JP7335260B2 - 非天然アマニチン類抗体複合物 - Google Patents

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Description

本発明は、二環式オクタペプチド系誘導体に関する。この化合物は、特殊な化学構造で対応する標的結合基に結合し、その構造が血漿において安定するが、特定の生物学的環境において有効成分の薬物に分解され、標的細胞に対する殺傷性の最大化および非標的細胞に対する有毒な副作用の最小化を達成し、多種類の悪性腫瘍の治療に適用できる。
アマニチン（ａｍａｎｉｔｉｎ）は、劇毒キノコから分離されたアマトキシンの一種であり、８つのアミノ酸から構成される二環式ペプチドである。分離精製された天然アマニチンには、α－アマニチン、β－アマニチン、γ－アマニチン、ε－アマニチン、アマニン（ａｍａｎｉｎ）、アマニンアミド（ａｍａｎｉｎａｍｉｄｅ）、アマヌリン（ａｍａｎｕｌｌｉｎ）、アマヌリン酸（ａｍａｎｕｌｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）およびプロアマヌリン（ｐｒｏａｍａｎｕｌｌｉｎ）の９種類がある。そのうち、α－アマニチンおよびβ－アマニチンは死亡を引き起こす主な毒素である。アマニチンは、遅効性毒素であり、真核生物のＲＮＡポリメラーゼＩＩおよびＲＮＡポリメラーゼＩＩＩの転写を阻害し、タンパク質欠失および細胞死を引き起こすことができる。このような毒素は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩに対する阻害性が極めて高く、ＫＤが３ｎＭに達することができ、消化管の腸肝循環により繰り返し体内に吸収され、人体の肝臓、腎臓、心臓、肺などの臓器に継続的で深刻な損傷を引き起こす。
アマニチンは大きな生体分子担体（例えば、抗体分子）と結合した後、その毒性が大幅に低下するかまたは無毒になる。特定の生理的環境において生体分子担体が切除された後にのみ、アマニチンはその細胞毒性を示す。
Ｔｈｅｏｄｏｒ Ｗｉｅｌａｎｄらの研究により、天然アマニチン中のスルホキシド構造を硫黄元素に変更した後、形成された非天然アマニチンの細胞に対する毒性の変化は大きくないことが分かった。ドイツのハイデルベルク製薬株式会社は、天然アマニチン分子をモノクローナル抗体と結合して抗腫瘍活性を有する薬物分子を得た。
本発明では、毒性が天然アマニチンに類似した非天然アマニチンを、バイオ医薬品に許容される連結構造を通じて標的に結合可能な生物分子に結合することにより、血漿中で安定し、細胞中で腫瘍細胞を効率的に殺すことができる化合物が得られる。
定義
この技術分野の標準的な慣行によれば、化学式および表に用いる符号
は、部分または置換基として化合物構造の核心または核の結合部位との結合を示す。
この技術分野の標準的な慣行によれば、ヘテロ（原子、アルキル基、アリール基、環式基）とは、炭素原子以外の他の原子を含む化学構造を指す。
本発明は、二環式オクタペプチド類アマニチン誘導体と生体高分子との複合体を提供する。この複合体は、血液循環システムにおいて安定し、標的細胞によりエンドサイトーシスされた後に切断され、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤であるアマニチン誘導体を放出し、真核生物ｍＲＮＡの合成に対する特異的阻害により細胞に対する強い毒性を生じる。具体的には、構造式（Ｉ）の毒素複合体である。
式中、Ｒ１はＨ、－ＯＨまたは－Ｏ－Ｌ－Ａであり、
Ｒ２はＨ、－ＯＨであり、
Ｒ３はＯＣ１～６アルキル基であり、
Ｒ４はＨまたは－Ｌ－Ａであり、
Ｒ５は－ＮＨ２、－ＯＨ、－ＮＨ－Ｌ－Ａまたは－Ｏ－Ｌ－Ａである。
Ｏは酸素原子、Ｎは窒素原子、Ｈは水素原子である。
Ａは標的部位に結合する生体高分子部分である。
好ましい実施形態において、前記Ｌは以下の構造を含む。
式中、Ｌ１は生体高分子Ａに結合されるリンカーであり、Ｌ２はスペーサーであって、Ｌ１とＡＡの間に結合される断片であり、ｍは１－６の整数であり、Ｌ３は構造式（Ｉ）で表される毒素に結合され、ＡＡは１～６個のアミノ酸を含んでなる断片であり、ｎは０または１である。
好ましい実施形態において、前記Ａは、標的部位に結合される生体高分子部分であり、抗体またはその抗原結合断片、抗体様タンパク質、核酸アプタマーなどを含む。
好ましい実施形態において、前記標的部位に結合される生体高分子は、抗体またはその抗原結合断片であり、キメラ抗体、脱免疫化抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、四重特異性抗体およびナノ抗体から選択される。
より好ましくは、前記抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ'）、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖおよびジスルフィド結合により連結されたＦｖ（ｄｓＦｖ）からなる群より選択される。
好ましい実施形態において、前記Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５のうちの１つのみが－Ｌ－Ａ構造を有する。
好ましい実施形態において、前記Ｌ１は生体高分子Ａに結合されるリンカーであり、
などから選択され、波線で生体高分子Ａに結合される。
好ましい実施形態において、前記Ｌ２はスペーサーであり、置換または非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基、置換または非置換のＣ３－Ｃ２０シクロアルキル基、置換または非置換のＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル基、置換または非置換のＣ５－Ｃ２０アリール基、置換または非置換のＣ５－Ｃ２０ヘテロアリール基、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａ－（ａは１～２０の整数である）などから選択される１種または複数種の組み合わせであり、スペーサーとスペーサーの間は任意の化学結合により結合される。
さらに好ましくは、前記置換基は、ヒドロキシル基、チオール基、ハロゲン、カルボキシル基、アミノ基、リン酸基、ニトロ、シアノ、スルホン酸基、置換または非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基などから選択される１種または複数種の組み合わせである。
さらに好ましくは、前記置換基は、ヒドロキシル基、チオール基、ハロゲン、カルボキシル基、アミノ基、リン酸基、ニトロ、シアノ、スルホン酸基などから選択される１種または複数種の組み合わせである。
好ましい実施形態において、ＡＡは１～６個のアミノ酸から構成される断片であり、前記アミノ酸はＬ－アミノ酸であり、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、セリン、チロシン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、トレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニンおよびヒスチジンなどから選択される。
さらに好ましくは、前記アミノ酸は、フェニルアラニン、シトルリン、バリン、リジン、セリン、グルタミン酸、アスパラギン酸またはグリシンである。
好ましい実施形態において、前記Ｌ３は、
または毒素に結合される任意の連結基などから選択される。
波線はＡＡに結合され、アスタリスクは構造式（Ｉ）で表される毒素に結合される。
さらに好ましくは、前記Ｌ４は、カルボニル基または単結合である。
さらに好ましくは、前記Ｒ６、Ｒ７は、それぞれ独立して水素、Ｃ１－Ｃ６アルキル基などから選択される。
さらに好ましくは、前記Ｌ５はＣ２－Ｃ１２アルキル基である。
好ましい実施形態において、前記薬物は、以上のいずれかの構造式（Ｉ）の構造を有する毒素複合体またはその塩を含む。
好ましい実施形態において、抗腫瘍薬または抗がん薬の製造における以上のいずれかの構造式（Ｉ）の毒素複合体またはその塩の使用。
好ましい実施形態において、前記抗腫瘍薬または抗がん薬は、抗肺がん薬、抗腎臓がん薬、抗尿道がん薬、抗結腸直腸がん薬、抗前立腺がん薬、抗神経膠腫薬、抗卵巣がん薬、抗膵がん薬、抗乳がん薬、抗黒色腫薬、抗肝がん薬、抗膀胱がん治療薬、抗悪性リンパ腫薬、抗白血病薬、抗胃がん薬または抗食道がん薬である。
略語と符号
ｇ：グラム
ｍｇ：ミリグラム
ｍｉｎ：分間
ｍＬ：ミリリットル
ｍｏｌ：モル
℃：摂氏度
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル
ＰｙＢＯＰ：ヘキサフルオロリン酸（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウム
Ｃｉｔ：シトルリン
ＣＯ２：二酸化炭素
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＰＢＳ：ダルベッコリン酸緩衝液
ＤＴＰＡ：ジエチルトリアミン五酢酸
ＤＴＴ：ジチオスレイトール
ＥＡ：酢酸エチル
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
ＦＢＳ：胎児ウシ血清
ＨＡＴＵ：Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩
Ｈ２Ｏ：水
ＨＯＢｔ：１－ヒドロキシルベンゾトリアゾール
ｍＡｂ：モノクローナル抗体
ＭＥＭ：最少必須培地
ＭＴＳ：３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－５－（３－カルボキシメチル）－２－（４－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾール、内塩
ＭＴＴ：３－（４，５－ジメチルチアゾール－２）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド
ＰＡＢ：ｐ－アミノベンジルオキシ
ＰＢＳ：リン酸緩衝液
Ｓｏｄｉｕｍ Ｐｙｒｕｖａｔｅ：ピルビン酸ナトリウム
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
Ｔｒｉｓ：トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
Ｖａｌ：バリン
Ｔｒｔ－Ｃｌ：トリフェニルクロロメタン
ＴＢＴＵ：Ｏ－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート
ＨＯＢＴ：１－ヒドロキシルベンゾトリアゾール
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＢＳ－Ｃｌ：ｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン
ＨＯＳｕ：Ｎ－ヒドロキシルスクシンイミド
Ｎａ２ＣＯ３：炭酸ナトリウム
ＥＤＣＩ：１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩
ＣｕＢｒ：臭化第一銅
以下、具体的な実施例により本発明をさらに説明する。これらの実施例は本発明を説明するものにすぎず、本発明の範囲を制限しない。別段の定義がない限り、本明細書で使用される専門用語および科学用語はすべて、当業者によく知られている用語と同じ意味を持っている。さらに、記載される内容と類似または同等の任意の方法および材料は本発明の方法に適用することができる。本明細書に記載の好ましい実施方法と材料は例示的なものに過ぎない。
実施例１：低分子ｐａｙｌｏａｄ ａｍａ－０３０１の合成
１）中間体０８の固相合成
