JP7362417B2 - 口腔内病原性細菌の生育抑制剤、口腔用組成物及び促進剤 - Google Patents
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ヒトの口腔内には様々な病原性を示す細菌が存在する。例えば、う蝕の原因菌であるストレプトコッカス ミュータンス(Streptococcus mutans)、歯周病や口臭の原因菌であるポルフィロモナス ジンジバリス(Porphyromonas gingivalis)、プレボテラ インターメディア(Prevotella intermedia)、フゾバクテリウム ヌクレアタム(Fusobacterium nucleatum)等が挙げられる。
さらに、(B)ミルクオリゴ糖及びラクツロースから選ばれる1種以上が、それ自身は口腔内病原性細菌に対する生育抑制効果を有していないものの、ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)、ストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)及びこれらの培養物に作用して、これらの有する口腔内病原性細菌に対する生育抑制効果を促進させること、例えば、上記ストレプトコッカス ペロリス等の生育を促進することにより、口腔内病原性細菌に対する顕著な生育抑制効果を有することを知見し、発明をなすに至ったものである。
1.(A)ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)、ストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)及びこれらの培養物から選ばれる1種以上を含有する、口腔内病原性細菌に対する生育抑制剤。
2.(B)ミルクオリゴ糖及びラクツロースから選ばれる1種以上を含有する、口腔内病原性細菌に対する生育抑制剤。
3.口腔内のストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)又はストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)が有する口腔内病原性細菌に対する生育抑制効果を促進させ、口腔内病原性細菌に対する生育を抑制することを特徴とする、2記載の口腔内病原性細菌に対する生育抑制剤。
4.さらに、(A)ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)、ストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)及びこれらの培養物から選ばれる1種以上を含有する、2又は3記載の口腔内病原性細菌に対する生育抑制剤。
5.口腔内病原性細菌が、ポルフィロモナス ジンジバリス(Porphyromonas gingivalis)、プレボテラ インターメディア(Prevotella intermedia)又はフゾバクテリウム ヌクレアタム(Fusobacterium nucleatum)である1~4のいずれかに記載の口腔内病原性細菌に対する生育抑制剤。
6.(A)ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)、ストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)及びこれらの培養物から選ばれる1種以上を含有する口腔用組成物。
7.(B)ミルクオリゴ糖及びラクツロースから選ばれる1種以上を含有する、歯磨剤、洗口剤、塗布剤、マウススプレー、貼付剤、シート剤、口腔内徐放剤、咀嚼剤、口腔内溶解剤、口腔内崩壊剤、義歯ケア剤、舌ケア剤及び口中清涼剤から選ばれる口腔用組成物。
8.さらに、(A)ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)、ストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)及びこれらの培養物から選ばれる1種以上を含有する7記載の口腔用組成物。
9.歯周病又は口臭の予防又は改善用である6~8のいずれかに記載の口腔用組成物。
10.(A)ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)、ストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)及びこれらの培養物から選ばれる1種以上が有する口腔内病原性細菌に対する生育抑制効果を促進する、(B)ミルクオリゴ糖及びラクツロースから選ばれる1種以上を含有する促進剤。
11.ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)又はストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)の生育を促進する、(B)ミルクオリゴ糖及びラクツロースから選ばれる1種以上を含有する促進剤。
I.口腔内病原性細菌に対する生育抑制剤
本発明の口腔内病原性細菌に対する第1の生育抑制剤(以下、「口腔内病原性細菌に対する生育抑制剤」を単に「生育抑制剤」と表記する場合がある。)は、(A)ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)、ストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)及びこれらの培養物から選ばれる1種以上を含有する、口腔内病原性細菌に対する生育抑制剤である。
この場合、生育抑制の有効成分である(A)及び(B)成分を、生育抑制剤、口腔用組成物に応用する場合は、生育抑制効果の点から、(A)及び(B)成分の配合量がそれぞれ後述の範囲が好ましい。以下、生育抑制剤、口腔用組成物のいずれの場合も組成物全体として記載する。
(A)成分と(B)成分との量比を示す(A)/(B)は、質量比として0.002~5,000が好ましく、0.01~100がより好ましく、0.1~20がさらに好ましい。
X=(a/b)×100
Xの値は0~70の範囲が好ましく、0~50がより好ましく、0~20がさらに好ましい。
本発明の第1の口腔用組成物は、(A)ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)、ストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)及びこれらの培養物から選ばれる1種以上を含有する口腔用組成物である。
なお、本発明において、口腔用組成物とは、主として口腔内で使用することを目的にするものであり、使用後は口腔内から排出される口腔用製剤だけでなく、摂取可能な飲食品でもよい。例えば、歯磨剤(練歯磨、液体歯磨、液状歯磨、粉歯磨等)、洗口剤、塗布剤、マウススプレー、貼付剤、シート剤、口腔内徐放剤、咀嚼剤、口腔内溶解剤、口腔内崩壊剤、舌ケア剤、口中清涼剤、義歯ケア剤等の一般的な口腔用製剤に調製できる。また、口腔内に含んで使用するチューインガム、錠菓、キャンディ、グミ、可食フイルム、トローチや、水に溶かして飲む粉末飲料等の飲食品に調製することもできる。調製法は、それぞれの常法を採用できる。なお、飲食品の形態は、いつでもどこでも使用可能な簡便性、携帯性の点から、チューインガム、錠菓、キャンディ、グミ、可食フイルムのいずれかが好ましい。第2の口腔用組成物の場合、歯磨剤、洗口剤、塗布剤、マウススプレー、貼付剤、シート剤、口腔内徐放剤、咀嚼剤、口腔内溶解剤、口腔内崩壊剤、義歯ケア剤、舌ケア剤及び口中清涼剤から選ばれる口腔用組成物であることが好ましい。
口腔用製剤、例えば歯磨剤、洗口剤では、界面活性剤、研磨剤、粘稠剤、粘結剤、着色剤、甘味料、防腐剤、香料、有効成分、pH調整剤等を配合できる。
飲食品、例えばチューインガム、錠菓、キャンディ、グミでは、ガムベース、着色剤、甘味料、香料、光沢剤、流動化剤、結合剤、酸味料、滑沢剤、保存料、崩壊剤、賦形剤等を配合できる。以下、剤及び口腔用組成物中の好適な配合量を示す。
粘結剤は、有機粘結剤としてカルボキシメチルセルロースナトリウム等のセルロール誘導体、ガム類等、無機粘結剤としてゲル化性シリカ等が挙げられる。その配合量は、通常、0.5~10%である。
[I]病原性細菌に対する抗菌効果試験
下記方法で、病原性細菌に対する抗菌効果を評価した。
使用した主原料を下記に示す。
(A)成分
ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris):以下、S.perorisと略記。)ATCC 700780
ストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius):以下、S.lactariusと略記。)CCUG 66490T
(B)成分
3’-シアリルラクトース:Carbosynth社製
ラクスロース:富士フイルム和光純薬工業社製
(病原性細菌)
ポルフィロモナス ジンジバリス(Porphyromonas gingivalis:以下、P.gingivalisと略記。)ATCC33277
上記各種細菌の凍結菌液を、馬脱繊血を含有するトッドへヴィットブロス(Todd Hewitt Broth、Becton and Dickinson社製)寒天培地に白金耳にて植菌し、37℃で72時間嫌気培養(80体積%窒素、10体積%二酸化炭素、10体積%水素)にて起菌した。続いて増殖したコロニーを5mg/Lのヘミン(Sigma社製)及び1mg/LのビタミンK(富士フイルム和光純薬工業社製)を含むトッドへヴィットブロス(Todd Hewitt Broth、Becton and Dickinson社製)〔THBHM〕4mLに懸濁し、37℃24時間嫌気培養した。さらに、この培養液を20mLのTHBHMに1%接種し、37℃24時間嫌気培養した。
得られた培養液を11,000rpm 5minで遠心し、上清を回収した。上清のpHをpH7に調整した後、0.22μフィルターでろ過して菌体を取り除いた。ろ過後の培養液を小試験管に3mLずつ分注した(n=2)。濁度(O.D.550nm)1.0に調整したP.gingivalis菌液を30μLずつ添加し、37℃で24時間嫌気培養後に濁度(O.D.550nm)を測定した。
評価サンプル((B)成分、又は(A)及び(B)成分)添加の濁度をa、コントロール((A)成分なし、(B)成分の代わりに蒸留水添加)の濁度をbとしたときの下記式における、コントロールに対する評価サンプルの濁度相対値Xを生育抑制効果の指標とした。Xが低いほど病原性細菌に対する生育抑制効果が高いことを示す。結果をn=2の平均値で示す。
X=(a/b)×100
一方、表1のコントロールと、表1の(B)成分が3’-シアリルラクトース又はラクツロースの結果の結果から明らかであるように、(B)成分は、それ自身は口腔内病原性細菌に対する生育抑制効果を有していないものの、表2,3の結果から明らかであるように、(B)成分をストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)又はストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)が存在する口腔内に適用すること、又は(B)成分と口腔内以外の(A)成分とを併用することで、口腔内のストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)もしくはストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)、又は配合した(A)成分が有する口腔内病原性細菌に対する生育抑制効果を飛躍的に促進させる効果が得られた。
下記方法で、S.perorisの生育促進効果を評価した。
評価サンプル(3’-シアリルラクトース又はラクツロース)又は蒸留水(コントロール)を添加したトッドへヴィットブロス培地200μLに、上記[I]記載のように濁度(O.D.550nm)1.0になるように再懸濁したS.peroris菌液を1%添加し、96穴プレートを用いて37℃で18時間嫌気培養した。細菌の増殖量は、濁度(O.D.550nm)で測定し、菌の生育度を評価した。表中の濃度はトッドへヴィットブロス培地中の濃度である。
評価サンプル添加の濁度を(Ts)、コントロール(蒸留水添加)の濁度を(Tc)としたときの下記式における、コントロールに対する評価サンプルの濁度相対値Yを生育促進効果の指標とした。すなわち、Yが100より大きいと生育が促進されたことになる。
Y=Ts/Tc×100
(A)成分については、各菌をトッドへヴィットブロス培地で37℃24時間嫌気培養した後、得られた培養液を11,000rpm 5minで遠心分離した上清又は沈殿物を凍結乾燥した粉末を用いた。
[処方例1]チューインガム
(A)S.peroris 培養上清乾燥粉末 1
(B)3’-シアリルラクトース 0.1
キシリトール 48.9
マルチトール 20
ガムベース 20
アラビアガム 9
香料 1
合計 100%
(B)ラフィノース 0.1
キシリトール 49.9
マルチトール 20
ガムベース 20
アラビアガム 9
香料 1
合計 100%
(A)S.peroris 培養上清乾燥粉末 1
(B)3’-シアリルラクトース 0.1
ソルビトール 80.9
キシリトール 10
ショ糖脂肪酸エステル 3
香料 4.5
微粒二酸化ケイ素 0.5
合計 100.0%
(A)S.peroris 培養沈殿物乾燥粉末 1
(B)3’-シアリルラクトース 0.1
ソルビトール 80.9
キシリトール 10
ショ糖脂肪酸エステル 3
香料 4.5
微粒二酸化ケイ素 0.5
合計 100.0%
(B)3'-シアリルラクトース 0.1
ソルビトール 81.9
キシリトール 10
ショ糖脂肪酸エステル 3
香料 4.5
微粒二酸化ケイ素 0.5
合計 100.0%
(A)S.peroris 培養上清乾燥粉末 1
(B)3’-シアリルラクトース 0.1
砂糖 40
水飴 30
ブドウ糖液糖 10
グリセリン 5
ゼラチン 5
香料 0.2
蒸留水 バランス
合計 100.0%
(B)3’-シアリルラクトース 0.1
砂糖 40
水飴 30
ブドウ糖液糖 10
グリセリン 5
ゼラチン 5
香料 0.2
蒸留水 バランス
合計 100.0%
(A)S.peroris 培養上清乾燥粉末 1
(B)3'-シアリルラクトース 0.1
砂糖 50
水飴 33
クエン酸 2.0
香料 0.2
蒸留水 バランス
合計 100.0%
