JP7343564B2 - 生体触媒の存在下におけるホモファルネソールの生物変換によって形成された(-)-アンブロックス(Ambrox)の固体形態 - Google Patents
生体触媒の存在下におけるホモファルネソールの生物変換によって形成された(-)-アンブロックス(Ambrox)の固体形態 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7343564B2 JP7343564B2 JP2021205922A JP2021205922A JP7343564B2 JP 7343564 B2 JP7343564 B2 JP 7343564B2 JP 2021205922 A JP2021205922 A JP 2021205922A JP 2021205922 A JP2021205922 A JP 2021205922A JP 7343564 B2 JP7343564 B2 JP 7343564B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ambrox
- bioconversion
- homofarnesol
- compound
- crystals
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- YPZUZOLGGMJZJO-UHFFFAOYSA-N ambrofix Natural products C1CC2C(C)(C)CCCC2(C)C2C1(C)OCC2 YPZUZOLGGMJZJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 198
- YPZUZOLGGMJZJO-LQKXBSAESA-N ambroxan Chemical compound CC([C@@H]1CC2)(C)CCC[C@]1(C)[C@@H]1[C@]2(C)OCC1 YPZUZOLGGMJZJO-LQKXBSAESA-N 0.000 title claims description 195
- 239000007787 solid Substances 0.000 title claims description 32
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title description 48
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title description 48
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 title description 28
- KOICZDDAVPYKKX-NCZFFCEISA-N (3e,7e)-4,8,12-trimethyltrideca-3,7,11-trien-1-ol Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CCO KOICZDDAVPYKKX-NCZFFCEISA-N 0.000 title description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 87
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 73
- KOICZDDAVPYKKX-UHFFFAOYSA-N (3E,7Z)-4,8,12-trimethyltrideca-3,7,11-trien-1-ol Chemical compound CC(=C/CCO)CCC=C(/CCC=C(C)C)C KOICZDDAVPYKKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 70
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 62
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 62
- 108091000048 Squalene hopene cyclase Proteins 0.000 claims description 59
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 50
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 34
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 33
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 33
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 238000010908 decantation Methods 0.000 claims description 19
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 claims description 16
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 claims description 12
- 230000002210 biocatalytic effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 claims description 11
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 10
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 claims description 7
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 2
- 239000012265 solid product Substances 0.000 claims description 2
- 239000011343 solid material Substances 0.000 claims 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 119
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 58
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 55
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 43
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 33
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 description 21
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 21
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 20
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 19
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 17
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 15
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 14
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 14
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 13
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 13
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 13
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 12
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 10
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 10
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 10
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 9
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 9
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 8
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 7
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 7
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N N-Methyl-N-nitrosourea Chemical compound O=NN(C)C(N)=O ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- JSNRRGGBADWTMC-UHFFFAOYSA-N (6E)-7,11-dimethyl-3-methylene-1,6,10-dodecatriene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(=C)C=C JSNRRGGBADWTMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 5
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 5
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 4
- 229940069078 citric acid / sodium citrate Drugs 0.000 description 4
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 238000001033 granulometry Methods 0.000 description 4
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 4
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 4
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 4
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 238000010956 selective crystallization Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- APAPGJJZPJQKJJ-NTCAYCPXSA-N (6e)-2,6-dimethyl-10-methylidenedodeca-2,6-diene Chemical compound CCC(=C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C APAPGJJZPJQKJJ-NTCAYCPXSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000640374 Alicyclobacillus acidocaldarius Species 0.000 description 3
- LVZWSLJZHVFIQJ-UHFFFAOYSA-N Cyclopropane Chemical compound C1CC1 LVZWSLJZHVFIQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 EEH) in a host cell Chemical compound 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 3
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 3
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 3
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 229930009668 farnesene Natural products 0.000 description 3
- CXENHBSYCFFKJS-UHFFFAOYSA-N farnesene group Chemical group C=CC(C)=CCC=C(C)CCC=C(C)C CXENHBSYCFFKJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 3
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 3
- 238000000634 powder X-ray diffraction Methods 0.000 description 3
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 239000007320 rich medium Substances 0.000 description 3
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 3
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 3
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 3
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 3
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- KOICZDDAVPYKKX-AJXWQLJOSA-N (7E)-4,8,12-trimethyltrideca-3,7,11-trien-1-ol Chemical compound CC(=CCCO)CC\C=C(\CCC=C(C)C)/C KOICZDDAVPYKKX-AJXWQLJOSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 2
- 102000055025 Adenosine deaminases Human genes 0.000 description 2
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 2
- 101001091269 Escherichia coli Hygromycin-B 4-O-kinase Proteins 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101001091268 Streptomyces hygroscopicus Hygromycin-B 7''-O-kinase Proteins 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 2
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010027570 Xanthine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- YSNRTFFURISHOU-UHFFFAOYSA-N beta-farnesene Natural products C=CC(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YSNRTFFURISHOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 2
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 101150083127 brox gene Proteins 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 239000002178 crystalline material Substances 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000005888 cyclopropanation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000004332 deodorization Methods 0.000 description 2
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 2
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N dodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 238000013492 plasmid preparation Methods 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- 101150012554 shc gene Proteins 0.000 description 2
- 238000010583 slow cooling Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 2
- 239000012485 toluene extract Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- JSNRRGGBADWTMC-QINSGFPZSA-N (E)-beta-Farnesene Natural products CC(C)=CCC\C(C)=C/CCC(=C)C=C JSNRRGGBADWTMC-QINSGFPZSA-N 0.000 description 1
- HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methylphenyl)sulfonylbutane-1,4-dione Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)C(C(=O)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000589174 Bradyrhizobium japonicum Species 0.000 description 1
- 239000007848 Bronsted acid Substances 0.000 description 1
- 241000244202 Caenorhabditis Species 0.000 description 1
- 241000244203 Caenorhabditis elegans Species 0.000 description 1
- 101100327917 Caenorhabditis elegans chup-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010034145 Helminth Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- 239000001358 L(+)-tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011002 L(+)-tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-LWMBPPNESA-N L-(+)-Tartaric acid Natural products OC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-LWMBPPNESA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000235346 Schizosaccharomyces Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000235013 Yarrowia Species 0.000 description 1
- 241000588902 Zymomonas mobilis Species 0.000 description 1
- ZJYCBQKWCRLSPZ-UHFFFAOYSA-N [Ge+3] Chemical compound [Ge+3] ZJYCBQKWCRLSPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical group 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-CAPXFGMSSA-N allolactose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-CAPXFGMSSA-N 0.000 description 1
