JP7265563B2 - ヒトパピローマウイルス18型のl1タンパク質の変異体 - Google Patents
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Description
本発明は、分子ウイルス学及び免疫学の分野に関する。特に本発明は、変異HPV18 L1タンパク質(又はその変種)、これをコードする配列、これを調製する方法、及びこれを含むウイルス様粒子に関し、ここで、前記タンパク質(又はその変種)及びウイルス様粒子は、少なくとも2種のHPV型(例えばHPV18とHPV45、又はHPV18、HPV45、HPV59)に対する中和抗体の生成を誘導することができ、従って前記少なくとも2種のHPV型による感染、及び前記感染によって引き起こされる疾患、例えば子宮頸癌及び尖圭コンジローマを防ぐために使用することができる。本発明はさらに、前記少なくとも2種のHPV型による感染、及び前記感染によって引き起こされる疾患、例えば子宮頸癌及び尖圭コンジローマを、予防するための医薬組成物又はワクチンの製造における前記タンパク質及びウイルス様粒子の使用に関する。
本発明は、少なくとも部分的に、本発明者らの驚くべき発見に基づいている:ヒトパピローマウイルス(HPV)18型のL1タンパク質の特定のセグメントを、第2のHPV型(例えばHPV45)のL1タンパク質の対応するセグメントで置換した後に、このようにして得られた変異HPV18 L1タンパク質は、生物においてHPV18及び2番目のHPV型(例えばHPV45)に対する高力価中和抗体の生成を誘導することができ、その防御効果はHPV18 VLPと2番目のHPV型のVLPの混合物の防御効果と同等であり、HPV18に対するその防御効果はHPV18 VLP単独の防御効果と同等であり、2番目のHPV型(例えばHPV45)に対するその防御効果は2番目のHPV型のVLP単独の防御効果と同等である。
(1)40~80個のアミノ酸、例えば40~50、45~70、50~70、55~65、60~70、65~75、60~80、又は70~80個のアミノ酸のN末端切断;そして
(2)(a)野生型HPV18 L1タンパク質の235~243位のアミノ酸残基の、第2の型の野生型HPVのL1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換、又は
(b)野生型HPV18 L1タンパク質の327~346位のアミノ酸残基の、第2の型の野生型HPVのL1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換、又は
(c)野生型HPV18 L1タンパク質の114~123位のアミノ酸残基の、第2の型の野生型HPVのL1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換、又は
(d)野生型HPV18 L1タンパク質の176~202位のアミノ酸残基の、第2の型の野生型HPVのL1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換、を有し、
(3)野生型HPV18 L1タンパク質の112~123位のアミノ酸残基の、第3の型の野生型HPVのL1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換。
(4)野生型HPV18 L1タンパク質の410~421位のアミノ酸残基の、第3の型の野生型HPVのL1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換。
いくつかの好適な実施態様において、野生型HPV45 L1タンパク質は、配列番号2又は115に記載されるようなアミノ酸配列を有する。
いくつかの好適な実施態様において、野生型HPV59 L1タンパク質は、配列番号3に示されるようなアミノ酸配列を有する。
いくつかの好適な実施態様において、野生型HPV45 L1タンパク質の142~168位のアミノ酸残基は、配列番号40に示されるような配列を有する。
いくつかの好適な実施態様において、野生型HPV45 L1タンパク質の201~209位のアミノ酸残基は、配列番号41に示されるような配列を有する。
いくつかの好適な実施態様において、野生型HPV45 L1タンパク質の293~314位のアミノ酸残基は、配列番号42に示されるような配列を有する。
いくつかの好適な実施態様において、野生型HPV59 L1タンパク質の349~360位のアミノ酸残基は、配列番号44に示されるような配列を有する。
いくつかの好適な実施態様において、変異HPV18 L1タンパク質は、配列番号6、7、9、13、17、18、及び19からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
