JP7196099B2 - ムコ多糖症iiia型(mps iiia)を処置するための、スルファミダーゼ(sgsh)バリアント、ベクター、組成物並びに方法及び使用 - Google Patents
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Description
[0002]ムコ多糖症IIIA型(MPS IIIA)は、スルファミダーゼの欠乏によって引き起こされるリソソーム蓄積症である。スルファミダーゼ(SGSH)の変異によって引き起こされるMPS IIIAは、社会能力の喪失並びに攻撃的行動、活動亢進、及び睡眠障害を伴う進行性の神経変性を特徴とする。身体的特徴は、軽度及び可変的であることが多い。リソソーム蓄積症の脳病理を修正するため、本発明者らのグループと他の研究者らは、欠如している酵素をコードする遺伝子の脳への導入に成功した。この遺伝子治療方法の基礎は、リソソーム酵素の効率的な分泌にある。酵素が遺伝子修正細胞から効果的に分泌された後、近くの細胞によって取り込まれ、クロスコレクションをもたらす可能性がある。
材料及び方法
リソソーム酵素及び関連バリアント発現ベクターの構築
[0217]ヒトSGSH、TPP1及びβ-glu遺伝子は、ヒトcDNAライブラリーからPCR増幅され、AAV骨格プラスミドにクローニングされた。SGSHバリアントは、オーバーラップPCRによって構築された。
[0218]リソソーム酵素活性アッセイは、蛍光基質によって測定された。SGSH活性は、2段階プロトコールによって測定された(例えば、Karpovaら、Journal of Inherited Metabolic Disease 19:278~285頁(1996年)参照)。簡単に言うと、第1のステップは、37℃で17時間、20μlの4-メチルウンベリフェリル(MU)-αGIcNs基質(29mMバルビタール/酢酸緩衝液中5mM、pH6.5)との10μlの試料のインキュベーションを含んだ。第2のステップは、37℃で24時間、10μlのα-グルコシダーゼ(0.2% BSA中10U/ml)との試料のインキュベーションを継続した。反応は、200μlのストップ緩衝液(0.025% Triton X-100を含む500mM炭酸緩衝液、pH10.7)の添加によって終了された。4-MUは標準として使用された。蛍光は励起390nm及び発光460nmで測定された。
[0221]低継代のHEK293細胞は、10% FBSを含むDMEM培地で維持された。トランスフェクションの24時間前、4×104個の細胞が96ウェルプレートの培地100μlに播種された。細胞は、リポフェクタミン(Lipofectamine)(商標)2000(Invitrogen)を使用して、100ngのプラスミドによってトランスフェクトされた。トランスフェクションの設定時間後(異なる実験に基づき24時間、48時間、又は72時間)、100μlの馴化培地が回収された。細胞は、100μlのライセート緩衝液(コンプリートプロテアーゼインヒビターカクテル、Rocheを含む通常の生理食塩水中0.1% Triton X-100)の添加によって収集された。可溶性のリソソーム酵素は、氷上で2回、2秒間の超音波処理によって細胞から放出された。不溶性の材料は、4℃で15分間、21×103gでの遠心分離によって除去された。馴化培地又は細胞ライセートからの10μlの試料が酵素活性アッセイのために使用された。同じ試料はまた、ウェスタンブロット解析にも使用された。
[0222]細胞ライセート又は培地からの20μlの試料が、4~12% SDS-PAGEゲルにロードされ、0.45μm PVDF膜に移された。一次抗体はマウス抗SGSH 1:2000(Shireからのギフト);二次抗体はHRP標識ヤギ抗マウス、1:20,000(Cell Signaling)。ブロットは、ECL Plus Western Blotting Detection System(GE Healthcare)を使用して現像され、画像のためにフィルムに曝露された。タンパク質定量は、ケミドック(ChemiDoc)(商標)Imaging System(Biorad)を使用して行われた。
[0223]ヒトMPS IIIA線維芽細胞は、10% FBSを含むDMEM培地で維持された。1×105個の細胞が24ウェルプレートに播種された。24時間後、細胞が90%コンフルエントに達すると、培地は、wtSGSH又はSGSHv4プラスミドによって、及びM6P(最終濃度10mM)の非存在又は存在下でトランスフェクトされたHEK293細胞由来の、100nmol/17時間/mlのSGSH活性を含有する300μlの馴化培地に交換された。6時間のインキュベーション後、馴化培地は除去され、細胞は、Ca2+及びMg2+を含む500μlのHBSSで3回洗浄された。細胞は、活性アッセイ又はウェスタンブロットのために回収及びプロセシングされた。同じ細胞は、免疫組織学のためにもプロセシングされた。
[0224]細胞は、Ca2+及びMg2+を含む500μlのHBSSで3回洗浄され、室温で10分間、PBS中4%パラホルムアルデヒドで固定され、ブロッキングされ、室温で1時間、透過処理された(PBS中10%ヤギ血清及び0.1% Triton X-100)。細胞は、4℃で終夜、2%ヤギ血清を含有するPBS中マウス抗SGSH一次抗体(1:200)と、次いで室温で1時間、Alexaコンジュゲート二次抗体(Invitrogen) 1:2000とインキュベートされた。細胞は、Fluoeo-Gel封入剤(Electron Microscopy Sciences)によってカバースリップされ、蛍光顕微鏡(Leica Microsystems)によって解析された。
[0225]Sgsh遺伝子座に自然発生的な変異を持つB6.Cg-Sgshmps3a/PstJ株のMPS IIIAマウスは、ジャクソン研究所から購入され(例えば、Bhattacharyyaら、Glycobiology 11:99~103頁(2001年);Bhaumikら、Glycobiology 9:1389~1396頁(1999年)参照)、動物施設で維持され、認可されたIACUCプロトコールに従った。wtSGSH又はSGSHv4酵素をコードするAAV4ベクターは、HEK293細胞での三重トランスフェクション及びCsCl精製によって産生された。8週齢のMPS IIIAマウス疾患(Sgsh-/-)又はヘテロ接合体(Sgsh+/-)マウスは、イソフルランによって麻酔された。AAVベクター(5×1010gp)は、側脳室に定位的に注射された(A/P -2.18-mm、M/L -2.9mm、D/V -3.5mm)。マウスは行動試験が完了した後、屠殺された。CSFは、解剖顕微鏡下で大槽を通るガラスキャピラリーによって収集された。CSF収集後、マウスは冷PBSによって灌流され、脳領域が回収された。脳組織は、酵素活性アッセイのために200μlの氷冷ホモジナイゼーション緩衝液(コンプリートプロテアーゼインヒビターカクテル、Rocheを含む通常の生理食塩水中0.1% Triton X-100)中でホモジナイズされた。
[0226]モリス水迷路は、以前に記載されたように実施された(例えば、Vorhees,C.V.&Williams,M.T. Nature Protocols 1:848~858頁(2006年)参照)。簡単に言うと、直径100cmのプールは3/4まで水で満たされ、酸化チタン(IV)(Sigma)によって濁らせた。プールは、任意に象限に分けられた。透明なプラットフォームは、1つの象限(標的象限と名付けた)において水の表面の0.5cm下に置かれた。マウスは、アクイジションフェーズの5日間調べた。それらは、アクイジションフェーズ中の各日に4回の試験を与えられた。各試験では、マウスは壁に向かって水に放された。それらは、プラットフォームにたどり着くのに60秒かかり、プラットフォームに15秒滞在した。これが達成されなかった場合、それらはプラットフォームに誘導された。各試験において、プラットフォームを見つけ出までのレイテンシーが記録された。プローブ試験は6日目に実施された。プラットフォームは除去され、開始位置は標的の場所と反対の象限であった。試験の長さは60秒であった。標的象限で費やした時間及び移動した距離が記録された。データは、Any-maze行動トラッキングソフトウェア(ANY-maze)によって解析された。
天然のSGSHは比較的分泌されない
[0227]トリペプチジルペプチダーゼ1(TPP1)及びβ-グルクロニダーゼ(β-glu)によるSGSHの分泌能を比較するため、HEK293細胞は、組換えタンパク質コード配列以外は同一の発現プラスミドによってトランスフェクトされた(図2)。72時間後、収集した培地及び細胞ライセート中のリソソーム酵素活性が解析された。図3に示したように、細胞ライセートと比較して20%より少ないSGSH活性が培地中で検出されたが、TPP-1又はβ-glu発現細胞では、それぞれおよそ50%及び75~80%が分泌された。この発見は、ウェスタンブロットによるタンパク質の総レベルを評価する場合に反映された(図3)。
[0228]リソソーム酵素のマンノース又はM6Pの翻訳後修飾は、N結合オリゴ糖側鎖で起こる。SGSHは、アミノ酸位置41、142、151、264、及び413にAsn残基を許容するグリカンを有する、5つの潜在的なN-グリコシル化コンセンサス配列(Asn-Xaa-Ser/Thr)を有する。5つのSGSH酵素バリアントは、示したようにAsnからGlnに逐次的に置換されて(図4A)構築され、それらの分泌及び取り込み特性が評価された。
[0231]遺伝子治療によるクロスコレクションの基本原理は、過剰発現する(形質導入された)細胞から酵素が効果的に分泌され、また、分泌された酵素は非形質導入細胞によってエンドサイトーシス(取り込み)されることを必要とする。そのため、MPS IIIA患者の線維芽細胞における野生型及びSGSHv4の取り込みが解析された。野生型SGSH又はSGSHv4を発現するHEK293細胞からの馴化培地が、6時間患者の線維芽細胞にアプライされ、次いで細胞は収集され、細胞ライセートにおける活性が評価された。驚くべきことに、SGSHv4発現産物、N264Qは、野生型SGSHと比較して患者の線維芽細胞によってより効果的に取り込まれ、SGSH N264Qの入力の>60%が細胞に入り、対して野生型SGSHでは<40%であった(図7)。さらに、10mM M6Pの存在下では、野生型SGSHの取り込みはブロックされたが、N264Qはされなかった(図7)。重要なことに、野生型とN264Q SGSHの両方は成熟酵素にプロセシングされ、いったん内部移行され、リソソーム送達を支持する(図8A、8B)。
[0232]in vivoでのSGSHv4をSGSHと比較するため、MPS IIIAモデルマウスは、同じ用量で異なる導入遺伝子(AAV.SGSH及びAAV.SGSHv4)をコードするAAV4ベクターによって脳室内に注射された;マウスにおいて、AAV4はもっぱら上衣細胞を標的化する(図9)(Davidsonら PNAS USA 97:3428~3432頁(2000年);Liuら J.Neurosci.25:9321~9327頁(2005年))。マウスは、隠れたプラットフォームを見つけ出すレイテンシーによって評価された空間学習により、行動遂行に関してモリス水迷路を使用して解析された(図10)。AAV.SGSHv4処置MPS IIIAマウスでは、5日目のレイテンシーは正常、ヘテロ接合体の同腹仔と等価であり、両群は未処置の疾患マウスよりも著しく良く遂行した。反対に、AAV.SGSH処置マウスは、未処置の疾患マウスに類似していた(図10)。AAV.SGSHv4によって処置されたMPS IIIAマウスはまた、標的象限で費やした時間及び移動した距離を評価する場合、それらのヘテロ接合体の同腹仔と類似して遂行したが、AAV.SGSHによって処置されたMPS IIIAマウスは未処置の疾患マウスと類似して行動した(図11A、11B)。データは、AAV.SGSHではなくAAV.SGSHv4の脳室内注射が、MPS IIIAマウスの空間学習及び記憶障害を修正するのに十分であることを示す。
[0233]AAV.SGSHv4処置マウスのCSFにおけるSGSH活性は、ヘテロ接合体レベルの80%に達し、AAV4.SGSH処置マウスのおよそ2倍であった(図12)。拡散の程度を評価するため、海馬、線条体、後頭皮質、及び小脳由来の試料は、解剖され、酵素活性を評価された。未処置のMPS IIIA組織は、約1~4%のヘテロ接合体レベルを有する。AAV.SGSHv4又はAAV.SGSHによって処置されたMPS IIIAマウスは、未処置のMPS IIIAマウスと比較してSGSH活性が増加したが、AAV.SGSHv4処置マウスからの脳領域は、AAV.SGSH処置マウスからの組織のおよそ2倍であった。AAV.SGSHv4処置マウスにおけるSGSH活性は、海馬、線条体、後脳皮質、及び小脳におけるヘテロ接合体レベルの、それぞれ35%、14.5%、16%及び14%であった(図13)。
[0235]AAV.SGSHv4は、MPS IIIAマウスの神経病理を緩和する。マウス(8週齢)は、AAV.SGSH又はAAV.HSNv4を側脳室に注射された。動物は、14週間後に屠殺され、神経病理学的な読み出しへの影響の解析のため組織が回収された。データは、図16A~16Dに示される。
[0236]天然のSGSHは、十分に分泌されない。反対に、データは、改変SGSHv4が細胞による分泌及び細胞取り込みの増加を示したことを示す。AAV.SGSHv4はまた、in vivoでCNSにおいて酵素レベルの上昇、及び実質組織における浸透の改善をもたらした。AAV.SGSHv4は、MPS IIIAマウスモデルにおいて行動障害の修正に関して非改変AAV.SGSHよりも優れていた。したがって、本明細書で例示したバリアントSGSHは1つ又は複数の以下の特性:細胞分泌の増強、CNSにおけるin vivoでの体内分布の改善を示し、バイスタンダー細胞の取り込み及びクロスコレクションの改善を示した。さらに、ベータ-グルクロニダーゼ、別の可溶性リソソームヒドラーゼのリン酸化レベルはSGSHv4によって変更された。
10 20 30 40 50
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60 70 80 90 100
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160 170 180 190 200
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210 220 230 240 250
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310 320 330 340 350
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[0001]本特許出願は、2017年5月12日に出願された米国特許出願第62/505,423号の利点及び優先権を主張する。上記出願の全内容は、全文、表、及び図面を含み、参照により本明細書に明確に組み込まれる。
Claims (52)
- スルファミダーゼ(SGSH)を哺乳動物の中枢神経系に送達するための組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)粒子を含む組成物であって、
前記rAAV粒子が、前記哺乳動物において細胞が、スルファミダーゼ(SGSH)バリアントを発現及び分泌するように、前記哺乳動物の脳脊髄液(CSF)に接触する前記細胞に形質導入するのに効果的な、スルファミダーゼ(SGSH)バリアントをコードする核酸を含み、前記SGSHバリアントが、配列番号1と少なくとも90%同一であり、且つ配列番号1の264位にアミノ酸置換を有するものであり、
前記組成物が、前記哺乳動物の中枢神経系(CNS)に投与されるためのものである、組成物。 - スルファミダーゼ(SGSH)の発現又は機能の欠乏又は欠損によって引き起こされる哺乳動物の疾患を処置するための組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)粒子を含む組成物であって、
前記rAAV粒子が、スルファミダーゼ(SGSH)バリアントをコードする核酸を含み、前記SGSHバリアントが、配列番号1と少なくとも90%同一であり、且つ配列番号1の264位にアミノ酸置換を有するものであり、
前記組成物が、前記哺乳動物の中枢神経系(CNS)に接触する細胞に形質導入するのに効果的な形で、前記哺乳動物のCNSに投与されるためのものであり、
前記疾患を処置するために前記細胞が前記スルファミダーゼ(SGSH)バリアントを発現及び分泌する、組成物。 - スルファミダーゼ(SGSH)を哺乳動物の中枢神経系に送達するための組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)粒子を含む組成物であって、
前記rAAV粒子が、スルファミダーゼ(SGSH)バリアントをコードする核酸を含み、前記SGSHバリアントが、配列番号1と少なくとも90%同一であり、且つ配列番号1の264位にアミノ酸置換を有するものであり、
前記組成物が、前記哺乳動物において細胞が、SGSHバリアントを発現及び分泌するように、脳実質細胞又は前記哺乳動物の脳脊髄液(CSF)に接触する細胞に形質導入するのに効果的な形で、前記哺乳動物の脳実質組織、クモ膜下腔、及び/又は髄腔内に投与されるためのものである、組成物。 - スルファミダーゼ(SGSH)の発現又は機能の欠乏又は欠損によって引き起こされる哺乳動物の疾患を処置するための組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)粒子を含む組成物であって、
前記rAAV粒子が、一対のAAV逆位末端反復配列の間に挿入されたスルファミダーゼ(SGSH)バリアントをコードする核酸を含み、前記SGSHバリアントが、配列番号1と少なくとも90%同一であり、且つ配列番号1の264位にアミノ酸置換を有するものであり、
前記組成物が、脳実質細胞又は前記哺乳動物の脳脊髄液(CSF)に接触する細胞に形質導入するのに効果的な形で、前記哺乳動物の脳実質組織、クモ膜下腔、及び/又は髄腔内に投与されるためのものであり、
前記疾患を処置するために前記細胞が前記SGSHバリアントを発現及び分泌する、組成物。 - 前記rAAV粒子がAAVカプシドタンパク質を含み、前記核酸が一対のAAV逆位末端反復配列(ITR)の間に挿入される、請求項1~4のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記AAVカプシドタンパク質が、AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV-rh74、AAV-rh10及びAAV-2i8 VP1、VP2及び/若しくはVP3カプシドタンパク質、又はAAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV-rh74、AAV-Rh10若しくはAAV-2i8 VP1、VP2及び/若しくはVP3カプシド配列と90%若しくはそれ以上の同一性を有するカプシド配列からなる群に由来するか、又は当該群から選択される、請求項5に記載の組成物。
- ITRの対の1つ又は複数が、AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV-rh74、AAV-rh10若しくはAAV-2i8 ITR、又はAAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV-rh74、AAV-Rh10若しくはAAV-2i8 ITR配列と90%若しくはそれ以上の同一性を有するITRに由来するか、これを含むか、又はこれからなる、請求項5に記載の組成物。
- 前記核酸が発現調節エレメントをさらに含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記発現調節エレメントがプロモーターを含む、請求項8に記載の組成物。
- 前記発現調節エレメントがエンハンサーエレメントを含む、請求項8に記載の組成物。
- 前記発現調節エレメントが、CMVエンハンサー、チキンベータアクチンプロモーター、CAGプロモーター及び/又は配列番号2に示されるCMVエンハンサーと90%若しくはそれ以上の同一性を有する配列及び/又は配列番号3に示されるCAGプロモーターと90%若しくはそれ以上の同一性を有する配列を含む、請求項8に記載の組成物。
- 前記核酸が、イントロン、フィラーポリヌクレオチド配列及び/若しくはポリAシグナルのうちの1つ又は複数、又はそれらの組合せをさらに含む、請求項1~11のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記組成物の投与が、複数のrAAV粒子の投与を含む、請求項5~11のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記組成物が、rAAV粒子を約1×106~約1×1018vg/kgの用量で投与するためのものである、請求項13に記載の組成物。
- 前記送達又は投与が、脳室内注射及び/又は実質組織内注射を含む、請求項1~14のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記組成物が、前記哺乳動物の脳室、クモ膜下腔、及び/又は髄腔内に投与又は送達されるためのものである、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記脳室が側脳室を含む、請求項16に記載の組成物。
- 前記細胞が、脳室上皮、軟膜、内皮、脳室、髄膜、グリア細胞及び/又はニューロンを含む、請求項1~17のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記細胞が、前記SGSHバリアントを前記哺乳動物のCNSに分泌する、請求項1~18のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記脳室上皮、軟膜、内皮、脳室、髄膜、グリア細胞及び/若しくはニューロンが、前記SGSHバリアントを発現し、並びに/又は前記脳室上皮、軟膜、内皮、脳室、髄膜細胞、グリア細胞、及び/若しくはニューロンが、前記SGSHバリアントをCSFに分泌する、請求項18に記載の組成物。
- 前記組成物の投与が、CNSに対してSGSHバリアントの発現又はSGSH機能の増加をもたらす、請求項1~20のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記組成物が、脳の1~5箇所に注射されるためのものである、請求項1~21のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記組成物が、吻側側脳室;及び/又は尾側側脳室;及び/又は右側脳室;及び/又は左側脳室;及び/又は右吻側側脳室;及び/又は左吻側側脳室;及び/又は右尾側側脳室;及び/又は左尾側側脳室に投与されるためのものである、請求項1~22のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記組成物の投与が、正常なSGSHの発現の約5~50%の間までSGSHバリアントの発現を増加させる、請求項1~23のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記組成物の投与が、正常なSGSHの発現の50%より高くまでSGSHバリアントの発現を増加させる、請求項1~23のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記哺乳動物における内在性SGSHの欠損又は欠乏による認知障害又は欠損を阻害、減少、又は低減させるためのものである、請求項1~25のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記哺乳動物における内在性SGSHの欠損又は欠乏による認知機能喪失又は空間学習喪失を増加、改善、保存、回復、又は救出させるためのものである、請求項1~26のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記哺乳動物の記憶障害又は欠損を増加、改善、保存、回復、又は救出させるためのものである、請求項1~27のいずれか一項に記載の組成物。
- 細胞におけるβ-グルクロニダーゼの産生又は蓄積を阻害又は減少させるためのものである、請求項1~28のいずれか一項に記載の組成物。
- ニューロンの変性又は死を阻害、減少、又は防止させるためのものである、請求項1~28のいずれか一項に記載の組成物。
- SGSH欠損又は欠乏の症状又は有害作用を改善、低減、又は減少させるためのものである、請求項1~28のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記哺乳動物が非げっ歯類哺乳動物である、請求項1~31のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記非げっ歯類哺乳動物が霊長類、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、又はイヌである、請求項32に記載の組成物。
- 前記非げっ歯類哺乳動物が霊長類である、請求項32に記載の組成物。
- 前記霊長類がヒトである、請求項33に記載の組成物。
- 前記ヒトが小児である、請求項35に記載の組成物。
- 前記哺乳動物、霊長類、又はヒトが内在性SGSHの発現又は機能の喪失又は低減を示す、請求項1~32のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記哺乳動物、霊長類、又はヒトが、喪失又は低減したSGSHの発現又は機能に関して、ホモ接合体(Sgsh-/-)又はヘテロ接合体(Sgsh+/-)である、請求項1~32のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記疾患がSGSHの発現又は機能の欠乏又は欠損によって引き起こされる、請求項1~38のいずれか一項に記載の組成物。
- 1つ又は複数の免疫抑制剤とともに投与されるための、請求項1~39のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記SGSHバリアントが哺乳動物である、請求項1~40のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記SGSHバリアントが、霊長類、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、又はイヌSGSHである、請求項1~40のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記SGSHバリアントがヒトである、請求項1~40のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記SGSHバリアントの形質導入細胞による分泌が、配列番号1として示される非バリアントSGSHと比較して高くなることを示す、請求項1~43のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記SGSHバリアントの細胞による取り込みが、配列番号1として示される非バリアントSGSHの取り込みと比較して増加することを示す、請求項1~44のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記SGSHバリアントの細胞による取り込みが、マンノース-6-リン酸受容体を必要としない、請求項45に記載の組成物。
- 前記SGSHバリアントが、CNSにおける非形質導入細胞に分配される、請求項1~46のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記SGSHが、前記CNS細胞によって取り込まれる、請求項47に記載の組成物。
- 前記SGSHバリアントが、配列番号1と少なくとも95%同一である、請求項1~48のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記SGSHバリアントが、配列番号1のバリアントを含む、請求項1~48のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記SGSHバリアントが、配列番号1の264位にグルタミン(Q)への置換を有する、請求項1~48のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記SGSHバリアントが、配列番号1の264位にアスパラギン(N)からグルタミン(Q)への置換を有する、請求項1~48のいずれか一項に記載の組成物。
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