JP7189211B2 - 血清中のタンパク質の半減期を増加させるための組成物及び方法 - Google Patents
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ASCIIテキストファイルでの以下の提出内容は、その全体を参照により本明細書に援用する:配列表のコンピュータ可読形式(CRF)(ファイル名:688096.96WO Sequence Listing、作成日:2017年9月28日、サイズ:125kb)。
本発明は、トランスフェリンを特異的に認識する単一ドメイン抗体(sdAb)、及びそれを作製及び使用する方法に関する。
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(a)配列番号46~配列番号82からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR1、
(b)配列番号136~配列番号172からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR2、及び
(c)配列番号226~配列番号262からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR3。
(a)配列番号83~配列番号90からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR1、
(b)配列番号173~配列番号180からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR2、及び
(c)配列番号263~配列番号270からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR3。
(a)配列番号38または配列番号45のアミノ酸配列を有するフレームワーク1、
(b)配列番号128または配列番号135のアミノ酸配列を有するフレームワーク2、
(c)配列番号218または配列番号225のアミノ酸配列を有するフレームワーク3、及び
(d)配列番号308または配列番号315のアミノ酸配列を有するフレームワーク4。
(a)配列番号83または配列番号90のアミノ酸配列を有するCDR1、
(b)配列番号173または配列番号180のアミノ酸配列を有するCDR2、及び
(c)配列番号263または配列番号270のアミノ酸配列を有するCDR3。
(1)融合タンパク質を取得することであって、当該融合タンパク質は、本発明の実施形態によるトランスフェリンと特異的に結合する抗体またはそのフラグメント、標的タンパク質、及び必要に応じてリンカーを含み、当該抗体またはそのフラグメントは、標的タンパク質のカルボキシル末端またはアミノ末端に融合し、及びリンカーは、抗体と標的タンパク質のカルボキシル末端またはアミノ末端とを必要に応じて分離する、取得することと、
(2)当該融合タンパク質を、トランスフェリンに対して曝すことであって、当該トランスフェリンが、標的タンパク質単独と比較して、融合タンパク質中の標的タンパク質の半減期を増加させる、曝すこと。
(a)融合タンパク質をコードする発現ベクターを取得すること、
(b)当該発現ベクターを細胞に導入して組換え細胞を取得すること、
(c)当該組換え細胞を当該融合タンパク質の発現を可能にする条件下で増殖させること、及び
(d)当該組換え細胞から当該融合タンパク質を取得すること。
(1)本発明の実施形態によるトランスフェリンと特異的に結合する抗体またはそのフラグメントをコードする第1のヌクレオチド配列、及び必要に応じてリンカーをコードする第2のヌクレオチド配列を含む発現ベクターであって、第1及び第2のヌクレオチド配列が作動可能に連結されている、発現ベクター、
(2)宿主細胞、及び
(3)トランスフェリン。
(a)配列番号1~配列番号45からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するフレームワーク1、
(b)配列番号91~配列番号135からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するフレームワーク2、
(c)配列番号181~配列番号225からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するフレームワーク3、及び
(d)配列番号271~配列番号315からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するフレームワーク4。
(a)
(1)配列番号1~配列番号45、及び
(2)配列番号1~配列番号45のアミノ酸配列と、4、3、2、または1のアミノ酸の相違を有するアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するフレームワーク1、
(b)
(1)配列番号91~配列番号135、及び
(2)配列番号91~配列番号135のアミノ酸配列と、4、3、2、または1のアミノ酸の相違を有するアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するフレームワーク2、
(c)
(1)配列番号181~配列番号225、及び
(2)配列番号181~配列番号225のアミノ酸配列と、4、3、2、または1のアミノ酸の相違を有するアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するフレームワーク3、ならびに
(d)
(1)配列番号271~配列番号315、及び
(2)配列番号271~配列番号315のアミノ酸配列と、4、3、2、または1のアミノ酸(複数可)の相違を有するアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するフレームワーク4。
(a)配列番号46~配列番号90からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域(CDR)1、
(b)配列番号136~配列番号180からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR2、及び
(c)配列番号226~配列番号270からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR3。
(a)
(1)配列番号46~配列番号90、及び
(2)配列番号46~配列番号90のアミノ酸配列と、4、3、2、もしくは1のアミノ酸(複数可)の相違を有するアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域(CDR)1、ならびに/または
(b)
(1)配列番号136~配列番号180、及び
(2)配列番号136~配列番号180のアミノ酸配列と、4、3、2、もしくは1のアミノ酸(複数可)の相違を有するアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR2、ならびに/または
(c)
(1)配列番号226~配列番号270、及び
(2)配列番号226~配列番号270のアミノ酸配列と、4、3、2、もしくは1のアミノ酸(複数可)の相違を有するアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR3。
(a)トランスフェリンと特異的に結合する抗体またはそのフラグメント、標的タンパク質、及び必要に応じたリンカーを含む融合タンパク質をコードする発現ベクターを取得することであって、当該抗体またはそのフラグメントは、標的タンパク質のカルボキシル末端またはアミノ末端に融合し、及び必要に応じたリンカーは、抗体と標的タンパク質のカルボキシル末端またはアミノ末端とを分離する、取得することと、
(b)ステップ(a)の発現ベクターを細胞に導入して組換え細胞を取得することと、
(c)当該組換え細胞を前記融合タンパク質の発現を可能にする条件下で増殖させることと、
(d)当該組換え細胞から当該融合タンパク質を取得すること。
(1)トランスフェリンと特異的に結合する抗体またはそのフラグメントをコードする第1のヌクレオチド配列、及び必要に応じてリンカーをコードする第2のヌクレオチド配列を含む発現ベクターであって、第1及び第2のヌクレオチド配列が作動可能に連結されている、発現ベクター、
(2)宿主細胞、及び
(3)トランスフェリン。
ラマ免疫ファージディスプレイライブラリーからのトランスフェリンsdAbの単離
雄のラマ(Lama glama)に、それぞれ1、22、36、50、及び64日目に50μgのヒトトランスフェリンと50μgのカニクイザルトランスフェリンを皮下注射した[11]。完全フロインドアジュバント(Sigma,St. Louis,MO)を一次免疫に使用し、不完全なフロイントアジュバントを後続の免疫2~4に使用した。アジュバントは最終免疫には使用しなかった。ラマは各免疫の1週間後に採血し、ヘパリン化された血液を末梢血白血球の即時分離のために収集し、さらに使用するまで-80℃で保存した。
ヒトのトランスフェリン及びカニクイザルの全ての結合物質を表1に示す。sdAbの発現及び精製のために、6個のsdAb(AS02360、AS01313、AS01299、AS01290、AS01284、及びAS01274)を選択した。発現したsdAbは、カルボキシル(C)末端に6×ヒスチジン精製タグを有する。これらのsdAbは周辺質に発現し、固定化金属イオンアフィニティクロマトグラフィー(IMAC)により精製した[13]。簡潔に述べると、クローンを25mlのLB-アンピシリン(Amp)に播種し、37℃で200回転/分(rpm)で一晩振とうした。翌日、20mlの培養物を使用して、0.4%カザミノ酸、5mg/LのビタミンB1、及び200μg/mlのAmpを補充した1LのM9培地(0.2%グルコース、0.6%Na2HPO4、0.3%KH2PO4、0.1%NH4Cl、0.05%NaCl、1mM MgCl2、0.1mM CaCl2)に播種し、24時間培養した。100mlの10×TB栄養素(12%トリプトン、24%酵母エキス、及び4%グリセロール)、2mlの100mg/ml Amp、1mlの1Mイソプロピル-β-D-チオガラクトピラノシド(IPTG)を培養物に添加し、200rpmで振とうしながら28℃でさらに65~70時間インキュベーションを続けた。E. coli細胞を遠心分離により回収し、リゾチームで溶解した。細胞溶解物を遠心分離し、透明な上清をHigh-Trap(商標)キレートアフィニティカラム(GE Healthcare)にロードし、Hisタグ付きタンパク質を精製した。
SdAbを、PBS(pH7.4)で1.0μg/ml、0.2μg/ml、0.04μg/mlに希釈した。試料を、水浴で50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、及び75℃で30分間加熱した。全ての試料をベンチトップで室温まで冷却した。試料を遠心分離して、凝集した物質をペレット化した。残りの可溶性タンパク質を、ELISAを使用して結合活性についてアッセイした。ELISAでは、96ウェルマイクロタイタープレートを2μg/mlのヒトトランスフェリンまたはカニクイザルで一晩コーティングし、4%修飾リン酸緩衝生理食塩水(MPBS)によって37℃で2時間ブロッキングした。熱処理したsdAb試料を事前にブロッキングしたウェルに添加し、1時間インキュベートした。西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲートsdAb抗体を、二次試薬として使用した。プレートを発色させ、450nmで吸光度を読み取った。
BIAcore T200光学センサープラットフォームと研究グレードのCM5センサーチップ(GE Healthcare)を使用して実験を実施した。AS01274 sdAb及びAS01299 sdAbを、標準的なアミンカップリングによりセンサーチップ表面に固定化した。全ての実験は、25℃でHEPES緩衝液[10mM HEPES(pH7.4)、150mM NaCl、3.4mM EDTA、0.005%Tween 20]中で実施した。ヒトトランスフェリン及びカニクイザルトランスフェリンを、特に明記しない限り、3.9nM~2000nMの範囲の連続希釈で30μl/分の流速で注入した。ブランクの対照表面から差し引いた後の結合分析物の量を、相対応答単位(RU)として示す。各一連の注入の二重参照センサーグラムを、BIA評価ソフトウェア(GE Healthcare)を使用して、結合動態について分析した。実験データを1:1 Langmuir結合モデル(Chi2<1)にグローバルフィッティングすることで決定して、解離定数(KD)を、オン及びオフレート(それぞれkon及びkoff)から計算した。
AS01274 sdAb及びAS01299 sdAbを、血清半減期測定に選択した。上述の2つのsdAbを、非常に短い半減期(数分から数時間)を有する別のsdAb(抗IL6R sdAb)に融合し、AS01274 sdAb融合タンパク質とAS01299 sdAb融合タンパク質を作製した。この実験の陽性対照は、抗HSA sdAb融合タンパク質である。体重4~5kgの3頭のカニクイザルに、それぞれ30mgのAS01274 sdAb融合タンパク質、AS01299 sdAb融合タンパク質、及び抗HSA融合タンパク質を静脈内(i.v.)注射した。示される時点でガラス毛細管によって目から血液を採取した。血清を分離し、さらに使用するまで-80℃で保存した。上述で収集された試料中の注入された抗体分子の濃度を、ELISAによって測定した。
sdAb AS01274及びAS01299のタンパク質配列を、それぞれ最高度の相同性を共有する5つの最も近いヒト生殖系列配列とアライメントした。最良のヒト生殖系列配列をヒトアクセプターとして選択した。相同性モデルを作成した。モデル分析データに従って、抗原結合または抗体足場形成に潜在的に重要な残基をそのまま残し、残りを人間の対応物への変換のために選択した。最初に、4つの配列最適化バリアントのパネルを生成した(ステージ1)。これらのバリアントをいくつかのパラメーターについて分析し、得られた結果を使用して第2の組のsdAbを設計した(ステージ2)。AS01274の上位2つのヒト化sdAb(AS01274VHa及びAS01274VHa-A49)を、結合、安定性、及び機能的活性データに基づいて選択した。それらの配列を表1に示す。AS01299の上位6つのヒト化sdAb(AS01299VH3a、AS01299VH3a-A49、AS01299VH3a-L47、AS01299VH3a-M78、AS01299VH4、及びAS01299VH4-L47)を、結合、安定性、及び機能的活性データに基づいて選択した。それらの配列を表1に示す。
ヒト化抗トランスフェリンsdAbの発現
sdAbの発現と精製には、8つのsdAbs(AS01274VHa、AS01274VHa-A49、AS01299VH3a、AS01299VH3a-A49、AS01299VH3a-L47、AS01299VH4、AS01299VH4-L47、及びAS01299VH3a-M78)を選択した。発現したsdAbは、カルボキシル(C)末端に6×ヒスチジン精製タグを有する。これらのsdAbは周辺質に発現し、固定化金属イオンアフィニティクロマトグラフィー(IMAC)により精製された[13]。発現及び精製手順は、ラクダ科動物のsdAbの産生で述べたものと同一である。
BIAcore T200光学センサープラットフォームと研究グレードのCM5センサーチップ(GE Healthcare;Little Chalfont,United Kingdom)を使用して実験を実施した。ヒトトランスフェリンを、標準的なアミンカップリングによりセンサーチップ表面に固定化した。全ての実験は、25℃でHEPES緩衝液[10mM HEPES(pH7.4)、150mM NaCl、3.4mM EDTA、0.005%Tween 20]中で実施した。ヒト化抗トランスフェリンsdAbを、特に明記しない限り、0.375nM~24nMの範囲の連続希釈で30μl/分の流速で注入した。ブランクの対照表面から差し引いた後の結合分析物の量を、相対応答単位(RU)として示す。各一連の注入の二重参照センサーグラムを、BIA評価ソフトウェア(GE Healthcare)を使用して、結合動態について分析した。実験データを1:1 Langmuir結合モデル(Chi2<1)にグローバルフィッティングすることで決定して、解離定数(KD)を、オン及びオフレート(それぞれkon及びkoff)から計算した。
静的結合能力の決定
2つのヒト化抗トランスフェリンsdAb(AS01274VHa-A49及びAS01299VH4)ならびにヒト血清アルブミン(HSA)に対する1つのsdAb対照をsdAbとプロテインAとの結合能力分析に使用した。3つのsdAbを全て1つの抗IL-6R sdAbに融合し、3つのsdAb融合タンパク質を得た。sdAb融合タンパク質は、2.1~2.4mg/mLの濃度で調製し、pH7.4のPBSで調製し、0.22μmの低タンパク質結合PVDFフィルター(Millipore,MA,USA)を使用して濾過した。プロテインA樹脂をPBSで30分間平衡化し、濾過して湿ったペーストを得た。1mLのsdAb融合タンパク質を100μLの湿った樹脂に添加した。スラリーを、室温で5分間、10分間、20分間、30分間、40分間、50分間、60分間、及び100分間穏やかに振盪しながらインキュベートした。樹脂を9mLのPBS、pH7.4で洗浄した。タンパク質の溶離を、4mLの100mMグリシン-HCl、pH2.5を樹脂に添加し、スラリーを室温で15分間穏やかに振とうしてインキュベートすることで実施した。全ての画分、すなわちフロースルー、洗浄、及び溶離を収集し、λ=280nmでの分光光度計によって分析して、sdAb融合タンパク質の含有量を決定した。
100μLのプロテインA樹脂を30mm×内径2.1mmカラムのマイクロボアに詰めた。アセトンパルス(0.01M)をカラムに適用して、カラムの総空隙容量を決定した。pH7.4のPBSで平衡化した後、1mLのpH7.4PBS中の3.5mg/mL sdAb融合タンパク質を、0.5ml/分の線形流速でカラムにロードした。フロースルーのsdAb融合タンパク質濃度が供給濃度の10%に達した時点で、ブレークスルー体積を決定した。このフロースルー体積を、空隙容量を差し引くことにより補正し、この補正体積に基づいて、プロテインA樹脂の動的結合能力を決定した。
AS01274VHa-A47 sdAb及びAS01299VH4 sdAbを、血清半減期測定に選択した。上述の2つのsdAbを、非常に短い半減期(数分から数時間)を有する別のsdAb(抗IL6R sdAb)に融合し、AS01274VHa-A47 sdAb融合タンパク質とAS01299VH4 sdAb融合タンパク質を作製した。体重4~5kgの2匹のカニクイザルに、それぞれ30mgのAS01274VHa-A47 sdAb融合タンパク質、及びAS01299VH4 sdAb融合タンパク質を静脈内(i.v.)注射した。示される時点でガラス毛細管によって目から血液を採取した。血清を分離し、さらに使用するまで-80℃で保存した。上述で収集された試料中の注入された抗体分子の濃度を、ELISAによって測定した。
sdAbの単離と特性評価
トランスフェリン特異的sdAbsの単離を、ヒトトランスフェリン及びカニクイザルのトランスフェリンによるラマ免疫、ラマからの免疫ファージディスプレイライブラリーの構築、及びその後のパニングによって達成した。
AS01274及びAS01299を、トランスフェリン結合活性、プロテインA結合活性、及び高い熱安定性に基づいて血清半減期を試験するために選択した。通常、sdAbは急速に血液から除去され、血清半減期は数分から数時間である。選択した2つのsdAbの血清半減期を調べるために、2つのsdAbを非常に短い血清半減期を有する別のsdAb(抗IL-6R sdAb)と融合し、それぞれsdAb融合タンパク質として産生した。
ヒト化抗トランスフェリンsdAbの発現
AS01274及びAS01299 sdAbsを、ヒト化用のために選択した。8つのヒト化sdAbバリアントを、相同体モデルと復帰変異に基づいて生成した。ヒト化sdAbバリアントには、フレームワーク領域1~4(表6)及び相補性決定領域1~3(表7)が含まれる。
上述の8つのヒト化抗トランスフェリンsdAbを、SPRベースのバイオセンサーを使用して、その親sdAbsとともに、ヒトトランスフェリン及びカニクイザルトランスフェリンへの結合について分析した。結果を図8と9に示した。結合(kon)速度、解離(koff)速度、及び解離定数(KD)を、表9(ヒトトランスフェリン)及び表6(カニクイザルのトランスフェリン)に列挙した。
2つのヒト化sdAbの静的及び動的プロテインA結合能力を、1つのプロテインA結合抗HSA sdAbとともに分析した。パラメーターを表11に列挙した。データは、2つのヒト化抗トランスフェリンsdAbのプロテインA結合能力が、抗HSA sdAb融合タンパク質と同様の静的及び動的タンパク質結合能力の挙動を有することを示した。
AS01274VHa-A49sdAb融合タンパク質及びAS01299VH4 sdAb融合タンパク質を、血清クリアランス分析のために4~5kgのカニクイザルに注射した。最初の投与後の血清sdAb融合タンパク質濃度を図10に示した。計算された血清半減期を表12に列挙した。データは、2つのヒト化抗トランスフェリンsdAbの血清半減期がヒト化後に影響を受けなかったことを示唆する。
1.Sleep,D.,J.Cameron,and L.R.Evans,Albumin as a versatile platform for drug half-life extension.Biochim Biophys Acta。
2.Kontermann,R.E.,Strategies for extended serum half-life of protein therapeutics.Curr Opin Biotechnol.22(6):p.868-76。
3.Lee,L.S.,et al.,Prolonged circulating lives of single-chain Fv proteins conjugated with polyethylene glycol:a comparison of conjugation chemistries and compounds.Bioconjug Chem,1999.10(6):p.973-81。
4.Tuettenberg,J.,et al.,Pharmacokinetics,pharmacodynamics,safety and tolerability of APG101,a CD95-Fc fusion protein,in healthy volunteers and two glioma patients.Int Immunopharmacol.13(1):p.93-100。
5.Nolte,M.W.,et al.,Improved kinetics of rIX-FP,a recombinant fusion protein linking factor IX with albumin,in cynomolgus monkeys and hemophilia B dogs.J Thromb Haemost.10(8):p.1591-9。
6.Holt,L.J.,et al.,Anti-serum albumin domain antibodies for extending the half-lives of short lived drugs.Protein Eng Des Sel,2008.21(5):p.283-8。
7.Walker,A.,et al.,Anti-serum albumin domain antibodies in the development of highly potent,efficacious and long-acting interferon.Protein Eng Des Sel.23(4):p.271-8。
8.Stork,R.,D.Muller,and R.E.Kontermann,A novel tri-functional antibody fusion protein with improved pharmacokinetic properties generated by fusing a bispecific single-chain diabody with an albumin-binding domain from streptococcal protein G.Protein Eng Des Sel,2007.20(11):p.569-76。
9.Matsubara,M.,et al.,Single dose GLP-1-Tf ameliorates myocardial ischemia/reperfusion injury.J Surg Res.165(1):p.38-45。10.Keefe,D.,et al.,In vitro characterization of an acetylcholine receptor-transferrin fusion protein for the treatment of myasthenia gravis.Autoimmunity.43(8):p.628-39。
11.Arbabi Ghahroudi,M.,et al.,Selection and identification of single domain antibody fragments from camel heavy-chain antibodies.FEBS Lett,1997.414(3):p.521-6。
12.Tanha,J.,A.Muruganandam,and D.Stanimirovic,Phage display technology for identifying specific antigens on brain endothelial cells.Methods Mol Med,2003.89:p.435-49。
13.Zhang,J.,et al.,A pentavalent single-domain antibody approach to tumor antigen discovery and the development of novel proteomics reagents.J Mol Biol,2004.341(1):p.161-9。
14.Cortez-Retamozo,V.,et al.,Efficient cancer therapy with a nanobody-based conjugate.Cancer Res,2004.64(8):p.2853-7。
15.Luo,F.R.,et al.,Correlation of pharmacokinetics with the antitumor activity of Cetuximab in nude mice bearing the GEO human colon carcinoma xenograft.Cancer Chemother Pharmacol,2005.56(5):p.455-64。
本開示は以下の実施形態を包含する。
[1] ヒト及びカニクイザルの血清トランスフェリンタンパク質及びプロテインA樹脂と特異的に結合する少なくとも1つの免疫グロブリン単一ドメイン抗体を含むポリペプチドであって、前記sdAbはプロテインAカラムによって精製でき、半減期の短いタンパク質またはフラグメントの半減期延長フラグメントとして使用できる、前記ポリペプチド。
[2] 前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下を含む、実施形態1に記載の単離されたsdAb:
(a)
a.配列番号46~配列番号90、及び
b.配列番号46~配列番号90のアミノ酸配列と、4、3、2、もしくは1のアミノ酸(複数可)の相違を有するアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域(CDR)1、
ならびに/または
(b)
a.配列番号136~配列番号180、及び
b.配列番号136~配列番号180のアミノ酸配列と、4、3、2、もしくは1のアミノ酸(複数可)の相違を有するアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR2、
ならびに/または
(c)
a.配列番号226~配列番号270、及び
b.配列番号226~配列番号270のアミノ酸配列と、4、3、2、もしくは1のアミノ酸の相違を有するアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR3。
[3] 単一ドメイン抗体(sdAb)である、実施形態1または2に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
[4] 配列番号316~配列番号360からなる群から選択される配列と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含む、実施形態3に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
[5] AS01274(QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVASGSIASIATMAWYRQAPGQQRELVAGITRGGSTKYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPDDTAVYYCTDYSRKYYQDYWGQGTQVTVSS(配列番号316))、またはAS01299(QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKQRELVAGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNAKNTMYLQMNSLKPEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTQVTVSS(配列番号332))、またはAS01299VH3a(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKGLELVAGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTLVTVSS(配列番号354))、またはAS01299VH3a-A49(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKGLELVSGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTLVTVSS(配列番号356))、またはAS01299VH3a-L47(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKGLEWVAGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTLVTVSS(配列番号357))、またはAS01299VH3a-M78(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKGLELVAGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTLVTVSS(配列番号358))、またはAS01299VH4(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKGLELVSGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTLVTVSS(配列番号359))、またはAS01299VH4-L47(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKGLEWVSGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTLVTVSS(配列番号360))のアミノ酸配列と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含む、実施形態4に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
[5] 10 -7 M以下の解離定数(K D )を有する、実施形態1~4のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
[6] 前記トランスフェリンがヒトトランスフェリンである、実施形態1~5のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
[7] 前記トランスフェリンがカニクイザルトランスフェリンである、実施形態1~6のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
[8] 前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメントが、プロテインA樹脂に結合する、実施形態1~7のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
[9] 前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメントが、組換えにより産生される、実施形態1~8のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
[10] 実施形態1~9のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、標的タンパク質、及び必要に応じたリンカーを含む、融合タンパク質であって、前記抗体またはそのフラグメントが、前記標的タンパク質のカルボキシル末端またはアミノ末端に融合し、前記リンカーは、前記抗体と前記標的タンパク質のカルボキシル末端またはアミノ末端とを必要に応じて分離する、前記融合タンパク質。
[11] 有効量の実施形態10に記載の融合タンパク質及びトランスフェリンを含む組成物。
[12] 実施形態1~11のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む融合タンパク質であって、プロテインA樹脂により精製できる、前記融合タンパク質。
[13] 前記融合タンパク質中の前記標的タンパク質の半減期を増加させる方法であって、実施形態10または12に記載の融合タンパク質をカニクイザル血清中のトランスフェリンに曝し、それにより前記融合タンパク質中の前記標的タンパク質の半減期を増加させることを含む、前記方法。
[14] 以下を含む、実施形態10または12に記載の融合タンパク質を産生する方法:
(a)前記融合タンパク質をコードする発現ベクターを取得すること、
(b)前記発現ベクターを細胞に導入して組換え細胞を取得すること、
(c)前記組換え細胞を前記融合タンパク質の発現を可能にする条件下で増殖させること、及び
(d)前記組換え細胞またはその上清から前記融合タンパク質を取得すること。
[15] 標的タンパク質の半減期を増加させる方法であって、
(1)融合タンパク質を取得することであって、前記融合タンパク質が、実施形態1~9のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、標的タンパク質、及び必要に応じたリンカーを含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記標的タンパク質のカルボキシル末端またはアミノ末端に融合し、前記リンカーが、前記抗体と前記標的タンパク質のカルボキシルまたはアミノ末端とを必要に応じて分離する、前記取得することと、
(2)前記融合タンパク質をトランスフェリンに曝すことと、を含み、
前記トランスフェリンが、前記標的タンパク質単独と比較して、前記融合タンパク質中の前記標的タンパク質の半減期を増加させる、前記方法。
[16] 前記曝すステップが、カニクイザルのトランスフェリンを含む血清に前記融合タンパク質を投与することを含む、実施形態15に記載の方法。
[17] 標的タンパク質の半減期を増加させるシステムであって、
(a)実施形態1~9のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする第1のヌクレオチド配列、及びリンカーをコードする第2のヌクレオチド配列をであって、前記第1及び第2のヌクレオチド配列が作動可能に連結されている、前記第1及び第2のヌクレオチド配列と、
(b)宿主細胞と、
(c)前記トランスフェリンと、を含む、前記システム。
Claims (15)
- ヒト及びカニクイザルの血清トランスフェリンタンパク質及びプロテインA樹脂と特異的に結合する単一ドメイン抗体(sdAb)またはその抗原結合フラグメントであって、前記sdAbはプロテインAカラムによって精製でき、半減期の短いタンパク質またはフラグメントの半減期延長フラグメントとして使用でき、前記sdAbは、
AS01274(QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVASGSIASIATMAWYRQAPGQQRELVAGITRGGSTKYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPDDTAVYYCTDYSRKYYQDYWGQGTQVTVSS(配列番号316))、または
AS01299(QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKQRELVAGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNAKNTMYLQMNSLKPEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTQVTVSS(配列番号332))、または
AS01299VH3a(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKGLELVAGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTLVTVSS(配列番号354))、または
AS01299VH3a-A49(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKGLELVSGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTLVTVSS(配列番号356))、または
AS01299VH3a-L47(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKGLEWVAGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTLVTVSS(配列番号357))、または
AS01299VH3a-M78(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKGLELVAGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTLVTVSS(配列番号358))、または
AS01299VH4(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKGLELVSGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTLVTVSS(配列番号359))、または
AS01299VH4-L47(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSIATMAWYRQAPGKGLEWVSGITRSGSTNYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTDYSSRYYHDYWGQGTLVTVSS(配列番号360))
のアミノ酸配列と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、
ただし、前記sdAbのCDR配列は改変されていない、
前記単一ドメイン抗体またはその抗原結合フラグメント。 - 10-7M以下の解離定数(KD)を有する、請求項1に記載の単一ドメイン抗体(sdAb)またはその抗原結合フラグメント。
- 請求項1又は2に記載の単一ドメイン抗体(sdAb)またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸。
- 前記単一ドメイン抗体(sdAb)またはその抗原結合フラグメントが、組換えにより産生される、請求項1~3のいずれか1項に記載の単一ドメイン抗体(sdAb)またはその抗原結合フラグメント。
- 請求項1、2および4のいずれか1項に記載の単一ドメイン抗体(sdAb)またはその抗原結合フラグメント、及び標的タンパク質を含む、融合タンパク質であって、前記単一ドメイン抗体(sdAb)またはその抗原結合フラグメントが、前記標的タンパク質のカルボキシル末端またはアミノ末端に融合されている、前記融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質がさらにリンカーを含み、前記リンカーは、前記単一ドメイン抗体(sdAb)と前記標的タンパク質のカルボキシル末端またはアミノ末端とを分離する、請求項5に記載の融合タンパク質。
- 請求項5又は6に記載の融合タンパク質であって、プロテインA樹脂により精製できる、前記融合タンパク質。
- 有効量の請求項5又は6に記載の融合タンパク質及びトランスフェリンを含む、組成物。
- 請求項5~7のいずれか1項に記載の融合タンパク質中の標的タンパク質の半減期を増加させる方法であって、前記融合タンパク質をカニクイザル血清中のトランスフェリンに曝し、それにより前記融合タンパク質中の前記標的タンパク質の半減期を増加させることを含む、前記方法。
- 以下を含む、請求項5~7のいずれか1項に記載の融合タンパク質を産生する方法:
(a)前記融合タンパク質をコードする発現ベクターを取得すること、
(b)前記発現ベクターを細胞に導入して組換え細胞を取得すること、
(c)前記組換え細胞を前記融合タンパク質の発現を可能にする条件下で増殖させること、及び
(d)前記組換え細胞またはその上清から前記融合タンパク質を取得すること。 - 標的タンパク質の半減期を増加させる方法であって、
(1)請求項1、2及び4のいずれか1項に記載の単一ドメイン抗体またはその抗原結合フラグメント及び標的タンパク質を含む融合タンパク質を取得すること、ここで前記単一ドメイン抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記標的タンパク質のカルボキシル末端またはアミノ末端に融合されている、並びに
(2)前記融合タンパク質をトランスフェリンに曝すこと、
を含み、前記トランスフェリンが、前記標的タンパク質単独と比較して、前記融合タンパク質中の前記標的タンパク質の半減期を増加させる、前記方法。 - 前記融合タンパク質が、さらにリンカーを含み、前記リンカーが、前記単一ドメイン抗体と前記標的タンパク質のカルボキシルまたはアミノ末端とを分離するものである、請求項11に記載の方法。
- 前記曝すステップが、カニクイザルのトランスフェリンを含む血清に前記融合タンパク質を投与することを含む、請求項11又は12に記載の方法。
- 標的タンパク質の半減期を増加させるシステムであって、
(a)請求項1、2及び4のいずれか1項に記載の単一ドメイン抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする第1の核酸と、
(b)宿主細胞と、
(c)前記トランスフェリンと、を含む、前記システム。 - (a)リンカーをコードする第2の核酸をさらに含み、前記第1及び第2の核酸が作動可能に連結されている、請求項14に記載のシステム。
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