本発明において、他に明記されない限り、本明細書で使用される科学技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。さらに、本明細書で使用される細胞培養、分子遺伝学、核酸化学、及び免疫学の実験室操作は、対応する分野で広く使用されている日常的な操作である。一方、本発明をよりよく理解するために、関連する用語の定義及び説明を以下に提供する。
研究によると、HPV18と他のHPV型(HPV45及びHPV59など)の間には一定の交差防御性があるが、そのような交差防御性は非常に小さく、一般に1%未満であり、同じHPV型のVLPの防御レベルの1000分の1ですらある。従って、HPV18ワクチンを接種された被験体は、他のHPV型(例えばHPV45及びHPV59)に感染するリスクが依然として高い。
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発現ベクターの構築
ギブソンアセンブリー(Gibson DG, Young L, Chuang RY, Venter JC, Hutchison CA, Smith HO. Enzymatic assembly of DNA molecules up to several hundred kilobases. Nat Methods. 2009; 6:343-5. doi: 10.1038/nmeth.1318)を使用して、HPV45 L1タンパク質からの特定のセグメント及び/又はHPV59 L1タンパク質からの特定のセグメントを含む変異HPV18 L1タンパク質をコードする発現ベクターを構築した。簡単に説明すると、まず、変異を含む短い断片と変異を含まない長い断片をPCRにより得て、次にギブソンアセンブリーシステムを使用して2つの断片を連結してリングを形成した。
組換えプラスミドpTO-T7-H18N65-45T1、pTO-T7-H18N65-45T2、pTO-T7-H18N65-45T3、pTO-T7-H18N65-45T4、pTO-T7-H18N65-45T5、pTO-T7-H18N65-45T3-59S1、pTO-T7-H18N65-45T3-59S2、pTO-T7-H18N65-45T3-59S4、pTO-T7-H18N65-45T3-59S5、pTO-T7-H18N65-45T4-59S1、pTO-T7-H18N65-45T4-59S2、pTO-T7-H18N65-45T4-59S3、pTO-T7-H18N65-45T4-59S5、pTO-T7-H18N65-45T1-59S5、pTO-T7-H18N65-45T2-59S5、及びpTO-T7-H18N65-45T1T3-59S5を含む大腸菌溶液をそれぞれ、-70℃の冷蔵庫から取り出し、カナマイシンを含む100mLのLB液体培地に接種し、200rpm及び37℃で約8時間インキュベートした。次に、培養物をカナマイシンを含む500mLのLB培地に移し(1mlの細菌溶液を移した)、さらにインキュベートした。細菌濃度のOD600が約0.6に達したとき、培養温度を25℃に下げ、500μLのIPTGを各培養ボトルに加えた。さらにインキュベーションを8時間行った。インキュベーション終了後、遠心分離により細菌を回収した。H18N65-45T1、H18N65-45T2、H18N65-45T3、H18N65-45T4、H18N65-45T5、H18N65-45T3-59S1、H18N65-45T3-59S2、H18N65-45T3-59S4、H18N65-45T3-59S5、H18N65-45T4-59S1、H18N65-45T4-59S2、H18N65-45T4-59S3、H18N65-45T4-59S5、H18N65-45T1-59S5、H18N65-45T2-59S5、及びH18N65-45T1T3-59S5タンパク質を発現する細菌が、それぞれ得られた。
上記で得られた細菌を、1gの細菌と10mLの溶解緩衝液(20mM トリス緩衝液、pH7.2、300mM NaCl)の比率で再懸濁した。超音波装置を30分間使用して、細菌を破壊した。破壊された細菌を含む溶解溶液を13500rpm(30000g)で15分間遠心分離し、上清(すなわち、破壊された細菌の上清)を得た。
機器:GE Healthcare(すなわち、元のAmershan Pharmacia Co.)製のAKTA Explorer 100分取液体クロマトグラフィーシステム
クロマトグラフィー媒体:SPセファロース4ファストフロー(GE Healthcare Co.)、CHT-II(Bio-RADから購入)、及びブチルセファロース4ファストフロー(GE Healthcare Co.)
緩衝液:緩衝液A(20mMリン酸緩衝液、pH8.0、20mM DTT);及び緩衝液B(20mMリン酸緩衝液、pH8.0、20mM DTT、2M NaCl)。以下の溶出プロトコールで使用した異なる濃度のNaClを含む緩衝液は、緩衝液Aと緩衝液Bを特定の比率で混合して調製された。
試料:上記のように得られた、それぞれH18N65-45T1、H18N65-45T2、H18N65-45T3、H18N65-45T4、H18N65-45T5、H18N65-45T3-59S1、H18N65-45T3-59S2、H18N65-45T3-59S4、H18N65-45T3-59S5、H18N65-45T4-59S1、H18N65-45T4-59S2、H18N65-45T4-59S3、H18N65-45T4-59S5、H18N65-45T1-59S5、H18N65-45T2-59S5、及びH18N65-45T1T3-59S5を含む破壊された細菌の上清。
(1)破壊された細菌の上清の、SPセファロース4ファストフローによる陽イオン交換精製:試料をカラムに載せ、400mM NaClを含む緩衝液(80%緩衝液A+20%緩衝液B)を用いて不要なタンパク質を溶出し、次に800mM NaClを含む緩衝液(60%緩衝液A+40%緩衝液B)を用いて目的のタンパク質を溶出し、800mM NaClを含む緩衝液で溶出した画分を回収した。
上記方法により精製されたH18N65-45T1、H18N65-45T2、H18N65-45T3、H18N65-45T4、H18N65-45T5、H18N65-45T3-59S1、H18N65-45T3-59S2、H18N65-45T3-59S4、H18N65-45T3-59S5、H18N65-45T4-59S1、H18N65-45T4-59S2、H18N65-45T4-59S3、H18N65-45T4-59S5、H18N65-45T1-59S5、H18N65-45T2-59S5、及びH18N65-45T1T3-59S5タンパク質を、電気泳動にかけた。電気泳動後、HPV L1タンパク質に対する広域スペクトル抗体4B3を用いてウエスタンブロットアッセイを行い、その結果を図2に示した。結果は、H18N65-45T1、H18N65-45T2、H18N65-45T3、H18N65-45T4、H18N65-45T5、H18N65-45T3-59S1、H18N65-45T3-59S2、H18N65-45T3-59S4、H18N65-45T3-59S5、H18N65-45T4-59S1、H18N65-45T4-59S2、H18N65-45T4-59S3、H18N65-45T4-59S5、H18N65-45T1-59S5、H18N65-45T2-59S5、及びH18N65-45T1T3-59S5が、広域スペクトル抗体4B3によって明確に認識できることを示した。
HPVウイルス様粒子の組み立て
所定の容量(約2ml)のタンパク質H18N65-45T1、H18N65-45T2、H18N65-45T3、H18N65-45T4、H18N65-45T5、H18N65-45T3-59S1、H18N65-45T3-59S2、H18N65-45T3-59S4、H18N65-45T3-59S5、H18N65-45T4-59S1、H18N65-45T4-59S2、H18N65-45T4-59S3、H18N65-45T4-59S5、H18N65-45T1-59S5、H18N65-45T2-59S5、又はH18N65-45T1T3-59S5を、(1)2L保存緩衝液(20mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.5、0.5M NaCl);(2)2L再生緩衝液(50mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0、2mM CaCl2、2mM MgCl2、0.5M NaCl);及び(3)20mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0、0.5M NaClで、連続して透析した。透析は、3つの緩衝液のそれぞれで12時間実施された。
透析した試料を、1120 Compact LC高速液体クロマトグラフィーシステム(Agilent Technologies)によるモレキュラーシーブクロマトグラフィー分析にかけた。使用した分析カラムは、TSKゲルPW5000×1 7.8×300mmであった。分析結果を図3A~3Sに示した。結果は、タンパク質H18N65-45T1、H18N65-45T2、H18N65-45T3、H18N65-45T4、H18N65-45T5、H18N65-45T3-59S1、H18N65-45T3-59S2、H18N65-45T3-59S4、H18N65-45T3-59S5、H18N65-45T4-59S1、H18N65-45T4-59S2、H18N65-45T4-59S3、H18N65-45T4-59S5、H18N65-45T1-59S5、H18N65-45T2-59S5、又はH18N65-45T1T3-59S5を含む試料の最初のタンパク質ピークが約13分で現れ、これは、HPV18N65 VLP、HPV45N27 VLP、及びHPV59 VLPと同様であり、これは、これらすべてのタンパク質がVLPに組み立てることができることを示した。
VLPを含む100μLの試料を透過型電子顕微鏡(TEM)で観察した。使用した装置は、JEOL Ltd. により提供された100kV透過型電子顕微鏡(倍率10万倍)であった。簡単に説明すると、13.5μLの試料を2%リンタングステン酸(pH7.0)で陰性染色し、炭素コーティングされた銅格子に固定して、TEMで観察した。結果を図4A~4Sに示した。結果は、H18N65-45T1、H18N65-45T2、H18N65-45T3、H18N65-45T4、H18N65-45T5、H18N65-45T3-59S1、H18N65-45T3-59S2、H18N65-45T3-59S4、H18N65-45T3-59S5、H18N65-45T4-59S1、H18N65-45T4-59S2、H18N65-45T4-59S3、H18N65-45T4-59S5、H18N65-45T1-59S5、H18N65-45T2-59S5、及びH18N65-45T1T3-59S5が、ウイルス様粒子に組み立てることができることを示した。さらに結果はまた、これらの変異タンパク質によって組み立てられた粒子が約30nmの半径を有し、サイズが均一であることを示した。野生型HPV18N65、HPV45N27、及びHPV59 L1によって組み立てられた粒子も、半径が約30nmで、サイズが均一であった。これは、これらの変異タンパク質が、HPV18、HPV45、及びHPV59のL1タンパク質に類似しており、均一なサイズのVLPに組み立てることができることを示した。
沈降速度分析用の装置は、光学検査システムとAn-50Ti及びAn-60Tiローターを備えたBeckmanXL-A分析用超遠心分離機であった。HPV18N65 VLP、HPV45N27 VLP、HPV59 VLP、H18N65-45T3 VLP、H18N65-45T4 VLP、H18N65-45T3-59S1 VLP、H18N65-45T4-59S1 VLP、及びH18N65-45T1T3-59S5 VLPの沈降係数を、沈降速度法により分析した。結果を図5A~5Hに示した。結果は、H18N65-45T3 VLP、H18N65-45T4 VLP、及びH18N65-45T1T3-59S5 VLPの沈降係数がそれぞれ143.7S、173.3S、及び167.1Sであり、これは、HPV18N65 VLP、HPV45N27 VLP、及びHPV59 VLPの沈降係数(HPV18N65 VLP、142.2S;HPV45N27 VLP、146.5S、及びHPV59 VLP、139.3S)と同様であることを示した。これは、H18N65-45T3 VLP、H18N65-45T4 VLP、及びH18N65-45T1T3-59S5 VLPが、サイズと形態の点で野生型 VLPと同様のウイルス様粒子に組み立てることができることを示した。
タンパク質HPV18N65、HPV45N27、HPV59、H18N65-45T3、H18N65-45T4、H18N65-45T3-59S1、H18N65-45T4-59S1、及びH18N65-45T1T3-59S5によって形成されたVLPを、GE Company(すなわち元のMicroCal Co.)から購入した示差走査熱量計VPキャピラリーDSCを使用して、これらの熱安定性を評価し、ここで、タンパク質の保存緩衝液を対照として使用し、タンパク質を10℃~90℃の温度範囲内で1.5℃/分の加熱速度で走査した。検出結果を図6A~6Hに示した。結果は、これらのタンパク質によって形成されたこれらすべてのVLPが非常に高い熱安定性を有することを示した。
H18N65-45T1、H18N65-45T2、H18N65-45T3、H18N65-45T4、H18N65-45T5、H18N65-45T3-59S1、H18N65-45T3-59S2、H18N65-45T3-59S4、H18N65-45T3-59S5、H18N65-45T4-59S1、H18N65-45T4-59S2、H18N65-45T4-59S3、H18N65-45T4-59S5、H18N65-45T1-59S5、H18N65-45T2-59S5、及びH18N65-45T1T3-59S5によって形成されたVLPの免疫防御を、マウスで評価した。ワクチン接種用の動物は、5~6週齢のBALB/cマウス(通常グレード)(Shanghai SLAC Laboratory Animal Co. LTD.から購入)であった。
この実験では、使用したウイルス様粒子は、H18N65-45T3-59S1 VLP、H18N65-45T4-59S1 VLP、及びH18N65-45T1T3-59S5 VLPであった。
この実験では、使用したウイルス様粒子はH18N65-45T4 VLPであった。
この実験では、ワクチン接種スケジュールを表13に示した。すべてのマウス(6週齢のBalB/c雌マウス)を2つの群に分けた:10μg用量の群(10μgの免疫用量で、アルミニウムアジュバントを使用)、及び1μg用量の群(1μgの免疫用量で、アルミニウムアジュバントを使用)。各群をさらに5つの亜群に分けた。対照亜群1及び2には、それぞれHPV45N27 VLP単独及びHPV18N65 VLP単独をワクチン接種し、対照亜群3には、混合HPV18/HPV45 VLP(すなわち、HPV18N65 VLPとHPV45N27 VLPの混合物を、それぞれのVLPの所定の免疫用量で)をワクチン接種し、実験亜群には、H18N65-45T4 VLPをワクチン接種した。
この実験では、使用したウイルス様粒子は、H18N65-45T3-59S1 VLP、H18N65-45T4-59S1 VLP、H18N65-45T1-59S5 VLP、H18N65-45T2-59S5 VLP、及びH18N65-45T1T3-59S5 VLPであった。
Claims (23)
- 変異HPV18 L1タンパク質であって、野生型HPV18 L1タンパク質と比較して、
(I)前記変異HPV18 L1タンパク質は以下の変異:
(1)40~80個のアミノ酸のN末端切断;及び
(2)(a)配列番号1の235~243位に対応する野生型HPV18 L1タンパク質の位置におけるアミノ酸残基の、野生型HPV45 L1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換、又は
(b)配列番号1の327~346位に対応する野生型HPV18 L1タンパク質の位置におけるアミノ酸残基の、野生型HPV45 L1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換、又は
(c)配列番号1の114~123位に対応する野生型HPV18 L1タンパク質の位置におけるアミノ酸残基の、野生型HPV45 L1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換、又は
(d)配列番号1の176~202位に対応する野生型HPV18 L1タンパク質の位置におけるアミノ酸残基の、野生型HPV45 L1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換、を有する;あるいは、
(II)変異HPV18 L1タンパク質は、(1)および(2)(a)で定義されるような変異を有し、そしてさらに以下の変異;
(3)配列番号1の112~123位に対応する野生型HPV18 L1タンパク質の位置におけるアミノ酸残基の、野生型HPV59 L1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換、を有する;あるいは、
(III)変異HPV18 L1タンパク質は、(1)および(2)(b)で定義されるような変異を有し、そしてさらに以下の変異;
(3)配列番号1の112~123位に対応する野生型HPV18 L1タンパク質の位置におけるアミノ酸残基の、野生型HPV59 L1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換、を有する;あるいは、
(IV)変異HPV18 L1タンパク質は、(1)および(2)(c)で定義されるような変異を有し、そしてさらに以下の変異:
(4)配列番号1の410~421位に対応する野生型HPV18 L1タンパク質の位置におけるアミノ酸残基の、野生型HPV59 L1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換、を有する;あるいは、
(V)変異HPV18 L1タンパク質は、(1)および(2)(d)で定義されるような変異を有し、そしてさらに以下の変異:
(4)配列番号1の410~421位に対応する野生型HPV18 L1タンパク質の位置におけるアミノ酸残基の、野生型HPV59 L1タンパク質の対応する位置のアミノ酸残基による置換、を有する;あるいは、
(VI)変異HPV18 L1タンパク質は、(1)、(2)(c)および(2)(a)で定義されるような変異を有し、そしてさらに(4)で定義されるような変異を有する;
ここで、前記対応する位置は、比較される配列が最適に整列されることにより決定される、上記変異HPV18 L1タンパク質。 - 前記変異HPV18 L1タンパク質は、野生型HPV18 L1タンパク質と比較して、45、50、52、55、58、60、62、65、68、70、72、75、又は78個のアミノ酸がN末端で切断されている、請求項1に記載の変異HPV18 L1タンパク質。
- (2)(a)に記載の対応する位置のアミノ酸残基は、野生型HPV45 L1タンパク質の201~209位のアミノ酸残基であり;
(2)(b)に記載の対応する位置のアミノ酸残基は、野生型HPV45 L1タンパク質の293~314位のアミノ酸残基であり;
(2)(c)に記載の対応する位置のアミノ酸残基は、野生型HPV45 L1タンパク質の79~89位のアミノ酸残基であり;
(2)(d)に記載の対応する位置のアミノ酸残基は、野生型HPV45 L1タンパク質の142~168位のアミノ酸残基である、請求項1又は2に記載の変異HPV18 L1タンパク質。 - (3)に記載の対応する位置のアミノ酸残基は、野生型HPV59 L1タンパク質の51~62位のアミノ酸残基であり;
(4)に記載の対応する位置のアミノ酸残基は、野生型HPV59 L1タンパク質の349~360位のアミノ酸残基である、請求項1~3のいずれか1項に記載の変異HPV18 L1タンパク質。 - 前記変異HPV18 L1タンパク質は以下の特徴:
(i)野生型HPV18 L1タンパク質は、配列番号1又は113に記載のアミノ酸配列を有する;
(ii)野生型HPV45 L1タンパク質は、配列番号2又は115に記載のアミノ酸配列を有する;
(iii)野生型HPV59 L1タンパク質は、配列番号3に記載のアミノ酸配列を有する;
の1又は複数を有する、請求項1~4のいずれか1項に記載の変異HPV18 L1タンパク質。 - 前記変異HPV18 L1タンパク質は、配列番号6、7、9、13、17、18、及び19からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項1~5のいずれか1項に記載の変異HPV18 L1タンパク質。
- 請求項1~6のいずれか1項に記載の変異HPV18 L1タンパク質をコードする単離された核酸。
- 配列番号25、26、28、32、36、37、及び38からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する、請求項7に記載の単離された核酸。
- 請求項7又は8に記載の単離された核酸を含むベクター。
- 請求項7又は8に記載の単離された核酸及び/又は請求項9に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 請求項1~6のいずれか1項に記載の変異HPV18 L1タンパク質を含むか又はそれからなるHPVウイルス様粒子。
- 請求項1~6のいずれか1項に記載の変異HPV18 L1タンパク質、又は請求項7又は8に記載の単離された核酸、又は請求項9に記載のベクター、又は請求項10に記載の宿主細胞、又は請求項11に記載のHPVウイルス様粒子、を含む組成物。
- 請求項11に記載のHPVウイルス様粒子、及び医薬的に許容し得る担体及び/又は賦形剤を含む医薬組成物又はワクチン。
- 前記HPVウイルス様粒子は、HPV感染又はHPV感染によって引き起こされる疾患を予防するのに有効な量で存在する、請求項13に記載の医薬組成物又はワクチン。
- 前記HPV感染は、1種以上のHPV型による感染であり、かつ/あるいは、HPV感染によって引き起こされる疾患は、子宮頸癌及び尖圭コンジローマからなる群から選択される、請求項14に記載の医薬組成物又はワクチン。
- 前記HPV感染は、HPV18感染、HPV45感染、HPV59感染、及びそれらのいずれかの組み合わせから選択される、請求項15に記載の医薬組成物又はワクチン。
- 変異HPV18 L1タンパク質を宿主細胞で発現させ、次に変異HPV18 L1タンパクを宿主細胞の培養物から回収することを含む、請求項1~6のいずれか1項に記載の変異HPV18 L1タンパク質を調製する方法。
- 前記宿主細胞は大腸菌である、請求項17に記載の方法。
- 前記方法は、大腸菌中で変異HPV18 L1タンパク質を発現させ、次に大腸菌の溶解物上清を精製することによって変異HPV18 L1タンパク質を得る工程を含む、請求項18に記載の方法。
- 請求項11に記載のHPVウイルス様粒子を、医薬的に許容し得る担体及び/又は賦形剤と組み合わせることを含む、ワクチンの調製方法。
- HPV感染又はHPV感染によって引き起こされる疾患の予防のための、請求項1~6のいずれか1項に記載の変異HPV18 L1タンパク質、又は請求項11に記載のHPVウイルス様粒子を含む組成物又はワクチン。
- 前記HPV感染は、1種以上のHPV型による感染であり、かつ/あるいは、HPV感染によって引き起こされる疾患は、子宮頸癌及び尖圭コンジローマからなる群から選択される、請求項21に記載の医薬組成物又はワクチン。
- 前記HPV感染は、HPV18感染、HPV45感染、HPV59感染、及びそれらのいずれかの組み合わせから選択される、請求項22に記載の医薬組成物又はワクチン。
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