- 150000001891 alpha-farnesene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000006646 aminoglycoside phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 229940045719 antineoplastic alkylating agent nitrosoureas Drugs 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 150000004181 beta-farnesene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000010352 biotechnological method Methods 0.000 description 1
- 239000012455 biphasic mixture Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 1
- 239000011928 denatured alcohol Substances 0.000 description 1
- 229940075894 denatured ethanol Drugs 0.000 description 1
- 230000001877 deodorizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- GUJOJGAPFQRJSV-UHFFFAOYSA-N dialuminum;dioxosilane;oxygen(2-);hydrate Chemical class O.[O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3].O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O GUJOJGAPFQRJSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 1
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N ethyl (e)-3-[3-amino-2-cyano-1-[(e)-3-ethoxy-3-oxoprop-1-enyl]sulfanyl-3-oxoprop-1-enyl]sulfanylprop-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C\SC(=C(C#N)C(N)=O)S\C=C\C(=O)OCC NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012527 feed solution Substances 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 150000002597 lactoses Chemical class 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 210000000723 mammalian artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 description 1
- 210000003574 melanophore Anatomy 0.000 description 1
- NQMRYBIKMRVZLB-UHFFFAOYSA-N methylamine hydrochloride Chemical compound [Cl-].[NH3+]C NQMRYBIKMRVZLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 238000005580 one pot reaction Methods 0.000 description 1
- JKDRQYIYVJVOPF-FDGPNNRMSA-L palladium(ii) acetylacetonate Chemical compound [Pd+2].C\C([O-])=C\C(C)=O.C\C([O-])=C\C(C)=O JKDRQYIYVJVOPF-FDGPNNRMSA-L 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000012437 perfumed product Substances 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 210000000745 plant chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 1
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000001144 powder X-ray diffraction data Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000007142 ring opening reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005730 ring rearrangement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000010963 scalable process Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 239000008137 solubility enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000012258 stirred mixture Substances 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000012956 testing procedure Methods 0.000 description 1
- 108700020534 tetracycline resistance-encoding transposon repressor Proteins 0.000 description 1
- JSNRRGGBADWTMC-NTCAYCPXSA-N trans-beta-farnesene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CCC(=C)C=C JSNRRGGBADWTMC-NTCAYCPXSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/04—Oxygen as only ring hetero atoms containing a five-membered hetero ring, e.g. griseofulvin, vitamin C
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q13/00—Formulations or additives for perfume preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D307/92—Naphthofurans; Hydrogenated naphthofurans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/07—Optical isomers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y504/00—Intramolecular transferases (5.4)
- C12Y504/99—Intramolecular transferases (5.4) transferring other groups (5.4.99)
- C12Y504/99017—Squalene--hopene cyclase (5.4.99.17)
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
- Furan Compounds (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Disinfection, Sterilisation Or Deodorisation Of Air (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
Description
本発明は、(-)-アンブロックス(Ambrox)の固体形態、ならびにそれを調製および精製する方法に関する。
AMBROFIX(商標)は、一般式(I)
さらに、ホモファルネソールの生物変換が工業規模で実現されるようになっても、極めて純度の高い3E,7E-ホモファルネソールの費用効率の高いソースが入手可能でなければならない。しかしながら、ホモファルネソールの合成経路は文献(例えば、US 2013/0273619を参照)に記載されているが、出願人の知る限り、費用対効果の高い、現在入手可能な純粋な7E,3E-ホモファルネソールの工業規模のソースは存在しない。
同時係属中の特許出願PCT/EP2014/072891(WO2015/059293として公開)およびPCT/EP2014/072882(WO2015/059290として公開)において、出願人は、7E,3E幾何異性体が豊富な7E,3E/Z-ホモファルネソール混合物を調製する効率的方法について記載している。7E,3E/Z-ホモファルネソール混合物は、ベータ-ファルネセンから調製され、この出発物質に含有されている異性体情報は、7位のホモファルネソール二重結合がE-配置で固定されるというように、保存されている。しかしながら、この洗練された化学も、まだ3E/Z異性体混合物をもたらす。純粋な7E,3E-ホモファルネソールは、合成的には難易度が高いままであり、異性体混合物の経済的に不利な精製という手段によってのみ達成され得る。
それが、以下の回折角2θのピーク、約15.6、16.2、16.7、17.0、17.4、18.3+/-0.2°の少なくとも1つを有するX線回折パターンを呈する;
それが、レーザー粒度測定法により測定すると10~400ミクロンの間の、より具体的には40~400ミクロンの間の、およびより具体的にはさらに100~400ミクロンの間の平均直径を有する細長い結晶を含む;
それが、レーザー粒度測定法により測定すると20~600ミクロンの、より具体的には40~500ミクロンの、およびより具体的にはさらに100~400ミクロンの、好ましくは100ミクロンよりも大きい、より具体的には200ミクロンよりも大きい、およびより具体的にはさらに300ミクロンよりも大きいその最長寸法に沿って測定した長さを有する細長い結晶を含む;および
それが、本明細書下記において用語が定義されているとおり、実質的に無色である。
