JP7168770B2 - ヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体及びそれを含む光線力学治療用組成物 - Google Patents

ヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体及びそれを含む光線力学治療用組成物 Download PDF

Info

Publication number
JP7168770B2
JP7168770B2 JP2021515600A JP2021515600A JP7168770B2 JP 7168770 B2 JP7168770 B2 JP 7168770B2 JP 2021515600 A JP2021515600 A JP 2021515600A JP 2021515600 A JP2021515600 A JP 2021515600A JP 7168770 B2 JP7168770 B2 JP 7168770B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
helicobacter pylori
lysine
poly
butyl
pheoa
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2021515600A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2022501382A (ja
Inventor
クン ナ
ビョン ナム イム
Original Assignee
エンビアル インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by エンビアル インコーポレイテッド filed Critical エンビアル インコーポレイテッド
Priority claimed from KR1020190115725A external-priority patent/KR102265446B1/ko
Publication of JP2022501382A publication Critical patent/JP2022501382A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7168770B2 publication Critical patent/JP7168770B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

本発明は、ヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体及びその用途に関する。
ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）は、ヒト及び動物などの胃腸に住むネジ状のグラム陰性菌であって、ウレアーゼ（Ｕｒａｓｅ）という酵素を作り出し、この酵素で胃粘液中の要素をアンモニアと二酸化炭素とに分解して、局所的にヘリコバクター・ピロリ周辺の胃酸を中和させながら胃で定着（感染）して生きて行く。
また、ヘリコバクター・ピロリ表面には、ＳａｂＡ（Ｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｄｈｅｓｉｎ）という細胞表面構成付着素があるが、これは、ヘリコバクター・ピロリが胃上皮細胞に感染や接着することを容易にするが、ヘリコバクター・ピロリのＳａｂＡは、細胞表面上のＳｉａｌｙｌａｔｅｄ／ｆｕｃｏｓｙｌａｓｔｅｄｇｌｙｃａｎに付着すると知られている。
グリコシレートされた上皮細胞に結合する能力は、ヘリコバクター・ピロリが持続的な感染及び疾病を起こすのに必須的であると知られている。ヘリコバクター・ピロリに感染されることは、慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌の発生にも繋がると知られており、国際癌研究所が規定した１等級発癌物質である。
このようなヘリコバクター・ピロリの感染は、西側諸国の一般人口の３０～５０％を感染させると知られており、現在、世界的に臨床で使われるヘリコバクター・ピロリ治療法は、プロトンポンプ抑制剤であるオメプラゾール（ｏｍｅｐｒａｚｏｌｅ）、アモキシシリン（ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）及びクラリスロマイシン（ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）で構成された３剤療法が１次標準療法として使われたが、クラリスロマイシンの耐性増加が、除菌治療失敗の主要原因として知られている。
前記３剤療法を利用した１次治療が失敗するか、耐性菌がある場合、代替剤としてメトロニダゾール（ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ）、テトラサイクリン（ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、キノロン（ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）などが使われているが、これらも、抗生剤の耐性増加の問題点がある。これにより、ヘリコバクター・ピロリ抗生剤基盤の治療剤の限界点を解決することができる新たなヘリコバクター・ピロリ治療方法についての研究及び開発が必要な実情である。
本発明は、従来の抗生剤の耐性問題で完全な除菌が難しかったヘリコバクター・ピロリ菌感染を効果的に治療するためのヘリコバクター・ピロリ光線力学治療用高分子組成物に関するものであって、該高分子組成物は、ヘリコバクター・ピロリ菌と選択的に結合し、レーザ照射時に、高分子と結合された光増感剤から生成される一重項酸素を通じてヘリコバクター・ピロリ菌の感染を治療することができる。
本発明は、光増感剤；シアリルラクトース；及び連結体として水溶性高分子からなることを特徴とするヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体を提供する。
本発明は、光増感剤；シアリルラクトース；及び連結体として水溶性高分子からなることを特徴とするヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体を含むヘリコバクター・ピロリによって誘導される胃疾患の光線力学治療用薬学組成物を提供する。
また、本発明は、光増感剤；シアリルラクトース；及び連結体として水溶性高分子からなることを特徴とするヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体を含むヘリコバクター・ピロリ感染診断用組成物を提供する。
本発明によれば、ヘリコバクター・ピロリ表面に選択的に結合するシアリルラクトースを接合させた水溶性高分子－光増感剤複合体は、ヘリコバクター・ピロリ菌株に対する優れた選択力及び結合力を有し、レーザ照射時に、前記複合体内の光増感剤が一重項酸素を発生させることにより、ヘリコバクター・ピロリの不活性化を効果的に誘導することが確認されることによって、前記複合体をヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体として提供して、胃腸管内でヘリコバクター・ピロリを効果的に検出し、従来の抗生剤の耐性問題を解決するためのヘリコバクター・ピロリ光線力学治療剤として提供しようとする。
ヘリコバクター・ピロリ認知能ポリマーがヘリコバクター・ピロリ表面にあるＳａｂＡと相互作用してヘリコバクター・ピロリ表面に結合する形状とレーザ照射時に、光増感剤から発生する一重項酸素の作用でヘリコバクター・ピロリの死滅を誘導する形状とを示す模式図である。 ＮＣＡ－カルボベンジルオキシ－Ｌ－リジン［ＮＣＡ－Ｃａｒｂｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙ－Ｌ－ｌｙｓｉｎｅ］のＨ１－ＮＭＲスペクトルを示した図面である。 ブチル－ポリ（カルボベンジルオキシ－リジン）１０［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ（Ｃｂｚ－ｌｙｓｉｎｅ）１０］のＨ１－ＮＭＲスペクトルを示した図面である。 ブチル－ポリ（Ｃｂｚ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ（Ｃｂｚ－ｌｙｓｉｎｅ）１０－Ｐｈｅｏａ］のＨ１－ＮＭＲスペクトルを示した図面である。 ブチル－ポリ（リジン）１０－Ｐｈｅｏａ［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ（ｌｙｓｉｎｅ）１０－Ｐｈｅｏａ］のＨ１－ＮＭＲスペクトルを示した図面である。 ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ｐｈｅｏａ［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ（３ＳＬ－ｌｙｓｉｎｅ）１０－Ｐｈｅｏａ］のＨ１－ＮＭＲスペクトルを示した図面である。 ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ｐｈｅｏａの一重項酸素の生成能を確認した結果である。 ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ｐｈｅｏａとヘリコバクター・ピロリ２６６９５菌株との相互作用及び光応答剤によるヘリコバクター・ピロリの不活性化を確認した共焦点顕微鏡の分析結果である。 ＡＧＳ細胞でブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ｐｈｅｏａの濃度別の細胞毒性を確認した結果である。 ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ｐｈｅｏａのレーザ照射量による細胞毒性を確認した結果である。 生体外（Ｉｎ ｖｉｔｒｏ）でヘリコバクター・ピロリ２６６９５菌株に対するブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ｐｈｅｏａの抗菌活性を確認したＣＦＵの分析結果である。 生体外でヘリコバクター・ピロリＳＳ１菌株に対するブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ｐｈｅｏａの抗菌活性を確認したＣＦＵの分析結果である。 生体外でブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ｐｈｅｏａの細胞吸収率を確認した結果である。 ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ｐｈｅｏａとヘリコバクター・ピロリＳＳ１菌株との相互作用及び光応答剤によるヘリコバクター・ピロリの不活性化を確認した共焦点顕微鏡の分析結果である。 ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ｐｈｅｏａのＢａｌｂ／ｃ ｍｏｕｓｅヘリコバクター・ピロリＳＳ１菌株感染モデルに対するヘリコバクター・ピロリ感染治療の効果を確認した結果である。 ブチル－ポリ－（Ｃｂｚ－リジン）１０－クロリンｅ６［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ－（Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）１０－Ｃｈｌｏｒｉｎ ｅ６］の合成過程及びそれを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 カルボベンジルオキシ基を除去する過程及びカルボベンジルオキシ基が除去されたブチル－ポリ（リジン）１０－クロリンｅ６を確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 ブチル－ポリ（リジン）１０－クロリンｅ６とシアリルラクトース（３ＳＬ）との接合過程及びそれを通じた混成化物質ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－クロリンｅ６を確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 ブチル－ポリ－（Ｃｂｚ－リジン）１０－プロトポルフィリンＩＸ［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ－（Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）１０－Ｐｒｏｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎ ＩＸ］の合成過程及びそれを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 カルボベンジルオキシ基を除去する過程及びカルボベンジルオキシ基が除去されたブチル－ポリ（リジン）１０－プロトポルフィリンＩＸを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 ブチル－ポリ（リジン）１０－プロトポルフィリンＩＸとシアリルラクトース（３ＳＬ）との接合過程及びそれを通じた混成化物質ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－プロトポルフィリンＩＸを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 ブチル－ポリ－（Ｃｂｚ－リジン）１０－ヘマトポルフィリン［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ－（Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）１０－Ｈｅｍａｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎ］の合成過程及びそれを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 カルボベンジルオキシ基を除去する過程及びカルボベンジルオキシ基が除去されたブチル－ポリ（リジン）１０－ヘマトポルフィリンを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 ブチル－ポリ（リジン）１０－ヘマトポルフィリンとシアリルラクトース（３ＳＬ）との接合過程及びそれを通じた混成化物質ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ヘマトポルフィリンを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 スクシニル化シリコンフタロシアニン（ＳＳｉＰＣ）の合成過程及びそれを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 ポリ－（Ｃｂｚ－リジン）１０－シリコンフタロシアニン［ｐｏｌｙ－（Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）１０－ｓｉｌｉｃｏｎ ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ］の合成過程及びそれを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 カルボベンジルオキシ基を除去する過程及びカルボベンジルオキシ基が除去されたブチル－ポリ（リジン）１０－シリコンフタロシアニンを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 ブチル－ポリ（リジン）１０－シリコンフタロシアニンとシアリルラクトース（３ＳＬ）との接合過程及びそれを通じた混成化物質ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－シリコンフタロシアニンを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 凍結乾燥して精製されたキトサン及びそれを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 キトサンとシアリルラクトース（３ＳＬ）との接合過程及びそれを通じた混成化物質キトサン－３’－シアリルラクトース［Ｃｈｉｔｏｓａｎ－（３’－Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔｏｓｅ）］を確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 キトサン－３’－シアリルラクトースとクロリン系光増感剤であるフェオホルビドａ（Ｐｈｅｏａ）とを結合させたキトサン－３ＳＬ－Ｐｈｅｏａ複合体及びそれを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 ３’－シアリルラクトース－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）－Ｐｈｅｏａ複合体の合成過程を示した図面である。 ３’－シアリルラクトース－ポリエチレングリコール－Ｐｈｅｏａ複合体を確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 プルラン（Ｐｕｌｌｕｌａｎ）－フェオホルビドａ［ＰＵ－Ｐｈｅｏａ］複合体の製造過程及びそれを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 プルラン－フェオホルビドａ［ＰＵ－Ｐｈｅｏａ］複合体のアミン化の過程及びそれを確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 プルラン－フェオホルビドａ［ＰＵ－Ｐｈｅｏａ］複合体とシアリルラクトース（３ＳＬ）との接合過程及びそれを通じた混成化物質３ＳＬ－プルラン－フェオホルビドａ［３ＳＬ－Ｐｕｌｌｕｌａｎ－Ｐｈｅｏａ］を確認した核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の分析結果である。 ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｃｅ６及びブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＰＰＩＸのヘリコバクター・ピロリ菌に対する抗菌活性を確認したＣＦＵ（Ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔｓ）の分析結果である。 ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＨＰＰ及びブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＳＳｉＰＣのヘリコバクター・ピロリ菌に対する抗菌活性を確認したＣＦＵの分析結果である。 キトサン－３ＳＬ－Ｐｈｅｏａ複合体のヘリコバクター・ピロリ菌に対する抗菌活性を確認したＣＦＵの分析結果である。 ３ＳＬ－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）－Ｐｈｅｏａ複合体のヘリコバクター・ピロリ菌に対する抗菌活性を確認した抑制領域（Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｚｏｎｅ）の分析結果である。 ３ＳＬ－プルラン－フェオホルビドａ複合体のヘリコバクター・ピロリ菌に対する抗菌活性を確認したＣＦＵの分析結果である。
以下、本発明をより詳細に説明する。
本発明は、光増感剤；シアリルラクトース；及び連結体として水溶性高分子からなることを特徴とするヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体を提供することができる。
前記高分子複合体は、水溶性高分子のアミン基またはヒドロキシ基と光増感剤のカルボキシ基とが結合するものである。
前記高分子複合体は、水溶性高分子のアミン基とシアリルラクトースのヒドロキシ基とが結合するものである。
より詳細には、シアリルラクトースグルコース環（ｇｌｕｃｏｓｅ ｒｉｎｇ）の中間体が有するアルデヒドと水溶性高分子のアミン基（ａｍｉｎｅｇｒｏｕｐ）とが結合して二重結合が形成され、この際、ＮａＣＮＢＨ３添加剤によって二重結合が還元されながら単一結合に変わって、最終的にシアリルラクトースのヒドロキシ基と水溶性高分子のアミン基とが結合するものである。
前記高分子複合体は、光増感剤のカルボキシ基とシアリルラクトースのヒドロキシ基とが水溶性高分子の互いに異なるアミン基とそれぞれ結合するものであるか、光増感剤のカルボキシ基と水溶性高分子のヒドロキシ基とが結合し、シアリルラクトースのヒドロキシ基と水溶性高分子のアミン基とが結合するものであるが、これに制限されるものではない。
前記水溶性高分子は、ポリリジン、ポリエチレングリコール、ポリエチレンアミン、プルラン、コンドロイチンサルフェート、ヒアルロン酸、キトサン、ポリカプロラクトン、及びポリジオキサンからなる群から選択されうる。
前記光増感剤は、クロリン類（ｃｈｌｏｒｉｎｓ）、フォフィリン類（ｐｈｏｐｈｙｒｉｎｓ）、及びフタロシアニン類（ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ）からなる群から選択され、より望ましくは、フェオホルビドａ（Ｐｈｅｏｐｈｏｒｂｉｄｅ ａ）である。
前記シアリルラクトースは、３’－シアリルラクトース（ｓｉａｌｙｌｌａｃｔｏｓｅ）である。
より詳細には、前記３’－シアリルラクトースは、ヘリコバクター・ピロリ表面にあるＳａｂＡと相互作用して結合が可能であって、ヘリコバクター・ピロリをより正確に認知することができる。
本発明の実施例によれば、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）のヘリコバクター・ピロリの不活性化の効果を確認するために、混成化高分子内のヘリコバクター・ピロリ認知能を示す３’－シアリルラクトース（３ＳＬ）または前記３’－シアリルラクトースの異性体である６’－シアリルラクトース（６ＳＬ）が結合された混成化高分子間のヘリコバクター・ピロリ２６６９５菌株に対する抗菌活性の効果を比較し、シアリルラクトースと競争的に相互作用するＰｒｅ３ＳＬ＋ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ実験群との比較を通じてＨＳＰの３’－シアリルラクトース（３ＳＬ）の認知能がヘリコバクター・ピロリ抗菌作用に及ぼす影響を確認した。
その結果、図１１のように、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）が処理されたヘリコバクター・ピロリ２６６９５菌株の場合、１．２Ｊ／ｃｍ２のレーザが照射された実験群は、陰性対照群と比較して、５×１０５～５×１０４ＣＦＵ／ｍｌのレベルのヘリコバクター・ピロリコロニー数が減少し、２．４Ｊ／ｃｍ２以上のレーザが照射された実験群では、ヘリコバクター・ピロリの成長がこれ以上確認されていない。
一方、同じ条件のレーザが照射されたブチル－ポリ（６ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ及びＰｒｅ３ＳＬ＋ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ対照群の場合、いずれもヘリコバクター・ピロリと正しく相互作用することができず、洗浄段階でほとんど洗い流され、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）と比較して、非常に低い抗菌活性を示すことを確認することができた。
前記結果からブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）のヘリコバクター・ピロリの不活性化の効果が非常に優れていることが確認され、あらゆるシアリルラクトースが同じ効果を示すものではないことが確認された。
前記ヘリコバクター・ピロリ菌株は、ヘリコバクター・ピロリ２６６９５、ヘリコバクター・ピロリＳＳ１、ヘリコバクター・ピロリ５１、及びヘリコバクター・ピロリ５２からなる群から選択されうる。
前記ヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体は、下記化学式１で表されるものである。
Figure 0007168770000001
前記化学式１において、Ｘは、１～１５の整数であり、より望ましくは、Ｘは、１０であるが、これに限定されるものではない。
本発明は、光増感剤；シアリルラクトース；及び連結体として水溶性高分子からなることを特徴とするヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体を含むヘリコバクター・ピロリによって誘導される胃疾患の光線力学治療用薬学組成物を提供することができる。
前記胃疾患は、十二指腸潰瘍、胃炎、胃潰瘍、胃下垂症、胃酸過多症、胃拡張症、無酸症、空気嚥下症、胃痙攣、幽門狭窄、胃軸捻転症、胃ポリープ、胃石、及び胃癌からなる群から選択されうる。
本発明の一具体例において、前記薬学組成物は、通常の方法によって注射剤、顆粒剤、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、坐剤、ゲル、懸濁剤、乳剤、点滴剤または液剤からなる群から選択された何れか１つの剤型を使用することができる。
本発明の他の具体例において、前記化学式１のように表示される高分子を含むヘリコバクター・ピロリ関連胃疾患の光線力学治療用薬学組成物の製造に通常の適切な担体、賦形剤、崩壊剤、甘味剤、被覆剤、膨張剤、潤滑剤、滑沢剤、香味剤、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤、及び潤滑剤からなる群から選択される１つ以上の添加剤をさらに含みうる。
具体的に、担体、賦形剤及び希釈剤は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、非晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱物油を使用し、経口投与のための固型製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固型製剤は、前記組成物に少なくとも１つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロースまたはラクトース、ゼラチンなどを混ぜて調剤することができる。また、単純な賦形剤の以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤も使用することができる。経口のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などがあり、よく使われる単純希釈剤である水、流動パラフィンの以外に、さまざまな賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれうる。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤などが含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステルなどが使われる。坐剤の基剤としては、ウイテプゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、トゥイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使われる。
本発明の一実施例によれば、前記薬学組成物は、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、腹腔内、胸骨内、経皮、鼻側内、吸入、局所、直腸、経口、眼球内または皮内経路を通じて通常の方式で対象体に投与することができる。
前記化学式１のように表示される高分子の望ましい投与量は、対象体の状態及び体重、疾患の種類及び程度、薬物形態、投与経路及び期間によって変わり、当業者によって適切に選択されうる。本発明の一実施例によれば、これに制限されるものではないが、１日投与量が０．０１～２００ｍｇ／ｋｇ、具体的には、０．１～２００ｍｇ／ｋｇ、より具体的には、０．１～１００ｍｇ／ｋｇである。投与は、一日一回投与することもでき、数回に分けて投与することもでき、これにより、本発明の範囲が制限されるものではない。
本発明において、前記「対象体」は、ヒトを含む哺乳動物であるが、これらに限定されるものではない。
また、本発明は、光増感剤；シアリルラクトース；及び連結体として水溶性高分子からなることを特徴とするヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体を含むヘリコバクター・ピロリ感染診断用組成物を提供することができる。
以下、本発明の理解を助けるために、実施例を挙げて詳細に説明する。但し、下記の実施例は、本発明の内容を例示するものであり、本発明の範囲が、下記の実施例に限定されるものではない。本発明の実施例は、当業者に本発明をより完全に説明するために提供されるものである。
＜実施例１＞ポリリジン－フェオホルビドａ光増感剤接合体とシアリルラクトース接合を利用した混成高分子の製造
１－１．ＮＣＡ－カルボベンジルオキシ－Ｌ－リジン（ＮＣＡ－Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）の合成
[反1］
Figure 0007168770000002
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）５０ｍｌが入れられている２００ｍｌの丸底フラスコにＮ６－カルボベンジルオキシ－Ｌ－リジン（Ｎ６－Ｃａｒｂｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙ－Ｌ－Ｌｙｓｉｎｅ）３ｇを入れ、完全に溶解させた後、前記丸底フラスコにトリホスゲン（Ｔｒｉｐｈｏｓｇｅｎｅ）３ｇを添加し、マグネチックバーを用いて混合しながら完全に溶解させた。
次いで、オイルバス（Ｏｉｌ ｂａｔｈ）で６０℃で４時間反応させた。以後、ガラスペーパー濾過紙（ｇｌａｓｓ ＆ ｐａｐｅｒ ｆｉｌｔｅｒ）を用いて濾過した後に９００ｍｌのヘキサン（Ｈｅｘａｎｅ）を一滴ずつ落として沈殿反応を進行した。次いで、ガラスペーパー濾過紙を用いてもう一度濾過した後、真空ポンプを用いて反応物から１２時間ヘキサンを完全に除去した。その結果、図２のように、約３ｇのＮＣＡ－カルボベンジルオキシ－Ｌ－リジン（ＮＣＡ－Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）を回収し、前記化合物を核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて確認された。
１－２．ポリ－カルボベンジルオキシ－Ｌ－リジン［Ｐｏｌｙ－Ｃａｒｂｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙ－Ｌ－Ｌｙｓｉｎｅ；ｐｏｌｙ（Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）ｘ］の合成
[反２］
Figure 0007168770000003
ポリ－カルボベンジルオキシ－Ｌ－リジンを作るために、反応開始剤としてブチル－アミン（Ｂｕｔｙｌ－ａｍｉｎｅ）９０μｌをＤＭＦ １０ｍｌに溶解させ、前記実施例１－１から回収されたＮＣＡ－カルボベンジルオキシ－Ｌ－リジン３ｇをＤＭＦ ２０ｍｌに溶解させた。前記ＮＣＡ－カルボベンジルオキシ－Ｌ－リジン溶液をブチル－アミン溶液に一滴ずつ落として反応を進行させ、４８時間反応させた後、３００ｍｌのエーテル（Ｅｔｈｅｒ）に一滴ずつ落として沈殿反応を進行させた。
沈殿反応溶液を５０ｍｌのファルコンチューブ（ｆａｌｃｏｎ ｔｕｂｅ）に分けて入れ、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した後に上澄み液を捨て、新たなエーテル溶液で５回繰り返して未反応物を除去した。
以後、真空ポンプを用いて１２時間エーテルを完全に除去し、反応物を回収し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて確認した。
その結果、図３のような化合物を得て、ｘは、約１０と確認された。
１－３．ポリリジン－フェオホルビドａ接合体［ｐｏｌｙ－（Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）１０－Ｐｈｅｏｐｈｏｒｂｉｄｅ ａ］の合成
[反３］
Figure 0007168770000004
フェオホルビドａ（Ｐｈｅｏａ）２５０ｍｇとＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）１０８ｍｇ、ＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド）６６ｍｇとをＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）１０ｍｌに溶解させ、４時間混合して活性化させた後、前記実施例１－２から回収されたブチル－ポリ（カルボベンジルオキシ－リジン）１０ １ｇを１０ｍｌのＤＭＦに溶解させた。
次いで、０．４５注射器フィルターを用いて、前記活性化されたフェオホルビドａ溶液からＤＣＵ（ジシクロヘキシル尿素）を除去した後、ブチル－ポリ（カルボベンジルオキシ－リジン）ｘ溶液を一滴ずつ添加した後、２４時間反応させた。
２４時間後、エーテルを添加して沈殿反応を進行させた後、５０ｍｌのファルコンチューブに移して入れ、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。遠心分離後に上澄み液を捨て、新たなエーテル溶液で再浮遊させ、前記過程を５回繰り返して未反応物を除去した。
以後、真空ポンプを用いて１２時間エーテルを完全に除去した後、反応物であるブチル－ポリ（Ｃｂｚ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａを回収し、図４のような核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）の結果を得た。
１－４．ポリ（リジン）１０－Ｐｈｅｏａ［ｐｏｌｙ（ｌｙｓｉｎｅ）１０－Ｐｈｅｏａ］の製造
[反４］
Figure 0007168770000005
 前記実施例１－３から回収されたブチル－ポリ（Ｃｂｚ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ接合体からカルボベンジルオキシ基（ｃａｒｂｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙ ｇｒｏｕｐ；Ｃｂｚ）を除去するために、５００ｍｇのブチル－ポリ（Ｃｂｚ－リジン）１０－ＰｈｅｏａをＴＦＡ ３ｍｌに溶解させ、酢酸３ｍｌにＨＢｒを３３％の濃度で溶解させた後、２０ｍｌのバイアルに入れ、３０分間混合した。
前記混合液にエーテル／エタノール溶液（５０／５０ｖｏｌ ％）１００ｍｌを添加して沈殿反応を行った後、５０ｍｌのファルコンチューブに移して入れ、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した後、上澄み液を捨て、新たなエーテル／エタノール溶液（５０／５０ｖｏｌ ％）を添加して同じ過程を行った。
前記過程を５回繰り返して未反応物を除去し、真空ポンプを用いて１２時間エーテル／エタノール溶液を完全に除去した後、反応物を回収した。
その結果、図５のような核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を示すブチル－ポリ（リジン）１０－Ｐｈｅｏａ接合体を確認した。
１－５．ポリリジン－フェオホルビドａ接合体とシアリルラクトース接合を通じた混成化高分子の製造
[反５]
Figure 0007168770000006
前記１－４から回収されたブチル－ポリ（リジン）Ｘ－Ｐｈｅｏａ ３００ｍｇをアセテート緩衝溶液１０ｍｌ（ｐＨ５．５）に溶解させた。３’－シアリルラクトース（３ＳＬ）１５０ｍｇ（ブチル－ポリ（リジン）１０－Ｐｈｅｏａモル数の１．５倍）を５ｍｌのアセテート緩衝溶液（ｐＨ５．５）に溶解させ、ＮａＣＮＢＨ３ １５ｍｇ（ブチル－ポリ（リジン）１０－Ｐｈｅｏａモル数の１．５倍）をＤＭＳＯに１ｍｌに溶解させて準備した。
次いで、５０ｍｌの丸底フラスコに前記溶液を添加して混合した後、２４時間反応させた。以後、反応溶液に蒸留水を混合し、透析膜（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔｏｆｆ ｓｉｚｅ １０００ Ｄａ）を用いて７２時間１次蒸留水で透析した。透析後、反応物を７２時間凍結乾燥して、粉末形態の混成化高分子ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ｐｈｅｏａを回収し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図６のように確認した。
＜実施例２＞ポリリジン－クロリンｅ６光増感剤接合体とシアリルラクトース接合を利用した混成高分子の製造
２－１．ブチル－ポリ－（Ｃｂｓ－リジン）１０－クロリンｅ６接合体［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ－（Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）１０－Ｃｈｌｏｒｉｎ ｅ６］の製造
前記実施例１－３のような過程でブチル－ポリ－（Ｃｂｓ－リジン）１０－クロリンｅ６［Ｃｅ６］接合体を製造し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図１６のように確認した。
２－２．ブチル－ポリ（リジン）１０－Ｃｅ６［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ（Ｌｙｓｉｎｅ）１０－Ｃｅ６］の製造
前記実施例２－１から回収されたブチル－ポリ－（Ｃｂｓ－リジン）１０－クロリンｅ６接合体からカルボベンジルオキシ基（Ｃｂｚ）を除去するために、実施例１－４のような過程を行って、ブチル－ポリ（リジン）１０－Ｃｅ６接合体を回収し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を行って、図１７のように確認した。
２－３．ポリ（リジン）１０－Ｃｅ６とシアリルラクトースとの接合を利用した混成高分子の製造
前記実施例１－５のような過程で実施例２－２から回収されたブチル－ポリ（リジン）１０－Ｃｅ６にシアリルラクトースを接合させ、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｃｅ６［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ（３ＳＬ－Ｌｙｓｉｎｅ）１０－Ｃｅ６］混成高分子を製造し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を用いて図１８のように確認した。
＜実施例３＞ポリリジン－プロトポルフィリン光増感剤接合体とシアリルラクトース接合を利用した混成高分子の製造
３－１．ポリリジン－プロトポルフィリン接合体［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ－（Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）１０－Ｐｒｏｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎ ＩＸ（ＰＰＩＸ）］の合成
前記実施例１－３のような過程でブチル－ポリ－（Ｃｂｚ－リジン）１０－ＰＰＩＸ［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ－（Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）１０－ＰＰＩＸ］接合体を製造し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図１９のように確認した。
３－２．ブチル－ポリ（リジン）１０－ＰＰＩＸ［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ（Ｌｙｓｉｎｅ）１０－ＰＰＩＸ］の製造
実施例１－４のような過程を行って、前記実施例３－１－１から回収されたブチル－ポリ－（Ｃｂｚ－リジン）１０－ＰＰＩＸ接合体からカルボベンジルオキシ基（Ｃｂｚ）を除去して、ブチル－ポリ（リジン）１０－ＰＰＩＸ接合体を回収し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を用いて図２０のように確認した。
３－３．ブチル－ポリ（リジン）１０－ＰＰＩＸ接合体とシアリルラクトース（３ＳＬ）の接合を利用した混成高分子の製造
実施例１－１－５のような過程で前記実施例３－１－２から回収されたブチル－ポリ（リジン）１０－ＰＰＩＸ接合体にシアリルラクトースを接合させ、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図２１のように確認した。
＜実施例４＞ポリリジン－ヘマトポルフィリン光増感剤接合体とシアリルラクトース接合を利用した混成高分子の製造
４－１．ポリリジン－ヘマトポルフィリン接合体［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ－（Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）１０－Ｈｅｍａｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎ（ＨＰＰ）］の合成
前記実施例１－３のような過程でブチル－ポリ－（Ｃｂｚ－リジン）１０－ヘマトポルフィリン［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ－（Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）１０－ＨＰＰ］接合体を製造し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図２２のように確認した。
４－２．ブチル－ポリ（リジン）１０－ヘマトポルフィリン［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ（Ｌｙｓｉｎｅ）１０－ＨＰＰ］接合体の製造
実施例１－４のような過程を行って、前記実施例３－２－１から回収されたブチル－ポリ－（Ｃｂｚ－リジン）１０－ヘマトポルフィリン接合体からカルボベンジルオキシ基（Ｃｂｚ）を除去して、ブチル－ポリ（リジン）１０－ＨＰＰ接合体を製造し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図２３のように確認した。
４－３．ブチル－ポリ（リジン）１０－ＨＰＰ接合体とシアリルラクトース（３ＳＬ）の接合を利用した混成高分子の製造
実施例１－５のような過程で前記実施例３－２－２から回収されたブチル－ポリ（リジン）１０－ＨＰＰ接合体にシアリルラクトースを接合させ、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図２４のように確認した。
＜実施例５＞ポリリジン－フタロシアニン接合体とシアリルラクトース接合を利用した混成高分子の製造
５－１．スクシニル化シリコンフタロシアニンの合成
シリコンフタロシアニン（Ｓｉｌｉｃｏｎ ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ：ＳｉＰＣ）２００ｍｇを１００ｍｌの反応器に入れ、ピリジン（ｐｙｒｉｄｉｎｅ）１０ｍｌに溶解させた。以後、無水コハク酸（Ｓｕｃｃｉｎｙｌ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）３４８ｍｇとＤＭＡＰ（４－ジメチルアミノピリジン）２１３ｍｇとをピリジン５ｍｌに溶解させ、ＳｉＰＣ溶液に添加した後、１００℃で２４時間窒素パージさせながら反応させた。ピリジンをいずれも蒸発させた後、固形の反応物をエタノールに溶かし、低温の蒸留水に沈殿反応を進行させた。５０ｍｌのファルコンチューブに移して入れた後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上澄み液を捨て、新たな蒸留水で前記過程を３回繰り返して未反応物を除去した。以後、７２時間凍結乾燥してスクシニル化されたＳｉＰＣ（ＳＳｉＰＣ）を回収した。その結果、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図２５のように確認した。
５－２．ポリリジン－フタロシアニン接合体［Ｂｕｔｙｌ－Ｐｏｌｙ－（Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）１０－ｓｉｌｉｃｏｎ ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ（ＳｉＰＣ）］の合成
前記実施例４－１から回収されたスクシニル化されたＳｉＰＣ（ＳＳｉＰＣ）を用いて実施例１－３のような過程でブチル－ポリ－（Ｃｂｚ－リジン）１０－フタロシアニン接合体［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ－（Ｃｂｚ－Ｌｙｓｉｎｅ）１０－ＳｉＰＣ］を合成し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図２６のように確認した。
５－３．ブチル－ポリ（リジン）１０－ＳｉＰＣ［Ｂｕｔｙｌ－ｐｏｌｙ（ｌｙｓｉｎｅ）１０－ＳｉＰＣ］の製造
実施例１－４のような過程を行って、前記実施例４－２から回収されたブチル－ポリ－（Ｃｂｚ－リジン）１０－フタロシアニン接合体からカルボベンジルオキシ基（Ｃｂｚ）を除去して、ブチル－ポリ（リジン）１０－ＳｉＰＣ接合体を製造し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図２７のように確認した。
５－４．ブチル－ポリ（リジン）１０－ＳｉＰＣ接合体とシアリルラクトース（３ＳＬ）の接合を利用した混成高分子の製造
実施例１－５のような過程で前記実施例４－３から回収されたブチル－ポリ（リジン）１０－ＳｉＰＣ接合体にシアリルラクトースを接合させ、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図２８のように確認した。
＜実施例６＞キトサンに基づいて光線力学治療が可能なヘリコバクター・ピロリ認知用複合体の製造
６－１．キトサン（Ｃｈｉｔｏｓａｎ；Ｌｏｗ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ、ＬＭ）精製
キトサン（ＬＭ）６７１ｍｇをウェイテイング（ｗｅｉｇｈｉｎｇ）して、１％ 酢酸溶液５０ｍｌに１２時間撹拌させて完全に溶解させた。完壁に溶解されたキトサン溶液を透析膜（１２ｋ～１４ｋ）に移して入れ、７２時間透析を進行した後、凍結乾燥を通じて精製されたキトサンを回収し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図２９のように確認した。
６－２．キトサン－（３’－シアリルラクトース）［Ｃｈｉｔｏｓａｎ－（３’－Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔｏｓｅ）］接合体の合成
キトサンにヘリコバクター認知用３’－シアリルラクトース（３ＳＬ）を接合するために、精製されたキトサン９０ｍｇをウェイテイングした後、２ｍｌの１％ 酢酸溶液に撹拌して溶解させ、１次蒸留水を４ｍｌを追加して混合した後、溶液のｐＨを確認（ｐＨ４～ｐＨ５）した。３ＳＬとＮａＢＨ３ＣＮとをそれぞれウェイテイングして、５ｍｌのバイアルにそれぞれ１ｍｌの１次蒸留水に溶解させ、オイルバス（５５℃）ｄｐに入れ、撹拌しながら４８時間反応させた。以後、透析膜（１２ｋ～１４ｋ）に溶液を移し、３日間透析進行後、凍結乾燥させ、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図３０のように確認した。
６－３．キトサン－シアリルラクトース－クロリン系光増感剤複合体の合成
凍結乾燥を通じて回収されたキトサン－シアリルラクトース接合体（Ｃｈｉｔｏｓａｎ－３ＳＬ）とクロリン系光増感剤であるフェオホルビドａ（Ｐｈｅｏａ）との複合体の形成のために、まず、Ｐｈｅｏａ、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）及びＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド）を１：１．２：１．２の比率で４時間常温でＤＭＳＯ ５ｍｌで溶かして反応させた。４時間後に３０００ｒｐｍで５分間遠心分離を通じて発生した反応副産物ＤＣＵ（ジシクロヘキシル尿素）を除去した。
前記Ｐｈｅｏａ溶液と蒸留水２０ｍｌに溶かしたキトサン－３ＳＬ接合体３００ｍｇとを混合した後、２４時間常温で反応させ、３日間透析（１２ｋ～１４ｋ）した。以後、Ｃｏ－ｓｏｌｖｅｎｔで沈殿された過度な遊離Ｐｈｅｏａを３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して未反応物を除去した後、凍結乾燥させてキトサン－３ＳＬ－Ｐｈｅｏａを回収し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図３１のように確認した。
