JP7366496B2 - ミトコンドリア活性化剤 - Google Patents
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Description
本発明の実施例で使用した冬虫夏草は、下記の手順で調製したものを使用した。
1.冬虫夏草(Cordyceps sinensis)10gを乾燥後粉砕する。
2.熱水で90分間抽出後ろ過し、濾液を乾燥させることでエキスAとする。
3.2のろ過工程における残渣を酵素処理し、ろ過したもののうち濾液を酵素処理末、残渣を微粉砕化したものをエキスBとする。
4.エキスAにデキストリンを混合し、6gとなるように質量調整を行ったものをエキス末とする。
5.エキスBに倍量のデキストリンを加え製剤性を高めたものを加工粉末とする。
6.上記工程により製造されたエキス末・酵素処理末・加工粉末を混合し、冬虫夏草として使用する。
正常ヒト骨格筋筋芽細胞(HSMM)をGFR Matrigel Matrixコート96well black plate(Greiner社製)に7.5×103cells/mL/wellとなるようにSkGM-2培地(Lonza社製)に播種し、24時間培養した。2% Horse Serum(Thermo Fisher Scientific社製)を添加したDMEM:F-12培地(Lonza社製)に交換後、4日間培養し、筋管分化を誘導させた。冬虫夏草を溶解させた2% Horse Serum添加DMEM:F-12培地に交換し、24時間培養を行った。1mM Mito Tracker Red CM-H2Xros(Thermo Fisher Scientific社製)、10mg/mL Hoechst 33342(Thermo Fisher Scientific社製)を添加した2% Horse Serum添加DMEM:F-12培地に交換し、30分間処理を行った。新しい2% Horse Serum添加DMEM:F-12培地に交換し、Operetta CLS(Parkin Elmer社製)を用いて画像撮影を行い、Red陽性area/総核数を算出し、相対活性型ミトコンドリア量の定量化を行った。
活性型ミトコンドリア量は、未処理の場合の活性型ミトコンドリア量を100とした場合の相対値を算出し、表1に示した。
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- コルダイセプシネンシス(Cordyceps sinensis)の子実体を有効成分とする骨格筋筋芽細胞におけるミトコンドリア活性化剤。
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