JP7268030B2 - 動物飼料材料 - Google Patents
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Description
・第1の動物飼料成分を提供することと、
・多糖酪酸エステルを提供することと、そして
・前記第1の動物飼料成分と前記多糖酪酸エステルとを混合して、均質な混合物を得ることと、
が含まれる。
・第1の動物飼料成分を提供することと、
・多糖酪酸エステルを提供することと、
・前記第1動物飼料成分と前記多糖酪酸エステルとを混合して、均質な混合物を得ることと、そして
・均質な混合物をペレット化することと、
が含まれる。
[実施例1]試験管内での発酵の評価
本発明に係る多糖酪酸エステルが、動物の胃腸管(GIT)内における酪酸濃度を増加させるために、どの程度の影響力を持っているかを評価するために、試験管内での発酵の評価が実行された。この評価においては、ブロイラー鶏のGITバクテリアが、本発明に係るプロダクトと共に植え付けられた。ポジティブコントロールとネガティブコントロールとが用意された。
1リットルの培養液は、0.6gのKCL、0.6gのNaCl、0.2gのCaCl2・2H2O、0.5gのMgSO4・7H2O、1.5gのパイプスバッファー、0.54gのNH4Cl、1.0gのトリプチケース、1mlのレサズリン溶液(200mlの蒸留水につき0.2gのレサズリン)、10mlの「トレースミネラル溶液」、12mlのビタミン/リン酸溶液、10mlのヘミン溶液(1Lの蒸留水につき0.1gのヘミン)、4mg/mlのNaHCO3、及び1mg/mlのシステインHCLを含むものである。
1Lの0.02M HCl溶解液中に、0.025gのCuCl・2H2O、0.020gのFeSO4・7H2O、0.025gのZnCl2、0.025gのCuCl2・H2O、0.050gのCoCl2・6H2O、0.050gのSeO2、0.250gのNiCl2・6H2O、0.250gのNa2MoO4・2H2O、0.0314gのNaVO3、0.0250gのH3BO3を含有するもの。
54.7gのKH2PO4を含む蒸留水1Lにつき、0.0204gのビオチン、0.0205gの葉酸、0.1640gのカルシウムD-パントテン酸、0.1640gのニコチンアミド、0.1640gのリボフラビン、0.1640gのチアミンHCl、0.1640gのピリドキシンHCl、0.0204gのパラ-アミノ安息香酸、0.0205gシアノコバラミン(ビタミンB12)を含有するもの。
誕生から4週間のブロイラーROSS408のGITの、回腸、結腸、及び盲腸の腸サンプルが収集された。各セグメントにつき、同様の方法で、種菌が用意された。解剖のすぐ後、サンプルは、37度の温度条件のもと、嫌気状態に置かれた(嫌気チャンバー、ラスキン・テクノロジー、ブリジェンド、英国)。各セグメントについて内容物が秤量され、予め温められた(37度)嫌気性の滅菌されたリン酸緩衝食塩水と1:9の割合となるように希薄された。均質化の後、試験プロダクトが添加され、希釈された材料が上述の培養液に対し1:10の割合となるように接種された。
下の表に示すように、3つの異なる材料において、GITにおける酪酸濃度を増加させる機能に関する試験を行った。全ての試験は、最終濃度が0.5%w/vとなるような条件で行われた。
HPLC-UVによる酪酸濃度の分析のために接種した後、0時間、4時間、6時間、及び24時間後の時点で、流動性のサンプルが収集された。De Baere ら(Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 80 (2013) 107-115)によって示されるように、抽出プロトコル及び装置が用いられた。
図1は、回腸接種において測定された酪酸濃度を示している。
本発明に係る多糖酪酸エステルの、動物の下部胃腸管で酪酸濃度を増加させる能力を評価するために、生体内での実験が実行された。本発明に係るプロダクトが、家禽の飼料に添加され、結腸における酪酸濃度が決定され、他の遅延放出製剤やプロダクトにより得られた結果と比較された。
下の表に示される試験プロダクトを、商用のマッシュ状のブロイラー飼料(Versele-Laga, ベルギー)に、飼料1kg当たり3gの酪酸ナトリウムが含まれるように混合することにより、7つの異なる試験飼料の組成が用意された。選択的に飼料が取り入れられるのを回避するために、試験飼料は、続いてペレット化(水蒸気なし)された。全ての試験プロダクトに関して、ペレット化の技術、ペレットの大きさ、及び商用のブロイラー飼料は、同じであった。
生後19日、20日、21日目の、平均した1日当たりの飼料の摂取量が、畜舎により測定された。生後22日の雄及び雌のひよこに対して、ランダムに、上述の試験飼料の組成が適用されて、生後22~27日の間、制限的な飼料の供給(以前に測定した摂取量の平均の、95%)を受けた。生後28日目に、ひよこを犠牲にし、結腸が収集された。
各ひよこの結腸の腸内容物のうちの1グラムが秤量され、1mlの蒸留水により希釈された。希釈した後、サンプルは均質化され、13,000rpmで20分間遠心処理された。そして、HPLC-UVによる分析のために抽出されるまでの間、-20℃で保存された。抽出のプロトコル及び装置には、De Baereら(Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 80 (2013) 107-115)に示されるようなものが用いられた。試験4では、ポリヒドロキシ酪酸、ヒドロキシ酪酸の濃度が測定され、図4に示された。
腸内容物における酪酸濃度をmM/g単位で、処理グループごとにプロットしたものが、図4に結果として示されている。腸内容物の量が十分でない場合、又は抽出に失敗した場合には、この測定にはデータが含まれない。
本発明に係る多糖酪酸エステルが、サルモネラ・エンテリティディスに感染した動物の腸におけるサルモネラ菌のコロニー形成を減少させる能力を評価するために、生体内での実験が実行された。本発明に係るプロダクトが家禽の飼料に添加され、盲腸におけるサルモネラ・エンテリティディスの存在が調べられ、他の遅延放出酪酸製剤又はプロダクトにより得られた結果と、比較された。
この試験においては、Ross308ボイラー鶏が用いられた。生後1日のひよこが、商業的な孵化場により得られた。全ての処理グループは、同一の条件下で、床に寝わらを敷いた状態の個別の鳥かごに収容された。160羽のひよこが、各20羽からなる、8つのグループ(コントロールのグループを含む。)に分割された。4つの試験飼料の組成は、2倍で試験された。全てのひよこは、任意の時に水や飼料にアクセスできるようにしていた。
飼料1kg当たりの酪酸ナトリウムの濃度が3gとなるように、下の表に示される試験プロダクトを商用のマッシュ状のブロイラー飼料(Versele-Laga,ベルギー)に混合することで、4つの異なる試験飼料の組成物が用意された。選択的に飼料が取り入れられるのを回避するために、試験飼料は、続いてペレット化(水蒸気なし)された。全ての試験プロダクトに関して、ペレット化の技術、ペレットの大きさ、及び商用のブロイラー飼料は、同じであった。
この実験には、家禽農場から単離された特徴がはっきりとしたストレプトマイシン耐性の菌種(Methnerら、1995年)である、サルモネラ・エンテリティディスの菌株SE147が、用いられた。この菌株は、Luria-Bertoni培地(LB, Sigma, St. Louis MO)で6時間成長され、100μg/mLのストレプトマイシン(Sigma, St. Louis, MO)を含むキリロース・リジン・デオキシコール酸寒天培地(XLD, Oxoid, Basingstoke,英国)に10倍希釈したバクテリア懸濁液をプレーティングすることにより、ミリグラム当たりのコロニー形成単位が決定された。バクテリア懸濁液は、プレートカウントを行う間、4℃で保存され、所望の感染量を得るためにPBSで希釈された。
孵化後17日のときに、全てのひよこには経口的に、1羽当たり10^5のコロニー形成単位のサルモネラ・エンテリティディスが接種された。感染後4日目に、全てのひよこを安楽死させ、細菌学的分析のために、盲腸のサンプルが採取された。実験は、ゲント大学獣医学部の倫理委員会により承認された。
盲腸のサンプルは、緩衝ペプトン水(BPW, Oxoid, Basingstoke,英国)のボリュームで均質化され、PBSにより10倍希釈したものが作製された。各希釈液につき、6×20μLが接種され、100μg/mLのストレプトマイシンを含むXLDプレートに播かれた。ダイレクト・プレーティングの後、陰性であったサンプルは、緩衝ペプトン水(BPW, Oxoid, Basingstoke,英国)中において37℃で一晩、プレ高濃度化された。その後、全てのサンプルは、1mLのこの懸濁液を9mLのブリリアント・グリーン・テトラチオネート液体培地(Oxoid, Basingstoke,英国)に添加することで、高濃度化された。滴定の後サルモネラ菌が陰性だったのが、高濃度化の後には陽性になったようなサンプルは、1×10^1cfu/gの組織を含んでいたものと考えられる。高濃度化後も依然として陰性であったものは、0cfu/gの組織を有していたものと考えられる。
下の表に示されるように、CABのような多糖酪酸エステルを含む飼料の管理をすることで、盲腸でのサルモネラ菌のコロニー形成に関し、他の遅延放出製剤又はプロダクトと比して、著しく向上した結果が得られた。
サルモネラ・エンテリティディスに感染した動物からのサルモネラ菌の糞便排出を減少させるのに、本発明に係る多糖酪酸エステルがどの程度寄与するかを評価するために、生体内での実験が実行された。本発明に係るプロダクトが家禽の飼料に添加され、排泄標本におけるサルモネラ・エンテリティディスの存在が決定され、他の遅延放出酪酸製剤又はプロダクトで得られた結果と比較された。
この試験においては、Ross308ボイラー鶏が用いられた。生後1日のひよこが、商業的な孵化場により得られた。全ての処理グループのひよこは、同一の条件で、寝わらが敷かれた個別の鳥かごに収容された。80羽のひよこは、それぞれが20羽からなる(コントロールグループ含む)、4つのグループに分割された。以下にリスト化した4つの試験飼料の組成について試験がされた。全てのひよこは、任意の時に水や飼料にアクセスできるようにしていた。
飼料1kg当たりに酪酸ナトリウムが3gの濃度だけ含まれるように、以下の表に示した試験プロダクトを、商用のブロイラー飼料(Versele-Laga,ベルギー)と混合することにより、1つの異なる試験飼料の組成が用意された。
この実験には、家禽農場から単離された特徴がはっきりとしたストレプトマイシン耐性の菌種(Methnerら、1995年)である、サルモネラ・エンテリティディスの菌株SE147が、用いられた。この菌株は、Luria-Bertoni培地(LB, Sigma, St. Louis MO)で6時間成長され、100μg/mLのストレプトマイシン(Sigma, St. Louis, MO)を含むキリロース・リジン・デオキシコール酸寒天培地(XLD, Oxoid, Basingstoke,英国)に10倍希釈したバクテリア懸濁液をプレーティングすることにより、ミリグラム当たりのコロニー形成単位が決定された。バクテリア懸濁液は、プレートカウントを行う間、4℃で保存され、所望の感染量を得るためにPBSで希釈された。
孵化後17日のときに、全てのひよこには経口的に、1羽当たり10^5のコロニー形成単位のサルモネラ・エンテリティディスが接種された。感染日の一日前、感染後一日目及び三日目に、細菌学的分析のために、排泄標本が採取された。実験は、ゲント大学獣医学部の倫理委員会により承認された。
排泄標本が、100μg/mLのストレプトマイシンを含むXLDプレートに播かれ、37℃で一晩培養された。ダイレクト・プレーティングの後、陰性であったサンプルは、緩衝ペプトン水(BPW, Oxoid, Basingstoke,英国)中において37℃で一晩、プレ高濃度化された。その後、全てのサンプルは、1mLのこの懸濁液を9mLのブリリアント・グリーン・テトラチオネート液体培地(Oxoid, Basingstoke,英国)に添加することで、高濃度化された。この懸濁液は再び、37℃で一晩培養され、その後、100μg/mLのストレプトマイシンを含むXLDに播かれた。37℃での一晩にわたる培養の後、排泄標本1つについてのコロニー形成単位の数が決定された。滴定の後、サルモネラに対して陰性であったが、高濃度化の後に陽性となったサンプルは、サルモネラ菌の存在に対して陽性であると評価された。高濃度化の後の依然として陰性であったサンプルは、サルモネラ菌の存在に対して陰性であると評価された。
下の表に示されるように、CABのような多糖酪酸エステルを含む飼料を管理することにより、サルモネラ菌の糞便排出に関し、他の遅延放出製剤又はプロダクトと比して、著しく向上した結果が得られた。
本発明に係る多糖酪酸エステルが、最適以下の農業行為の下で成長能力に及ぼす影響を評価するために、生体内での実験が行われた。本発明に係るプロダクトが負荷菜種飼料(RSM)に転嫁され、成長能力に与える影響が決定され、他の遅延放出酪酸製剤又はプロダクトで得られた結果と比較された。
実験は、完全乱塊法計画として設定された。処理グループは、3つの遅延放出酪酸製剤又はプロダクト及び2つの補足レベル(餌をやるベースとして、飼料1kgにつき0.25g又は1gの酪酸を含む)を伴って、3×2の要因実験及びコントロールとして、用意された。各処理グループは、6回再現され、結果として全部で6ブロックが再現された。食事は、下の表に詳細に示すような、RSM-トウモロコシ-小麦の幼動物期用、成長期用、及び仕上げ期用の食事に基づいていた。実験的な幼動物期用の食事、及び成長期用の食事は、基礎的なレシピに由来し、大豆油の代わりに飼料添加物を添加することにより得られた。
実験は、ヴァーヘニンゲン大学のカルス研究農場で行われた。合計で357羽の雄の生後1日のブロイラー(出生時体重47g;Ross308,Aviagen Group, Newbridge,英国)が、商業的な孵化場(Morren Breeders B.V., Lunteren,オランダ)から得られた。到着時に、ひよこは個別に秤量され、体重ごとのカテゴリーに割り当てられた(小<μ-0.68×σ;μ-0.68×σ<中<μ+0.68×σ;大>μ+0.68×σ)。各カテゴリーのひよこが、2つの環境制御された部屋の、42の床の畜舎の1つにランダムに割り当てられた。各畜舎は8~9羽のひよこを収容し、1.85×1m(長さ×幅)の面積を有し、休める場所が豊富に供給されていた。かんなくずが、寝床の材料として用いられた。環境温度は、生後3日目までは32℃に維持され、その後、生後23日目に22℃となるように徐々に低下された。生後3日目までは、23L:1Dの光周期が適用され、その後、16L:8Dに変化させた。ひよこは、飼料及び水に自由にアクセスできるようにしていた。畜舎の重量と、畜舎の飼料摂取量とが、生後21日目、35日目、及び42日目に、記録された。死亡率が日ごとに監視され、死亡したひよこの体重が記録された。
下の表には、飼料要求率(FCR)、平均体重増加量(ADG)、1日の飼料摂取量の平均(ADFI)、及び死亡率が示されている。FCRは、ADGとADFIを用いて、畜舎の単位で算出された。また、結果は再計算されて、それぞれのコントロールに対する変化のパーセンテージが求められた。
表11は、幼動物期、成長期、仕上げ期のそれぞれの時期において、食餌処理が性能パラメータに与える影響を示している。
最適ではない農業技術の下で、本発明に係る多糖酪酸エステルが飼料要求率に与える影響を評価するために、生体内での実験が行われた。本発明に係るプロダクトが負荷菜種飼料(RSM)に添加され、飼料要求率に及ぼされる効果が決定され、統計的に分析され、そして他の遅延放出(ヒドロキシ)酪酸製剤又はプロダクトにより得られた結果と比較された。
実験は、完全任意ブロック配列法として計画された。処理グループは、10羽/畜舎×8回繰り返し×4処理として、用意された。4処理は、1つのコントロールと、3つの遅延放出(ヒドロキシ)酪酸形成又はプロダクトである(飼料1kgにつき、1gの(ヒドロキシ)酪酸を含有)。食餌は、RSM-トウモロコシ-小麦の幼動物期用の食餌と、下の表に詳細に示す成長期用食餌とに、基づいていた。実験的な幼動物期及び成長期の飼料は、大豆油の代わりに飼料添加物を添加した基礎的なレシピに由来していた。
実験は、ILVO―DIER(Burge, Merelbeke, ベルギー)の実験的な鶏舎12で行われた。合計で320羽の雄の生後1日のブロイラー(Ross 308, Aviagen Group, Newbridge, イギリス)が、商業的な孵化場(Belgabroed NV, Merksplas, ベルギー)から得られた。到着すると、ひよこは、単一の気候調製室の32の床のうちの1つの畜舎にランダムに割り当てられた。各畜舎は10羽のひよこを収容し、2.1×1mの面積を有していた。環境温度は、生後7日目までは29~30℃に保たれ、その後、1週間に2℃ずつ低下された。生後7日目までは23L:1Dの光周期が適用され、その後16L:8Dに変更された。ひよこは自由に、飼料及び水にアクセスできた。個々の重量、そして畜舎の重量と、畜舎での飼料の摂取量とが、毎週記録された。
以下のモデルを用いて、SAS(version 9.3, SAS Institute Inc., Cary, NC)のPROC GLMを利用して、性能パラメータが分析された。
下の表に、生後0~35日の補給期間における、食餌による酪酸の補給が飼料要求率(FCR)に与える影響を示している。
Claims (7)
- 飼料要求率を減少させ、生命体の体重を増加させ、又は1日あたりの平均増体量を増加させるための、治療的でない方法であって、アセチルエステル基をさらに含むセルロース酪酸エステルを投与することを含み、前記セルロース酪酸エステルは、数平均モル質量が2000~1000000g/molであり、
前記セルロース酪酸エステルは、少なくとも1重量%及び10重量%以下のアセチル基を含有することを特徴とする治療的でない方法。 - 請求項1に記載の治療的でない方法であって、前記セルロース酪酸エステルは、数平均モル質量が7000~250000g/molであることを特徴とする、治療的でない方法。
- 請求項2に記載の治療的でない方法であって、前記セルロース酪酸エステルは、数平均モル質量が13000~250000g/molであることを特徴とする、治療的でない方法。
- 請求項1から3のいずれか1項に記載の治療的でない方法であって、単糖ユニットあたりに含まれるブチリル基の平均数は、0.1~4である、治療的でない方法。
- 請求項1から4のいずれか1項に記載の治療的でない方法であって、前記セルロース酪酸エステルは、セルロース酪酸エステルの全重量に対し、少なくとも2重量%の、アセチル基を含有することを特徴とする、治療的でない方法。
- 請求項1から5のいずれか1項に記載の治療的でない方法であって、前記セルロース酪酸エステルは、セルロース酪酸エステルの全重量に対し、8重量%以下の、アセチル基を含有することを特徴とする、治療的でない方法。
- 請求項1から6のいずれか1項に記載の治療的でない方法であって、処理される動物の種類は家禽である、治療的でない方法。
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