＜実施例７＞ＰＥＧに基づいて光線力学治療が可能なヘリコバクター・ピロリ認知用複合体の製造
３’－シアリルラクトース－ポリエチレングリコール－フェオホルビドａ［３ＳＬ－ＰＥＧ－Ｐｈｅｏａ］複合体の製造
図３２のような過程でポリエチレングリコール（ＰＥＧ）６ｋにクロリン系光増感剤であるＰｈｅｏａを接合するために、まず、Ｐｈｅｏａ、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）及びＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド）を１：１．２：１．２の比率で４時間常温でＤＭＦ ５ｍｌで溶かし、４時間後に３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して発生した反応副産物ＤＣＵ（ジシクロヘキシル尿素）を除去した。前記ＰＥＧをＰｈｅｏａと１：１．２の比率で反応させた後、疎水性カラム（ＬＨ２０）を用いてＰＥＧ－Ｐｈｅｏａを精製した。
精製されたＰＥＧ－Ｐｈｅｏａと３ＳＬとを１：１．２の比率で１％ 酢酸（ｐＨ５．２）に溶かして、６０℃で２４時間反応させた後、透析（１２ｋ～１４ｋ）して未反応物を除去し、凍結乾燥を通じて最終３ＳＬ－ＰＥＧ－Ｐｈｅｏａ複合体を回収し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図３３のように確認した。
＜実施例８＞プルランに基づいて光線力学治療が可能なヘリコバクター・ピロリ認知用複合体の製造
８－１．プルラン－フェオホルビドａ［ＰＵ－Ｐｈｅｏａ］複合体の製造
ＰＵ－Ｐｈｅｏａ接合体を製造するために、ＰＵ（５０ｍｇ）及びＰｈｅｏａ（１０ｍｇ）をＤＭＳＯ（１０ｍｌ）にそれぞれ溶解させた。触媒及びカップリング試薬としてＤＭＡＰ及びＤＣＣをそれぞれ１：１：１．５のｍｏｌ比でＰｈｅｏａ溶液に添加した。４時間後、Ｐｈｅｏ Ａ溶液をＰＵ溶液に滴加し、２日間撹拌した。
反応していない物質は、３日間１２，０００～１４，０００ＭＷＣＯの膜を使用して透析して除去し、精製されたＰＵ－Ｐｈｅｏａ接合体を凍結乾燥させた後、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）を通じて図３４のように確認した。
８－２．プルラン－フェオホルビドａ［ＰＵ－Ｐｈｅｏａ］複合体のアミン化
１００ｍｌの反応器にプルラン－フェオホルビドａ複合体を（ＰＵ－Ｐｈｅｏａ）５００ｍｇをＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）１０ｍｌに溶解させ、ピリジン１００μｌを添加した。以後、フード内で塩化チオニル（ＳＯＣｌ２）９０μｌを添加し、３時間反応させた。この際、反応器をゴム栓で塞いだ後、針２本を刺した。
反応後、反応物をエーテルに添加して沈殿反応を進行させた後、５０ｍｌのファルコンチューブに移して入れ、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。遠心分離後に上澄み液を捨て、新たなエーテル溶媒で再浮遊させ、前記過程を３回繰り返して未反応物を除去した。以後、真空ポンプを用いて１２時間エーテルを完全に除去した後、反応物を回収した。回収した反応物をＤＭＦ １０ｍｌに溶解させた後、ＤＭＦ １５ｍｌにエチレンジアミン（Ｃ２Ｈ４（ＮＨ２）２）１ｍｌを添加した。次いで、反応物溶液にエチレンジアミン溶液を一滴ずつ添加した後、２時間反応させた。反応後、反応物をエーテルに添加して沈殿反応を進行させた後、５０ｍｌのファルコンチューブに移して入れ、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。遠心分離後に上澄み液を捨て、新たなエーテル溶液で同じ過程を行った。以後、真空ポンプを用いて１２時間エーテルを完全に除去した後、反応物を回収し、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）分析を進行して、図３５のように確認した。
８－３．３ＳＬ－プルラン－フェオホルビドａ［３ＳＬ－ＰＵ－Ｐｈｅｏａ］複合体の製造
精製したアミン－ＰＵ－Ｐｈｅｏａと３ＳＬとを１：１．２の比率でそれぞれＤＭＳＯと１％ 酢酸（ｐＨ５．２）とに溶解させた。ＮａＣＮＢＨ３（ａｍｉｎｅ－ＰＵ－ｐｈｅｏａモル数の１．５倍）をＤＭＳＯに溶解させ、６０℃で２４時間反応させた後、透析膜（ＭＷＣＯ：１２ｋ～１４ｋ）を利用した透析を進行して未反応物を除去し、凍結乾燥させて、最終３ＳＬ－ＰＥＧ－Ｐｈｅｏａ複合体を回収した。回収された複合体を核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ－ＮＭＲ）で分析して、図３６のように確認した。
＜実験例１＞ヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化高分子の一重項酸素（ＳＯＧ）の生成能の確認
実施例１のように製造されたヘリコバクター・ピロリ認知能混成化過分子が水上でレーザ照射によって一重項酸素を生成するかを確認した。
実施例１で製造した混成化高分子ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＰｈｅｏａとフェオホルビドａとをＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを用いて１μｇ／ｍＬの濃度で希釈した後、ＳＯＳＧ（ｓｉｎｇｌｅｔ ｏｘｙｇｅｎ ｓｅｎｓｏｒｇｒｅｅｎ）溶液と１：１（ｖ／ｖ）に混合し、２０ｍＷの強度のレーザを２０秒ずつ照射し、蛍光分光光度計を用いて一重項酸素（ＳＯＧ）の生成能を確認した。
その結果、図７のように、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａは、４００秒までレーザを照射した時、時間経過に比例して蛍光強度値が増加して、一重項酸素の生成が増加することが確認された一方、フェオホルビドａは、レーザを照射しても蛍光強度値がほとんど増加しなかった。
前記結果から実施例１で製造した混成化高分子ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａは、水上で難溶性を有するフェオホルビドａと比較して、非常に優れた一重項酸素の生成能を有することが確認されることによって、従来のフェオホルビドａが有した難溶性問題を効果的に解決することができると判断される。
＜実験例２＞共焦点顕微鏡を通じたヘリコバクター・ピロリ認知能混成化高分子の相互作用及び不活性化の確認
実施例１のように合成されたヘリコバクター・ピロリ認知能混成化高分子が生体外でヘリコバクター・ピロリと相互作用し、レーザ照射によってヘリコバクター・ピロリの不活性化を誘導できるか否かを確認した。
実施例１で製造した混成化高分子であるブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａをフェオホルビドａ １μｇ／ｍｌの基準にＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを用いて定量後、蒸留水を用いて希釈した。
ヘリコバクター・ピロリ（２６６９５菌株）１×１０６ＣＦＵ／ｍｌにブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ溶液を混合して、３７℃、２時間インキュベーションした。
対照群として３’－シアリルラクトース（３’－Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔｏｓｅ；３ＳＬ）５ｍｇ／ｍｌをあらかじめ３０分間ヘリコバクター・ピロリ １ｍｌ（１×１０６ＣＦＵ／ｍｌ）に添加してインキュベーションした後、遠心分離（４０００ｒｐｍ、２分）して上澄み液を除去した。以後、蒸留水で再分散させ、前記過程を２回繰り返し行い、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａを処理して、３７℃、２時間インキュベーションした。また、対照群としてヘリコバクター・ピロリ認知能を有さないブチル－ポリ（Ｃｂｚ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（Ｃｂｚ＝ｃａｒｂｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙ、ｎＨＳＰと表記）を３７℃、２時間インキュベーションした。
前記インキュベーション後、各実験群を遠心分離（４００ｒｐｍ、２分）して上澄み液を除去し、蒸留水（Ｄ．Ｗ）で再分散させ、前記過程を２回繰り返した。以後、５０ｍＷのレーザ強度で合計１０Ｊ／ｃｍ２のレーザを照射した。
また、ヘリコバクター・ピロリをＳＹＴＯ ９とヨウ化プロピジウム（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ）とを用いて染色し、ＳＹＴＯ ９（Ｇｒｅｅｎ、Ｅｘ／Ｅｍ ４８５／４９８）、ヨウ化プロピジウム（Ｒｅｄ、Ｅｘ／Ｅｍ ５３５／６１７）、Ｃｙ５（ｐｕｐｐｌｅ、Ｅｘ／Ｅｍ ６５０／６７０）の条件で蛍光イメージを共焦点顕微鏡で観察した。
その結果、図８のように、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）が処理されたヘリコバクター・ピロリ群では、正常ヘリコバクター・ピロリ細胞で表われるＳＹＴＯ ９（Ｇｒｅｅｎ）とＨＳＰのフェオホルビドａのＣｙ５（ｐｕｐｐｌｅ）との蛍光がほとんど一致することが確認されることによって、ＨＳＰがヘリコバクター・ピロリと相互作用することが確認された。
一方、ブチル－（Ｃｂｚ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ｎＨＳＰ）が処理されたヘリコバクター・ピロリ群では、ＳＹＴＯ ９（Ｇｒｅｅｎ）蛍光が表われたが、フェオホルビドａのＣｙ５（ｐｕｐｐｌｅ）蛍光が表われないことが確認されることによって、ｎＨＳＰは、ヘリコバクター・ピロリと相互作用しないことが確認された。
また、３’－シアリルラクトース（３ＳＬ）を３０分間前処理した後、ＨＳＰ処理したヘリコバクター・ピロリ群（Ｐｒｅ３＋ＨＳＰ）では、正常ヘリコバクター・ピロリ細胞で表われるＳＹＴＯ ９（Ｇｒｅｅｎ）が確認されたが、フェオホルビドａのＣｙ５（ｐｕｐｐｌｅ）蛍光が表われないことが確認されることによって、前記ＨＳＰが単独処理された場合とは異なってヘリコバクター・ピロリとＨＳＰとが相互作用しないことが確認された。
一方、レーザ照射によるヘリコバクター・ピロリの不活性化能を確認した結果、図８のように、ＨＳＰが処理されたヘリコバクター・ピロリ群にレーザを照射［Ｌａｓｅｒ（＋）］した場合、ＨＳＰとヘリコバクター・ピロリとの相互作用後、レーザ照射によってフェオホルビドａから発生した一重項酸素によるヘリコバクター・ピロリ細胞膜の損傷を示すヨウ化プロピジウム（Ｒｅｄ）蛍光が確認された。
また、他の実験群では、レーザ照射有無によって正常なヘリコバクター・ピロリで表われるＳＹＴＯ ９（Ｇｒｅｅｎ）蛍光が表われた一方、ヨウ化プロピジウム（Ｒｅｄ）蛍光は確認されていない。
前記結果からブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）は、ヘリコバクター・ピロリを正確に認知して相互作用し、レーザ照射時に、相互作用されたＨＳＰの光増感剤で発生する一重項酸素を通じてヘリコバクター・ピロリを効果的に不活性化させることが確認された。
＜実験例３＞ヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化高分子の細胞毒性の確認
前記実施例１のように合成された混成化高分子ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）の細胞毒性を確認するために、ＡＧＳ細胞（ヒト胃癌細胞）を９６ウェルプレートに５×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で１００μｌずつ各ウェルに分注し、２４時間３７℃、５％ ＣＯ２条件で培養した。２４時間後、各ウェルに前記実施例１で製造した認知能混成化高分子を０．５～５０μｇ／ｍＬの濃度で処理し、４時間３７℃、５％ ＣＯ２条件で反応させ、ＭＴＴ試験法を行った後、蛍光強度を５７０ｎｍでマルチリーダー機（Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１ Ｍｕｌｔｉ－ｍｏｄｅ Ｒｅａｄｅｒ、Ｂｉｏｔｅｋ）を用いて確認し、フェオホルビドａのみ処理され、対照群と比較して細胞生存率を計算した。
その結果、図９のように、ＨＳＰは、フェオホルビドａ ０．５μｇ／ｍｌの以下の濃度で細胞毒性をほとんど表わさないことを確認することができた。
＜実験例４＞ヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化高分子の細胞光毒性の確認
前記実施例１のように合成された混成化高分子ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）が抗菌活性を示す濃度及びレーザ強度で細胞毒性を確認した。
２４ウェルプレートにＡＧＳ細胞を２×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で１ｍｌずつ各ウェルに分注し、２４時間３７℃、５％ ＣＯ２条件で培養した。２４時間後、ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを用いて、各ウェルに高分子ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）をフェオホルビドａ基準０．５μｇ／ｍＬの濃度で無血清ＲＰＭＩ培地を用いて処理し、抗菌活性実験時に効能を表わした３０分間、３７℃、５％ ＣＯ２条件で反応させた。
反応後、５０ｍＷの強度のレーザを用いて０～４．０Ｊ／ｃｍ２の範囲でレーザを照射し、ＭＴＴアッセイを行って、細胞生存率を対照群と比較して計算した。
対照群は、前記高分子と同じ濃度でフェオホルビドａのみを処理し、ＭＴＴ溶液処理後、表われる蛍光強度を５７０ｎｍでマルチリーダー機（Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１ Ｍｕｌｔｉ－ｍｏｄｅ Ｒｅａｄｅｒ、Ｂｉｏｔｅｋ）を用いて確認した。
その結果、図１０のように、０．５μｇ／ｍＬの濃度のフェオホルビドａを処理して３０分間インキュベーションした後、レーザを照射した対照群では、０．８Ｊ／ｃｍ２のレーザ強度から細胞毒性が表われ、レーザ照射量の増加によって、４．０Ｊ／ｃｍ２では、約５０％レベルの細胞毒性が確認された。
一方、混成化高分子ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）は、２．４Ｊ／ｃｍ２のレーザ照射までは、細胞毒性がほとんど表われず、３．２Ｊ／ｃｍ２のレーザ照射から若干の細胞毒性が確認されて、４．０Ｊ／ｃｍ２では、約３０％レベルの細胞毒性が確認された。
前記結果からブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａは、フェオホルビドａよりも低い細胞毒性が表われることが確認された。
＜実験例５＞ヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化高分子の細胞吸収の確認
実施例１から製造された混成化高分子ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）が細胞内に吸収されるレベルを確認した。
ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａとフェオホルビドａとの濃度を同様にフェオホルビドａ基準０．５ｍＬの濃度で合わせ、ＡＧＳ細胞にそれぞれ処理して、３６℃で３０分間インキュベーションした。インキュベーション後、ＤＰＢＳで２回洗浄し、トリプシン処理して細胞を収集した後、遠心分離（１５００ｒｐｍ、３分）して上澄み液を除去した。
次いで、ＡＧＳ細胞を１×１０５ｃｅｌｌ／ｍＬの濃度でＤＰＢＳ １ｍｌに分散させ、ＦＡＣＳを用いてＡＧＳ細胞に吸収されたフェオホルビドａとブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａとの細胞吸収程度をフェオホルビドａ蛍光強度で確認した。
その結果、図１３のように、フェオホルビドａは、対照群と比較して７×１０２程度さらに多く細胞内に吸収されることが確認された一方、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａは、対照群とほぼ類似したレベルのフェオホルビドａ蛍光強度を表わした。
＜実験例６＞ヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化高分子のヘリコバクター・ピロリの抗菌活性の確認
前記実施例１のように合成された混成化高分子ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）のヘリコバクター・ピロリの不活性化の効果を確認した。
また、前記混成化高分子内のヘリコバクター・ピロリ認知能を示す３’－シアリルラクトース（３ＳＬ）または前記３’－シアリルラクトースの異性体である６’－シアリルラクトース（６ＳＬ）が結合された混成化高分子間の抗菌活性の効果を比較し、シアリルラクトースと競争的に相互作用するＰｒｅ３ＳＬ＋ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ実験群との比較を通じてＨＳＰの３’－シアリルラクトース（３ＳＬ）の認知能がヘリコバクター・ピロリ抗菌作用に及ぼす影響を確認した。
ヘリコバクター・ピロリ２６６９５菌株（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ ｓｔｒａｉｎ ２６６９５）とヘリコバクター・ピロリＳＳ１菌株（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ ｓｔｒａｉｎ ＳＳ１）とをヘリコバクター・ピロリ菌株銀行から分譲された。前記菌株を１０％ ウマ血清（Ｗｅｌｇｅｎｅ、Ｋｏｒｅａ）を添加したブルセラブロス（ｂｒｕｃｅｌｌａｂｒｏｔｈ；Ｄｉｆｃｏ、ＵＳＡ；ｂａｃｔｏ ｔｒｙｐｔｏｎｅ １０ｇ、ｂａｃｔｏ ｐｅｐｔａｍｉｎ １０ｇ、ｂａｃｔｏ ｄｅｘｔｒｏｓｅ １ｇ、ｂａｃｔｏ ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ２ｇ、ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ５ｇ、ｓｏｄｉｕｍ ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ ０．１ｇ）を用いて、１０％のＣＯ２、９５％以上の湿度及び３７℃のインキュベーターで嫌気性条件を保持して培養した。
それぞれ培養されたヘリコバクター・ピロリ菌株１ｍｌ（５×１０５ＣＦＵ／ｍ）にブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（フェオホルビドａ基準０．５μｇ／ｍＬの濃度）を添加して混合し、３７℃で３０分間インキュベーションした。インキュベーション後、遠心分離（４０００ｒｐｍ、２分）して上澄み液を除去し、蒸留水（Ｄ．Ｗ）１ｍｌを用いて分散させ、前記過程２回繰り返してヘリコバクター・ピロリと反応しないブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａを除去し、ＣＦＵアッセイを行って、抗菌活性を評価した。
６’－シアリルラクトース（６ＳＬ）が結合された混成化高分子ブチル－ポリ（６ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａも、前記と同じ方法で抗菌活性を評価した。
また、３’－シアリルラクトース（３ＳＬ）との競争的認知能の阻害効果を確認するために、３ＳＬ ５ｍｇ／ｍｌを蒸留水に溶解させて、ヘリコバクター・ピロリと３７℃、３０分間事前インキュベーションを進行した。インキュベーション後、遠心分離（４０００ｒｐｍ、２分）して上澄み液を除去し、１ｍｌの蒸留水を用いて分散させ、この過程２回繰り返した後、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａを添加して、３７℃、３０分間インキュベーションした。
インキュベーション後、遠心分離（４０００ｒｐｍ、２分）して上澄み液を除去し、１ｍｌの蒸留水を用いて分散させ、前記過程２回繰り返してヘリコバクター・ピロリと反応していないブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａを除去した。以後、ヘリコバクター・ピロリ２６６９５菌株実験群に５０ｍＷの強度で０、２４、４８、７２及び９６秒間レーザ照射した後、ＣＦＵアッセイを行い、ヘリコバクター・ピロリＳＳ１菌株実験群には、５０ｍＷの強度で０、１２、４８及び６０秒間レーザを照射してＣＦＵアッセイを行った。
その結果、図１１のように、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）が処理されたヘリコバクター・ピロリ２６６９５菌株の場合、１．２Ｊ／ｃｍ２のレーザが照射された実験群は、陰性対照群と比較して５×１０５～５×１０４ＣＦＵ／ｍｌのレベルのヘリコバクター・ピロリコロニー数が減少し、２．４Ｊ／ｃｍ２以上のレーザが照射された実験群では、ヘリコバクター・ピロリの成長がこれ以上確認されていない。
一方、同じ条件のレーザが照射されたブチル－ポリ（６ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ及びＰｒｅ３ＳＬ＋ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ対照群の場合、いずれもヘリコバクター・ピロリと正しく相互作用することができず、洗浄段階でほとんど洗い流され、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）と比較して、非常に低い抗菌活性を示すことを確認することができた。
また、図１２のように、ヘリコバクター・ピロリＳＳ１菌株の場合、陰性対照群（ＮＣ）とレーザのみ照射された実験群と比較して、混成化高分子ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）が処理された実験群では、１．２Ｊ／ｃｍ２のレーザが照射された実験群からＣＦＵが減少して、２．４Ｊ／ｃｍ２が照射された実験群では、ヘリコバクター・ピロリコロニーが表われず、抗菌活性を示すレーザ照射量と確認された。一方、ブチル－ポリ（６ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ及びＰｒｅ３ＳＬ＋ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ対照群では、陰性対照群と類似したレベルのヘリコバクター・ピロリ個体数が保持されることが確認された。
前記結果から２．４Ｊ／ｃｍ２の強度でレーザが照射される場合、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａが非常に優れたヘリコバクター・ピロリの抗菌活性を示すことが確認され、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）は、ブチル－ポリ（６ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ及びＰｒｅ３ＳＬ＋ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ対照群よりもヘリコバクター・ピロリと非常に優れているように相互作用することが確認された。
＜実験例７＞共焦点顕微鏡分析を利用したヘリコバクター・ピロリ認知能混成化物質の相互作用及び不活性化の確認
実施例１のように合成されたヘリコバクター・ピロリ認知能混成化高分子が生体外でヘリコバクター・ピロリＳＳ１菌株と相互作用し、レーザ照射によってヘリコバクター・ピロリの不活性化を誘導できるか否かを確認した。
前記実施例１で製造した混成化高分子ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ＨＳＰ）をフェオホルビドａ（１μｇ／ｍｌ）基準にＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを用いて定量後、蒸留水を用いて希釈し、ヘリコバクター・ピロリＳＳ１菌株１×１０６ＣＦＵ／ｍｌと混合して、３７℃、２時間インキュベーションした。
また、ヘリコバクター・ピロリ認知能を有さないブチル－ポリ（６ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａを前記と同じ過程でヘリコバクター・ピロリＳＳ１菌株と混合して、３７℃、２時間インキュベーションした後、前記対照群を６ＳＬ－ＬＲＰと表記した。
さらに他の対照群として３’－シアリルラクトース（Ｐｒｅ３ＳＬ）５ｍｇ／ｍｌをあらかじめ３０分間ヘリコバクター・ピロリＳＳ１菌株１ｍｌ（１×１０６ＣＦＵ／ｍｌ）とインキュベーションした後、遠心分離（４０００ｒｐｍ、２分）して上澄み液を除去した。以後、Ｄ．Ｗで再分散させ、前記過程を２回繰り返し実施した。以後、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａを処理し、３７℃、２時間インキュベーションし、前記対照群を３ＳＬ－ＬＲＨＳＰと表記した。
各実験群のインキュベーション終了後、それぞれの実験群を遠心分離（４０００ｒｐｍ、２分）した後、上澄み液を除去した。以後、Ｄ．Ｗで再分散させ、前記過程を２回繰り返した。
次いで、５０ｍＷのレーザ強度で合計１０Ｊ／ｃｍ２のレーザを照射し、ヘリコバクター・ピロリをＳＹＴＯ ９とヨウ化プロピジウムとで染色した後、ＳＹＴＯ ９（Ｇｒｅｅｎ、Ｅｘ／Ｅｍ ４８５／４９８）、ヨウ化プロピジウム（Ｒｅｄ、Ｅｘ／Ｅｍ ５３５／６１７）、Ｃｙ５（ｐｕｐｐｌｅ、Ｅｘ／Ｅｍ ６５０／６７０）の条件で蛍光イメージを確認した。
その結果、図１４のように、ＨＳＰの場合、正常なヘリコバクター・ピロリで表われるＳＹＴＯ ９（Ｇｒｅｅｎ）の蛍光と３ＳＬ－ＬＲＨＳＰのフェオホルビドａのＣｙ５（ｐｕｐｐｌｅ）蛍光とがほとんど一致することが確認されることによって、３ＳＬ－ＬＲＨＳＰがヘリコバクター・ピロリと相互作用することを確認した。一方、ブチル－ポリ（６ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａが処理された実験群（６ＳＬ－ＬＲＰ）の場合には、正常なヘリコバクター・ピロリでは、ＳＹＴＯ ９（Ｇｒｅｅｎ）の蛍光を示すが、ＨＳＰのフェオホルビドａのＣｙ５（ｐｕｐｐｌｅ）蛍光が表われず、さらに他の実験群として３’－シアリルラクトースを３０分間前処理した後、ＨＳＰを処理した実験群（Ｐｒｅ３ＳＬ＋ＬＲＨＳＰ）も、正常なヘリコバクター・ピロリでは、ＳＹＴＯ ９（Ｇｒｅｅｎ）の蛍光が表われたが、ＨＳＰのフェオホルビドａのＣｙ５（ｐｕｐｐｌｅ）蛍光は表われていない。
前記結果からブチル－ポリ（６ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａと３’－シアリルラクトース前処理後、処理されたブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａは、ヘリコバクター・ピロリと相互作用しないことが確認された。
一方、レーザ照射した実験群［Ｌａｓｅｒ（＋）と表記］とレーザを照射していない実験群［Ｌａｓｅｒ（－）と表記］とを比較した場合、３ＳＬ－ＬＲＨＳＰ実験群は、３ＳＬ－ＬＲＨＳＰがヘリコバクター・ピロリと相互作用するために、レーザ照射によって３ＳＬ－ＬＲＨＳＰのフェオホルビドａで発生した一重項酸素によってヘリコバクター・ピロリ細胞膜の損傷で誘導され、これにより、ヘリコバクター・ピロリの内部に入って蛍光値を示すヨウ化プロピジウム（Ｒｅｄ）が確認された。
しかし、他の６ＳＬ－ＬＲＰ Ｌａｓｅｒ（＋）、Ｌａｓｅｒ（－）、Ｐｒｅ３ＳＬ＋３ＳＬ－ＬＲＨＳＰ Ｌａｓｅｒ（＋）、Ｌａｓｅｒ（－）実験群では、レーザ照射有無によって正常なヘリコバクター・ピロリで表われるＳＹＴＯ ９（Ｇｒｅｅｎ）蛍光のみ確認されただけであり、ヨウ化プロピジウム（赤色）蛍光は、確認されていない。
前記結果から３ＳＬ－ＬＲＨＳＰは、ヘリコバクター・ピロリを認知して成功的に相互作用することによって、レーザ照射時に、フェオホルビドａで発生した一重項酸素によってヘリコバクター・ピロリが効果的に不活性化されることが確認された。
＜実験例８＞生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）ヘリコバクター・ピロリ認知能混成化高分子のヘリコバクター・ピロリ感染治療の効果確認
実施例１のように製造されたヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化高分子ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（３ＳＬ－ＬＲＨＳＰ）のヘリコバクター・ピロリ感染治療の効果を確認するために、生体内で確認した。
ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）ＳＳ１菌株を１０％ ウマ血清（Ｗｅｌｇｅｎｅ、Ｋｏｒｅａ）が添加されたブルセラブロス（ｂａｃｔｏ ｔｒｙｐｔｏｎｅ １０ｇ、ｂａｃｔｏ ｐｅｐｔａｍｉｎ １０ｇ、ｂａｃｔｏ ｄｅｘｔｒｏｓｅ １ｇ、ｂａｃｔｏ ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ２ｇ、ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ５ｇ、ｓｏｄｉｕｍ ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ ０．１ｇ；Ｄｉｆｃｏ、ＵＳＡ）を用いて培養した。嫌気性条件を保持させるために、インキュベーターは、１０％のＣＯ２、９５％以上の湿度を保持し、温度は、３７℃を保持した。
また、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）ＳＳ１菌株２００μｌ（３×１０８ＣＦＵ／ｍ）をｂａｌｂ ｃマウスに一週間二日間隔で合計３回経口投与して接種及び感染を誘発させた。
以後、２週間感染発達を進行させ、ヘリコバクター・ピロリ感染治療に効果がある抗争制基盤の３剤療法［ＯＣＡ；オメプラゾール４００μｍｏｌ／ｋｇ、アモキシシリン６８μｍｏｌ／ｋｇ、及びクラリスロマイシン１９．１μｍｏｌ／ｋｇ）を３日間１日間隔で経口投与し（経口投与６時間前からｂａｌｂ ｃは節食）、３ＳＬ－ＬＲＨＳＰ［ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｐｈｅｏａ（ｐｈｅｏｐｈｏｒｂｉｄｅ ａ基準０．５μｇ／ｍＬの濃度）］を３番目のＯＣＡ投与時に、共に投与し、３０分後、微細繊維レーザ（ｍｉｃｒｏ ｆｉｂｅｒ ｌａｓｅｒ）を用いて胃内にレーザを照射した。
レーザ照射は、４０ｍＷのレーザを２５０秒間合計１０Ｊ／ｃｍ２照射し、対照群としてＰＢＳとＯＣＡとが投与された動物実験群にも同じ量のレーザを照射して追加比較した（レーザを照射したグループは、（＋）と表記、レーザを照射していないグループは、（－）と表記）、最終薬物投与以後、二日後、ｂａｌｂ ｃの胃を取り外して半分に分け、ＰＢＳ １０ｍｌで胃組織を洗浄し、セルストレーナー（ｃｅｌｌ ｓｔｒａｉｎｅｒ）を用いて胃内浮遊物をフィルタリングし、残ったヘリコバクター・ピロリＳＳ１菌株（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ ＳＳ１ ｓｔｒａｉｎ）溶液を用いてＣＦＵアッセイを行った。
ＣＦＵアッセイに使われた培地は、Ｓｋｉｒｒｏｗ´ｓ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ［バンコマイシン（１０ｍｇ／ｌ）、ポリミキシンＢ（２～５ＩＵ／ｍｌ）、トリメトプリム（５ｍｇ／ｌ）］が含まれ、２～３日後、培地に表われたコロニー数を数えて、ＣＦＵアッセイを通じて最終的なヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化物質の感染治療の効果を確認した。
その結果、図１５のように、ＰＢＳ（－）及びＰＢＳ（＋）グループの場合、それぞれ約１．１×１０７ＣＦＵ／ｓｔｏｍａｃｈ、１．４×１０７ＣＦＵ／ｓｔｏｍａｃｈのヘリコバクター・ピロリコロニーが確認され、ＯＣＡ（－）及びＯＣＡ（＋）実験群では、それぞれ２．６×１０６及び４．４×１０６ＣＦＵ／ｓｔｏｍａｃｈのヘリコバクター・ピロリコロニーが確認された。最後に、３ＳＬ－ＬＲＨＳＰ（－）及び３ＳＬ－ＬＲＨＳＰ（＋）実験群では、それぞれ１．６×１０７及び６．７×１０４ＣＦＵ／ｓｔｏｍａｃｈのヘリコバクター・ピロリコロニーを確認することができた。
前記結果からＰＢＳ（－）、ＰＢＳ（＋）及び３ＳＬ－ＬＲＨＳＰ（－）実験群のＣＦＵアッセイ結果が類似したレベルに確認されることによって、前記実験群では、レーザ照射有無によるヘリコバクター・ピロリの感染レベルの減少影響は大きな差がないと確認された。また、従来のヘリコバクター・ピロリを治療する抗生剤基盤の方法であるＯＣＡ（－）及びＯＣＡ（＋）対照群でも、レーザ照射有無による影響はほとんど表われないことが確認された。
一方、３ＳＬ－ＬＲＨＳＰが処理された実験群では、ＰＢＳ（－）、ＰＢＳ（＋）及び３ＳＬ－ＬＲＨＳＰ（－）と比較して、約１．５×１０２～２．３×１０２倍のコロニーが減少し、従来のヘリコバクター・ピロリ治療剤が処理されたＯＣＡ（－）及びＯＣＡ（＋）実験群よりも、３．８～６．５倍のコロニーが減少したことが確認された。
コロニー減少は、胃腸官内の感染力を有するヘリコバクター・ピロリ数が減少したことを意味するが、前記実施例１のように製造されたヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化高分子は、従来の抗生剤を利用したヘリコバクター・ピロリ治療効果よりも約３．８～６．８倍程度さらに優れた感染治療の効果を示すと確認された。
＜実験例９＞ポリリジン基盤のヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化物質の生体外ヘリコバクター・ピロリの抗菌活性の確認
前記実施例２、実施例３、実施例４及び実施例５から製造されたポリリジン基盤のヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化物質ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｃｅ６、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＰＰＩＸ、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＨＰＰ及びブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＳＳｉＰＣが、ヘリコバクター・ピロリの不活性の効果を示す濃度及び抗菌活性を生体外で確認した。
１．実験方法
ヘリコバクター・ピロリＳＳ１（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ ｓｔｒａｉｎ ＳＳ１）をヘリコバクター・ピロリ菌株銀行から分譲されて使用した。菌の培養には、１０％ ウマ血清（Ｗｅｌｇｅｎｅ、Ｋｏｒｅａ）を添加したブルセラブロス（Ｄｉｆｃｏ、ＵＳＡ）を利用し、培地の組成は、ｂａｃｔｏ ｔｒｙｐｔｏｎｅ １０ｇ、ｂａｃｔｏ ｐｅｐｔａｍｉｎ １０ｇ、ｂａｃｔｏｄｅｘｔｒｏｓｅ １ｇ、ｂａｃｔｏ ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ２ｇ、ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ５ｇ、ｓｏｄｉｕｍ ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ ０．１ｇで構成された。嫌気性条件を保持させるために、インキュベーターは、１０％のＣＯ２、９５％以上の湿度を保持し、温度は、３７℃を保持した。
また、ヘリコバクター・ピロリ（ＳＳ１ ｓｔｒａｉｎ）１ｍｌ（５＊１０５ＣＦＵ／ｍｌ）に３’－シアリルラクトース（３ＳＬと表記）のヘリコバクター・ピロリ認知能の効果を確認するために、同じ濃度の遊離光応答剤（Ｃｅ６、ＰＰＩＸ、ＨＰＰ、ＳＳｉＰＣ）をＤＭＳＯに過量溶かして蒸留水で希釈して、ヘリコバクター・ピロリ認知用複合体と各濃度を合わせた。
また、それぞれの物質は、ヘリコバクター・ピロリとあらかじめ３７℃、３０分間インキュベーションした。インキュベーション後、４０００ｒｐｍで２分間遠心分離して上澄み液を除去し、１ｍｌのＰＢＳを用いて分散させた。前記過程を２回繰り返してヘリコバクター・ピロリと反応していない未反応物を除去した後、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｃｅ６、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＰＰＩＸ、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＨＰＰ、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＳＳｉＰＣ（それぞれの光応答剤Ｃｅ６、ＰＰＩＸ、ＨＰＰ、ＳＳｉＰＣ基準０～５０μｇ／ｍＬの濃度）と混合し、３７℃、３０分間インキュベーションした。インキュベーション後、４０００ｒｐｍで２分間遠心分離して上澄み液を除去し、以後、ＰＢＳ １ｍｌを用いて再分散させた。前記過程２回繰り返してヘリコバクター・ピロリと反応しない未反応物を除去した。
以後、それぞれの実験群に５０ｍＷの強度でそれぞれ２００秒間レーザを照射した後、希釈してＣＦＵアッセイを進行した。
２．実験結果
図３７のように、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｃｅ６は、Ｃｅ６濃度基準０．５μｇ／ｍｌからヘリコバクター・ピロリコロニー数が減少して、１．０μｇ／ｍｌでは、コロニーがほとんど表われないことが確認されることによって、レーザ（１０．０Ｊ／ｃｍ２）照射時に、抗菌活性を示す適正濃度であることが確認された。また、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＰＰＩＸは、ＰＰＩＸ濃度基準５．０μｇ／ｍｌからヘリコバクター・ピロリコロニー数が減少して、１０．０μｇ／ｍｌは、コロニーがほとんど表われないことが確認されることによって、レーザ（１０．０Ｊ／ｃｍ２）照射時に、抗菌活性を示す適正濃度であることが確認された。
一方、対照群として遊離Ｃｅ６及びＰＰＩＸがそれぞれ処理されたヘリコバクター・ピロリコロニーでは、遊離Ｃｅ６及びＰＰＩＸ濃度基準５０．０μｇ／ｍｌでＮＣ群に比べて、半分を上回るコロニー結果値を確認した。
一方、図３８を参照すれば、［ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＨＰＰ］は、ＨＰＰ濃度基準１０．０μｇ／ｍｌでありながら１０．０Ｊ／ｃｍ２のレーザが照射された時、１＊１０５ＣＦＵ／ｍｌから３＊１０３ＣＦＵ／ｍｌにヘリコバクター・ピロリコロニーの数が減少し、特に、ＨＰＰ濃度基準２５．０μｇ／ｍｌ以上の濃度では、対照実験群である遊離ＨＰＰ比較群に比べて、ヘリコバクター・ピロリがこれ以上育たないことが確認された。また、［ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＳＳｉＰＣ］は、ＳＳｉＰＣ濃度基準２５．０μｇ／ｍｌでありながら１０．０Ｊ／ｃｍ２のレーザを照射した時、１＊１０５ＣＦＵ／ｍｌから４＊１０３ＣＦＵ／ｍｌにヘリコバクター・ピロリコロニーの数が減少することが確認され、５０．０μｇ／ｍｌは、コロニーが表われず、レーザ（１０．０Ｊ／ｃｍ２）照射時に、抗菌活性を示す適正濃度であることが確認された。
一方、対照群として遊離ＨＰＰ及びＳＳｉＰＣがそれぞれ処理されたヘリコバクター・ピロリコロニーでは、遊離ＨＰＰ及びＳＳｉＰＣ濃度基準５０．０μｇ／ｍｌでＮＣ群に比べて、半分を上回るコロニー結果値を確認した。
前記結果からブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－Ｃｅ６、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＰＰＩＸ、ブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＨＰＰ及びブチル－ポリ（３ＳＬ－リジン）１０－ＳＳｉＰＣ混成化物質は、優れたヘリコバクター・ピロリの不活性化の効果を示すことが確認された一方、遊離Ｃｅ６、ＰＰＩＸ、ＨＰＰ及びＳＳｉＰＣは、同じレーザ量を照射した時、ヘリコバクター・ピロリと相互作用するシアリルラクトース（３ＳＬ）が存在しなくて、ヘリコバクター・ピロリと正しく相互作用することができず、抗菌活性の効果がほとんど表われないことが確認されることによって、前記混成化物質は、優れたヘリコバクター・ピロリ認知能を表わして、抗菌活性の効果を向上させることができることが確認された。
＜実験例１０＞キトサン基盤のヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化物質の生体外ヘリコバクター・ピロリの抗菌活性の確認
前記実施例６から製造されたキトサン基盤のヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化物質３’－Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔｏｓｅ－Ｃｈｉｔｏｓａｎ－Ｐｈｅｏｐｈｏｒｂｉｄｅ ａ（３ＳＬ－Ｃｈｉｔｏｓａｎ－Ｐｈｅｏａ）のヘリコバクター・ピロリの不活性の効果を示す濃度及び抗菌活性を生体外で確認した。
前記進行した実験例９の実験方法と同じ過程でＣＦＵアッセイを行って、ヘリコバクター・ピロリ（ＳＳ１ ｓｔｒａｉｎ）５＊１０５ＣＦＵ／ｍｌの基準にＮｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ（ＮＣと表記）とレーザのみ照射した実験群（Ｏｎｌｙ ｌａｓｅｒと表記）に比べて、キトサン基盤のヘリコバクター・ピロリ認知用光増感混成化物質３ＳＬ－Ｃｈｉｔｏｓａｎ－Ｐｈｅｏａと遊離Ｐｈｅｏａ比較群のコロニー数を確認した。
その結果、図３９のように、３ＳＬ－Ｃｈｉｔｏｓａｎ－Ｐｈｅｏａの場合、Ｐｈｅｏａ濃度基準１０．０μｇ／ｍｌからヘリコバクター・ピロリコロニー数が減少し始めて、２５．０μｇ／ｍｌは、コロニーが表われず、一定量のレーザ（１０．０Ｊ／ｃｍ２）を照射した時、抗菌活性を示す適正濃度であることが確認された。一方、対照実験群遊離Ｐｈｅｏａでは、Ｐｈｅｏａ濃度基準５０．０μｇ／ｍｌである時、ＮＣに比べて、半分に僅かに及ばないコロニー結果値を確認した。
前記結果からＰｈｅｏａ濃度基準２５．０μｇ／ｍｌ以上の濃度では、対照実験群である遊離Ｐｈｅｏａ比較群よりもヘリコバクター・ピロリがこれ以上育たないと見て、３ＳＬ－Ｃｈｉｔｏｓａｎ－Ｐｈｅｏａの優れた抗菌活性能を示すことが確認された一方、遊離Ｐｈｅｏａは、同じレーザ量を照射した時、ヘリコバクター・ピロリと相互作用するシアリルラクトース（３ＳＬ）が存在しなくて、ヘリコバクター・ピロリと正しく相互作用することができず、以後、洗浄段階でヘリコバクター・ピロリと相互作用することができなかった物質がほとんど洗わせられて、ヘリコバクター・ピロリ混成化物質３ＳＬ－Ｃｈｉｔｏｓａｎ－Ｐｈｅｏａに比べて、抗菌活性能力をほとんど表わすことができないことが確認された。
＜実験例１１＞ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基盤のヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化物質の生体外ヘリコバクター・ピロリの抗菌活性の確認
前記実施例７から製造されたＰＥＧ基盤のヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化物質３’－Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔｏｓｅ－ＰＥＧ－Ｐｈｅｏｐｈｏｒｂｉｄｅ ａ（３ＳＬ－ＰＥＧ－Ｐｈｅｏａ）のヘリコバクター・ピロリの不活性の効果を示す濃度及び抗菌活性を生体外で確認した。
１．実験方法
ヘリコバクター・ピロリＳＳ１をヘリコバクター・ピロリ菌株銀行から分譲されて使用した。菌の培養には、１０％ ウマ血清（ｈｏｒｓｅ ｓｅｒｕｍ）（Ｗｅｌｇｅｎｅ、Ｋｏｒｅａ）を添加したブルセラブロス（Ｄｉｆｃｏ、ＵＳＡ）を利用し、培地の組成は、ｂａｃｔｏ ｔｒｙｐｔｏｎｅ １０ｇ、ｂａｃｔｏ ｐｅｐｔａｍｉｎ １０ｇ、ｂａｃｔｏｄｅｘｔｒｏｓｅ １ｇ、ｂａｃｔｏ ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ２ｇ、ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ５ｇ、ｓｏｄｉｕｍ ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ ０．１ｇで構成された。嫌気性条件を保持させるために、インキュベーターは、１０％のＣＯ２、９５％以上の湿度を保持し、温度は、３７℃を保持した。
また、ヘリコバクター・ピロリ（２６６９５ ｓｔｒａｉｎ）１ｍｌ（１＊１０５ＣＦＵ／ｍｌ）に３ＳＬ－ＰＥＧ－Ｐｈｅｏａの濃度を固定（５０μｇ／ｍｌ）後、レーザ強度による光線力学抗菌治療の効果を確認した。また、それぞれの物質は、ヘリコバクター・ピロリとあらかじめ３７℃、３０分間インキュベーションした。
インキュベーション後、４０００ｒｐｍで２分間遠心分離して上澄み液を除去し、１ｍｌのＰＢＳを用いて分散させた。前記過程２回繰り返してヘリコバクター・ピロリと反応していない未反応物を除去した後、３ＳＬ－ＰＥＧ－Ｐｈｅｏａ（Ｐｈｅｏａ基準５０μｇ／ｍＬの濃度）と混合し、３７℃、３０分間インキュベーションした。インキュベーション後に４０００ｒｐｍで２分間遠心分離して上澄み液を除去し、ＰＢＳ １ｍｌを用いて再分散させた。前記過程を２回繰り返してヘリコバクター・ピロリと反応しない未反応物を除去した。
以後、Ｂｒｕｃｅｌｌｅｂｒｏｔｈ寒天培地に反応ヘリコバクター・ピロリをプレートに均一に接菌した後、それぞれの実験群に１００ｍＷの強度でそれぞれ０～５０Ｊ／ｃｍ２のレーザを照射し、二日後、プレートに３ＳＬ－ＰＥＧ－Ｐｈｅｏａによる光線力学治療の効果で抑制領域の形成を確認した。
２．実験結果
図４０のように、３ＳＬ－ＰＥＧ－Ｐｈｅｏａの場合、Ｐｈｅｏａ濃度基準（５０．０μｇ／ｍｌ）で１０Ｊ／ｃｍ２でヘリコバクター・ピロリが育たない抑制領域が確認され、３０、４０、５０Ｊ／ｃｍ２のレーザ強度でも、抑制領域が確認された。一方、レーザが照射されていない比較群では、抑制領域が表われていない。
前記結果から３ＳＬ－ＰＥＧ－Ｐｈｅｏａ混成化物質は、優れたヘリコバクター・ピロリの不活性化の効果を示すことができ、特に、ヘリコバクター・ピロリ光線力学的不活性化が可能な混成化物質の潜在性を有したことが確認された。
＜実験例１２＞プルラン基盤のヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化物質の生体外ヘリコバクター・ピロリの抗菌活性の確認
前記実施例８から製造されたプルラン基盤のヘリコバクター・ピロリ認知能光増感混成化物質３’－Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔｏｓｅ－Ｐｕｌｌｕｌａｎ－Ｐｈｅｏｐｈｏｒｂｉｄｅ ａ（３ＳＬ－ＰＵ－Ｐｈｅｏａ）のヘリコバクター・ピロリの不活性の効果を示す濃度及び抗菌活性を生体外で確認した。
前記進行した実験例９の実験方法と同じ過程でＣＦＵアッセイを行って、ヘリコバクター・ピロリ（ＳＳ１ ｓｔｒａｉｎ）５＊１０５ＣＦＵ／ｍｌの基準にＮｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ（ＮＣと表記）とレーザのみ照射した実験群（Ｏｎｌｙ ｌａｓｅｒと表記）に比べて、プルラン基盤のヘリコバクター・ピロリ認知用光増感混成化物質３ＳＬ－ＰＵ－Ｐｈｅｏａと遊離光増感剤Ｐｈｅｏａ比較群のコロニー数を確認した。
その結果、図４１のように、３ＳＬ－ＰＵ－Ｐｈｅｏａの場合、Ｐｈｅｏａ濃度基準２０．０μｇ／ｍｌに１０．０Ｊ／ｃｍ２のレーザ照射した時、１＊１０５ＣＦＵ／ｍｌから５＊１０３ＣＦＵ／ｍｌにヘリコバクター・ピロリコロニーの数が減少することが確認された。一方、Ｐｈｅｏａ濃度基準５０．０μｇ／ｍｌ以上の濃度では、対照実験群である遊離Ｐｈｅｏａ比較群よりもヘリコバクター・ピロリがこれ以上育たないことが確認された。
一方、比較群遊離Ｐｈｅｏａでは、同じレーザ量を照射した時、Ｐｈｅｏａ濃度基準５０．０μｇ／ｍｌでも、９＊１０２ＣＦＵ／ｍｌのヘリコバクター・ピロリコロニーを確認することができた。
前記結果から３ＳＬ－Ｃｈｉｔｏｓａｎ－Ｐｈｅｏａ混成化物質は、優れたヘリコバクター・ピロリの抗菌活性能を示すことが確認された。
以上、本発明の特定の部分を詳しく記述したところ、当業者にとって、このような具体的な記述は、単に望ましい実施形態に過ぎず、これにより、本発明の範囲が制限されるものではないという点は明白である。したがって、本発明の実質的な範囲は、特許請求の範囲とそれらの等価物とによって定義される。

Claims (5)

  1. 光増感剤；３’－シアリルラクトース；及び連結体としてポリリジンからなることを特徴とするヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体を含むヘリコバクター・ピロリによって誘導される胃疾患の光線力学治療用薬学組成物。
  2. 前記光増感剤は、クロリン類、フォフィリン類、及びフタロシアニン類からなる群から選択されることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
  3. 前記ヘリコバクター・ピロリ菌株は、ヘリコバクター・ピロリ２６６９５、ヘリコバクター・ピロリＳＳ１、ヘリコバクター・ピロリ５１、及びヘリコバクター・ピロリ５２からなる群から選択されることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
  4. 前記ヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体は、下記化学式１で表されることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
    Figure 0007168770000007
    前記化学式１において、Ｘは、１～１５の整数である。
  5. 光増感剤；３’－シアリルラクトース；及び連結体としてポリリジンからなることを特徴とするヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体を含むヘリコバクター・ピロリ感染診断用組成物。
JP2021515600A 2018-09-20 2019-09-20 ヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体及びそれを含む光線力学治療用組成物 Active JP7168770B2 (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2018-0112824 2018-09-20
KR20180112824 2018-09-20
PCT/KR2019/012197 WO2020060260A1 (ko) 2018-09-20 2019-09-20 헬리코박터 파일로리 인지용 고분자 복합체 및 이를 포함하는 광역학 치료용 조성물
KR10-2019-0115725 2019-09-20
KR1020190115725A KR102265446B1 (ko) 2018-09-20 2019-09-20 헬리코박터 파일로리 인지용 고분자 복합체 및 이를 포함하는 광역학 치료용 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2022501382A JP2022501382A (ja) 2022-01-06
JP7168770B2 true JP7168770B2 (ja) 2022-11-09