Ｎ－フルオレニルメトキシカルボニル－Ｏ－ｔｅｒｔ－ブチル－Ｌ－ヒドロキシプロリンプリロード樹脂を出発原料とし、２０％ピペリジン（１ｇ樹脂に２０ｍｌの２０％ピペリジンが添加されている）で保護基Ｆｍｏｃを脱保護した後、ＰＨが中性になるまでＤＭＦで５回洗浄し、ＤＭＦを溶液（２０ｍｌ／ｇ）とし、順にＦｍｏｃ－Ｎ－プロピニル－Ｌ－アスパラギン（Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ）（３ｅｑ）、ＴＢＴＵ（２．５ｅｑ）、ＨＯＢＴ（１．８ｅｑ）、ＤＩＰＥＡ（６ｅｑ）を加え、室温（２８℃）で２時間反応させた後、ＤＭＦ（毎回１ｇ樹脂あたり２０ｍｌＤＭＦ）で３回洗浄し、さらに上記操作で次のアミノ酸を結合し、完全に結合した後、１％ＴＦＡジクロロメタン溶液（毎回１ｇ樹脂あたり２０ｍｌの１％ＴＦＡ ５ｍｉｎ、３回繰り返し）で樹脂から切断し、回転蒸留により溶液を除去し、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルを加え、撹拌して晶析させ、化合物０８を得た。総収率は約４３％であり、ＨＰＬＣ純度は８１．３％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ]＋１２４４．６５２１
２）化合物０９の合成
８ｇ化合物０８の粗生成物をＴＦＡ（１０ｍｌ／ｇ）で溶解した後、室温で５時間撹拌しながら反応させ、５０℃でＴＦＡを減圧除去し、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、純粋な化合物０９を約３．８ｇ得た。収率は７１％、純度は９６．４％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ]＋８２８．３２４１
３）化合物１４の合成
２５０ｍｌの一口フラスコに（４Ｓ）－ヒドロキシルイソロイシン２．９４ｇ、１，４－ジオキサン４０ｍｌ、飽和炭酸ナトリウム溶液を加え、均一に撹拌し、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕをバッチで加え、１０ｍｉｎ後に、引き続き室温で１２時間撹拌しながら反応させ、原料が完全に反応した後、反応液に５０ｍｌ水を加え、５％のクエン酸溶液でＰＨを約４に調整し、酢酸エチルで３回抽出し（毎回５０ｍｌ）、有機層を収集し、飽和食塩水５０ｍｌで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して淡黄色油状物を得た。精製せずにそのまま次の反応に供した。収率＞１００％であった。
４）化合物１５の合成
前記化合物１３の粗生成物を４０ｍｌＤＭＦで溶解させた後、イミダゾール２．６８ｇ（２ｅｑ）を加え、ＴＢＳ－Ｃｌをバッチで加えた後、室温で１２時間撹拌し、原料が完全に反応した後、水５０ｍｌ、酢酸エチル５０ｍｌを加え、撹拌し、有機層を分離し、水層を酢酸エチルで２回抽出し（毎回５０ｍｌ）、有機層を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、淡黄色油状物を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により精製し、油状物４．５ｇを得た。二段階収率は約４６．６％であった。
５）化合物１０の合成
２５０ｍｌ一口フラスコに順に化合物１４、ＨＯＳｕ（１．２３ｇ，１．１５ｅｑ）、ＤＣＣ（２．２３ｇ，１．１５ｅｑ）、ＴＨＦ５０ｍｌを加え、窒素ガスの保護下で、室温で６時間撹拌し、完全に反応した後、水５０ｍｌ、酢酸エチル５０ｍｌを加え、１０ｍｉｎ撹拌した後、有機層を分離し、水層を酢酸エチルで２回抽出し（毎回５０ｍｌ）、有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、淡黄色油状物を得た。分取液体クロマトグラフィーにより精製し、白色泡沫状固体約３．２４ｇを得た。収率は６０％であった。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：０．０８（ｓ，６Ｈ），０．８６（ｓ，９Ｈ），０．９８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），１．０６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝５．６），１．９５（ｔ，Ｊ＝１０．８），２．８３（ｓ，４Ｈ），４．２１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，８．０Ｈｚ），４．３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２Ｈｚ，４Ｈｚ），４．６７～４．７３（ｍ，１Ｈ），７．３１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３４～７．４６（ｍ，２Ｈ），７．７０～７．７６（ｍ，２Ｈ），７．８９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝１２．０），８．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）；ＭＳ：５８１．３４［Ｍ＋Ｈ］
６）化合物１１の合成
０．５ｇ化合物０９を乾燥ＤＭＦ１．５ｍｌで溶解させた後、化合物１０（７０１ｍｇ，２ｅｑ）、ＤＩＰＥＡを加えてｐＨを８～９に調整し、窒素ガスの保護下で、室温で５時間反応させ、ＨＰＬＣにより反応をモニタリングし、原料０９は基本的に完全に反応した。生成物を後処理せずにそのまま次の反応に供することができる。
７）化合物１２の合成
前記反応液にピペリジン０．３ｍｌ（２０％）を加え、室温で２時間撹拌しながら反応させ、ＨＰＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、反応を停止させ、分取液体クロマトグラフィー（中性、アセトニトリル／純水系）により精製し、目的ピーク留分を収集し、アセトニトリルを減圧除去した後、凍結乾燥させ、白色粉末状固体２７７ｍｇを得た。二段階収率は約４２．８％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１０７１．５１２０．
８）化合物１３の合成
２７０ｍｇ化合物１２を乾燥ＤＭＦで溶解させた後、ＥＤＣＩ（９６．６ｍｇ，２ｅｑ）、ＨＯＢＴ（１７０ｍｇ，５ｅｑ）、ＤＩＰＥＡ（０．２２ｍｌ，５ｅｑ）を加え、室温で４時間撹拌した後、ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、分取液体クロマトグラフィー（中性、アセトニトリル／純水系）により精製し、目的ピーク留分を収集し、アセトニトリルを減圧除去した後、凍結乾燥させ、白色粉末状固体約１３６．４ｍｇを得た。収率は約５１．４％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１０５３．４９０８．
９）化合物１６の合成
１ｇの６－マレイミドヘキサン酸スクシンイミジルを１０ｍｌテトラヒドロフランで溶解させた後、０．６７８ｇの２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エチルアミン（１．２ｅｑ）を加え、窒素ガスの保護下で、室温で４時間撹拌し、ＴＬＣにより完全に反応したことを確認した後、水を加え、ＥＡで３回抽出し（毎回１０ｍｌ）、有機層を合わせ、乾燥濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製し、目的製品約０．８ｇを得た。収率は８４％であった。
１０）化合物１７の合成
８０ｍｇ化合物１６をＤＭＳＯ ５ｍｌで溶解させた後、化合物１３（１１４．７ｍｇ，０．５ｅｑ）、臭化第一銅４４．７ｍｇ（１．５ｅｑ）、精製水０．２ｍｌを加え、窒素ガスの保護下で、室温で３時間撹拌した後、ＨＰＬＣにより化合物１３が完全に反応したことを確認した後、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、目的ピーク留分を収集し、有機溶媒を回転蒸留により除去した後、凍結乾燥させ、白色固体約５０．５ｍｇを得た。収率は３２．６％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１４２０．７０３１
１１）化合物ａｍａ－０３０１の合成
４５ｍｇ化合物１７を１ｍｌの５％ＴＦＡ／ＭｅＯＨに加えて溶解し、窒素ガスの保護下で、室温で１時間反応させ、ＨＰＬＣにより原料１７が完全に反応したことを確認した後、溶媒を窒素パージして乾燥させ、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、濃縮して有機溶媒を除去した後、凍結乾燥させ、白色固体１５．４ｍｇを得た。収率は３７．２％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１３０６．６０１３
実施例２：低分子ｐａｙｌｏａｄ ａｍａ－０３０２の合成
１）主な中間体２４の固相合成
化合物０８の合成を参照し、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルを晶析させ、黄褐色固体約１０．６ｇを得た。ＨＰＬＣ純度は約７９．８％であった。
２）化合物２５の合成
化合物０９の合成を参照し、化合物２４の粗生成物を５０ｍｌＴＦＡで溶解させた後、窒素ガスの保護下で、室温で５時間撹拌した後、ＨＰＬＣにより原料が完全に反応し、主な点が明らかであることを確認した後、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、目的ピーク留分を収集し、減圧により有機溶媒を除去した後、凍結乾燥させ、白色固体２．３８ｇを得た。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋８３１．４２５１
３）化合物２６の合成
化合物１１の合成を参照し、原料２５を１．０ｇ投入し、凍結乾燥させ、白色固体約８２０ｍｇを得た。収率は５２．５％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２９６．６４３１
４）化合物２７の合成
参考化合物１２の合成を参照し、原料２６を８００ｍｇ投入し、凍結乾燥させ、白色固体約３０８．８ｍｇを得た。収率は約４６．６％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１０７４．５１８４
５）化合物２８の合成
化合物１３の合成を参照し、原料２７を３００ｍｇ投入し、凍結乾燥させ、白色固体約２０８．４ｍｇを得た。収率は約７０．６％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１０５６．５２４３
６）化合物２９の合成
１００ｍｇ化合物２８を５％ＴＦＡのメタノール溶液１ｍｌで溶解させた後、窒素ガスの保護下で、室温で２時間撹拌しながら反応させ、ＨＰＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、目的ピーク留分を収集し、凍結乾燥させ、淡黄色固体約６９．５ｍｇを得た。収率は７７．９％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋９４２．４５７１
７）化合物３０の合成
５０ｍｇ化合物２９を１０ｍｌ反応フラスコに加え、窒素ガスの保護下で、テトラキス（トリフェニルホスフィンパラジウム）６７．５ｍｇ（１．１ｅｑ）を加え、窒素ガスで空気を置換し、注射器で反応フラスコに５ｍｌの乾燥テトラヒドロフラン、０．１ｍｌの乾燥モルホリンを加え、原料を溶解し、引き続き室温で１２時間撹拌し、ＨＰＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、目的ピーク留分を収集し、凍結乾燥させ、淡黄色固体約３５．２ｍｇを得た。収率は７３．５％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋９０２．４１２３
８）化合物３１の合成
Ｆｍｏｃ－Ｌ－バリン（２０ｇ）、ＨｏＳｕ（７．４６ｇ，１．１ｅｑ）を２００ｍｌのＴＨＦで溶解させた後、反応フラスコを氷塩浴に置き、０℃まで降温し、ＤＣＣ縮合剤（１４．６ｇ，１．１ｅｑ）をゆっくりと加え、反応温度を０－５℃に制御し、３時間かけて加えた。その後、氷浴から取り外し、室温で１２時間撹拌しながら反応させた。ＴＬＣによりＦｍｏｃ－Ｌ－バリンが完全に反応したことを確認した後、反応を停止させた。減圧で吸引濾過し、１００ｍｌのＴＨＦで濾過ケーキを洗浄し、回転蒸留により濾液を除去し、残留物に１００ｍｌのＤＣＭを加え、撹拌して溶解させ（３５℃で撹拌して溶解させ）、有機濾過膜で少量な不溶物を濾別した後、３５℃の油浴に置き、撹拌しながら１００ｍｌの石油エーテルを加え、自然に降温して１時間晶析させた後、氷塩浴に置き、降温して２時間晶析させ、吸引濾過し、石油エーテルで固体を洗浄し、固体を４０℃の真空乾燥オーブン中で乾燥させ、２１．８６ｇの白色粉末状固体を得た。収率は約８５％であった。
９）化合物３２の合成
２０ｇの化合物３１を２００ｍＬ溶媒ＴＨＦに溶解し、９．６４ｇ（１．２ｅｑ）Ｌ－シトルリンを加え、１Ｍ炭酸ナトリウムを加えてｐＨを８～９に調整し、完全に溶解させ、室温で４８時間撹拌しながら反応させ、ＴＬＣにより完全に反応したことを確認した。氷浴で撹拌しながらクエン酸水溶液で反応液のｐＨを３－４に調整し、イソプロパノール：ＥＡ＝１：５（４０ｍｌイソプロパノール＋２００ｍｌ ＥＡ）で３回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、回転蒸留により乾燥させ、さらに２００ｍｌのメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルを加えて撹拌し、２時間撹拌した後、吸引濾過し、濾過ケーキを収集し、４５℃の真空乾燥オーブンに置き、乾燥させ、１８．６ｇ白色固体生成物を得た。収率は約８１．７％であった。
１０）化合物３３の合成
１８ｇ化合物３２を５００ｍＬの反応フラスコに加え、２００ｍＬのＤＭＦで溶解させた後、運に８ｇ（１．０ｅｑ）４－［（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノメチル］アニリン、ＨＡＴＵ２０ｇ（１．５ｅｑ）、ＤＩＰＥＡ（１８ｍｌ，３ｅｑ）を加え、室温で２４時間撹拌し、ＴＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、水２００ｍＬ、ジクロロメタン２００ｍＬを加え、１０ｍｉｎ撹拌した後、有機層を分離し、水で２回洗浄し（毎回５０ｍＬ）、有機層を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、濾過し、濃縮し、褐色油状物を得た。油状物にメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル２００ｍｌを加え、３０ｍｉｎ撹拌した後に固体が析出し、濾過し、濾過ケーキをメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルで２回洗浄し（毎回５０ｍｌ）、濾過ケーキを収集し、５０℃の真空乾燥オーブンで乾燥させ、褐色固体１８．９ｇを得た。収率は７４．４％であった。
１１）化合物３４の合成
１５ｇ化合物３３を２５０ｍｌ反応フラスコに加え、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液７５ｍｌを加え、室温で１時間撹拌した後、ＴＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、オイルポンプにより溶媒を減圧蒸留して除去した後、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル２００ｍｌを加え、室温で２時間撹拌し、褐色固体が析出し、濾過し、濾過ケーキをメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルで２回洗浄し（毎回５０ｍｌ）、濾過ケーキを収集し、５０℃の真空乾燥オーブンで乾燥させ、褐色固体６．８ｇを得た。収率は６６．４％であった。
１２）化合物３５の合成
１ｇ化合物３４を１０ｍｌのＤＭＦで溶解させた後、６－マレイミドヘキサン酸スクシンイミジル７７３ｍｇ（１．２ｅｑ）を加え、室温で５時間撹拌し、ＴＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、反応液に水１０ｍｌ、酢酸エチル２０ｍｌを加え、１０ｍｉｎ撹拌した後、有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー （石油エーテル：酢酸エチル５０：１） により精製し、淡黄色泡沫状固体９５６ｍｇを得た。収率は６８．３％であった。
１３）化合物３６の合成
３０ｍｇ化合物３５を２０％ＴＦＡのジクロロメタン溶液で溶解させた後、室温で２時間撹拌しながら反応させ、ＴＬＣにより完全に反応したことを確認した後、減圧で回転蒸留して溶媒を除去し、化合物３６の粗生成物を得た。使用まで保存した。精製せずにそのまま次の反応に供した。
１４）ａｍａ－０３０２の合成
得られた化合物３６（１．２ｅｑ）の粗生成物を１ｍｌのＤＭＦで溶解させた後、３２．５ｍｇ化合物３０、ＨＡＴＵ２０．５ｍｇ（１．５ｅｑ）を加え、ＤＩＰＥＡでｐＨを８～９に調整し、窒素ガスの保護下で、室温で６時間撹拌し、ＨＰＬＣにより原料３０が完全に反応したことを確認した後、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、目的ピーク留分を収集し、凍結乾燥させ、淡黄色固体１５．３ｍｇを得た。収率は２９．１％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１４５５．７０１１．
実施例３：低分子ｐａｙｌｏａｄ ａｍａ－０３０３の合成
１）化合物３７の合成
文献Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１８，１４０，６５１３－６５１７の合成方法を参照。
２）化合物３８の合成
化合物１１の合成を参照し、凍結乾燥させ、目的化合物約７５１．５ｍｇを得た。収率は５６．８％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１４２６．６７５１
３）化合物３９の合成
化合物１２の合成を参照し、化合物３８を７００ｍｇ投入し、凍結乾燥させ、白色固体約４８２．３ｍｇを得た。収率は８１．６％であった。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２０５．６１２４
４）化合物４０の合成
化合物１３の合成を参照し、化合物３９を４５０ｍｇ投入し、分取精製した後、凍結乾燥させ、白色固体約３８４．２ｍｇを得た。収率は８６．７％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋１１８６．６０１２