さらにより具体的な態様において、式(I)で表される化合物の固体形態は、実質的に以下の図1に描画されたとおりの粉末X線回折パターンによって特徴付けられる。
したがって、本発明は、別のその側面において、式(I)に従う生物変換生成物の固体形態を提供する。
本発明の態様において、式(I)に従う生物変換生成物の固体形態は、本明細書における上記で言及した特徴の少なくとも1つを有する。
本発明に従って得られた個々の結晶の特徴的なサイズおよび形状は、以下、図2に示される。
I)生体触媒プロセスの手段によって生物変換培地中で結晶(-)-アンブロックスを形成すること;および
II)生物変換培地から(-)-アンブロックスを分離すること
を含む、前記方法を提供する。
(-)-アンブロックスはまた、濾過および/またはデカンテーションに代替して、またはこれに加えて、ペレット化されてもよい。好ましくは、(-)-アンブロックスの結晶は、濾過および/またはデカンテーションおよび/またはペレット化に先立って融解される。
再結晶化のステップは、より大きくより均一な結晶を形成させることを可能にし、これは分離のステップの効率性をさらに改善することの助けになる。
(-)-アンブロックスの結晶は、10~100ミクロンの間またはそれ以上のメッシュサイズ、好ましくは約50ミクロン、60ミクロン、70ミクロン、80ミクロン、90ミクロンまたは100ミクロンより大きい、を有する好適なフィルター床によって濾過されることができる。
濾過遠心装置は、当分野において広く既知である(例えば、Frederick J. Dechow Novesによる“Separation and Purification Techniques in Biotechnology”の第1章;出版物ISBN No. 0-8155-1197-3を参照)。装置は、分離板遠心機、またはシリンダー型遠心機を包含する、そのあらゆる変型であってもよい。
デカンテーションのプロセスにおいて、生物変換培地は、好適なデカンテーション装置中へと供給され、およびその中で重力加速を施される。ストークスの法則(Stoke's Law)に従って、生物変換培地中におけるより小さくて低密度である粒子状物質、例えば、細胞または細胞残屑は、生物変換プロセスの他の不純物を含有する上清中において懸濁されて保持され、一方、比較的大きくて高密度である(-)-アンブロックスの結晶は、それのために提供された台(bed)の上に沈殿物として沈む。分離は、静的に行うことができ、または、生物変換培地に、6000gまでの、より具体的には約500~1500gの、およびより具体的には約1000gの、およびより具体的にはさらに1170gの、力を施すことによって、それを促進することができる。
デカンテーション装置は、当分野において一般的に既知である。本発明における使用のために好適である具体的な装置は、Guinard Decanter、例えば、モデルD1LC20HCである。生物変換培地は、効率的なスループットを提供するために最適化されたいずれかの望ましい速度で、例えば、500kg/時間までで、および、より具体的には約300~400kg/時間で、装置中へと供給され得る。
より具体的には、結晶は、水、例えば1質量の結晶に対して3質量の水で洗浄される。複数回洗浄(multiple washings)が行われてもよい。
洗浄後、濾液を、または場合によっては上清を、捨てることができる。
しかしながら、より典型的には、(-)-アンブロックスには、香料用途に用いられる前に、溶媒中に溶解されて下記においてより詳細に記述されるとおりのさらなる精製ステップを施すことができる。
(-)-アンブロックスの溶液には、粒子サイズ分離のステップの間に取り除かれなかったかも知れない細胞または細胞残屑などのあらゆる残留粒子状物質を(-)-アンブロックスから取り除いて分離するのに好適なメッシュサイズを有するフィルター上での濾過のステップ、および引き続く洗浄が、施され得る。好適なメッシュサイズは、0.22~1ミクロンの間から始まり、および、150ミクロンまでであり得る。かかる目的のために好適であることが当分野において既知であるあらゆる濾過技術および装置が、本発明に従って採用されてもよい。
任意に、(-)-アンブロックスの溶液に漂白剤を添加することの代替として、溶液を濃縮し、および固形残渣を減圧下で蒸留することもできる。
代替的に、残留固形物は、好適な再結晶化溶媒中に溶解されてもよい。目的のために好適な溶媒は、エタノールなどの水混和性アルカノール、または前記アルカノールと水との混合物である。再結晶化溶媒は、約10~15℃までの徐冷却の前に、約75~80℃まで15分間加熱することができる。結果物たる結晶は、濾過により回収し、および、任意に真空下で(例えば、0.5bar)、乾燥させることができる。
本発明に従う(-)-アンブロックスの固体形態は、高い度合いの明度または明るさ(brightness)、および低い度合いの黄色度を呈する。これは香料用途のために、および特にファインフレグランスまたは化粧品における使用を意図した香料のために、視覚的な美観並びに匂いが重視されること、および香り付きの製品が香料成分の組み込みの結果として退色してはならないことから、重要である。
b*値は、物の青-黄の色相を規定する。b*値が大きければ大きいほど、黄色度の度合いが高くなる。b*値が小さければ小さいほど、青色度の度合いが高くなる。
あらゆる読み取りを行う前に、それのために提供された黒および白の物体を機器の光学センサーの窓上に置くことによって、機器をゼロおよび100%反射について校正すべきである。
本発明の態様において、(-)-アンブロックスの固体形態は、生物変換生成物である。
本発明の態様において、(-)-アンブロックスの固体形態は、本明細書に記載されているとおりの生物変換プロセスに従って形成された生物変換生成物である。
より具体的な態様においては、生体触媒プロセスは、微生物の生体触媒プロセスである。
本発明のまた別の側面において、本明細書に定義されたとおりの(-)-アンブロックスの形態の、フレグランスまたはフレーバー用途における使用が提供される。
本発明に従って、(-)-アンブロックスの結晶形態は、生物変換プロセスによって得られる。条件が、生体触媒が基質を変換させて、生物変換培地中において結晶化される形態で(-)-アンブロックスを生成することができるようなものであるならば、生物変換の正確な性質(例えば、使用する生体触媒、基質、基質の生物変換のための反応条件などの性質)は重大ではない。
SHC生物触媒は、野生型もしくは変異型酵素であるか、またはSHC酵素をコードする遺伝子を発現する微生物、好ましくは組み換え大腸菌微生物である。SHC生物触媒は、これらに限定されないが、精製されたSHC酵素、SHC酵素を含有する粗(crude)抽出物、または(例えば、担体上に)固定化されたSHC酵素などのあらゆる形態で用いることができ、あるいは、生物触媒は、SHC酵素を含有する、無傷の組み換え全細胞および/または断片化細胞または膜分画などの、SHCを産生したもしくは産生する微生物であってもよい。
より具体的な態様においては、ホモファルネソール混合物は、少なくとも7E,3E/7E,3Zの重量で55/45である。
より具体的な態様においては、ホモファルネソール混合物は、少なくとも7E,3E/7E,3Zの重量で70/30である。
さらにより具体的な態様において、ホモファルネソール混合物は、少なくとも7E,3E/7E,3Zの重量で80/20である。
さらにより具体的な態様において、ホモファルネソール混合物は、少なくとも7E,3E/7E,3Zの重量で95/5である。
本発明の具体的態様においては、ホモファルネソール混合物は、ホモファルネソールの7E,3E/Z-幾何異性体からなり、他の幾何異性体を含まない。
酵素に関して用いられる用語「組み換え」は、組み換えDNA技術によって産生される、すなわち所望の酵素をコードする外来性DNAコンストラクトによって形質転換された細胞から産生される、酵素を言うものとする。したがって、用語「組み換えDNA」は、ベクターに、自己複製プラスミドもしくはウイルスに、または原核生物もしくは真核生物のゲノムDNA(もしくは、天然の染色体上の部位以外の位置において、相同な細胞のゲノム)に組み込まれた組み換えDNAを包含する。
好ましくは、細胞はアスペルギルス種または真菌細胞であり、好ましくは、これは属サッカロミセス、カンジタ、クルイベロミセス(Kluyveromyces)、ハンゼヌラ(Hansenula)、シゾサッカロミセス(Schizosaccharomyces)、ヤロウィア(Yarrowia)、ピキア、およびアスペルギルスからなる群から選択され得る。
好ましくは、大腸菌宿主細胞は、産業界および規制当局によって認識されている大腸菌宿主細胞である(大腸菌 K12宿主細胞または例に実証されている大腸菌 BL21宿主細胞を包含するが、これらに限定されない)。
本開示の別の態様においては、LBなどの富栄養培地が用いられた。LB(Luria-Bertani)培地の構成成分は10g/Lのトリプトン、5g/Lの酵母エキストラクト、5g/LのNaClを含む。
ミネラル培地およびM9ミネラル培地の他の例は、例えばUS6,524,831B2およ
びUS2003/0092143A1に開示されている。
野生型SHC酵素についての生物変換反応のpH範囲は、約5.0から7.0、より好ましくは約5.6から約6.2、さらにはより好ましくは約6.0である。
SHC変異型酵素についての生物変換反応のpHは、約4.8~6.4、好ましくは約5.2~6.0である。
[SDS]/[細胞]比は、EEHホモファルネソールに対する生体触媒の比が約2:1であるときに、約10:1~20:1の範囲内、好ましくは約15:1~18:1、好ましくは約16:1である。
EEHホモファルネソール基質に対する生体触媒の比は約0.5:1~2:1の範囲内、いくつかの態様においては2:1、好ましくは約1:1または0.5:1である。
化合物(II)からなるもしくはこれを含む香料成分および香料組成物、ならびにこれを含有する香り付き物品は、本発明の追加の側面を形成する。
(-)-アンブロックスと嗅覚的に許容可能な量の化合物(II)との混合物は、本発明のまた別の側面を形成する。
本発明のさらに別の側面においては、化合物(II)、(III)および(IV)の1種以上を含有する生物変換培地から、(-)-アンブロックスを分離および精製するステップを含む、(-)-アンブロックスの匂いを改善または増強する方法が提供される。
(-)-アンブロックスが結晶化により分離され得る容易性は、(-)-アンブロックスならびに副生成物(II)、(III)および(IV)の沸点が非常に近いために精留などの他の精製技術によって、または溶媒抽出によって、(II)、(III)および/または(IV)を含有する混合物から、(-)-アンブロックスがかかる容易な方法およびかかる高い収率では回収され得ないという観察とは対照的であり得た。
より具体的な態様においては、嗅覚的に純粋な形態の(-)-アンブロックスは、化合物(II)、(III)または(IV)の各々を、4重量%未満、3重量%未満、2重量%未満、1重量%未満、0.9重量%未満、0.8重量%未満、0.7重量%未満、0.6重量%未満、0.5重量%未満、0.4重量%未満、0.3重量%未満、0.2重量%未満、0.1重量%未満もしくは、0.05重量%未満含有する。
より具体的な態様においては、化合物(II)、(III)および(IV)の1種以上を含み、ホモファルネソールを含まない、または実質的に含まない混合物からの(-)-アンブロックスの単離および精製は、(-)-アンブロックスの選択的結晶化により達成される。
結晶形態の(-)-アンブロックスは、本発明のさらに別の側面を形成する。
例1:
ホモファルネソールの調製
一般的な分析条件:
非極性GC/MS:50℃/2分、20℃/分200℃、35℃/分270℃。HP 7890AシリーズGCシステムを有するGC/MSアジレント5975C MSD。非極性カラム:SGEからのBPX5、5%フェニル95%ジメチルポリシロキサン0.22mm×0.25mm×12m。キャリアガス:ヘリウム。インジェクター温度:230℃。スプリット1:50。フロー:1.0ml/分。トランスファーライン:250℃。MS-四重極型:106℃。MSソース:230℃。
水(400ml)中の尿素(175g、2.9mol)およびメチルアミン塩酸塩(198g、2.9mol)の溶液を撹拌下において3.5時間、加熱還流(105℃)する。40℃で、水(200ml)中に溶解したNaNO2(101g、1.45mol)を加える。15分後に、THF(1000ml)を加え、これは透明な二相性混合物をもたらす。濃H2SO4(110g、1.1mol)を0~5℃で加え、1.5時間以内で撹拌する。0~5℃でのさらなる0.5時間後に、2つの透明な相が25℃で分離する。有機相(A)(1065ml、理論上は1.35M)は0~5℃で数日間保存するか、または直ちにシクロプロパン化反応容器に進む。
1gのK2CO3(1g)の添加および40~60mbarでの30cmスチールコイルカラムによる蒸留により、147gのモノシクロプロパン化合物(68%corr)を135~145℃で得る。画分をプールして、純度100%のモノシクロプロパン化合物92gを得る。
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): 5.1 (2 m, 2 H), 4.6 (2 H), 2.2 (2 H), 2.1 (4 H), 2.0 (2 H), 1.7 (s, 3 H), 1.6 (2 s, 6 H), 1.3 (1 H), 0.6 (2 H), 0.45 (2 H) ppm. 13C-NMR (CDCl3, 400 MHz): 150.9 (s), 135.1 (s), 131.2 (s), 124.4 (d), 124.1 (d), 106.0 (t), 39.7 (t), 35.9 (t), 26.7 (t), 25.7 (q), 17.7 (q), 16.0 (d), 6.0 (t) ppm. GC/MS: 218 (2%, M+), 203 (5%, [M - 15]+), 175 (11%), 147 (31%), 134 (15%), 133 (20%), 121 (12%), 107 (55%), 95 (16%), 93 (30%), 91 (20%), 82 (11%), 81 (33%), 79 (42%), 69 (100%), 67 (22%), 55 (20%), 53 (21%), 41 (75%). IR (フィルム): 3081 (w), 2967 (m), 2915 (m), 2854 (m), 1642 (m), 1439 (m), 1377 (m), 1107 (w), 1047 (w), 1018 (m), 875 (s), 819 (m), 629 (w). C16H26の分析計算値: C, 88.00; H, 12.00.結果: C, 87.80; H, 12.01.
圧力管内における(E)-(6,10-ジメチルウンデカ-1,5,9-トリエン-2-イル)シクロプロパン(E-Δファルネセン)(1g、4.6mmol)、ドデカン(0.2g、1.15mmol、内部標準)、およびL-(+)-酒石酸(1g、6.9mmol)の混合物を撹拌下において150℃で加熱する。18時間および(GCによる)完全な変換の後に、混合物を水(50ml)およびトルエン(50ml)に注ぐ。
SHCプラスミド調製および生体触媒産生
SHCプラスミド調製
アリシクロバチルス・アシドカルダリウス スクアレン-ホペン環化酵素(AacSHC)(GenBank M73834, Swissprot P33247)をコードする遺伝子を、プラスミドpET-28a(+)に挿入した。そこでは、それは大腸菌によるタンパク質産生のためのIPTG誘導性T7プロモーターの制御下にある。プラスミドを標準的なヒートショック形質転換プロトコールを用いて大腸菌株BL21(DE3)に形質転換した。
タンパク質産生のためには、富栄養培地(LB培地)または最少培地のいずれかを用いた。M9は最少培地の一例であり、これを用いて成功した。
デフォルトとして選んだ最少培地は、350ml培養のために下記のように調製した:35mlクエン酸/リン酸ストック(KH2PO4 133g/l、(NH4)2HPO4 40g/l、クエン酸.H2O 17g/g、pHは6.3に調整)にH2O 307mlを加え、pHは必要に応じて32%NaOHで6.8に調整した。50%MgSO4 0.850mlをオートクレーブした後に、微量元素溶液(次項の組成物)溶液 0.035ml、チアミン溶液 0.035ml、および20%グルコース 7mlを加えた。
小スケールの生体触媒産生(野生型SHCまたはSHC変異型)、350ml培養(培地に50μg/mlカナマイシンを補った)は、SHC産生プラスミドを含有する大腸菌株BL21(DE3)の前培養から植菌した。細胞は、一定の撹拌(250rpm)をしながら37℃でおよそ0.5の光学密度(OD650nm)まで増殖させた。
20ml 10×リン酸/クエン酸緩衝液
14ml 50%グルコース
0.53ml MgSO4溶液
2ml (NH4)2SO4溶液
0.020ml 微量元素溶液
0.400ml チアミン溶液
0.200ml カナマイシンストック。
一般的に、産生された生体触媒の特異的活性は、全ての他の条件が不変である状態では、富栄養培地と比較して最少培地を用いたときにより高かった。誘導は30または37℃で成功した。誘導が40~43℃でなされたときには、より高い特異的活性の生体触媒が得られるということが着目された。
下記表1は、2つの例について、誘導開始および誘導終了の両方における培養体積、光学密度、および細胞の量と、集められたバイオマスの量(湿重量)とを示している。
MAEQLVEAPAYARTLDRAVEYLLSCQKDEGYWWGPLLSNVTMEAEYVLLCHILDRVDRDRMEKIRRYLLHEQREDGTWALYPGGPPDLDTTIEAYVALKYIGMSRDEEPMQKALRFIQSQGGIESSRVFTRMWLALVGEYPWEKVPMVPPEIMFLGKRMPLNIYEFGSWARATVVALSIVMSRQPVFPLPERARVPELYETDVPPRRRGAKGGGGWIFDALDRALHGYQKLSVHPFRRAAEIRALDWLLERQAGDGSWGGIQPPWFYALIALKILDMTQHPAFIKGWEGLELYGVELDYGGWMFQASISPVWDTGLAVLALRAAGLPADHDRLVKAGEWLLDRQITVPGDWAVKRPNLKPGGFAFQFDNVYYPDVDDTAVVVWALNTLRLPDERRRRDAMTKGFRWIVGMQSSNGGWGAYDVDNTSDLPNHIPFCDFGEVTDPPSEDVTAHVLECFGSFGYDDAWKVIRRAVEYLKREQKPDGSWFGRWGVNYLYGTGAVVSALKAVGIDTREPYIQKALDWVEQHQNPDGGWGEDCRSYEDPAYAGKGASTPSQTAWALMALIAGGRAESEAARRGVQYLVETQRPDGGWDEPYYTGTGFPGDFYLGYTMYRHVFPTLALGRYKQAIERR
MAEQLVEAPAYARTLDRAVEYLLSCQKDEGYWWGPLLSNVTMEAEYVLLCHILDRVDRDRMEKIRRYLLHEQREDGTWALYPGGPPDLDTTIEAYVALKYIGMSRDEEPMQKALRFIQSQGGIESSRVFTRMWLALVGEYPWEKVPMVPPEIMFLGKRMPLNIYEFGSWARATVVALSIVMSRQPVFPLPERARVPELYETDVPPRRRGAKGGGGWIFDALDRALHGYQKLSVHPFRRAAEIRALDWLLERQAGDGSWGGIQPPWFYALIALKILDMTQHPAFIKGWEGLELYGVELDYGGWMFQASISPVWDTGLAVLALRAAGLPADHDRLVKAGEWLLDRQITVPGDWAVKRPNLKPGGFAFQFDNVYYPDVDDTAVVVWALNTLRLPDERRRRDAMTKGFRWIVGMQSSNGGWGAYDVDNTSDLPNHIPFCDFGEVTDPPSEDVTAHVLECFGSFGYDDAWKVIRRAVEYLKREQKPDGSWFGRWGVNYLYGTGAVVSALKAVGIDTREPYIQKALDWVEQHQNPDGGWGEDCRSYEDPAYAGKGASTPSQTAWALMALIAGGRAESEAARRGVQYLVETQRPDGGWDEPYYTGTGYPGDFYLGYTMYRHVFPTLALGRYKQAIERR
ATGGCTGAGCAGTTGGTGGAAGCGCCGGCCTACGCGCGGACGCTGGATCGCGCGGTGGAGTATCTCCTCTCCTGCCAAAAGGACGAAGGCTACTGGTGGGGGCCGCTTCTGAGCAACGTCACGATGGAAGCGGAGTACGTCCTCTTGTGCCACATTCTCGATCGCGTCGATCGGGATCGCATGGAGAAGATCCGGCGGTACCTGTTGCACGAGCAGCGCGAGGACGGCACGTGGGCCCTGTACCCGGGTGGGCCGCCGGACCTCGACACGACCATCGAGGCGTACGTCGCGCTCAAGTATATCGGCATGTCGCGCGACGAGGAGCCGATGCAGAAGGCGCTCCGGTTCATTCAGAGCCAGGGCGGGATCGAGTCGTCGCGCGTGTTCACGCGGATGTGGCTGGCGCTGGTGGGAGAATATCCGTGGGAGAAGGTGCCCATGGTCCCGCCGGAGATCATGTTCCTCGGCAAGCGCATGCCGCTCAACATCTACGAGTTTGGCTCGTGGGCTCGGGCGACCGTCGTGGCGCTCTCGATTGTGATGAGCCGCCAGCCGGTGTTCCCGCTGCCCGAGCGGGCGCGCGTGCCCGAGCTGTACGAGACCGACGTGCCTCCGCGCCGGCGCGGTGCCAAGGGAGGGGGTGGGTGGATCTTCGACGCGCTCGACCGGGCGCTGCACGGGTATCAGAAGCTGTCGGTGCACCCGTTCCGCCGCGCGGCCGAGATCCGCGCCTTGGACTGGTTGCTCGAGCGCCAGGCCGGAGACGGCAGCTGGGGCGGGATTCAGCCGCCTTGGTTTTACGCGCTCATCGCGCTCAAGATTCTCGACATGACGCAGCATCCGGCGTTCATCAAGGGCTGGGAAGGTCTAGAGCTGTACGGCGTGGAGCTGGATTACGGAGGATGGATGTTTCAGGCTTCCATCTCGCCGGTGTGGGACACGGGCCTCGCCGTGCTCGCGCTGCGCGCTGCGGGGCTTCCGGCCGATCACGACCGCTTGGTCAAGGCGGGCGAGTGGCTGTTGGACCGGCAGATCACGGTTCCGGGCGACTGGGCGGTGAAGCGCCCGAACCTCAAGCCGGGCGGGTTCGCGTTCCAGTTCGACAACGTGTACTACCCGGACGTGGACGACACGGCCGTCGTGGTGTGGGCGCTCAACACCCTGCGCTTGCCGGACGAGCGCCGCAGGCGGGACGCCATGACGAAGGGATTCCGCTGGATTGTCGGCATGCAGAGCTCGAACGGCGGTTGGGGCGCCTACGACGTCGACAACACGAGCGATCTCCCGAACCACATCCCGTTCTGCGACTTCGGCGAAGTGACCGATCCGCCGTCAGAGGACGTCACCGCCCACGTGCTCGAGTGTTTCGGCAGCTTCGGGTACGATGACGCCTGGAAGGTCATCCGGCGCGCGGTGGAATATCTCAAGCGGGAGCAGAAGCCGGACGGCAGCTGGTTCGGTCGTTGGGGCGTCAATTACCTCTACGGCACGGGCGCGGTGGTGTCGGCGCTGAAGGCGGTCGGGATCGACACGCGCGAGCCGTACATTCAAAAGGCGCTCGACTGGGTCGAGCAGCATCAGAACCCGGACGGCGGCTGGGGCGAGGACTGCCGCTCGTACGAGGATCCGGCGTACGCGGGTAAGGGCGCGAGCACCCCGTCGCAGACGGCCTGGGCGCTGATGGCGCTCATCGCGGGCGGCAGGGCGGAGTCCGAGGCCGCGCGCCGCGGCGTGCAATACCTCGTGGAGACGCAGCGCCCGGACGGCGGCTGGGATGAGCCGTACTACACCGGCACGGGCTTCCCAGGGGATTGGTACCTCGGCTACACCATGTACCGCCACGTGTTTCCGACGCTCGCGCTCGGCCGCTACAAGCAAGCCATCGAGCGCAGGTGA
MAEQLVEAPAYARTLDRAVEYLLSCQKDEGYWWGPLLSNVTMEAEYVLLCHILDRVDRDRMEKIRRYLLHEQREDGTWALYPGGPPDLDTTIEAYVALKYIGMSRDEEPMQKALRFIQSQGGIESSRVFTRMWLALVGEYPWEKVPMVPPEIMFLGKRMPLNIYEFGSWARATVVALSIVMSRQPVFPLPERARVPELYETDVPPRRRGAKGGGGWIFDALDRALHGYQKLSVHPFRRAAEIRALDWLLERQAGDGSWGGIQPPWFYALIALKILDMTQHPAFIKGWEGLELYGVELDYGGWMFQASISPVWDTGLAVLALRAAGLPADHDRLVKAGEWLLDRQITVPGDWAVKRPNLKPGGFAFQFDNVYYPDVDDTAVVVWALNTLRLPDERRRRDAMTKGFRWIVGMQSSNGGWGAYDVDNTSDLPNHIPFCDFGEVTDPPSEDVTAHVLECFGSFGYDDAWKVIRRAVEYLKREQKPDGSWFGRWGVNYLYGTGAVVSALKAVGIDTREPYIQKALDWVEQHQNPDGGWGEDCRSYEDPAYAGKGASTPSQTAWALMALIAGGRAESEAARRGVQYLVETQRPDGGWDEPYYTGTGFPGDWYLGYTMYRHVFPTLALGRYKQAIERR
7E,3E/Z-ホモファルネソール混合物の生物変換
下記反応条件を用いて生物変換を行った:
反応(合計体積150.1g)は、合計ホモファルネソール146g/lを含有するInforsHT750ml発酵槽において、0.1Mクエン酸/クエン酸ナトリウム緩衝液pH5.4中で、86:14の7E,3E:7E,3Zの混合物であるホモファルネソール基質、細胞250g/l(例2の方法に従って形成された、発酵)、およびSDS1.55%を用いて実施した。反応は35℃で一定の撹拌(900rpm)をしながら実施し、pHコントロールは水中の10から40%クエン酸を用いて行った。
7E,3E/Z-ホモファルネソール混合物の生物変換
下記反応条件を用いて生物変換を行った:
反応(合計体積2.5ml)は、Heidolph Synthesis 1装置上の11mlガラス反応容器において0.1Mクエン酸/クエン酸ナトリウム緩衝液中で、50℃およびpH6.0で激しい振盪(800rpm)をしながら実施した。反応は、1g/lのE,E-ホモファルネソール(86:14のEE:EZ比のホモファルネソールストックから)、例2に記載されている方法に従って野生型SHCを30のOD650nmまで生成した細胞、および0.12%SDSを含有した。反応開始の約48時間後に、E,E-ホモファルネソールの変換は約60%であった。
一般的な下流プロセスは、参考として、以下、図4に記述される。
第1のステップにおいて、生物変換培地は、約15分間の間、約80~85℃の温度まで加熱され、(-)-アンブロックスの結晶を融解させる。この段階では液体である(-)-アンブロックスは、反応培地を1時間あたり約5℃の速度で、20℃の温度まで冷却することによって、再結晶化される。
エタノール溶液を、真空下で、乾燥するまで濃縮した。濃縮物を、工業グレード(industrial grade)の変性エタノール中に再溶解させて、漂白剤(Tonsil 412FF)とそれに加えて珪藻土濾過剤(CELATOM FW 50)を、撹拌下において添加した。混合物を、55~65℃まで冷却する前に、撹拌下において30分間80~85℃で還流した。固形物を取り除くために、混合物を25ミクロンフィルターによって濾過した。
下流プロセシング:(-)-アンブロックスを生物変換培地から選択的に分離する手段としての固-液分離とトルエン抽出との比較
200mlの不活性化された生物変換培地を、MTBEで抽出し、およびガスクロマトグラフィーによって分析した。
200mlの不活性化された生物変換培地を、液相から固形物を分離するために遠心した(Sorvall GS3、5000rpm、10分、10℃)。これは、およそ120mlの液体上清から80mlの固形ペレットを分離させた。上清を取り除き、MTBEで抽出し、およびガスクロマトグラフィーによって分析した。同様に、ペレットをMTBEで抽出し、およびMTBE抽出物をガスクロマトグラフィーによって分析した。
生物変換培地の200mlを、45mlトルエンによって6×抽出した。有機相を集め、および、あらゆる細胞残屑を取り除くために濾過した。トルエンを剥がし取り、および、ガスクロマトグラフィーによって分析する前に、残渣をMTBE中に溶解させた。
GC分析結果は、以下、図3に描画される。結果から、遠心により集められた固相は、極めて高いレベルの(-)-アンブロックス、および極めて少ない量の副生成物II、IIIおよびIVを含有したことが明らかである。他方で、トルエン抽出物は、未加工の生物変換培地と比較して(-)-アンブロックスを富化されていなかった。結果は、(-)-アンブロックスが生物変換培地から結晶化される一方で、構造的に関連する化合物(II)、(III)および(IV)が液相中に残ることを示唆する。固相の分析において見出された(II)、(III)および(IV)の残渣は、単に固相の徹底的な洗浄によって取り除くことができた残渣であった。
官能分析
目的:粗物質中および結晶化された物質中において形成された(-)-アンブロックスならびに化合物(II)、(III)および(IV)の官能分析を行うこと。
E,E-ホモファルネソールの生体内変換は、(-)-アンブロックスおよび化合物(IV)をもたらす。
E,Z-ホモファルネソールの生体内変換は、マクロ環エーテル化合物(II)およびエピ-アンブロックス化合物(III)をもたらす。
(-)-アンブロックスの粗混合物は、それぞれ87.1重量%、2.8重量%、2.5重量%、および7.6重量%の量で存在する、所望の(-)-アンブロックス、化合物(II)、(III)および(IV)を含む。
(-)-アンブロックス:匂い閾値 0.2ng/l。
化合物(IV):弱い、IsoE、ウッディー、GC検出閾値 5~10ng。
化合物(II):「無臭」(GC閾値 >500ng)。
化合物(III):(-)-アンブロックスよりも約10×高いGC閾値(およそ2ng)。
3つの副生成物(化合物II、III、およびIV)の官能分析は、(-)-アンブロックスからのものよりも弱い匂いを示す。
事実、エピ-アンブロックス(化合物III)の匂いは、(-)-アンブロックスよりも約10倍弱く、それが本質的に無臭であるということを示唆している。
微生物発酵プロセスにより形成された(-)-アンブロックスの固体形態のX線特徴付け
STOE STADI P X線回折計を使用して、粉末X線回折パターンを取得した。
実験パラメータ:パターン計測を、2θ=約4°~26°の間で行った。決定した回折角の正確度は、およそ+/-0.2° 2θである。
Claims (11)
- 式(I)
で表される(-)-アンブロックスを含有し、
5重量%未満の、化合物(II)または(IV)、および化合物(III)
を含有する、固体物。 - 化合物(II)または化合物(IV)、および化合物(III)を3重量%含有する、請求項1に記載の固体物。
- 化合物(II)または化合物(IV)、および化合物(III)を2重量%含有する、請求項2に記載の固体物。
- 式(I)
で表される(-)-アンブロックス、
少なくとも1種の他の香料成分、および
嗅覚的に許容可能な量の、化合物(II)または化合物(IV)、および化合物(III)
を含む香料組成物。 - 請求項1~3のいずれか一項に記載の固体物を調製する方法であって、
(-)-アンブロックスの固体物を生物変換プロセスによって形成し、前記方法は、
I)生体触媒プロセスの手段によって生物変換培地中で結晶(-)-アンブロックスを形成すること;および
II)生物変換培地から(-)-アンブロックスを分離すること
のステップを含み、
生物変換プロセスが、ホモファルネソールの7E,3Eおよび7E,3Z幾何異性体の混合物を含むホモファルネソールの酵素触媒環化反応であり、
環化反応を、ホモファルネソールを(-)-アンブロックスに生物変換することができる野生型スクアレンホペン環化酵素または野生型スクアレンホペン環化酵素の変異型の存在下で行う、前記方法。 - 分離のステップが、濾過のステップであるか、デカンテーションのステップであるか、または濾過のステップおよびデカンテーションのステップの両方の組み合わせである、請求項5に記載の方法。
- 分離のステップに先立って、結晶(-)-アンブロックスを融解させるために生物変換培地を少なくとも55℃の温度まで加熱し;およびその後、(-)-アンブロックスを生物変換培地から再結晶化するように、ゆっくりと冷却する、請求項5または6に記載の方法。
- 回収した(-)-アンブロックスの結晶を溶媒中で可溶化し、蒸発または再結晶化により溶媒を取り除くことによって固体形態にされる前に、溶液をサブミクロンフィルターに通して濾過し、生物変換培地中に存在していたあらゆる残留粒子状物質を取り除く、請求項5~7のいずれか一項に記載の方法。
- 結晶の洗浄を、水、水混和性溶媒、またはそれらの混合物で洗浄する、請求項5~8のいずれか一項に記載の方法。
- (-)-アンブロックスの回収を、フィルターまたはデカンター装置またはベルトフィルターからのその機械的除去、収集および乾燥により達成する、請求項5~9のいずれか一項に記載の方法。
- 可溶化した(-)-アンブロックス結晶の溶液を、漂白剤と接触させる、請求項5~10のいずれか一項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (8)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/EP2016/058987 WO2016170099A1 (en) | 2015-04-24 | 2016-04-22 | Enzymes and applications thereof |
PCT/EP2016/058997 WO2016170106A1 (en) | 2015-04-24 | 2016-04-22 | Process for isolating and purifying ambrox |
EPPCT/EP2016/058987 | 2016-04-22 | ||
EPPCT/EP2016/058997 | 2016-04-22 | ||
GBGB1618090.3A GB201618090D0 (en) | 2016-10-26 | 2016-10-26 | Product |
GB1618090.3 | 2016-10-26 | ||
JP2018555127A JP7407513B2 (ja) | 2016-04-22 | 2017-04-20 | 生体触媒の存在下におけるホモファルネソールの生物変換によって形成された(-)-アンブロックス(Ambrox)の固体形態 |
PCT/EP2017/059327 WO2017182542A1 (en) | 2016-04-22 | 2017-04-20 | A solid form of (-)-ambrox formed by a bioverversion of homofarnesol in the presence of a biocatalyst |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018555127A Division JP7407513B2 (ja) | 2016-04-22 | 2017-04-20 | 生体触媒の存在下におけるホモファルネソールの生物変換によって形成された(-)-アンブロックス(Ambrox)の固体形態 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022061977A JP2022061977A (ja) | 2022-04-19 |
JP7343564B2 true JP7343564B2 (ja) | 2023-09-12 |
Family
ID=57738295
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018555127A Active JP7407513B2 (ja) | 2016-04-22 | 2017-04-20 | 生体触媒の存在下におけるホモファルネソールの生物変換によって形成された(-)-アンブロックス(Ambrox)の固体形態 |
JP2021205922A Active JP7343564B2 (ja) | 2016-04-22 | 2021-12-20 | 生体触媒の存在下におけるホモファルネソールの生物変換によって形成された(-)-アンブロックス(Ambrox)の固体形態 |
JP2023138844A Pending JP2023179438A (ja) | 2016-04-22 | 2023-08-29 | 生体触媒の存在下におけるホモファルネソールの生物変換によって形成された(-)-アンブロックス(Ambrox)の固体形態 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018555127A Active JP7407513B2 (ja) | 2016-04-22 | 2017-04-20 | 生体触媒の存在下におけるホモファルネソールの生物変換によって形成された(-)-アンブロックス(Ambrox)の固体形態 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023138844A Pending JP2023179438A (ja) | 2016-04-22 | 2023-08-29 | 生体触媒の存在下におけるホモファルネソールの生物変換によって形成された(-)-アンブロックス(Ambrox)の固体形態 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US10844412B2 (ja) |
EP (1) | EP3445755A1 (ja) |
JP (3) | JP7407513B2 (ja) |
CN (2) | CN115819385A (ja) |
BR (1) | BR112018071284A2 (ja) |
CO (1) | CO2018011292A2 (ja) |
GB (1) | GB201618090D0 (ja) |
IL (4) | IL310388A (ja) |
MX (1) | MX2018012836A (ja) |
RU (1) | RU2018136063A (ja) |
SG (1) | SG11201808643SA (ja) |
WO (1) | WO2017182542A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201618090D0 (en) * | 2016-10-26 | 2016-12-07 | Givaudan Sa | Product |
GB201917694D0 (en) | 2019-12-04 | 2020-01-15 | Givaudan Sa | Enzyme mediated process |
GB202011823D0 (en) | 2020-07-30 | 2020-09-16 | Givaudan Sa | Method |
WO2023175123A1 (en) | 2022-03-17 | 2023-09-21 | Givaudan Sa | Shc enzymes and enzyme variants |
WO2024097746A1 (en) * | 2022-11-01 | 2024-05-10 | Conagen Inc. | Alkene cyclopropanation with nickel catalyst enhancer and improved rearrangement reaction |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20130273619A1 (en) | 2012-04-16 | 2013-10-17 | Basf Se | Process for the Preparation of (3E, 7E)-Homofarnesol |
JP2015518477A (ja) | 2012-04-16 | 2015-07-02 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアBasf Se | (3e,7e)−ホモファルネソールの改良製造方法 |
Family Cites Families (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE4123767C2 (de) * | 1991-07-18 | 1993-11-18 | Henkel Kgaa | Verfahren zur Herstellung von Stereoisomerengemischen von 8,12-Oxido-13,14,15,16-tetranorlabdan |
DE69213916T2 (de) * | 1991-12-29 | 1997-03-06 | Kuraray Co | Verfahren zur Herstellung von L-Ambrox |
DE19649655A1 (de) | 1996-11-29 | 1998-06-04 | Haarmann & Reimer Gmbh | Syntheseenzyme für die Herstellung von Coniferylalkohol, Coniferylaldehyd, Ferulasäure, Vanillin und Vanillinsäure und deren Verwendung |
US6180121B1 (en) * | 1998-03-05 | 2001-01-30 | Colgate-Palmolive Company | Fragrance enhancing compositions for cosmetic products |
DE19960106A1 (de) | 1999-12-14 | 2001-06-21 | Haarmann & Reimer Gmbh | Enzyme und Gene für die Herstellung von Vanillin |
US20040265850A1 (en) | 2002-12-02 | 2004-12-30 | Hua Wang | Rapid detection of microorganisms |
WO2004063699A2 (en) | 2002-12-02 | 2004-07-29 | The Ohio State University Research Foundation | Rapid detection of microorganisms |
JP5236233B2 (ja) * | 2007-09-04 | 2013-07-17 | 花王株式会社 | (−)−アンブロキサンの製造方法 |
EP2438102B1 (de) | 2009-06-05 | 2013-05-01 | Basf Se | Verbundteile enthaltend plastisch verformbaren polyurethanhartschaumstoff, klebstoff und abdeckmaterial |
WO2010139719A2 (de) | 2009-06-05 | 2010-12-09 | Basf Se | Biokatalytische herstellung von ambroxan |
US8935839B2 (en) | 2010-02-19 | 2015-01-20 | Owen V. Burt | Ballistic enhanced battering ram |
EP2640835B1 (de) | 2010-11-17 | 2019-05-22 | Basf Se | Verfahren zur biokatalytischen cyclisierung von terpenen und darin einsetzbare cyclase-mutanten |
US8932839B2 (en) | 2010-11-17 | 2015-01-13 | Basf Se | Method for the biocatalytic cyclization of terpenes and cyclase mutants employable therein |
JP2013132226A (ja) * | 2011-12-26 | 2013-07-08 | Kao Corp | (−)−3a,6,6,9a−テトラメチルドデカヒドロナフト[2,1−b]フランの製造方法 |
CN105579585B (zh) | 2013-09-05 | 2019-03-15 | 国立大学法人新潟大学 | 龙涎香醇的制造方法 |
GB201318894D0 (en) | 2013-10-25 | 2013-12-11 | Givaudan Sa | Improvements in or relating to organic compounds |
GB201318886D0 (en) | 2013-10-25 | 2013-12-11 | Givaudan Sa | Improvements i or relating to organic compounds |
GB201507170D0 (en) * | 2015-04-24 | 2015-06-10 | Givaudan Sa | Process |
GB201507207D0 (en) * | 2015-04-24 | 2015-06-10 | Givaudan Sa | Enzymes and applications thereof |
CN105037308B (zh) | 2015-07-06 | 2017-06-06 | 四川中烟工业有限责任公司 | 一种制备降龙涎香醚的方法 |
MX361536B (es) * | 2015-10-23 | 2018-12-10 | Univ Michoacana De San Nicolas De Hidalgo | Proceso de sintesis de ambrox a partir de ageratina jocotepecana. |
CN105418566B (zh) * | 2015-11-27 | 2018-02-09 | 北京工商大学 | 降龙涎醚的一种合成方法 |
GB201618090D0 (en) * | 2016-10-26 | 2016-12-07 | Givaudan Sa | Product |
-
2016
- 2016-10-26 GB GBGB1618090.3A patent/GB201618090D0/en not_active Ceased
-
2017
- 2017-04-20 CN CN202211391612.9A patent/CN115819385A/zh active Pending
- 2017-04-20 RU RU2018136063A patent/RU2018136063A/ru not_active Application Discontinuation
- 2017-04-20 US US16/095,444 patent/US10844412B2/en active Active
- 2017-04-20 SG SG11201808643SA patent/SG11201808643SA/en unknown
- 2017-04-20 EP EP17721968.0A patent/EP3445755A1/en active Pending
- 2017-04-20 JP JP2018555127A patent/JP7407513B2/ja active Active
- 2017-04-20 IL IL310388A patent/IL310388A/en unknown
- 2017-04-20 MX MX2018012836A patent/MX2018012836A/es unknown
- 2017-04-20 IL IL290606A patent/IL290606B2/en unknown
- 2017-04-20 WO PCT/EP2017/059327 patent/WO2017182542A1/en active Application Filing
- 2017-04-20 BR BR112018071284-1A patent/BR112018071284A2/pt unknown
- 2017-04-20 CN CN201780024917.7A patent/CN109071480B/zh active Active
-
2018
- 2018-10-15 IL IL262393A patent/IL262393B/en unknown
- 2018-10-22 CO CONC2018/0011292A patent/CO2018011292A2/es unknown
-
2020
- 2020-10-14 US US17/070,385 patent/US11401541B2/en active Active
-
2021
- 2021-12-20 JP JP2021205922A patent/JP7343564B2/ja active Active
-
2022
- 2022-02-25 US US17/680,840 patent/US11773419B2/en active Active
-
2023
- 2023-05-23 US US18/322,167 patent/US20230357809A1/en active Pending
- 2023-07-09 IL IL304330A patent/IL304330B2/en unknown
- 2023-08-29 JP JP2023138844A patent/JP2023179438A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20130273619A1 (en) | 2012-04-16 | 2013-10-17 | Basf Se | Process for the Preparation of (3E, 7E)-Homofarnesol |
JP2015518477A (ja) | 2012-04-16 | 2015-07-02 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアBasf Se | (3e,7e)−ホモファルネソールの改良製造方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Helv. Chim. Acta,1985年,68,2022-2029 |
Helv. Chim. Acta,1990年,73,1935-1947 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3445755A1 (en) | 2019-02-27 |
US10844412B2 (en) | 2020-11-24 |
US20230357809A1 (en) | 2023-11-09 |
CN109071480B (zh) | 2022-11-29 |
IL310388A (en) | 2024-03-01 |
US11401541B2 (en) | 2022-08-02 |
CN109071480A (zh) | 2018-12-21 |
RU2018136063A3 (ja) | 2020-07-13 |
IL262393B (en) | 2022-03-01 |
IL290606A (en) | 2022-04-01 |
IL290606B2 (en) | 2024-02-01 |
SG11201808643SA (en) | 2018-11-29 |
CO2018011292A2 (es) | 2018-11-13 |
US20220177935A1 (en) | 2022-06-09 |
IL304330A (en) | 2023-09-01 |
US20210040521A1 (en) | 2021-02-11 |
RU2018136063A (ru) | 2020-05-22 |
JP7407513B2 (ja) | 2024-01-04 |
JP2019521952A (ja) | 2019-08-08 |
IL304330B1 (en) | 2024-03-01 |
BR112018071284A2 (pt) | 2019-02-12 |
CN115819385A (zh) | 2023-03-21 |
JP2023179438A (ja) | 2023-12-19 |
IL262393A (en) | 2018-12-31 |
MX2018012836A (es) | 2019-03-11 |
IL304330B2 (en) | 2024-07-01 |
IL290606B1 (en) | 2023-10-01 |
US20190136275A1 (en) | 2019-05-09 |
JP2022061977A (ja) | 2022-04-19 |
GB201618090D0 (en) | 2016-12-07 |
WO2017182542A1 (en) | 2017-10-26 |
US11773419B2 (en) | 2023-10-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7343564B2 (ja) | 生体触媒の存在下におけるホモファルネソールの生物変換によって形成された(-)-アンブロックス(Ambrox)の固体形態 | |
JP7246133B2 (ja) | アンブロクスを単離および精製するためのプロセス | |
JP2023015116A (ja) | 酵素およびその適用 | |
JP2023522021A (ja) | アンバーケタールおよびアンバーケタールホモログを製造するための酵素媒介プロセス | |
JP2023504855A (ja) | スクアレンホペンシクラーゼ(shc)バリアント | |
JP5474360B2 (ja) | 新規大環状ラクトン | |
WO2019086583A1 (en) | Production of macrocyclic ketones in recombinant hosts |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220119 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220119 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230206 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230508 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230807 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230831 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7343564 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |