JP7285848B2

JP7285848B2 - 化粧品における環状ペプチドの使用

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Publication number: JP7285848B2
Application number: JP2020541976A
Authority: JP
Inventors: モンドン，フィリップ; ドリド，エマニュエル; マルシャン，ティボー
Original assignee: セダーマ
Priority date: 2018-02-01
Filing date: 2019-01-29
Publication date: 2023-06-02
Anticipated expiration: 2039-01-29
Also published as: CA3087808A1; FR3077202A1; FR3077202B1; US20210052480A1; EP3746041A1; CN111670027B; WO2019149450A1; KR20200115554A; JP2021513520A; CN111670027A

Description

本発明は、ペプチドに基づいた美容処置、新規のペプチドに基づいた化粧品成分または新規のペプチドに基づいた皮膚科学的成分、それを含む組成物、およびそれらの化粧品的使用または皮膚科学的使用に関する。より詳細には、本発明は、ヒトまたは哺乳動物の、皮膚およびその付属器の治療を目的とするペプチドに関する。

これは特に、化粧品、皮膚科学的製品、衛生製品、およびパーソナルケア製品の産業に関係している。

ペプチドは、重要なシグナル機能を有し、多くの生化学的プロセスを調整する。その結果、ペプチドは、特に化粧品産業において、長い間、避けて通れない有望な活性成分となっている。その新しい化合物は、皮膚およびその付属器を美しくするために、すなわちそれらの通常の状態を改善するために、常に探索されている。

真皮細胞外マトリックスに対する特性を有することで、抗老化用途を有する多数のペプチドまたはペプチド混合物が、特に、本出願人によって既に提案されている。例えば、商標マトリキシル（MATRIXYL）（登録商標）として市販されているＰａｌ－ＫＴＴＫＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、商標マトリキシル（MATRIXYL）（登録商標）３０００として市販されているＰａｌ－ＧＨＫ／Ｐａｌ－ＧＱＰＲ混合物（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、商標マトリキシル（MATRIXYL）（登録商標）シンセ’６（Synthe’ 6）（登録商標）として市販されているＰａｌ－ＫＭＯ２Ｋ（ＭＯ２は二酸化メチオニンに相当）、または最近では商標マトリキシル（MATRIXYL）（登録商標）モルフォミックス（Morphomics）（商標）として市販されているＰａｌ－Ｋ（Ｐ）ＨＧ（リジンにグラフトされたプロリンを有する）が挙げられる。他の公知のペプチドは、以下の説明に記載されている。

ペプチドの一般的な種類には、環状ペプチド（またはシクロペプチド）がある。環状ペプチドの多くは、自然界で発見されている。また、環状ペプチドは研究所で合成することもできる。環状ペプチドの長さは、２つのアミノ酸残基から数百のアミノ酸残基まで様々である。これらのペプチドは、医学および生物学の分野で多くの用途が見出されている。最も単純なものは、－ＮＨ₂末端基も末端ＣＯＯＨ基も有さないペプチドであり、これら２つの末端基が反応してペプチド結合を形成し、ペプチド骨格を閉じたものである。また、末端アミンと側鎖との間、末端カルボキシルと側鎖との間、または２つの側鎖の間に共有結合が形成され、ペプチド分子を部分的に環状にするいくつかの環状ペプチドもある。

環状ペプチドは、従来のペプチドよりも多くの利点を有する。例えば、環状ペプチドは、直鎖状ペプチドをＣ末端および／またはＮ末端で攻撃してアミノ酸に分解するエキソペプチダーゼに対して、非感受性である。このように、環状ペプチドは、直鎖状ペプチドよりも安定している。環状ペプチドの活性に関しては、環状ペプチドは、骨格の曲率および自由度の低さによって、多くの結合の回転が阻害されているとともに、外部標的との相互作用により利用可能な側鎖を有する。そのため、標的との相互作用の強さを増加させることができ、隣接するアミノ酸は、分子間相互作用を妨げない。このことは、環状ペプチドに、直鎖ペプチドよりも高い生物学的利用能を与える可能性がある。

植物または微生物は、環状ペプチドの天然の供給源の代表である（例えば、植物シクロペプチドを列挙する合成のレビュー："Plant Cyclo peptides", Tan, N.H., Zhou, J.; Chem Rev., 2006; 106 (3); 840-895を参照のこと）。したがって、環状ペプチドは、環境および健康に危険な溶媒を使用せずに、天然材料から、環境に配慮した化学を使って製造することができるという利点も有している。

特に、亜麻種子油には、環状ペプチドが含まれていることが知られている。亜麻は、亜麻科に属している。この一年草は、繊維および油糧種子のためにその全体が利用されている。その起源は不明である。それは実質的にユーラシア大陸が起源であるだろう。亜麻は、非常に長い期間（数千年前、最初の形跡は３６０００年前）栽培化され、現在世界中で栽培されている。カナダが最大の生産国である。亜麻仁油には多くの成分が含まれている。亜麻仁油は、不飽和脂肪酸のトリグリセリド、特にリノレン酸が豊富である。亜麻仁油は、また、粘液、トリテルペンおよびステロール、シアン化物を生成可能なヘテロサイド、リグナン、ならびにタンパク質（環状ペプチドを含む）も含む。亜麻仁油の医薬的活性は、特に次のように記載されている：便通の促進、粘膜の刺激の軟化、抗炎症、鎮痛および解熱、心血管系の予防、ホルモン調整、抗糖尿病ならびに抗がん。

亜麻仁油は、亜麻産業の副産物であり、医薬用途の観点から、神経変性、血液学的、炎症性およびウイルス性感染症、自己免疫疾患および癌に対して（ＷＯ２００９７９７９２）、成長、細胞周期、および体重増加を刺激することによって、または、腸炎、真菌の成長を制御し、消化管の微生物を調節し、かつ腸管粘膜における炎症細胞の浸潤を抑制することによって、健康を改善するために（ＷＯ２０１３０９１０７１）、骨粗鬆症に対して（ＷＯ２０１５／１１４８１７）、および免疫抑制療法のために（ＷＯ９００７５２３）、提案されている。

また、中国薬局方で使用されている植物の環状ペプチドがまとめられているレビューがある（"Chemical Progress in Cyclopeptide-Containing Traditional Medicines Cited in Chinese Pharmacopoeia"; Zhao, Simeng et al; Chin J. Chem. 2012, 30 (6); 1213-1225）。

化粧品用活性成分の分野では、すでにMERCK社からしわ防止活性剤としてロナケア（RonaCare）（登録商標）シクロペプチド－５が販売されている。合成により得られたこの特定の環状ペプチド（シクロ（１－アミノシクロヘキサンカルボニル－Ｌ－アルギニルグリシル－Ｌ－α－アスパルチル－Ｄ－フェニルアラニル（Cyclo (1-aminocyclohexanecarbonyl-L-arginylglycyl-L-alpha-aspartyl-D-phenylalanyl）、ＳＥＱＩＤＮＯ：３）は、特許出願ＷＯ２００９／１２４７５４の主題であった。

本発明の目的は、皮膚および／またはその付属器の通常の状態を改善することができる、特に化粧品のための活性成分の形態で、提供され得る環状ペプチド、より詳細には、細胞外マトリックスの主要分子の合成のみならず、他の相補的な生物学的標的に対しても活性のある環状ペプチドを提供することにある。さらに、本発明は、数ｐｐｍの割合で、単独でまたは組み合わせて使用するのに十分に効果的であり、かつ化粧品組成物を含む局所組成物の形態で使用することができる環状ペプチドを提供することを目的とする。

この目的のために、第１の形態によれば、本発明は、皮膚および／またはその付属器の非治療的な美容処置における活性成分としての少なくとも１つの環状ペプチドの使用であって、前記環状ペプチドが、少なくとも１つのプロリン（Ｐｒｏ）および少なくとも２つのフェニルアラニン（Ｐｈｅ）を含む少なくとも５つのアミノ酸からなり、他のアミノ酸は、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、バリン（Ｖａｌ）、アラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、メチオニン（Ｍｅｔ）およびトリプトファン（Ｔｒｐ）を含む群より選択され、メチオニン（Ｍｅｔ）が存在する場合、メチオニン（Ｍｅｔ）は、酸化されていないか、または酸化されている、環状ペプチドの使用を提供する。

好ましくは、本発明に係る環状ペプチドは、ペプチド骨格のみから形成された単一環で形成され、末端－ＮＨ₂基および末端ＣＯＯＨ基のいずれも有していない環状ペプチドであり、以下の式Ｉで表される：

ここで、式Ｉにおいて：
Ｒ１は、アミノ酸の側鎖基であり；
Ｘ＝ＮＨ、または、プロリンの場合にはＸ＝Ｎを満たし、かつ、Ｒ１は、５原子環の一部であり；
ｎは、最大で１５個のアミノ酸、好ましくは最大で１２個のアミノ酸、より好ましくは最大で９個のアミノ酸、より好ましくは８個または９個のアミノ酸からなる環状ペプチドを形成するように、３から１３、好ましくは３から１１、より好ましくは６または７である。アミノ酸が１５を超える場合、環状ペプチドは、製造コストが高すぎて、および／または、かさばりすぎて、皮膚に移植することができない場合がある。

以下の詳細な説明におけるインビトロおよびインビボの結果によって示されるように、本発明に係る特定の環状ペプチドは、化粧品産業のための活性成分の分野で関心を持たれている。

確かに、環状ペプチドは、皮膚およびその付属器に対して以下の有益な活性を有する：

１）加齢とともに減少する、真皮細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の２つの主要構成分子の合成を刺激する活性：コラーゲンＩおよびエラスチン
真皮の、密度および厚さの喪失、ならびにしわの出現は、真皮線維芽細胞によるこれらの高分子の合成が加齢に伴って減少することに関連している。コラーゲンＩは、真皮に最も多く含まれているタンパク質である。コラーゲンＩは、緻密で張りのある肌を持つために欠かせない成分である。エラスチンは、真皮の細胞外空間で合成され、分泌される。エラスチンは、弾性繊維の９０％までの主成分を構成している。これらの成分の回復が不十分であることによって真皮の質が弱くなると、皮膚の付属器の、支持力および保護力が低下する。そして、それらの周辺の被覆が減少することによって、血管がより目立ち、脆弱になり、毛穴がより目立ちやすくなる。これは、皮膚の均質性および質感に悪影響を及ぼす。

２）真皮／表皮接合部（ＤＥＪ）分子の２つの主要な型の合成を刺激する活性：コラーゲンＩＶおよび全てのラミニン
これらの分子の合成が減少すると、メラノサイト、ケラチノサイト、およびＤＥＪ間の連絡が悪くなり、組織の柔軟性が低下する。逆に、これらの分子の適切な合成は、ＤＥＪを回復／強化するのに役立つ。コラーゲンＩＶは、二次元ネットワークを形成し、ＤＥＪの主要な構成要素の一つである。ラミニンも、基底層に含まれており、細胞表面を基底膜へ固定することに関与している。ＤＥＪのこれら２つの重要な成分はともに、基底膜のケラチノサイトにより良い固定を確保し、表皮の柔軟性を維持するのに役立つ。
真皮およびＤＥＪにおけるこれらのタンパク質の合成を刺激することによって、主に力学的特性の点で、皮膚の、装飾および通常の状態における結果を得ることが可能になる：すなわち、皮膚は、より緻密で、再度張りが出て、より張りがあり、より強壮で、より柔軟で、かつより弾力的であると同時に、その結果として、視覚的なレベルでは、より均質で滑らかな肌の質感をも持つ。

３）脂腺細胞による皮脂の産生を減少させる活性
毛穴のサイズを小さくし、毛穴を目立たなくする（肌はより規則的なキメを持ち、より滑らかに見える）ため、および、必要に応じて、脂性肌に特徴的な、ギラツキのある外観を減少させることに貢献するため。

４）微小炎症現象に多く存在する炎症の伝達物質の濃度を下げる活性
この活性は、敏感肌および赤みの不快感を軽減する効果を有する。

５）ストラティフィン産生を調節する活性
ストラティフィンは、最近発見された、表皮で合成され、その後真皮内で見られるタンパク質であり、その成分に負の作用をする。ケラチノサイトによるこのタンパク質の産生は、早期老化を進行させることが知られている酸化条件下（例えば、紫外線（ＵＶ）タイプのストレス）で増加する。ストラティフィンは、真皮への移行後、一方では真皮タンパク質を攻撃するプロテアーゼ（特に、ＭＭＰ－１およびＭＭＰ－２）の線維芽細胞による産生を引き起こし、他方では、コラーゲンタイプＩのｍＲＮＡおよびフィブロネクチンの産生を減少させる。したがって、ストラティフィンの増加は、支持組織の質を低下させ、早期老化につながる。したがって、ストラティフィンの産生を制限することは興味深い。

６）ミトコンドリアの正常な機能に関与するタンパク質を刺激する活性
これらのタンパク質は、エネルギーの産生、細胞質とミトコンドリアとの間の代謝物の輸送、および酸化ストレスに対する防御に関与している。これらのタンパク質の合成は、加齢とともに（量および質が）減少する。したがって、肌の老化に対抗するには、これらのタンパク質の産生を積極的に調節する必要がある。

従って、本発明は、皮膚の、弾性特性、張り、質感および／または、輝きまたは明るさを改善することを意図した美容処置を目的としうる。この処置は、しわおよび小じわの治療、平滑化、引き締め、再構成、膨張、たるみ防止処置、毛穴サイズの縮小（引き締め）、および／または過剰な皮脂による皮膚のテカリの減少、および／または皮膚の微小炎症の減少のための処置から選択することができる。

本発明に係る環状ペプチド（類）の他の用途は、特に保湿、痩身、解毒、抗糖化、抗ラジカル、抗疲労、目の下のたるみ防止および／またはくま防止、（頭および身体の）毛髪の成長に対する作用、色素沈着に対する作用、頭皮に対する作用、シワ伸ばし効果などの予防的または治療的な作用も想定している。

好ましい特徴によれば、環状ペプチドは、特定のアミノ酸および／または特定のアミノ酸配列を含み、より好ましくは：
・少なくとも１つのロイシン；および／または
・少なくとも２つのフェニルアラニンおよび／または少なくとも２つのプロリン；および／または
・少なくとも１つのPro-Phe-Phe配列；および／または
・少なくとも１つのPro-Pro-Phe-Phe配列；および／または
・１つのIle-Met-LeuまたはVal-Met-Leu配列；および/または
・２つのメチオニン；および／または
・１つのトリプトファン；および／または
・Pro-Phe-Phe-Trp配列
を含む。

したがって、前記少なくとも１つの環状ペプチドは、以下を含む群より選択される本発明の第１の形態に係る。
・Cyclo (-Met-Leu-Val-Phe-Pro-Leu-Phe-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：４）；
・Cyclo (-Met-Leu-Ile-Pro-Pro-Phe-Phe-Val-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：５；図１参照）；
・Cyclo (-Ile-Leu-Val-Pro-Pro-Phe-Phe-Leu-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：６）；
・Cyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：７）；
・Cyclo (-Met-Leu-Leu-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：８）；および
・Cyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Val) （ＳＥＱＩＤＮＯ：９）。

本発明の第１の形態によれば、好ましくは、以下の説明で得られた比較結果によって示されるように、少なくとも２つの環状ペプチドの混合物が使用され、前記少なくとも２つの環状ペプチドは、以下の３つの環状ペプチドを含む群より選択され、
・Cyclo (-Met-Leu-Val-Phe-Pro-Leu-Phe-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：４）；
・Cyclo (-Met-Leu-Ile-Pro-Pro-Phe-Phe-Val-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：５）；および
・Cyclo (-Ile-Leu-Val-Pro-Pro-Phe-Phe-Leu-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：６）；
より具体的には、混合物は、有利には、これら３つの環状ペプチドを、特に、環状ペプチドの前記混合物の総重量に対して、少なくとも５０重量％、好ましくは少なくとも６０重量％、より好ましくは少なくとも７０重量％含む。

好ましくは、環状ペプチドの前記混合物の総重量に対する残りの重量％は、以下を含む群より選択される少なくとも１つの環状ペプチドを含む。
・Cyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：７）；
・Cyclo (-Met-Leu-Leu-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：８）；および
・Cyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Val) （ＳＥＱＩＤＮＯ：９）。

より具体的には、前記環状ペプチドの混合物は、以下を含む：
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して約１５から２５重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Val-Phe-Pro-Leu-Phe-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：４）；
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して約１５から２５重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Ile-Pro-Pro-Phe-Phe-Val-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：５）；
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して約１５から２５重量％を占めるCyclo (-Ile-Leu-Val-Pro-Pro-Phe-Phe-Leu-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：６）；
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して残りの重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、Cyclo (-Met-Leu-Leu-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、およびCyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Val) （ＳＥＱＩＤＮＯ：９）の環状ペプチドの混合物。

第２の形態によれば、生理学的に許容される媒体中に、環状ペプチドの混合物を含む化粧品または皮膚科学的活性成分を提供し、環状ペプチドの前記混合物は、以下を含む：
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して約１５から２５重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Val-Phe-Pro-Leu-Phe-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：４）；
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して約１５から２５重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Ile-Pro-Pro-Phe-Phe-Val-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：５）；
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して約１５から２５重量％を占めるCyclo (-Ile-Leu-Val-Pro-Pro-Phe-Phe-Leu-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：６）；
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して残りの重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、Cyclo (-Met-Leu-Leu-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、およびCyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Val) （ＳＥＱＩＤＮＯ：９）の環状ペプチドの混合物。

これらの環状ペプチド（類）は、ペプチド合成によって製造されてもよく、有利には、亜麻仁油から、適切な溶媒、特にアルコール性溶媒、例えば、植物性エタノール、または、ヒトおよび環境への影響が低い他の任意の溶媒を用いて、精製後、混合物としてまたは単独で抽出されてもよい。調製方法を以下に詳述する。

好ましくは、本発明に記載の使用される環状ペプチドは、単独でまたは混合物として、部分的に酸化されて、スルホキシドまたはスルホンになり、好ましくはスルホキシドになり、より好ましくはわずかに酸化されてスルホキシドになり、より好ましくは酸化されない。

一般的に、環状ペプチド（類）は、相乗的に作用することができる有効な濃度で、または活性の補強として、以下のような他の活性剤と組み合わせてもよい：抗老化、しわ防止および小じわの防止、美白、色素沈着促進、保湿、潤い付与、収斂、ふけ防止、痩身、抗にきび、抗炎症、抗酸化、顔色の輝きに作用するもの、抗糖化、ボリューム付与、再構成、抗カルボニル化、皮膚緩和、抗毛髪再成長、角質層に作用するもの、真皮－表皮接合部に作用するもの、タンパク質ＨＳＰ産生に作用するもの、張り、弾力性、肌の色調、毛髪再成長（例えば、まつげ、眉毛）などに作用するもの。

特に有利には、本発明の第１の形態に係る使用および本発明の第２の形態に係る成分の面において、環状ペプチド（類）は、表皮および／または角質層の特性（例えば、皮膚の膜の保護および／または保湿）に相補的に作用するように適合された少なくとも１つの活性剤と組み合わされてもよい。

このような付加的活性剤は、リン脂質、各種セラミド、スフィンゴシン、フィトスフィンゴシン、グリコスフィンゴ脂質、コレステロールおよびその誘導体、ステロール（特に、キャノーラおよび大豆のもの）、脂肪酸（リノール酸、パルミチン酸、リポ酸、およびチオクチン酸を含む）、（特にオリーブの）スクワラン、（特にヤシ油の）トリグリセリド、ラノリン、ラノリン由来のアルコール類、ラノステロール、ビタミンＤ３、トコフェロールニコチン酸、各種油（特に、アルガン、ローズ、およびバオバブ）、アスコルビン酸、Ｎ－アセチルシステイン、Ｎ－アセチル－Ｌ－セリン、ビタミンＢ３化合物（ナイアシンアミド、ニコチン酸など）、パンテノール、シュードフィラグリン、アルギニン、セリン、ＰＣＡ（ピロリドンカルボン酸）塩、ツボクサ葉抽出物（マデカッソシドおよびアジアチコサイドで滴定）、一部の植物抽出物（ワイルドヤムの根、クリ、スギの芽、およびナス科）、プランクトンの抽出物、および酵母の抽出物を含む群より選択されてもよい。また、Sederma社から販売されている以下の活性剤を挙げることができる。ヴェニュセアンヌ（Venuceane）（商標）（サーマス・サーモフィルスの発酵培地抽出物）、モイスト２４（Moist 24）（商標）（チガヤの根の含水グリコール抽出物）、ダーマキシル（Dermaxyl）（商標）（セラミド２とペプチドＰａｌ－ＶＧＶＡＰＧとの結合物）、セネステム（Senestem）（商標）（ヘラオオバコのインビトロ細胞培養物から抽出）、セラミド２（Ceramide 2）（商標）（セラミド）、セラミドＨＯ３（Ceramide HO3）（商標）（ヒドロキシセラミド）、オプティムヒアル（Optim Hyal）（商標）（アセチル化グルクロン酸のオリゴ糖）、メイリテイジ（Meiritage）（商標）（ミシマサイコ、キバナオウギおよびオオバナオケラの根の抽出物の結合物）、リバイドレイド（Revidrate）（商標）（ミリスチルホスホリンゴ酸塩）、パシフィール（Pacifeel）（商標）（オシロイバナの抽出物）、ハイドロノネシス（Hydrononesis）（商標）（サリノコッカスヒスパニカス（Salinococcus hispanicus）の発酵物）、シアバター（商標）のＮＧ不けん化物およびシティステム（Citystem）（商標）（ホアハウンドのインビトロ細胞培養物）。

同様に、特定の有利な態様において、本発明の第１の形態に係る使用および本発明の第２の形態に係る成分の面において、環状ペプチド（類）は、脂腺細胞による皮脂産生の減少に作用するように適合された少なくとも１つの活性剤と関連付けることができ、環状ペプチド（類）は、真皮に作用し、それゆえ、毛穴支持組織の補強に作用し、付加的活性剤は、皮脂産生に関する活性の補強に作用する。したがって、有利には、特に、皮膚のキメを美しくし、それによりその輝きを美しくする活性を有する成分が提供される。そのような付加的活性剤は、以下の１つまたは複数の純粋な分子を含む群より選択することができる：アルキルフタル酸またはそれを含む植物抽出物、硫黄およびその有機誘導体（例えば、Ｓ－カルボキシメチルシステイン）だけでなく、硫黄含有アミノ酸、シスチン、システイン、メチオニン、亜鉛および／または銅の塩、例えば、Ｌ－ピロリドンカルボン酸の塩（Solabia社のクイブリドン（Cuivridone）（登録商標）およびジンシドン（Zincidone）（登録商標））、レチノイン酸、ビタミンＢ６、過酸化ベンゾイル、サリチル酸、乳酸アンモニウム、水酸化塩化アルミニウム、１０－ヒドロキシデカン酸、ウンデシレン鎖にグラフトされたグリシン、例えばSeppic社のリパサイドＵＧＯＲ（Lipacide UG OR）の名称で販売されているもの、Sasol社のコスマコル（COSMACOL）（登録商標）ＥＣＩの名称で販売されているクエン酸トリアルキル（Ｃ１２－Ｃ１３）。天然由来の抽出物としては、特にアルガンオイル、クローブエキス、ノコギリヤシエキス、ウルマイヤーエキス、アカキナノキ樹皮エキス、キハダエキス、シモツケソウエキス、クララ属エキス、ラミナリア属海藻エキス、Vincience社のアルガラン亜鉛（Algualane Zinc）（登録商標）の名称で販売されている亜鉛を濃縮したチノリモ微細藻類エキス、カオリン（白色粘土）などが挙げられる。

このタイプの活性剤は、特にSederma社からも販売されている。バイオダーミン（Biodermine）（商標）（ペプチドを豊富に含む細菌培養液）、セボソフト（Sebosoft）（商標）（ポリアクリル酸ゲル中のセバシン酸）、セボミンＳＢ１２（Sebomine SB12）（商標）（ラクトフェリン、グルコースオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、およびチオシアン酸カリウムの組み合わせ）、ノルマセブ（Normaseb）（商標）（発酵カゼイン濾液）、イーストバイオメンブレン（Yeast Biomembranes）（商標）、セブレス（Sebuless）（商標）（ライラック細胞培養物の抽出物）、エバーマット（Evermat）（商標）（エナンチアクロランタ抽出物およびオレアノール酸の組み合わせ）、ac.ネット（ac.net）（商標）（オレアノール酸およびノルジヒドログアイアヤレティック酸の組み合わせ）などがある。

同様に、特定の有利な態様において、本発明の第１の形態に係る使用および本発明の第２の形態に係る成分の面において、環状ペプチド（類）は、環状ペプチドの即時の平滑化および均質化効果をさらに向上させるために、毛穴を「力学的に」引き締めるために、少なくとも１つの収斂性活性成分と組み合わせることができる。そのような付加的活性成分は、純粋な分子として以下を含む群より選択されうる：アルミニウムヒドロキシクロライド、ジヒドロキシアルミニウム、ミョウバン、酢酸アルミニウム、ジヒドロキシアルミニウムアラントインなどの特定のアルミニウム塩；Interchemical社のフェノールスルホン酸亜鉛、硫酸亜鉛、酸化亜鉛、タンニン酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸；植物抽出物として、タンニン、特に凝縮タンニンまたはエラグタンニン、セイヨウトチノキ、モーブ、ハマメリス、オーツ麦、スイートアーモンド、ウスベニタチアオイの根、ゴボウの根、ツタウルシ、シラカバ樹皮、トクサ、カモミール、タツナミソウ属、コホッシュの根、ウルマリア、セイヨウオトギリソウ、ヤナギ、ギンバイカなど、ならびに、ホワイトジンジャー、トクサ、ツタウルシ、ローズマリー、ユッカなどの抽出物の混合物、ならびに、アカシア、ニレ、白ヤナギ、シナモン、カバノキ、シモツケソウ、リンドウ、キュウリ、クルミ、ラタニア、グレープフルーツなどの抽出物、ならびに、ウツボグサ属、ビワだけでなく、リンゴ、ナシ、カリン、ナナカマド、サンザシなどのバラ科の多くの果物の抽出物；ならびに、未熟な柿、グリーンバナナ、ヤマモモ属の種の抽出物、チコリーの根、カシスの果実、スグリ、ブルーベリー、クランベリー、シーバックソーン、クコ。

好ましくは、前記付加的活性剤は、セダネノライド、セダノライド、および３－ｎ－ブチルフタリドを含む群より選ばれる少なくとも１種のアルキルフタル酸であり、好ましくはセダノライドであり、セダネノライド、セダノライドおよび３－ｎ－ブチルフタリドの混合物を含むセロリ種子の抽出物であり、好ましくは超臨界ＣＯ₂抽出物であり、好ましくはセダノライドを（アルキルフタル酸の総重量に対して重量％で）主成分とするアルキルフタル酸の混合物を含む抽出物である。この種の成分は、特許出願ＷＯ２０１６１５７０７３に記載されている。この活性成分は、有利には、ケラチノサイトの前分化を介した表皮に対して、および脂腺細胞による皮脂の産生に対して、の２つの形態に作用することができる。インビトロおよびインビボの結果は、この特に有利な組み合わせについての詳細について以下に記載される。

