JP7180027B1 - ハダニを殺滅するためのタンパク質bvp8及びその使用 - Google Patents
ハダニを殺滅するためのタンパク質bvp8及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7180027B1 JP7180027B1 JP2022101036A JP2022101036A JP7180027B1 JP 7180027 B1 JP7180027 B1 JP 7180027B1 JP 2022101036 A JP2022101036 A JP 2022101036A JP 2022101036 A JP2022101036 A JP 2022101036A JP 7180027 B1 JP7180027 B1 JP 7180027B1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- spider mite
- bvp8
- spider
- mites
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
- A01N37/44—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a nitrogen atom attached to the same carbon skeleton by a single or double bond, this nitrogen atom not being a member of a derivative or of a thio analogue of a carboxylic group, e.g. amino-carboxylic acids
- A01N37/46—N-acyl derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/60—Isolated nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
- A01P7/00—Arthropodicides
- A01P7/02—Acaricides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16731—Uses of virus other than therapeutic or vaccine, e.g. disinfectant
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
ダニを殺滅するためのBVP8タンパク質の取得:
1)配列番号1に示される配列(配列番号2に示されるタンパク質を符号化したもの)で、BVP8タンパク質遺伝子断片(Sangon Bioengineering(Shanghai)Co.Ltd.)を人工合成し、且つ大腸菌発現ベクターpet28aプラスミドに結合し、組換え発現プラスミドpet28a-BVP8を構築した。
ダニを殺滅するためのBVP8タンパク質を多く発現するために、上記の符号化配列が担持された組換え発現プラスミドpet28a-BVP8を大腸菌BL21に形質転換し、組換え菌BL21/pet28a-BVP8を得た。該組換え菌を5mL LB液体培地に接種し、37℃の振動台に置いてOD600が0.6になるまで培養した後、1.0mmol/Lのイソプロピル-B-Dチオガラクトシド(即ちIPTGであり、Sigma会社から購入されるもの)を添加して30℃で3時間誘導培養した。上記50mL組換え菌BL21/pet28a-BVP8の誘導培養を3時間行ったものを12000rpmで30秒間遠心分離して菌体を収集し、超音波(技術パラメータ:300W、粉砕30秒、間欠時間30秒)で細胞を粉砕した後、12000rpmで15分間遠心分離して上澄みを取り、続いて0.4μm孔径の濾過膜で濾過して異物を除去し、GST融合タンパク質のアフィニティークロマトグラフィー法で様々なタンパク質を精製した。最終的な精製生成物に対してSDS-PAGE電気泳動検出を行い、結果を図1に示すが、精製されたタンパク質とタンパク質分子量標準を比較すると、分子量が9kDaであることと推定され、予想されるタンパク質BVP8の分子量8.34kDaにほぼ一致し、本発明のBVP8タンパク質の大腸菌BL21での発現が成功したことが証明された。
1)BVP8タンパク質によるナミハダニ(Tetranychus urticae)の殺滅
FAO(国連食糧農業機関)で推薦する有害ダニ測定標準方法であるスライドグラス浸漬法を参照する。両面テープを2-3cmの長さに切り、顕微鏡のスライドガラスの一端に貼り付け、ピンセットでテープ上の紙を剥がし、0号毛筆で、大きさが一致し、色が鮮やかで、活発な雌成体を選択し、その背部を両面テープに貼り付け(ダニの足、髭及び口器に貼り付けないようにすることを注意する)、各シートに4行、各行に10匹貼り付けた。温度25℃、相対湿度85%の左右の生化学インキュベータに4時間放置した後、双眼鏡で観察し、死亡した又は活発でない生体を除去した。予備試験をベースとして水で薬剤を5-7種の濃度に希釈し、ダニ付きスライドグラスの一端を薬液に浸漬させ、軽く5秒間振った後に取り出し、吸水紙でダニ及びその周辺の余計な薬液を迅速に吸い取った。上記生化学インキュベータに置き、24時間後に双眼鏡で結果を検査する。毛筆でダニを軽く触れ、ダニの足が動かないものを死亡したものとした。各濃度のものに対して3回繰り返して行い、清水に浸漬したものを対照とした。上記実験ステップに従い、BVP8タンパク質懸濁液によってナミハダニをバイオアッセイすると、その結果は、以下の表1に示すように、12.98μg/mLであった。LC50値はSPASS 19.0データ処理ソフトウェアで算出された。
FAO(国連食糧農業機関)で推薦する有害ダニ測定標準方法であるスライドグラス浸漬法を参照する。両面テープを2-3cmの長さに切り、顕微鏡のスライドガラスの一端に貼り付け、ピンセットでテープ上の紙を剥がし、0号毛筆で、大きさが一致し、色が鮮やかで、活発な雌成体を選択し、その背部を両面テープに貼り付け(ダニの足、髭及び口器に貼り付けないようにすることを注意する)、各シートに4行、各行に10匹貼り付けた。温度25℃、相対湿度85%の左右の生化学インキュベータに4時間放置した後、双眼鏡で観察し、死亡した又は活発でない生体を除去した。予備試験をベースとして水で薬剤を5-7種の濃度に希釈し、ダニ付きスライドグラスの一端を薬液に浸漬させ、軽く5秒間振った後に取り出し、吸水紙でダニ及びその周辺の余計の薬液を迅速に吸い取った。上記生化学インキュベータに置き、24時間後に双眼鏡で結果を検査する。毛筆でダニを軽く触れ、ダニの足が動かないものを死亡したものとした。各濃度のものを3回繰り返し、清水に浸漬したものを対照とした。上記実験ステップに従い、BVP8タンパク質懸濁液によってミカンハダニをバイオアッセイすると、その結果は、以下の表2に示すように、33.45μg/mLであった。LC50値はSPASS 19.0データ処理ソフトウェアで算出された。
卵期のナミハダニが付いた葉を取り、水で成体と若虫を洗い流して除去した。吸水紙で葉の水分を吸い取った。両面テープが貼り付けられたスライドガラスに卵を軽く貼り付け、顕微鏡で観察してカウントし、カウントした後の卵を被検試料に3秒浸漬させて取り出した。続いて25度の恒温インキュベータに入れ、且つそれぞれ24時間、48時間、72時間後に顕微鏡でBVP8タンパク質によるナミハダニ卵への作用と効果を観察し、異なる形態の卵をカウントし、撮影した。