５）化合物４１の合成
化合物２９の合成を参照し、化合物４０を１００ｍｇ投入し、分取精製した後、凍結乾燥させ、白色固体約５４．２ｍｇを得た。収率は約６７．２％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋９５８．４２５０．
６）化合物４２の合成
化合物３０の合成を参照し、化合物４１を５０ｍｇ投入し、分取精製した後、目的ピーク留分を凍結乾燥させ、白色固体約２８．６ｍｇを得た。収率は５９．７％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋９１８．４４１３
７）化合物ａｍａ－０３０３の合成
化合物ａｍａ－０３０２の合成を参照し、化合物４２を２５ｍｇ投入し、分取精製した後、凍結乾燥させ、淡黄色固体約１５．２ｍｇを得た。収率は３８％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋１４７１．６８２０
実施例４：低分子ｐａｙｌｏａｄ ａｍａ－０３０４の合成
１）化合物４９の合成
合成方法は化合物０８の合成と同様である。化合物４９の粗生成物約２．４ｇを得た。純度は約８６．２％であった。生成物を精製せずにそのまま次の反応に供した。。
２）化合物５０の合成
化合物０９の合成を参照し、分取精製した後、目的化合物１．１ｇを得た。［Ｍ＋Ｈ］＋７９０．４１２６
３）化合物５１の合成
化合物１１の合成を参照し、化合物５０を５００ｍｇ投入し、分取精製した後、目的化合物３４１．５ｍｇを得た。収率は４３％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋１２５５．６１９５
４）化合物５２の合成
化合物１２の合成を参照し、化合物５１を３００ｍｇ投入し、分取精製した後、目的ピーク留分を凍結乾燥させ、白色固体約１８６．４ｍｇを得た。収率は７５．５％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋１０３３．５０１３
５）化合物５３の合成
化合物１３の合成を参照し、化合物５２を１５０ｍｇ投入し、分取精製した後、目的ピーク留分を凍結乾燥させ、白色固体約８６．５ｍｇを得た。収率は５８．７％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋１０１５．５１２１
６）化合物５４の合成
８０ｍｇ化合物５３を乾燥ＤＭＳＯで溶解させた後、ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－ブロモブチル）カルバミン酸１５９ｍｇ（８ｅｑ）、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド８８ｍｇ（１０ｅｑ）を加え、室温で１２時間撹拌しながら反応させ、ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－ブロモブチル）カルバミン酸１５９ｍｇ（８ｅｑ）、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド８８ｍｇ（１０ｅｑ）を加え、さらに室温で２４時間撹拌しながら反応させ、ＨＰＬＣにより原料がなくなったことを確認した後、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、目的ピーク留分を収集し、製品１８．２ｍｇを得た。収率は１９．５％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋１１８６．６１３７．
７）化合物５５の合成
得られた１８．２ｍｇ化合物５４を０．１ｍＬトリフルオロ酢酸で溶解させた後、室温で３０ｍｉｎ撹拌し、２ｍＬジクロロメタンを加え、均一に撹拌した後、減圧で溶媒を回転蒸留により除去し、使用まで保存した。
８）化合物ａｍａ－０３０４の合成
得られた化合物５５の粗生成物を１ｍｌのＤＭＦで溶解させた後、６－マレイミドヘキサン酸スクシンイミジル９．５ｍｇ（２ｅｑ）を加え、ＤＩＰＥＡでｐＨを８～９に調整し、窒素ガスの保護下で、室温で５時間撹拌し、ＨＰＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、目的ピーク留分を収集し、有機溶媒を回転蒸留により除去した後、凍結乾燥させ、類白色固体１０．４ｍｇを得た。収率は５３％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋１２７９．６５３７．
実施例５：低分子ｐａｙｌｏａｄ ａｍａ－０３０５の合成
１）化合物５６の合成
化合物１１の合成を参照し、原料５０を２００ｍｇ投入し、凍結乾燥させ、白色固体約２１１．３ｍｇを得た。収率は６０．２％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋１３８５．６７１３．
２）化合物５７の合成
化合物１２の合成を参照し、原料５６を２００ｍｇ投入し、凍結乾燥させ、白色固体約１１４．８ｍｇを得た。収率は６８．３％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋１１６３．５７９３．
３）化合物５８の合成
化合物１３の合成を参照し、原料５７を１１０ｍｇ投入し、凍結乾燥させ、類白色固体約７２．５ｍｇを得た。収率は６６．９％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋１１４５．５９０１
４）化合物５９の合成
得られた化合物５８約７０ｍｇを０．５ｍＬＴＦＡのメタノール溶液で溶解させた後、室温で１時間撹拌しながら反応させ、ＨＰＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、目的ピーク留分を収集し、回転蒸留により有機溶媒を除去し、凍結乾燥させ、類白色固体約４５．７ｍｇを得た。收率は８１．６％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋９１７．４０１３
５）化合物６０の合成
国際出願ＷＯ２０１２０４１５０４に記載の方法を参照。
６）化合物６１の合成
原料５９約４２ｍｇを１ｍｌ乾燥ＤＭＦで溶解させた後、２２ｍｇ（２ｅｑ）化合物６０、５８ｍｇジラウリン酸ジブチルスズを加えた後、窒素ガスの保護下で、室温で２４時間撹拌し、２２ｍｇ（２ｅｑ）化合物６０を加え、室温で５２時間撹拌し、ＨＰＬＣにより原料５９がなくなったことを確認した後、前記反応液に０．２ｍｌメタノールを加えて反応を停止させ、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、目的ピーク留分を収集し、回転蒸留により有機溶媒を除去し、凍結乾燥させ、淡黄色固体約９．６ｍｇを得た。収率は１８．１％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋１１５９．５７０３．
７）化合物６２の合成
得られた９．６ｍｇ化合物６１を０．１ｍｌトリフルオロ酢酸で溶解させた後、室温で３０ｍｉｎ撹拌し、２ｍｌジクロロメタンを加え、均一に撹拌した後、減圧で回転蒸留により溶媒を除去し、使用まで保存した。生成物を精製せずにそのまま次の反応に供した。。
８）化合物ａｍａ－０３０５の合成
得られた化合物６２を１ｍｌの乾燥ＤＭＦで溶解させた後、６－マレイミドヘキサン酸スクシンイミジル５．１ｍｇ（２ｅｑ）を加え、窒素ガスの保護下で、室温で５時間撹拌し、ＨＰＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、主ピーク留分を収集し、窒素パージして乾燥させ、類白色固体約４．６ｍｇを得た。収率は４４．４％であった。［Ｍ＋Ｈ］＋１２５２．６０９１．
実施例６：抗体－薬物複合体の製造
１）一般的な結合方法
予備精製されたモノマー比が９５％超えの抗体分子を、限外濾過用遠沈管によりＥＤＴＡを含むリン酸緩衝液（濃度１０ｍｇ／ｍｌ）に移す。抗体モル数の１０倍のＴＣＥＰを加え、室温で２時間反応させる。限外濾過用遠沈管によりｐＨ６．５のリン酸緩衝液に移し、抗体モル数の１０倍のＤＨＡＡを加え、室温で２時間反応させた。そして、抗体モル数の３倍のｐａｙｌｏａｄを加え、室温で４時間反応させた。反応終了後、カットオフ分子量が３０ＫＤａの限外濾過用遠沈管によりＰＢＳに移し、未結合のｐａｙｌｏａｄを除去した。
２）抗体－薬物結合ＤＡＲの検出
モノマー比の検出条件
サンプルを１４０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を取り、注入して分析する。
装置：Ｗａｔｅｒｓ ｅ２６９５（２４８９ＵＶ／Ｖｉｓ）
カラム：ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷＸＬ（７．８×３００ｍｍ，５μｍ）
移動相Ａ：５０ｍＭ ＰＢ，３００ｍＭ ＮａＣｌ，２００ｍＭ Ａｒｇ，５％ＩＰＡ，ｐＨ６．５
移動相Ａ：３０ｍｉｎイソクラティック溶離，流速：０．７１４ｍｌ／ｍｉｎ，カラム温度２５℃，検出波長：２８０ｎｍ。
ＤＡＲ検出条件
サンプルを１４０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を取り、注入して分析する。
装置：Ｗａｔｅｒｓ Ｈ－ｃｌａｓｓ（ＴＵＶ）
カラム：Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ ＨＩＣＢｕｔｙｌ－ＮＰ５（４．６×３５ｍｍ，５μｍ）
移動相Ａ：１．５Ｍ硫酸アンモニウム，０．０２５Ｍ無水リン酸ナトリウム，ｐＨ７．０
移動相Ｂ：０．０２５Ｍ無水リン酸ナトリウム，２５％ＩＰＡ，ｐＨ７．０
移動相Ａでカラムを平衡化し、移動相Ａ、Ｂでイソクラティック溶離し、流速０．８ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度２５℃、検出波長：２１４ｎｍ。
３）結果
４）結論
ａｍａ－０３０１／ａｍａ－０３０２／ａｍａ－０３０３／ａｍａ－０３０４／ａｍａ－０３０５とＴｒａｓｔｕｚｕｍａｂを結合した後、結合効率は高く、モノマー比は高かった。
実施例７：血漿安定性
１）操作
所定量のＡＤＣサンプルを取り、ヒトＩｇＧが除去されたヒト血漿に加え、各ＡＤＣについて３チューブずつ準備する。３７℃の水浴でインキュベートする。それぞれ７２時間、１４４時間後にＡＤＣサンプルを取り出し、各チューブにＰｒｏｔｅｉｎＡ（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ ＬＸ Ｌｏｔ：＃１０２２１４７９ ＧＥ，ＰＢＳで洗浄済）１００ｕｌを加え、縦型混合器で２時間振盪しながら吸着させ、洗浄、溶離した後、インキュベートされたＡＤＣを得た。所定時間インキュベートされたＡＤＣサンプルをＲＰ－ＨＰＬＣにより検出した。
２）結果
３）結論
ヒト血漿において、各抗体－薬物複合体は３日目および６日目にほとんど分解せず、安定性が良好であった。
実施例８：体外活性試験
１）実験材料
細胞：中国科学院細胞バンク
腫瘍細胞培地：Ｇｉｂｃｏ
ＦＢＳ：ＢＩＯＷＥＳＴ
２）培地の調製
増殖培地（１０％ＦＢＳ，Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ／ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（１００Ｕ／ｍｌ）を含有）
検出培地（１％ＦＢＳ，Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ／ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（１００Ｕ／ｍｌ）を含有）
３）操作
生物学的安全キャビネットのＵＶランプを３０ｍｉｎ早くオンにして照射し、その後、換気を３ｍｉｎオンにした。増殖培地、検出培地、Ｄ－ＰＢＳおよびパンクレアチンを３７℃恒温水槽中で予熱し、その後、アルコールで表面を消毒し、生物学的安全キャビネットに置いた。コンフルエンス率が約８０％の細胞を選択し、生物学的安全キャビネットに置き、古い培地を吸い取って除去し、Ｄ－ＰＢＳで洗浄し、吸引して廃棄し、トリプシンで２～３ｍｉｎ消化した後、増殖培地に加え、１２００ｒｐｍで３ｍｉｎ遠心分離した。遠心上清を吸い取り、４ｍｌの検出培地で均一に混合し、１００ｕｌを取ってカウントした（５０ｕｌ細胞液を取り出し、５０ｕｌのＴｒｙｐａｎ Ｂｌｕｅ Ｓｔａｉｎを加え、均一に混合した後、カウントした）。所定の細胞数でプレートをコーティングし、８０ｕｌ／ウェルで９６ウェルプレートに接種し、ウェルＥ１１、Ｆ１１、Ｇ１１に８０ｕｌ検出培地のみを加え、周りのウェルに１５０ｕｌのＤＰＢＳを加えた。
