JP7371070B2 - イヌインターロイキン４受容体アルファに対する抗体 - Google Patents

イヌインターロイキン４受容体アルファに対する抗体 Download PDF

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Description

関連出願に対する相互参照
本出願は２０１５年４月２日付け出願の米国仮特許出願第６２／１４２，１０８号、２
０１５年１２月１８日付け出願の第６２／２６９，４８６号および２０１６年３月１８日
付け出願の第６２／３１０，２５０号（それらの全ての全内容を参照により本明細書に組
み入れることとする）の３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）に基づく優先権を主張するも
のである。
発明の分野
本発明は、イヌＩＬ－４受容体アルファに対する高い結合アフィニティおよび特異的配
列を有する、イヌＩＬ－４受容体アルファに対する抗体（イヌＩＬ－４受容体アルファへ
のイヌＩＬ－４の結合を遮断しうる幾つかを含む）に関する。本発明は更に、イヌＩＬ－
４受容体アルファに対する抗体に結合する特有のエピトープに関する。本発明はまた、イ
ヌのアトピー性皮膚炎の治療における、本発明の抗体およびエピトープの使用に関する。
免疫系は、感染症および癌から宿主を防御するために協同的に機能する常在性および再
循環性の特殊化細胞のネットワークを含む。この機能を免疫系が果たす能力は、白血球に
より分泌されるインターロイキンと総称されるタンパク質の一群の生物活性に大きく依存
している。詳細に研究されているインターロイキンには、インターロイキン４（ＩＬ－４
）およびインターロイキン１３（ＩＬ－１３）として特定されている２つの重要な分子が
含まれる。ＩＬ－４およびＩＬ－１３は、ＣＤ４＋ Ｔｈ２細胞、ナチュラルキラーＴ細
胞（ＮＫＴ）、マクロファージ、マスト細胞および好塩基球を含む多数の細胞型により分
泌されうる密接に関連した２つのタンパク質である。ＩＬ－４およびＩＬ－１３は多数の
重複機能を示し、Ｔ細胞依存性体液性免疫応答の発生に決定的に重要である。全体的な構
造、細胞源および生物学的機能におけるそれらの類似性にもかかわらず、これらのサイト
カインのそれぞれは或る特殊化された機能を媒介し、これは、これらのインターロイキン
がそれらの共通の生物活性および特有の生物活性の両方を媒介する受容体および下流シグ
ナリング経路を特定することを目的とした多くの研究を刺激している。
ＩＬ－４は、２つの受容体、すなわち、Ｉ型およびＩＩ型ＩＬ－４受容体に高いアフィ
ニティで結合することが現在公知である。Ｉ型ＩＬ－４受容体は、ＩＬ－４受容体α鎖と
、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－９およびＩＬ－１５を含む幾つかの他のインターロイキン
の受容体の一部でもある共通のγＣ鎖とからなる。ＩＩ型ＩＬ－４受容体はＩＬ－４受容
体α鎖およびＩＬ－１３受容体α１鎖からなる。一方、ＩＬ－１３はＩＩ型ＩＬ－４受容
体に結合し、そしてＩＬ－１３受容体α２と称される特有の受容体に結合する。ＩＬ－１
３受容体α２へのＩＬ－１３の結合はシグナルを伝達せず、この受容体は可溶性形態でも
分泌される。したがって、ＩＬ－１３受容体α２は、しばしば、デコイ受容体と称される
。
種々の種からのＩＬ－４タンパク質をコードする遺伝子がクローニングされ、細菌およ
び哺乳類細胞において発現されている。例えば、成熟ヒトＩＬ－４は、１５Ｋｄの推定分
子量を有する１２９アミノ酸の分泌ポリペプチドであることを、ヒトＩＬ－４をコードす
るｃＤＮＡが示している［Ｙｏｋｏｔａら，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ
ＳＡ．８３（１６）：５８９４－５８９８（１９８６）］。イヌＩＬ－４タンパク質をコ
ードするｃＤＮＡも特定されており、ヒトＩＬ－４に対して４０％の同一性を有する１３
２アミノ酸のポリペプチドをコードすることが示されている［ｖａｎ ｄｅｒ Ｋａａｉ
ｊら，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４９：１４２－１４３（１９９９）］。ヒトＩＬ
－１３をコードする遺伝子がクリーニングされ、種々の宿主系において発現されている［
Ｍｉｎｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２４８－５０（１９９３）］。成熟ＩＬ－１３は
、１２．４Ｋｄの見掛け分子量を有する分泌ポリペプチドであることを、ヒトＩＬ－１３
をコードするｃＤＮＡが示している。イヌＩＬ－１３をコードするｃＤＮＡも特定されて
いる［Ｙａｎｇら，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ ２０：７７９－７８５（２０００）］。推定イヌＩＬ－１３成熟ポリペプチドは
１１１アミノ酸からなり、ヒトＩＬ－１３に対して６１．８％の同一性を有する。
ヒトおよびマウスＩＬ－４受容体α鎖をコードする遺伝子がクローニングされ、種々の
宿主系において発現されている。例えば、ヒトＩＬ－４受容体α鎖をコードするｃＤＮＡ
はＧａｌｉｚｚｉら［Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２（７）：
６６９－６７５（１９９０）］により記載されており、マウスＩＬ－４受容体α鎖をコー
ドするｃＤＮＡはＭｏｓｌｅｙら［Ｃｅｌｌ，５９（２）：３３５－３４８（１９８９）
］により記載されている。ヒトＩＬ－４受容体α鎖のｃＤＮＡは、２４アミノ酸残基のシ
グナル配列を含む８２５アミノ酸残基をコードしている。マウスタンパク質はヒト受容体
より１５アミノ酸残基短いが、両方のタンパク質は密接に関連しており、全体の配列同一
性はアミノ酸レベルで５０％である。
ウマ、イヌおよびネコＩＬ－４受容体α鎖をコードする遺伝子も開示されている［ＵＳ
７，２０８，５７９ Ｂ２を参照されたい］。また、イヌＩＬ－４受容体αのアイソフ
ォームの１つに対応すると推定されるｃＤＮＡがＧｅｎｂａｎｋデータベースにおいて見
出されうる（配列番号１）。したがって、本発明は、ＩＬ－４受容体α鎖ｃＤＮＡを決定
すること、およびそのコード化ポリペプチド配列を明確に決定することを実施した。
ＩＬ－４およびＩＬ－１３は、細胞外病原体（例えば、組織または管腔生息寄生生物）
に対する防御に必要なＴｈ２免疫応答の発生のための決定的に重要なサイトカインである
が、どちらのサイトカインもヒトおよび動物における種々のアレルギー疾患（喘息および
アトピー性皮膚炎を含む）の病理発生に関連づけられている。喘息はヒトにおける一般的
な呼吸器疾患である。この疾患は肺炎、外部刺激に対する気管支気道の過敏性および気管
支壁組織の構造的修飾により特徴づけられる。アレルギー性喘息の病態生理はＶａｔｒｅ
ｌｌａら［Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｓｔｈｍａ ａｎｄ Ａｌｌｅｒｇｙ ７：１２３
－１３０（２０１４）］により概説されている。喘息は、大量のＩＬ－４およびＩＬ－１
３を産生しアレルギー性気道における免疫炎症応答を調整するＣＤ４＋ Ｔｈ２細胞によ
り維持される。喘息応答の理解における最近の進歩は、疾患の病理発生においてＩＬ－４
およびＩＬ－１３の両方により果たされる重要な役割を強調している。例えば、どちらの
サイトカインもＩｇＭからＩｇＥへのＢ細胞における免疫グロブリンアイソタイプの切り
換えを刺激し、このアレルゲン特異的ＩｇＥは気道におけるマスト細胞脱顆粒および炎症
メディエーターの放出に寄与する。また、ＩＬ－４およびＩＬ－１３は共に気管支平滑筋
の収縮を増強し、好酸球の気道リクルートメントを刺激し、これは好酸球上の対応受容体
に対するアレルゲン結合ＩｇＥの架橋に応答して脱顆粒をも引き起こしうる。また、ＩＬ
－１３は粘液分泌をも刺激し、気道リモデリングを促進し、これは杯細胞の過形成、コラ
ーゲンの沈着および気道平滑筋細胞の増殖を刺激することにより生じる。したがって、Ｉ
Ｌ－４およびＩＬ－１３は、気管支収縮および気道機能亢進の増強を含む喘息発作の発現
を招く病理学的変化に密接に関与していることが今や明らかである。
アトピー性皮膚炎（ＡＤ）は、免疫系調節不全および表皮障壁異常により特徴づけられ
る再発性掻痒性炎症性皮膚疾患である。ＡＤの病理学的および免疫学的特性は広範な研究
の対象となっている［Ｒａｈｍａｎら，Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ＆ Ａｌｌｅｒｇｙ
－ｄｒｕｇ ｔａｒｇｅｔ １０：４８６－４９６（２０１１）およびＨａｒｓｋａｍｐ
ら，Ｓｅｍｉｎａｒ ｉｎ Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｓｕｒｇ
ｅｒｙ ３２：１３２－１３９（２０１３）に概説されている］。ＡＤはヒトにおける最
も一般的な皮膚疾患であり、米国の成人集団の２～１０％を冒し、全世界で小児の約２５
％を冒す。ヒトにおいては、ＡＤ皮膚病変はＴｈ２細胞、好酸球、マスト細胞および樹状
細胞の浸潤により特徴づけられる。ＡＤの急性期においては、これらの病変は、ＩＬ－４
およびＩＬ－１３を含むＴｈ２型サイトカインの優勢な発現を示す。ＡＤはＩｇＥの循環
レベルの上昇によっても特徴づけられ、皮膚のＣＤ４＋ Ｔｈ２細胞におけるＩＬ－４お
よびＩＬ－１３の発現と正に相関する。ＡＤはＴｈ２疾患として分類されているが、Ｔｈ
１、Ｔｈ２２およびＴｈ１７のような他のＴ細胞サブセットも疾患の病理発生に寄与して
いる可能性がある。世界的にＡＤの発生率が増加しているにもかかわらず、症状が局所薬
によって適切に抑制されない患者に利用可能な治療選択肢は経口コルチコステロイド、経
口シクロスポリンおよび狭帯域ＵＶＢ光線療法に限られる。これらの療法は常に有効なわ
けではなく、それらの使用は種々の安全性の影響を伴う。最近、ヒトＩＬ－４Ｒαに特異
的なモノクローナル抗体が開発され、これらの抗体の幾つかはアトピー性皮膚炎の治療の
ためのヒトにおけるそれらの治療的有用性に関して広範に試験されている［例えば、ＵＳ
２０１５００１７１７６ Ａ１を参照されたい］。
ＡＤは伴侶動物、特にイヌにおいても一般的な疾患であり、イヌにおいて、その罹患率
はイヌの全頭数の約１０～１５％であると推定されている。イヌおよびネコにおけるＡＤ
の発生病理［Ｎｕｔｔａｌｌら，Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｃｏｒｄｓ １７２（８）
：２０１－２０７（２０１３）に概説されている］はヒトにおけるＡＤの場合との有意な
類似性を有し、それらには、ＩＬ－４およびＩＬ－１３サイトカインの優勢を含むＣＤ４
－ Ｔｈ２偏向性サイトカイン環境ならびに種々の免疫細胞の皮膚浸潤が含まれる。ヒト
の場合と同様に、イヌおよびネコにおけるアトピー性皮膚炎に対する現在の療法はシャン
プーおよび保湿剤のような緩和療法、または経口もしくは全身性コルチコステロイドおよ
び経口シクロスポリンの使用による対症療法に依存している。ヒトのＡＤの場合と同様に
、これらの療法は、疾患の根底にあるメカニズムに対処するものではなく、重大な安全性
および有効性の問題を有する。したがって、伴侶動物におけるＡＤの安全かつ有効な治療
選択肢に対する満たされていない医学的需要が存在する。そのような治療は、好ましくは
、疾患の根底にあるメカニズムを妨げるものであるべきである。
本明細書におけるいずれの参考文献の引用も、そのような参照が本出願の「先行技術」
として利用可能であることを認めるものとして解釈されるべきではない。
発明の概括
本発明は、イヌＩＬ－４Ｒαに対して高い結合アフィニティを有する抗イヌインターロ
イキン４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）抗体に関する。より詳細な実施形態においては
、該抗イヌインターロイキン４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）抗体は、Ｉ型またはＩＩ
型ＩＬ－４受容体へのイヌＩＬ－４およびイヌＩＬ－１３の結合を遮断し次いでイヌＩＬ
－４およびＩＬ－１３の両方からのシグナリングを抑制する能力をも有する。特定の実施
形態においては、そのような抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体はマウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体で
ある。より詳細な実施形態においては、該抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体はイヌＩＬ－４Ｒαに
対する高い結合アフィニティを有し、Ｉ型およびＩＩ型ＩＬ－４受容体へのイヌＩＬ－４
およびイヌＩＬ－１３の結合を遮断する能力を有する。
更に、本発明は、これらの抗体に含まれる相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびこれらの
ＣＤＲ（例えば、マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体から得られるもの）をイヌフレーム内に
組込んでイヌ化抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体を得ることに関する。本発明はまた、アトピー性
皮膚炎のような状態、ならびに／またはＩ型および／もしくはＩＩ型ＩＬ－４受容体への
イヌＩＬ－４および／もしくはイヌＩＬ－１３の結合からのシグナリングの下流効果によ
る他の有害な状態の治療における、そのような抗体の使用に関する。
したがって、本発明は１４個の例示されているマウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体からのＣ
ＤＲの特有のセット（組合せ）を提供する。そのような１４個の例示されているマウス抗
イヌＩＬ－４Ｒα抗体はＣＤＲの特有のセット、すなわち、３個の軽鎖ＣＤＲであるＣＤ
Ｒ軽鎖１（ＣＤＲＬ１）、ＣＤＲ軽鎖２（ＣＤＲＬ２）およびＣＤＲ軽鎖３（ＣＤＲＬ３
）ならびに３個の重鎖ＣＤＲであるＣＤＲ重鎖１（ＣＤＲＨ１）、ＣＤＲ重鎖２（ＣＤＲ
Ｈ２）およびＣＤＲ重鎖３（ＣＤＲＨ３）を有する。後記で詳細に記載されているとおり
、ＣＤＲの各群内の相当な配列相同性および更には幾らかの重複が存在する（例えば、後
記のＣＤＲＬ１のセットを参照されたい）。したがって、本発明は、１４個の例示されて
いるマウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体からの６個のＣＤＲのアミノ酸配列を提供するだけで
なく、更に、これらのＣＤＲの保存的に修飾された変異体、ならびに同じ標準（カノニカ
ル）構造を含む（例えば、共有する）および／またはイヌＩＬ－４Ｒαのエピトープに含
まれるイヌＩＬ－４Ｒαのアミノ酸残基の１以上（例えば、１～４個またはそれ以上）に
結合する変異体をも提供する。
したがって、本発明は、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、
配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号１
２９、配列番号１３０もしくは配列番号１３１のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域
１（ＶＬ ＣＤＲ１）および／または配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列
番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、
配列番号１３２、配列番号１３３もしくは配列番号１３４のアミノ酸配列を含む軽鎖相補
性決定領域２（ＶＬ ＣＤＲ２）および／または配列番号６５、配列番号６６、配列番号
６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列
番号７３、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８もしくは
配列番号１３９のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ ＣＤＲ３）および／
または配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列
番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号１４０、配列番号１４
１、配列番号１４２もしくは配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１
（ＶＨ ＣＤＲ１）および／または配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番
号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配
列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７もしくは配列番号１４
８のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＶＨ ＣＤＲ２）および／または配列番
号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配
列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番
号１５１、配列番号１５２もしくは配列番号１５３のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定
領域３（ＶＨ ＣＤＲ３）を含む、ＩＬ－４Ｒαに特異的に結合する抗体またはその抗原
結合性フラグメントを提供する。特定の実施形態においては、該抗体は哺乳類抗体である
。より詳細な実施形態においては、該抗体はイヌ化抗体である。
したがって、本発明のイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号７４
、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号
８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２
または配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＶＨ ＣＤＲ１）
の１以上を含む。もう１つの実施形態においては、重鎖相補性決定領域２（ＶＨ ＣＤＲ
２）は配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列
番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号１４４、配列番号１４
５、配列番号１４６、配列番号１４７または配列番号１４８のアミノ酸配列を含む。更に
もう１つの実施形態においては、重鎖相補性決定領域３（ＶＨ ＣＤＲ３）は配列番号９
２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番
号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１
５１、配列番号１５２または配列番号１５３のアミノ酸配列を含む。このタイプの特定の
実施形態においては、該イヌ化抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号７４、配
列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０
、配列番号８１、配列番号８２、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２また
は配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１と、配列番号８３、配列番号８４
、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号
９０、配列番号９１、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４
７または配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２との両方を含む。もう１つ
のそのような実施形態においては、該イヌ化抗体または抗原結合性フラグメントは、配列
番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、
配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番
号１４２または配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１と、配列番号９２、
配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９
８、配列番号９９または配列番号１００、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１
５１、配列番号１５２または配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３との両
方を含む。更にもう１つのそのような実施形態においては、該イヌ化抗体または抗原結合
性フラグメントは、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番
号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号１４４、
配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７または配列番号１４８のアミノ酸配列
を含むＶＨ ＣＤＲ２と、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、
配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９または配列番号１００、配列
番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２または配列番号１５３の
アミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３との両方を含む。更にもう１つのそのような実施形態
においては、該イヌ化抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号７４、配列番号７
５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番
号８１、配列番号８２、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２または配列番
号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号８３、配列番号８４、配列番号
８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列
番号９１、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７または配
列番号１４８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号９２、配列番号９３
、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号
９９または配列番号１００、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１、配列番
号１５２または配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態においては、該イヌ化抗体または抗原結合性フラグメントはまた、配列
番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、
配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号１２９、配列番号１３０または配
列番号１３１のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ ＣＤＲ１）を含む。関
連実施形態においては、軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ ＣＤＲ２）は配列番号５６、配列
番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、
配列番号６３、配列番号６４、配列番号１３２、配列番号１３３または配列番号１３４の
アミノ酸配列を含む。更にもう１つの実施形態においては、軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ
ＣＤＲ３）は配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６
９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号１３５、配列
番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８または配列番号１３９のアミノ酸配列を含
む。このタイプの特定の実施形態においては、該イヌ化抗体または抗原結合性フラグメン
トは、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列
番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号１２９、配列番号１３
０または配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１と、配列番号５６、配列番
号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配
列番号６３、配列番号６４、配列番号１３２、配列番号１３３または配列番号１３４のア
ミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２との両方を含む。
他のそのような実施形態においては、該イヌ化抗体または抗原結合性フラグメントは、
配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５
２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号１２９、配列番号１３０また
は配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１と、配列番号６５、配列番号６６
、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号
７２、配列番号７３、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３
８または配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３との両方を含む。更にもう
１つのそのような実施形態においては、該イヌ化抗体または抗原結合性フラグメントは、
配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６
１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号１３２、配列番号１３３また
は配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２と、配列番号６５、配列番号６６
、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号
７２、配列番号７３、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３
８または配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３との両方を含む。
更に他のそのような実施形態においては、該イヌ化抗体または抗原結合性フラグメント
は、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番
号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号１２９、配列番号１３０
または配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５６、配列番号５
７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番
号６３、配列番号６４、配列番号１３２、配列番号１３３または配列番号１３４のアミノ
酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列
番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、
配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８または配列番号１３
９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態においては、該イヌ化抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体は相補性決定領域（ＣＤ
Ｒ）を含み、この場合、ＣＤＲは重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそれ
ぞれＨ１－１、Ｈ２－３ＡおよびＨ３－１２の標準（カノニカル）構造を有し、すなわち
、重鎖のＣＤＲ１は標準構造クラス１を有し、重鎖のＣＤＲ２は標準構造クラス３Ａを有
し、重鎖のＣＤＲ３は標準構造クラス１２を有する。より一層詳細な実施形態においては
、対応軽鎖のＣＤＲは軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそれぞれＬ１－
１、Ｌ２－１およびＬ３－１の標準構造を有する。他の実施形態においては、該イヌ化抗
イヌＩＬ－４Ｒα抗体は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、この場合、ＣＤＲは重鎖のＣ
ＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそれぞれＨ１－１、Ｈ２－２ＡおよびＨ３－７
の標準構造を有する。このタイプのより一層詳細な実施形態においては、対応軽鎖のＣＤ
Ｒは軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそれぞれＬ１－２Ａ、Ｌ２－１お
よびＬ３－１の標準構造を有する。更に他の実施形態においては、該イヌ化抗イヌＩＬ－
４Ｒα抗体は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、この場合、ＣＤＲは重鎖のＣＤＲ１、Ｃ
ＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそれぞれＨ１－１、Ｈ２－２ＢおよびＨ３－１５の標準構
造を有する。このタイプのより一層詳細な実施形態においては、対応軽鎖のＣＤＲは軽鎖
のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそれぞれＬ１－４、Ｌ２－１およびＬ３－
１の標準構造を有する。更に他の実施形態においては、該イヌ化抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体
は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、この場合、ＣＤＲは重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およ
びＣＤＲ３に関してそれぞれＨ１－１、Ｈ２－１およびＨ３－１５の標準構造を有する。
このタイプのより一層詳細な実施形態においては、対応軽鎖のＣＤＲは軽鎖のＣＤＲ１、
ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそれぞれＬ１－３、Ｌ２－１およびＬ３－１の標準構造
を有する。更に他の実施形態においては、該イヌ化抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体は相補性決定
領域（ＣＤＲ）を含み、この場合、ＣＤＲは重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に
関してそれぞれＨ１－１、Ｈ２－２ＢおよびＨ３－６の標準構造を有する。このタイプの
より一層詳細な実施形態においては、対応軽鎖のＣＤＲは軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およ
びＣＤＲ３に関してそれぞれＬ１－２Ａ、Ｌ２－１およびＬ３－１の標準構造を有する。
更に他の実施形態においては、該イヌ化抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体は相補性決定領域（Ｃ
ＤＲ）を含み、この場合、ＣＤＲは重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそ
れぞれＨ１－１、Ｈ２－２ＢおよびＨ３－４の標準構造を有する。このタイプのより一層
詳細な実施形態においては、対応軽鎖のＣＤＲは軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ
３に関してそれぞれＬ１－６、Ｌ２－１およびＬ３－１の標準構造を有する。更に他の実
施形態においては、該イヌ化抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み
、この場合、ＣＤＲは重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそれぞれＨ１－
１、Ｈ２－１およびＨ３－１３の標準構造を有する。このタイプのより一層詳細な実施形
態においては、対応軽鎖のＣＤＲは軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそ
れぞれＬ１－１、Ｌ２－１およびＬ３－１の標準構造を有する。更に他の実施形態におい
ては、該イヌ化抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、この場合、
ＣＤＲは重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそれぞれＨ１－１、Ｈ２－２
ＡおよびＨ３－６の標準構造を有する。このタイプのより一層詳細な実施形態においては
、対応軽鎖のＣＤＲは軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそれぞれＬ１－
２Ａ、Ｌ２－１およびＬ３－１の標準構造を有する。
更に他の実施形態においては、該イヌ化抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体は相補性決定領域（Ｃ
ＤＲ）を含み、この場合、ＣＤＲは重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそ
れぞれＨ１－１、Ｈ２－３ＡおよびＨ３－１５またはＨ３－１３の標準構造を有する。こ
のタイプのより一層詳細な実施形態においては、対応軽鎖のＣＤＲは軽鎖のＣＤＲ１、Ｃ
ＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそれぞれＬ１－６、Ｌ２－１およびＬ３－１の標準構造を
有する。更に他の実施形態においては、該イヌ化抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体は相補性決定領
域（ＣＤＲ）を含み、この場合、ＣＤＲは重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関
してそれぞれＨ１－１、Ｈ２－２ＡおよびＨ３－１０の標準構造を有する。このタイプの
より一層詳細な実施形態においては、対応軽鎖のＣＤＲは軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およ
びＣＤＲ３に関してそれぞれＬ１－６、Ｌ２－１およびＬ３－１の標準構造を有する。更
に他の実施形態においては、該イヌ化抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体は相補性決定領域（ＣＤＲ
）を含み、この場合、ＣＤＲは重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関してそれぞ
れＨ１－１、Ｈ２－３ＡおよびＨ３－９の標準構造を有する。このタイプのより一層詳細
な実施形態においては、対応軽鎖のＣＤＲは軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に
関してそれぞれＬ１－３、Ｌ２－１およびＬ３－３の標準構造を有する。
本発明はまた、イヌＩｇＧ重鎖とイヌカッパまたはラムダ軽鎖とを含む、ＩＬ－４Ｒα
に特異的に結合する単離されたイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する
。このタイプの特定の実施形態においては、３個の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）である
ＣＤＲ軽鎖１（ＣＤＲＬ１）、ＣＤＲ軽鎖２（ＣＤＲＬ２）およびＣＤＲ軽鎖３（ＣＤＲ
Ｌ３）を含むイヌカッパまたはラムダ軽鎖、ならびに３個の重鎖ＣＤＲであるＣＤＲ重鎖
１（ＣＤＲＨ１）、ＣＤＲ重鎖２（ＣＤＲＨ２）およびＣＤＲ重鎖３（ＣＤＲＨ３）を含
むイヌＩｇＧ重鎖はマウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体から得られる。本発明のイヌ化抗体お
よびその抗原結合性フラグメントの特定の実施形態はイヌＩＬ－４Ｒαに結合し、および
／またはイヌＩＬ－４へのイヌＩＬ－４Ｒαの結合を遮断する。
特定の実施形態においては、本発明は、３個の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＣ
ＤＲ軽鎖１（ＣＤＲＬ１）、ＣＤＲ軽鎖２（ＣＤＲＬ２）およびＣＤＲ軽鎖３（ＣＤＲＬ
３）と、３個の重鎖ＣＤＲであるＣＤＲ重鎖１（ＣＤＲＨ１）、ＣＤＲ重鎖２（ＣＤＲＨ
２）およびＣＤＲ重鎖３（ＣＤＲＨ３）とを含む、イヌインターロイキン４受容体アルフ
ァ（ＩＬ－４Ｒα）に特異的に結合する単離された哺乳類抗体またはその抗原結合性フラ
グメントを提供する。ある実施形態においては、ＣＤＲＬ１は配列番号４７、配列番号４
７の変異体、配列番号４７の保存的修飾変異体（すなわち、保存的に修飾された変異体）
、１の標準構造クラスを含む配列番号４７の変異体のアミノ酸配列、配列番号４８、配列
番号４８の変異体、配列番号４８の保存的修飾変異体、２Ａの標準構造クラスを含む配列
番号４８の変異体、配列番号４９、配列番号４９の変異体、配列番号４９の保存的修飾変
異体、４の標準構造クラスを含む配列番号４９の変異体、配列番号５０、配列番号５０の
変異体、配列番号５０の保存的修飾変異体、３の標準構造クラスを含む配列番号５０の変
異体、配列番号５１、配列番号５１の変異体、配列番号５１の保存的修飾変異体、３の標
準構造クラスを含む配列番号５１の変異体、配列番号５２、配列番号５２の変異体、配列
番号５２の保存的修飾変異体、２Ａの標準構造クラスを含む配列番号５２の変異体、配列
番号５３、配列番号５３の変異体、配列番号５３の保存的修飾変異体、６の標準構造クラ
スを含む配列番号５３の変異体、配列番号５４、配列番号５４の変異体、配列番号５４の
保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号５４の変異体、配列番号５５、配
列番号５５の変異体、配列番号５５の保存的修飾変異体、２Ａの標準構造クラスを含む配
列番号５５の変異体、配列番号１２９、配列番号１２９の変異体、配列番号１２９の保存
的修飾変異体、６の標準構造クラスを含む配列番号１２９の変異体、配列番号１３０、配
列番号１３０の変異体、配列番号１３０の保存的修飾変異体、６の標準構造クラスを含む
配列番号１３０の変異体、配列番号１３１、配列番号１３１の変異体、配列番号１３１の
保存的修飾変異体、３の標準構造クラスを含む配列番号１３１の変異体のアミノ酸配列を
含む。
対応するＣＤＲＬ２は配列番号５６、配列番号５６の変異体、配列番号５６の保存的修
飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号５６の変異体、配列番号５７、配列番号５
７の変異体、配列番号５７の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号５７
の変異体、配列番号５８、配列番号５８の変異体、配列番号５８の保存的修飾変異体、１
の標準構造クラスを含む配列番号５８の変異体、配列番号５９、配列番号５９の変異体、
配列番号５９の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号５９の変異体、配
列番号６０、配列番号６０の変異体、配列番号６０の保存的修飾変異体、１の標準構造ク
ラスを含む配列番号６０の変異体、配列番号６１、配列番号６１の変異体、配列番号６１
の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号６１の変異体、配列番号６２、
配列番号６２の変異体、配列番号６２の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配
列番号６２の変異体、配列番号６３、配列番号６３の変異体、配列番号６３の保存的修飾
変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号６３の変異体、配列番号６４、配列番号６４
の変異体、配列番号６４の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号６４の
変異体、配列番号１３２、配列番号１３２の変異体、配列番号１３２の保存的修飾変異体
、１の標準構造クラスを含む配列番号１３２の変異体、配列番号１３３、配列番号１３３
の変異体、配列番号１３３の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号１３
３の変異体、配列番号１３４、配列番号１３４の変異体、配列番号１３４の保存的修飾変
異体または１の標準構造クラスを含む配列番号１３４の変異体のアミノ酸配列を含む。
対応するＣＤＲＬ３は配列番号６５、配列番号６５の変異体、配列番号６５の保存的修
飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号６５の変異体、配列番号６６、配列番号６
６の変異体、配列番号６６の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号６６
の変異体、配列番号６７、配列番号６７の変異体、配列番号６７の保存的修飾変異体、１
の標準構造クラスを含む配列番号６７の変異体、配列番号６８、配列番号６８の変異体、
配列番号６８の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号６８の変異体、配
列番号６９、配列番号６９の変異体、配列番号６９の保存的修飾変異体、１の標準構造ク
ラスを含む配列番号６９の変異体、配列番号７０、配列番号７０の変異体、配列番号７０
の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号７０の変異体、配列番号７１、
配列番号７１の変異体、配列番号７１の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配
列番号７１の変異体、配列番号７２、配列番号７２の変異体、配列番号７２の保存的修飾
変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号７２の変異体、配列番号７３、配列番号７３
の変異体、配列番号７３の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号７３の
変異体、配列番号１３５、配列番号１３５の変異体、配列番号１３５の保存的修飾変異体
、１の標準構造クラスを含む配列番号１３５の変異体、配列番号１３６、配列番号１３６
の変異体、配列番号１３６の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号１３
６の変異体、配列番号１３７、配列番号１３７の変異体、配列番号１３７の保存的修飾変
異体、１の標準構造クラスを含む配列番号１３７の変異体、配列番号１３８、配列番号１
３８の変異体、配列番号１３８の保存的修飾変異体、３の標準構造クラスを含む配列番号
１３８の変異体、配列番号１３９、配列番号１３９の変異体、配列番号１３９の保存的修
飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号１３９の変異体のアミノ酸配列を含む
。
対応するＣＤＲＨ１は配列番号７４、配列番号７４の変異体、配列番号７４の保存的修
飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号７４の変異体、配列番号７５、配列番号７
５の変異体、配列番号７５の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号７５
の変異体、配列番号７６、配列番号７６の変異体、配列番号７６の保存的修飾変異体また
は１の標準構造クラスを含む配列番号７６の変異体、配列番号７７、配列番号７７の変異
体、配列番号７７の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号７７の変
異体、配列番号７８、配列番号７８の変異体、配列番号７８の保存的修飾変異体、１の標
準構造クラスを含む配列番号７８の変異体、配列番号７９、配列番号７９の変異体、配列
番号７９の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号７９の変異体、配列番
号８０、配列番号８０の変異体、配列番号８０の保存的修飾変異体、１の標準構造クラス
を含む配列番号８０の変異体、配列番号８１、配列番号８１の変異体、配列番号８１の保
存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号８１の変異体、配列番号８２、配列
番号８２の変異体、配列番号８２の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配
列番号８２の変異体、配列番号１４０、配列番号１４０の変異体、配列番号１４０の保存
的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号１４０の変異体、配列番号１４１、配
列番号１４１の変異体、配列番号１４１の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む
配列番号１４１の変異体、配列番号１４２、配列番号１４２の変異体、配列番号１４２の
保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号１４２の変異体、配列番号１４３
、配列番号１４３の変異体、配列番号１４３の保存的修飾変異体または１の標準構造クラ
スを含む配列番号１４３の変異体のアミノ酸配列を含む。
対応するＣＤＲＨ２は配列番号８３、配列番号８３の変異体、配列番号８３の保存的修
飾変異体、３Ａの標準構造クラスを含む配列番号８３の変異体、配列番号８４、配列番号
８４の変異体、配列番号８４の保存的修飾変異体、２Ａの標準構造クラスを含む配列番号
８４の変異体、配列番号８５、配列番号８５の変異体、配列番号８５の保存的修飾変異体
または２Ｂの標準構造クラスを含む配列番号８５の変異体、配列番号８６、配列番号８６
の変異体、配列番号８６の保存的修飾変異体、配列番号８７、配列番号８７の変異体、配
列番号８７の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む配列番号８７の変異体、配列
番号８８、配列番号８８の変異体、配列番号８８の保存的修飾変異体、２Ｂの標準構造ク
ラスを含む配列番号８８の変異体、配列番号８９、配列番号８９の変異体、配列番号８９
の保存的修飾変異体、２Ｂの標準構造クラスを含む配列番号８９の変異体、配列番号９０
、配列番号９０の変異体、配列番号９０の保存的修飾変異体、１の標準構造クラスを含む
配列番号９０の変異体、配列番号９１、配列番号９１の変異体、配列番号９１の保存的修
飾変異体、２Ａの標準構造クラスを含む配列番号９１の変異体、配列番号１４４、配列番
号１４４の変異体、配列番号１４４の保存的修飾変異体、３Ａの標準構造クラスを含む配
列番号１４４の変異体、配列番号１４５、配列番号１４５の変異体、配列番号１４５の保
存的修飾変異体、２Ａの標準構造クラスを含む配列番号１４５の変異体、配列番号１４６
、配列番号１４６の変異体、配列番号１４６の保存的修飾変異体、３Ａの標準構造クラス
を含む配列番号１４６の変異体、配列番号１４７、配列番号１４７の変異体、配列番号１
４７の保存的修飾変異体、３Ａの標準構造クラスを含む配列番号１４７の変異体、配列番
号１４８、配列番号１４８の変異体、配列番号１４８の保存的修飾変異体または３Ａの標
準構造クラスを含む配列番号１４８の変異体のアミノ酸配列を含む。
対応するＣＤＲＨ３は配列番号９２、配列番号９２の変異体、配列番号９２の保存的修
飾変異体、１２の標準構造クラスを含む配列番号９２の変異体、配列番号９３、配列番号
９３の変異体、配列番号９３の保存的修飾変異体、７の標準構造クラスを含む配列番号９
３の変異体、配列番号９４、配列番号９４の変異体、配列番号９４の保存的修飾変異体ま
たは１５の標準構造クラスを含む配列番号９４の変異体、配列番号９５、配列番号９５の
変異体、配列番号９５の保存的修飾変異体または１１の標準構造クラスを含む配列番号９
５の変異体、配列番号９６、配列番号９６の変異体、配列番号９６の保存的修飾変異体、
１５の標準構造クラスを含む配列番号９６の変異体、配列番号９７、配列番号９７の変異
体、配列番号９７の保存的修飾変異体、６の標準構造クラスを含む配列番号９７の変異体
、配列番号９８、配列番号９８の変異体、配列番号９８の保存的修飾変異体、４の標準構
造クラスを含む配列番号９８の変異体、配列番号９９、配列番号９９の変異体、配列番号
９９の保存的修飾変異体、１３の標準構造クラスを含む配列番号９９の変異体、配列番号
１００、配列番号１００の変異体、配列番号１００の保存的修飾変異体または６の標準構
造クラスを含む配列番号１００の変異体、配列番号１４９、配列番号１４９の変異体、配
列番号１４９の保存的修飾変異体、１５の標準構造クラスを含む配列番号１４９の変異体
、配列番号１５０、配列番号１５０の変異体、配列番号１５０の保存的修飾変異体、１０
の標準構造クラスを含む配列番号１５０の変異体、配列番号１５１、配列番号１５１の変
異体、配列番号１５１の保存的修飾変異体、１５の標準構造クラスを含む配列番号１５１
の変異体、配列番号１５２、配列番号１５２の変異体、配列番号１５２の保存的修飾変異
体、９の標準構造クラスを含む配列番号１５２の変異体、配列番号１５３、配列番号１５
３の変異体、配列番号１５３の保存的修飾変異体または１３の標準構造クラスを含む配列
番号１５３の変異体のアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態においては、本発明の哺乳類抗体（キメラ哺乳類抗体を含む）および／
またはその抗原結合性フラグメントはイヌインターロイキン４受容体アルファ（ＩＬ－４
Ｒα）に結合し、ならびに／またはイヌＩＬ－４および／もしくはイヌＩＬ－１３へのイ
ヌＩＬ－４Ｒαの結合を遮断する。関連実施形態においては、本発明の哺乳類抗体および
／またはその抗原結合性フラグメントはＩＬ－４ Ｉ型受容体および／またはＩＬ－４
ＩＩ型受容体へのイヌＩＬ－４および／またはイヌＩＬ－１３の結合を遮断する。特定の
実施形態においては、該哺乳類抗体（単離されているか否かに無関係）はイヌ化抗体であ
る。
したがって、哺乳類抗体（イヌ化抗体を含む）の或る実施形態においては、ＣＤＲＬ１
は配列番号４７、配列番号４７の変異体、配列番号４７の保存的修飾変異体または１の標
準構造クラスを含む配列番号４７の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ２は配列番号
５６、配列番号５６の変異体、配列番号５６の保存的修飾変異体または１の標準構造クラ
スを含む配列番号５６の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ３は配列番号６５、配列
番号６５の変異体、配列番号６５の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配
列番号６５の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ１は配列番号７４、配列番号７４の
変異体、配列番号７４の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号７４
の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ２は配列番号８３、配列番号８３の変異体、配
列番号８３の保存的修飾変異体および３Ａの標準構造クラスを含む配列番号８３の変異体
のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ３は配列番号９２、配列番号９２の変異体、配列番号９
２の保存的修飾変異体または１２の標準構造クラスを含む配列番号９２の変異体のアミノ
酸配列を含む。
哺乳類抗体（イヌ化抗体を含む）の更に他の実施形態においては、ＣＤＲＬ１は配列番
号４８、配列番号４８の変異体、配列番号４８の保存的修飾変異体または２Ａの標準構造
クラスを含む配列番号４８の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ２は配列番号５７、
配列番号５７の変異体、配列番号５７の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含
む配列番号５７の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ３は配列番号６６、配列番号６
６の変異体、配列番号６６の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号
６６の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ１は配列番号７５、配列番号７５の変異体
、配列番号７５の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号７５の変異
体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ２は配列番号８４、配列番号８４の変異体、配列番号
８４の保存的修飾変異体および２Ａの標準構造クラスを含む配列番号８４の変異体のアミ
ノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ３は配列番号９３、配列番号９３の変異体、配列番号９３の保
存的修飾変異体または７の標準構造クラスを含む配列番号９３の変異体のアミノ酸配列を
含む。
哺乳類抗体（イヌ化抗体を含む）の更に他の実施形態においては、ＣＤＲＬ１は配列番
号４９、配列番号４９の変異体、配列番号４９の保存的修飾変異体または４の標準構造ク
ラスを含む配列番号４９の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ２は配列番号５８、配
列番号５８の変異体、配列番号５８の保存的修飾変異体または４の標準構造クラスを含む
配列番号５８の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ３は配列番号６７、配列番号６７
の変異体、配列番号６７の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号６
７の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ１は配列番号７６、配列番号７６の変異体、
配列番号７６の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号７６の変異体
のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ２は配列番号８５、配列番号８５の変異体、配列番号８
５の保存的修飾変異体および２Ｂの標準構造クラスを含む配列番号８５の変異体のアミノ
酸配列を含む；ＣＤＲＨ３は配列番号９４、配列番号９４の変異体、配列番号９４の保存
的修飾変異体または１５の標準構造クラスを含む配列番号９４の変異体のアミノ酸配列を
含む。
哺乳類抗体（イヌ化抗体を含む）の更に他の実施形態においては、ＣＤＲＬ１は配列番
号５１、配列番号５１の変異体、配列番号５１の保存的修飾変異体または３の標準構造ク
ラスを含む配列番号５１の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ２は配列番号６０、配
列番号６０の変異体、配列番号６０の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む
配列番号６０の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ３は配列番号６９、配列番号６９
の変異体、配列番号６９の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号６
９の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ１は配列番号７８、配列番号７８の変異体、
配列番号７８の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号７８の変異体
のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ２は配列番号８７、配列番号８７の変異体、配列番号８
７の保存的修飾変異体および１の標準構造クラスを含む配列番号８７の変異体のアミノ酸
配列を含む；ＣＤＲＨ３は配列番号９６、配列番号９６の変異体、配列番号９６の保存的
修飾変異体または１５の標準構造クラスを含む配列番号９６の変異体のアミノ酸配列を含
む。
哺乳類抗体（イヌ化抗体を含む）の更に他の実施形態においては、ＣＤＲＬ１は配列番
号５２、配列番号５２の変異体、配列番号５２の保存的修飾変異体または２Ａの標準構造
クラスを含む配列番号５２の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ２は配列番号６１、
配列番号６１の変異体、配列番号６１の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含
む配列番号６１の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ３は配列番号７０、配列番号７
０の変異体、配列番号７０の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号
７０の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ１は配列番号７９、配列番号７９の変異体
、配列番号７９の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号７９の変異
体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ２は配列番号８８、配列番号８８の変異体、配列番号
８８の保存的修飾変異体および２Ｂの標準構造クラスを含む配列番号８８の変異体のアミ
ノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ３は配列番号９７、配列番号９７の変異体、配列番号９７の保
存的修飾変異体または１６の標準構造クラスを含む配列番号９７の変異体のアミノ酸配列
を含む。
哺乳類抗体（イヌ化抗体を含む）の更に他の実施形態においては、ＣＤＲＬ１は配列番
号５３、配列番号５３の変異体、配列番号５３の保存的修飾変異体または６の標準構造ク
ラスを含む配列番号５３の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ２は配列番号６２、配
列番号６２の変異体、配列番号６２の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む
配列番号６２の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ３は配列番号７１、配列番号７１
の変異体、配列番号７１の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号７
１の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ１は配列番号８０、配列番号８０の変異体、
配列番号８０の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号８０の変異体
のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ２は配列番号８９、配列番号８９の変異体、配列番号８
９の保存的修飾変異体および２Ｂの標準構造クラスを含む配列番号８９の変異体のアミノ
酸配列を含む；ＣＤＲＨ３は配列番号９８、配列番号９８の変異体、配列番号９８の保存
的修飾変異体または４の標準構造クラスを含む配列番号９８の変異体のアミノ酸配列を含
む。
哺乳類抗体（イヌ化抗体を含む）の更に他の実施形態においては、ＣＤＲＬ１は配列番
号５４、配列番号５４の変異体、配列番号５４の保存的修飾変異体または１の標準構造ク
ラスを含む配列番号５４の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ２は配列番号６３、配
列番号６３の変異体、配列番号６３の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む
配列番号６３の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ３は配列番号７２、配列番号７２
の変異体、配列番号７２の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号７
２の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ１は配列番号８１、配列番号８１の変異体、
配列番号８１の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号８１の変異体
のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ２は配列番号９０、配列番号９０の変異体、配列番号９
０の保存的修飾変異体および１の標準構造クラスを含む配列番号９０の変異体のアミノ酸
配列を含む；ＣＤＲＨ３は配列番号９９、配列番号９９の変異体、配列番号９９の保存的
修飾変異体または１３の標準構造クラスを含む配列番号９９の変異体のアミノ酸配列を含
む。このタイプの特定の実施形態においては、該抗体（またはその抗原結合性フラグメン
ト）がイヌインターロイキン４受容体α（ＩＬ－４Ｒα）に結合する際、該抗体は配列番
号１５７または配列番号１５８のアミノ酸配列内の、あるいは配列番号１５７と配列番号
１５８との両方における少なくとも１つのアミノ酸残基、好ましくは２～５個のアミノ酸
残基、および／またはより好ましくは３～８個以上のアミノ酸残基に結合する。
哺乳類抗体（イヌ化抗体を含む）の更に他の実施形態においては、ＣＤＲＬ１は配列番
号５５、配列番号５５の変異体、配列番号５５の保存的修飾変異体または２Ａの標準構造
クラスを含む配列番号５５の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ２は配列番号６４、
配列番号６４の変異体、配列番号６４の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含
む配列番号６４の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ３は配列番号７３、配列番号７
３の変異体、配列番号７３の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号
７３の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ１は配列番号８２、配列番号８２の変異体
、配列番号８２の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを含む配列番号８２の変異
体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ２は配列番号９１、配列番号９１の変異体、配列番号
９１の保存的修飾変異体および２Ａの標準構造クラスを含む配列番号９１の変異体のアミ
ノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ３は配列番号１００、配列番号１００の変異体、配列番号１０
０の保存的修飾変異体または６の標準構造クラスを含む配列番号１００の変異体のアミノ
酸配列を含む。
哺乳類抗体（イヌ化抗体を含む）の更に他の実施形態においては、ＣＤＲＬ１は配列番
号１２９、配列番号１２９の変異体、配列番号１２９の保存的修飾変異体または６の標準
構造クラスを含む配列番号１２９の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ２は配列番号
１３２、配列番号１３２の変異体、配列番号１３２の保存的修飾変異体または１の標準構
造クラスを含む配列番号１３２の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ３は配列番号１
３５、配列番号１３５の変異体、配列番号１３５の保存的修飾変異体または１の標準構造
クラスを含む配列番号１３５の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ１は配列番号１４
０、配列番号１４０の変異体、配列番号１４０の保存的修飾変異体または１の標準構造ク
ラスを含む配列番号１４０の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ２は配列番号１４４
、配列番号１４４の変異体、配列番号１４４の保存的修飾変異体および３Ａの標準構造ク
ラスを含む配列番号１４４の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ３は配列番号１４９
、配列番号１４９の変異体、配列番号１４９の保存的修飾変異体または１５の標準構造ク
ラスを含む配列番号１４９の変異体のアミノ酸配列を含む。このタイプの特定の実施形態
においては、該抗体（またはその抗原結合性フラグメント）がイヌインターロイキン４受
容体α（ＩＬ－４Ｒα）に結合する際、該抗体は配列番号１２７または配列番号１２８の
アミノ酸配列内の、あるいは配列番号１２７と配列番号１２８との両方における少なくと
も１つのアミノ酸残基、好ましくは２～５個のアミノ酸残基、および／またはより好まし
くは３～８個以上のアミノ酸残基に結合する。
哺乳類抗体（イヌ化抗体を含む）の更に他の実施形態においては、ＣＤＲＬ１は配列番
号１３０、配列番号１３０の変異体、配列番号１３０の保存的修飾変異体または６の標準
構造クラスを含む配列番号１３０の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ２は配列番号
１３３、配列番号１３３の変異体、配列番号１３３の保存的修飾変異体または１の標準構
造クラスを含む配列番号１３３の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ３は配列番号１
３６、配列番号１３６の変異体、配列番号１３６の保存的修飾変異体または１の標準構造
クラスを含む配列番号１３６の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ１は配列番号１４
１、配列番号１４１の変異体、配列番号１４１の保存的修飾変異体または１の標準構造ク
ラスを含む配列番号１４１の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ２は配列番号１４５
、配列番号１４５の変異体、配列番号１４５の保存的修飾変異体および２Ａの標準構造ク
ラスを含む配列番号１４５の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ３は配列番号１５０
、配列番号１５０の変異体、配列番号１５０の保存的修飾変異体または１０の標準構造ク
ラスを含む配列番号１５０の変異体のアミノ酸配列を含む。このタイプの特定の実施形態
においては、該抗体（またはその抗原結合性フラグメント）がイヌインターロイキン４受
容体α（ＩＬ－４Ｒα）に結合する際、該抗体は配列番号１５８または配列番号１６２の
アミノ酸配列内の、あるいは配列番号１５８と配列番号１６２との両方における少なくと
も１つのアミノ酸残基、好ましくは２～５個のアミノ酸残基、および／またはより好まし
くは３～８個以上のアミノ酸残基に結合する。
哺乳類抗体（イヌ化抗体を含む）の更に他の実施形態においては、ＣＤＲＬ１は配列番
号１２９、配列番号１２９の変異体、配列番号１２９の保存的修飾変異体または６の標準
構造クラスを含む配列番号１２９の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ２は配列番号
１３４、配列番号１３４の変異体、配列番号１３４の保存的修飾変異体または１の標準構
造クラスを含む配列番号１３４の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ３は配列番号１
３７、配列番号１３７の変異体、配列番号１３７の保存的修飾変異体または１の標準構造
クラスを含む配列番号１３７の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ１は配列番号１４
０、配列番号１４０の変異体、配列番号１４０の保存的修飾変異体または１の標準構造ク
ラスを含む配列番号１４０の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ２は配列番号１４６
、配列番号１４６の変異体、配列番号１４６の保存的修飾変異体および３Ａの標準構造ク
ラスを含む配列番号１４６の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ３は配列番号１５１
、配列番号１５１の変異体、配列番号１５１の保存的修飾変異体または１５の標準構造ク
ラスを含む配列番号１５１の変異体のアミノ酸配列を含む。このタイプの特定の実施形態
においては、該抗体（またはその抗原結合性フラグメント）がイヌインターロイキン４受
容体α（ＩＬ－４Ｒα）に結合する際、該抗体は配列番号１２５または配列番号１２６の
アミノ酸配列内の、あるいは配列番号１２５と配列番号１２６との両方における少なくと
も１つのアミノ酸残基、好ましくは２～５個のアミノ酸残基、および／またはより好まし
くは３～８個以上のアミノ酸残基に結合する。
哺乳類抗体（イヌ化抗体を含む）の更に他の実施形態においては、ＣＤＲＬ１は配列番
号１３１、配列番号１３１の変異体、配列番号１３１の保存的修飾変異体または３の標準
構造クラスを含む配列番号１３１の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ２は配列番号
６０、配列番号６０の変異体、配列番号６０の保存的修飾変異体または１の標準構造クラ
スを含む配列番号６０の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ３は配列番号１３８、配
列番号１３８の変異体、配列番号１３８５の保存的修飾変異体または３の標準構造クラス
を含む配列番号１３８の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ１は配列番号１４２、配
列番号１４２の変異体、配列番号１４２の保存的修飾変異体または１の標準構造クラスを
含む配列番号１４２の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ２は配列番号１４７、配列
番号１４７の変異体、配列番号１４７の保存的修飾変異体および３Ａの標準構造クラスを
含む配列番号１４７の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ３は配列番号１５２、配列
番号１５２の変異体、配列番号１５２の保存的修飾変異体または９の標準構造クラスを含
む配列番号１５２の変異体のアミノ酸配列を含む。このタイプの特定の実施形態において
は、該抗体（またはその抗原結合性フラグメント）がイヌインターロイキン４受容体α（
ＩＬ－４Ｒα）に結合する際、該抗体は配列番号１５４または配列番号１５５または配列
番号１５６またはそれらの任意の組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸残基、好まし
くは２～５個のアミノ酸残基、および／またはより好ましくは３～８個以上のアミノ酸残
基に結合する。
哺乳類抗体（イヌ化抗体を含む）の更に他の実施形態においては、ＣＤＲＬ１は配列番
号１２９、配列番号１２９の変異体、配列番号１２９の保存的修飾変異体または６の標準
構造クラスを含む配列番号１２９の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ２は配列番号
１３２、配列番号１３２の変異体、配列番号１３２の保存的修飾変異体または１の標準構
造クラスを含む配列番号１３２の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＬ３は配列番号１
３９、配列番号１３９の変異体、配列番号１３９の保存的修飾変異体または１の標準構造
クラスを含む配列番号１３９の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ１は配列番号１４
３、配列番号１４３の変異体、配列番号１４３の保存的修飾変異体または１の標準構造ク
ラスを含む配列番号１４３の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ２は配列番号１４８
、配列番号１４８の変異体、配列番号１４８の保存的修飾変異体および３Ａの標準構造ク
ラスを含む配列番号１４８の変異体のアミノ酸配列を含む；ＣＤＲＨ３は配列番号１５３
、配列番号１５３の変異体、配列番号１５３の保存的修飾変異体または１３の標準構造ク
ラスを含む配列番号１５３の変異体のアミノ酸配列を含む。このタイプの特定の実施形態
においては、該抗体（またはその抗原結合性フラグメント）がイヌインターロイキン４受
容体α（ＩＬ－４Ｒα）に結合する際、該抗体は配列番号１５９または配列番号１６０ま
たは配列番号１６１またはそれらの任意の組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸残基
、好ましくは２～５個のアミノ酸残基、および／またはより好ましくは３～８個以上のア
ミノ酸残基に結合する。
本発明は、イヌインターロイキン４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）に特異的に結合す
る抗体およびその抗原結合性フラグメントを含む。このタイプの特定の実施形態において
は、該抗体およびその抗原結合性フラグメントはイヌＩＬ－４Ｒαに結合し、イヌＩＬ－
４および／またはＩＬ－１３へのイヌＩＬ－４Ｒαの結合を遮断する。前記のとおり、単
離された哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントはイヌ化抗体またはそのイヌ化抗
原結合性フラグメントでありうる。他の実施形態においては、単離された哺乳類抗体また
はその抗原結合性フラグメントはマウス抗体またはそのマウス抗原結合性フラグメントで
ありうる。
本発明のイヌ化抗体またはそのイヌ化抗原結合性フラグメントはヒンジ領域を含みうる
。このタイプの特定の実施形態においては、ヒンジ領域は配列番号１０１のアミノ酸配列
を含む。もう１つの実施形態においては、ヒンジ領域は配列番号１０２のアミノ酸配列を
含む。更にもう１つの実施形態においては、ヒンジ領域は配列番号１０３のアミノ酸配列
を含む。更にもう１つの実施形態においては、ヒンジ領域は配列番号１０４のアミノ酸配
列を含む。
ある実施形態においては、該イヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番
号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。このタイプの特定の実施形態においては、該
重鎖は、配列番号１６３のヌクレオチド配列によりコードされる。他の実施形態において
は、該イヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１６６のアミノ酸配列
を含む重鎖を含む。このタイプの特定の実施形態においては、該重鎖は、配列番号１６５
のヌクレオチド配列によりコードされる。更に他の実施形態においては、該イヌ化抗体ま
たはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
このタイプの特定の実施形態においては、該重鎖は、配列番号１６７のヌクレオチド配列
によりコードされる。そのようなタイプの特定の実施形態においては、該イヌ化抗体（ま
たはその抗原結合性フラグメント）がイヌインターロイキン４受容体α（ＩＬ－４Ｒα）
に結合する際、該抗体は配列番号１５４または配列番号１５５または配列番号１５６また
はそれらの任意の組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸残基、好ましくは２～５個の
アミノ酸残基、および／またはより好ましくは３～８個以上のアミノ酸残基に結合する。
関連実施形態においては、該イヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番
号１７０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。このタイプの特定の実施形態においては、該
軽鎖は、配列番号１６９のヌクレオチド配列によりコードされる。他の実施形態において
は、該イヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１７２のアミノ酸配列
を含む軽鎖を含む。このタイプの特定の実施形態においては、該軽鎖は、配列番号１７１
のヌクレオチド配列によりコードされる。更に他の実施形態においては、該イヌ化抗体ま
たはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
このタイプの特定の実施形態においては、該軽鎖は、配列番号１７３のヌクレオチド配列
によりコードされる。そのようなタイプの特定の実施形態においては、該イヌ化抗体（ま
たはその抗原結合性フラグメント）がイヌインターロイキン４受容体α（ＩＬ－４Ｒα）
に結合する際、該抗体は配列番号１５４または配列番号１５５または配列番号１５６また
はそれらの任意の組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸残基、好ましくは２～５個の
アミノ酸残基、および／またはより好ましくは３～８個以上のアミノ酸残基に結合する。
本発明は更に、そのような重鎖と軽鎖との組合せを含む抗体を提供する。特定の実施形
態においては、該重鎖は配列番号１６４のアミノ酸配列を含み、該軽鎖は配列番号１７０
のアミノ酸配列を含む。このタイプのより詳細な実施形態においては、該重鎖は配列番号
１６３のヌクレオチド配列によりコードされ、該軽鎖は配列番号１６９のヌクレオチド配
列によりコードされる。他の実施形態においては、該重鎖は配列番号１６６のアミノ酸配
列を含み、該軽鎖は配列番号１７２のアミノ酸配列を含む。このタイプのより詳細な実施
形態においては、該重鎖は配列番号１６５のヌクレオチド配列によりコードされ、該軽鎖
は配列番号１７１のヌクレオチド配列によりコードされる。更に他の実施形態においては
、該重鎖は配列番号１６８のアミノ酸配列を含み、該軽鎖は配列番号１７４のアミノ酸配
列を含む。このタイプのより詳細な実施形態においては、該重鎖は配列番号１６７のヌク
レオチド配列によりコードされ、該軽鎖は配列番号１７３のヌクレオチド配列によりコー
ドされる。
関連実施形態においては、該重鎖は配列番号１６４のアミノ酸配列を含み、該軽鎖は配
列番号１７２のアミノ酸配列を含む。他の実施形態においては、該重鎖は配列番号１６４
のアミノ酸配列を含み、該軽鎖は配列番号１７４のアミノ酸配列を含む。更に他の実施形
態においては、該重鎖は配列番号１６６のアミノ酸配列を含み、該軽鎖は配列番号１７０
のアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態においては、該重鎖は配列番号１６６のアミノ
酸配列を含み、該軽鎖は配列番号１７４のアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態におい
ては、該重鎖は配列番号１６８のアミノ酸配列を含み、該軽鎖は配列番号１７０のアミノ
酸配列を含む。他の実施形態においては、該重鎖は配列番号１６８のアミノ酸配列を含み
、該軽鎖は配列番号１７２のアミノ酸配列を含む。
そのようなタイプの特定の実施形態においては、該イヌ化抗体（またはその抗原結合性
フラグメント）がイヌインターロイキン４受容体α（ＩＬ－４Ｒα）に結合する際、該抗
体は配列番号１５４または配列番号１５５または配列番号１５６またはそれらの任意の組
合せにおける少なくとも１つのアミノ酸残基、好ましくは２～５個のアミノ酸残基、およ
び／またはより好ましくは３～８個以上のアミノ酸残基に結合する。
したがって、本発明は更に、イヌインターロイキン４受容体α（ＩＬ－４Ｒα）に特異
的に結合する、単離された哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメント（イヌ化抗体ま
たはその抗原結合性フラグメントを含む）を提供し、ここで、該抗体は、イヌＩＬ－４Ｒ
αに結合する際、配列番号１２５または配列番号１２６または配列番号１２７または配列
番号１２８または配列番号１５４または配列番号１５５または配列番号１５６または配列
番号１５７または配列番号１５８または配列番号１５９または配列番号１６０または配列
番号１６１または配列番号１６２またはそれらの任意の組合せにおける少なくとも１つの
アミノ酸残基、好ましくは２～５個のアミノ酸残基、および／またはより好ましくは３～
８個以上のアミノ酸残基に結合する。特定の実施形態においては、該抗体またはその抗原
結合性フラグメントはイヌＩＬ－４Ｒαに結合し、イヌインターロイキン４へのイヌＩＬ
－４Ｒαの結合を遮断する。
本発明は更に、１×１０－１２Ｍより低い解離定数（Ｋｄ）（例えば、１×１０－１３
Ｍ以下）でイヌＩＬ－４Ｒαに結合する哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントを
提供する。特定の実施形態においては、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメント
は１×１０－５Ｍ～１×１０－１２Ｍの解離定数でイヌＩＬ－４Ｒαに結合する。より詳
細な実施形態においては、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントは１×１０－
７Ｍ～１×１０－１１Ｍの解離定数でイヌＩＬ－４Ｒαに結合する。更により詳細な実施
形態においては、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントは１×１０－８Ｍ～１
×１０－１１Ｍの解離定数でイヌＩＬ－４Ｒαに結合する。更により詳細な実施形態にお
いては、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントは１×１０－８Ｍ～１×１０－
１０Ｍの解離定数でイヌＩＬ－４Ｒαに結合する。
本発明はまた、１×１０７Ｍ－１ｓ－１より大きなオン（ｏｎ）速度（ｋｏｎ）でイヌ
ＩＬ－４Ｒαに結合する哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。特定
の実施形態においては、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントは１×１０２Ｍ
－１ｓ－１～１×１０７Ｍ－１ｓ－１のオン速度（ｋｏｎ）でイヌＩＬ－４Ｒαに結合す
る。より詳細な実施形態においては、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントは
１×１０３Ｍ－１ｓ－１～１×１０６Ｍ－１ｓ－１のオン速度でイヌＩＬ－４Ｒαに結合
する。更により詳細な実施形態においては、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメ
ントは１×１０３Ｍ－１ｓ－１～１×１０５Ｍ－１ｓ－１のオン速度でイヌＩＬ－４Ｒα
に結合する。更により詳細な実施形態においては、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フ
ラグメントは１×１０４Ｍ－１ｓ－１～１×１０５Ｍ－１ｓ－１のオン速度でイヌＩＬ－
４Ｒαに結合する。
本発明は更に、１×１０－７ｓ－１より遅いオフ（ｏｆｆ）速度（ｋｏｆｆ）でイヌＩ
Ｌ－４Ｒαに結合する哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。特定の
実施形態においては、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントは１×１０－３ｓ
－１～１×１０－８ｓ－１のオフ速度でイヌＩＬ－４Ｒαに結合する。より詳細な実施形
態においては、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントは１×１０－４ｓ－１～
１×１０－７ｓ－１のオフ速度でイヌＩＬ－４Ｒαに結合する。更により詳細な実施形態
においては、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントは１×１０－５ｓ－１～１
×１０－７ｓ－１のオフ速度でイヌＩＬ－４Ｒαに結合する。
特定の実施形態においては、本発明の哺乳類抗体（キメラ抗体を含む）はＩＬ－４Ｒα
へのイヌＩＬ－４の結合を遮断する。より詳細な実施形態においては、該抗体は１×１０
－８Ｍ～１×１０－９Ｍまたはより一層低い濃度の最小ＥＣ５０でＩＬ－４Ｒαへのイヌ
ＩＬ－４の結合を遮断する。更により詳細な実施形態においては、ＥＣ５０は５×１０－
９Ｍ～５×１０－１３Ｍである。更により詳細な実施形態においては、ＥＣ５０は５×１
０－９Ｍ～５×１０－１１Ｍである。
関連実施形態においては、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントは、Ｉ型お
よび／またはＩＩ型ＩＬ－４受容体に結合するＩＬ－４および／またはＩＬ－１３によっ
て媒介される細胞シグナル伝達経路を負に減衰させる（例えば、抑制する）。特定の実施
形態においては、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントは動物対象において掻
痒性炎症性皮膚疾患、例えばアトピー性皮膚炎を改善する。より詳細な実施形態において
は、動物対象はイヌである。関連実施形態においては、動物対象はネコである。
したがって、本発明の任意の抗体は、これらの特性、すなわち、イヌＩＬ－４Ｒαに関
する前記の解離定数、イヌＩＬ－４Ｒαへの結合に関する前記のオン速度、該抗体－イヌ
ＩＬ４Ｒα結合複合体からの解離に関する前記のオフ速度、Ｉ型および／またはＩＩ型Ｉ
Ｌ－４受容体へのＩＬ－４および／またはＩＬ－１３結合により媒介される細胞シグナル
伝達経路の抑制、あるいは動物対象における掻痒性炎症性皮膚疾患、例えばアトピー性皮
膚炎の改善の１つ、２つ、３つ、４つ又は全てを示しうる。
前記のとおり、前記抗体（およびその抗原結合性フラグメント）を含む本発明の抗体（
およびその抗原結合性フラグメント）はモノクローナル抗体（およびその抗原結合性フラ
グメント）、哺乳類抗体（およびその抗原結合性フラグメント）、例えばネズミ（マウス
）抗体（およびその抗原結合性フラグメント）、イヌ化抗体（およびその抗原結合性フラ
グメント）［イヌ化マウス抗体（およびその抗原結合性フラグメント）を含む］であるこ
とが可能であり、ある実施形態においては、該抗体（およびその抗原結合性フラグメント
）は単離されている。
本発明は更に、本発明のイヌ化抗体の軽鎖のいずれか１つをコードする核酸（単離され
た核酸を含む）を提供する。同様に、本発明は、本発明のイヌ化抗体の重鎖のいずれか１
つをコードする単離された核酸を提供する。
本発明は更に、本発明の核酸（単離された核酸を含む）の１以上を含む発現ベクターを
提供する。本発明は更に、本発明の発現ベクターの１以上を含む宿主細胞を提供する。
特定の実施形態においては、該抗体は組換え抗体またはその抗原結合性フラグメントで
ある。関連実施形態においては、可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインが、一本鎖抗
体を形成するように柔軟性リンカーにより連結されている。
特定の実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントはＦａｂフラグメン
トである。他の実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントはＦａｂ’フ
ラグメントである。他の実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは（
Ｆａｂ’）２フラグメントである。更に他の実施形態においては、該抗体または抗原結合
性フラグメントはジアボディである。特定の実施形態においては、該抗体または抗原結合
性フラグメントはドメイン抗体である。特定の実施形態においては、該抗体または抗原結
合性フラグメントは単一ドメイン抗体である。
特定の実施形態においては、イヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体または抗原結合性フ
ラグメントは、治療される動物対象（例えば、イヌ）における、Ｉ型および／またはＩＩ
型ＩＬ－４受容体へのＩＬ－４および／またはＩＬ－１３結合により媒介される細胞シグ
ナル伝達経路を負に減衰させる。より詳細な実施形態においては、本発明のイヌ化マウス
抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体または抗原結合性フラグメントの投与は、治療される動物対象（
例えば、イヌ）におけるアトピー性皮膚炎の症状の１以上を改善するように働く。
本発明は更に、イヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体またはその一部をコードする単離
された核酸を提供する。関連実施形態においては、そのような抗体または抗原結合性フラ
グメントは、イヌ対象におけるアトピー性皮膚炎を治療するための医薬の製造のために使
用されうる。代替的に又は組合せて、本発明は、診断用途のための、本発明の抗体または
抗体フラグメントのいずれかの使用を提供する。更に追加的な実施形態においては、本明
細書に開示されてるイヌ化抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかを含むキットを
提供する。
更に追加的な実施形態においては、本発明のイヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体また
は抗原結合性フラグメントのいずれかをコードする単離された核酸を含む発現ベクターを
提供する。本発明はまた、本明細書に記載されている発現ベクターのいずれかを含む宿主
細胞に関する。特定の実施形態においては、本発明のこれらの核酸、発現ベクターまたは
ポリペプチドは抗体の製造方法において有用である。本発明は更に、配列番号１２５また
は配列番号１２６または配列番号１２７または配列番号１２８または配列番号１５４また
は配列番号１５５または配列番号１５６または配列番号１５７または配列番号１５８また
は配列番号１５９または配列番号１６０または配列番号１６１または配列番号１６２のア
ミノ酸配列を含む８０個以下のアミノ酸残基からなるペプチド（単離された抗原ペプチド
を含む）を提供する。関連実施形態においては、該ペプチド（単離された抗原ペプチドを
含む）は、配列番号１２５または配列番号１２６または配列番号１２７または配列番号１
２８または配列番号１５４または配列番号１５５または配列番号１５６または配列番号１
５７または配列番号１５８または配列番号１５９または配列番号１６０または配列番号１
６１または配列番号１６２のアミノ酸配列を含む６０個以下のアミノ酸残基からなる。関
連実施形態においては、該ペプチド（単離された抗原ペプチドを含む）は、配列番号１２
５または配列番号１２６または配列番号１２７または配列番号１２８または配列番号１５
４または配列番号１５５または配列番号１５６または配列番号１５７または配列番号１５
８または配列番号１５９または配列番号１６０または配列番号１６１または配列番号１６
２のアミノ酸配列を含む１０～４５個のアミノ酸残基からなる。更に他の実施形態におい
ては、該ペプチド（単離された抗原ペプチドを含む）は、配列番号１２５または配列番号
１２６または配列番号１２７または配列番号１２８または配列番号１５４または配列番号
１５５または配列番号１５６または配列番号１５７または配列番号１５８または配列番号
１５９または配列番号１６０または配列番号１６１または配列番号１６２のアミノ酸配列
からの、またはそれらを含む５～２５個のアミノ酸残基からなる。
本発明は更に、配列番号１２５または配列番号１２６または配列番号１２７または配列
番号１２８または配列番号１５４または配列番号１５５または配列番号１５６または配列
番号１５７または配列番号１５８または配列番号１５９または配列番号１６０または配列
番号１６１または配列番号１６２のアミノ酸配列に対して８０％、８５％、９０％、９５
％または１００％同一であり、本発明の単離された哺乳類抗体またはその抗原結合性フラ
グメントに結合するアミノ酸配列を含む８０個以下のアミノ酸残基からなる抗原ペプチド
（単離されたペプチドを含む）を提供する。関連実施形態においては、該抗原ペプチド（
単離された抗原ペプチドを含む）は、配列番号１２５または配列番号１２６または配列番
号１２７または配列番号１２８または配列番号１５４または配列番号１５５または配列番
号１５６または配列番号１５７または配列番号１５８または配列番号１５９または配列番
号１６０または配列番号１６１または配列番号１６２のアミノ酸配列に対して８０％、８
５％、９０％、９５％または１００％同一であり、単離された哺乳類抗体またはその抗原
結合性フラグメントに結合するアミノ酸配列を含む６０個以下のアミノ酸残基からなる。
他の実施形態においては、該ペプチドは、配列番号１２５または配列番号１２６または配
列番号１２７または配列番号１２８または配列番号１５４または配列番号１５５または配
列番号１５６または配列番号１５７または配列番号１５８または配列番号１５９または配
列番号１６０または配列番号１６１または配列番号１６２のアミノ酸配列に対して８０％
、８５％、９０％、９５％または１００％同一であり、単離された哺乳類抗体またはその
抗原結合性フラグメントに結合するアミノ酸配列からの、またはそれらを含む５～２５個
のアミノ酸残基からなる。特定の実施形態においては、該哺乳類抗体は４Ｄ８のＣＤＲを
含む。他の実施形態においては、該哺乳類抗体は１１Ｈ２のＣＤＲを含む。更に他の実施
形態においては、該哺乳類抗体は４Ｈ３のＣＤＲを含む。更に他の実施形態においては、
該哺乳類抗体は１１Ｂ６のＣＤＲを含む。更に他の実施形態においては、該哺乳類抗体は
２Ｅ２のＣＤＲを含む。更に他の実施形態においては、該哺乳類抗体は６Ｃ１２のＣＤＲ
を含む。
本発明は更に、前記ペプチドのいずれかを含む融合タンパク質を提供する。特定の実施
形態においては、該融合タンパク質はそのような抗原ペプチドと非イヌ哺乳類ＩｇＧ抗体
のＦｃ領域とを含む。より詳細な実施形態においては、該融合タンパク質は非イヌ哺乳類
ＩｇＧ抗体のＦｃ領域を含む。ある実施形態においては、該非イヌ哺乳類ＩｇＧ抗体はマ
ウスＩｇＧである。代替的実施形態においては、該非イヌ哺乳類ＩｇＧ抗体はヒトＩｇＧ
である。他の実施形態においては、該非イヌ哺乳類ＩｇＧ抗体はウマＩｇＧである。更に
他の実施形態においては、該非イヌ哺乳類ＩｇＧ抗体はブタＩｇＧである。更に他の実施
形態においては、該非イヌ哺乳類ＩｇＧ抗体はウシＩｇＧである。
特定の実施形態においては、該非イヌ哺乳類ＩｇＧ抗体はＩｇＧ１である。他の実施形
態においては、該非イヌ哺乳類ＩｇＧ抗体はＩｇＧ２ａである。更に他の実施形態におい
ては、該非イヌ哺乳類ＩｇＧ抗体はＩｇＧ３である。更に他の実施形態においては、該非
イヌ哺乳類ＩｇＧ抗体はＩｇＧ４である。他の実施形態においては、該融合タンパク質は
前記抗原ペプチドのいずれかとマルトース結合性タンパク質とを含む。更に他の実施形態
においては、該融合タンパク質は前記抗原ペプチドのいずれかとベータ－ガラクトシダー
ゼとを含む。更に他の実施形態においては、該融合タンパク質は前記抗原ペプチドのいず
れかとグルタチオンＳ－トランスフェラーゼとを含む。更に他の実施形態においては、該
融合タンパク質は前記抗原ペプチドのいずれかとチオレドキシンとを含む。更に他の実施
形態においては、該融合タンパク質は前記抗原ペプチドのいずれかとＧｒｏ ＥＬとを含
む。更に他の実施形態においては、該融合タンパク質は前記抗原ペプチドのいずれかとＮ
ｕｓＡとを含む。
本発明は更に、本発明の抗原ペプチドおよび対応融合タンパク質をコードする核酸（単
離された核酸を含む）を提供する。本発明はまた、これらの核酸を含む発現ベクター、お
よび本発明の発現ベクターの１以上を含む宿主細胞を提供する。
また、本発明は、本発明の抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体またはその抗原結合性フラグメント
、イヌＩＬ－４Ｒαからの抗原ペプチド（単離された抗原ペプチドを含む）、本発明のイ
ヌＩＬ－４Ｒαからの抗原ペプチドを含む融合タンパク質、本発明の抗原断片および／ま
たは融合タンパク質をコードする核酸（単離された核酸を含む）、そのような核酸を含む
発現ベクターまたはそれらのいずれかの組合せと、医薬上許容される担体または希釈剤と
を含む医薬組成物を含む。
また、本発明は、ＩＬ－４および／またはＩＬ－１３の活性を負に減衰させる方法であ
って、それを要する動物にそのような医薬組成物の治療的有効量を投与することを含む方
法を提供する。ある実施形態においては、該方法はイヌにおけるアトピー性皮膚炎の治療
に使用される。
本発明のこれらの及び他の態様は、後記の「図面の簡単な説明」および「詳細な説明」
を参照することにより、より良く理解されるであろう。
詳細な説明
ヒトＡＤの治療のための種々のアプローチが現在、多数の臨床試験において研究中であ
る［Ｍａｌａｊｉａｎら，Ｎｅｗ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔ
ｉｃ ｐａｒａｄｉｇｍｓ ｉｎ ａｔｏｐｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ Ｃｙｔｏｋｉ
ｎｅ，（２０１４）において概説されている］。これらのアプローチの幾つかは、Ｔｈ２
細胞の発生および活性化を招くシグナル伝達分子／事象の１以上を妨げることを目的とし
ている。この領域における研究の１つの方向はＴｈ２経路の鍵インターロイキン駆動物質
の作用の遮断のためのアプローチを含む。ＡＤは主にＴｈ２に支配される疾患であるとい
う観察、ならびにＴｈ２細胞の発生の鍵駆動物質としてのＩＬ－４およびＩＬ－１３の両
方の複合作用に関する中心的役割を裏付ける蓄積データに基づいて、そしてＩＬ－４受容
体α鎖が両方のサイトカインからのシグナル伝達のための必須受容体であることを示すデ
ータに基づいて、本発明は、Ｉ型およびＩＩ型ＩＬ－４受容体へのイヌＩＬ－４およびイ
ヌＩＬ－１３の結合を遮断し次いでイヌＩＬ－４およびＩＬ－１３の両方からのシグナル
伝達を抑制するモノクローナル抗体の作製および特徴づけを記載する。これらの抗体は、
本明細書に開示されているとおり、伴侶動物におけるアトピー性皮膚炎および他の疾患の
治療における有用性を有する。
略語
本発明の詳細な説明および実施例の全体にわたって、以下の略語を用いる。
ＡＤＣＣ 抗体依存性細胞傷害；
ＣＤＣ 補体依存性細胞傷害；
ＣＤＲ Ｋａｂａｔ（カバト）番号付け系を用いて定められた、免疫グロブリン可変領
域内の相補性決定領域；
ＣＨＯ チャイニーズハムスター卵巣；
ＥＣ５０ ５０％の効力または結合をもたらす濃度；
ＥＬＩＳＡ 酵素結合イムノソルベントアッセイ；
ＦＲ 抗体フレームワーク領域：ＣＤＲ領域を除く免疫グロブリン可変領域；
ＨＲＰ ホースラディッシュペルオキシダーゼ；
ＩＦＮ インターフェロン；
ＩＣ５０ ５０％の抑制をもたらす濃度；
ＩｇＧ 免疫グロブリンＧ；
Ｋａｂａｔ Ｅｌｖｉｎ Ａ．Ｋａｂａｔ［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉ
ｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂ
ｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏ
ｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）］により開発された免疫グロ
ブリンアライメントおよび番号付け系；
ｍＡｂ モノクローナル抗体（また、ＭａｂまたはＭＡｂ）；
ＰＣＲ ポリメラーゼ連鎖反応；
ＭＥＳ ２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸；
ＭＯＡ 作用メカニズム；
ＮＨＳ 正常ヒト血清；
ＰＣＲ ポリメラーゼ連鎖反応；
ＰＫ 薬物動態；
ＴＴ 破傷風トキソイド；
Ｖ領域 異なる抗体間で配列が可変性であるＩｇＧ鎖のセグメント。それは軽鎖内のＫ
ａｂａｔ残基１０９および重鎖内の１１３まで伸長する；
ＶＨ 免疫グロブリン重鎖可変領域；
ＶＬ 免疫グロブリン軽鎖可変領域；
ＶＫ 免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域。
定義
本発明がより容易に理解されうるように、幾つかの科学技術用語を以下に具体的に定義
する。本明細書中の他の箇所で特に定義されていない限り、本明細書中で用いる他の全て
の科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解される意味を有する。
添付の特許請求の範囲を含む本明細書において用いる単数形の語は、文脈に明らかに矛
盾しない限り、その対応複数対象物を含む。
「活性化」は、それが細胞または受容体に適用される場合、文脈により又は明示的に特
に示されていない限り、リガンドでの細胞または受容体の活性化または処理（治療）を意
味しうる。「リガンド」は、天然および合成リガンド、例えばサイトカイン、サイトカイ
ン変異体、類似体、突然変異タンパク質、および抗体由来の結合性化合物を含む。「リガ
ンド」はまた、小分子、例えば、サイトカインのペプチド模倣体、および抗体のペプチド
模倣体を含む。「活性化」は、内的メカニズムにより及び外的もしくは環境要因により調
節される細胞活性化を意味しうる。
分子の「活性」は、リガンドへの又は受容体への該分子の結合、あるいは触媒活性；遺
伝子発現または細胞シグナリング、分化もしくは成熟を刺激する能力；抗原活性、他の分
子の活性のモジュレーションなどを示しうる又は意味しうる。分子の「活性」は、細胞間
相互作用、例えば接着をモジュレーションまたは維持する場合の活性、あるいは細胞の構
造、例えば細胞膜または細胞骨格を維持する場合の活性をも意味しうる。「活性」は、比
活性、例えば、［触媒活性］／［ｍｇタンパク質］、または［免疫活性］／［ｍｇタンパ
ク質］、生物学的区画内の濃度などをも意味しうる。「活性」は、自然または適応免疫系
の成分のモジュレーションを意味しうる。
「投与」および「治療（処理）」は、それが動物、例えばイヌ実験対象、細胞、組織、
器官または生物学的流体に適用される場合には、該動物、例えばイヌ対象、細胞、組織、
器官または生物学的流体との外因性医薬、治療用物質、診断剤または組成物の接触を意味
する。細胞の処理は、該細胞との試薬の接触、および該細胞に接触している流体との試薬
の接触を含む。「投与」および「処理（治療）」は、試薬、診断剤、結合性化合物または
別の細胞による、例えば細胞の、インビトロおよびエクスビボ（ｅｘ ｖｉｖｏ）処理を
も意味する。「対象（被験者）」なる語は、任意の生物、好ましくは動物、より好ましく
は哺乳動物（例えば、イヌ、ネコまたはヒト）、最も好ましくはイヌを含む。
本明細書中で用いる、例えば抗体のアミノ酸配列における、別のアミノ酸残基での「ア
ミノ酸残基の置換」は、別のアミノ酸残基で「アミノ酸残基を置換すること」と同意義で
あり、アミノ酸配列内の特定の位置における特定のアミノ酸残基が、異なるアミノ酸残基
により置換されていることを示す。そのような置換は特別に設計可能であり、すなわち、
例えば組換えＤＮＡ技術により、アミノ酸配列内の特定の位置においてアラニンをセリン
で意図的に置換することが可能である。あるいは、より自然な選択過程により、例えば、
細胞により産生された抗体がその抗原（例えば、エピトープまたはその一部を含有するも
の）上の所与領域に結合する能力に基づいて、および／または置換対象であるＣＤＲと同
じ標準構造を保有する特定のＣＤＲを抗体が含むように、抗体の特定のアミノ酸残基また
はアミノ酸残基の鎖を１以上のアミノ酸残基により置換することが可能である。そのよう
な置換は「変異体」ＣＤＲおよび／または変異体抗体を与えうる。
「治療する（処理する）」または「治療（処理）」は、治療用物質（例えば、本発明の
抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかを含有する組成物）を、該物質が治療活性
を示す１以上の疾患症状を有する又は疾患を有すると疑われるイヌ対象または患者に内的
または外的に投与することを意味する。
典型的には、該物質は、いずれかの臨床的に測定可能な度合によるそのような症状の退
縮の誘導またはそのような症状の進行の抑制により、治療対象または集団における１以上
の疾患症状を軽減および／または改善するのに有効な量で投与される。いずれかの特定の
疾患症状を軽減するのに有効である治療用物質の量（「治療的有効量」とも称される）は
患者（例えば、イヌ）の病態、年齢および体重、ならびに対象において所望の応答を惹起
する医薬組成物の能力のような要因によって変動しうる。疾患症状が軽減または改善した
かどうかは、その症状の重症度または進行状態を評価するために獣医または他の熟練医療
提供者により典型的に用いられるいずれかの臨床的測定により評価されうる。本発明の或
る実施形態（例えば、治療方法または製造品）は全ての対象における標的疾患症状の軽減
において有効であるとは限らないかもしれないが、それは、当技術分野で公知のいずれか
の統計的検定、例えばスチューデントｔ検定、カイ２検定、マン（Ｍａｎｎ）およびホイ
ットニー（Ｗｈｉｔｎｅｙ）によるＵ検定、クルスカル－ワリス（Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａ
ｌｌｉｓ）検定（Ｈ検定）、ヨンケーレ－テルプストラ（Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅ－Ｔｅｒ
ｐｓｔｒａ）検定およびウィルコクソン（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ）検定により決定される統計
的に有意な対象数において、標的疾患症状を軽減するべきである。
「治療（処理）」は、それがヒト、獣医学的対象（例えば、イヌ）または研究対象に適
用される場合には、治療的処置、研究および診断適用を意味する。「治療（処理）」は、
それがヒト、獣医学的対象（例えば、イヌ）もしくは研究対象または細胞、組織もしくは
器官に適用される場合には、イヌもしくは他の動物対象、細胞、組織、生理学的区画また
は生理的流体との本発明の抗体または抗原結合性フラグメントの接触を含む。
本明細書中で用いる「イヌ」なる語は、特に示されていない限り、全ての飼いイヌ、カ
ニス・ループス・ファミリアリス（Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｕｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）ま
たはカニス・ファミリアリス（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）を含む。
本明細書中で用いる「ネコ」なる語はネコ（Ｆｅｌｉｄａｅ）科の任意のメンバーを意
味する。この科のメンバーは野生、動物園および家畜メンバー、例えば、ネコ（Ｆｅｌｉ
ｎａｅ）亜科の任意のメンバー、例えばネコ、ライオン、トラ、ピューマ、ジャガー、ヒ
ョウ、ユキヒョウ、パンサー、北米山（Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｍｏｕｎｔａｉ
ｎ）ライオン、チーター、オオヤマネコ、ボブキャット、カラカルまたはそれらの任意の
交雑種を含む。ネコはまた、飼いネコ、純血および／または雑種伴侶ネコ、見世物（ショ
ー）用ネコ、実験用ネコ、クローン化ネコおよび野生または野良ネコを含む。
本明細書中で用いる「イヌフレーム」なる語は、本明細書においてＣＤＲ残基と定めら
れている超可変領域残基を除くイヌ抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を意味する。大
多数の実施形態においては、イヌ化抗体に関しては、天然イヌＣＤＲのアミノ酸配列は両
鎖において対応外来ＣＤＲ（例えば、マウス抗体由来のもの）で置換されている。所望に
より、例えば、後記で例示されているとおり、イヌ抗体における外来ＣＤＲのコンホメー
ションを維持するために、および／またはＦｃ機能を修飾するために、イヌ抗体の重鎖お
よび／または軽鎖は幾つかの外来非ＣＤＲ残基を含有しうる。
イヌＩＬ－４Ｒαは、配列番号２［シグナル配列を含有しないものは配列番号４］のア
ミノ酸配列を含むことが判明している。特定の実施形態においては、イヌＩＬ－４Ｒαは
、配列番号１［シグナル配列を含有しないものは配列番号３］のヌクレオチド配列を含む
核酸によりコードされる。イヌＩＬ－４Ｒαは、例えば非保存領域内に保存的変異を有す
る点で異なりうるが、イヌＩＬ－４Ｒαは、配列番号２［シグナル配列を含有しないもの
は配列番号４］のアミノ酸配列を含むイヌＩＬ－４Ｒαと実質的に同じ生物機能を有する
。
サイトカインＩＬ－４およびＩＬ－１３はヒトおよび動物における種々のアレルギー疾
患（喘息およびアトピー性皮膚炎を含む）の病理発生に関連づけられている。ＩＬ－４受
容体α鎖はこれらのサイトカインからのシグナル伝達のための必須受容体であるため、本
発明は、ＩＬ－４ＲαへのイヌＩＬ－４およびイヌＩＬ－１３の結合を遮断してイヌＩＬ
－４およびＩＬ－１３の両方からのシグナル伝達を抑制するモノクローナル抗体の作製お
よび特徴づけを記載する。したがって、これらの抗体は、本明細書に開示されているとお
り、伴侶動物におけるアトピー性皮膚炎および他の疾患の治療における有用性を有する。
また、イヌＩＬ－４Ｒαの生物学的機能は、例えば、本開示の抗体によって特異的に結合
される細胞外ドメイン内のエピトープを有することでありうる。
個々のイヌＩＬ－４Ｒαアミノ酸配列は、一般に、配列番号４のアミノ酸配列を含むイ
ヌＩＬ－４Ｒαに対して少なくとも９０％同一である。ある場合には、イヌＩＬ－４Ｒα
は、配列番号４のアミノ酸配列を含むイヌＩＬ－４Ｒαに対して少なくとも９５％または
更には少なくとも９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一である。ある実施形態にお
いては、イヌＩＬ－４Ｒαアミノ酸配列は、配列番号４のアミノ酸配列を含むイヌＩＬ－
４Ｒαと比較して１０アミノ酸以下の相違を示す。ある実施形態においては、イヌＩＬ－
４Ｒαアミノ酸配列は、配列番号４のアミノ酸配列を含むイヌＩＬ－４Ｒαと比較して５
アミノ酸以下または更には４、３、２もしくは１アミノ酸以下の相違を示しうる。同一性
の割合（％）は後記のとおりに決定されうる。
「免疫応答」なる語は、例えば、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、および前
記細胞または肝臓により産生される可溶性巨大分子（抗体、サイトカインおよび補体を含
む）の作用であって、癌細胞、病原体に感染した細胞もしくは組織または侵襲病原体に対
する選択的損傷、破壊、または哺乳動物の体（例えば、イヌの体）からのそれらの排除を
もたらす作用を意味する。
抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体
本発明は、イヌＩＬ－４Ｒαに結合する単離された抗体（特にマウス抗イヌＩＬ－４Ｒ
α抗体およびそのイヌ化抗体）またはその抗原結合性フラグメント、およびそのような抗
体またはそのフラグメントの使用を提供する。特定の実施形態においては、イヌＩＬ－４
Ｒαに結合し、イヌＩＬ－４Ｒαの、そのリガンドであるイヌＩＬ－４またはＩＬ－１３
の１以上への結合を遮断することが示されている、マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体からの
マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα ＣＤＲを提供する。これらのＣＤＲをイヌ抗体の修飾イヌフ
レーム内に挿入して、イヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体を得ることが可能である。
本明細書中で用いる「抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体」は、（例えば、マウスまたはウサギの
ような哺乳動物において）イヌＩＬ－４Ｒαに対して産生された、イヌＩＬ－４Ｒαに特
異的に結合する抗体を意味する。「イヌＩＬ－４Ｒα（そして特にイヌＩＬ－４Ｒα）に
特異的に結合する」抗体、または「イヌＩＬ－４Ｒαのアミノ酸配列を含むポリペプチド
に特異的に結合する」抗体は、他の抗原と比較してイヌＩＬ－４Ｒαへの優先的結合を示
す抗体であるが、この特異性は絶対的な結合特異性を要しない。抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体
がイヌＩＬ－４Ｒαに「特異的」だとみなされるのは、その結合が、イヌのサンプルにお
ける他の分子の活性を不適切に妨げることなく、例えば、診断場面における偽陽性または
治療場面における副作用のような望ましくない結果をもたらすことなく、サンプル中のイ
ヌＩＬ－４Ｒαの存在を決定するものである場合、あるいはそれがイヌＩＬ－４Ｒαの活
性を変化させうる場合である。抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体に必要な特異性の度合は該抗体の
意図される用途に左右されうるが、いずれにせよ、意図される目的の用途に対するその適
合性によって定められる。想定される方法の抗体、または抗体の抗原結合性部位に由来す
る結合性化合物は、その抗原またはその変異体もしくは突然変異タンパク質に、いずれか
の他の抗原に対するアフィニティより少なくとも２倍大きな、好ましくは少なくとも１０
倍大きな、より好ましくは少なくとも２０倍大きな、最も好ましくは少なくとも１００倍
大きなアフィニティで結合する。
与えられた抗原配列（この場合は、イヌＩＬ－４Ｒαのアミノ酸配列の部分）を含むポ
リペプチドに抗体が特異的に結合すると言えるのは、それが、イヌＩＬ－４Ｒαのアミノ
酸配列の該部分を含むポリペプチドには結合するが、イヌＩＬ－４Ｒαの該配列のその部
分を欠く他のイヌタンパク質には結合しない場合である。例えば、イヌＩＬ－４Ｒαを含
むポリペプチドに特異的に結合する抗体はイヌＩＬ－４ＲαのＦＬＡＧ（登録商標）タグ
付き形態には結合しうるが、他のＦＬＡＧ（登録商標）タグ付きイヌタンパク質には結合
しない。抗体、または抗体の抗原結合性部位に由来する結合性化合物がそのイヌ抗原また
はその変異体もしくは突然変異タンパク質に「特異的に」結合すると言えるのは、それが
、いずれかの他の被検イヌ抗原に対するそのアフィニティより少なくとも１０倍大きな、
より好ましくは少なくとも２０倍大きな、より一層好ましくは少なくとも１００倍大きな
、そのイヌ抗原またはその変異体もしくは突然変異タンパク質に対するアフィニティを有
する場合である。
本明細書中で用いる「抗体」なる語は、所望の生物活性を示す任意の形態の抗体を意味
する。したがって、それは最も広い意味で用いられ、特に、所望の生物活性を示すモノク
ローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗
体（例えば、二重特異性抗体）、イヌ化抗体、完全イヌ抗体、キメラ抗体およびラクダ化
単一ドメイン抗体を含むが、これらに限定されるものではない。「親抗体」は、意図され
る使用のための抗体の修飾（例えば、イヌ治療用抗体としての使用のための抗体のイヌ化
）の前の、抗原への免疫系の曝露により得られる抗体である。
本明細書中で用いる「抗体フラグメント」または「抗原結合性フラグメント」は、抗体
の抗原結合性フラグメント、すなわち、完全長抗体により結合される抗原に特異的に結合
する能力を保有する抗体フラグメント、例えば、１以上のＣＤＲ領域を保有するフラグメ
ントを意味する。抗原結合性フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２
およびＦｖフラグメント；ジアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子、例えばｓｃＦｖ；
ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体およびナノボディが含まれるが
、これらに限定されるものではない。
「Ｆａｂフラグメント」は１個の軽鎖ならびに１個の重鎖のＣＨ１および可変領域から
構成される。Ｆａｂ分子の重鎖は別の重鎖分子とはジスルフィド結合を形成し得ない。「
Ｆａｂフラグメント」は抗体のパパイン切断の産物でありうる。
「結晶化可能フラグメント」（「Ｆｃ」）領域は、抗体のＣＨ３およびＣＨ２ドメイン
を含む２個の重鎖フラグメントを含有する。それらの２個の重鎖フラグメントは２以上の
ジスルフィド結合により、およびＣＨ３ドメインの疎水性相互作用により結合している。
「Ｆａｂ’フラグメント」は１個の軽鎖、ならびにＶＨドメインおよびＣＨ１ドメイン
を含有する１個の重鎖の部分または断片、ならびにＣＨ１およびＣＨ２ドメイン間の領域
を含有し、その結果、２個のＦａｂ’フラグメントの、２個の重鎖間で鎖間ジスルフィド
結合が形成されてＦ（ａｂ’）２分子を形成しうる。「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は
、２個の軽鎖、ならびにＣＨ１およびＣＨ２ドメイン間の定常領域の部分を含有する２個
の重鎖を含有し、その結果、それらの２個の重鎖の間で鎖間ジスルフィド結合が形成され
る。したがって、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、それらの２個の重鎖の間のジスルフィ
ド結合により連結された２個のＦａｂ’フラグメントから構成される。「Ｆ（ａｂ’）２
フラグメント」は抗体のペプシン切断の産物でありうる。
「Ｆｖ領域」は重鎖および軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠いている
。
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体なる語は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含
む抗体フラグメントであって、これらのドメインが単一ポリペプチド鎖内に存在するもの
を意味する。一般に、Ｆｖポリペプチドは更に、抗原結合のための所望の構造をｓｃＦｖ
が形成することを可能にする、ＶＨおよびＶＬドメイン間のポリペプチドリンカーを含む
［Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＹ ＯＦ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡ
Ｌ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，ｖｏｌ．１１３ ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，
Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４
）；ＷＯ ８８／０１６４９；ならびにＵ．Ｓ．４，９４６，７７８およびＵ．Ｓ．５，
２６０，２０３を参照されたい］。
本明細書中で用いる「標準（ｃａｎｏｎｉｃａｌ、カノニカル）構造」なる語は、抗体
の重鎖および軽鎖の超可変領域のそれぞれが、それらが存在するフレームワーク内で取り
うる局所コンホメーションを意味する。各超可変領域に関しては、少数の標準構造（一般
には、１または２などのような単純な整数により示される）が存在し、これらは、対応超
可変領域のアミノ酸配列［特に、対応する抗イヌＩＬ－４Ｒα可変ドメインに関して後記
に示されているそのフレームワークのアミノ酸配列の環境におけるもの（後記表３を参照
されたい）］から高い精度で予想されうる。これらの標準構造は、与えられたＣＤＲのア
ミノ酸配列の修飾が、その抗原結合相手に結合する能力の保持または喪失をもたらすかど
うかに関して決定的なものでありうる［ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｃａｎｏｎｉｃ
ａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉ
ｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０
１－９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍ
ｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｈｙｐｅｒｖａｒｉｂａｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ，Ｎａｔｕｒｅ
，３４：８７７－８８３（１９８９）；ならびにＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら，Ｓｔａｎｄ
ａｒｄ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕ
ｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３
：９２７－９４８（１９９７）を参照されたい］。
「ドメイン抗体」は、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含有する免疫学的に
機能的な免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの場合には、２以上のＶＨ領域がペ
プチドリンカーにより共有結合されて二価ドメイン抗体を形成する。二価ドメイン抗体の
、２個のＶＨ領域は、同じまたは異なる抗原を標的化しうる。
「二価抗体」は２個の抗原結合部位を含む。幾つかの場合には、それらの２個の結合部
位は同じ抗原特異性を有する。しかし、二価抗体は二重特異性でありうる（後記を参照さ
れたい）。
ある実施形態においては、本明細書におけるモノクローナル抗体はラクダ化単一ドメイ
ン抗体をも含む［例えば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．
Ｓｃｉ．２６：２３０（２００１）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ ２３１：２５（１９９９）；ＷＯ ９４／０４６７８；ＷＯ ９４／２５５
９１；Ｕ．Ｓ．６，００５，０７９を参照されたい］。１つの実施形態においては、本発
明は、単一ドメイン抗体が形成されるように修飾を有する２個のＶＨドメインを含む単一
ドメイン抗体を提供する。
本明細書中で用いる「ジアボディ」なる語は、２個の抗原結合部位を有する小さな抗体
フラグメントを意味し、該フラグメントは、同一ポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメイン（
ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨ）を含む。
同一鎖上で２個のドメイン間のペア形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用するこ
とにより、それらのドメインは別の鎖の相補的ドメインとペア形成することを強要され、
２個の抗原結合部位を生成する［ＥＰ ０ ４０４ ０９７ Ｂ１；ＷＯ ９３／１１１
６１；およびＨｏｌｌｉｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９
０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい］。操作された抗体変異体の総説と
しては、全般的には、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎ
ｏｌ．２３：１１２６－１１３６（２００５）を参照されたい。
典型的には、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは、その活性がモル基準で表
された場合、（親抗体と比較した場合に）そのイヌＩＬ－４Ｒα結合活性の少なくとも１
０％を保有する。好ましくは、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは親抗体とし
てのイヌＩＬ－４Ｒα結合活性の少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、
９５％または１００％またはそれ以上を保有する。また、本発明の抗体または抗原結合性
フラグメントは、その生物活性を実質的に改変しない保存的または非保存的アミノ酸置換
（抗体の「保存的変異体」または「機能保存変異体」と称される）を含みうると意図され
る。
「単離（された）抗体」は精製状態を意味し、そのような状況においては、該分子が他
の生物学的分子、例えば核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、または他の物質、例えば細
胞残渣および増殖培地を実質的に含有しないことを意味する。一般に、「単離（された）
」なる語は、そのような物質の完全な非存在、または水、バッファーもしくは塩の非存在
を意味するものではないが、それらは、本明細書に記載されている結合性化合物の実験的
または治療的使用を実質的に妨げる量で存在してはならない。
本明細書中で用いる「キメラ抗体」は、第１抗体からの可変ドメインと第２抗体からの
定常ドメインとを有する抗体であり、ここで、第１抗体および第２抗体は異なる種からの
ものである［Ｕ．Ｓ．４，８１６，５６７；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－６８５５（１９８４）］。典型的に
は、可変ドメインはげっ歯類のような実験動物からの抗体（「親抗体」）から得られ、定
常ドメイン配列は動物対象（例えば、ヒトまたはイヌ）抗体から得られ、その結果、生じ
るキメラ抗体は、それぞれイヌまたはヒト対象において有害な免疫応答を惹起する可能性
が、親（例えば、げっ歯類）抗体より低いであろう。
本明細書中で用いる「イヌ化抗体」なる語は、イヌ抗体および非イヌ（例えば、マウス
）抗体の両方からの配列を含有する抗体の形態を意味する。一般に、イヌ化抗体は、少な
くとも１つ、より典型的には２つの可変ドメインの実質的に全部を含み、ここで、超可変
ループの全部または実質的に全部は非イヌ免疫グロブリンのもの（例えば、後記で例示さ
れているとおり、６個のマウス抗イヌＩＬ－４Ｒα ＣＤＲを含む）に対応し、フレーム
ワーク（ＦＲ）領域の全部または実質的に全部（そして典型的には残りのフレームの全部
または実質的に全部）はイヌ免疫グロブリン配列のものである。本明細書に例示されてい
るとおり、イヌ化抗体は、イヌフレームまたは修飾イヌフレームと共に、マウス抗イヌＩ
Ｌ－４Ｒα抗体からの３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲの両方を含む。イヌ化抗
体の有効性を更に最適化して、例えば、イヌＩＬ－４Ｒαへのその結合を増強する、なら
びに／またはＩ型および／もしくはＩＩ型ＩＬ－４受容体へのイヌＩＬ－４および／もし
くはイヌＩＬ－１３の結合を遮断するその能力を増強する、本明細書に例示されている１
以上のアミノ酸変化を、修飾イヌフレームは含む。
「完全イヌ抗体」なる語は、イヌ免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味
する。完全イヌ抗体は、マウスにおいて、マウス細胞において、あるいはマウス細胞に由
来するハイブリドーマにおいて産生された場合には、マウス炭水化物鎖を含有しうる。同
様に、「マウス抗体」は、マウス免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。あるい
は、完全イヌ抗体は、ラットにおいて、ラット細胞において、あるいはラット細胞に由来
するハイブリドーマにおいて産生された場合には、ラット炭水化物鎖を含有しうる。同様
に、「ラット抗体」は、ラット免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。
イヌＩｇＧの、４つの公知ＩｇＧ重鎖サブタイプが存在し、それらはＩｇＧ－Ａ、Ｉｇ
Ｇ－Ｂ、ＩｇＧ－ＣおよびＩｇＧ－Ｄと称される。２つの公知軽鎖サブタイプはラムダお
よびカッパと称される。
各軽／重鎖ペアの可変領域は抗体結合部位を形成する。したがって、一般に、無傷抗体
は２つの結合部位を有する。二官能性または二重特異性抗体の場合を除き、それらの２つ
の結合部位は一般に同じである。
典型的には、重鎖および軽鎖の両方の可変ドメインは、比較的保存されたフレームワー
ク領域（ＦＲ）内に位置する、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称される３つの超可変領域
を含む。ＣＤＲは、通常、特定のエピトープへの結合が可能になるように、フレームワー
ク領域により整列されている。一般に、Ｎ末端からＣ末端方向に、軽鎖および重鎖可変ド