Family

ID=69888623

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021515600A Active JP7168770B2 (ja) 2018-09-20 2019-09-20 ヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体及びそれを含む光線力学治療用組成物

Country Status (2)

Country Link
JP (1) JP7168770B2 (ja)
WO (1) WO2020060260A1 (ja)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPWO2021157655A1 (ja) * 2020-02-05 2021-08-12

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001513819A (ja) 1997-03-06 2001-09-04 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション 病原体ターゲティングのための光線感作物質複合体
JP2003508124A5 (ja) 2000-08-31 2007-11-15
WO2007023398A3 (en) 2005-05-16 2008-02-21 Univ Geneve Compounds for photochemotherapy
WO2009155665A1 (en) 2008-06-26 2009-12-30 Central Northern Adelaide Health Service Methods and compositions for treating pathological infections

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2183329A1 (en) * 1994-03-02 1995-09-08 David A. Zopf Method for treating and inhibiting gastric and duodenal ulcers
US20030114434A1 (en) * 1999-08-31 2003-06-19 James Chen Extended duration light activated cancer therapy
KR101701036B1 (ko) * 2015-04-27 2017-01-31 가톨릭대학교 산학협력단 폴리에틸렌글리콜 숲을 이용한 광역학 치료용 고분자 나노접합체 및 이의 제조방법
KR20170104024A (ko) * 2016-03-03 2017-09-14 주식회사 엠디헬스케어 헬리코박터파일로리균 유래 나노소포 및 이의 용도
KR102007278B1 (ko) * 2017-01-19 2019-08-06 가톨릭대학교 산학협력단 바이러스 진단 및 치료를 위한 인지능 물질 및 이의 제조방법

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001513819A (ja) 1997-03-06 2001-09-04 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション 病原体ターゲティングのための光線感作物質複合体
JP2003508124A5 (ja) 2000-08-31 2007-11-15
WO2007023398A3 (en) 2005-05-16 2008-02-21 Univ Geneve Compounds for photochemotherapy
WO2009155665A1 (en) 2008-06-26 2009-12-30 Central Northern Adelaide Health Service Methods and compositions for treating pathological infections

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Infection and Immunity，1988年，Vol.56, No.11，pp.2896-2906
Proceedings of SPIE，2014年，Vol.8931，Article No.893115
光アライアンス，2015年，Vol.26, No.3，pp.9-10

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020060260A1 (ko) 2020-03-26
JP2022501382A (ja) 2022-01-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102265446B1 (ko) 헬리코박터 파일로리 인지용 고분자 복합체 및 이를 포함하는 광역학 치료용 조성물
Kim Chitin and chitosan derivatives: advances in drug discovery and developments
CN103751795B (zh) 透明质酸‑抗肿瘤药偶联物及复合纳米粒组合物的制备和应用
US6048736A (en) Cyclodextrin polymers for carrying and releasing drugs
Im et al. Helicobacter pylori-targeting multiligand photosensitizer for effective antibacterial endoscopic photodynamic therapy
JP5881254B2 (ja) 自己免疫疾患およびその他の疾患の治療のための組成物および方法
CN102988999B (zh) 姜黄素-多糖类偶联物及其制备方法与应用
CN102060991B (zh) 7-乙基-10-羟基喜树碱的两亲性药物前体及其制备方法
CN101448875A (zh) 鬼臼毒素类的高分子量结合体
CN106620717B (zh) 一种具有逆转肿瘤多药耐药性功能的两亲性缀合物抗肿瘤纳米药及其制备方法和应用
Doshi et al. Conducting polymer nanoparticles for targeted cancer therapy
WO2006041613A2 (en) Nanoparticles for targeting hepatoma cells
CN111621024B (zh) 快速氧化/还原双重响应性含双硒键的嵌段共聚物的制备方法
Zhang et al. Dual-responsive doxorubicin-loaded nanomicelles for enhanced cancer therapy
Xu et al. Synthesis, in vitro and in vivo evaluation of new norcantharidin-conjugated hydroxypropyltrimethyl ammonium chloride chitosan derivatives as polymer therapeutics
CN104162169B (zh) 一种药物组合物的制备方法
JP7168770B2 (ja) ヘリコバクター・ピロリ認知用高分子複合体及びそれを含む光線力学治療用組成物
CN104623685B (zh) 一种肿瘤间质pH敏感型靶向树状聚合物及其制备方法
Jana et al. Low molecular weight polyethyleneimine conjugated guar gum for targeted gene delivery to triple negative breast cancer
Zhou et al. Hyper-branched multifunctional carbon nanotubes carrier for targeted liver cancer therapy
KR20200026010A (ko) 염증성 장질환 예방 또는 치료용 생체적합성 고분자-글리시리진 컨쥬게이트
CN108456298A (zh) 一种可溶性不对称酞菁修饰的两亲性聚合物及合成方法
KR101871244B1 (ko) 광감각제를 함유하는 세포, 이의 제조방법 및 이의 용도
CN115068606B (zh) 一种肿瘤靶向纳米制剂、制备方法及在抗肿瘤药物制备中的应用
CN107073035B (zh) 治疗铁缺乏的方法

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210601

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20210601

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20220621

A711 Notification of change in applicant

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711

Effective date: 20220830

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20220830

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220920

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20221004

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20221027

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7168770

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150