(B)3’-シアリルラクトース 0.1
砂糖 50
水飴 33
クエン酸 2
香料 0.2
蒸留水 バランス
合計 100.0%
(A)S.peroris 培養上清乾燥粉末 1
(B)3’-シアリルラクトース 0.1
無水ケイ酸 10
ラウリル硫酸ナトリウム 1
カルボキシメチルセルロースナトリウム 1.5
サッカリンナトリウム 0.1
ソルビトール 25
香料 1
蒸留水 バランス
合計 100.0%
(A)S.peroris 培養沈殿物乾燥粉末 1
(B)3’-シアリルラクトース 0.1
無水ケイ酸 10
ラウリル硫酸ナトリウム 1
カルボキシメチルセルロースナトリウム 1.5
サッカリンナトリウム 0.1
ソルビトール 25
香料 1
蒸留水 バランス
合計 100.0%
(B)3’-シアリルラクトース 0.1
無水ケイ酸 10
ラウリル硫酸ナトリウム 1
カルボキシメチルセルロースナトリウム 1.5
サッカリンナトリウム 0.1
ソルビトール 25
香料 1
蒸留水 バランス
合計 100.0%
(A)S.peroris 培養上清乾燥粉末 0.1
(B)3’-シアリルラクトース 0.1
プロピレングリコール 5
グリセリン 5
クエン酸 0.03
クエン酸ナトリウム 0.25
香料 0.8
蒸留水 バランス
合計 100.0%
(B)3’-シアリルラクトース 0.1
プロピレングリコール 5
グリセリン 5
クエン酸 0.03
クエン酸ナトリウム 0.25
香料 0.8
蒸留水 バランス
合計 100.0%
Claims (9)
- (A)ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)、ストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)及びこれらの培養物から選ばれる1種以上を含有する、口腔内病原性細菌に対する生育抑制剤。
- (A)ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)、ストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)及びこれらの培養物から選ばれる1種以上、及び
(B)ミルクオリゴ糖及びラクツロースから選ばれる1種以上を含有する、口腔内病原性細菌に対する生育抑制剤。 - (A)口腔内のストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)又はストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)が有する口腔内病原性細菌に対する生育抑制効果を、(B)ミルクオリゴ糖及びラクツロースから選ばれる1種以上が促進させ、口腔内病原性細菌に対する生育を抑制することを特徴とする、請求項2記載の口腔内病原性細菌に対する生育抑制剤。
- 口腔内病原性細菌が、ポルフィロモナス ジンジバリス(Porphyromonas gingivalis)、プレボテラ インターメディア(Prevotella intermedia)又はフゾバクテリウム ヌクレアタム(Fusobacterium nucleatum)である請求項1~3のいずれか1項記載の口腔内病原性細菌に対する生育抑制剤。
- (A)ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)、ストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)及びこれらの培養物から選ばれる1種以上、及び
(B)ミルクオリゴ糖及びラクツロースから選ばれる1種以上を含有する、口腔用組成物。 - 歯磨剤、洗口剤、塗布剤、マウススプレー、貼付剤、シート剤、口腔内徐放剤、咀嚼剤、口腔内溶解剤、口腔内崩壊剤、義歯ケア剤、舌ケア剤及び口中清涼剤から選ばれる、請求項5記載の口腔用組成物。
- 歯周病又は口臭の予防又は改善用である請求項5又は6記載の口腔用組成物。
- (A)ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)、ストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)及びこれらの培養物から選ばれる1種以上が有する口腔内病原性細菌に対する生育抑制効果を促進する、(B)ミルクオリゴ糖及びラクツロースから選ばれる1種以上を含有する促進剤。
- ストレプトコッカス ペロリス(Streptococcus peroris)又はストレプトコッカス ラクタリウス(Streptococcus lactarius)の生育を促進する、(B)ミルクオリゴ糖及びラクツロースから選ばれる1種以上を含有する促進剤。
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