メインの両方はＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を
含む。各ドメインへのアミノ酸の帰属は、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら；Ｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．
；５ｔｈ ｅｄ．；ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ
，Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１－７５（１９７８）；Ｋａｂａｔら，Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６（１９７７）；Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｊ．Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）またはＣｈｏｔｈｉａら，Ｎａｔ
ｕｒｅ ３４２：８７８－８８３（１９８９）の定義に基づいている。
本明細書中で用いる「超可変領域」なる語は、抗原結合をもたらす、抗体のアミノ酸残
基を意味する。超可変領域は「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（すなわち、軽鎖可変
ドメイン内のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３ならびに重鎖可変ドメイン内のＣ
ＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３）からのアミノ酸残基を含む［配列により抗体の
ＣＤＲ領域を定める、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏ
ｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈ
ｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａ
ｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照されたい；また、構造により抗体
のＣＤＲ領域を定める、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６
：９０１－９１７（１９８７）を参照されたい］。本明細書中で用いる「フレームワーク
」または「ＦＲ」残基なる語は、ＣＤＲ残基として本明細書中で定められている超可変領
域残基を除く可変ドメイン残基を意味する。
イヌ免疫細胞の結合および活性化に加えて、ＩＬ－４Ｒαに対するイヌまたはイヌ化抗
体は最適には以下の２つの特性を有する：
１．抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）のような
エフェクター機能を欠いている；ならびに
２．プロテインＡクロマトグラフィーに基づく技術のような業界標準技術を用いて大
規模で容易に精製される。
天然に存在するイヌＩｇＧアイソタイプはいずれも、両方の基準を満たしているわけで
はない。例えば、ＩｇＧ－Ｂは、プロテインＡを使用して精製されうるが、高レベルのＡ
ＤＣＣ活性を有する。一方、ＩｇＧ－ＡはプロテインＡに弱く結合するが、望ましくない
ＡＤＣＣ活性を示す。更に、ＩｇＧ－ＤはＡＤＣＣ活性を示さないが（ＩｇＧ－Ｃは相当
なＡＤＣＣ活性を有する）、ＩｇＧ－ＣおよびＩｇＧ－Ｄはいずれも、プロテインＡカラ
ム上で精製できない。本発明がこの問題を克服するための１つの方法は、ＩＬ－４Ｒαに
特異的な突然変異イヌＩｇＧ－Ｂ抗体を得ることによるものであり、そのような抗体はＡ
ＤＣＣのようなエフェクター機能を欠き、業界標準のプロテインＡクロマトグラフィーを
用いて容易に精製されうる。
「相同性」は、最適にアライメント（整列）された２つのポリヌクレオチド配列間また
は２つのポリペプチド配列間の配列類似性を意味する。それらの２つの比較される配列の
両方における位置が同一塩基またはアミノ酸単量体サブユニットにより占拠されている場
合、例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれにおける位置がアデニンにより占拠されている
場合、該分子はその位置において相同である。相同性の割合（％）は、２つの配列により
共有される相同位置の数を、比較される位置の総数で割り算し、１００を掛け算したもの
である。例えば、２つの配列における位置の１０個中６個が、それらの配列が最適にアラ
イメントされた場合に、一致（マッチ）している又は相同である場合、それらの２つの配
列は６０％相同である。一般に、該比較は、最大相同性（％）を与えるように２つの配列
がアライメントされた場合に行われる。
「単離された核酸分子」は、該単離ポリヌクレオチドが天然で見出される場合のポリヌ
クレオチドの全部または一部を伴っておらず、あるいはそれが天然で連結していないポリ
ヌクレオチドに連結している、ゲノム、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡまたは合成由来のＤＮＡまた
はＲＮＡ、あるいはそれらの何らかの組合せを意味する。本開示の目的においては、特定
のヌクレオチド配列を「含む核酸分子」は無傷染色体を含まない、と理解されるべきであ
る。特定されている核酸配列を「含む」単離された核酸分子は、特定されている配列に加
えて、１０個まで又は更には２０個まで又はそれ以上の他のタンパク質またはその一部も
しくは断片のコード配列を含むことが可能であり、あるいは、挙げられている核酸配列の
コード領域の発現を制御する機能的に連結された調節配列を含むことが可能であり、およ
び／あるいは、ベクター配列を含むことが可能である。
本明細書中で用いる「制御配列」なる語は、特定の宿主生物における機能的に連結され
たコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を意味する。原核生物に適した制御配列には、例
えば、プロモーター、所望により、オペレーター配列、およびリボソーム結合部位が含ま
れる。真核細胞はプロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを用いるこ
とが公知である。
核酸が「機能的に連結」されていると言えるのは、それが別の核酸配列に対して機能的
な関係で配置されている場合である。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡがポ
リペプチドのＤＮＡに機能的に連結されていると言えるのは、それが、該ポリペプチドの
分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合であり、プロモーターまたはエンハ
ンサーがコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、それが該配列の転写に影響
を及ぼす場合であり、あるいはリボソーム結合部位がコード配列に機能的に連結されてい
ると言えるのは、翻訳を促進するようにそれが位置している場合である。一般に、「機能
的に連結（されている）」は、連結されているそれらのＤＮＡ配列が連続的であり、分泌
リーダーの場合には、連続的であり、かつ、リーディングフレームが一致していることを
意味する。しかし、エンハンサーは連続的である必要はない。連結は簡便な制限部位にお
ける連結により達成される。そのような部位が存在しない場合には、通常の慣例に従って
合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが使用される。
本明細書中で用いる「細胞」、「細胞系」および「細胞培養」なる表現は互換的に用い
られ、全てのそのような表示は後代を含む。したがって、「形質転換体」および「形質転
換細胞」なる語は、導入（トランスファー）の数には無関係に、初代対象細胞、およびそ
れに由来する培養を含む。また、意図的な又は故意でない突然変異のため、全ての後代は
厳密に同一のＤＮＡ含量を有するわけではないと理解される。元の形質転換細胞において
スクリーニングされたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異体後代も含まれる
。異なる名称が意図される場合、それは文脈から明らかであろう。
本明細書中で用いる「生殖系列配列」は未再構成免疫グロブリンＤＮＡ配列の配列を意
味する。いずれかの適当な未再構成免疫グロブリン配列源が用いられうる。ヒト生殖系列
配列は、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ
ａｎｄ Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌ ａｎｄ Ｓｋｉｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ
ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏ
ｆ Ｈｅａｌｔｈのウェブサイト上でＪＯＩＮＳＯＬＶＥＲ（登録商標）生殖系列データ
ベースから得られうる。マウス生殖系列配列は、例えば、Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉら［Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：Ｄ２５６－Ｄ２６１（２００５）］に記載され
ているとおりに得られうる。
マウス抗イヌＩＬ－４Ｒαおよびイヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体の特性
本発明は、単離されたマウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体およびそのイヌ化抗体を提供し、
また、疾患の治療、例えばイヌにおけるアトピー性皮膚炎の治療における該抗体またはそ
の抗原結合性フラグメントの使用方法を提供する。イヌにおいては、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ
と称される４つのＩｇＧ重鎖が存在する。これらの重鎖は、イヌＩｇＧの、４つの異なる
サブクラスに相当し、それらはＩｇＧＡ、ＩｇＧＢ、ＩｇＧＣおよびＩｇＧＤと称される
。２つの重鎖のそれぞれは１つの可変ドメイン（ＶＨ）、ならびにＣＨ－１、ＣＨ－２お
よびＣＨ－３と称される３つの定常ドメインからなる。ＣＨ－１ドメインは、「ヒンジ」
または「ヒンジ領域」と称されるアミノ酸配列を介してＣＨ－２ドメインに連結されてい
る。
これらの４つの重鎖のＤＮＡおよびアミノ酸配列はＴａｎｇら［Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８０：２５９－２７０（２００１）］により最初に特定
された。これらの重鎖のアミノ酸およびＤＮＡ配列はＧｅｎＢａｎｋデータベースからも
入手可能である。例えば、ＩｇＧＡ重鎖のアミノ酸配列はアクセッション番号ＡＡＬ３５
３０１．１を有し、ＩｇＧＢはアクセッション番号ＡＡＬ３５３０２．１を有し、ＩｇＧ
Ｃはアクセッション番号ＡＡＬ３５３０３．１を有し、ＩｇＧＤはアクセッション番号Ａ
ＡＬ３５３０４．１を有する。イヌ抗体はまた、２つのタイプの軽鎖、すなわち、カッパ
およびラムダを含有する。これらの軽鎖のＤＮＡおよびアミノ酸配列はＧｅｎＢａｎｋデ
ータベースから得られうる。例えば、カッパ軽鎖アミノ酸配列はアクセッション番号ＡＢ
Ｙ ５７２８９．１を有し、ラムダ軽鎖はアクセッション番号ＡＢＹ ５５５６９．１を
有する。
本発明においては、４つのイヌＩｇＧ Ｆｃフラグメントのそれぞれのアミノ酸配列は
、Ｔａｎｇら（前掲）により決定された、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインの特定された境界
に基づく。イヌＩＬ－４Ｒαに結合するイヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体には、マウ
ス抗イヌＩＬ－４Ｒα ＣＤＲと共に、イヌＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－ＢおよびＩｇＧ－Ｄ重
鎖ならびに／またはイヌカッパ軽鎖を含む抗体が含まれるが、これらに限定されるもので
はない。したがって、本発明は、イヌＩＬ－４Ｒαに結合し、Ｉ型またはＩＩ型ＩＬ－４
受容体へのイヌＩＬ－４およびイヌＩＬ－１３の結合を遮断する単離されたマウス抗イヌ
ＩＬ－４Ｒαおよび／またはイヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体またはそれらの抗原結
合性フラグメントを提供する。
本発明は更に、イヌ化抗体を与えるように対応軽鎖と釣り合いうる完全長イヌ重鎖を提
供する。したがって、本発明は更に、イヌ化マウス抗イヌ抗原抗体（単離されたイヌ化マ
ウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体を含む）を提供し、また、疾患の治療、例えばイヌにおける
アトピー性皮膚炎の治療における該抗体またはその抗原結合性フラグメントの使用方法を
提供する。
本発明はまた、イヌ結晶化可能フラグメント領域（ｃＦｃ領域）を含むイヌ化マウス抗
イヌＩＬ－４Ｒα抗体を提供し、ここで、ｃＦｃは、１以上のエフェクター機能が増強し
、低減し、または消失するよう遺伝的に修飾されている。本発明の１つの態様においては
、遺伝的に修飾されたｃＦｃは１以上のエフェクター機能を低減し、または消失させる。
本発明のもう１つの態様においては、遺伝的に修飾されたｃＦｃは１以上のエフェクター
機能を増強する。ある実施形態においては、遺伝的に修飾されたｃＦｃ領域は、遺伝的に
修飾されたイヌＩｇＧＢ Ｆｃ領域である。もう１つのそのような実施形態においては、
遺伝的に修飾されたｃＦｃ領域は、遺伝的に修飾されたイヌＩｇＧＣ Ｆｃ領域である。
特定の実施形態においては、エフェクター機能は、増強、低減または消失する抗体依存性
細胞傷害（ＡＤＣＣ）である。もう１つの実施形態においては、エフェクター機能は、増
強、低減または消失する補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）である。更にもう１つの実施形態
においては、ｃＦｃ領域は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣの両方を増強し、低減し、または消失
させるために遺伝的に修飾されている。
エフェクター機能を欠くイヌＩｇＧの変異体を作製するために、幾つかの突然変異体イ
ヌＩｇＧＢ重鎖を作製した。これらの変異体は、重鎖アミノ酸配列のＦｃ部分における以
下の単一の又は組合された置換の１以上を含みうる：Ｐ４Ａ、Ｄ３１Ａ、Ｎ６３Ａ、Ｇ６
４Ｐ、Ｔ６５Ａ、Ａ９３ＧおよびＰ９５Ａ。変異体重鎖（すなわち、そのようなアミノ酸
置換を含有するもの）を発現プラスミド内にクローニングし、軽鎖をコードする遺伝子を
含有するプラスミドと共にＨＥＫ２９３細胞内にトランスフェクトした。ＨＥＫ２９３細
胞から発現され精製された無傷抗体をＦｃγＲＩおよびＣ１ｑへの結合に関して評価して
、免疫エフェクター機能の媒介に関するそれらの可能性を評価した［２０１４年７月３０
日付け出願の米国仮特許出願第６２／０３０，８１２号および２０１４年１２月１６日付
け出願の米国仮特許出願第６２／０９２，４９６号（それらの両方の全内容を参照により
本明細書に組み入れることとする）を参照されたい］。
本発明はまた、対応天然ＩｇＧＤヒンジ領域の代わりに以下のものからのヒンジ領域を
含む修飾イヌＩｇＧＤを提供する。
ＩｇＧＡ： ＦＮＥＣＲＣＴＤＴＰＰＣＰＶＰＥＰ（配列番号１０１）；
ＩｇＧＢ： ＰＫＲＥＮＧＲＶＰＲＰＰＤＣＰＫＣＰＡＰＥＭ（配列番号１０２）；
または
ＩｇＧＣ： ＡＫＥＣＥＣＫＣＮＣＮＮＣＰＣＰＧＣＧＬ（配列番号１０３）。
あるいは、ＩｇＧＤヒンジ領域は、セリン残基をプロリン残基で置換することにより遺
伝的に修飾されうる：すなわち、ＰＫＥＳＴＣＫＣＩＰＰＣＰＶＰＥＳ（配列番号１０４
）（天然に存在するセリン残基は、下線および太字で示されているプロリン残基（Ｐ）に
より置換されている）。そのような修飾は、ｆａｂアーム交換を欠くイヌＩｇＧＤを与え
うる。修飾イヌＩｇＧＤは、組換えＤＮＡ技術の標準的な方法［例えば、Ｍａｎｉａｔｉ
ｓら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
（１９８２）］を用いて構築されうる。これらの変異体を構築するために、イヌＩｇＧＤ
のアミノ酸配列をコードする核酸は、それが修飾ＩｇＧＤをコードするように修飾されう
る。該修飾核酸配列はタンパク質発現のために発現プラスミド内にクローニングされる。
イヌＩＬ－４Ｒαに結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントは、本明細書に記
載されているマウス抗イヌ抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）の１、２、３、４、５または
６個を含みうる。そのような１、２、３、４、５または６個のＣＤＲは、独立して、後記
のもののＣＤＲ配列から選択されうる。もう１つの実施形態においては、イヌＩＬ－４Ｒ
αに結合する単離された抗体またはその抗原結合性フラグメントは、マウス軽鎖ＣＤＲ－
１、ＣＤＲ－２および／またはＣＤＲ－３を含むイヌ抗体カッパ軽鎖と、マウス重鎖ＣＤ
Ｒ－１、ＣＤＲ－２および／またはＣＤＲ－３を含むイヌ抗体重鎖ＩｇＧとを含む。
他の実施形態においては、本発明は、配列番号４７、４８、４９、５０、５１、５２、
５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６
６、６７、６８、６９、７０、７１、７２および／または７３のアミノ酸配列に対して少
なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を含む１～
６個の異なるＣＤＲを含むイヌ抗体カッパ軽鎖と、配列番号７４、７５、７６、７７、７
８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８７、８８、８９、９０、９１、９２
、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９および／または１００のアミノ酸配列に対
して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を含
む１～６個の異なるＣＤＲを含むイヌ抗体重鎖ＩｇＧとを有する一方で所望の結合および
機能特性を尚も示す、ＩＬ－４Ｒαに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグ
メントを提供する。もう１つの実施形態においては、本発明の抗体または抗原結合性フラ
グメントは、所望の結合および機能特性を尚も示す一方で０、１、２、３、４または５個
の保存的または非保存的アミノ酸置換を含有する前記ＣＤＲアミノ酸配列の１以上を有す
るカッパ軽鎖とのＩｇＧ重鎖配列の組合せを含むイヌフレームを含む。
配列同一性は、２つのポリペプチドのアミノ酸が、それらの２つの配列が最適に整列（
アライメント）された場合に、同等位置で同じである度合を意味する。１つのアミノ酸配
列が第２のアミノ酸配列に対して１００％「同一」であると本明細書中で用いているのは
、両方の配列のアミノ酸残基が同一である場合である。したがって、アミノ酸配列が第２
のアミノ酸配列に対して５０％「同一」であるのは、それらのアミノ酸配列のアミノ酸残
基の５０％が同一である場合である。配列比較は、与えられたタンパク質（例えば、比較
されているタンパク質またはポリペプチドの一部）に含まれるアミノ酸残基の連続的ブロ
ックにわたって行われる。特定の実施形態においては、選択された欠失または挿入が考慮
され、これは、それがなければ２つのアミノ酸配列の間の対応を改変しうるものである。
配列類似性は同一残基および非同一の生化学的に関連したアミノ酸を含む。類似特性を
共有し、交換可能でありうる生化学的に関連したアミノ酸が検討される。
「保存的に修飾された変異体」または「保存的置換」は、タンパク質におけるアミノ酸
が、類似特性（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、バックボーンコンホメーシ
ョンおよび剛性など）を有する他のアミノ酸で置換されることを意味し、ここで、該変化
は、該タンパク質の生物活性を改変することなく頻繁に施されうる。一般に、ポリペプチ
ドの非必須領域における単一アミノ酸置換は生物活性を実質的に変化させない、と当業者
は認識している［例えば、Ｗａｔｓｏｎら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ
ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，
ｐ．２２４（４ｔｈ Ｅｄ．；１９８７）を参照されたい］。また、構造的または機能的
に類似したアミノ酸の置換は、生物活性を損なう可能性が低い。典型的な保存的置換を以
下の表１に示す。
Figure 0007371070000001
Figure 0007371070000002
本発明の抗体の機能保存的変異体も本発明に含まれる。本明細書中で用いる「機能保存
的変異体」は、抗原アフィニティおよび／または特異性のような所望の特性が変化するこ
となく１以上のアミノ酸残基が変化している抗体またはフラグメントを意味する。そのよ
うな変異体は、類似特性を有するアミノ酸でのアミノ酸の置換、例えば、前記表１の保存
的アミノ酸置換を含むが、これらに限定されるものではない。
核酸
本発明は更に、本明細書に開示されているマウス抗イヌＩＬ－４Ｒαおよび／またはイ
ヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体ならびにそれらの抗原結合性フラグメントの免疫グロ
ブリン鎖をコードする核酸を含む（後記実施例を参照されたい）。
また、ＢＬＡＳＴアルゴリズム（この場合、該アルゴリズムのパラメーターは、それぞ
れの参照配列の全長にわたってそれぞれの配列の間で最大マッチを与えるように選択され
る）により比較を行った場合に、本発明で提供されるＣＤＲおよび抗体のアミノ酸配列に
対して少なくとも約７０％同一である、好ましくは少なくとも約８０％同一である、より
好ましくは少なくとも約９０％同一である、最も好ましくは少なくとも約９５％（例えば
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％）同一であるアミノ酸配列を含む
免疫グロブリンポリペプチドをコードする核酸も本発明に含まれる。本発明は更に、ＢＬ
ＡＳＴアルゴリズム（この場合、該アルゴリズムのパラメーターは、それぞれの参照配列
の全長にわたってそれぞれの配列の間で最大マッチを与えるように選択される）により比
較を行った場合に、参照アミノ酸配列のいずれかに対して少なくとも約７０％類似してい
る、好ましくは少なくとも約８０％類似している、より好ましくは少なくとも約９０％類
似している、最も好ましくは少なくとも約９５％（例えば、９５％、９６％、９７％、９
８％、９９％、１００％）類似しているアミノ酸配列を含む免疫グロブリンポリペプチド
をコードする核酸を提供する。
本明細書中で用いるヌクレオチドおよびアミノ酸配列の同一性（％）は、Ｃ，ＭａｃＶ
ｅｃｔｏｒ（ＭａｃＶｅｃｔｏｒ，Ｉｎｃ．Ｃａｒｙ，ＮＣ ２７５１９）、Ｖｅｃｔｏ
ｒ ＮＴＩ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ．ＭＤ）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｇｒｏｕｐ ＰＬＣ（１９９６）およびＣｌｕｓｔａｌ Ｗアルゴリズムをアライメント
デフォルトパラメーターおよび同一性に関するデフォルトパラメーターと共に用いて決定
されうる。これらの商業的に入手可能なプログラムは、同一または類似デフォルトパラメ
ーターを用いて配列類似性を決定するためにも用いられうる。あるいは、例えば、デフォ
ルトパラメーターを用いるＧＣＧ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，
Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ＧＣＧ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉ
ｏｎ ７，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）パイルアッププログラムを使用して、
デフォルトフィルター条件下のＡｄｖａｎｃｅｄ Ｂｌａｓｔ検索が用いられうる。
以下の参考文献は、配列分析にしばしば使用されるＢＬＡＳＴアルゴリズムに関するも
のである：ＢＬＡＳＴアルゴリズム：Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉ
ｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）；Ｇｉｓｈ，Ｗ．ら，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎ
ｅｔ．３：２６６－２７２（１９９３）；Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ
ｙｍｏｌ．２６６：１３１－１４１（１９９６）；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら，Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２（１９９７）；Ｚｈａｎｇ
，Ｊ．ら，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．７：６４９－６５６（１９９７）；Ｗｏｏｔｔｏｎ，
Ｊ．Ｃ．ら，Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．１７：１４９－１６３（１９９３）；Ｈａｎｃｏ
ｃｋ，Ｊ．Ｍ．ら，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：６７－７０（１９９
４）；アライメント・スコアリング・システム：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．ら，“Ａ ｍ
ｏｄｅｌ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ”
，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
，ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．３．Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編），ｐｐ．３４５－３５２
（１９７８）；Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ
，ＤＣ；Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｍ．ら，“Ｍａｔｒｉｃｅｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉ
ｎｇ ｄｉｓｔａｎｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ”，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．３（
１９７８），Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編），ｐｐ．３５３－３５８（１９７８），Ｎａ
ｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ；Ａｌｔｓｃ
ｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９：５５５－５６５（１９９１）；Ｓｔ
ａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．ら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３：６６－７０（１９９１）；Ｈｅｎｉｋｏｆ
ｆ，Ｓ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５－１０
９１９（１９９２）；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３６：２
９０－３００（１９９３）；アライメント統計学：Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４－２２６８（１９９０）；Ｋａｒｌ
ｉｎ，Ｓ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５８
７７（１９９３）；Ｄｅｍｂｏ，Ａ．ら，Ａｎｎ．Ｐｒｏｂ．２２：２０２２－２０３９
（１９９４）；およびＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．“Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓ
ｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｉｓｔ
ｉｎｃｔ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ”，Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｃ
ｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（
Ｓ．Ｓｕｈａｉ編），ｐｐ．１－１４，Ｐｌｅｎｕｍ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９７）。
本発明はまた、本発明の単離された核酸を含む発現ベクターを提供し、ここで、該核酸
は、宿主細胞が該ベクターでトランスフェクトされた場合に宿主細胞により認識される制
御配列に機能的に連結されている。また、本発明の発現ベクターを含む宿主細胞を提供す
る。また、抗体または抗原結合性フラグメントをコードする発現ベクターを含有する宿主
細胞を培地内で培養し、宿主細胞または培地から抗原またはその抗原結合性フラグメント
を単離することを含む、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメン
トの製造方法を提供する。
エピトープ結合および結合アフィニティ
本発明は更に、マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体と同じ、イヌＩＬ－４Ｒαのエピトープ
のアミノ酸残基に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。特定の実
施形態においては、該マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体またはその抗原結合性フラグメント
はＩ型および／またはＩＩ型ＩＬ－４受容体へのイヌＩＬ－４およびイヌＩＬ－１３の結
合を抑制／遮断しうる。
イヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体は、当分野で公知の方法により組換え的に製造さ
れうる。本明細書に開示されている抗体またはフラグメントの発現のための宿主として利
用可能な哺乳類細胞系は当技術分野でよく知られており、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多数の不死化細胞系
を包含する。これらは、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ
、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ
）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ＨＥＫ－
２９３細胞および多数の他の細胞系を包含する。哺乳類宿主細胞はヒト、マウス、ラット
、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマおよびハムスター細胞を包含する。特に好ましい
細胞系は、どの細胞系が高い発現レベルを有するのかを決定することにより選択される。
使用されうる他の細胞系としては、昆虫細胞系、例えばＳｆ９細胞、両生類細胞、細菌細
胞、植物細胞および真菌細胞が挙げられる。重鎖またはその抗原結合性部分もしくはフラ
グメント、軽鎖および／またはその抗原結合性フラグメントをコードする組換え発現ベク
ターを哺乳類宿主細胞内に導入する場合には、該宿主細胞における該抗体の発現（または
より好ましくは、該宿主細胞が培養される培地内への該抗体の分泌）を可能にするのに十
分な期間にわたって該宿主細胞を培養することにより、該抗体が産生される。
抗体は、標準的なタンパク質精製方法を用いて、培地から回収されうる。更に、生産細
胞系からの本発明の抗体（またはそれからの他の部分）の発現は、幾つかの公知技術を用
いて増強されうる。例えば、グルタミンシンテターゼ遺伝子発現系（ＧＳ系）は、一定条
件下で発現を増強するための一般的アプローチである。ＧＳ系は欧州特許第０ ２１６
８４６号、第０ ２５６ ０５５号および第０ ３２３ ９９７号ならびに欧州特許出願
第８９３０３９６４．４号において全体的または部分的に考察されている。
一般に、個々の細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質
は、該細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質に特徴的な
グリコシル化パターンを有するであろう。したがって、抗体の個々のグリコシル化パター
ンは、該抗体を製造するために使用される個々の細胞系またはトランスジェニック動物に
左右されるであろう。しかし、本発明で提供される核酸分子によりコードされる、または
本発明で提供されるアミノ酸を含む全ての抗体は、該抗体が有しうるグリコシル化パター
ンには無関係に、本発明を構成する。同様に、特定の実施形態においては、非フコシル化
Ｎ－グリカンのみを含むグリコシル化パターンを有する抗体が有利でありうる。なぜなら
、これらの抗体は、インビトロおよびインビボの両方において、それらのフコシル化対応
物より高い効力を典型的に示すことが示されているからである［例えば、Ｓｈｉｎｋａｗ
ａら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：３４６６－３４７３（２００３）；米国特許第
６，９４６，２９２号および第７，２１４，７７５号を参照されたい］。
本発明は更に、本明細書に開示されているマウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体の抗体フラグ
メントを含む。該抗体フラグメントにはＦ（ａｂ）２フラグメントが含まれ、これは例え
ばペプシンによるＩｇＧの酵素的切断により製造されうる。Ｆａｂフラグメントは、例え
ば、ジチオトレイトールまたはメルカプトエチルアミンでのＦ（ａｂ）２の還元により製
造されうる。Ｆａｂフラグメントは、ジスルフィド架橋によりＶＨ－ＣＨ１鎖に連結され
たＶＬ－ＣＬ鎖である。Ｆ（ａｂ）２フラグメントは、今度は２つのジスルフィド架橋に
より連結された２つのＦａｂフラグメントである。Ｆ（ａｂ）２分子のＦａｂ部分は、ジ
スルフィド架橋が間に位置しているＦｃ領域の部分を含む。ＦｖフラグメントはＶＬまた
はＶＨ領域である。
１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、重鎖定常領域、
例えばイヌ定常領域、例えばＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－ＣおよびＩｇＧ－Ｄイヌ
重鎖定常領域またはそれらの変異体を含む。もう１つの実施形態においては、該抗体また
は抗原結合性フラグメントは、軽鎖定常領域、例えばイヌ軽鎖定常領域、例えばラムダま
たはカッパイヌ軽鎖領域またはそれらの変異体を含む。限定的ではない例示として挙げる
と、イヌ重鎖定常領域はＩｇＧ－Ｂ由来であることが可能であり、イヌ軽鎖定常領域はカ
ッパ由来であることが可能である。
抗体の改変操作
本発明のイヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体は、例えば該抗体の特性を改善するため
に、親（すなわち、イヌ）モノクローナル抗体の可変ドメイン内のイヌフレームワークお
よび／またはイヌフレーム残基に対する修飾を含むように操作されうる。
実験用途および診断用途
本発明のマウス抗イヌＩＬ－４Ｒαおよび／またはイヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗
体またはそれらの抗原結合性フラグメントは、イヌＩＬ－４Ｒαタンパク質に関する診断
アッセイ、例えば、アトピー性皮膚炎に関連した及び／又はそれに関するその発現の検出
においても有用でありうる。
例えば、そのような方法は以下の工程を含む。
（ａ）マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体またはその抗原結合性フラグメントで基体（例
えば、マイクロタイタープレートウェル、例えばプラスチックプレートの表面）をコーテ
ィングすること；
（ｂ）イヌＩＬ－４Ｒαの存在に関して試験されるべきサンプルを該基体に適用する
こと；
（ｃ）該プレートを洗浄して、該サンプル中の未結合物質を除去すること；
（ｄ）ＩＬ－４Ｒα抗原に同様に特異的である検出可能な様態で標識された抗体（例
えば、酵素結合抗体）を適用すること；
（ｅ）該基体を洗浄して、未結合標識抗体を除去すること；
（ｆ）標識抗体が酵素結合体である場合には、蛍光シグナルへと酵素により変換され
る化学物質を適用すること；および
（ｇ）標識抗体の存在を検出すること。
もう１つの実施形態においては、該標識抗体はペルオキシダーゼで標識され、これはＡ
ＢＴＳ［例えば、２，２’－アジノ－ビス（３－エチルベンゾチアゾリン－６－スルホン
酸）］または３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジンと反応して、検出可能な変色
をもたらす。あるいは、該標識抗体は、検出可能な放射性同位体（例えば、３Ｈ）で標識
され、これは、シンチラントの存在下、シンチレーションカウンターにより検出されうる
。本発明のマウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体はウエスタンブロットまたは免疫タンパク質ブ
ロット法において使用されうる。
そのような方法は本発明の一部を構成し、例えば以下のことを含む。
（ｉ）結合イヌＩＬ－４Ｒαまたはそのその断片の存在に関して試験すべき膜または
他の固体基体を本発明のマウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体またはその抗原結合性フラグメン
トと接触させること。そのような膜は、非変性ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル電気泳
動）ゲルまたはＳＤＳ－ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気
泳動）ゲルにおいてイヌＩＬ－４Ｒαの存在に関して試験すべきタンパク質が（例えば、
該ゲルにおける電気泳動分離の後で）トランスファー（転移）されたニトロセルロースま
たはビニル系［例えば、ポリビニリデンフルオリド（ＰＶＤＦ）］膜の形態をとりうる。
該膜をマウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体またはその抗原結合性フラグメントと接触させる前
に、該膜を、所望により、該膜上の非特異的タンパク質結合部位に結合させるために、例
えば脱脂乾燥乳などでブロッキングしてもよい。
（ｉｉ）該膜を１回以上洗浄して、未結合マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体またはその
抗原結合性フラグメントおよび他の未結合物質を除去すること；ならびに
（ｉｉｉ）結合したマウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体またはその抗原結合性フラグメン
トを検出すること。
結合抗体または抗原結合性フラグメントの検出は、検出可能な様態で標識された二次抗
体（抗免疫グロブリン抗体）に該抗体または抗原結合性フラグメントを結合させ、該二次
抗体標識の存在を検出することによるものでありうる。
本明細書に開示されているマウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体およびその抗原結合性フラグ
メントは免疫組織化学的方法にも使用されうる。そのような方法は本発明の一部を構成し
、例えば、（１）イヌＩＬ－４Ｒαの存在に関して試験すべき細胞を本発明のマウス抗イ
ヌＩＬ－４Ｒα抗体およびその抗原結合性フラグメントと接触させ、（２）該細胞上また
は該細胞内の該抗体またはフラグメントを検出することを含む。該抗体または抗原結合性
フラグメント自体が検出可能な様態で標識されている場合、それは直接的に検出されうる
。あるいは、該抗体または抗原結合性フラグメントは、検出可能な様態で標識された、検
出される二次抗体に結合されうる。
イメージング技術には、ＳＰＥＣＴイメージング（単一光子放出型コンピュータ断層撮
影）またはＰＥＴ（陽電子放出断層撮影）が含まれる。標識には、例えばヨウ素－１２３
（１２３Ｉ）およびテクネチウム－９９ｍ（９９ｍＴｃ）（例えば、ＳＰＥＣＴイメージ
ングと組合されるもの）、または１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏまたは１８Ｆ（例えば、ＰＥＴ
イメージングと組合されるもの）、またはインジウム－１１１が含まれる［例えば、Ｇｏ
ｒｄｏｎら，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．６７：３８５
－４４０（２００５）を参照されたい］。
交差遮断性抗体
更に、本発明の抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体およびその抗原結合性フラグメントには、本明
細書に記載されている抗体およびフラグメントが結合するのと同じ、イヌＩＬ－４Ｒαに
おけるエピトープに結合する任意の抗体またはその抗原結合性フラグメント、ならびにイ
ヌＩＬ－４Ｒα結合に関して、本明細書に記載の抗体またはフラグメントを（部分的また
は完全に）交差遮断し、または本明細書に記載の抗体またはフラグメントによって（部分
的または完全に）交差遮断される任意の抗体または抗原結合性フラグメント、ならびにそ
れらの任意の変異体が含まれる。
本明細書に記載されている交差遮断性抗体およびその抗原結合性フラグメントは、（後
記実施例５に記載されているＣＤＲに基づく）本明細書に開示されている抗体、すなわち
、１Ａ３、１Ａ９、１Ｂ１２、１０Ｃ１２、１０Ｆ２、１０Ｅ１０、１０Ｇ８および／ま
たは１１Ｄ３、あるいはより詳細には１１Ｂ６および／または６Ｃ１２、ならびにより一
層詳細には４Ｄ８、４Ｈ３、２Ｅ２および／または１１Ｈ２と交差競合するそれらの能力
に基づいて、標準的な結合アッセイ（例えば、ＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）、後記で例示
されているＥＬＩＳＡ、またはフローサイトメトリー）において特定されうる。例えば、
標準的なＥＬＩＳＡアッセイが利用可能であり、この場合、組換えイヌＩＬ－４Ｒαタン
パク質をプレート上に固定化し、該抗体の１つを蛍光標識し、該標識抗体の結合と競合す
る非標識抗体の能力を評価する。追加的または代替的に、抗体が交差競合する能力を評価
するために、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）が用いられうる。例えば１Ａ３、１Ａ９、１Ｂ
１２、１０Ｃ１２、１０Ｆ２、１０Ｅ１０、１０Ｇ８および／または１１Ｄ３、あるいは
より詳細には１１Ｂ６および／または６Ｃ１２、ならびにより一層詳細には４Ｄ８、４Ｈ
３、２Ｅ２および／または１１Ｈ２の、イヌＩＬ－４Ｒαへの結合を試験抗体が抑制しう
ることは、該試験抗体が、１Ａ３、１Ａ９、１Ｂ１２、１０Ｃ１２、１０Ｆ２、１０Ｅ１
０、１０Ｇ８、１１Ｄ３、１１Ｂ６、６Ｃ１２、４Ｄ８、４Ｈ３、２Ｅ２および／または
１１Ｈ２と、イヌＩＬ－４Ｒαへの結合に関して競合可能であり、したがって、場合によ
っては、１Ａ３、１Ａ９、１Ｂ１２、１０Ｃ１２、１０Ｆ２、１０Ｅ１０、１０Ｇ８、１
１Ｄ３、１１Ｂ６、６Ｃ１２、４Ｄ８、４Ｈ３、２Ｅ２および／または１１Ｈ２と同じ、
イヌＩＬ－４Ｒα上のエピトープに結合しうることを示す。前記のとおり、本発明の抗イ
ヌＩＬ－４Ｒα抗体またはフラグメントのいずれかと同じエピトープに結合する抗体およ
びフラグメントも本発明の一部を構成する。
医薬組成物および投与
イヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体またはその抗原結合性フラグメントの医薬組成物
または無菌組成物を製造するためには、それを医薬上許容される担体または賦形剤と混合
する［例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ ａｎｄ Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａ
ｒｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８
４）を参照されたい］。
治療用および診断用物質の製剤は、例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水性の溶液または
懸濁液の形態で、許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより製造されう
る［例えば、Ｈａｒｄｍａｎら，（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’
ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔ
ｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００
）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐ
ｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅ
ｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら，（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃ
ｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅ
ｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら，（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋ
ｋｅｒ，ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ
Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい］。１つの実施形態においては、本発明の抗ＩＬ
－４Ｒα抗体を酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ５～６）中で適当な濃度に希釈し、ＮａＣｌま
たはスクロースを等張化のために加える。安定性を増強するために、追加的物質、例えば
ポリソルベート２０またはポリソルベート８０が加えられうる。
単独で又は別の治療剤と組合せて投与される該抗体組成物の毒性および治療効力は、例
えばＬＤ５０（集団の５０％に致死的である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％におい
て治療的に有効である用量）を決定するための、細胞培養または実験動物における標準的
な薬学的手法により決定されうる。毒性効果と治療効果との用量比は治療係数（ＬＤ５０
／ＥＤ５０）である。特定の態様においては、高い治療係数を示す抗体が望ましい。これ
らの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、イヌにおける使用のための
投与量の範囲の決定において使用されうる。そのような化合物の投与量は、好ましくは、
毒性をほとんど又は全く伴わないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。該投与量は、
使用される剤形および投与経路に応じて、この範囲内で変動しうる。
投与様式は様々でありうる。適当な投与経路には、経口、直腸、経粘膜、腸、非経口；
筋肉内、皮下、皮内、髄内、鞘内、直接心室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、眼内、吸入、
吹送、局所、皮膚、経皮または動脈内が含まれる。特定の実施形態においては、マウス抗
イヌＩＬ－４Ｒα抗体またはその抗原結合性フラグメントは注射のような侵襲的経路によ
り投与されうる。本発明の他の実施形態においては、マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体もし
くはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物は静脈内、皮下、筋肉内、動脈内
に、または吸入、エアゾール運搬により投与される。非侵襲的経路（例えば、経口、例え
ば、丸剤、カプセル剤または錠剤）も本発明の範囲内である。
組成物は、当技術分野で公知の医学的装置を使用して投与されうる。例えば、本発明の
医薬組成物は皮下注射針（例えば、予め充填されたシリンジまたは自動注入装置を含む）
での注射により投与されうる。本明細書に開示されている医薬組成物は、例えば米国特許
第６，６２０，１３５号、第６，０９６，００２号、第５，３９９，１６３号、第５，３
８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８
８０号、第４，７９０，８２４号または第４，５９６，５５６号に開示されている装置の
ような無針（ｎｅｅｄｌｅｌｅｓｓ）皮下注射装置によっても投与されうる。
本明細書に開示されている医薬組成物は注入によっても投与されうる。医薬組成物を投
与するための良く知られたインプラントおよびモジュールの例には、米国特許第４，４８
７，６０３号（これは、制御された速度で医薬を分注するための移植可能な微量注入ポン
プを開示している）、米国特許第４，４４７，２３３号（これは、正確な注入速度で医薬
を運搬するための医薬注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２２４号（
これは、連続的薬物運搬のための可変流量移植可能注入装置を開示している）、米国特許
第４，４３９，１９６号（これは、マルチチャンバ・コンパートメントを有する浸透性薬
物運搬系を開示している）に開示されているものが含まれる。多数の他のそのようなイン
プラント、運搬系およびモジュールは当業者によく知られている。
あるいは、マウス抗イヌまたはイヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体を全身的ではなく
局所的に、例えば、しばしば、デポー剤または徐放製剤により、免疫病理学により特徴づ
けられる関節炎関節または病原体誘発性病変内に該抗体を直接注射することにより投与す
ることが可能である。更に、標的化薬物運搬系により、例えば、免疫病理学的に特徴づけ
られる関節炎関節または病原体誘発性病変を標的化する組織特異的抗体で被覆されたリポ
ソーム中で、該抗体を投与することが可能である。該リポソームは罹患組織に標的化され
、罹患組織により選択的に取り込まれるであろう。
投与は、治療用抗体の血清または組織代謝回転速度、症状の程度、治療用抗体の免疫原
性、および生物学的マトリックスにおける標的細胞の接近可能性を含む幾つかの要因に左
右される。好ましくは、投与レジメンは、標的病態における改善をもたらすのに十分な治
療用抗体を投与する一方で、同時に、望ましくない副作用を最小にする。したがって、運
搬される生物学的物質の量は、部分的には、個々の治療用抗体、および治療される状態の
重症度に左右される。治療用抗体の適当な用量を選択する際の指針が利用可能である［例
えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉ
ｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ（１９９６）；Ｋｒｅ
ｓｉｎａ（編）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａ
ｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１
９９１）；Ｂａｃｈ（編）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅ
ｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒ
ｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９９３）；Ｂａｅｒｔら，Ｎｅｗ
Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１－６０８（２００３）；Ｍｉｌｇｒｏｍら，Ｎｅ
ｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３（１９９９）；Ｓｌａｍｏｎら
，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２（２００１）；Ｂｅｎｉａｍ
ｉｎｏｖｉｔｚら，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９（２０００
）；Ｇｈｏｓｈら，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２（２００３）；
Ｌｉｐｓｋｙら，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２（２００
０）を参照されたい］。
適当な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野で知られている又
は疑われているパラメータまたは因子を用いて、獣医によりなされる。一般に、用量は、
最適用量より幾分少ない量から開始し、ついで、負の副作用と比較して所望または最適効
果が得られるまで、少しずつ増量する。重要な診断尺度には、例えば炎症の症状の尺度、
または産生される炎症性サイトカインのレベルが含まれる。
本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントは、連続的注入により、
または例えば、毎日、週１～７日、毎週、隔週、毎月、隔月、年４回、年２回、年１回な
どの間隔での投与により投与されうる。投与は、例えば、静脈内、皮下、局所、経口、鼻
腔内、直腸、筋肉内、脳内、脊髄内に、または吸入により行われうる。毎週の全用量は、
一般に、少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ体重、より一般には少なくとも０．２μｇ／ｋｇ
、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ
／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２
５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ以上である［例えば、Ｙａｎｇら，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ
．Ｍｅｄ．３４９：４２７－４３４（２００３）；Ｈｅｒｏｌｄら，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．
Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２－１６９８（２００２）；Ｌｉｕら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．
Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１－４５６（１９９９）；Ｐｏｒｔｉｅｌ
ｊｉら，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３－１４４
（２００３）を参照されたい］。また、対象の血清中のイヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα
抗体の予め決められた目標濃度、例えば０．１、０．３、１、３、１０、３０、１００、
３００μｇ／ｍｌ以上を達成するよう、投与は行われうる。他の実施形態においては、本
発明のイヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体は皮下または静脈内に、毎週、隔週、「４週
間ごと」、毎月、隔月または年４回で、１０、２０、５０、８０、１００、２００、５０
０、１０００または２５００ｍｇ／対象で投与される。
また、Ｉ型およびＩＩ型ＩＬ－４受容体へのイヌＩＬ－４およびイヌＩＬ－１３の結合
を遮断する抗体を生成させるためのワクチンとして、抗イヌＩＬ－４Ｒα ｍＡｂにより
認識される抗原ペプチドが使用されうる。そのようなワクチンは、アトピー性皮膚炎のよ
うな疾患に対する治療用ワクチンとして有用でありうる。これらの抗原ペプチドをワクチ
ンとして使用するために、これらのペプチドの１以上を化学的に又は組換えＤＮＡ技術に
より別の担体タンパク質に結合させて、これらのペプチドの免疫原性を増強し、ペプチド
特異的抗体を生成させることが可能である。ペプチドを担体タンパク質に結合させるため
の技術は当業者に公知である。動物をワクチン接種するために、ペプチドワクチンは、Ｉ
Ｍ、Ｓ／Ｃ、経口、スプレーまたは卵内経路により動物にワクチン接種するために使用さ
れうる。ペプチドワクチンは、細菌、ウイルス、酵母またはバキュロウイルス系から発現
されるサブユニットタンパク質として使用されうる。あるいは、そのようなペプチドワク
チンは、当業者に公知の方法により実際されうるとおり、そのようなペプチドワクチンを
発現する種々のウイルスベクターまたは細菌ベクターの投与後に運搬されうる。該ペプチ
ドワクチンは１～１０００μｇの用量で投与可能であり、所望により、アジュバントおよ
び許容される医薬担体を含有しうる。
本明細書中で用いる「抑制する」または「治療する」または「治療」は、障害に関連し
た症状の発生の遅延および／またはそのような障害の症状の重症度の軽減を含む。該用語
は更に、既存の無制御の又は望ましくない症状の改善、追加的な症状の予防、およびその
ような症状の根本原因の改善または予防を含む。したがって、該用語は、障害、疾患もし
くは症状を有する脊椎動物対象、またはそのような障害、疾患もしくは症状を発生する可
能性を有する脊椎動物対象に有益な結果がもたらされていることを示す。
本明細書中で用いる「治療的有効量」、「治療的有効用量」および「有効量」なる語は
、単独で又は追加的な治療用物質と共に細胞、組織または対象に投与された場合に、疾患
もしくは病態の症状の１以上またはそのような疾患もしくは病態の進行における測定可能
な改善を引き起こすのに有効である、本発明のイヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体また
はその抗原結合性フラグメントの量を意味する。治療的有効量は更に、症状の少なくとも
部分的な改善、例えば関連医学的状態の治療、治癒、予防または改善、あるいはそのよう
な状態の治療、治癒、予防または改善の率の増加をもたらすのに十分な該結合性化合物の
量を意味する。治療的有効量は、単独で投与される個々の有効成分に適用される場合には
、その成分のみに関するものである。治療的有効量は、組合せ体に適用される場合には、
組合せ投与、連続投与または同時投与のいずれで投与されるかにかかわらず、治療効果を
もたらす、有効成分の組合された量を意味する。治療用物質の有効量は、少なくとも１０
％、通常は少なくとも２０％、好ましくは少なくとも約３０％、より好ましくは少なくと
も４０％、最も好ましくは少なくとも５０％の、診断尺度またはパラメータの改善をもた
らす。有効量はまた、疾患の重症度を評価するために主観的尺度が用いられる場合には、
主観的尺度における改善をもたらしうる。
他の組合せ（併用）療法
既に記載されているとおり、本発明のイヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体もしくはそ
の抗原結合性フラグメントおよび／または抗原ペプチドは１以上の他の治療用物質（例え
ば、次段落に記載されているインヒビター）および／またはマウス（またはイヌ化マウス
）抗イヌＴＳＬＰ抗体と共投与されうる［Ｕ．Ｓ．８，７９１，２４２を参照されたい］
。該抗体は（免疫複合体として）該物質に連結されることが可能であり、および／または
該物質もしくは他の抗体とは別々に投与されうる。後者（別々の投与）の場合、抗体は該
物質の前、後または同時に投与可能であり、あるいは他の公知療法と共投与されうる。
キット
更に、医薬上許容される担体および／またはインヒビター、例えばヤヌス（Ｊａｎｕｓ
）キナーゼ（ＪＡＫ）インヒビター、例えばオクラシチニブ（ｏｃｌａｃｉｔｉｎｉｂ）
［ＷＯ ２０１３／０４０２４１を参照されたい］、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）イ
ンヒビター［例えば、Ｕ．Ｓ．８，７５９，３６６を参照されたい］、もしくはＴＨ２細
胞上で発現される化学誘引物質受容体ホモログ分子に対するアンタゴニスト［例えば、Ｗ
Ｏ ２０１０／０９９０３９；ＷＯ ２０１０／０３１１８３；およびＵ．Ｓ．８，５４
６，４２２を参照されたい］（これらに限定されるものではない）を含む１以上の追加的
成分と共に、ＩＬ－４Ｒαに特異的に結合する本明細書に記載されている抗体または抗原
結合性フラグメント（例えば、イヌ化マウス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体またはその抗原結合
性フラグメント）（これらに限定されるものではない）を含む１以上の成分を含むキット
を提供する。直前に記載されている結合性化合物および／またはインヒビターは、純粋な
組成物として、または医薬組成物において医薬上許容される担体と組合せて製剤化されう
る。
１つの実施形態においては、該キットは、本発明の結合性組成物（例えば、イヌ化マウ
ス抗イヌＩＬ－４Ｒα抗体またはその医薬組成物）を１つの容器（例えば、無菌ガラスま
たはプラスチックバイアル）内に、そしてその医薬組成物および／または前記のインヒビ
ターをもう１つの容器（例えば、無菌ガラスまたはプラスチックバイアル）内に含む。
該キットが対象への非経口投与のための医薬組成物を含む場合、該キットは、そのよう
な投与を行うための装置を含みうる。例えば、該キットは前記の１以上の皮下注射針また
は他の注射装置を含みうる。該キットはまた、該キットにおける医薬組成物および剤形に
関する情報を含む添付文書を含みうる。一般に、そのような情報は、封入されている医薬
組成物および剤形を有効かつ安全に使用することにおいてペット所有者および獣医を補助
する。例えば、本発明の組合せに関する以下の情報が添付文書（インサート）において供
給されうる：薬物動態、薬力学、臨床試験、有効性パラメータ、適応症および用法、禁忌
、警告、予防策、有害反応、過剰投薬、適切な投与量および投与、供給方法、適切な保存
条件、参考資料、製造業者／流通業者情報ならびに特許情報。
便宜上、本明細書に開示されている抗体または特異的結合性物質は、キットとして、す
なわち、診断用または検出用アッセイを行うための説明を伴う所定量の試薬のパッケージ
化された組合せとして提供されうる。該抗体が酵素で標識されている場合には、該キット
は、該酵素により要求される基質および補因子（例えば、検出可能な発色団または発蛍光
団を与える基質前駆体）を含む。また、他の添加物、例えば安定剤、バッファー（例えば
、ブロッキングバッファーまたは細胞溶解バッファー）などが含まれうる。種々の試薬の
相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中濃度をもたらすように大き
く変動しうる。特に、該試薬は、適当な濃度を有する試薬溶液を溶解時に与える賦形剤を
含む乾燥粉末、通常は凍結乾燥粉末として提供されうる。
図１はイヌＩＬ－４Ｒαの細胞外ドメインに対する精製マウス抗イヌＩＬ－４Ｒαモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の反応性を示す。種々のマウスｍＡｂをイヌＩＬ－４Ｒαの細胞外ドメインへのそれらの結合に関してＥＬＩＳＡにより試験した。試験したｍＡｂは以下の名称を有する。
Figure 0007371070000003
横軸は、加えたｍＡｂのｌｏｇ濃度を示し、縦軸は、ＥＬＩＳＡにより得られた光学濃度
を示す。
図２Ａは、細胞に基づくＣＨＯ－ｃＩＬ－４Ｒα結合アッセイを用いた場合の、ＣＨＯ細胞の表面上で発現されたイヌＩＬ－４ＲαへのイヌＩＬ－４の結合に関する用量反応曲線を示す。横軸は、加えたＩＬ－４のｌｏｇ濃度を示し、縦軸は、ＦＡＣＳを用いた場合の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。図２Ｂは以下のマウス抗イヌＩＬ－４Ｒαモノクローナル抗体（ｍＡｂ）によるＣＨＯ－ｃＩＬ－４Ｒαに関する用量反応曲線を示す。
Figure 0007371070000004
横軸は、加えたｍＡｂのｌｏｇ濃度（ｎＭ）を示し、縦軸は、ＦＡＣＳを用いた場合の平
均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。該抗体のそれぞれに関する最大半量有効濃度（ＥＣ５０）
は後記表２に示されている。
図３Ａおよび３Ｂは、細胞に基づくＣＨＯ－ｃＩＬ－４ＲαとのＩＬ－４の結合に関する、連続希釈された個々のマウス抗イヌＩＬ－４Ｒαモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の結果を示す。図３Ａは、細胞に基づくＣＨＯ－ｃＩＬ－４ＲαとのＩＬ－４の結合を個々に遮断するモノクローナル抗体
Figure 0007371070000005
の濃度依存的能力を示す。図３Ｂは、細胞に基づくＣＨＯ－ｃＩＬ－４ＲαとのＩＬ－４
の結合を個々に遮断するモノクローナル抗体
Figure 0007371070000006
の濃度依存的能力を示す。横軸は、加えたｍＡｂのｌｏｇ濃度（ｎＭ）を示し、縦軸は、
ＦＡＣＳを用いた場合の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。
図４は、ＥＬＩＳＡにより評価した場合の、イヌＩＬ－４Ｒαへのキメラおよびイヌ化モノクローナル抗体の結合を示す。イヌＩＬ－４受容体アルファ鎖に対するイヌ化モノクローナル抗体の用量依存的反応性は以下のとおりである。
Figure 0007371070000007
実施例
実施例１
イヌＩＬ－４受容体α鎖受容体の特定およびクローニング
推定完全長イヌＩＬ－４受容体アルファ鎖をコードするｃＤＮＡ（配列番号１）をＧｅ
ｎｂａｎｋデータベース（アクセッション番号ＸＭ ５４７０７７．４；ＵＳ ７，２０
８，５７９ Ｂ２も参照されたい）の検索により特定した。この推定ｃＤＮＡは、２５ア
ミノ酸のリーダー配列を含む８２３アミノ酸（配列番号２）をコードしており、アクセッ
ション番号ＸＰ ５４７０７７．３として特定される。成熟推定イヌＩＬ－４受容体α鎖
タンパク質（配列番号４）はヒトＩＬ－４受容体α鎖（アクセッション番号ＮＰ ０００
４０９．１）に対して６５％の同一性およびブタＩＬ－４受容体α鎖（アクセッション番
号ＮＰ ９９９５０５．１）に対して７０％の同一性を共有する。成熟推定イヌＩＬ－４
受容体α鎖タンパク質は、配列番号３として特定されているヌクレオチド配列によりコー
ドされる。推定成熟ＩＬ－４受容体α鎖とヒトＩＬ－４受容体α鎖の公知配列との比較は
成熟イヌＩＬ－４受容体α鎖タンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を特定した。これは
配列番号６と称される。成熟イヌＩＬ－４
受容体α鎖のＥＣＤをコードするＤＮＡ配列は配列番号５として特定されている。
Figure 0007371070000008
Figure 0007371070000009
Figure 0007371070000010
Figure 0007371070000011
実施例２
マウス抗イヌＩＬ－４受容体アルファ鎖抗体
抗イヌＩＬ－４受容体α鎖モノクローナル抗体の作製：
合計３匹のＢａｌｃ／ｃマウスを１７日間にわたって複数回（１回当たり１０μｇで）
免疫化した。免疫化抗原はイヌＩＬ－４Ｒアルファ鎖細胞外ドメイン（ＥＣＤ）－ヒトＦ
ｃ融合タンパク質であった。免疫化後、血清を各マウスから集め、イヌＩＬ－４受容体ア
ルファ鎖ＥＣＤ ＨＩＳタグ付きタンパク質に対する反応性に関して試験した。最高血清
抗ＩＬ－４受容体アルファ鎖ＥＣＤ力価を有するマウスの脾臓細胞を骨髄腫Ｐ３Ｘ６３Ａ
ｇ８．６５３細胞系と融合させた。融合の約２週間後、推定ハイブリドーマ細胞からの上
清をＩＬ－４受容体アルファ鎖ＥＣＤ ＨＩＳタグ付きタンパク質に対するそれらの反応
性に関してＥＬＩＳＡにより試験した。ＥＬＩＳＡにおいて強力な陽性シグナルを示すハ
イブリドーマを限界希釈によりサブクローニングし、イヌＩＬ－４受容体アルファ鎖ＥＣ
Ｄ ＨＩＳタグ付きタンパク質に対する反応性に関して再び試験した。
イヌＩＬ－４受容体α鎖に対するモノクローナル抗体の反応性の確認：
イヌＩＬ－４受容体アルファ鎖のＥＣＤに対する、ハイブリドーマにより分泌された抗
体の反応性をＥＬＩＳＡにより確認した。ＣＥＬＬｉｎｅバイオリアクター（Ｉｎｔｅｇ
ｒａ－ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してハイブリドーマ細胞を１０～３０日間培養し
た。最初は、４ｍＭ Ｌ－グルタミンおよび１０％ Ｕｌｔｒａ Ｌｏｗ ＩｇＧウシ胎
児血清（ＦＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ）で補足されたＤＭＥＭ内で細胞を維持した。ＣＥＬＬｉ
ｎｅバイオリアクターセルチャンバー内で、ＦＢＳ濃度を２０％に増加させた同じ培地の
１５ｍＬ中、ハイブリドーマ細胞を約２×１０６ 細胞／ｍＬの細胞密度で播いた。外側
チャンバーを１Ｌの栄養培地（４ｍＬ Ｌ－グルタミンおよび２％ 標準ＦＢＳを含有す
るＤＭＥＭ）で満たした。セルチャンバー内のハイブリドーマを３～７日間にわたって約
２．５×１０７ 細胞／ｍＬまで増殖させた。ついで１０ｍＬの細胞懸濁液をセルチャン
バーから集め、新鮮培地と交換して、細胞の再増殖および後続の回収を可能にした。各ハ
イブリドーマクローンから適量のｍＡｂを得るために、必要に応じて、この手順を繰返し
た。回収された細胞懸濁液を遠心分離し、上清を０．２ミクロン濾過膜で濾過した。抗体
精製のために、プロテインＧセファロース４ファーストフロー（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ Ｓ
ｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｆａｓｔ ｆｌｏｗ）５ｍＬカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒ
ｅ）を使用して、自然流下により各クローンの上清を精製した。Ｔｒｉｓ－ＥＤＴＡ（Ｔ
Ｅ）バッファー（ｐＨ８．０）で洗浄した後、０．１Ｍ グリシンバッファー（ｐＨ２．
７）を使用して結合抗体を溶出し、ついで１Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）を使用してｐＨ
の中和を行った。Ｃｅｎｔｒｉｐｒｅｐ ＹＭ－１０ｋＤａ ＮＭＷＬ遠心フィルターユ
ニット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、抗体を濃縮し、バッファーをリン酸緩衝食塩
水（ＰＢＳ）中に交換した。分光光度法により抗体濃度を定量した。精製された抗イヌＩ
Ｌ－４受容体α鎖ｍＡｂをイヌＩＬ－４受容体アルファ鎖のＨＩＳタグ付きＥＣＤドメイ
ンに対する反応性に関して以下のとおりにＥＬＩＳＡにより試験した。ＨＩＳタグ付きイ
ヌＩＬ－４受容体アルファ鎖タンパク質をコーティングバッファー（炭酸塩／炭酸水素塩
，ｐＨ９．０）中で１０μｇ／ｍＬに希釈し、９６ウェル平底ＥＬＩＳＡプレート（ＮＵ
ＮＣ）内に１００μｌ／ウェルで分注する。該プレートを４℃で一晩インキュベートする
。ついで該プレートを、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０（ＰＢＳＴ）を含有するリン酸緩
衝食塩水で３回洗浄する。次に２００μｌのブロッキングバッファー（ＰＢＳＴ中の５％
脱脂乳）を各ウェルに加え、該プレートを３０℃で６０分間インキュベートする。つい
で該プレートをＰＢＳＴで３回洗浄する。次に、ブロッキングバッファー中で希釈された
１００μｌの試験ｍＡｂを適当な列の第１ウェルに加える。ついで試験ｍＡｂを適当なプ
レート位置へ３倍希釈する。該プレートを３７℃で６０分間インキュベートした後、該プ
レートをＰＢＳＴで３回洗浄する。次に１００μｌ／ウェルの１：２，０００希釈のホー
スラディッシュペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ（ＫＰＬ）を該プレートに加え
、ついでこれを３７℃で６０分間インキュベートする。ついで該プレートをＰＢＳＴで３
回洗浄し、１００μｌ／ウェルの３，３’，５，５’ テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ
）基質（ＫＰＬから入手）を該プレートに加える。呈色反応を３７℃で５～２０分間進行
させた後、６５０ｎｍの吸光度を測定する。
種々のマウス抗イヌＩＬ－４Ｒαモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、イヌＩＬ－４Ｒα
の細胞外ドメインに結合するそれらの能力に関して、ＥＬＩＳＡによりアッセイした。図
１に示されているとおり、これらのｍＡｂの大多数は陽性（正）の量依存的結合を示す。
実施例３
抗イヌＩＬ－４受容体アルファ鎖モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖可変ドメインの
ＤＮＡおよび推定タンパク質配列の特定
標準的な分子生物学的方法を用いて各ハイブリドーマからｍＲＮＡを単離した後、マウ
スＶＨおよびＶＬ鎖のＤＮＡ配列を特定する。これらのハイブリドーマからのＶＨおよび
ＶＬのＤＮＡおよび推定アミノ酸配列の配列番号を以下に示す。シグナル配列をコードす
るＤＮＡおよび推定シグナル配列に対応するアミノ酸が下線で示されており、ＣＤＲに対
応するものが太字で示されており、ＦＲには下線も太字も施されていない（すなわち、シ
グナル配列－ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）。
Figure 0007371070000012
Figure 0007371070000013
Figure 0007371070000014
Figure 0007371070000015
Figure 0007371070000016
Figure 0007371070000017
Figure 0007371070000018
Figure 0007371070000019
実施例４
イヌＩＬ－４受容体アルファ鎖を発現するＣＨＯ細胞系の構築およびリガンド遮断アッ
セイにおける使用
完全長イヌＩＬ－４受容体アルファ鎖（ｃＩＬ－４Ｒα；配列番号４）をコードする遺
伝子を合成し、哺乳類発現ベクター内にサブクローニングした。得られたプラスミドをＣ
ＨＯ ＤＧ４４細胞内にトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、該
細胞を９６ウェルプレート内に希釈して単細胞クローンを得た。４週間のインキュベーシ
ョンの後、約１３０個のクローンを得た。抗ｃＩＬ－４Ｒαモノクローナル抗体６Ｂ２を
使用するＦＡＣＳにより、ｃＩＬ－４Ｒαの発現に関して該クローンの全てをスクリーニ
ングした。安定性の評価のために３個のクローンを選択した。ＦＡＣＳにより、２０継代
にわたって安定性をモニターした。
ＣＨＯ細胞の表面上で発現されたイヌＩＬ－４ＲアルファへのイヌＩＬ－４の結合をイ
ヌＩＬ－４受容体アルファに特異的なモノクローナル抗体が遮断する能力を評価するため
に、リガンド遮断アッセイを以下のとおりに設定した。
試薬および装置：
・細胞増殖培地：ＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ培地 ＋ ８ｍＭ Ｌ－グルタミン ＋ ０
．０１８％ Ｆ－６８；
・ＦＡＣＳバッファー：ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ染色（Ｓｔａｉｎ）バッファー
（ＢＤカタログ番号５５４６５７）；
・Ｒ－フィコエリシン（ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｉｎ）結合ストレプトアビジン（Ｌｉ
ｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ：ＳＢ６６）；
・イヌＩＬ－４（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍ，カタログ番号７５４－ＣＬ／ＣＦ）；
・製造業者の推奨に従いイヌＩＬ－４をビオチン化するために使用されるＬｉｇｈｔ
ｎｉｎｇ－Ｌｉｎｋビオチン結合キットＡ型（Ｎｏｖｕｓ：７０４－００１０）
・フローサイトメーター：ＢＤ Ａｃｃｕｒｉ－Ｃ６。
手順：
１．ＣＨＯ－ＤＨ４４－ｃａｎＩＬ－４Ｒα細胞を９６％以上の生存度で２～４×１
０６ 細胞／ｍＬまで増殖させた。
２．細胞を遠心沈降させ、上清を廃棄し、細胞を２×１０７ 細胞／ｍＬまでＦＡＣ
Ｓバッファー中に懸濁させた。
３．細胞をＵ型９６ウェルプレート内に分注（各ウェル５０μｌ）した。
４．ＦＡＣＳバッファー中の抗イヌＩＬ－４Ｒα ｍＡｂを９６ウェルプレート上で
上部ウェルから下部ウェルへと５０μｇ／ｍＬから３倍希釈した。
５．５０μｌの各希釈Ａｂを細胞プレート内に移し、ついで氷上で３０分間インキュ
ベートした。
６．細胞をＦＡＣＳバッファーで２回洗浄した。
７．細胞をＦＡＣＳバッファー中の０．３２μｇ／ｍＬのビオチン化イヌＩＬ－４の
１００μｌ中に再懸濁させ、氷上で３０分間インキュベートした。
８．細胞をＦＡＣＳバッファーで２回洗浄した。
９．細胞をＦＡＣＳバッファー中のＲ－フィコエリシン結合ストレプトアビジン（１
：１０００希釈）の１００μｌ中に再懸濁させ、氷上で３０分間インキュベートした。
１０．細胞をＦＡＣＳバッファーで２回洗浄した。
１１．細胞を３００μｌのＦＡＣＳバッファー中に仕込んだ。
１２．ＢＤ Ａｃｃｕｒｉ－Ｃ６により各サンプル当たり１０，０００個の細胞を読
取った。
１３．得られた読取り（リードアウト）をＦｌｏｗＪｏにより分析して、平均蛍光強
度（ＭＦＩ）を得た。
ＣＨＯ細胞の表面上で発現されたイヌＩＬ－４ＲαへのイヌＩＬ－４の結合に関する用
量反応曲線を、細胞に基づくＣＨＯ－ｃＩＬ－４Ｒα結合アッセイを用いて得た（図２Ａ
を参照されたい）。この曲線から２５ｎＭの最大半量有効濃度（ＥＣ５０）が決定された
。次に、マウス抗イヌＩＬ－４Ｒαモノクローナル抗体（ｍＡｂ）：１１Ｂ６、４Ｄ８、
４Ｈ３、２Ｅ２、１１Ｈ２および６Ｃ１２によるＣＨＯ－ｃＩＬ－４Ｒαの結合に関する
用量反応曲線を得た（図２Ｂを参照されたい）。該抗体のそれぞれに関する最大半量有効
濃度（ＥＣ５０）を以下の表２に示す。
Figure 0007371070000020
ついでマウス抗イヌＩＬ－４Ｒαモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、細胞に基づくＣＨ
Ｏ－ｃＩＬ－４ＲαへのイヌＩＬ－４の結合を遮断するそれらの能力に関してアッセイし
た。図３Ａに示されているとおり、５つのｍＡｂ、すなわち、１１Ｂ６、４Ｄ８、４Ｈ３
、２Ｅ２および１１Ｈ２が有意な遮断能を示した。補足的研究において、第６のｍＡｂを
試験し（６Ｃ１２）、前記の５つの被検ｍＡｂの１つ（１１Ｈ２）と比較した（図３Ａ）
。図３Ｂおよび表２から明らかなとおり、６Ｃ１２ ｍＡｂは１１Ｈ２ ｍＡｂより有意
に高い最大半量抑制濃度（ＩＣ５０）を有する。図３Ａおよび３Ｂならびに表２において
認められうるとおり、抗ｃＩＬ－４Ｒαモノクローナル抗体４Ｄ８、２Ｅ２、４Ｄ８およ
び１１Ｈ２の４つは優れた遮断能を示した。
実施例５
マウスＣＤＲのアミノ酸配列
Figure 0007371070000021
Figure 0007371070000022
Figure 0007371070000023
Figure 0007371070000024
Figure 0007371070000025
実施例６
マウス抗イヌＩＬ－４受容体アルファ抗体のエピトープマッピング
対応コグネイトタンパク質抗原との抗体の相互作用は該抗体の特異的アミノ酸（パラト
ープ）と標的抗原の特定のアミノ酸（エピトープ）との結合によって媒介される。エピト
ープは、免疫グロブリンによる特異的反応を引き起こす抗原決定基である。エピトープは
抗原の表面上のアミノ酸の一群からなる。関心のあるタンパク質は、種々の抗体により認
識される幾つかのエピトープを含有しうる。抗体により認識されるエピトープは直鎖状エ
ピトープまたはコンホメーションエピトープとして分類される。直鎖状エピトープはタン
パク質におけるアミノ酸の一連の連続的配列により形成され、一方、コンホメーションエ
ピトープは、一次アミノ酸配列においては不連続的である（例えば、遠く離れている）が
三次元タンパク質フォールディングに際して合体するアミノ酸から構成される。
エピトープマッピングは、抗体により認識されるその標的抗原上のアミノ酸配列（すな
わち、エピトープ）を特定する方法を意味する。標的抗原上でモノクローナル抗体（ｍＡ
ｂ）により認識されるエピトープの特定は重要な用途を有する。例えば、それは新規治療
剤、診断剤およびワクチンの開発を補助しうる。エピトープマッピングはまた、最適化治
療用ｍＡｂの選択を補助し、その作用メカニズムの解明を助けうる。また、ＩＬ－４受容
体アルファに関するエピトープの情報は特有のエピトープを明らかにし、ワクチンの防御
効果または病原性効果を明らかにしうる。エピトープの特定はまた、担体タンパク質また
は他の免疫刺激剤への特定されたペプチドエピトープの化学的または遺伝的カップリング
に基づくサブユニットワクチンの開発につながりうる。
エピトープマッピングは、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を使用して実施可
能であり、エピトープの予想される性質（すなわち、直鎖状対コンホメーション）に応じ
て、幾つかの方法がエピトープの特定のために用いられる。直鎖状エピトープのマッピン
グはより直接的であり、相対的に実施がより容易である。この目的のために、直鎖状エピ
トープマッピングのための商業的サービスは、しばしば、ペプチドスキャニングを用いる
。この場合、標的タンパク質の短いペプチド配列の重複セットを化学合成し、関心のある
抗体に結合するそれらの能力に関して試験する。この方法は迅速でハイスループットであ
り、比較的安価に行われる。一方、不連続的エピトープのマッピングは、技術的に、より
困難であり、より専門的な技術、例えば、対応標的タンパク質とのモノクローナル抗体の
Ｘ線共結晶解析、水素－重水素（Ｈ／Ｄ）交換、酵素消化と組合された質量分析、および
当業者に公知の幾つかの他の方法を要する。
質量分析を用いるイヌＩＬ－４受容体アルファエピトープのマッピング：
抗イヌＩＬ－４受容体アルファｍＡｂにより認識されるエピトープを特定するために、
化学的架橋および質量分析検出に基づく方法を用いた［ＣｏｖａｌＸ Ｉｎｓｔｒｕｍｅ
ｎｔ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ］。イヌＩＬ－４受容体アルファ鎖のエピトープマッピ
ングに対するこの技術の適用は、表４に挙げられているｍＡｂにより認識されるエピトー
プの特定をもたらした。
表４に示されている６個の抗体を使用するイヌＩＬ－４受容体アルファのエピトープマ
ッピングからの結果は、イヌＩＬ－４受容体アルファの細胞外ドメイン内に存在する特異
的ペプチドエピトープを該ｍＡｂが認識することを示している。注目すべきことに、試験
した６個のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）のそれぞれに関して２～３個のエピトープが特
定された。興味深いことに、ｍＡｂ ２Ｅ２に関して特定されたエピトープの１つはｍＡ
ｂ １１Ｂ６のもの（すなわち、配列番号１５８）と全く同じアミノ酸配列を有すること
が判明した。以下の表４に示されているとおり、ｍＡｂ：４Ｄ８、１１Ｈ２および１１Ｂ
６は全て、同じ直鎖状アミノ酸配列の部分である「１」と表示されたエピトープを認識し
、ｍＡｂ：１１Ｈ２、４Ｈ３および２Ｅ２は全て、もう１つの直鎖状アミノ酸配列の部分
である「２」と表示されたエピトープを認識し、ｍＡｂ：４Ｈ３および２Ｈ２は全て、第
３の直鎖状アミノ酸配列の部分である「３」と表示されたエピトープを認識する。関連エ
ピトープの特定におけるこの相対的合致は、これらの６個のモノクローナル抗体が、イヌ
ＩＬ－４受容体アルファの、その細胞外ドメイン内の限られた数の部分を認識することを
示している。
Figure 0007371070000026
前記表４に挙げられている６個の抗体に関して実施例５に記載されているＣＤＲと併せ
て考えると、ＣＤＲの各セットと表４におけるそれらの対応エピトープとの間で１対１の
関係が定められる。この関係は、表４における６個の抗体のそれぞれに関する実施例５に
おける６個のＣＤＲのセットと、それらが結合する対応エピトープとの関連性を定めるこ
とを可能にする。したがって、表４における対応エピトープに結合する実施例５に記載さ
れている６個ＣＤＲの一定のセットを有する抗体（例えば、イヌ化抗体）も本発明の一部
である。
実施例７
イヌ化抗イヌＩＬ－４受容体アルファモノクローナル抗体の構築
イヌ化の操作を実施するために、イヌＩｇＧの重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡ配列
を決定した。イヌ重鎖および軽鎖のＤＮＡおよびタンパク質配列は当技術分野で公知であ
り、ＮＣＢＩ遺伝子およびタンパク質データベースの検索により得られうる。前記のとお
り、イヌ抗体に関しては、４つの公知ＩｇＧサブタイプ、すなわち、ＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ
－Ｂ、ＩｇＧ－ＣおよびＩｇＧ－Ｄ、ならびに２つのタイプの軽鎖、すなわち、カッパお
よびラムダが存在する。いずれかの特定のアプローチに限定されるものではないが、イヌ
化抗イヌＩＬ－４受容体アルファｍＡｂを得るために種々の組合せで混合されうるイヌ化
重鎖および軽鎖を製造する全体的方法は以下のスキームを含む。
ｉ）所望の抗ＩＬ－４受容体アルファｍＡｂのＣＤＲを含むＶＨおよびＶＬドメイン
のＤＮＡ配列を特定する。
ｉｉ）所望の抗ＩＬ－４受容体ｍＡｂのＨおよびＬ鎖ＣＤＲを特定する。
ｉｉｉ）イヌＩｇＧのＨおよびＬ鎖に関する適当な配列を特定する。
ｉｖ）前記配列のイヌＩｇＧ ＨおよびＬ鎖の内因性ＣＤＲをコードするＤＮＡ配列
を特定する。
ｖ）内因性イヌＨおよびＬ鎖ＣＤＲをコードするＤＮＡ配列を、所望の抗ＩＬ－４受
容体アルファＣＤＲをコードするＤＮＡ配列で置換する。また、所望により、幾つかのイ
ヌフレームワーク残基を、所望の抗ＩＬ－４受容体ｍＡｂフレームワーク領域から選択さ
れた残基で置換してもよい。
ｖｉ）工程（ｖ）からのＤＮＡを合成し、それを適当な発現プラスミド内にクローニ
ングし、所望のイヌ化ＨおよびＬ鎖を含有するプラスミドをＨＥＫ２９３細胞内にトラン
スフェクトする。
ｖｉｉ）発現されたイヌ化抗体をＨＥＫ２９３上清から精製する。
ｖｉｉｉ）精製されたイヌ化抗体をイヌＩＬ－４受容体アルファ鎖への結合に関して
試験する。
前記で大まかに記載されている工程の適用は、以下の表５において配列番号が挙げられ
ているイヌ化ＨおよびＬ鎖配列のセットを与えた。
Figure 0007371070000027
本発明は、前記表５に挙げられている種々のイヌ化重鎖および軽鎖の組合せにより形成
されるイヌ化抗体を提供し、そのような抗体はイヌＩＬ－４受容体アルファとの特に強固
な結合を示す。特定の実施形態においては、該重鎖は配列番号１６４のアミノ酸配列を含
み、該軽鎖は配列番号１７０のアミノ酸配列を含む。このタイプのより詳細な実施形態に
おいては、該重鎖は配列番号１６３のヌクレオチド配列によりコードされ、該軽鎖は配列
番号１６９のヌクレオチド配列によりコードされる。もう１つの実施形態においては、該
重鎖は配列番号１６６のアミノ酸配列を含み、該軽鎖は配列番号１７２のアミノ酸配列を
含む。このタイプのより詳細な実施形態においては、該重鎖は配列番号１６５のヌクレオ
チド配列によりコードされ、該軽鎖は配列番号１７１のヌクレオチド配列によりコードさ
れる。更にもう１つの実施形態においては、該重鎖は配列番号１６８のアミノ酸配列を含
み、該軽鎖は配列番号１７４のアミノ酸配列を含む。このタイプのより詳細な実施形態に
おいては、該重鎖は配列番号１６７のヌクレオチド配列によりコードされ、該軽鎖は配列
番号１７３のヌクレオチド配列によりコードされる。これらのイヌ抗体によるＩＬ－４受
容体アルファに対する結合研究は後記８に記載されており、図４に示されている。
前記のとおり、ＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター機能を除去するために、該イヌ化抗
体のＦｃ部分はイヌＩｇＧ－Ｂの修飾配列に基づいている。これらの抗体のＦｃ領域は他
のイヌＩｇＧアイソタイプからの修飾Ｆｃで置換されることが可能であり、および／また
は代用ヒンジ領域と組合されることが可能であり、これらは前記のとおりであり、２０１
４年７月３０日付け出願の米国仮特許出願第６２／０３０，８１２号、２０１４年９月３
０日付け出願の米国仮特許出願第６２／０５７，５４１号、２０１４年１２月１６日付け
出願の米国仮特許出願第６２／０９２，４９６号、２０１５年６月８日付け出願の米国仮
特許出願第６２／１７２，５１１号およびＷＯ ２０１５／０９１９１０（それらの全て
の全内容を参照により本明細書に組み入れることとする）に例示され、開示されている。
Figure 0007371070000028
Figure 0007371070000029
Figure 0007371070000030
Figure 0007371070000031
実施例８
イヌＩＬ－４受容体アルファに対するイヌ化抗体の反応性
該イヌ化抗体をイヌＩＬ－４受容体アルファに対する反応性に関して以下のとおりに試
験した。
１．イムノプレート上に２００ｎｇ／ウェルのＩＬ－４受容体アルファをコーティン
グし、該プレートを４℃で一晩インキュベートする。
２．該プレートを、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０を含有するリン酸緩衝食塩水（Ｐ
ＢＳ）（ＰＢＳＴ）で３回洗浄する。
３．該プレートをＰＢＳ中の０．５％ ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で室温で４５
～６０分間ブロッキングする。
４．該プレートをＰＢＳＴで３回洗浄する。
５．該イヌ化抗体を希釈プレートの各列または行において０．３μｇ／ｍＬから３倍
希釈する。
６．該希釈イヌ化抗体をイムノプレートの各列または行内に移し、該プレートを室温
で４５～６０分間インキュベートする。
７．該プレートをＰＢＳＴで３回洗浄する。
８．該プレートの各ウェル内に１：４０００希釈ホースラディッシュペルオキシダー
ゼ標識抗イヌＩｇＧ Ｆｃを加え、該プレートを室温で４５～６０分間インキュベートす
る。
９．該プレートをＰＢＳＴで３回洗浄する。
１０．該プレートの各ウェル内に３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（Ｔ
ＭＢ）基質を加え、該プレートを室温で１０～１５分間インキュベートして発色させる。
１１．各ウェル内に１００μＬの１．５Ｍ リン酸を加えて反応を停止させる。５４
０ｎｍの参照波長を用いてプレートを４５０ｎｍで読取る。
図４に示されているとおり、ＩＬ－４受容体アルファへの以下の５つの抗体の結合を調べた：４Ｈ３ Ｍ－Ｃ、ｃ４Ｈ３ Ｈ１－Ｌ１、ｃ４Ｈ３ Ｈ２－Ｌ２、ｃ４Ｈ３ Ｈ３－Ｌ３および２Ｇ９ Ｍ－Ｃ。２Ｇ９ Ｍ－Ｃは陰性対照抗体として使用した。４Ｈ３ Ｍ－Ｃは、ここに開示されている４Ｈ３抗体のマウス可変重鎖領域およびイヌ定常領域、ならびにマウス４Ｈ３抗体からの軽鎖からなるキメラ抗体である。ｃ４Ｈ３ Ｈ１－Ｌ１、ｃ４Ｈ３ Ｈ２－Ｌ２、ｃ４Ｈ３ Ｈ３－Ｌ３は、マウス４Ｈ３抗体の、３つのイヌ化変異体であり、前記表５に示されているとおり、特異的重鎖および軽鎖を含む。２Ｇ９ Ｍ－Ｃは、ＩＬ－４受容体アルファに全く無関係な抗原に対するマウス抗体のマウス可変重鎖およびイヌ定常領域、ならびにその無関係な抗原に対するマウス抗体からの軽鎖からなるキメラ抗体である。一貫して、２Ｇ９ Ｍ－ＣはＩＬ－４受容体アルファに結合しなかったが、調べた残りの４つの抗体、すなわち、４Ｈ３ Ｍ－Ｃ、ｃ４Ｈ３ Ｈ１－Ｌ１、ｃ４Ｈ３ Ｈ２－Ｌ２およびｃ４Ｈ３ Ｈ３－Ｌ３は全て、比較的強固に結合した（図４を参照されたい）。
本発明は一態様において、以下を提供する。
［項目１］
３個の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、ＣＤＲ軽鎖１（ＣＤＲＬ１）、ＣＤＲ軽鎖２（ＣＤＲＬ２）およびＣＤＲ軽鎖３（ＣＤＲＬ３）、ならびに３個の重鎖ＣＤＲ、すなわち、ＣＤＲ重鎖１（ＣＤＲＨ１）、ＣＤＲ重鎖２（ＣＤＲＨ２）およびＣＤＲ重鎖３（ＣＤＲＨ３）を含むイヌインターロイキン４受容体α（ＩＬ－４Ｒα）に特異的に
結合する単離された哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、ここで、
（ａ）ＣＤＲＬ１は、配列番号４７、配列番号５４、配列番号４８、配列番号５２、配列番号５５、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５３、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１；配列番号４７、配列番号５４、配列番号４８、配列番号５２、配列番号５５、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５３、配列番号１２９、配列番号１３０または配列番号１３１の保存的修飾変異体；１の標準構造クラスを含む配列番号４７または配列番号５４の変異体；２Ａの標準構造クラスを含む配列番号４８、配列番号５２または配列番号５５の変異体；４の標準構造クラスを含む配列番号４９の変異体；３の標準構造クラスを含む配列番号５０、配列番号５１または配列番号１３１の変異体；および６の標準構造クラスを含む配列番号５３、配列番号１２９または配列番号１３０の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）ＣＤＲＬ２は、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４；配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号１３２、配列番号１３３または配列番号１３４の保存的修飾変異体；および配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号１３２、配列番号１３３または配列番号１３４の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここで、該変異体は１の標準構造クラスを含む；
（ｃ）ＣＤＲＬ３は、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９；配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８または配列番号１３９の保存的修飾変異体；１の標準構造クラスを含む配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７または配列番号１３９の変異体；および３の標準構造クラスを含む配列番号１３８の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）ＣＤＲＨ１は、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３；配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２または配列番号１４３の保存的修飾変異体；および配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２または配列番号１４３の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここで、該変異体は１の標準構造クラスを含む；
（ｅ）ＣＤＲＨ２は、配列番号８３、配列番号８４、配列番号９１、配列番号８５、配列番号８８、配列番号８９、配列番号８７、配列番号９０、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８；配列番号８３、配列番号８４、配列番号９１、配列番号８５、配列番号８８、配列番号８９、配列番号８７、配列番号９０、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８の保存的修飾変異体；３Ａの標準構造クラスを含む配列番号８３、配列番号１４４、配列番号１４６、配列番号１４７または配列番号１４８の変異体；２Ａの標準構造クラスを含む配列番号８４、配列番号９１または配列番号１４５の変異体；２Ｂの標準構造クラスを含む配列番号８５、配列番号８８または配列番号８９の変異体；および１の標準構造クラスを含む配列番号８７または配列番号９０の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）ＣＤＲＨ３は、配列番号９２；配列番号９２の保存的修飾変異体；１２の標準構造クラスを含む配列番号９２の変異体；配列番号９３；配列番号９３の保存的修飾変異体；７の標準構造クラスを含む配列番号９３の変異体；配列番号９４、配列番号９６、配列番号１４９、配列番号１５１；配列番号９４、配列番号９６、配列番号１４９または配列番号１５１の保存的修飾変異体；１５の標準構造クラスを含む配列番号９４、配列番号９６、配列番号１４９または配列番号１５１の変異体；配列番号９５；配列番号９５の保存的修飾変異体；または１１の標準構造クラスを含む配列番号９５の変異体；配列番号９７、配列番号１００；配列番号９７または配列番号１００の保存的修飾変異体；６の標準構造クラスを含む配列番号９７または配列番号１００の変異体；配列番号９８；配列番号９８の保存的修飾変異体；４の標準構造クラスを含む配列番号９８の変異体；配列番号９９、配列番号１５３；配列番号９９または配列番号１５３の保存的修飾変異体；１３の標準構造クラスを含む配列番号９９または配列番号１５３の変異体；配列番号１５０；配列番号１５０の保存的修飾変異体；１０の標準構造クラスを含む配列番号１５０の変異体；配列番号１５２；および配列番号１５２の保存的修飾変異体；９の標準構造クラスを含む配列番号１５２の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
ここで、該抗体およびその抗原結合性フラグメントはイヌＩＬ－４Ｒ α に結合する、単
離された哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメント。
［項目２］
（ａ）ＣＤＲＬ１は、配列番号５４、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１；配列番号５４、配列番号１２９、配列番号１３０または配列番号１３１の保存的修飾変異体；１の標準構造クラスを含む配列番号５４の変異体；３の標準構造クラスを含む配列番号１３１の変異体；および６の標準構造クラスを含む配列番号１２９または配列番号１３０の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）ＣＤＲＬ２は、配列番号６０、配列番号６３、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４；配列番号６０、配列番号６３、配列番号１３２、配列番号１３３または配列番号１３４の保存的修飾変異体；および配列番号６０、配列番号６３、配列番号１３２、配列番号１３３または配列番号１３４の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、該変異体は１のクラスの標準構造クラスを含む；
（ｃ）ＣＤＲＬ３は、配列番号７２、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９；配列番号７２、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８または配列番号１３９の保存的修飾変異体；１の標準構造クラスを含む配列番号７２、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７または配列番号１３９の変異体；および３の標準構造クラスを含む配列番号１３８の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）ＣＤＲＨ１は、配列番号８１、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３；配列番号８１、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２または配列番号１４３の保存的修飾変異体；および配列番号８１、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２または配列番号１４３の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここで、該変異体は１の標準構造クラスを含む；
（ｅ）ＣＤＲＨ２は、配列番号９０、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８；配列番号９０、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８の保存的修飾変異体；３Ａの標準構造クラスを含む配列番号１４４、配列番号１４６、配列番号１４７または配列番号１４８の変異体；２Ａの標準構造クラスを含む配列番号１４５の変異体；および１の標準構造クラスを含む配列番号９０の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）ＣＤＲＨ３は、配列番号１４９、配列番号１５１；配列番号１４９または配列番号１５１の保存的修飾変異体；１５の標準構造クラスを含む配列番号１４９または配列番号１５１の変異体；配列番号９９、配列番号１５３；配列番号９９または配列番号１５３の保存的修飾変異体；１３の標準構造クラスを含む配列番号９９または配列番号１５３の変異体；配列番号１５０；配列番号１５０の保存的修飾変異体；１０の標準構造クラスを含む配列番号１５０の変異体；配列番号１５２；配列番号１５２の保存的修飾変異体；および９の標準構造クラスを含む配列番号１５２の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
ここで、該抗体およびその抗原結合性フラグメントはイヌＩＬ－４Ｒ α に結合し、イヌインターロイキン４へのイヌＩＬ－４Ｒ α の結合を遮断する、項目１記載の単離された哺乳類抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目３］
（ａ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１２９、配列番号１２９の保存的修飾変異体、および６の標準構造クラスを含む配列番号１２９の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１３２、配列番号１３２の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号１３２の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）ＣＤＲＬ３は、配列番号１３５、配列番号１３５の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号１３５の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１４０、配列番号１４０の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号１４０の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｅ）ＣＤＲＨ２は、配列番号１４４、配列番号１４４の保存的修飾変異体、および３Ａの標準構造クラスを含む配列番号１４４の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）ＣＤＲＨ３は、配列番号１４９、配列番号１４９の保存的修飾変異体、および１５の標準構造クラスを含む配列番号１４９の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
ここで、該抗体およびその抗原結合性フラグメントはイヌＩＬ－４Ｒ α に結合し、イヌインターロイキン４へのイヌＩＬ－４Ｒ α の結合を遮断する、項目２記載の単離された哺乳類抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目４］
（ａ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１３０、配列番号１３０の保存的修飾変異体、および６の標準構造クラスを含む配列番号１３０の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１３３、配列番号１３３の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号１３３の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）ＣＤＲＬ３は、配列番号１３６、配列番号１３６の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号１３６の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１４１、配列番号１４１の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号１４１の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｅ）ＣＤＲＨ２は、配列番号１４５、配列番号１４５の保存的修飾変異体、および２Ａの標準構造クラスを含む配列番号１４５の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）ＣＤＲＨ３は、配列番号１５０、配列番号１５０の保存的修飾変異体、および１０の標準構造クラスを含む配列番号１５０の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
ここで、該抗体およびその抗原結合性フラグメントはイヌＩＬ－４Ｒ α に結合し、イヌインターロイキン４へのイヌＩＬ－４Ｒ α の結合を遮断する、項目２記載の単離された哺乳類抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目５］
（ａ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１２９、配列番号１２９の保存的修飾変異体、および６の標準構造クラスを含む配列番号１２９の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１３４、配列番号１３４の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号１３４の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）ＣＤＲＬ３は、配列番号１３７、配列番号１３７の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号１３７の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１４０、配列番号１４０の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号１４０の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｅ）ＣＤＲＨ２は、配列番号１４６、配列番号１４６の保存的修飾変異体、および３Ａの標準構造クラスを含む配列番号１４６の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）ＣＤＲＨ３は、配列番号１５１、配列番号１５１の保存的修飾変異体、および１５の標準構造クラスを含む配列番号１５１の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
ここで、該抗体およびその抗原結合性フラグメントはイヌＩＬ－４Ｒ α に結合し、イヌインターロイキン４へのイヌＩＬ－４Ｒ α の結合を遮断する、項目２記載の単離された哺乳類抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目６］
（ａ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１３１、配列番号１３１の保存的修飾変異体、および３の標準構造クラスを含む配列番号１３１の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）ＣＤＲＬ２は、配列番号６０、配列番号６０の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号６０の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）ＣＤＲＬ３は、配列番号１３８、配列番号１３８の保存的修飾変異体、および３の標準構造クラスを含む配列番号１３８の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１４２、配列番号１４２の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号１４２の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｅ）ＣＤＲＨ２は、配列番号１４７、配列番号１４７の保存的修飾変異体、および３Ａの標準構造クラスを含む配列番号１４７の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）ＣＤＲＨ３は、配列番号１５２、配列番号１５２の保存的修飾変異体、および９の標準構造クラスを含む配列番号１５２の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
ここで、該抗体およびその抗原結合性フラグメントはイヌＩＬ－４Ｒ α に結合し、イヌインターロイキン４へのイヌＩＬ－４Ｒ α の結合を遮断する、項目２記載の単離された哺乳類抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目７］
（ａ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１２９、配列番号１２９の保存的修飾変異体、および６の標準構造クラスを含む配列番号１２９の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１３２、配列番号１３２の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号１３２の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）ＣＤＲＬ３は、配列番号１３９、配列番号１３９の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号１３９の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１４３、配列番号１４３の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号１４３の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｅ）ＣＤＲＨ２は、配列番号１４８、配列番号１４８の保存的修飾変異体、および３Ａの標準構造クラスを含む配列番号１４８の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）ＣＤＲＨ３は、配列番号１５３、配列番号１５３の保存的修飾変異体、および１３の標準構造クラスを含む配列番号１５３の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
ここで、該抗体およびその抗原結合性フラグメントはイヌＩＬ－４Ｒ α に結合し、イヌ
インターロイキン４へのイヌＩＬ－４Ｒ α の結合を遮断する、項目２記載の単離された
哺乳類抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目８］
（ａ）ＣＤＲＬ１は、配列番号５４、配列番号５４の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号５４の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）ＣＤＲＬ２は、配列番号６３、配列番号６３の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号６３の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）ＣＤＲＬ３は、配列番号７２、配列番号７２の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号７２の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）ＣＤＲＨ１は、配列番号８１、配列番号８１の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号８１の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｅ）ＣＤＲＨ２は、配列番号９０、配列番号９０の保存的修飾変異体、および１の標準構造クラスを含む配列番号９０の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）ＣＤＲＨ３は、配列番号９９、配列番号９９の保存的修飾変異体、および１３の標準構造クラスを含む配列番号９９の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；
ここで、該抗体およびその抗原結合性フラグメントはイヌＩＬ－４Ｒ α に結合し、イヌ
インターロイキン４へのイヌＩＬ－４Ｒ α の結合を遮断する、項目２記載の単離された
哺乳類抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目９］
哺乳類抗体がマウス抗体である、項目１、２、３、４、５、６、７または８記載の単離された哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメント。
［項目１０］
イヌ化抗体またはそのイヌ化抗原結合性フラグメントである、項目１、２、３、４、５、６、７または８記載の単離された哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメント。
［項目１１］
配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３および配列番号１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒンジ領域を含む、項目１０記載のイヌ化抗体またはそのイヌ化抗原結合性フラグメント。
［項目１２］
イヌ化抗体またはそのイヌ化抗原結合性フラグメントである、項目６記載の単離された哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメント。
［項目１３］
配列番号１６４、配列番号１６６および配列番号１６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１７０、配列番号１７２および配列番号１７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖、または該重鎖と該軽鎖との組合せを含む、項目１２記載のイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメント。
［項目１４］
配列番号１６３、配列番号１６５および配列番号１６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列によりコードされる重鎖、配列番号１６９、配列番号１７１および配列番号１７３からなる群から選択されるヌクレオチド配列によりコードされる軽鎖、または該重鎖と該軽鎖との組合せを含む、項目１３記載のイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメント。
［項目１５］
イヌインターロイキン４受容体α（ＩＬ－４Ｒ α ）に特異的に結合する単離された哺乳
類抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、イヌＩＬ－４Ｒ α に結合する際、該
抗体は配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２またはそれらのいずれかの組合せのアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合し、ここで、該抗体またはその抗原結合性フラグメントはイヌＩＬ－４Ｒαに結合し、イヌインターロイキン４へのイ
ヌＩＬ－４Ｒ α の結合を遮断する、単離された哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメ
ント。
［項目１６］
イヌＩＬ－４Ｒ α に結合する際、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントある
いは該イヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントは配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２またはそれらのいずれかの組合せのアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合し、ここで、該抗体またはその抗原結合性フラグメントはイヌＩＬ－４Ｒαに結合し、イヌインターロイキン４へのイヌＩＬ－４Ｒαの結合を遮断する、請求
項１、２、３、４、５、６、７または８記載の単離された哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメント、あるいは項目１０、１１、１２、１３または１４記載のイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメント。
［項目１７］
イヌＩＬ－４Ｒ α に結合する際、該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントある
いは該イヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントは配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１およびそれらのいずれかの組合せからなる群から選択されるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合し、ここで、該抗体またはその抗原結合性フラグメントはイヌＩＬ－４Ｒαに結
合し、イヌインターロイキン４へのイヌＩＬ－４Ｒ α の結合を遮断する、項目６または
７記載の単離された哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメント、あるいは項目１２、１３または１４記載のイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメント。
［項目１８］
該哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントあるいは該イヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントは、以下の特性：
（ｉ）１×１０ －５ Ｍ～１×１０ －１２ Ｍの解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ－４Ｒ α に結合すること；
（ｉｉ）１×１０ ２ Ｍ －１ ｓ －１ ～１×１０ ７ Ｍ －１ ｓ －１ のオン速度（ｋ ｏｎ ）でイ
ヌＩＬ－４Ｒ α に結合すること；
（ｉｉｉ）１×１０ －３ ｓ －１ ～１×１０ －８ ｓ －１ のオフ速度（ｋ ｏｆｆ ）でイヌＩ
Ｌ－４Ｒ α に結合すること；
（ｉｖ）Ｉ型ＩＬ－４受容体へのＩＬ－４の結合を遮断すること；
（ｖ）Ｉ型ＩＬ－４受容体へのＩＬ－１３の結合を遮断すること；
（ｖｉ）ＩＩ型ＩＬ－４受容体へのＩＬ－４の結合を遮断すること；および
（ｖｉｉ）ＩＩ型ＩＬ－４受容体へのＩＬ－１３の結合を遮断すること
の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または全てを示す、項目１、２、３、４、５、６、７、８、１５、１６または１７記載の哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメント、あるいは項目１０、１１、１２、１３、１４、１６または１７記載のイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメント。
［項目１９］
イヌＩＬ－４Ｒ α への結合に関して、項目１、２、３、４、５、６、７、８、１５、１６、１７または１８記載の１以上の哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメントあるいは項目１０、１１、１２、１３、１４、１６、１７または１８記載のイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントと交差競合するイヌ化モノクローナル抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、イヌＩＬ－４Ｒαに結合し、イヌＩＬ－４へのイヌＩＬ－４Ｒ α の結合を遮断するイヌ化モノクローナル抗体またはその抗原結合性フラグメント。
［項目２０］
項目１、２、３、４、５、６、７、８、１５、１６、１７または１８記載の哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメント、項目９記載のマウス抗体またはその抗原結合性フラグメント、あるいは項目１０、１１、１２、１３、１４、１６、１７、１８または１９記載のイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントの軽鎖をコードする単離された核酸。
［項目２１］
項目１、２、３、４、５、６、７、８、１５、１６、１７または１８記載の哺乳類抗体またはその抗原結合性フラグメント、項目９記載のマウス抗体またはその抗原結合性フラグメント、あるいは項目１０、１１、１２、１３、１４、１６、１７、１８または１９記載のイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントの重鎖をコードする単離された核酸。
［項目２２］
配列番号４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２および１５３からなる群から選択される１以上のアミノ酸配列をコードする、項目２０または２１記載の単離された核酸。
［項目２３］
項目２０、２１または２２記載の単離された核酸を含む発現ベクター。
［項目２４］
項目２３記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
［項目２５］
配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して９５％同一であり、項目１、２、３、４、５、６、７、８、１５、１６、１７または１８記載の単離された哺乳類抗体またはその結合性フラグメントあるいは項目１０、１１、１２、１３、１４、１６、１７、１８または１９記載のイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントに結合する、５～２５個のアミノ酸残基を含む単離されたペプチド。
［項目２６］
項目２５記載のペプチドを含む融合タンパク質。
［項目２７］
非イヌ哺乳類ＩｇＧのＦｃ領域を更に含む、項目２６記載の融合タンパク質。
［項目２８］
項目２５記載の単離されたペプチド、項目２６記載の融合タンパク質または項目２７記載の融合タンパク質をコードする単離された核酸。
［項目２９］
項目２８記載の単離された核酸を含む発現ベクター。
［項目３０］
項目２９記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
［項目３１］
項目１０、１１、１２、１３、１４、１６、１７、１８または１９記載のイヌ化抗体、あるいは項目２０、２１、２２または２８記載の核酸、項目２３または２９記載の発現ベクター、項目２５記載の単離されたペプチド、項目２６または２７記載の融合タンパク質、あるいはそれらのいずれかの組合せと、医薬上許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物。
［項目３２］
免疫細胞の活性の低減を要する対象に、項目３１記載の医薬組成物の治療的有効量を投与することを含む、免疫細胞の活性を低減させる方法。
［項目３３］
（ｉ）アトピー性皮膚炎の治療、または
（ｉｉ）喘息の治療、または
（ｉｉｉ）アトピー性皮膚炎の治療および喘息の治療
に使用される、項目３２記載の方法。

Claims (7)

  1. イヌインターロイキン‐４受容体α（ＩＬ－４Ｒα）に化学的架橋および質量分析検出によって決定される特異性で結合する、単離されたイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合性フラグメントがイヌＩＬ－４Ｒαに結合する際に、
    ‐配列番号１２５および配列番号１２６；
    ‐配列番号１２７および配列番号１２８；
    ‐配列番号１５４、配列番号１５５および配列番号１５６；並びに
    ‐配列番号１５９、配列番号１６０および配列番号１６１
    からなる群から選択されるアミノ酸配列またはその一部を含むＩＬ－４Ｒαエ ピトープに結合し、
    前記アミノ酸配列の一部は少なくとも、
    ‐配列番号１２６および配列番号１２７について：ＦＱＰＳＫＨＶＫＰＲ；
    ‐配列番号１２８、配列番号１５６および配列番号１６１について：ＫＳＧ；
    ‐配列番号１５４、配列番号１６０について：ＥＤＳＶＣＶＣＳＭＰＩ；
    のアミノ酸配列を含み、またはこれらのアミノ酸配列からなり、
    前記抗体またはその抗原結合性フラグメントがイヌＩＬ－４Ｒ α に結合して、イヌＩＬ－４Ｒαがイヌインターロイキン‐４と結合するのを阻害する、前記単離されたイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  2. 前記イヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントが、１×１０ －１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ－４Ｒαに結合する、請求項１記載の単離されたイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  3. 前記イヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメントが、１×１０ －５Ｍ～１×１０ －１２Ｍの解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ－４Ｒαに結合する、請求項１記載の単離されたイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  4. 配列番号１２５および配列番号１２６；
    配列番号１２７および配列番号１２８；
    配列番号１５４、配列番号１５５および配列番号１５６；並びに
    配列番号１５９、配列番号１６０、および配列番号１６１；
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＩＬ－４Ｒ α エピトープに結合する、請求項１記載の単離されたイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  5. 配列番号１２５および配列番号１２６；
    配列番号１２７および配列番号１２８；
    配列番号１５４、配列番号１５５および配列番号１５６；並びに
    配列番号１５９、配列番号１６０、および配列番号１６１；
    からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるＩＬ－４Ｒ α エピトープに結合する、請求項１記載の単離されたイヌ化抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  6. １×１０ －８Ｍ～１×１０ －９Ｍの最小ＥＣ５０でイヌＩＬ－４ＲαへのイヌＩＬ－４の結合を遮断する、請求項１～５のいずれか一項記載の単離されたイヌ化抗体。
  7. ５×１０ －９Ｍ～５×１０ －１１Ｍの最小ＥＣ５０でイヌＩＬ－４ＲαへのイヌＩＬ－４の結合を遮断する、請求項１～５のいずれか一項記載の単離されたイヌ化抗体。
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