JP7376023B2

JP7376023B2 - 老化抑制剤

Info

Publication number: JP7376023B2
Application number: JP2019149502A
Authority: JP
Inventors: 主典松原; 直樹中村; 亮介本間; 優一虫明
Original assignee: Hiroshima University NUC; Ikeda Food Research Co Ltd
Current assignee: Hiroshima University NUC; Ikeda Food Research Co Ltd
Priority date: 2018-11-14
Filing date: 2019-07-30
Publication date: 2023-11-08
Anticipated expiration: 2039-07-30
Also published as: JP2020080856A

Description

本発明は、老化抑制剤及びその製造方法等に関する。

高齢化の進展に伴って健康に対する意識がますます高まっており、老化を抑制できる食品や医薬品の開発が強く望まれている。

これまでに老化抑制剤として、乳酸菌ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズクレモリスＨ－６１株（ＮＩＴＥＡＰ－９２）を含有することを特徴とする老化抑制剤（特許文献１）、カテキン類を有効成分とする老化抑制剤（特許文献２）及びコエンザイムＱ１０とザクロ加工物とを含有する老化抑制剤（特許文献３）等が開示されている。

特許第４６０４２０７号公報特開２００８‐６３３１８号公報特開２０１５‐１７０８１号公報

本発明は、天然物由来の新規な老化抑制剤を提供する。

発明者らは、枯草菌に老化抑制効果があることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、以下の［１］～［４］の態様に関する。
［１］枯草菌を有効成分とする、老化抑制剤。
［２］枯草菌を液体培養して得られる菌体を有効成分とする、［１］記載の老化抑制剤。
［３］枯草菌が芽胞形成能欠損株である、［１］又は［２］記載の老化抑制剤。
［４］［１］～［３］の何れかに記載の老化抑制剤を含む飲食品、化粧品、医薬品又は飼料。

本発明によって、天然物由来の新規な老化抑制剤を提供できる。また、殺菌後の死菌において老化抑制効果が認められることから、枯草菌の死菌体を使用することで、製造設備の衛生管理や製品の品質管理が容易になり、老化抑制剤を効率的に製造できる。また、有効成分が化学合成品ではなく、食経験のある菌のため、継続した長期的な摂取が望ましい老化抑制剤として最適である。さらに、芽胞形成能欠損株を使用すれば、一般的な微生物と同様に１００℃以下の穏和な条件で殺菌を行うことができ、芽胞菌で問題となる殺菌不足による製造設備の汚染を防ぐことができるため、各種食品への添加や製剤化が容易である。

２７週齢老化促進モデルマウスの老化度評点に及ぼす枯草菌の投与効果を示す。老化促進モデルマウスへの枯草菌投与による、老化度評点の推移を示す。５７週齢老化促進モデルマウスの受動性の低下、被毛の艶の悪化及び被毛の粗造性の増加に及ぼす枯草菌の投与効果を示す。

本発明の老化抑制剤は、枯草菌を有効成分とするものであり、摂取により、老化により引き起こされる種々の変化を抑制するといった老化抑制効果を有する。

本発明に記載の枯草菌は、老化抑制剤の有効成分となる枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）であれば、生菌でも死菌でもよく、特に限定されないが、バチルス・サブチリス・サブスピーシーズ・サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ．ｓｕｂｓｐ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）が好ましく、バチルス・サブチリスＮＢＲＣ３００９、バチルス・サブチリスＮＢＲＣ３０１３、バチルス・サブチリスＮＢＲＣ１３１６９等の納豆菌がより好ましく、独立行政法人製品評価技術基盤機構等から入手することができる。死菌でも老化抑制効果があるため、枯草菌の死菌体を使用することで、製造設備の衛生管理や製品の品質管理が容易になり、老化抑制剤を効率的に製造できる。また、芽胞形成能欠損株を使用すれば、１００℃以下の穏和な殺菌条件で死菌体を調製することができるため、芽胞菌で問題となる殺菌不足による製造設備の汚染を防ぐことができ、各種食品への添加や製剤化が容易となる。

本発明で使用される枯草菌は、特に限定されないが、芽胞形成能欠損株が好ましく、芽胞形成能欠損株の取得方法としては、遺伝子組換えによる方法、突然変異による方法等が例示できるが、自然突然変異による方法が好ましい。自然突然変異による芽胞形成能欠損株の取得方法は、特に限定されず、高温焙養法や、野生株と欠損株のコロニーのメラニン色素の着色により識別するランダム法、異化代謝産物抑制（Ｃａｔａｂｏｌｉｔｅｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）様現象を利用した方法（Ｊ．Ｆ．Ｍｉｃｈｅｌ，Ｂ．Ｃａｍｉ，Ｐ．Ｓｃｈａｅｆｆｅｒ：Ａｎｎ．Ｉｎｓｔ．Ｐａｓｔｅｕｒ，１１４，１１；２１（１９６８））が例示できるが、異化代謝産物抑制様現象を利用した方法が好ましい。異化代謝産物抑制様現象を利用する方法により得られる芽胞形成能欠損株は、芽胞形成能と供にリゾチーム活性及び形質転換能が欠損しているため、溶菌による問題がなく継代することができ、芽胞形成能欠損という形質を維持することができる。

枯草菌の培養には、通常の細菌培養用培地が使用でき、炭素源、窒素源、無機物、その他枯草菌が必要とする微量栄養素等を含有するものであれば、合成培地、天然培地の何れでも使用可能である。炭素源としては、グルコース、シュクロース、デキストリン、澱粉、グリセリン、糖蜜等が使用できる。窒素源としては、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機塩類、ＤＬ－アラニン、Ｌ－グルタミン酸等のアミノ酸類、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、麦芽エキス、コーンスティープリカー等の窒素含有天然物が使用できる。無機物としては、リン酸一ナトリウム、リン酸二ナトリウム、リン酸一カリウム、リン酸二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化第二鉄等が使用できる。

枯草菌の培養条件は、適宜設定できるが、通気、振盪、攪拌等により好気的に液体培養するのが好ましく、培養温度は例えば２０～５０℃が例示でき、３０～４５℃が好ましく、培養時間は例えば２～７２時間が例示でき、４～４８時間が好ましく、６～３６時間がより好ましく、培地のｐＨは例えば５．０～９．０が例示でき、５．５～８．５が好ましい。

枯草菌は培養後に殺菌してもよく、殺菌条件は一般的な方法であれば特に限定されないが、例えば６０～１２０℃で１～３０分間又は８０～１００℃で５～２０分間の加熱が好ましい。菌体の回収は、遠心分離機等で培地を除去した後、緩衝液、生理食塩水、滅菌水等で菌体を洗浄し、遠心分離機等により固液分離して集菌できる。さらに、エアードライ、スプレードライ、真空及び／又は凍結乾燥等を行って粉末化してもよい。

本発明の老化抑制剤の摂取方法として、本菌株を含む製剤等を経口投与することが好ましく、老化抑制効果が認められる投与量であれば特に限定されないが、ヒトに対しては体重１ｋｇあたり、菌体重量で５０ｍｇ／日以上の投与が好ましく、安全性の面で問題はないため、上限は特に限定されないが、通常６０～２００ｍｇ／日程度の投与が好ましく、８０～１５０ｍｇ／日程度の投与が適当である。該投与量を菌体重量として含む製剤を１日１回又は数回に分けて摂取すればよい。

本発明の老化抑制剤はその有効成分が天然物由来であり、かつ、製造が容易なため、広く利用でき、各種製品に添加が可能で、液状で添加してもよく、冷蔵、冷凍又は乾燥状態で添加してもよく、老化抑制効果を有する飲食品、化粧品、医薬品、飼料等を調製することができる。各種製品中の枯草菌含有量は、摂取により老化抑制効果が認められる量であれば特に限定されないが、０．１～２０重量％が好ましく、０．２～１０重量％がより好ましく、０．５～５重量％がさらに好ましい。

以下、実施例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の例によって限定されるものではない。尚、本発明において、％は別記がない限り全て重量％である。

（１．枯草菌菌体の調製）
異化代謝産物抑制様現象を利用した自然突然変異により、納豆菌の一種であるバチルス・サブチリスＮＢＲＣ１３１６９から、芽胞形成能を欠損した、芽胞形成能欠損株：バ

利用した自然突然変異は、特許第６０１９５２８号公報の実施例に記載の方法で行い、該公報に記載の方法で芽胞形成能が欠損した株であることを確認した。

前記枯草菌を、液体培地（酵母エキス：２％、グルコース：５％、水道水：９３％）に接種して３７℃で２４時間通気攪拌培養した後、９０℃で１０分間加熱殺菌処理した。次いで、遠心分離機を用いて培地を除去し、回収した菌体を水道水で洗浄した後、さらに遠心分離機で固液分離することで、菌体を回収した。回収した菌体をスプレードライヤーで乾燥し、枯草菌の死菌体粉末を調製した。

（２．老化促進モデルマウス（ＳＡＭＰ８）における枯草菌投与効果の確認）
９週齢の老化促進マウス（ＳＡＭＰ８）に、枯草菌投与群（７匹：ｓ１～ｓ７）として前記１で得られた菌体粉末を１％配合したＭＦ飼料（オリエンタル酵母工業製）を与え、また、対照群（７匹：ｃ１～ｃ７）としてＭＦ飼料を与えて飼育した。実験期間中、飼料および水は自由摂取させ、各マウスの体重及び飼料摂取量を測定した。各群の１日当たりの餌の摂取量を表１に示した。尚、９～２７週の飼育期間における、マウスの平均体重は何れの群も約３２ｇだった。

（２－１．機能評価による老化度の判定：２７週齢時）
２７週齢時の各群、各７匹について、「老化促進モデルマウスを用いた機能評価」（細川・梅澤、ｐ．２９４‐２９７、食品機能研究法、篠原・鈴木・上野川編、光琳、２０００年）に記載の方法により、老化進行の指標として、１１項目からなる行動や外見の変化（１）能動性の低下、２）受動性の低下、３）被毛の艶の悪化、４）被毛の粗造性の増加、５）脱毛、６）皮膚の潰瘍及び痂皮形成、７）眼瞼炎及び眼の周囲の皮膚の糜爛、８）角膜の混濁、９）角膜潰瘍、１０）白内障、１１）背骨の前後湾曲の増強）を各０～４点の５段階で点数化し、その総点数によって表される老化度評点を算出して、老化度を判定した。結果を表２に示した。また、各群の１匹あたりの老化度評点の平均値及び標準偏差について図１に示した。

（２－２．機能評価による老化度の判定：５７週齢時）
５７週齢まで、４～５週間おきに、２－１と同様に、１１項目からなる行動や外見の変化を各０～４点の５段階で点数化した。各群の各週齢における老化度評点の平均値の推移について図２に示した。また、各群の５７週齢時の、受動性の低下、被毛の艶の悪化及び被毛の粗造性の増加について、１匹あたりの各点数の平均値及び標準偏差を図３に示した。尚、５７週齢時の生存数は、各群共、４匹だった。

（２－３－１．老化度評価）
表２及び図１より、２７週齢時に、対照群に比べて枯草菌投与群で老化度評点が有意に低く、さらに、図２より、５７週齢までの老化度評点の推移では、対照群に比べて枯草菌投与群で、終始、老化度評点が低く、枯草菌の経口投与により、老化が抑制されることが確認できた。特に、５７週齢では、図３に示したとおり、受動性の低下、被毛の艶の悪化及び被毛の粗造性の増加で、対照群に比べて枯草菌投与群で有意に低い点数であり、枯草菌の経口投与によって、老化により引き起こされる、触覚感度の鈍化又は反射的行動の衰退を抑制する効果や、外観の加齢変化である毛の変化を抑制する効果が発揮されたと考えられる。

尚、枯草菌投与群では、２７週齢までの飼育期間におけるマウスの平均体重約３２ｇ当たり、菌体重量で１日当たり４３～５６ｍｇの投与で効果が認められた。

（２－３－２．排泄物の評価）
対照群では、４４週齢まで見られなかった下痢症状が、４９週齢からみられたのに対し、枯草菌投与群では、４９週齢及び５３週齢においても正常な糞の状態であり、５７週齢になって、５３週齢まで見られなかった下痢症状がみられた。

下痢症状は、老化による腸の機能低下によって引き起こされたと考えられ、枯草菌の経口投与によって、腸の機能低下を抑えることができると考えられる。

Claims

枯草菌の死菌を有効成分とし、前記枯草菌は芽胞形成能欠損株であり、
老化による受動性の低下を抑制することで、老化によって引き起こされる触覚感度の鈍化又は反射的行動の衰退を抑制する用途に使用される老化抑制剤。
枯草菌を液体培養して得られる菌体を有効成分とする、請求項１記載の老化抑制剤。
請求項１又は２記載の老化抑制剤を含み、老化による受動性の低下を抑制することで、老化によって引き起こされる触覚感度の鈍化又は反射的行動の衰退を抑制する用途に使用される飲食品、化粧品、医薬品又は飼料。