ｘ３はＥであり；Ｘ４はＬであり；Ｘ５はＥまたはＤであり；Ｘ６はＲであり；Ｘ７はＲまたはＰであり；Ｘ８はＥであり；Ｘ９はＥであり；Ｘ１０はＫまたはＱであり；Ｘ１１はＤであり；Ｘ１２はＫであり；Ｘ１３はＲであり；Ｘ１４はＬであり；Ｘ１５はＹまたはＦであり；Ｘ１６はＲまたはＫであり；Ｘ１７はＫであり；Ｘ１８はＫであり；Ｘ１９はＷであり；Ｘ２０はＬであり；Ｘ２１はＤであり；Ｘ２２はＦまたはＩであり；Ｘ２３はＴであり；Ｘ２４はＥまたはＫであり；Ｘ２５はＥであり；Ｘ２６はＮであり；かつ、Ｘ２７はＱである、ポリペプチド。
［付記２］
Ｘ１はＦであり、かつＸ１０はＫである、付記１に記載のポリペプチド。
［付記３］
前記変異体が配列番号６～７２のうちいずれか１つの配列を有する、付記１に記載のポリペプチド。
［付記４］
１以上のアミノ酸のＣ末端伸長部をさらに含む、付記１～３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
［付記５］
前記Ｃ末端伸長部がＮＰまたはＮＰＶＴＰＫである、付記４に記載のポリペプチド。
［付記６］
リンカーを介してポリペプチドのＣ末端に融合されたＦｃドメイン単量体、野生型Ｆｃドメイン、アミノ酸置換を含むＦｃドメイン、アルブミン結合ペプチド、フィブロネクチンドメイン、またはヒト血清アルブミンをさらに含む、付記１～５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
［付記７］
前記リンカーがアミノ酸スペーサーである、付記６に記載のポリペプチド。
［付記８］
付記１～７のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする核酸分子。
［付記９］
付記８の核酸分子を含むベクター。
［付記１０］
付記１～７のいずれか一項に記載のポリペプチド、付記８に記載の核酸分子、または付記９に記載のベクターと、１種類以上の薬学上許容される担体または賦形剤と、を含む、医薬組成物。
［付記１１］
筋力低下または筋肉の萎縮を含む疾患または病態を有する対象を治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、治療有効量の、付記１～７のいずれか一項に記載のポリペプチド、付記８に記載の核酸分子、または付記９に記載のベクターを含み、前記医薬組成物は前記対象に投与されるものである、医薬組成物。
［付記１２］
前記疾患または病態は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、サルコペニア、癌悪液質、または封入体筋炎である、付記１１に記載の医薬組成物。
［付記１３］
それを必要とする対象において筋肉量を増加させる医薬組成物であって、前記医薬組成物は、治療有効量の、付記１～７のいずれか一項に記載のポリペプチド、付記８に記載の核酸分子、または付記９に記載のベクター、を含み、前記医薬組成物は前記対象に投与されるものである、医薬組成物。
［付記１４］
前記対象が、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、封入体筋炎、筋萎縮性側索硬化症、サルコペニア、または癌悪液質を有する、付記１３に記載の医薬組成物。
［付記１５］
デュシェンヌ型筋ジストロフィー、顔面嚢胞上腕性筋ジストロフィー、封入体筋炎、筋萎縮性側索硬化症、サルコペニア、または癌悪液質を有する対象を治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は治療有効量の、付記１～７のいずれか一項に記載のポリペプチド、付記８に記載の核酸分子、または付記９に記載のベクターを含み、前記医薬組成物は前記対象に投与されるものである、医薬組成物。

Claims (17)

  1. 配列番号６～７２のいずれか１つの配列を含むとともに、そのＣ末端でＦｃドメイン単量体に融合されている細胞外アクチビンＩＩａ型受容体（ＡｃｔＲＩＩａ）変異体を含むポリペプチドにおいて、前記ポリペプチドは二量体の形態である、ポリペプチド。
  2. 前記ＡｃｔＲＩＩａ変異体の前記Ｃ末端に、１～６個のアミノ酸のＣ末端伸長部をさらに含む、請求項１に記載のポリペプチド。
  3. 前記Ｃ末端伸長部がＮＰまたはＮＰＶＴＰＫである、請求項２に記載のポリペプチド。
  4. 前記Ｆｃドメイン単量体は、前記ＡｃｔＲＩＩａ変異体の前記Ｃ末端にリンカーを介して融合されている、請求項１～３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  5. 前記リンカーがアミノ酸スペーサーである、請求項４に記載のポリペプチド。
  6. 前記ＡｃｔＲＩＩａ変異体は、配列番号６、配列番号３８、配列番号４１、配列番号４４、配列番号５８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１または配列番号７２の配列を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  7. 前記ＡｃｔＲＩＩａ変異体は、配列番号６９の配列を有する、請求項６に記載のポリペプチド。
  8. 請求項１～７のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする核酸分子。
  9. 請求項８の核酸分子を含むベクター。
  10. 請求項１～７のいずれか一項に記載のポリペプチドを発現する宿主細胞であって、前記宿主細胞は、請求項８に記載の核酸分子または請求項９に記載のベクターを含み、前記核酸分子またはベクターが前記宿主細胞内で発現される、宿主細胞。
  11. 請求項１～７のいずれか一項に記載のポリペプチドを作製する方法であって、前記方法は、
    ａ）請求項８に記載の核酸分子または請求項９に記載のベクターを含む宿主細胞を提供すること、および
    ｂ）前記ポリペプチドの形成を可能とする条件下、前記宿主細胞内で前記核酸分子またはベクターを発現させること
    を含む、方法。