抗体溶液の希釈
検出培地を用い、Ｖ型９６ウェルプレートの第１列において初期濃度が５ｕＭのテストソリューション３００ｕｌを調製し、次の第２から１０列にそれぞれ２１０ｕｌの検出培地を加え、均一に混合された第１列から３０ｕｌを取って第２列に加え、ピペットで１０回均一に上下混合し、ピペットチップを廃棄し、次の７つの濃度について順番に操作した。プレートコーティング２４時間後に、１ウェル／２０ｕｌで希釈抗体を加え、対照群を作り、第１１列に２０ｕｌの検出培地のみを加え、各濃度について２回繰り返し、細胞渦発振器で均一に混合した（５５０ｒｐｍ，３ｍｉｎ）。
４）検出
４日後、ＭＴＳ試薬を取り出し、常温、暗所で解凍した後、十分に均一に混合した後、生物学的安全キャビネットに置き、ウェルの側壁に沿って１００μＬ細胞培地あたり２０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎ ＭＴＳ試薬を加え、プレート面を軽く叩いてＭＴＳ溶液を均一に混合した後、細胞培養インキュベーターに入れ、暗所で２時間インキュベートした。反応終了後、９６ウェルプレートを取り出し、マイクロプレートリーダー中でＯＤ４９０ｎｍでの吸光度を測定し、データを記録、整理、記憶した。
５）結果

Claims (7)

  1. 構造式（Ｉ）で表される非天然アマニチン類抗体複合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される製剤成分。
    （式中、Ｒ１はＨ、－ＯＨまたは－Ｏ－Ｌ－Ａであり、
    Ｒ２はＨまたは－ＯＨであり、
    Ｒ３はＯＣ１～６アルキル基であり、
    Ｒ４はＨまたは－Ｌ－Ａであり、
    Ｒ５は－ＮＨ２、－ＯＨ、－ＮＨ－Ｌ－Ａまたは－Ｏ－Ｌ－Ａであり、
    Ａは標的部位に結合される生体高分子部分であり、抗体またはその抗原結合断片、抗体様タンパク質を含み、
    Ｏは酸素原子、Ｎは窒素原子、Ｈは水素原子であり、
    Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５のうちの１つが－Ｌ－Ａ構造を有し、
    前記Ｌは、下式の構造を含み、
    式中、Ｌ１は生体高分子Ａに結合されるリンカーであり、
    から選択され、波線で生体高分子Ａに結合され、
    Ｌ２はスペーサーであり、置換または非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基、置換または非置換のＣ５－Ｃ２０ヘテロアリール基、－（ＣＨ ２ ＣＨ ２ Ｏ）ａ－（ａは１～２０の整数である）から選択される１種または複数種であり、スペーサーとスペーサーの間は化学結合により結合され、Ｌ２はＬ１とＡＡの間に結合される断片であり、ｍは１－６の整数であり、
    ＡＡは１～６個のアミノ酸を含んでなる断片であり、フェニルアラニン、シトルリン、バリン、リジン、セリン、グルタミン酸、アスパラギン酸又はグリシンから選択され、ｎは０または１であり、
    前記Ｌ ３ は、
    又は毒素に結合される任意の連結基から選択され、
    波線はＡＡに結合され、アスタリスクは構造式（Ｉ）で表される毒素に結合され
    前記Ｌ ４ は、カルボニル基または単結合であり、
    前記Ｌ ５ はＣ２－Ｃ１２アルキル基であり、
    前記Ｒ ６ 、Ｒ ７ は、それぞれ独立して水素、Ｃ１－Ｃ６アルキル基から選択される。）
  2. 前記標的部位に結合される生体高分子は、抗体またはその抗原結合断片であり、キメラ抗体、脱免疫化抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、四重特異性抗体およびナノ抗体から選択される、請求項１に記載の非天然アマニチン類抗体複合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される製剤成分。
  3. 前記抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ'）、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖおよびジスルフィド結合により連結されたＦｖ（ｄｓＦｖ）からなる群より選択される、請求項１または２に記載の非天然アマニチン類抗体複合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される製剤成分。
  4. 前記置換基は、ヒドロキシル基、チオール基、ハロゲン、カルボキシル基、アミノ基、リン酸基、ニトロ、シアノ、スルホン酸基、置換または非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基から選択される１種または複数種である、請求項１に記載の非天然アマニチン類抗体複合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される製剤成分。
  5. 請求項１から４のいずれか１項に記載の非天然アマニチン類抗体複合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される製剤成分を含む、薬物組成物。
  6. 抗腫瘍薬または抗がん薬の製造における請求項１から４のいずれか１項に記載の非天然アマニチン類抗体複合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される製剤成分の使用。
  7. 前記薬物組成物は、抗肺がん薬、抗腎臓がん薬、抗尿道がん薬、抗結腸直腸がん薬、抗前立腺がん薬、抗神経膠腫薬、抗卵巣がん薬、抗膵がん薬、抗乳がん薬、抗黒色腫薬、抗肝がん薬、抗膀胱がん治療薬、抗悪性リンパ腫薬、抗白血病薬、抗胃がん薬または抗食道がん薬である、請求項５に記載の薬物組成物。
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