本発明に係る環状ペプチド（類）はまた、ビタミンＢ３化合物、ならびに、ナイアシンアミドまたはトコフェロールのような化合物、ならびに、レチノール、ヘキサミジン、α－リポ酸、レスベラトロールまたはＤＨＥＡのようなレチノイド化合物、ならびに、ヒアルロン酸、ならびにペプチドから選択される少なくとも１つの化合物と組み合わされてもよい。ペプチドは、特に、Ｎ－アセチル－Ｔｙｒ－Ａｒｇ－Ｏ－ヘキサデシル、Ｐａｌ－ＶＧＶＡＰＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０）、Ｐａｌ－ＫＴＴＫＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、Ｐａｌ－ＧＨＫ、Ｐａｌ－ＫＭＯ２Ｋ、Ｐａｌ－ＧＱＰＲ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、およびＰａｌ－Ｋ（Ｐ）ＨＧであってもよく、これらは、化粧品組成物または皮膚科学的組成物に使用される従来の活性成分である。

第３の形態によれば、本発明は、上述した本発明の第２の形態に係る成分を含む組成物を提供する。このような組成物は、皮膚、皮膚の付属器および粘膜をケアするための化粧品にまたは局所治療剤として使用することができる。

第４の形態によれば、本発明はまた、上述した本発明の第２の形態に係る化粧品活性成分を含む化粧品組成物の有効な量を皮膚に局所的に塗布することを含む、皮膚の美的外観を改善する方法を提供する。

本発明に係る環状ペプチドは、光学的に純粋なものであってもよく、Ｌ異性体またはＤ異性体、またはそれらの混合物を含んでいてもよい。好ましくは、天然に存在するＬ異性体であってもよい。環状ペプチドは、塩の形態で存在してもよい。

本発明はまた、（化学的機能の改良および／または付加を有するが、炭素骨格は変化しない）環状ペプチド誘導体、（化学的機能の改良および／または付加を有するが、炭素骨格はさらに変化する）環状ペプチド類縁体、および金属イオン（例えば、銅、亜鉛、マンガン、およびマグネシウムなど）のような他の種との複合体も包含する。

「生理学的に許容される媒体」とは、本発明によれば、限定されるものではないが、水性または水－アルコール溶液、油中水型エマルジョン、水中油型エマルジョン、マイクロエマルジョン、水性ゲル、無水物ゲル、血清、小胞の分散液、または粉末を意味する。

「生理学的に許容される」とは、組成物が、毒性、不適合性、不安定性、アレルギー反応などの危険性がなく、哺乳動物、特にヒトの皮膚および頭皮に接触させての局所使用に適していることを意味する。この「生理学的に許容される媒体」は、一般に、組成物の賦形剤と呼ばれるものを形成する。

本発明に従って使用される環状ペプチドは、将来の最終用途に応じて、適切な場合には可溶化剤を用いて、親油性マトリックスまたは親水性マトリックスに可溶化することができる。

本発明に係る組成物は、身体のあらゆる部位に適用することができ、より具体的には、顔、身体、首回りまたは頭皮に推奨される指示に従って、当業者に公知であるいずれかの形態または媒体であってもよく、特に溶液、分散液、エマルジョン、ペーストまたは粉末の形態で、単独でまたはプレミックスとしてあってもよく、または、単独でまたは媒体中でプレミックスとしてあってもよく、媒体は、例えば、マクロ、ミクロまたはナノカプセル、マクロ、ミクロまたはナノスフィア、リポソーム、オレオソームまたはカイロミクロン、マクロ、ミクロまたはナノ粒子、マクロ、ミクロまたはナノスポンジ、ミクロまたはナノエマルジョンであってもよく、有機ポリマー粉末、タルク、ベントナイト、胞子またはエキシン、または他の無機もしくは有機支持体上に吸着されるものが挙げられる。

特に化粧品においては、顔、体、髪、頭皮のスキンケア範囲およびメイクアップケア範囲に用途を提案できる。

一般に、本発明に係る環状ペプチドは、皮膚／織物との接触によって美容または治療効果を発揮し連続的な局所的送達を可能にするように、織物、天然繊維、合成繊維、羊毛および皮膚に接触することを意図した任意の材料、昼間または夜間の衣服、下着、ハンカチ、または組織への処理のため、任意の形態で、マクロ－、ミクロ－およびナノ粒子、マクロ－、ミクロ－およびナノカプセル上に結合した形態で、または取り込まれた形態で、もしくはそれらに吸収された形態で使用されてもよい。

ＣＴＦＡ（ワシントンＤＣの「米国化粧品工業会」によって発行された「International Cosmetic Ingredient Dictionary & Handbook」（第１８版、２０１８年））は、本発明の組成物中の付加的成分としての使用に適している、スキンケアおよび頭皮ケア業界において一般的に使用される化粧品成分の非限定的な広範な種類について記載している。

その他特に有用な追加のスキンケア活性物質は、Sederma社の商業文献およびwww.sederma.comまたはwww.crodarom.frに掲載されている。

また、以下の市販の活性剤も例として挙げることができる。例えば、ベタイン、グリセロール、アクチモイストバイオ２（ActimoistBio2）（商標）（Active organics社）、アクアカクティーン（AquaCacteen）（商標）（Mibelle AG Cosmetics社）、アクアフィリン（Aquaphyline）（商標）（Silab社）、アクアグルＫ（AquaregulK）（商標）（Solabia社）、カリシリン（Carciline）（商標）（Greentech社）、コディアベレーン（Codiavelane）（商標）（Biotech Marine社）、ダーマフラックス（Dermaflux）（商標）（Arch Chemicals， Inc社）、ハイドラ’フロー（Hydra’ Flow）（商標）（Sochibo社）、ハイドロモイストＬ（Hydromoist L）（商標）（Symrise社）、レノブヒアル（RenovHyal）（商標）（Soliance社）、シーモス（Seamoss）（商標）（Biotech Marine社）、アルジルリン（Argireline）（商標）（Lipotec社のアセチルヘキサペプチド－３の商標名）、スピラントール（spilanthol）、もしくは、ガチュリンエクスプレッション（Gatuline Expression）（商標）の商品名で知られるオランダセンニチの抽出物、ボスウェリン（Boswellin）（商標）の商品名で知られるボスウェリア・セラータの抽出物、ディーパリンＰＶＢ（DeepalinePVB）（商標）（Seppic社）、シン－ＡＫＥ（Syn-AKE）（商標）（Pentapharm社）、アメリオックス（Ameliox）（商標）、バイオキシリフト（Bioxilift）（商標）（Silab社）、フィトセルテック（PhytoCellTec）（商標）アルガン（Argan）（Mibelle社）、パピルアクチルＤ（PapilactylD）（商標）（Silab社）、プレベンセリア（Preventhelia）（商標）（Lipotec社）、もしくは、Sederma社が販売する以下の活性成分のうちの１つまたは１つ以上のもの、サブリスキン（Subliskin）（商標）、ヴェニュセアンヌ（Venuceane）（商標）、モイスト２４（Moist 24）（商標）、ベジソームモイスト２４（Vegesome Moist 24）（商標）、エッセンスキン（Essenskin）（商標）、ジュビニティー（Juvinity）（商標）、リビラット（Revidrat）（商標）、レジステム（Resistem）（商標）、クロノディン（Chronodyn）（商標）、コンブチカ（Kombuchka）（商標）、クロモケア（Chromocare）（商標）、カルモセンシン（Calmosensine）（商標）、グリコカインファクターＳ（Glycokin factor S）（商標）、バイオブスチル（Biobustyl）（商標）、イデアリフト（Idealift）（商標）、セラミド２（Ceramide 2）（商標）、セラミドＡ２（Ceramide A2）（商標）、セラミドＨＯ３（Ceramide HO3）（商標）、レガンス（Legance）（商標）、インテンスリム（Intenslim）（商標）、プロディジア（Prodizia）（商標）、ビューティーファイ（Beautifeye）（商標）、パシフィール（Pacifeel）（商標）、ジンガースリム（Zingerslim）（商標）、メイリテイジ（Meiritage）（商標）、セネステム（Senestem）（商標）、セブレス（Sebuless）（商標）、マジェステム（Majestem）（商標）、アピスカルプ（Apiscalp）（商標）、ルビステム（Rubistem）（商標）、シティステム（Citystem）（商標）、ネオニカ（Neonyca）（商標）、シアバターのＮＧ不けん化物（NG Insaponifiables de Beurre de Karite）（商標）、マジェステム（Majestem）（商標）、ハイドロノネシス（Hydroonesis）（商標）、ポアテクト（Poretect）（商標）およびクリスタライド（Crystalide）（商標）、もしくはそれらの混合物。

本発明に係る環状ペプチド（類）と組み合わせることができる植物抽出物（従来の抽出物の形態で、またはインビトロによって調製された形態で）の中で、アイビー、特にイングリッシュアイビー（Hedera helix）、マンシュウサイコ、ミシマサイコ、アルニカ、ローズマリー、マリーゴールド）、セージ、チョウセンニンジン、イチョウ、セントジョーンズワート、ナギイカダ、ヨーロピアンシモツケソウ、ビッグフラワージャワティー、アーティチョーク、藻類、カバノキ、緑茶、コーラナッツ、セイヨウトチノキ、竹、ツボクサ）、ヘザー、ヒバマタ、ヤナギ、ヤナギタンポポ、エスシン、カンズー、クリサンテルムインジクム、アルメニアセア属の植物、アトラクチロディスプラティコドン、シノメニウム、ファルビチジス、フレミンギア、コレウス、例えば、コレウスフォルスコリ、コレウスブルメイ、コレウスエスキロリ、コレウススクテラロイド、コレウスキサントスおよびコレウスバルバトスの抽出物、例えばコレウスバルバトスの根の抽出物、バロッテ、グイオア、ダバリア）、ターミナリア、バリングトニア、トレマ、アンチロビア、セクロピア、アルガン、ディオスコレア属、例えばディスコレアオッポシタまたはメキシカンの抽出物、アンミビスナガ、メナモミ、特にツクシメナモミの抽出物、ツツジ科の植物抽出物、特にコケモモまたはクマコケモモの抽出物、アロエベラ、ステロールを含む植物（すなわち植物ステロール）、マンジスタ（アカネ属植物、特にルビアコーディフォリアの抽出物）、およびグッガル（コンミフォラ属植物、特にグッグルの抽出物）、コーラの抽出物、カモミール、ムラサキツメクサの抽出物、カバの抽出物（カバカバ（Kava Kava）（商標）、SEDERMA社）、オトメアゼナの抽出物（バコカルミン（Bacocalmine）（商標）、SEDERMA社）およびムチヤギの抽出物、スペインカンゾウ、クワ、コバノブラシノキ（ティーツリー）、ラレアディバリケータ、ラブドシア・ルベッセンス、ユーグレナグラシリス、フィブラウレアレシサヒルディネア、シャラパルソルガムの抽出物、ヒマワリの抽出物、エナンチアクロランタ、ミトラカーパススケーパー、ブチューバロマス、ヘンナＬ、ホウライシダＬ、クサノオウ、ヘチマ、ジャパニーズマンダリン、チャノキ、チガヤ、ツノゲシ、サイプレス、ソロモンズシール、ラブリーヘムスレイア、セイヨウニワトコ、アオイマメ、シマセンブリ、オオウキモ、トゥルネラ・ディフサ、ハナスゲ、ヒメマツバボタン、ホップ、コーヒーノキ、イェルバマテ、グロブラリア・コルディフォリア、ネムノキ、サワーウッド、ハナショウガ、キバナオウギ、オオバナオケラ、ヘラオオバコ、セイヨウウスユキソウ、オシロイバナ、ホアハウンド、または蘭の抽出物を挙げることができる。

本発明の組成物は、１つまたは１つ以上の追加のペプチド類を含んでもよく、特に限定されないが、ジ－、トリ－、テトラ－、ペンタ－、およびヘキサペプチドならびにこれらの誘導体を含んでもよい。特定の実施形態によれば、組成物中の付加的ペプチドの濃度は１×１０^-7重量％から２０重量％の範囲であり、１×１０^-6重量％から１０重量％の範囲が好ましく、１×１０^-5重量％から５重量％の範囲が好ましい。本明細書において、「ペプチド」という用語は、１０種類以下のアミノ酸を含むペプチド、これらの誘導体、同位体および例えば金属イオン（銅、亜鉛、マンガン、マグネシウム等）等の他の種類との複合体を表す。「ペプチド類」という用語は、天然ペプチド類および合成ペプチド類の両方を示す。「ペプチド類」は、自然界において見出されるおよび／または商業上入手可能なペプチド類を含む組成物も示す。

本発明での使用に適したジペプチドは、カルノシン（βＡＨ）、ＹＲ、ＶＷ、ＮＦ、ＤＦ、ＫＴ、ＫＣ、ＣＫ、ＫＰ、ＫＫ、ＴＴ、ＰＡ、ＰＭ、またはＰＰを含むが、これらに限定されない。

本発明での使用に適したトリペプチドは、ＲＫＲ、ＨＧＧ、ＧＫＨ、ＧＨＫ、ＧＧＨ、ＧＨＧ、ＫＦＫ、ＫＡｖａＫ、ＫβＡＫ、ＫＡｂｕＫ、ＫＡｃａＫ、ＫＰＫ、ＫＭＯＫ、ＫＭＯ₂Ｋ（ＭＯ₂は、二酸化スルホキシドメチオニン）、ＫＶＫ、ＰＰＬ、ＰＰＲ、ＳＰＲ、ＱＰＡ、ＬＰＡ、またはＳＰＡを含むが、これらに限定されない。

本発明での追加のペプチドとしての使用に適したテトラペプチドは、ＲＳＲＫ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１）、ＧＱＰＲ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２）、ＫＴＦＫ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＫＴＡＫ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４）、ＫＡＹＫ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、またはＫＦＹＫ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）を含むが、これらに限定されない。適したペンタペプチドは、ＫＴＴＫＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）を含むが、これに限定されない。適したヘキサペプチドは、ＧＫＴＴＫＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＶＧＶＡＰＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９）を含むが、これらに限定されない。

本発明での付加的ペプチドとしての使用に適した他のペプチド類は、ペプチド類の親油性誘導体、好ましくはパルミトイル（Ｐａｌ）誘導体またはミリストイル（Ｍｙｒ）、および前記の金属複合体（例えば、トリペプチドＨＧＧの銅錯体）を含むが、これらに限定されない。好ましいジペプチドは、Ｎ－パルミトイル－ベータ－Ａｌａ－Ｈｉｓ、Ｎ－アセチル－Ｔｙｒ－Ａｒｇ－ヘキサデシルエステル（カルモセンシン（Calmosensine）（商標）、Sederma社）、Ｐａｌ－ＲＴまたはＰａｌ－ＫＴ（Sederma社）を含む。好ましいトリペプチド誘導体は、例えば、Ｐａｌ－ＧＫＨおよびＰａｌ－ＧＨＫ（Sederma社）、ＨＧＧの銅誘導体（ラミン（Lamin）（商標）、Sigma社）、リポスポンディン（Lipospondin）（Ｎ－エライドイルーＫＦＫ）およびその保存的置換をした類似体、Ｎ－アセチル－ＲＫＲ－ＮＨ₂（ペプチドＣＫ＋）、Ｎ－Ｂｉｏｔ－ＧＨＫ（Sederma社）、Ｐａｌ－ＫＡｖａＫ、Ｐａｌ－ＫβＡｌａＫ、Ｐａｌ－ＫＡｂｕＫ、Ｐａｌ－ＫＡｃａＫ、またはＰａｌ－ＫＭＯ₂Ｋ（商標マトリキシル（Matrixyl）（登録商標）シンセ’６（Synthe’ 6）（登録商標）、Sederma社）、Ｐａｌ－ＫＶＫ（シン－コル（Syn-Coll）（商標）、DSM社）、およびこれらの誘導体を含む。

ここで、ＷＯ２０１５１８１６８８出願に記載されている一般式Ｘ－Ｐｒｏ＊－Ｐｒｏ＊－Ｘａａ－Ｙの抗老化トリペプチドについても言及されてもよい。Ｘａａは、Ｎ末端において、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、およびＡｓｐから選択される。Ｘは、Ｃ末端において、Ｈ、－ＣＯ－Ｒ１および－ＳＯ２－Ｒ１から選択される。Ｙは、ＯＨ、ＯＲ１、ＮＨ２、ＮＨＲ１またはＮＲ１Ｒ２から選択される。Ｒ１およびＲ２は互いに独立して、それぞれ、直鎖状、分枝状、環状、多環状、不飽和、水酸化、カルボニル化、リン酸化および／または硫化された、アルキル基、アリル基、アルキルアリル基、アルコキシ基およびアリロキシ基から選択され、前記基は場合によってはその骨格にヘテロ原子、特にＯ、Ｓおよび／またはＮを有している。Ｐｒｏ＊は、プロリン、そのアナログまたはその誘導体に対応している；例えば、一般式Ｘ－Ｐｒｏ＊－Ｐｒｏ＊－Ｘａａ－Ｙは、Ｍｙｒ－ＰＰＬ－ＯＨおよびＭｙｒ－ＰＰＲ－ＯＨを含む。

ここではさらに、ＷＯ２０１４／０８０３７６に開示されている一般式Ｘ－（Ｘａａ₁）ｎ－Ｐｒｏ＊－Ｘａａ₂－Ｙの色素沈着促進および／またはＥＣＭ促進の、ジペプチドおよびトリペプチドを引用することができる。ｎ＝０、１または２の場合、Ｘａａ₁は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｓｏ、Ｐｈｅ、およびＰｒｏならびにそれらの類似体および誘導体から選択される疎水性アミノ酸、もしくはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、およびＧｌｕ、ならびにそれらの類似体および誘導体から選択される極性アミノ酸である；ｎ＝２の場合、２つのアミノ酸Ｘａａ₁は、同じまたは異なる；Ｘａａ₂は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｓｏ、およびＰｈｅ、ならびにそれらの類似体および誘導体から選択される疎水性アミノ酸、もしくはＡｒｇ、Ｌｙｓ、およびＨｉｓ、ならびにそれらの類似体および誘導体から選択される塩基性アミノ酸である；Ｎ末端において、Ｘは、Ｈ、－ＣＯ－Ｒ₁および－ＳＯ₂－Ｒ₁から選択される；Ｃ末端において、Ｙは、ＯＨ、ＯＲ₁、ＮＨ₂、ＮＨＲ₁またはＮＲ₁Ｒ₂から選択される；Ｒ₁およびＲ₂は、互いに独立して、アルキル基、アリル基、アラルキル基、アルキルアリル基、アルコキシ基およびアリルオキシ基から選択され、それは、直鎖状、分枝状、環状、多環状、飽和、不飽和、水酸化、カルボニル化、リン酸化および／または硫化であり得、前記基は、骨格中にＯ、Ｓおよび／またはＮのヘテロ原子を有するか否かを問わず、Ｐｒｏ＊がプロリン、その類似体またはその誘導体に対応している；例えば、一般式Ｘ－（Ｘａａ₁）ｎ－Ｐｒｏ＊－Ｘａａ₂－Ｙは、以下のペプチドＰａｌ－ＳＰＲ－ＯＨ、Ｐａｌ－ＰＰＲ－ＯＨ、Ｐａｌ－ＱＰＡ－ＯＨ、Ｐａｌ－ＬＰＡＯＨ、Ｍｙｒ－ＳＰＡ－ＯＨ、Ｐａｌ－ＰＭ－ＯＨ、Ｐａｌ－ＰＡ－ＯＨおよびＰａｌ－ＰＰ－ＯＨを含む。

本発明に係る追加のペプチドとしての使用に適したテトラペプチド誘導体としては、Ｐａｌ－ＧＱＰＲ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）（Sederma社）、およびＰａｌ－ＫＴＦＫ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）またはＥｌａ－ＫＴＦＫ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）、Ｅｌａ－ＫＴＡＫ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、Ｅｌａ－ＫＡＹＫ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２３）またはＥｌａ－ＫＦＹＫ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２４）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書において追加のペプチドとしての使用に適したペンタペプチド誘導体としては、Ｐａｌ－ＫＴＴＫＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）（Sederma社からマトリキシル（Matrixyl）（登録商標）として入手可能）、ＸａａがＬｅｕまたはＰｒｏであるＰａｌ－ＹＧＧＦＸａａ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２５）、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書において使用に適したヘキサペプチド誘導体は、Ｐａｌ－ＶＧＶＡＰＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０）、Ｐａｌ－ＧＫＴＴＫＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２６）、ＸａａがＴｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｉｃ、７－ヒドロキシ－ＴｉｃまたはＴｐｉ（7-hydroxy-Tic ou Tpi）（ＳＥＱＩＤＮＯ：２７）であるＰａｌ－ＨＬＤＩＩＸａａ、およびそれらの誘導体を含むが、これらに限定されない。また、Ｐａｌ-ＧＨＫおよびＰａｌ-ＧＱＰＲ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）（マトリキシル（Matrixyl）（登録商標）３０００、Sederma社）の混合物も挙げることができる。

トリペプチドまたはその誘導体を含む市販の好ましい組成物には、Sederma社のバイオペプタイドＣＬ（Biopeptide-CL）（商標）、マキシリップ（Maxilip）（商標）、バイオブスチル（Biobustyl）（商標）、プロキャピル（Procapil）（商標）およびマトリキシル（Matrixyl）（登録商標）シンセ’６（Synthe’ 6）（登録商標）が含まれる。テトラペプチドの商業的に入手可能な好ましい供給源である組成物は、５０から５００ｐｐｍの間のＰａｌ-ＧＱＰＲ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）およびSederma社によって提示される賦形剤を含むリジン（Rigin）（商標）、アイリス（Eyelis）（商標）、マトリキシル（Matrixyl）（登録商標）リローデッド（Reloaded）およびマトリキシル３０００（Matrixyl 3000）（登録商標）を含む。

付加的活性成分としては、以下の市販されているペプチドも挙げることができる。
・Pentapharm社から販売されている、バイアロックス（Vialox）（商標）（ＩＮＣＩ名＝ペンタペプチド－３（アラニン、アルギニン、イソロイシン、グリシン、およびプロリンを含む合成ペプチド））、シン－Ａａｋｅ（Syn-Aake）（商標）（β－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｄａｂ－ＮＨ－Ｂｚｌ）またはシン－コル（Syn-Coll）（商標）（Ｐａｌ－Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－ＯＨ）；
・Lipotec社から販売されている、アルジルリン（Argireline）（商標）（Ａｃ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－ＮＨ₂（ＩＮＣＩ名＝アセチルヘキサペプチド－３））（ＳＥＱＩＤＮＯ：２８）、ルーファシル（Leuphasyl）（商標）（Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ）（ＳＥＱＩＤＮＯ：２９）、アルデニン（Aldenine）（商標）（Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｌｙｓ）、トリラーゲン（Trylagen）（商標）（ＩＮＣＩ名＝シュードアルテロモナス発酵抽出物、コムギタンパク質加水分解物、ダイズタンパク質加水分解物、トリペプチド－１０シトルリン（シトルリンとトリペプチド－１０（アスパラギン酸、イソロイシン、およびリジンからなる合成ペプチド）の反応生成物）、トリペプチド－１）、アイセリル（Eyeseryl）（商標）（Ａｃ－β－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ）（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、セリレシン（Serilesine）（商標）（Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ）（ＳＥＱＩＤＮＯ３１）またはデコリニル（Decorinyl）（商標）（ＩＮＣＩ名：トリペプチド－１０シトルリン＝シトルリンとトリペプチド－１０（アスパラギン酸、イソロイシン、リジンからなる合成ペプチド）の反応生成物；
・Vincience社から販売されている、コラキシル（Collaxyl）（商標）（Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３２））またはクインテスシン（Quintescine）（商標）（Ｃｙｓ－Ｇｌｙ）；
・Les Laboratoires Serobiologiques/Cognis社から販売されている、サイトキノール（Cytokinol）（商標）ＬＳ（カゼイン加水分解物）；
・欧州生物学研究所（L'Institut Europeen de Biologie Cellulaire）から販売されている、コラレン（Kollaren）（商標）（Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｌｙｓ）、ＩＰ２０００（商標）（Ｐａｌ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ）またはメディプレン（Meliprene）（商標）（ＩＮＣＩ名＝モノフルオロヘプタペプチド－１：酢酸と、アルギニン、グリシン、グルタミン酸、ヒスチジン、ノルロイシン、ｐ－フルオロフェニルアラニンおよびトリプトファンを含む合成ペプチドとの反応生成物）；
・Introvations社から販売されている、ニュートラゼン（Neutrazen）（商標）（Ｐａｌ－Ｈｉｓ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－ＮＨ₂）；
・lnfinitec Activos社から販売されているボント－Ｌ－ペプチド（BONT－L－Peptide）（商標）（ＩＮＣＩ名＝パルミトイルヘキサペプチド－１９：パルミチン酸とヘキサペプチド－１９（アスパラギン、アスパラギン酸、リジンおよびメチオニンからなる合成ペプチド）との反応生成物）、Ｔｉｍｐ－ペプチド（Timp－Peptide）（商標）（ＩＮＣＩ名＝アセチルヘキサペプチド－２０：ヘキサペプチド－２０（アラニン、グリシン、リジン、バリンおよびプロリンからなる合成ペプチド）のアセチル化によって得られた反応生成物））、又はＥＣＭモジューリン（ECM Moduline）（商標）（ＩＮＣＩ名＝パルミトイルトリペプチド－２８：パルミチン酸とトリペプチド－２８（アルギニン、リジンおよびフェニルアラニンからなる合成ペプチド）との反応生成物））。

「局所処置」又は「局所使用」とは、本発明によれば、それが適用される場所、すなわち皮膚、粘膜および皮膚の付属器で作用することが意図される適用を意味する。

本発明に係る環状ペプチド（類）またはその組成物は、例えば、カニューレ型器具を用いて、標的領域に局所的に適用することができる。

「有効な」量とは、様々な因子、例えば、ヒトの年齢、患者の状態、障害または状態の重症度、投与様式などに依存する。有効な量は、所望の効果を達成するのに十分な非毒性量を意味する。

本発明に係る化粧品組成物において、有効な量で存在する環状ペプチド（類）は、一般的に、組成物の総重量に対して０．０００００１％から５％の範囲の量、好ましくは０．００００１％から０．１％、より好ましくは０．０００５％から０．００５％の範囲の量であり、組成物の目的および所望の効果に応じて増減が判断される。

本明細書で使用される全てのパーセンテージおよび比は、組成物全体の重量によるものであり、他に指定がない限り、全ての測定は、２５℃で行われる。

例えば、顔の美容処置について、欧州化粧品指令（European Cosmetics Directive）は、１人当たり２．７２ｍｇ／ｃｍ²／日のクリームの標準適用量、および１人当たり０．５ｍｇ／ｃｍ²／日のボディーローションの標準適用量を設定している。

他の特定の特徴によれば、本発明に係る美容処置方法は、例えば、光療法、温熱療法またはアロマセラピー処置などの皮膚を標的とする１つまたは１つ以上の他の処置方法と組み合わされてもよい。

本発明によれば、上記に記載の方法の実施を意図されたいくつかのコンパートメントを有するデバイスまたはキットを提示することが可能であり、それは、例えば、限定されないが、第１のコンパートメントに少なくとも本発明に係る活性を含む組成物を、第２コンパートメントに付加的賦形剤および／または活性剤を含むことができる。ここで、第１コンパートメントおよび第２コンパートメントに含まれる組成物は、特に、上記の処置方法の１つにおいて、同時の、別々のまたは段階的な使用のための組み合わせの組成物とみなされる。

本発明の第３の形態に係る組成物は、皮膚、特に真皮細胞外マトリックスを構成する分子が欠乏している皮膚の処置に適している。

以下の実施例によって、本発明の特定の態様が開示され、説明される。実施例は、本開示を限定するものではなく、その理解および実施に有用な情報を主に提供する。詳細な説明は、以下の図と共に参照される：

図１は、本発明に係る環状ペプチドCyclo (-Met-Leu-Ile-Pro-Pro-Phe-Phe-Val-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：５）を図示している；図２は、実施例Ａの混合物の環状ペプチド組成物を示した表である；図３は、インビボ評価に使用されるキュートメーターを使用して得られた、時間に応じた皮膚の変形のグラフを示している。

詳細な説明

Ａ）本発明に係る環状ペプチドの製造例
亜麻種子をオイルプレスで粉砕し、水性エタノールで抽出する。次に、その混合物を、翼板または他の適当な手段で約１時間撹拌する。その懸濁液を３から５日間で、２相に分離させる。使用済み油（環状ペプチドは含まれない）とエタノールとの画分を分離する。油性画分を除去する。エタノールを真空下で蒸発させる。本発明に係る環状ペプチドの混合物を構成する固体残渣を回収し、乾燥させ、微粉末に粉砕する。

本方法で得られる混合物は、本質的に環状ペプチドからなり、残りの部分は脂質（脂肪酸およびトリグリセリド）からなる。

環状ペプチドをシステム内のＨＰＬＣで分離し、定量した。ＨＰＬＣの条件は、５ｍＭアンモニウムアセトニトリル／ギ酸グラジエント（質量分析によって補足できる２１４ｎｍでの検出）を用い、Ｃ１８カラムで行った。

図２は、混合物の質的および量的組成を示す：
－３つの環状ペプチドが主である：リヌソルブ（Linusorb）Ｂ１（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）、リヌソルブＢ２（図１に例示目的で示され、かつＳＥＱＩＤＮＯ：５）、およびリヌソルブＢ３（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）であり；これらはそれぞれ、２２％、２１％および２３％であるので、環状ペプチドの混合物の総重量に対して合計６５重量％を占める；
－他の３つの環状ペプチドは、より小さい割合で、リヌソルブＡ１（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、リヌソルブＡ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）およびリヌソルブＡ３（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）であり、環状ペプチドの混合物の総重量に対して３５重量％を占める。

リヌソルブＢ１、Ｂ２、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、その配列中に、特に種子を原因として酸化されうるメチオニンを有する。上記の混合物において、メチオニンの一部は、スルホキシドに酸化され、環状ペプチドの全重量に対して約４０重量％を占める。

本発明に係る環状ペプチドおよびその調製の他の例は、特許出願ＷＯ２００９７９７９２およびＷＯ２０１３０９１０７０にも記載されている。

Ｂ）本発明に係る化粧品または局所治療活性成分の調製例
１／環状ペプチドの混合物に基づく成分の調製
活性剤：本発明に係る環状ペプチドの混合物１０００ｐｐｍ。その調整は上記Ａ）に記載されている。
賦形剤：脂肪性賦形剤、例えばカプリル酸／カプリン酸トリグリセリドタイプのエステル化油。
手順：活性剤を、脂肪性賦形剤中で中程度の撹拌をしながら、高温で可溶化する。

２／本発明に係る環状ペプチド混合物とセロリの超臨界ＣＯ₂抽出物との組み合わせに基づく成分の調製
上記に開示されているように、環状ペプチドの本発明に係る混合物は、有利には、セロリ種子の超臨界ＣＯ₂抽出物と組み合わせることができる。

特許出願ＷＯ２０１６／１５７０７３に出願人が記載したこの種の抽出物は、以下の方法で調製される：セロリの種子を粉砕して約８００μｍの粒径の粉末を得る。次に、この粉末を、圧力９０バール、４０℃で超臨界ＣＯ₂を用いて抽出する。その後、最終的な抽出物に存在する可能性のある残留水を除去する。抽出物は、３つのアルキルフタル酸を含む全フタル酸の７１重量％の油性液状である：３つのアルキルフタル酸は、フタル酸の総重量に対して、３－ｎ－ブチルフタル酸を１０重量％、セダノライドを３０重量％、セダネノライドを６０重量％の割合で含む。

活性剤：本発明に係る環状ペプチドの混合物５００ｐｐｍ。その製造は、上記のＡ）に記載されている。それに加えて、セロリ種子の超臨界ＣＯ₂抽出物の７００ｐｐｍ（最終的に全フタル酸のうちの５００ｐｐｍを含む）。
賦形剤：界面活性剤（例えば、ソルビタントリオレート）の存在下での脂肪性賦形剤（例えばカプリル／カプリン酸トリグリセリド型のエステル化油）。
手順：Ａ）で製造された本発明に係る環状ペプチドの混合物は、界面活性剤の存在下で、脂肪性賦形剤の一部の中で、中程度の撹拌をしながら、高温で可溶化される。冷却せずに、室温まで攪拌を続けながら、脂肪性賦形剤の残りを添加する。その後、セロリ種子の超臨界ＣＯ₂抽出物を中程度の撹拌下で可溶化する。

一例として、インビボの記載および項目Ｄ）のガレノス製剤については、これらの成分（皮膚に適用可能な化粧品組成物中の、成分１または成分２の、０．５％から１０％の間）を使用したものである。

Ｃ）インビトロ有効性試験
これらは、以下の３つの異なる段階で実施された。
１）本発明に係る環状ペプチドの混合物（上記のＡ）で調製したもの）の効果
２）比較試験：純粋な環状ペプチドを環状ペプチドの混合物と比較
３）環状ペプチド混合物とセロリ種子のＣＯ₂超臨界抽出物との組み合わせの効果

１／本発明に係る環状ペプチドの利益
１．１／真皮の緻密化効果／支持組織の強化
８０歳の人の真皮は、長い繊維のコラーゲンを有する２０－３０歳の人に比べて、４倍以上の断片化したコラーゲンを含む。この断片化によって、細胞がマトリックスと維持している相互作用を最大８０％まで減少させる。皮膚に最も多く含まれるタンパク質であるコラーゲン－Ｉおよびエラスチンなどを含む支持タンパク質の、真皮線維芽細胞による産生量は、加齢とともに減少する。

これは、密度、組織力、および動性が低下した皮膚の構造的および機能的な衰えを説明している。皮膚を支持する組織の質の低下は、皮膚の粘弾性特性の低下を引き起こす。皮膚の粘弾性特性は、張り、弾性力、および色調であり、１０年で約１３％減少する。

そこで、真皮マトリックスの成分の産生を刺激することができる化粧品活性剤が、特に探索されている。

原理：
２つの補完的な方法が用いられた。真皮由来のヒト線維芽細胞（ＨＤＦ）を、その生理機能および増殖に必要な成長因子を供給する培地で播種した。細胞がコンフルエントに達したとき、細胞に、試験品を添加した。３日間の接触後、培地を除去し、細胞によって産生されたエラスチンの量をＥＬＩＳＡ法（ｎ＝５）で測定し、試験品溶媒（コントロール）で得られた量と比較した（下記表１）。

実験の第２シリーズにおいて、７日間の接触後、細胞によって産生されたエラスチン繊維を、固定マット上で免疫蛍光法（ＩＭＦ、ｎ＝３）によって強調し、画像解析によって定量化した。結果は、任意の蛍光単位／１０⁷細胞で表される。

細胞数は、ＤＮＡをマーキングする、ヘキスト３３２５８法を用いて評価した。結果の有意性を評価するために、分散分析および対応のない標本に対するＳｔｕｄｅｎｔｔ－検定を行った。

コラーゲン－Ｉの産生は、同様の方法で実証した（表２）。

結果：
表１：本発明に係る環状ペプチドの混合物との接触後におけるＨＤＦによるエラスチン産生の変化

表２：本発明に係る環状ペプチドの混合物との接触後におけるＨＤＦによるコラーゲン－Ｉ産生の変化

これらのデータは、真皮の支持組織における光学的な補強において、本発明に係る環状ペプチドの混合物が、より張りおよび弾力性をもたらす可能性を示している。

１．２／真皮－表皮接合部（ＤＥＪ）の強化
ラミニンは、ＤＥＪの部位において重要である。ラミニンは、基底層の一部であり、基底ケラチノサイトを基底膜上に適切に固定し、表皮の柔軟性に関与している。さらに、ラミニンは、ケラチノサイトの増殖を刺激し、ケラチノサイトを分化に関与させることを可能にする。ラミニンは、古い細胞では、若い細胞と同じように効率的に入れ替わることができないため、より良い再生のためにケラチノサイトの生合成を刺激することが注目されている。

コラーゲンＩＶ合成量の増加も、探索されている。コラーゲンＩＶは、ＤＥＪを回復／強化するのに役立つ。コラーゲンＩＶは、二次元ネットワークを形成し、ＤＥＪの主要な構成要素の一つである。

加齢に伴うタンパク質合成の減少は、ＤＥＪの部位において感じられる。このように、コラーゲンＩＶは、より断片化され、同時にラミニンと同様に生成されにくくなり、いくつかの領域では、ＤＥＪの変化と、メラノサイト、ケラチノサイト、およびＤＥＪ間の連絡の低下と、組織の柔軟性の低下とにつながる。したがって、これら２つのタンパク質の合成を刺激することに関心が持たれるのは、明らかである。

原理：
培地の溶液中で、本発明に係る環状ペプチドの混合物を、ＨＤＦと接触させた。ラミニンおよびコラーゲンＩＶの分析を培地上で行った；その結果は、マット上に存在する細胞の数に還元した。

結果：
表３：本発明に係る環状ペプチドの混合物の異なる濃度での接触後における、ＨＤＦによるラミニン産生の変化；ＥＬＩＳＡ法（ｎ＝４）。

本発明に係る環状ペプチドの混合物は、ラミニンの産生をポジティブに調節する。その効果は、５ｐｐｍから明らかであり、＋７６％に達する（ｐ＜０．０１）。

表４：本発明に係る環状ペプチドの混合物の異なる濃度での接触後における、ＨＤＦによるコラーゲンＩＶ産生の変化；ＥＬＩＳＡ法（ｎ＝４）。

本発明に係る環状ペプチドの混合物は、コラーゲンＩＶの産生をポジティブに調節する。その効果は、５ｐｐｍから明らかであり、＋４４．１％に達する（ｐ＜０．０１）。

このようにして、本発明に係る環状ペプチドの混合物は、ラミニンおよびコラーゲンＩＶの合成を刺激し、基底ケラチノサイトのＤＥＪへのより良い固定、その増殖／分化、および真皮の弾性成分へのＤＥＪのより良い固定を促進する。

１．３／炎症メディエーターの減少
敏感肌および刺激性肌の特徴は、サイトカイン、炎症誘発性ペプチド（例えば、ＩＬ－８、ＩＬ－６）、および炎症誘発性脂質（例えば、ＰＧＥ－２）の分泌が異常に多いことである。

また、炎症メディエーターである、ＩＬ－６およびＰＧＥ－２は、微小な炎症を介して早期老化現象を誘発することが知られている。したがって、炎症反応を減らし、皮膚の老化を遅らせるために、ＩＬ－８、ＩＬ－６、およびＰＧＥ２の産生を減少させる活性剤を統合することが、化粧品の処方において探索されている。

活性成分を検証するために、皮膚細胞を穏やかなストレス条件下（ＵＶＢ照射の適用）で培養し、微小炎症を模倣した。この条件において、炎症メディエーターである、ＩＬ－８、ＩＬ－６、およびＰＧＥ－２の有意な減少は、抗炎症作用の意味で解釈される。

原理：
ＨＤＦを、コンフルエントなマットが得られるまで増殖させる。この段階で、ＨＤＦを試験品と２４時間接触させた後、マットにＵＶＢを照射し、再び試験品と２４時間接触させた。ＰＧＥ－２およびＩＬ－８の合成量は、ＥＬＩＳＡ法によって培養上清中で測定された。データを正規化するために、細胞数を評価した。結果の有意性を評価するために、分散分析および対応のない標本に対するＳｔｕｄｅｎｔｔ－検定を行った。

結果：
表５：本発明に係る環状ペプチドの混合物の異なる濃度での接触後における、線維芽細胞によって産生されるＰＧＥ₂およびＩＬ－８の量の変化；（ｎ＝３）

原理：
ヒトケラチノサイト（ＨＫ）をコンフルエントなマットが得られるまで培養した。この段階で、ＨＫを試験品と２４時間接触させ、次に、マットにＵＶＢを照射し、再び試験品と２４時間接触させた。ＰＧＥ－２およびＩＬ－８の合成量は、ＥＬＩＳＡ法によって培養上清中で測定された。データを正規化するために、細胞数を評価した。結果の有意性を評価するために、分散分析および対応のない標本に対するＳｔｕｄｅｎｔｔ－検定を行った。

結果：
表６：本発明に係る環状ペプチドの混合物の異なる濃度での接触後における、ケラチノサイトによって産生されるＰＧＥ₂およびＩＬ－８の量の変化；（ｎ＝３）

したがって、有利には、本発明に係る環状ペプチドの混合物は、２つのタイプの細胞における２つの炎症誘発性メッセンジャーを強くかつ有意に減少させる。

１．４／脂腺細胞による皮脂分泌量の減少
皮膚の表面には多くの毛穴があり、その機能は、余分な皮脂、ならびに、垢および汗などの皮膚の不純物を取り除くことである。脂性肌は、脂腺細胞の皮脂分泌量が多すぎることに関係している。皮脂が多すぎると、にきびおよび黒ずみの発生が増えたり、毛穴がふさがれて毛穴が拡大して目立ちやすくなったり、肌の粒が不規則になったりするなど、肌および頭皮の性質に変化が生じる。

抗脂漏性の化粧品活性剤は、皮脂の産生を減少させることによってこの進行に対抗し、皮膚の毛穴を引き締める効果を有し、特に脂性肌の特徴である不規則なキメとともに脂っぽい／テカリのある外観を滑らかにし、低減する効果を有する。

原理：
脂腺細胞を、その増殖培地に播種した。コンフルエント時に、皮脂細胞を、本発明に係る環状ペプチド混合物と４８時間接触させる。培地を除去した後、細胞マットを細胞内脂質マーカーであるレッドナイルを添加してインキュベートし、これによって、細胞内に存在する脂質の量を、放出された蛍光を測定することにより推定することができる。生存可能性の推定は、蛍光色素を用いて同じマット上で並行して行う。

結果：
表７：本発明に係る環状ペプチドの混合物の異なる濃度での接触後における、脂腺細胞における脂質合成の変化；（ｎ＝３）

これらの結果は、本発明に係る環状ペプチドの混合物に皮脂産生細胞を曝露することによって、これらの脂腺細胞における脂質の量を減少できることを示している。

したがって、本発明に係る環状ペプチドの混合物は、テカリ、ギラツキのある外観、毛穴のサイズおよび数など、脂性肌または脂性傾向のある肌に関連する皮膚疾患を治療するために使用することができ、肌に滑らかで、均一で、より調和のとれた外観を与えることができる。

１．５／クロストーキングケラチノサイト／線維芽細胞（条件付培地での試験）
ａ／予備試験
原理：
ＨＫをコンフルエントになるまで培養し、２４時間、本発明に係る環状ペプチドの混合物の異なる用量を添加、または何も添加しなかった（溶媒コントロール）。一旦洗浄を行った細胞は、その後、わずかな酸化ストレスを生じさせるように、ＵＶＢを照射され、２４時間培養に戻された。照射していないＨＫの培養物をネガティブコントロールとして用いた。これらのストレスを受けたＨＫの培養液（条件付培地）を除去し、この条件付培地によって誘導され得る、コラーゲン－Ｉ産生（ＩＭＦによる評価）およびＭＭＰ１産生（ＥＬＩＳＡ法による評価）を評価するために、ヒト線維芽細胞に沈着させた。

結果：
この試験では、ストラティフィンの存在下で、線維芽細胞による、コラーゲン－ＩおよびＭＭＰ１産生の増加が確認された。

ｂ／「クロストーキング」試験
原理：
ＨＫを、上記と同様に調製し、次に、本発明に係る環状ペプチド混合物またはネガティブコントロールとしてのその溶媒を、２４時間添加し、中性緩衝液中でＵＶＢを照射して、ストラティフィンタンパク質の産生を増加させた。その後、後者を培地中でウエスタンブロット法により分析した。

結果：
この試験によって、本発明に係る環状ペプチドの混合物は、ＵＶＢ照射を受けたＨＫによるストラティフィンの産生を減少させる能力を有し（１０ｐｐｍで－５５％；ｐ＞０．０１）、その結果、線維芽細胞に対するこのタンパク質によって誘導される効果（コラーゲン合成の減少および真皮タンパク質のプロテアーゼの増加）を強く制限することが実証された。

したがって、環状ペプチドの混合物は、コラーゲンＩおよびＭＭＰ１に対するストラティフィンの有害な効果に対する保護効果を有する。

１．６／ミトコンドリアタンパク質への作用
各哺乳類細胞は、約１５００個のミトコンドリアで構成されている。ミトコンドリアは、機能、合成、防御、およびより一般的には皮膚の恒常性維持に必要なエネルギーを供給している。加齢に伴うミトコンドリアＤＮＡの変異は、呼吸鎖を弱め、老化の主な要因として知られているよく知られた酸素ラジカル種を増加させる可能性がある。また、ミトコンドリアに不可欠な化合物の減少、ミトコンドリアのエネルギー産生の障害、機能障害、または病理学的な問題との間にも関連があると考えられている。この現象は、特に、臓器および皮膚の老化を加速させる。

ミトコンドリアは、１２００個のタンパク質を必要とする：９９％は、核内ＤＮＡによってコード化されているが、呼吸およびＡＴＰ産生に非常に重要な１３個のタンパク質だけが、ミトコンドリア内で設計されている。加齢または外因性の理由（太陽ストレス、アルコール、汚染物質、薬物等）によって、細胞質からのタンパク質の供給が減少し、欠陥のあるタンパク質が生成され、ミトコンドリアＤＮＡにダメージを与える。

ミトコンドリアが適切に機能するためには、これらすべてのタンパク質の十分な量およびその完全性が必要である。これらの重要なタンパク質の産生をポジティブに調節することができる活性剤は、肌の老化に対抗するツールとして考えられている。具体的には、以下のようなタンパク質およびその機能を挙げることができる。

ＭＰＶ１７：ミトコンドリアゲノムの維持および活性酸素種の代謝調節に関与。

ＤＮＪＢ４：熱およびタンパク質の折り畳みへの応答に関与。

ＳＥＬＴ：酸化還元バランスおよび抗酸化作用に関与。

ＴＩＭ１４：ミトコンドリア内膜のタンパク質輸送に作用（この輸送を可能にするタンパク質複合体に関与）。

ＭＦＮ２：特にミトコンドリア膜の組織化に関与。

ＰＴＣＤ３：ミトコンドリア翻訳のメカニズムに関与。

ＭＴＣＨ１：アポトーシスプロセスの調節に関与。

ＴＩＭＭＤＣ１：呼吸鎖の複合体Ｉの組み立てに関与。

ＴＯＭ２０：ミトコンドリア膜の外側での転座を可能にする複合体の組み立てに関与。

ＳＬＣ２５Ａ２０：ミトコンドリア内の輸送に関与。

ｈＰＲＥＰ：本ペプチドがタンパク質から剥離した後、ミトコンドリアへのタンパク質の侵入を可能にするマーカーペプチドを破壊するプロテアーゼ。

ＭｓＲＡ：酸化したタンパク質に対する解毒作用。

ＴＩＭ１６：ミトコンドリアの内膜内でのタンパク質輸送に作用（この輸送を可能にするタンパク質複合体に関与）。

ＭＦＴＣ：ミトコンドリア内でビタミンである葉酸を輸送。

ＬＹＲＭ７：ミトコンドリアの恒常性維持に不可欠な複合体ＩＩＩの集合体因子。

原理：
ＨＤＦを、コンフルエントなマットが得られるまで増殖させる。その後、３日ごとに培地を交換しながら、本発明に係る環状ペプチドの混合物１０ｐｐｍ（またはコントロールとしてその賦形剤）と１０日間接触させた。この接触後に、タンパク質を抽出し、破砕物の形で分析するために、細胞を溶解した。分析は、破砕物に対するプロテアーゼの作用、液体クロマトグラフィーおよび質量分析を結合させたフラグメントの分離、そして得られたフラグメントの性質および量に応じた既存のタンパク質の同定および濃縮を、関連付ける方法によって行った。結果の有意性を評価するために、分散分析および対応のない標本に対するＳｔｕｄｅｎｔｔ－検定を行った。各条件についてＮ＝３で行った。

結果：
表８：線維芽細胞の異なるミトコンドリアタンパクにおけるコントロールに対する変化。本発明に係る環状ペプチドの混合物１０ｐｐｍの効果。

これらの結果は、本発明に係る環状ペプチドの混合物１０ｐｐｍが、ミトコンドリアにおけるタンパク質の輸送、酸化ストレスに対するミトコンドリアの防御、活性、およびミトコンドリアの恒常性の維持に関与するいくつかのミトコンドリアタンパク質の合成を刺激することが可能であることを示している。これらの刺激は、ミトコンドリアの代謝を改善し、同様に、それらを含む皮膚細胞を改善する。

２／比較試験：精製された環状ペプチド対環状ペプチドの混合物
本項目の目的は、本発明に係る精製された環状ペプチドの活性と、本発明に係る環状ペプチドの混合物の活性とを比較することである。この比較に使用される試験は、線維芽細胞によるコラーゲンおよびエラスチンの合成に関連するものである。

２．１／ＥＬＩＳＡ法によるコラーゲンＩとエラスチン合成
原理：
ＨＮＦを、２４ウェルプレートで２４時間培養した。細胞を、異なる濃度の試験品と接触させ、または接触させないで、３日間置いた。コラーゲン合成を、培養上清におけるＥＬＩＳＡ法で評価し、その結果を、細胞数に還元した。

結果：
表９：本発明に係る環状ペプチドの混合物と精製された２つの環状ペプチドとの間のコラーゲンＩの産生量の比較（ＥＬＩＳＡ法）。

表１０：本発明に係る環状ペプチドの混合物と精製された２つの環状ペプチドとの間のエラスチンの産生量の比較（ＥＬＩＳＡ法）。

２．２／ＩＭＦによるコラーゲン合成
原理：
ＦＨＮを、２４ウェルプレートで２４時間培養した。細胞を、異なる濃度の試験品（またはその賦形剤）と６日間接触させた。次に、細胞によって産生されたコラーゲンＩを、固定マット上で免疫蛍光法によって定量した。

結果：
表１１：本発明に係る環状ペプチドの混合物と２つの精製環状ペプチドとの間のコラーゲンＩの産生の比較（ＩＭＦ法）。

これらの試験の結果は、精製された環状ペプチドに関して、特定の場合に環状ペプチドの混合物を使用することの利点を示している。

３／本発明に係る環状ペプチドの混合物とセロリの種子抽出物との組み合わせ
原理：
以下に示す様々な試験の方法は、項目１／で以前に述べたものと同じである。これらの試験では、上記項目Ｂ）２）で定義した本発明に係る活性成分であり、Ｂ）で述べたように、環状ペプチド混合物５００ｐｐｍ（項目Ａ参照）とセロリの種子の超臨界ＣＯ₂抽出物（最終的に全フタル酸の０．０５％を含む）７００ｐｐｍとを組み合わせて、これを評価した。この活性成分は、１．５％、２％または３％；すなわち、環状ペプチド混合物の７．５ｐｐｍ、１０ｐｐｍまたは１５ｐｐｍ、ならびにセロリの種子の超臨界ＣＯ₂抽出物の１０．５ｐｐｍ、１４ｐｐｍまたは２１ｐｐｍで試験した。

インビトロ試験で、環状ペプチドおよびアルキルフタル酸は、（環状ペプチドについては）酸性ＤＭＳＯおよび（アルキルフタル酸を含むセロリ種子抽出物については）エタノールであらかじめ溶解してから、各試験の培地に導入した。したがって、以後、活性成分の相当量を参照する（下記表１３から表１６および表１８）。

結果：
表１２：

３．１／炎症メディエーターの減少
原理：上記項目１．３／の開示と同様

結果：
表１３：本発明に係る活性成分の相当量の異なる割合（％）での接触後における、線維芽細胞によって産生されるＰＧＥ₂およびＩＬ－６の量の変化。

これらのデータは、微小炎症に関与することが知られているＩＬ６およびＰＧＥ２メディエーターの基礎産生を、本発明に係る活性成分は、照射なしで、有意に調節することを示している。

予想されるように、使用されるストレスモデル（ＵＶＢ）は、活性成分を含まないコントロールにおいて、ＩＬ－６およびＰＧＥ２の大きな増加を誘導する。本発明に係る活性成分は、用量依存的かつ有意に、これらの誘導を減少させる。

これらの結果は、本発明に係る活性成分が用量依存的にＵＶＢ誘発性のＩＬ－６の産生を減少させる相補的な試験によって、ケラチノサイトにおいて確認された（－４８％、ｐ＜０．０５、３％相当で）。

３．２／脂腺細胞による皮脂分泌量の減少
原理：上記項目１．４／の開示と同様

結果：
表１４：本発明に係る活性成分の相当量の異なる濃度での接触後における、脂腺細胞による脂質合成の変化；（ｎ＝３）。

先行研究と同様に、インビトロでの脂腺細胞における脂質貯蔵は、明らかに減少している。コントロール例に対する脂質貯蔵の低下（本発明に係る活性成分の２％に相当する量に対して－５４％）は、皮脂を形成する脂質の産生の低下を示している。

３．３／クロストーキング（条件付培地を使用した試験）
上記の項目１．５／に記載されたものと同様の試験を実施し、本発明に係る環状ペプチドとセロリ種子抽出物との混合物はまた、ＵＶＢ照射を受けたケラチノサイトによるストラティフィンの産生を減少させる能力を有し（１０ｐｐｍで－６２％；ｐ＞０．０１）、その結果、線維芽細胞に対するこのタンパク質によって誘導される効果（真皮におけるコラーゲン合成の減少およびタンパク質プロテアーゼの増加）を大幅に制限することが示された。

３．４／ミトコンドリアタンパクへの作用
原理：上記項目１．６／の開示と同様

結果：
表１５：線維芽細胞の異なるミトコンドリアタンパクにおけるコントロールに対する変化。本発明に係る活性成分相当量の２％の効果。

これらの結果から、本発明に係る活性成分は、ミトコンドリアにおけるタンパク質の輸送またはミトコンドリアの防御に関与するいくつかのタンパク質の合成を刺激することがわかる。これらの刺激は、ミトコンドリアの代謝を改善する。

３．５／皮膚の膜の完全性を維持するための活性
角質層は表皮の最外層である。角質層は、脱落によって絶えず更新されている。角質層は、外部環境の分子に対して非常に効果的な疎水性の膜を形成している。さらに、この膜は、特にＮＭＦのおかげで、体の水の損失を制限する。この膜は、一方では、強く結合されている核のない平らな細胞を、他方では、脂質およびタンパク質を、関連付ける非常に複雑な機構であり、その組成および機構は、環境の物理的、化学的、および生物学的な攻撃に対して非常に耐性のあるこの構造の独特な特性を確保する。したがって、角質層は、皮膚の膜を良好な状態に保つために、皮膚の良好な水分補給を維持するという観点から重要である。

以下の試験は、本発明に係る成分がこの目的を達成できることを示している：最初の試験は視覚レベル（細胞層の分化の状態）で行い、他の試験は、２つの異なる生物学的系（ヒトケラチノサイト薄層培養物またはヒト皮膚組織培養物）において表皮分化の異なるマーカーを分析することによる、分子レベルでの試験である。

ａ）ケラチノサイトの分化の質の向上
ほぼコンフルエントに達したヒトケラチノサイトを、細胞の外観に応じて、顕微鏡下での表現型の変化を試験するために、本発明に係る活性成分（またはそのプラセボ）を適切な培地中で２日、３日、および６日間接触させた。本発明に係る活性成分の相当量（１％から）を使用すると、表皮の上層の典型的な構造の存在（プロテオリピドの剛体マトリックスと、角化外膜の多層とに特徴的な分岐構造の存在；屈折ネットワーク）下で、分化に特徴的な表現型の明確な加速が観察される。

ｂ）ケラチノサイトの分化に関する試験
原理：
一部の新規な状態を上記で試験したものと同じ細胞層を、本発明に係る活性成分（またはその溶媒コントロール）の相当量と４日間接触させた後に、停止させる。次に、それらを固定し、（特異的一次抗体および蛍光二次抗体の使用を介して）免疫染色し、２つの表皮分化マーカーであるロリクリンおよびインボルクリンの合成を可視化した。３つのレプリカそれぞれについて５枚の写真を作成した。マーキングの定量化は、画像解析によって行った。細胞核をカウンター染色することによって、細胞数を推定し、データを正規化することができる。結果の有意性を評価するために、分散分析および対応のない標本に対するＳｔｕｄｅｎｔｔ－検定を行った。

結果：
表１６：本発明に係る活性成分の相当量と２％で接触させたケラチノサイトによるロリクリンおよびインボルクリンの発現の変化。

ｃ）移植片の分化に関する試験
原理：
患者からの標準化された腹部皮膚移植片を、採取直後に受け取った。３７℃に順応させた後、本発明に係る活性成分を３％含有するクリームまたはプラセボクリームを１日１回、毎日更新しながら６日間、移植片の表面に塗布する。６日間培養した後に、培養を停止し、窒素中で凍結させ、切断した。次に、特異的一次抗体および蛍光二次抗体を用いて、分化マーカータンパク質である、ＰＮＰＬＡ１、Ｋ２４およびＫ１０の免疫標識を行った。各条件を蛍光顕微鏡下で撮影した。マーキングの定量化は、画像解析によって行った。結果の有意性を評価するために、分散分析および対応のない標本に対するＳｔｕｄｅｎｔｔ－検定を行った。

結果：
表１７：皮膚の移植片におけるＰＮＰＬＡ１、Ｋ２４およびＫ１０の発現の変化。本発明に係る活性成分３％の効果。

ｄ）ケラチノサイトにおける中性脂質の合成
原理：
新規な状態を上記で検討したものと同じ細胞層を、本発明に係る活性成分（またはそのプラセボ）の２％相当量を、４日間接触させた後に停止させた。次に、それらを固定し、ナイルブルー（中性脂質マーカー）および細胞定量のための核マーカーで染色した。各マーキングを評価するために写真を撮影し、画像解析により定量化した。結果の有意性を評価するために、分散分析および対応のない標本に対するＳｔｕｄｅｎｔｔ－検定を行った。

結果：
表１８：本発明に係る活性成分の相当量と２％で接触させたケラチノサイトによる中性脂質合成の変化。

これらの結果はすべて、本発明に係る活性成分が皮膚の膜の形成、強化、および修復に関与することを示している。皮膚の膜形成の質に関する既知のタンパク質マーカーである、インボルクリン、ロリクリン、ＰＮＰＬＡ１、Ｋ２４およびＫ１０は、すべて本発明に係る活性成分によって増加している。これは、角質層の形成を決定する脂質のカテゴリーである中性脂質についても同様である。

Ｄ）ガレノス製剤
様々な組成物／製剤を以下に記載する。本発明に係る活性成分の活性を任意に支持および／または補完する追加の化粧品活性成分を、それらの疎水性または親水性の性質に応じて適切な段階で添加することができる。これらの成分は、その機能、適用される場所（身体、顔、首、バスト、手、毛髪、睫毛、眉毛、毛髪等）、所望の最終効果および対象とする消費者に応じて、どのようなカテゴリーのものであってもよい。所望の最終効果は、例えば、抗酸化作用、シワ伸ばし作用、保湿作用、栄養補給作用、保護作用、平滑化作用、リモデリング作用、ボリュームアップ作用（リポフィリング）、顔色の輝きへの作用、目の下のたるみおよびくまに対する作用、コンシーラー作用、抗糖化作用、痩身作用、鎮静作用、筋弛緩作用、抗赤み作用、抗妊娠線作用、日焼け止め作用などが挙げられる。それらは本明細書中において上記のように述べられている。

本発明に係る活性成分：上記項目Ｂ．１／または上記項目Ｂ．２／で記載されているものと同様（さらにセロリ種子の抽出物を含む）。この成分は、１％から５％、好ましくは３％の間で配合することができる。

１）クリーム形態、例えば、顔の老化防止デイクリーム

付加的成分の例：
・以下のような皮脂調製成分：
・セブレス（SEBULESS）（商標）：Sederma社から販売され、インビトロ細胞培養により得られたライラックの抽出物を含む皮脂調整剤で、肌を清潔にし、テカリを抑え、清涼感を与え、小じわを目立たなくさせる。
・Ac-ネット（Ac- Net）（商標）：Sederma社から販売され、脂性肌およびにきび肌の処置のためのものである。
・エバーマット（EVERMAT）（商標）：Sederma社から販売され、プロトベルベリンを豊富に含むエナンチアクロランタ抽出物とオレイン酸との配合を含み；毛穴のサイズおよびテカリを減少させ；にきびができやすい肌のキメを整える。
・以下のような張りを持たせる成分：
・イデアリフト（IDEALIFT）（商標）：Sederma社から販売され、リポジペプチドであるＮ－アセチル－チロシル－アルギニル－Ｏ－ヘキサデシルエステルを含み、特にエラスチンを刺激することにより、顔のたるみに対抗し、重力に対する抵抗力を向上させる。

２）流体形態のクリーム、例えば、メイク前に使用する顔用の軽い引き締めのためのベースを実現する（特に真皮の密度を高め、毛穴を引き締めることに作用）。

付加的成分の例：
・以下のような敏感肌のための鎮静成分：
・フィトフルール（Phytofleur）（商標）Lily、Crodarom社から販売され、ニワシロユリの花からの抽出物を含む。
・以下のような保湿成分：
・アクアランス（AQUALANCE）（商標）、Sederma社から販売され、ホマリンおよびエリスリトールからなる浸透圧保護剤である。
・以下のような老化防止成分：
・レジステム（RESISTEM）（商標）、Sederma社から販売され、植物グロブラリア・コルディフォリアのインビトロ細胞培養で得られた抽出物をベースに、肌の老化防止のための防御システムの構築をサポートする。

３）マスク形態

付加的成分の例：
・以下のような「清涼」効果のある成分：
・コバフレッシュ（Covafresh）（商標）（メンチル乳酸＆ＰＰＧ－２６ブテス－２６＆ＰＥＧ－４０水添ヒマシ油）Firmenich社から販売されている。
・以下のような保湿成分：
・パシフィール（Pacifeel）（商標）、Sederma社から販売され、オシロイバナの抽出物を含む。
・以下のようなシワ伸ばし／鎮静成分：
・ダイナリフト（Dynalift）（商標）、Sederma社から販売され、ポリオシドおよびスクロースを豊富に含むソルゴ果汁の抽出物を含む。
・テンソルベジタルＳＴ（Tenseur vegetal ST）、Sederma社から販売されて、ポリマンヌロン酸（オオウキモの藻類の親水性多糖類）と、プロラミン（高分子量を有し、グルタミン／グルタミン酸を非常に豊富に含む小麦タンパク質）とを含む。

４）軽い質感の形態、蒸発して肌にヴェールだけを残す。

付加的成分の例：
・以下のような抗酸化／老化防止成分：
・マジェステム（MAJESTEM）（商標）、Sederma社から販売され、インビトロ細胞培養で得られたセイヨウウスユキソウの植物細胞をベースに、レオントポジン酸で滴定したもので；酸化ストレス（汚染、紫外線）を中和し、皮膚の張りを回復させる。
・セネステム（SENESTEM）（商標）、Sederma社から販売され、ヘラオオバコのインビトロ細胞培養により得られた植物細胞を含む。
・以下のような保湿成分：
・クロダロム（Crodarom）（登録商標）ハニー（Honey）、Crodarom社から販売され、はちみつをベースにしている。

５）オイルクリーム形態、例えば、ナイトマスクを形成する。

付加的成分の例：
・以下のような保湿／鎮静成分：
・オプティムヒアル（Optim Hyal）（商標）、Sederma社から販売され、ヒアルロン酸の断片に類似した構造を有するアセチル化グルクロン酸のオリゴ糖を含む。
・以下のような目の下のたるみおよびくまなどに作用する成分：
・ハロキシル（HALOXYL）（商標）、Sederma社から販売され、Ｐａｌ－ＧＨＫおよびＰａｌ－ＧＱＰＲの２つのマトリックスに、Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミドおよびフラボノイドであるクリシンを配合。
・アイリス（EYELISS）（商標）、Sederma社から販売され、ヘスペリジンメチルカルコン、ジペプチドバリルトリプトファン（ＶＷ）、およびリポペプチドであるＰａｌ－ＧＱＰＲの３つの成分を配合。
・プロディジア（PRODIZIA）（商標）、Sederma社から販売され、ネムノキの抽出物を含み、糖化によるダメージから肌を修復し保護することによって、疲労の目に見える兆候である、くま、目の下のたるみ、くすみ、顔色の悪さ、および引きつった顔といった特徴を軽減する。

６）ぼかし乳剤の形態、光拡散

付加的成分の例：
・以下のような世界的な老化防止成分：
・リノベージ（RENOVAGE）（商標）、Sederma社から販売され、テプレノンをベースとしている。

７）スティック形態、例えば、顔の「Ｔ」ゾーンに局所的な効果

付加的成分の例：
・以下のような日焼け止め成分：
・ソラベール（Solaveil）（商標）ＣＴ－３００（酸化チタン＆ポリヒドロキシステアリン酸＆ステアリン酸アルミニウム＆アルミナ）、Croda社から販売されている。
・以下のような活性化成分：
・フローラルネクター（Floral Nectar）（商標）、Sederma社から販売され、コンブレツムファリノスムの花からの抽出物。
・以下のような汚染防止成分：
・シティステム（Citystem）（商標）、Sederma社から販売され、高濃度のForsythoside Bを有するホアハウンドのインビトロで得られた植物細胞をベースにしており；汚染の攻撃に対して使用される。肌がより柔らかく、より滑らかになり、肌のキメが洗練され、面疱の視認性が低下し、肌が明るく、浄化される。

８）透明な香油形態

９）トニック形態

付加的成分の例：
・以下のようなトニック成分：
・クロノディン（CHRONODYN）（商標）、Sederma社から販売され、ユーグレナグラシリスの生物工学的な抽出物であり、肌を引き締め、強化し、疲労痕を消す。

Ｅ）インビボ有効性試験
試験品：上記に記載の項目Ｄ）ガレノス製剤の１）クリーム形態

原理：
混合物の有効性の評価は、以下のパラメータに従うことによって皮膚の質の改善を測定するために、プラセボに対して、合計３１名のボランティア被験者に実施された：パラメータ：再緻密化、張り、表面状態および再膨化の効果。

異なるパラメータを試験するために、いくつかの補完的な技術が使用されてきた。
・キュートメーターを用いた粘弾性特性の評価；
・トランスルーシーメーター（Translucymeter）を用いた真皮密度の評価；
・共焦点レーザー顕微鏡による細孔支持組織の評価；および
・ゴニオラックス（Goniolux）（登録商標）およびシリコン印象解析による表面の質感評価。

手順：
具体的な包含基準
この試験は、平均年齢４７歳（３５～５８歳）の女性ボランティア３１名を対象に実施された。彼女らの毛穴はわずかに拡張しており、皮膚の密度の低下が目視で確認された。彼女らは、試験に先立つ３か月間および試験中において、ホルモンの一貫性を求められた。さらに、ボランティアは、保湿剤を用いて１０日間の洗い流し期間を観察し、スクラブまたはマスクタイプの美容行為を除外しなければならなかった。

試験、期間、および塗布のタイプ
ボランティアは、感覚刺激的にも視覚的にも同一である試験された２つの製品の組成を認識していなかった。クリームは顔に塗布され、各ボランティアは顔の一方の面に本発明に係るクリームを塗布し、他方の面にプラセボクリームを塗布した。これらのクリームは、８週間、隔日で、マッサージして塗布された。

試験の概要は、以下の表のようにまとめられうる。

統計
統計的研究は、Ｓｔｕｄｅｎｔｔ－検定、または必要に応じてノンパラメトリックＷｉｌｃｏｘｏｎ検定を用いて実施した。検定は、一致した系列について実施された。

方法と結果
頬の粘弾性特性の評価
キュートメーター（登録商標）ＭＰＡ５８０（Courage&Khazaka社）を用いて、ボランティアの頬の粘弾性パラメータを測定した。この装置は、繰り返しの機械的な吸引ストレスにさらされた皮膚領域の変形およびその回復力を測定する。この装置は、図３に示すように、時間に応じた皮膚の変化のグラフを提供する。この図では、選択されたパラメータＵｒ／Ｕｅ、Ｕｒ／ＵｆおよびＵｒは、それぞれ、張り、弾性および色調と呼ばれ、年齢とともに変化することが示されている。３つの独立したパラメータ取得は、Ｔ０週およびＴ８週に行われた。

結果：
表１９：頬の張り、弾力、および色調の変化－本発明品の混合物およびプラセボの効果（ｎ＝３０名のボランティア；ｎ＝３回測定）

上の表の結果は、試験した３つのパラメータの純増加を示している。

したがって、これらの結果は、本発明に係るクリームの再膨化効果に関連した頬の粘弾性パラメータの明確な改善を示しており、張り＋８．２％；弾性＋７．１％および色調＋４．６％である。この改善は、プラセボと比較して有意である（ｐ＜０．０５）。これらの結果は、環状ペプチドがコラーゲン－Ｉ合成を活性化し、抗マトリックス剤の「クロストーキング」を中和することを示すインビトロで得られた結果と一致している。

頬の真皮密度の評価
原理：
上記で説明したように、老化防止戦略の一環としての皮膚密度は非常に重要である。皮膚の質は、音による測定（例えば超音波）または様々なタイプの光（紫外線、可視光、赤外線）を用いて、皮膚上および皮膚内での測定を可能にする非侵襲的な方法で長い間評価されてきた。皮膚内の光の経路を測定するトランスルーシーメーター（Translucymeter）（登録商標）ＴＬＳ８５０（Diastron社）が使用された。皮膚は、多くの試料と同様に、完全に透明（鮮明な画像の透過）でも、完全に不透明（光を透過しない）でもなく、半透明である。半透明の度合いは、試料の吸収係数と、試料に入る光に対する分散度とに依存する。

トランスルーシーメーター（Translucymeter）（登録商標）は、有色の細い光線で皮膚を照らす。これらの光は、層（角質層および表皮間、表皮－真皮間等の接合部）および高分子（特に皮膚の質量の８０％を占めるコラーゲン繊維）に出会うところで皮膚に浸透する。コラーゲン繊維は、深さおよび年齢によって非常に異なる密度および質を有する。光は多かれ少なかれ吸収されたり、異なる方向に偏向されたり、プローブに戻されたり（後方散乱）し、後者は信号を分析し、光のレベルに変換する。

結果：
顔の片側に本発明に係るクリームを塗布し、反対側にプラセボを塗布したボランティア３１名（ｎ＝３）のＴ２ヶ月後の測定を行った。

表２０：ボランティア３１名の顔の赤色光の減衰量の変化

光の減衰値が、プラセボを塗布した側と比較して、本発明に係るクリームを２ヶ月間塗布した顔の側で＋２．４％（ｐ＜０．０１）有意に大きいことが分かる。これらのデータは、本発明に係るクリームで処理された側が他の側よりも密度が高いことを示している。

レーザー共焦点顕微鏡による顔の毛穴支持組織の試験
原理：
上記で説明したように、加齢に伴って支持組織の密度が低下し、その結果、より毛穴が開いた肌を有する印象を受けることになる。中間期（Ｔ１ヶ月）に、Ｔ０（ｎ＝２３）の時点で毛穴がはっきりと見える人を対象とした試験を実施した：共焦点レーザー顕微鏡（ビバスコープ（VivaScope）（登録商標）３０００、Mavig GmbH社）を用いて、皮膚の水平光学切片を作成した。

このカメラは、皮膚の異なる深さで撮影し、後者の真皮乳頭層（表皮の近く）への「移動」の完全に痛みのない非侵襲的な方法を可能にする。このようにして生成された光学切片は、互いに離れて２．６ミクロン（μｍ）の深さしかない。

２つの毛穴の真皮の深さで撮影された水平写真のセットは、毛穴の周辺部を抽出することを可能にした。支持組織に囲まれた垂直チャネルの画像が得られ、この画像は、支持組織の密度の分析および定量化を可能にする。

結果：
ボランティアで撮影された写真は、毛穴の開きパラメータに対するＴ０およびＴ２ヶ月の間の本発明に係るクリームの効果を示す。これらのボランティアでは、塗布後の皮膚の外観に著しい変化がある。

表２１：本発明に係るクリーム塗布後のコラーゲンシースの強度の変化（ｎ＝２の測定、２３名のボランティア）。

本結果は、本発明に係るクリームをわずか４週間塗布することにより、末梢の毛穴組織の密度を有意に改善しないプラセボ（＋２．４％、ｎｓｄ）と比較して、１ヶ月間で１４．４％改善することが可能であることを示している（ｐ＜０．０５）。これらの結果は、キュートメーターおよびトランスルーコメーター（translucometer）を使用して得られた結果を確かめる：それは、本発明に係るクリームが、プラセボと比較して、皮膚支持組織をより良く、有意に再膨化し、再密集化することが実証されている。Ｔ０における両側検定の有意差は見られなかった。

ゴニオラックス（Goniolux）（登録商標）による質感評価
原理：
加齢に伴って、肌の表面は、微小な凹凸が増え、特に毛穴が大きくなるため、均一性が失われる。規則的で均一な質感の若い肌は、受けた光をよりよく反射し、艶やかである。質感の均質性の喪失は、それによって光が反射される方法を変化させ、肌をくすませ、輝きのないものにしうる。本発明に係るクリームは、真皮をふっくらさせる効果に加えて、新しい皮膚を表面に生成する有益な効果を有する。

皮膚表面における光散乱の定量化は、１）オペレータに大きく依存する臨床観察、２）この輝きを捉えた写真の品質に密接に関係する写真上の光沢成分の抽出、または、３）ゴニオメータータイプの計量光学的手段、ここではゴニオラックス（Goniolux）（登録商標）（Orion Technoloabtm社、フランス）を使用して保持された方法によって行うことができる。

ゴニオラックス（Goniolux）（登録商標）は、異なる角度から反射された光の強度を測定する。そのシリンダーは、選択された皮膚領域に制御された方法で適用される。その照明システムは、その戻りが半球上に規則的に分布するいくつかの光ファイバーによって収集された光を送信する。皮膚によって反射される光は、鏡面反射光（ミラーの効果）および拡散の反射光（艶効果）のように使用されていた変数に分解する。装置の目盛りは任意の単位で、その後、パーセンテージに変換される（したがって、０から１００まで）。白人の肌では、ダイナミクスはほとんど向上しない：非常に光沢のある肌での３５％から非常に艶感のある肌での４５％まで。変化はこの尺度を用いて表現した。

結果：
表２２：本発明に係るクリームまたはそのプラセボの塗布後の皮膚の艶感の変化（ｎ＝３回測定、３１名のボランティア）

本発明に係るクリームを塗布して１ヶ月後、散乱光のレベルが、生理的尺度で、試験開始時とプラセボとを比較して２２％有意に増加している（ｐ＜０．０１）ことが観察される。同時に、プラセボを用いたマッサージもまた、艶感を改善するが、より控えめ（＋８％）であった。

これによって、肌の表面に光が拡散し、自然な柔らかさをうみだす艶感のある顔になる。

プリント解析による頬の肌質の評価
原理：
質感の変化は、以前に使用された方法および写真上の観察を完全に補完する、ロバストで実証済みの別の技術を使用して測定された。それぞれの期間で、ボランティアの頬の皮膚のネガティブな成形は、シリコーンポリマーを使用して行われた。その後、データ取得は、ドロップシャドウ（Visioline、Monaderm社）の技術によって行われ、その後、分析は、専用のソフトウェアを使用して行われる。

皮膚の微小くぼみネットワークの質感を反映させるために、等方性パラメータが選択された。若い皮膚は、高い表面均質性があり、等方性があることが知られている。若い皮膚には、微小溝が多く存在しすべての方向に向いており、表面欠陥もより少なく、悪化もより少ないので、光をよりよく拡散する。２８名のボランティアのフットプリントが保持された。

結果：
表２３：本発明に係るクリームまたはそのプラセボを頬に塗布した後の等方性の変化（ｎ＝２８）。

表２３のデータは、わずか１ヶ月後に、頬の皮膚の等方性が、本発明に係るクリームを塗布した後、顕著かつ有意に１０％増加したことを示している（ｐ＜０．０５ｖｓＴ０およびｐ＜０．０６ｖｓプラセボ）。一方、プラセボの塗布は、このパラメータを減少させるが、有意ではない（－２．７％、ｎｓｄ）。ゴニオラックス（Goniolux）（登録商標）および写真で得られたこれらの結果は、皮膚の質感が改善されていることを示している。これは、特に下地の皮膚の質（張り、色調、弾力性）の改善、皮膚の毛穴への周辺支持組織の強化、およびエネルギッシュな活性に関連している。

Claims

皮膚および／またはその付属器の弾力性、張り、質感および／または輝きの特性を改善するための非治療的な美容処置における活性成分としての環状ペプチドの混合物の使用方法であって、前記環状ペプチドの混合物は、以下を含む、使用方法。
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して少なくとも５０重量％を占める以下の３つの環状ペプチド。
・Cyclo (-Met-Leu-Val-Phe-Pro-Leu-Phe-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：４）；
・Cyclo (-Met-Leu-Ile-Pro-Pro-Phe-Phe-Val-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：５）；および
・Cyclo (-Ile-Leu-Val-Pro-Pro-Phe-Phe-Leu-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：６）
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して残りの重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、Cyclo (-Met-Leu-Leu-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、およびCyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Val) （ＳＥＱＩＤＮＯ：９）の環状ペプチドの混合物。
ここで、メチオニン（Ｍｅｔ）は、前記環状ペプチドに存在する場合、酸化されていないか、または酸化されており、前記環状ペプチドまたは前記環状ペプチドの混合物が、亜麻種子油から抽出される。
前記環状ペプチドの混合物は、以下を含む、請求項１に記載の使用方法。
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して１５から２５重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Val-Phe-Pro-Leu-Phe-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：４）；
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して１５から２５重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Ile-Pro-Pro-Phe-Phe-Val-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：５）；および
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して１５から２５重量％を占めるCyclo (-Ile-Leu-Val-Pro-Pro-Phe-Phe-Leu-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：６）
前記環状ペプチドの混合物が、セダネノライド、セダノライドおよび３－ｎ－ブチルフタル酸を含む群より選択される少なくとも１種のアルキルフタル酸、またはセダネノライド、セダノライドおよび３－ｎ－ブチルフタル酸の混合物を含むセロリ種子の抽出物と組み合わせて使用される、請求項１または２に記載の使用方法。
前記美容処置は、小じわおよびしわの処置、平滑化処置、引き締め処置、真皮の緻密化および支持組織の強化のための処置、たるみに対する処置、毛穴のサイズを縮小するためのおよび／または過剰な皮脂による皮膚のテカリを減少させるためのおよび／または皮膚の微小炎症を減少させるための処置から選択される、請求項１から３のいずれか１項に記載の使用方法。
皮膚および／またはその付属器の非治療的な美容処置における活性成分としての環状ペプチドの使用方法であって、前記環状ペプチドは、Cyclo (-Met-Leu-Ile-Pro-Pro-Phe-Phe-Val-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：５）、または、Cyclo (-Ile-Leu-Val-Pro-Pro-Phe-Phe-Leu-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：６）であり、メチオニン（Ｍｅｔ）は、酸化されていないか、または酸化されている、使用方法。
前記美容処置が、皮膚の弾力性、張り、質感および／または、輝きの特性を改善するためのものである、請求項５に記載の使用方法。
生理学的に許容される媒体中に環状ペプチドの混合物を含む化粧品活性組成物であって、前記環状ペプチドの混合物は、以下を含む、化粧品活性組成物。
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して１５から２５重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Val-Phe-Pro-Leu-Phe-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：４）；
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して１５から２５重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Ile-Pro-Pro-Phe-Phe-Val-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：５）；
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して１５から２５重量％を占めるCyclo (-Ile-Leu-Val-Pro-Pro-Phe-Phe-Leu-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：６）；
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して残りの重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、Cyclo (-Met-Leu-Leu-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、およびCyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Val) （ＳＥＱＩＤＮＯ：９）の環状ペプチドの混合物。
ここで、メチオニン（Ｍｅｔ）は、前記環状ペプチドに存在する場合、酸化されていないか、または酸化されており、前記環状ペプチドの混合物が、亜麻種子油の抽出物である。
さらに、表皮および／または角質層の特性に作用するように、および／または脂腺細胞による皮脂産生の減少に作用するように適合された、および／または収斂活性を有する、少なくとも１つの化粧品活性剤を含む、請求項７に記載の化粧品活性組成物。
前記化粧品活性剤はさらに、セダネノライド、セダノライドおよび３－ｎ－ブチルフタル酸を含む群より選択される少なくとも１種のアルキルフタル酸である、またはセダネノライド、セダノライドおよび３－ｎ－ブチルフタル酸の混合物を含むセロリ種子の抽出物である、請求項８に記載の化粧品活性組成物。
請求項７から９のいずれか１項に記載の化粧品活性組成物の有効な量を局所的に塗布することを含む、皮膚の美的外観を改善する方法。
皮膚の微小炎症を減少させるための化粧品または医薬品の製造における環状ペプチドの混合物の使用方法であって、前記環状ペプチドの混合物は、以下を含む使用方法。
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して少なくとも５０重量％を占める以下の３つの環状ペプチド。
・Cyclo (-Met-Leu-Val-Phe-Pro-Leu-Phe-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：４）；
・Cyclo (-Met-Leu-Ile-Pro-Pro-Phe-Phe-Val-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：５）；および
・Cyclo (-Ile-Leu-Val-Pro-Pro-Phe-Phe-Leu-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：６）；
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して残りの重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、Cyclo (-Met-Leu-Leu-Pro-Phe-Phe-Trp-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、およびCyclo (-Met-Leu-Met-Pro-Phe-Phe-Trp-Val) （ＳＥＱＩＤＮＯ：９）の環状ペプチドの混合物。
ここで、メチオニン（Ｍｅｔ）は、前記環状ペプチドに存在する場合、酸化されていないか、または酸化されており、前記環状ペプチドの混合物が、亜麻種子油の抽出物である。
前記環状ペプチドの混合物は、以下を含む、請求項１１に記載の使用方法。
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して１５から２５重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Val-Phe-Pro-Leu-Phe-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：４）；
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して１５から２５重量％を占めるCyclo (-Met-Leu-Ile-Pro-Pro-Phe-Phe-Val-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：５）；および
・前記環状ペプチドの混合物の総重量に対して１５から２５重量％を占めるCyclo (-Ile-Leu-Val-Pro-Pro-Phe-Phe-Leu-Ile) （ＳＥＱＩＤＮＯ：６）
前記環状ペプチドの混合物が、セダネノライド、セダノライドおよび３－ｎ－ブチルフタル酸を含む群より選択される少なくとも１種のアルキルフタル酸、またはセダネノライド、セダノライドおよび３－ｎ－ブチルフタル酸の混合物を含むセロリ種子の抽出物と組み合わせて使用される、請求項１１または１２に記載の使用方法。