  12. 請求項１～７のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項８に記載の核酸分子、または請求項９に記載のベクターと、１種類以上の薬学上許容される担体または賦形剤と、を含む、医薬組成物。
  13. 筋力低下または筋肉の萎縮を含む疾患または病態を有する対象を治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、治療有効量の、請求項１～７のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項８に記載の核酸分子、または請求項９に記載のベクターを含み、前記医薬組成物は前記対象に投与されるものである、医薬組成物。
  14. 前記疾患または病態は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、サルコペニア、癌悪液質、または封入体筋炎である、請求項１３に記載の医薬組成物。
  15. それを必要とする対象において筋肉量を増加させる医薬組成物であって、前記医薬組成物は、治療有効量の、請求項１～７のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項８に記載の核酸分子、または請求項９に記載のベクター、を含み、前記医薬組成物は前記対象に投与されるものである、医薬組成物。
  16. 前記対象が、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、封入体筋炎、筋萎縮性側索硬化症、サルコペニア、または癌悪液質を有する、請求項１５に記載の医薬組成物。
  17. デュシェンヌ型筋ジストロフィー、顔面嚢胞上腕性筋ジストロフィー、封入体筋炎、筋萎縮性側索硬化症、サルコペニア、または癌悪液質を有する対象を治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は治療有効量の、請求項１～７のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項８に記載の核酸分子、または請求項９に記載のベクターを含み、前記医薬組成物は前記対象に投与されるものである、医薬組成物。
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7280182B2 (ja) 2016-10-05 2023-05-23 アクセルロン ファーマ インコーポレイテッド バリアントＡｃｔＲＩＩＢタンパク質およびその使用
US11013785B2 (en) 2016-11-10 2021-05-25 Keros Therapeutics, Inc. Activin receptor type IIA variants and methods of use thereof
WO2019094751A1 (en) * 2017-11-09 2019-05-16 Keros Therapeutics, Inc. Activin receptor type iia variants and methods of use thereof
WO2019106592A2 (en) * 2017-11-30 2019-06-06 Grifols Diagnostic Solutions Inc. Immunoassays and engineered proteins for monitoring antibody treatments to the immune checkpoint inhibitors pd1 and pd-l1
JP2021518745A (ja) 2018-01-12 2021-08-05 ケロス セラピューティクス インコーポレイテッドＫｅｒｏｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． アクチビンｉｉｂ型受容体変異体およびそれらの使用方法
AU2019266314A1 (en) * 2018-05-09 2020-11-19 Keros Therapeutics, Inc. Activin receptor type iia variants and methods of use thereof
AU2021237730A1 (en) * 2020-03-20 2022-10-06 Keros Therapeutics, Inc. Activin receptor type II chimeras and methods of use thereof
EP4230196A1 (en) 2022-02-21 2023-08-23 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of dystrophinopathies

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008507288A (ja) 2004-07-23 2008-03-13 アクセルロン ファーマ インコーポレーテッド ＡｃｔＲＩＩ受容体ポリペプチド、方法、および組成物
JP2020503262A (ja) 2016-11-10 2020-01-30 ケロス セラピューティクス インコーポレイテッドＫｅｒｏｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． アクチビンＩＩａ型受容体変異体およびそれらの使用方法

Family Cites Families (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040223966A1 (en) 2002-10-25 2004-11-11 Wolfman Neil M. ActRIIB fusion polypeptides and uses therefor
US8008453B2 (en) 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
US8067562B2 (en) 2005-11-01 2011-11-29 Amgen Inc. Isolated nucleic acid molecule comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:1
CA3045808C (en) 2005-11-23 2022-08-16 Acceleron Pharma, Inc. Activin-actriia antagonists and uses for promoting bone growth
WO2007130619A1 (en) 2006-05-03 2007-11-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for regulating osteoclast differentiation, activation and bone resorption
US8895016B2 (en) * 2006-12-18 2014-11-25 Acceleron Pharma, Inc. Antagonists of activin-actriia and uses for increasing red blood cell levels
CN104524548A (zh) 2006-12-18 2015-04-22 阿塞勒隆制药公司 活化素-actrii拮抗剂及在提高红细胞水平中的用途
ES2415666T3 (es) 2007-02-01 2013-07-26 Acceleron Pharma, Inc. Composiciones farmacéuticas que comprenden antagonistas de Activina-ActRIIa para uso en la prevención o el tratamiento de metástasis de cáncer de mama o pérdida ósea relacionada con el cáncer de mama
TW201907946A (zh) 2007-02-02 2019-03-01 美商艾瑟勒朗法瑪公司 衍生自ＡｃｔＲＩＩＢ的變體與其用途
EP2484372A1 (en) 2007-02-09 2012-08-08 Acceleron Pharma, Inc. Activin-ActRIIa Antagonists and Uses for Promoting Bone Growth in Cancer Patients
TWI573802B (zh) 2007-03-06 2017-03-11 安美基公司 變異之活動素受體多肽及其用途
US8501678B2 (en) 2007-03-06 2013-08-06 Atara Biotherapeutics, Inc. Variant activin receptor polypeptides and uses thereof
WO2009015345A1 (en) 2007-07-25 2009-01-29 Amgen Inc. Pharmaceutical compositions comprising fc fusion proteins
CA2699936A1 (en) 2007-09-18 2009-03-26 Acceleron Pharma Inc. Activin-actriia antagonists and uses for decreasing or inhibiting fsh secretion
WO2009111793A2 (en) 2008-03-07 2009-09-11 Myoscience, Inc. Subdermal tissue remodeling using myostatin, methods and related systems
WO2009158025A2 (en) 2008-06-26 2009-12-30 Acceleron Pharma Inc. Methods for dosing an actriib antagonist and monitoring of treated patients
KR20110031951A (ko) 2008-06-26 2011-03-29 악셀레론 파마 인코포레이티드 액티빈-ａｃｔｒｉｉａ의 길항물질 및 적혈구 수준을 증가시키기 위한 이들의 용도
HRP20230761T1 (hr) 2008-08-14 2023-10-13 Acceleron Pharma Inc. Gdf zamke
US8216997B2 (en) 2008-08-14 2012-07-10 Acceleron Pharma, Inc. Methods for increasing red blood cell levels and treating anemia using a combination of GDF traps and erythropoietin receptor activators
EA201791940A3 (ru) 2008-11-26 2018-04-30 Амген Инк. Варианты полипептидов рецептора iib активина и их использование
US8138142B2 (en) 2009-01-13 2012-03-20 Acceleron Pharma Inc. Methods for increasing adiponectin in a patient in need thereof
AU2010258931B2 (en) 2009-06-08 2015-04-23 Acceleron Pharma Inc. Methods for increasing thermogenic adipocytes
US8293881B2 (en) 2009-06-12 2012-10-23 Acceleron Pharma Inc. Isolated nucleic acid encoding a truncated ActRIIB fusion protein
IL287990B (en) 2009-08-13 2022-07-01 Acceleron Pharma Inc Combined use of gdf traps and erythropoietin receptor activators to increase red blood cell levels
CN102781518A (zh) 2009-09-09 2012-11-14 阿塞勒隆制药公司 Actriib拮抗剂及其给药和用途
WO2011056896A1 (en) 2009-11-03 2011-05-12 Acceleron Pharma Inc. Methods for treating fatty liver disease
ES2658292T3 (es) 2009-11-17 2018-03-09 Acceleron Pharma, Inc. Proteínas ActRIIB y variantes y usos de las mismas con respecto a la inducción de la utrofina para el tratamiento de la distrofia muscular
EP2638065A4 (en) * 2010-11-08 2014-04-09 Acceleron Pharma Inc ACTRIIA BINDING AGENTS AND USES THEREOF
CA2852683A1 (en) 2011-10-17 2013-04-25 Acceleron Pharma, Inc. Methods and compositions for treating ineffective erythropoiesis
WO2013074557A1 (en) 2011-11-14 2013-05-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for increasing muscle mass and muscle strength by specifically antagonizing gdf8 and/or activin a
SG10201605027XA (en) 2011-12-19 2016-08-30 Amgen Inc Variant activin receptor polypeptides, alone or in combination with chemotherapy, and uses thereof
KR101995751B1 (ko) 2012-01-05 2019-07-03 주식회사 와이바이오로직스 Ｄｌｋ１ 세포 외 수용성 도메인을 유효성분으로 포함하는 미오스타틴 저해제
JP2015525230A (ja) 2012-06-11 2015-09-03 アムジエン・インコーポレーテツド デュアル受容体アンタゴニスト性抗原結合タンパク質およびその使用
WO2014138485A1 (en) 2013-03-08 2014-09-12 Irm Llc Ex vivo production of platelets from hematopoietic stem cells and the product thereof
US20160038588A1 (en) 2013-03-15 2016-02-11 Amgen Inc. Myostatin Antagonism in Human Subjects
EP3816625A1 (en) 2013-05-06 2021-05-05 Scholar Rock, Inc. Compositions and methods for growth factor modulation
TW201920262A (zh) * 2013-07-30 2019-06-01 美商再生元醫藥公司 抗活化素ａ之抗體及其用途
WO2015108972A1 (en) 2014-01-14 2015-07-23 Santa Maria Biotherapeutics, Inc. Activin inhibitor response prediction and uses for treatment
JP2017509647A (ja) 2014-03-21 2017-04-06 アクセルロン ファーマ， インコーポレイテッド アクチビンｂおよび／またはｇｄｆ１１の阻害によって赤血球レベルを増大させ、無効赤血球生成を処置する方法
EP3808778A1 (en) 2014-04-18 2021-04-21 Acceleron Pharma Inc. Methods for increasing red blood cell levels and treating sickle-cell disease
CA2951926C (en) 2014-06-13 2023-01-10 Acceleron Pharma, Inc. Methods and compositions for treating ulcers
TW201625675A (zh) 2014-06-13 2016-07-16 聖塔瑪麗亞生物治療公司 經調配之受體多肽及相關方法
GB201421379D0 (en) 2014-12-02 2015-01-14 Isis Innovation Ltd And Medical Res Council Molecule
MA41119A (fr) 2014-12-03 2017-10-10 Acceleron Pharma Inc Méthodes de traitement de syndromes myélodysplasiques et d'anémie sidéroblastique
ES2946160T3 (es) 2014-12-03 2023-07-13 Celgene Corp Antagonistas de activina-ActRII y usos para tratar síndrome mielodisplásico
CN107849114B (zh) * 2015-04-06 2021-08-20 阿塞勒隆制药公司 单臂i型和ii型受体融合蛋白和其用途
SG11201708351XA (en) 2015-04-22 2017-11-29 Alivegen Usa Inc Novel hybrid actriib ligand trap proteins for treating muscle wasting diseases
JP6976859B2 (ja) 2015-05-13 2021-12-08 セルジーン コーポレイション ＡｃｔＲＩＩリガンドトラップを用いたβ−サラセミアの治療
CA2986432A1 (en) 2015-05-20 2016-11-24 Celgene Corporation In vitro cell culture methods for beta-thalassemia using activin type ii receptor ligand traps
US11123430B2 (en) 2015-11-04 2021-09-21 Acceleron Pharma Inc. Methods for increasing red blood cell levels and treating ineffective erythropoiesis
EP3380121B1 (en) 2015-11-23 2023-12-20 Acceleron Pharma Inc. Actrii antagonist for use in treating eye disorders
AU2017222526A1 (en) 2016-02-22 2018-08-23 Acceleron Pharma Inc. ActRII antagonists for use in increasing immune activity
RS62011B1 (sr) 2016-07-15 2021-07-30 Acceleron Pharma Inc Kompozicije koje sadrže polipeptide actriia za upotrebu u lečenju plućne hipertenzije
KR20190040972A (ko) 2016-07-27 2019-04-19 악셀레론 파마 인코포레이티드 골섬유증 치료 방법 및 조성물
AU2017340504A1 (en) 2016-10-05 2019-04-11 Acceleron Pharma, Inc. Compositions and method for treating kidney disease
JP7280182B2 (ja) 2016-10-05 2023-05-23 アクセルロン ファーマ インコーポレイテッド バリアントＡｃｔＲＩＩＢタンパク質およびその使用
JOP20190085A1 (ar) 2016-10-20 2019-04-17 Biogen Ma Inc طرق علاج الضمور العضلي ومرض العظام باستخدام بروتينات احتجاز مركب ترابطي actriib هجين حديثة
CN110461880A (zh) 2016-11-10 2019-11-15 科乐斯疗法公司 Gdnf融合多肽及其使用方法
GB201620119D0 (en) 2016-11-29 2017-01-11 Pharmafox Therapeutics Ag Compounds
WO2018144542A1 (en) 2017-02-01 2018-08-09 Acceleron Pharma Inc. TGFβ AND ACTRII ANTAGONISTS FOR USE IN INCREASING IMMUNE ACTIVITY
CA3052625A1 (en) 2017-02-06 2018-08-09 Acceleron Pharma Inc. Compositions and methods for treating heart failure
WO2019094751A1 (en) 2017-11-09 2019-05-16 Keros Therapeutics, Inc. Activin receptor type iia variants and methods of use thereof
JP2021518745A (ja) 2018-01-12 2021-08-05 ケロス セラピューティクス インコーポレイテッドＫｅｒｏｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． アクチビンｉｉｂ型受容体変異体およびそれらの使用方法
AU2019266314A1 (en) 2018-05-09 2020-11-19 Keros Therapeutics, Inc. Activin receptor type iia variants and methods of use thereof
WO2021189006A1 (en) 2020-03-20 2021-09-23 Keros Therapeutics, Inc. Methods of using activin receptor type iia variants
AU2021237730A1 (en) 2020-03-20 2022-10-06 Keros Therapeutics, Inc. Activin receptor type II chimeras and methods of use thereof
EP4121088A1 (en) 2020-03-20 2023-01-25 Keros Therapeutics, Inc. Methods of using activin receptor type iib variants

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008507288A (ja) 2004-07-23 2008-03-13 アクセルロン ファーマ インコーポレーテッド ＡｃｔＲＩＩ受容体ポリペプチド、方法、および組成物
JP2020503262A (ja) 2016-11-10 2020-01-30 ケロス セラピューティクス インコーポレイテッドＫｅｒｏｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． アクチビンＩＩａ型受容体変異体およびそれらの使用方法

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