[付記1]
配列番号2に示されるタンパク質又は配列番号2に示されるタンパク質を符号化する遺伝子の殺ハダニ剤の調製への使用であって、前記ハダニはナミハダニ、ミカンハダニ又はニセナミハダニである、使用。
配列番号2に示されるタンパク質又は配列番号2に示されるタンパク質を符号化する遺伝子のハダニ卵の孵化阻害剤の調製への使用であって、前記ハダニはナミハダニである、使用。
Claims (2)
- 配列番号2に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質又は配列番号2に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を符号化する遺伝子の殺ハダニ剤の調製への使用であって、前記ハダニはナミハダニ、ミカンハダニ又はニセナミハダニである、使用。
- 配列番号2に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質又は配列番号2に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を符号化する遺伝子のハダニ卵の孵化阻害剤の調製への使用であって、前記ハダニはナミハダニである、使用。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110755725.1 | 2021-07-05 | ||
CN202110755725.1A CN113527439B (zh) | 2021-07-05 | 2021-07-05 | 杀叶螨蛋白bvp8及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP7180027B1 true JP7180027B1 (ja) | 2022-11-29 |
JP2023008858A JP2023008858A (ja) | 2023-01-19 |
Family
ID=78126659
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022101036A Active JP7180027B1 (ja) | 2021-07-05 | 2022-06-23 | ハダニを殺滅するためのタンパク質bvp8及びその使用 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11793204B2 (ja) |
EP (1) | EP4115737B1 (ja) |
JP (1) | JP7180027B1 (ja) |
KR (1) | KR102663879B1 (ja) |
CN (1) | CN113527439B (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117402221B (zh) * | 2023-10-17 | 2024-05-10 | 湖北省生物农药工程研究中心 | 用于防治螨害的蛋白组合物及应用 |
CN117285607B (zh) * | 2023-10-17 | 2024-02-27 | 湖北省生物农药工程研究中心 | 杀螨蛋白bvp28在防治螨害中的应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109096378A (zh) * | 2018-08-14 | 2018-12-28 | 黑龙江八农垦大学 | 一种枯草芽孢杆菌蛋白激发子amep412及其功能 |
CN109096379A (zh) * | 2018-08-14 | 2018-12-28 | 黑龙江八农垦大学 | 一种枯草芽孢杆菌amep412蛋白的新功能及其抗菌肽的鉴定 |
CN110754471A (zh) * | 2019-12-02 | 2020-02-07 | 黑龙江八一农垦大学 | Amep412蛋白对白粉虱的杀虫活性及其在防治白粉虱中的应用 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5262158A (en) * | 1991-04-30 | 1993-11-16 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis isolates for controlling acarida |
MX2017003452A (es) * | 2014-09-17 | 2017-07-28 | Bayer Cropscience Lp | Composiciones que comprenden celulas recombinantes de bacillus y otro agente de control biologico. |
-
2021
- 2021-07-05 CN CN202110755725.1A patent/CN113527439B/zh active Active
-
2022
- 2022-06-03 US US17/832,566 patent/US11793204B2/en active Active
- 2022-06-23 JP JP2022101036A patent/JP7180027B1/ja active Active
- 2022-07-05 EP EP22183098.7A patent/EP4115737B1/en active Active
- 2022-07-05 KR KR1020220082799A patent/KR102663879B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109096378A (zh) * | 2018-08-14 | 2018-12-28 | 黑龙江八农垦大学 | 一种枯草芽孢杆菌蛋白激发子amep412及其功能 |
CN109096379A (zh) * | 2018-08-14 | 2018-12-28 | 黑龙江八农垦大学 | 一种枯草芽孢杆菌amep412蛋白的新功能及其抗菌肽的鉴定 |
CN110754471A (zh) * | 2019-12-02 | 2020-02-07 | 黑龙江八一农垦大学 | Amep412蛋白对白粉虱的杀虫活性及其在防治白粉虱中的应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR102663879B1 (ko) | 2024-06-10 |
KR20230008622A (ko) | 2023-01-16 |
CN113527439A (zh) | 2021-10-22 |
US20230011837A1 (en) | 2023-01-12 |
EP4115737A1 (en) | 2023-01-11 |
US11793204B2 (en) | 2023-10-24 |
EP4115737B1 (en) | 2024-02-28 |
CN113527439B (zh) | 2022-04-12 |
JP2023008858A (ja) | 2023-01-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7180027B1 (ja) | ハダニを殺滅するためのタンパク質bvp8及びその使用 | |
Fan et al. | Annotated catalogue of Stigmaeidae (Acari: Prostigmata), with a pictorial key to genera | |
JP7263601B2 (ja) | ハダニを防除するためのタンパク質bvp10及びその応用 | |
Seagraves et al. | Oviposition preference for water-stressed plants in Orius insidiosus (Hemiptera: Anthocoridae) | |
Murray et al. | Sitona weevils (Coleoptera: Curculionidae) as agents for rapid transfer of nitrogen from white clover (Trifolium repens L.) to perennial ryegrass (Lolium perenne L.) | |
Ramzan et al. | Biology of fall armyworm, Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) a new alien invasive Pest in Pakistan | |
JP2012246227A (ja) | 土壌病害防除剤、及びこの防除剤を用いた土壌病害防除方法 | |
Neravathu | Feeding impact of Cisaberoptus kenyae Keifer (Acari: Eriophyidae) on photosynthetic efficiency and biochemical parameters of Mangifera indica L. | |
JPH06276892A (ja) | 昆虫寄生性線虫の増殖用培地 | |
BR102022013214A2 (pt) | Uso da proteína bvp8 para matar ácaros tetraniquídeos e inibir a eclosão de ovos de ácaros tetraniquídeos | |
JP2683799B2 (ja) | 昆虫寄生性線虫増殖用培地 | |
CN117402221B (zh) | 用于防治螨害的蛋白组合物及应用 | |
Holtz et al. | Alternative Management of Tetranychus Urticae with Extract of the Jatropha Pie | |
CN117285607B (zh) | 杀螨蛋白bvp28在防治螨害中的应用 | |
WO2024127435A1 (en) | Peptide(s), composition(s) and method(s) having broad spectrum activity against crop insects | |
Phillips | Influence of liquid food on fecundity and longevity of Microctonus hyperodae Loan | |
Chanchala et al. | Disease Transmission Ability and Pattern of Deltocephalus menoni (Hemiptera: Cicadellidae) Vector of Sugarcane White Leaf Disease | |
JPH04504730A (ja) | プロテイナーゼ阻害剤およびその使用法 | |
Mason | Observations on the life history and control of the vine weevil on cyclamen and foliage plants. | |
Bulgarini | Indagini sull’ecologia e sul comportamento della specie invasiva Halyomorpha halys (Heteroptera: Pentatomidae) finalizzate alla sua gestione sostenibile negli agroecosistemi | |
Castañeda González | Arthropod deversity associated with decaying opuntia ssp. and citrus sinensis fruits=[Diversidad de artrópodos asociados con frutos descompuestos de opuntia spp. y citrus sinensis] | |
Sandeep Singh et al. | Natural control of mealybug, Nipaecoccus viridis (Newstead) by coccinellid predator, Nephus regularis (Sicard) on Jujube (ber). | |
Daiber | False codling moth, Cryptophlebia leucotreta (Meyr.) in peach orchards and home gardens of the summer rainfall area of South Africa | |
Bhagat et al. | Efficacy of percentage preference of Bracon hebetor Say on (Hymenoptera: Braconidae) on the Helicoverpa armigera & Maruca vitrata in pigeonpea under laboratory conditions | |
Lodha et al. | Oviposition and hatchability of eggs of the face fly |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220711 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20220711 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220927 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221007 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221115 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221116 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7180027 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |