JP7161511B2 - 不妊症の処置のための組成物 - Google Patents

Description

本発明は、不妊症の処置のための組成物および医薬製品に関する。

体外受精（ＩＶＦ）などの生殖補助医療（ＡＲＴ）技術は周知である。これらのＡＲＴ
技術は、一群の卵胞が完全成熟するように刺激される調節卵巣刺激法（ＣＯＳ）のステッ
プを一般に必要とする。標準的ＣＯＳ治療計画は、卵胞発育を刺激する卵胞刺激ホルモン
（ＦＳＨ）単独の、またはそれと黄体化ホルモン（ＬＨ）活性との組合せなどの、ゴナド
トロピン〔gonadotrophin〕の投与を、通常は早発性ＬＨサージを予防するための刺激の
前および／または刺激中でのＧｎＲＨアナログの投与と共に、含む。ＣＯＳのために一般
に使用される医薬組成物は、組換え卵胞刺激ホルモン（ｒＦＳＨ）、尿由来ＦＳＨ、組換
えＦＳＨ＋ＬＨ調製物、尿由来メノトロピン〔menotrophin〕［ヒト閉経期ゴナドトロピ
ン（ｈＭＧ）］および高精製ヒト閉経期ゴナドトロピン（ＨＰ－ｈＭＧ）を含む。ＩＶＦ
は、重症の場合は生命を危うくする可能性がある、卵巣過剰刺激症候群（ＯＨＳＳ）の危
険を伴う可能性がある。

上に示したとおり、標準的ＣＯＳプロトコールはＦＳＨの投与を一般に含む。ＦＳＨの
用量は、年齢、ＦＳＨ刺激への以前の応答、ＦＳＨの基礎レベル、胞状卵胞数および近年
では抗ミュラー管ホルモン（ＡＭＨ）を含む多数の因子に一般に依存する。臨床医は、所
与の用量に応答した卵巣の複数の卵胞の発育を、循環中の１７－β－エストラジオールの
上昇と共に、予期する。

所与の用量への応答（卵巣の複数の卵胞の発育、循環中の１７－β－エストラジオール
の上昇）が適当である、または予期したとおりである場合、これは正常な卵巣予備能とも
称される、正常な卵巣機能を示している。ＦＳＨ刺激に十分に応答しない患者は、わずか
しか卵胞を産生せず、結果として刺激の際の彼女らの１７－β－エストラジオールレベル
は、ゆっくり上昇し、比較的低いレベルに達する。これらの患者は「低応答者」と称され
、卵巣予備能が減退していると言われる場合がある。年齢の上昇、骨盤癒着症、卵巣疾患
および免疫学的因子を含むいくつかの因子が低応答に関与すると考えられている。

調節卵巣刺激法（ＣＯＳ）への女性の応答可能性を予測する能力は、個別化されたＣＯ
Ｓプロトコールの開発を可能にし得る。例えばこれは、刺激に過剰に応答すると予測され
る女性におけるＯＨＳＳの危険を低減でき、低応答者と分類された女性における妊娠結果
を改善でき、および／またはＦＳＨの用量（および曝露）の低減をもたらし、それにより
特定の患者における治療費を低減した（および治療の安全性を増大させた）。

抗ミュラー管ホルモン（ＡＭＨ）の血清濃度は、いまや卵巣予備能の信頼できるマーカ
ーとして確立されている。ＡＭＨのレベルの低下は、ＣＯＳの際のゴナドトロピンへの卵
巣応答の低減と関連している。さらに、高レベルのＡＭＨは過剰卵巣応答の良好な予測因
子であり、ＯＨＳＳの危険の指標である。

ＡＲＴを受けている３５歳未満の女性の予備研究では、ＣＯＮＳＯＲＴ投薬アルゴリズ
ム（基礎ＦＳＨ、ＢＭＩ、年齢およびＡＦＣを組み込んでいる）が、ＯＨＳＳ発症の危険
がある女性におけるＣＯＳのための、最適なＦＳＨ開始用量を予測するために使用された
（Ｏｌｉｖｅｎｎｅｓ ｅｔ．ａｌ．，２００９）。用量を個別化することは、適当な卵
母細胞収量および良好な妊娠結果をもたらした。しかし、低用量群（７５ＩＵ ＦＳＨ）
では不適当な応答による中止が高率であり、患者の相当な割合においてＯＨＳＳが生じた
。

上に示すとおり、標準的ＣＯＳプロトコールはＦＳＨの投与を含む場合がある。ＦＳＨ
は天然では脳下垂体前葉によって分泌され、卵胞発育および排卵を支持するように機能す
る。ＦＳＨは、他の糖タンパク質ホルモンＬＨおよびＣＧにも共通する９２アミノ酸アル
ファサブユニットと、ホルモンの生物学的特異性を付与するＦＳＨに固有の１１１アミノ
酸ベータサブユニットとを含む（Ｐｉｅｒｃｅ ａｎｄ Ｐａｒｓｏｎｓ，１９８１）。
各サブユニットは、複雑な炭水化物残基の付加によって翻訳後修飾される。両サブユニッ
トは、Ｎ連結グリカン付着のための部位２個を有している、アルファサブユニットのアミ
ノ酸５２および７８、ならびにベータサブユニットのアミノ酸残基７および２４である（
Ｒａｔｈｎａｍ ａｎｄ Ｓａｘｅｎａ，１９７５，Ｓａｘｅｎａ ａｎｄ Ｒａｔｈｎ
ａｍ，１９７６）。ＦＳＨはこのようにして、質量で約３０％までグリコシル化されてい
る（Ｄｉａｓ ａｎｄ Ｖａｎ Ｒｏｅｙ．２００１．Ｆｏｘ ｅｔ ａｌ．２００１）
。

閉経後のヒト尿から精製されたＦＳＨは何年もの間、自然生殖で排卵を促進するためお
よび生殖補助技術のための卵母細胞を提供するための両方で、不妊症処置において使用さ
れている。フォリトロピンアルファ（ＧＯＮＡＬ－Ｆ、Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｒｏｎｏ／ＥＭ
Ｄ Ｓｅｒｏｎｏ）およびフォリトロピンベータ（ＰＵＲＥＧＯＮ／ＦＯＬＬＩＳＴＩＭ
、ＭＳＤ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ）などの、卵巣刺激のための現在承認されて
いる組換えＦＳＨ（ｒＦＳＨ）製品は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株由
来である。現在、ヒト細胞株由来のｒＦＳＨ産生物は商業的に入手できない。

ＦＳＨ調製物には、存在する種々のアイソフォームの量の差異に関連する相当な不均一
性が伴う。個々のＦＳＨアイソフォームは、同一のアミノ酸配列を示すが、翻訳後修飾さ
れた程度が異なっている；具体的なアイソフォームは炭水化物分枝構造の不均一性および
シアル酸（末端糖）取り込みの量の差異によって特徴付けられ、その両方が特定のアイソ
フォーム生理活性に影響を与えると考えられている。

天然ＦＳＨのグリコシル化は非常に複雑である。天然由来下垂体ＦＳＨにおけるグリカ
ンは、モノ、バイ、トリおよびテトラアンテナグリカンの組合せを含む場合がある、さま
ざまな構造を含有する場合がある（Ｐｉｅｒｃｅ ａｎｄ Ｐａｒｓｏｎｓ，１９８１．
Ｒｙａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８７．Ｂａｅｎｚｉｇｅｒ ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ，１９８
８）。グリカンはさらなる修飾を有する場合がある：コアフコシル化、二分グルコサミン
、アセチルラクトサミンでの鎖伸長、部分的または完全なシアル酸付加、α２，３および
α２，６連結でのシアル酸付加およびガラクトースの硫酸化ガラクトサミン置換である（
Ｄａｌｐａｔｈａｄｏ ｅｔ ａｌ．，２００６）。さらに、個々のグリコシル化部位で
グリカン構造の分布間に差異がある。個体の血清由来および閉経後の女性の尿由来のＦＳ
Ｈにおいて同等なレベルのグリカン複雑性が見出されている（Ｗｉｄｅ ｅｔ ａｌ．，
２００７）。

組換えＦＳＨ産生物のグリコシル化は、宿主細胞株に存在するグリコシル転移酵素の範
囲を反映する。商業的に入手可能なｒＦＳＨ産生物は、操作されたチャイニーズハムスタ
ー卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）由来である。ＣＨＯ細胞由来ｒＦＳＨにおけるグリカン修飾の
範囲は、天然産生物において見出されるものよりも限定されている。ＣＨＯ細胞由来ｒＦ
ＳＨにおいて見出されるグリカン不均一性の低減の例は、二分グルコサミンの欠失ならび
にコアフコシル化およびアセチルラクトサミン伸長の含有量の低減を含む（Ｈａｒｄ ｅ
ｔ ａｌ．，１９９０）。加えて、ＣＨＯ細胞は、α２，３連結を使用してのみシアル酸
を付加できる（Ｋａｇａｗａ ｅｔ ａｌ，１９８８，Ｔａｋｅｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ，
１９８８，Ｓｖｅｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０）；ＣＨＯ細胞由来ｒＦＳＨはα
２，３－連結シアル酸だけを含み、α２，６－連結シアル酸を含まない。

したがってＣＨＯ細胞由来ＦＳＨは、α２，３およびα２，６－連結シアル酸の混合物
のグリカンを含有し前者が優位である天然産生ＦＳＨ（例えばヒト下垂体／血清／尿中Ｆ
ＳＨ）とは異なる。したがってＣＨＯ系を使用して発現された組換えタンパク質は、それ
らの末端シアル酸連結の種類において、その天然カウンターパートとは異なる。これは、
炭水化物部分が分子の薬理学的特質に寄与する場合があることから、薬学的使用のための
生物製剤の産生において考慮すべき重要な事項である。

本出願者らは、ＷＯ２００９／１２７８２６Ａとして公開された国際特許出願第ＰＣＴ
／ＧＢ２００９／０００９７８号の対象であるヒト由来組換えＦＳＨを開発した。α２，
３およびα２，６－連結シアル酸の両方の混合物を含む組換えＦＳＨは、ｒＦＳＨおよび
α２，３シアル酸転移酵素の両方を発現するようにヒト細胞株を操作することによって作
られた。発現産生物は、非常に酸性であり、α２，３－およびα２，６－連結シアル酸の
両方の混合物を有し、後者は内在性シアル酸転移酵素活性によってもたらされている。シ
アル酸連結、α２，３－またはα２，６－の種類が、ＦＳＨの生物学的クリアランスに劇
的な影響を有する場合があることが見出された。α２，３およびα２，６－連結シアル酸
の両方の混合物を含む組換えＦＳＨは、従来のＣＨＯ細胞において発現されたｒＦＳＨを
超える２つの利点を有する。第１に、２種のシアル酸転移酵素の活性の組合せによって物
質はさらに高度にシアル酸付加されており、第２に、物質は天然ＦＳＨにさらに密接に類
似している。これは、α２，３－連結シアル酸だけを産生している（Ｋａｇａｗａ ｅｔ
ａｌ，１９８８，Ｔａｋｅｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ，１９８８，Ｓｖｅｎｓｓｏｎ ｅｔ
ａｌ．，１９９０）、およびシアル酸含有量が減少している（Ｕｌｌｏａ－Ａｇｕｉｒ
ｒｅ ｅｔ ａｌ．１９９５．，Ａｎｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．２００４）ＣＨＯ細胞
由来組換え産生物と比較してさらに生物学的に好適であると考えられる。

近年、卵胞刺激ホルモン受容体またはＦＳＨ受容体（ＦＳＨＲ）が卵巣予備能の減退に
関連するまたは関与する場合があることが示唆されている。ＦＳＨ受容体は、ＦＳＨと相
互作用する膜貫通受容体である。ＦＳＨ受容体は、アデニル酸シクラーゼに連結されたＧ
－タンパク質共役７回膜貫通受容体であり、大きなＮ末端リガンド結合ドメインならびに
推定リン酸化部位としてのセリンおよびスレオニン残基に富むＣ末端細胞質側末端を有す
る。その活性化はＦＳＨのホルモン機能のために必要である。ＦＳＨ受容体中の変異が卵
巣予備能の減退を導くかもしれないと仮定されている。変異だけでなく、ＦＳＨ受容体バ
リアント（ＦＳＨ受容体多型）が見出されている。そのような多型の２種は、ＦＳＨ受容
体のエクソン１０中の３０７位（Ａｌａ／Ｔｈｒ）および６８０位（Ａｓｎ／Ｓｅｒ）に
位置している（図４）。これらは、３０７位におけるＡｌａまたはＴｈｒのバリアント、
および６８０位におけるＡｓｎまたはＳｅｒのバリアントである。これらの多型は、６８
０位に関する３種の異なるＦＳＨ受容体遺伝子型：Ａｓｎ／Ａｓｎ、Ａｓｎ／Ｓｅｒおよ
びＳｅｒ／Ｓｅｒをもたらす［Ｓｉｍｏｎｉ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌ
ｉｎｉｃａｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，Ｖｏｌ８
４，Ｎｏ．２，７５１～７５５（１９９９）、Ｆａｌｃｏｎｅｒ ｅｔ ａｌ，Ａｃｔａ
Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｓｃａｎｄ ２００５：８４：８０６～８１１（２０
０５）およびＬｏｕｔｒａｄｉｓ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｓｓｉｓｔｅ
ｄ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４，
（Ａｐｒｉｌ ２００６）を参照されたい］。

本出願者らは、低ＡＭＨ［ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ、一般に低応答と関連付け
られる］を有する、またＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有すると
同定された患者は、低ＡＭＨおよびＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＡｓｎ／Ａｓｎ
またはバリアントＡｓｎ／Ｓｅｒを有する患者と比較して、ＦＳＨ処置の継続期間が長い
ことを見出した。低ＡＭＨ［ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ、（例えば０．０５ｐｍｏ
ｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ、例えば５．０ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ
）］を有するだけでなく、ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有する
患者への開始ＦＳＨ用量の増加は、したがって長期間のＦＳＨ処置を回避するための代替
手段となり得る。これは特定のＡＭＨレベルを有するだけでなく、ＦＳＨＲに特定の多型
を有すると同定された、特定の患者におけるＦＳＨの用量の調整を可能にする。

低ＡＭＨ［ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．
９ｐｍｏｌ／Ｌ、例えば５．０ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）］を有するだけ
でなく、ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有する患者へのＦＳＨの
さらに高い開始用量の投与は、それが成功（妊娠および／または出生に関する）のさらに
高い可能性および成功のさらに良好な予測を提供できることから有利である。患者が理想
的な処置ウインドウ内で生じる適当な応答（予期された卵巣の複数の卵胞の発育、循環中
の１７－β－エストラジオールの上昇）を有する場合、さらに成功が期待できる。応答が
この処置ウインドウの中央内にある、すなわちウインドウ内で早すぎも遅すぎもしない場
合、成功はさらに増強される。低ＡＭＨおよびＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅ
ｒ／Ｓｅｒを有する患者における処置期間の低減（用量を１２μｇを超えて増加させるこ
とによる）は、成功の見込みの増強を伴って、応答を処置ウインドウの中央に移動できる
。

ｐＦＳＨアルファ／ベータ発現ベクターのプラスミドマップを示す図である。 α２，３－シアル酸転移酵素（ＳＴ３ＧＡＬ４）発現ベクターを示す図である。 α２，６－シアル酸転移酵素（ＳＴ６ＧＡＬ１）発現ベクターを示す図である。 エクソン１０のアミノ酸３０７および６８０位ならびにプロモーター中の２９位での多型の位置を示すＦＳＨ受容体の模式図である。 実施例８の研究においてＦＳＨで処置した患者２２２名についてのＦＳＨ受容体遺伝子でのＳＮＰハプロタイプの分布を示す図である。 完全分析セットについて、６８０位に関する３種の異なるＦＳＨ受容体遺伝子型：Ａｓｎ／Ａｓｎ、Ａｓｎ／ＳｅｒおよびＳｅｒ／Ｓｅｒのそれぞれにおいて、ＡＭＨ＜１５ｐｍｏｌ／Ｌを有する患者／対象の、ゴナドトロピン（ＦＳＨ）処置の観察された継続期間（日）ならびに送達された合計ゴナドトロピン（ＦＳＨ）用量（μｇ）を示す結果の表である。 完全分析セットについて、６８０位に関する３種の異なるＦＳＨ受容体遺伝子型：Ａｓｎ／Ａｓｎ、Ａｓｎ／ＳｅｒおよびＳｅｒ／Ｓｅｒのそれぞれにおいて、ＡＭＨ＜１５ｐｍｏｌ／Ｌを有する患者／対象に送達されたゴナドトロピン（ＦＳＨ）処置の予測された継続期間（日）を、用量について調整して示す結果の表である。

図１、２および３：ｐＦＳＨアルファ／ベータ、ｐＳＴ３およびｐＳＴ６発現ベクター
のプラスミドマップ。ＣＭＶ＝サイトメガロウイルスプロモーター、ＢＧＨｐ（Ａ）＝ウ
シ成長ホルモンポリアデニル化配列、ｆｌ ｏｒｉ＝ｆｌ複製開始点、ＳＶ４０＝シミア
ンウイルス４０プロモーター、Ｎｅｏ＝ネオマイシン耐性マーカー、Ｈｙｇ＝ハイグロマ
イシン耐性マーカー、ＳＶ４０ ｐ（Ａ）＝シミアンウイルス４０ポリアデニル化配列、
ＦＳＨ Ａ＝卵胞刺激ホルモンアルファポリペプチド、ＦＳＨ Ｂ＝卵胞刺激ホルモンベ
ータポリペプチド、ＳＴ３ＧＡＬ４＝α２，３－シアル酸転移酵素、ＳＴ６ＧＡＬ１＝α
２，６－シアル酸転移酵素、ＣｏｌＥ１＝ＣｏｌＥ１複製開始点、Ａｍｐ＝アンピリシン
耐性マーカー。

本発明による第一の態様では、９から２４μｇの卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）を含む、
不妊症の処置における使用のための組成物（例えば医薬組成物）であって、ＦＳＨ受容体
の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有すると（処置前に）同定された（例えば、と
して選択された）患者への（例えば連日の）投与のための、組成物が提供される。組成物
は、ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有すると（処置前に）同定さ
れ（例えば、として選択され）、かつ血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．
０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）を有すると（処置前に）同定された（例え
ば、として選択された）患者への（例えば連日の）投与のためのものであってよい。組成
物は、９から２４μｇのＦＳＨ、例えば１０から１８μｇのＦＳＨ、例えば１２から１６
μｇのＦＳＨ、例えば１２から１５μｇのＦＳＨを含んでよい。組成物は、１２μｇ超の
ＦＳＨ、例えば１２．３から２４μｇのＦＳＨ、例えば１２．３３から２４μｇのＦＳＨ
、例えば１２．６７から２４μｇのＦＳＨ、例えば１３から２４μｇのＦＳＨ、例えば１
３から１６μｇのＦＳＨ、例えば１３から１５μｇのＦＳＨを含んでよい。

組成物（例えば医薬組成物）は、上に、本明細書におよび特許請求の範囲に定義のヒト
由来ｒＦＳＨの量の日用量または相当する日用量を含んでよい。組成物（例えば医薬組成
物）は、処置の１日目に開始し、６から１６日間、例えば７から１６日間、例えば８から
１６日間、例えば８から１３日間継続する、ＦＳＨの（連日）投与のためのものであって
よい。不妊症の処置は、患者のＦＳＨ受容体の６８０位でのバリアントを同定する（例え
ば決定する、例えば測定する）ステップ、およびＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳ
ｅｒ／Ｓｅｒを有する（と同定された）患者に用量を投与するステップを含んでよい。不
妊症の処置は、患者の血清ＡＭＨレベルを同定する（例えば決定する、例えば測定する）
ステップおよび、１５ｐｍｏｌ／Ｌ未満の血清ＡＭＨレベル（例えば０．０５ｐｍｏｌ／
Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）を有する（と同定された）患者に用量を投与するステップ
を含んでよい。

ＦＳＨは組換えＦＳＨであってよい。ＦＳＨは、α２，３－およびα２，６－シアル酸
付加を含む組換えＦＳＨであってよい。ＦＳＨは、全シアル酸付加の１から９９％がα２
，６－シアル酸付加であり、全シアル酸付加の９９％から１％がα２，３－シアル酸付加
である、α２，３－およびα２，６－シアル酸付加を含む組換えＦＳＨであってよい。Ｆ
ＳＨは、全シアル酸付加の１から５０％がα２，６－シアル酸付加であり、全シアル酸付
加の５０％から９９％がα２，３－シアル酸付加である、α２，３－およびα２，６－シ
アル酸付加を含む組換えＦＳＨであってよい。ＦＳＨは、全シアル酸付加の５から４０％
がα２，６－シアル酸付加であり、全シアル酸付加の６０％から９５％がα２，３－シア
ル酸付加である、α２，３－およびα２，６－シアル酸付加を含む組換えＦＳＨであって
よい。好ましくは、ＦＳＨはヒト細胞株由来組換えＦＳＨである。

本発明によるさらなる態様では、血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０
５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）を有し、かつＦＳＨ受容体の６８０位にバリ
アントＳｅｒ／Ｓｅｒを有する患者における不妊症の処置における使用のための卵胞刺激
ホルモン（ＦＳＨ）を含む組成物（例えば医薬組成物）であって、１日あたり９から２４
μｇの用量または相当量の組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）が投与され、不妊症の処置
が、患者の血清ＡＭＨレベルを同定する（例えば決定する）ステップ、患者のＦＳＨ受容
体の６８０位でのバリアントを同定するステップ、ならびに血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍ
ｏｌ／Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）およびＦＳＨ受容体
の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有する（と同定された）患者に組成物を投与す
るステップを含む、組成物が提供される。組成物は、９から２４μｇのＦＳＨ、例えば１
０から１８μｇのＦＳＨ、例えば１２から１６μｇのＦＳＨ、例えば１２から１５μｇの
ＦＳＨを含んでよい。組成物は、１２μｇ超のＦＳＨ、例えば１２．３から２４μｇのＦ
ＳＨ、例えば１２．３３から２４μｇのＦＳＨ、例えば１２．６７から２４μｇのＦＳＨ
、例えば１３から２４μｇのＦＳＨ、例えば１３から１６μｇのＦＳＨ、例えば１３から
１５μｇのＦＳＨを含んでよい。

組成物（例えば医薬組成物）は、血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０
５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）を有し、かつＦＳＨ受容体の６８０位にバリ
アントＳｅｒ／Ｓｅｒを有する患者における不妊症の処置における使用のためのものであ
ってよい［不妊症の処置は、患者の血清ＡＭＨレベルを同定する（例えば決定する）ステ
ップ、患者のＦＳＨ受容体の６８０位でのバリアントを同定するステップ、および血清Ａ
ＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ
）およびＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有する（と同定された）
患者に用量を投与するステップを含む］。

ＦＳＨは組換えＦＳＨであってよい。ＦＳＨは、α２，３－およびα２，６－シアル酸
付加を含む組換えＦＳＨであってよい。ＦＳＨは、全シアル酸付加の１から９９％がα２
，６－シアル酸付加であり、全シアル酸付加の９９％から１％がα２，３－シアル酸付加
である、α２，３－およびα２，６－シアル酸付加を含む組換えＦＳＨであってよい。Ｆ
ＳＨは、全シアル酸付加の１から５０％がα２，６－シアル酸付加であり、全シアル酸付
加の５０％から９９％がα２，３－シアル酸付加である、α２，３－およびα２，６－シ
アル酸付加を含む組換えＦＳＨであってよい。ＦＳＨは、全シアル酸付加の５から４０％
がα２，６－シアル酸付加であり、全シアル酸付加の６０％から９５％がα２，３－シア
ル酸付加である、α２，３－およびα２，６－シアル酸付加を含む組換えＦＳＨであって
よい。好ましくは、ＦＳＨはヒト細胞株由来組換えＦＳＨである。

用量は、ＯＨＳＳの危険を最少化する一方で効果的な応答をもたらす。

上の用量は、患者の（対象の）初回刺激プロトコールでの不妊症の処置のためのもので
あってよい。さらなる刺激周期のために、用量が初回周期での実際の卵巣の応答に応じて
調整され得ることは理解される。

ｒＦＳＨは、単一のアイソフォームとしてまたはアイソフォームの混合物として存在し
てよい。

本出願者らは、組換えＦＳＨの特定の用量が、患者の特定のＡＭＨレベルおよびＦＳＨ
Ｒ単一ヌクレオチド多型に基づいて、患者を処置するために使用され、それにより刺激へ
の適当な応答の見込みを増加させ（例えば応答可能性が低い患者において）、および／ま
たはＯＨＳＳもしくは他の副作用の危険を減少させる、「個別化」ＣＯＳプロトコールを
発明した。

ＡＭＨの血清レベルは、当技術分野において周知の任意の方法によって決定（例えば測
定）され得る。一例として、血清ＡＭＨレベルは、ＡＭＨ Ｇｅｎ－ＩＩ ｅｎｚｙｍｅ
ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙキット（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃ
ｏｕｌｔｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｗｅｂｓｔｅｒ、Ｔｅｘａｓ）を使用して測定される。このア
ッセイは、１．１ｐｍｏｌ／Ｌを定量の最少限度として、０．５７ｐｍｏｌ／Ｌより高い
ＡＭＨ濃度を検出できる。他のアッセイも使用され得る。本明細書において、血清ＡＭＨ
値は一般にｐｍｏｌ／Ｌの単位で記されている。これは、変換式１ｎｇ／ｍｌ ＡＭＨ＝
７．１ｐｍｏｌ／Ｌ ＡＭＨを使用して、ｎｇ／ｍＬに変換され得る。

したがって組成物は、Ｂｅｃｋｍａｎｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｇｅｎ－ＩＩ ｅｎｚｙｍ
ｅ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙを使用して測定したときの
血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏ
ｌ／Ｌ）、または異なる方法によって測定される同等なＡＭＨレベルを有すると同定され
た（例えば、として選択された）患者への（例えば連日の）投与のためのものであってよ
い。

本明細書において用語「患者」および「対象」は、互換的に用いられる。

組成物（例えば医薬組成物）は好ましくは、上に、本明細書におよび特許請求の範囲に
定義のヒト由来ｒＦＳＨの量の日用量または相当する日用量を含む。（日）用量は初回量
であってよい（すなわちそれは処置の際に低減、増加または維持されてよい）。

ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有すると同定された患者は、当
技術分野において周知の手段によって、例えば当技術分野において周知の方法によるゲノ
ムＤＮＡの抽出に続く、ＦＳＨ受容体の６８０位での対立遺伝子バリアントの同定によっ
て同定され得る［例えば、Ｇｒｏｍｏｌｌ ｅｔ ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２１，８３～
９７（２０００），Ｓｉｍｏｎｉ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａ
ｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，Ｖｏｌ ８４，Ｎｏ
．２，７５１～７５５（１９９９），Ｆａｌｃｏｎｅｒ ｅｔ ａｌ，Ａｃｔａ Ｏｂｓ
ｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｓｃａｎｄ ２００５：８４：８０６～８１１（２００５）お
よびその参考文献に記載の、血液からのゲノムＤＮＡの抽出のためのキットおよび続くＤ
ＮＡ配列決定の手段による、またはＤＮＡ抽出に続く、１本鎖コンホメーション多型（Ｓ
ＳＣＰに続くゲル電気泳動など）、もしくはＬｏｕｔｒａｄｉｓ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏｆ Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｓ，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４，Ａｐｒｉｌ ２００６に記載されているようなＰＣＲおよ
びＲＦＬＰ法による］。それにより組成物は、ゲノムＤＮＡの抽出（例えば血液から）と
、Ｌｏｕｔｒａｄｉｓ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｒｅｐ
ｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４，Ａｐｒｉｌ
２００６に記載されているような、それに続くＰＣＲおよびＲＦＬＰ法または同等の方
法による分析とによって測定したときに、ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／
Ｓｅｒを有すると同定された（例えば、として選択された）患者への（例えば連日の）投
与のためのものであってよい。

組成物（例えば医薬組成物）は、処置の１日目に開始し、６から１６日間、例えば７か
ら１６日間、例えば８から１６日間、例えば８から１３日間継続するＦＳＨの（連日）投
与のためのものであってよい。組成物（例えば医薬組成物）は、ＧｎＲＨアゴニスト（例
えばＳｙｎａｒｅｌ、Ｌｕｐｒｏｎ、Ｄｅｃａｐｅｐｔｙｌ）の投与から（例えば投与の
開始から、例えば連日投与の開始から）１２から１６日後、例えば１３から１５日後、例
えば１４日後の投与のためのものであってよい。組成物（例えば医薬組成物）は、ＧｎＲ
Ｈアゴニストを伴う投与のためのものであってよい。組成物（例えば医薬組成物）は、Ｇ
ｎＲＨアンタゴニスト（例えばｇａｎｉｒｅｌｉｘ、ｃｅｔｒｏｒｅｌｉｘ）の投与の前
の投与、例えばＧｎＲＨアンタゴニストの投与の５または６日前の投与のためのものであ
ってよい。組成物（例えば医薬組成物）は、ＧｎＲＨアンタゴニストを伴う投与のための
ものであってよい。組成物（例えば医薬組成物）は、処置の６日目から（例えば連日）投
与されるＧｎＲＨアンタゴニスト（例えばｇａｎｉｒｅｌｉｘ、ｃｅｔｒｏｒｅｌｉｘ）
を伴う投与のためのものであってよい。好ましくは組成物（例えば医薬組成物）は、最終
的な卵胞成熟を誘発するためのｈＣＧの高用量（排卵性）（例えば４，０００から１１，
０００ＩＵのｈＣＧ、例えば５，０００ＩＵのｈＣＧ、１０，０００ＩＵのｈＣＧなど、
または１５０から３５０マイクログラムの組換えｈＣＧ、例えば２５０マイクログラムの
組換えｈＣＧ）の投与の前の投与のためのものである。

組成物が連日より多い（または少ない）頻度での投薬のためのものであってよいことは
理解され、その場合、妥当な用量は本明細書に明記する（日）用量に相当する。

本明細書における用語「不妊症の処置」は、調節卵巣刺激法（ＣＯＳ）、または調節卵
巣刺激法（ＣＯＳ）のステップもしくは段階を含む方法による不妊症の処置、例えば子宮
腔内人工授精（ＩＵＩ）、体外受精（ＩＶＦ）、または細胞質内精子注入法（ＩＣＳＩ）
を含む。用語「不妊症の処置」は、排卵誘発（ＯＩ）によるまたは排卵誘発（ＯＩ）のス
テップもしくは段階を含む方法による不妊症の処置を含む。用語「不妊症の処置」は、子
宮内膜症、例えばステージＩもしくはステージＩＩ子宮内膜症を有する対象、および／ま
たは無排卵性不妊症、例えばＷＨＯ ＩＩ型無排卵不妊症を有する対象、および／または
男性不妊症を有するパートナーを有する対象における不妊症の処置を含めて、卵管性また
は原因不明不妊症を有する対象における不妊症の処置を含む。組成物は、子宮内膜症を有
する対象、例えば子宮内膜症の種々のステージについてＴｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏ
ｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＡＳＲＭ）分類系
によって定義された（ステージＩＶは最も重度、ステージＩは最も軽度）ステージＩもし
くはステージＩＩ子宮内膜症を有する対象における不妊症の処置（および／または調節卵
巣刺激のため）（における使用）のためのものであり得る［Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉ
ｅｔｙ ｆｏｒ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｒｅｖｉｓｅｄ Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ：１９９６．Ｆｅ
ｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ １９９７；６７，８１７ ８２１］。

組成物は、初期卵胞相において１から１６ＩＵ／Ｌ、例えば１から１２ＩＵ／Ｌの正常
血清ＦＳＨレベルを有する対象における不妊症の処置（および／または調節卵巣刺激）（
における使用）のためのものであってよい。

組成物は、年齢１８から４２歳、例えば２５から３７歳として同定された対象における
不妊症の処置（および／または調節卵巣刺激）（における使用）のためのものであってよ
い。産生物は、ＢＭＩ＞１５からＢＭＩ＜３８ｋｇ／ｍ^２を有すると同定された対象、例
えばＢＭＩ＞１８かつＢＭＩ＜２５ｋｇ／ｍ^２を有すると同定された対象、例えばＢＭＩ
＞２０かつＢＭＩ＜２５ｋｇ／ｍ^２を有する対象における不妊症の処置（および／または
調節卵巣刺激）（における使用）のためのものであってよい。

ｒＦＳＨは［シアル酸のモルのタンパク質のモルに対する比を単位として表した］６ｍ
ｏｌ／ｍｏｌ以上、例えば６ｍｏｌ／ｍｏｌから１５ｍｏｌ／ｍｏｌの間、例えば８ｍｏ
ｌ／ｍｏｌから１４ｍｏｌ／ｍｏｌの間、例えば９ｍｏｌ／ｍｏｌから１４ｍｏｌ／ｍｏ
ｌの間、例えば１０ｍｏｌ／ｍｏｌから１４ｍｏｌ／ｍｏｌの間、例えば１１ｍｏｌ／ｍ
ｏｌから１４ｍｏｌ／ｍｏｌの間、例えば１２ｍｏｌ／ｍｏｌから１４ｍｏｌ／ｍｏｌの
間、例えば１２ｍｏｌ／ｍｏｌから１３ｍｏｌ／ｍｏｌの間のシアル酸含有量を有してよ
い。ｒＦＳＨは、ヒト細胞株において産生または発現され得る。

本発明による使用のためのＦＳＨ（ｒＦＳＨ）は、全シアル酸付加の１％から９９％が
α２，３－シアル酸付加であってよい。ｒＦＳＨは、全シアル酸付加の１０％以上がα２
，３－シアル酸付加であってよい。例えば全シアル酸付加の２０、３０、４０、５０、６
０、７０、８０または９０％以上がα２，３－シアル酸付加であってよい。ｒＦＳＨは、
全シアル酸付加の５０から９５％、例えば全シアル酸付加の５０から７０％、例えば全シ
アル酸付加の６０から６９％、例えば６３から６７％、例えば全シアル酸付加のおよそ６
５％の量でα２，３－シアル酸付加を好ましくは含んでよい。本発明による使用のための
ＦＳＨ（ｒＦＳＨ）は、全シアル酸付加の１％から９９％がα２，６－シアル酸付加であ
ってよい。本発明のｒＦＳＨ（またはｒＦＳＨ調製物）は、全シアル酸付加の５％以上、
例えば５％から９９％、例えば５％から５０％がα２，６－シアル酸付加であってよい。
ｒＦＳＨは、全シアル酸付加の５０％以下がα２，６－シアル酸付加であってよい。ｒＦ
ＳＨは、全シアル酸付加の５から５０％、例えば全シアル酸付加の１０から５０％、例え
ば３１から３８％、例えば全シアル酸付加のおよそ３５％の量でα２，６－シアル酸付加
を好ましくは含んでよい。シアル酸付加によって、ＦＳＨ炭水化物構造に存在するシアル
酸残基の量が意味される。α２，３－シアル酸付加は、２，３位でのシアル酸付加（当技
術分野において周知のとおり）および２，６位でのα２，６シアル酸付加（同様に当技術
分野において周知のとおり）が意味される。したがって「全シアル酸付加の…％がα２，
３シアル酸付加であってよい」は、ＦＳＨ中に存在するシアル酸残基の総数における２，
３位でシアル酸付加の％を指す。用語「全シアル酸付加の…％がα２，６－シアル酸付加
である」は、ＦＳＨ中に存在するシアル酸残基の総数における２，６位でシアル酸付加の
％を指す。

ｒＦＳＨは、質量で（タンパク質に加えて炭水化物の質量ではなくタンパク質の質量に
基づいて）６％以上（例えば６％から１５％の間、例えば７％から１３％の間、例えば８
％から１２％の間、例えば１１％から１５％の間、例えば１２％から１４％の間）のシア
ル酸含有量（ＦＳＨ分子あたりのシアル酸付加の量）を有してよい。

ｒＦＳＨは、ヒト細胞株、例えばＰｅｒ．Ｃ６細胞株、ＨＴ１０８０細胞株などにおい
て産生または発現されてよい。これは、シアル酸付加を維持するための、例えば細胞増殖
培地の、操作および管理が公知のプロセスよりもあまり重要でない場合があることから、
産生方法を簡便化（およびさらに効率的に）できる。方法は、公知のｒＦＳＨ産生物の産
生と比較して塩基性ｒＦＳＨがあまり産生されず、酸性ｒＦＳＨが多く産生され、塩基性
ＦＳＨの分離／除去が問題になりにくいことから、さらに効率的になり得る。ｒＦＳＨは
、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）由来細胞株または改変Ｐ
ＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞株において産生および発現されてよい。ヒト細胞株（例えば
ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞株、ＨＴ１０８０細胞株など）において産生または発現さ
れるｒＦＳＨは、［細胞株の］内在性シアル酸転移酵素活性によって提供されるいくらか
のα２，６－連結シアル酸（α２，６シアル酸付加）を含み、内在性シアル酸転移酵素活
性によって提供されるいくらかのα２，３－連結シアル酸（α２，３シアル酸付加）を含
む。細胞株は、α２，３－シアル酸転移酵素を使用して改変されてよい。細胞は、α２，
６－シアル酸転移酵素を使用して改変されてよい。代替的にまたは追加的に、ｒＦＳＨは
、［細胞株の］内在性シアル酸転移酵素活性によって提供されるα２，６－連結シアル酸
（α２，６シアル酸付加）を含んでよい。本明細書において用語「ヒト由来組換えＦＳＨ
」は、ヒト細胞株において産生または発現される組換えＦＳＨ（例えばヒト細胞株を操作
することによって作られた組換えＦＳＨ）を意味する。

ｒＦＳＨは、α２，３－および／またはα２，６－シアル酸転移酵素を使用して産生さ
れ得る。一例では、ｒＦＳＨはα２，３－シアル酸転移酵素を使用して産生される。ｒＦ
ＳＨは、内在性シアル酸転移酵素活性によってもたらされたα２，６－連結シアル酸（α
２，６シアル酸付加）を含んでよい。

組成物は、医薬組成物であってよい。医薬組成物は、不妊症の処置のためのものである
。不妊症の処置は、生殖補助技術（ＡＲＴ）、排卵誘発または子宮腔内受精（ＩＵＩ）を
含んでよい。医薬組成物は、例えば公知のＦＳＨ調製物が使用される場合、医学的適用で
使用されてよい。

産生物または組成物は、任意の経路の薬物投与、例えば経口、直腸内、非経口、経皮（
例えばパッチ技術）、静脈内、筋肉内、皮下、胸骨内〔intrasusternal〕、膣内、腹腔内
、局所（散剤、軟膏もしくは滴下剤）またはバッカルもしくは鼻内噴霧のための周知の組
成物に製剤化されてよい。典型的な組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃ
ｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｆｉｆｔｅｅｎｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｔｔ
Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９７５）の１４０５から１４１２頁および１
４６１～８７頁ならびにｔｈｅ ｎａｔｉｏｎａｌ ｆｏｒｍｕｌａｒｙ ＸＩＶ ｆｏ
ｕｒｔｅｅｎｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，１９７５）に記載されているような、水溶液、塩および保存
剤を含む無毒性賦形剤、緩衝剤などの薬学的に許容される担体を含む。

好適な水性および非水性医薬用担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例は、水、エタノ
ール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど
）、カルボキシメチルセルロースおよびその好適な混合物、植物油（オリーブ油など）お
よびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルを含む。本発明の組成物は、これだ
けに限らないが、保存剤、湿潤剤、乳化剤、界面活性剤および分散剤などの添加物も含有
することができる。抗菌剤および抗真菌剤は、微生物の増殖を防ぐために含めることがで
き、例えば、ｍ－クレゾール、ベンジルアルコール、パラベン、クロロブタノール、フェ
ノール、ソルビン酸などを含む。保存剤が含まれる場合、ベンジルアルコール、フェノー
ルおよび／またはｍ－クレゾールは好ましい、しかし保存剤は決してこれらの例に限定さ
れない。さらに、糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことが望ましい場合がある。産
生物または組成物は、Ｎａ^＋もしくはＫ^＋塩からなる群から選択される薬学的に許容され
るアルカリ金属カチオンまたはこれらの組合せを含む塩をさらに含む場合がある。好まし
くは塩は、Ｎａ^＋塩、例えばＮａＣｌまたはＮａ_２ＳＯ_４である。

好ましくは産生物または組成物は、組換えＦＳＨならびにポリソルベート２０、Ｌ－メ
チオニン、フェノール、硫酸二ナトリウムおよびリン酸ナトリウム緩衝剤の１つまたは複
数を含む。

一部の場合、持続性作用をもたらすことは、皮下または筋肉内注射からＦＳＨ（および
存在する場合は他の活性成分）の吸収を遅らせるために望ましい。これは、水溶性が乏し
い結晶またはアモルファス物質の液体懸濁物の使用によって達成することができる。次い
でＦＳＨの吸収速度は溶解の速度に依存し、今度は結晶サイズおよび結晶形態に依存させ
ることができる。代替的に、非経口投与されたＦＳＨ組合せ形態の吸収の遅延は、ＦＳＨ
組合せを油ビヒクル中に溶解するまたは懸濁することによって達成される。注射可能なデ
ポー形態は、ポリ乳酸ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中にＦＳＨ（および存在す
る場合は他の活性成分）のマイクロカプセル化マトリクスを形成することによって作製す
ることができる。ＦＳＨのポリマーに対する比および用いられる具体的なポリマーの性質
に応じて、ＦＳＨの放出速度は調節することができる。他の生分解性ポリマーの例は、ポ
リビニルピロリドン、ポリ（オルトエステル）、ポリ（無水物）などを含む。注射可能な
デポー製剤は、身体組織に適合性であるリポソームまたはマイクロエマルジョン中にＦＳ
Ｈを捕捉することによっても調製される。

注射可能な製剤は、例えば細菌保持フィルターを通す濾過によって、または滅菌水もし
くは他の滅菌注射可能な媒体に使用直前に溶解もしくは分散することができる滅菌固体組
成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって、滅菌することができる。注射可能製剤は、
任意の好適な容器内、例えばバイアル、プレフィルドシリンジ、注射カートリッジなどで
供給することができる。

産生物または組成物は、単回使用のためまたは複数回使用（複数用量）のために製剤化
されてよい。産生物または組成物が複数回使用のために製剤化される場合、保存剤が含ま
れることが好ましい。保存剤が含まれる場合、ベンジルアルコール、フェノールおよび／
またはｍ－クレゾールは好ましいが、保存剤はこれらの例に決して限定されない。単回使
用または複数回使用に製剤化された産生物または組成物は、Ｎａ^＋もしくはＫ^＋塩からな
る群から選択される薬学的に許容されるアルカリ金属カチオンまたはこれらの組合せを含
む塩をさらに含んでよい。好ましくは塩はＮａ^＋塩、例えばＮａＣｌまたはＮａ_２ＳＯ_４
である。

産生物または組成物は、バイアル、プレフィルドカートリッジ（例えば単回投与用もし
くは複数回使用のため）または例えば複数用量の投与のための「ペン」などの注射デバイ
スなどの容器に含めてもよい。

産生物または組成物は、ＦＳＨ（任意選択でｈＣＧ、ＬＨ、ＬＨ活性などと共に）を含
む製剤（例えば注射可能な製剤）であってよい。存在する場合ＬＨ活性は、ＬＨまたはヒ
ト絨毛性ゴナドトロピン、ｈＣＧから生じてよい。１つより多い活性成分（すなわちＦＳ
Ｈおよび例えばｈＣＧまたはＬＨ）がある場合、これらは、別々または一緒での投与のた
めに好適なものとなり得る。別々に投与される場合、投与は逐次的にすることができる。
産生物は、任意の好適なパッケージで供給することができる。例えば産生物は、ＦＳＨも
しくはｈＣＧまたはＦＳＨおよびｈＣＧの両方の１つの組合せ（または組合せ）を含有す
る多数の容器（例えばプレフィルドシリンジまたはバイアル）を含むことができる。ｈＣ
Ｇは、組換えｈＣＧまたは尿由来ｈＣＧであってよい。産生物がＦＳＨ、例えば組換えＦ
ＳＨを含有する多数の容器（例えばプレフィルドシリンジまたはバイアル）を含む場合、
各容器は同じ量のＦＳＨを含んでよい。１つまたは複数の容器は異なる量のＦＳＨを含ん
でよい。シリンジまたはバイアルは、ブリスターパッケージまたは滅菌性を維持するため
の他の手段にパッケージされてよい。任意の産生物は、ＦＳＨ（および例えば存在する場
合はｈＣＧ）製剤を使用するための説明書を任意選択で含むことができる。医薬組成物の
種々の構成成分のｐＨおよび正確な濃度は、本分野の日常的習慣により調整される。ＧＯ
ＯＤＭＡＮ ａｎｄ ＧＩＬＭＡＮ’ｓ ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ Ｂ
ＡＳＩＳ ＦＯＲ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＥＳ、７^ｔｈ ｅｄを参照されたい。好まし
い実施形態では、本発明の組成物は非経口投与のための組成物として供給される。非経口
製剤の調製のための一般的方法は当技術分野において公知であり、上記ＲＥＭＩＮＧＴＯ
Ｎ；ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹの７
８０～８２０頁に記載されている。非経口組成物は、液体製剤でまたは投与の直前に滅菌
注射可能媒体と混合される固体として供給することができる。特に好ましい実施形態では
、非経口組成物は投与の簡便性および投薬の均一性のために単位投与形態で供給される。

本発明によるさらなる態様では、不妊症［例えば血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ
（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）およびＦＳＨ受容体の６８０
位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有する患者における不妊症］の処置方法であって、
（ａ）患者の血清ＡＭＨレベルを同定する（例えば決定する）こと、
（ｂ）患者のＦＳＨ受容体の６８０位でのバリアントを同定すること、ならびに（ｃ）血
清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ
／Ｌ）およびＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有する（と同定され
た）患者に１日あたり９から２４μｇの用量または相当量の組換え卵胞刺激ホルモン（Ｆ
ＳＨ）を投与することを含む、不妊症の処置方法が提供される。組成物は、９から２４μ
ｇのＦＳＨ、例えば１０から１８μｇのＦＳＨ、例えば１２から１６μｇのＦＳＨ、例え
ば１２から１５μｇのＦＳＨを含んでよい。組成物は、１２μｇ超のＦＳＨ、例えば１２
．３から２４μｇのＦＳＨ、例えば１２．３３から２４μｇのＦＳＨ、例えば１２．６７
から２４μｇのＦＳＨ、例えば１３から２４μｇのＦＳＨ、例えば１３から１６μｇのＦ
ＳＨ、例えば１３から１５μｇのＦＳＨを含んでよい。

ＦＳＨの投与は、処置の１日目に開始され、６から１６日間、例えば７から１６日間、
例えば８から１６日間、例えば８から１３日間継続してよい。

ＦＳＨは組換えＦＳＨであってよい。ＦＳＨは、α２，３－およびα２，６－シアル酸
付加を含む組換えＦＳＨであってよい。ＦＳＨは、全シアル酸付加の１から９９％がα２
，６－シアル酸付加であり、全シアル酸付加の９９％から１％がα２，３－シアル酸付加
である、α２，３－およびα２，６－シアル酸付加を含む組換えＦＳＨであってよい。Ｆ
ＳＨは、全シアル酸付加の１から５０％がα２，６－シアル酸付加であり、全シアル酸付
加の５０％から９９％がα２，３－シアル酸付加である、α２，３－およびα２，６－シ
アル酸付加を含む組換えＦＳＨであってよい。ＦＳＨは、全シアル酸付加の５から４０％
がα２，６－シアル酸付加であり、全シアル酸付加の６０％から９５％がα２，３－シア
ル酸付加である、α２，３－およびα２，６－シアル酸付加を含む組換えＦＳＨであって
よい。好ましくは、ＦＳＨはヒト細胞株由来組換えＦＳＨである。

投与は好ましくは、上におよび特許請求の範囲に定義のＦＳＨの量の日用量または相当
する日用量を含む。（日）用量は初回量であってよい（すなわちそれは処置の際に低減、
増加または維持されてよい）。

方法は、患者の（対象の）初回刺激プロトコールにおける不妊症の処置方法であってよ
い。さらなる刺激周期のために、用量が初回周期での実際の卵巣の応答に応じて調整され
得ることは理解される。

本発明によるさらなる態様では、９から２４μｇの卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）を含む
、不妊症の処置のための医薬品の製造における使用のためのＦＳＨを含む組成物（例えば
医薬組成物）が提供され、医薬品は（処置前に）ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳ
ｅｒ／Ｓｅｒを有すると同定された（例えば、として選択された）患者への（例えば連日
の）投与のためのものである。医薬品は、ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／
Ｓｅｒを有すると同定され（例えば、として選択され）、かつ（処置前に）血清ＡＭＨレ
ベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ））を
有すると同定された（例えば、として選択された）患者への（例えば連日の）投与のため
のものであってよい。組成物は、９から２４μｇのＦＳＨ、例えば１０から１８μｇのＦ
ＳＨ、例えば１２から１６μｇのＦＳＨ、例えば１２から１５μｇのＦＳＨを含んでよい
。組成物は、１２μｇ超のＦＳＨ、例えば１２．３から２４μｇのＦＳＨ、例えば１２．
３３から２４μｇのＦＳＨ、例えば１２．６７から２４μｇのＦＳＨ、例えば１３から２
４μｇのＦＳＨ、例えば１３から１６μｇのＦＳＨ、例えば１３から１５μｇのＦＳＨを
含んでよい。

本出願者らは、低ＡＭＨ［ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ
／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）、一般に低応答と関連付けられる］を有する、またＦＳ
Ｈ受容体の６８０位にバリアントＡｓｎ／ＡｓｎまたはバリアントＡｓｎ／Ｓｅｒを有す
ると同定された患者へのＦＳＨの投与が卵胞発育に関して良好な応答をもたらすことも見
出した。これは、低ＡＭＨおよびＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを
有する患者の処置と比較して、ＦＳＨの投薬量の低減および／または処置期間の低減を伴
って達成される。これは、特定のＡＭＨレベル、またＦＳＨＲにこれらの特定の多型を有
すると同定された、特定の患者においてＦＳＨの用量を調整できるようにする。下に記載
のとおり、ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／ＬおよびバリアントＡｓｎ／Ａｓｎを有する患
者への刺激の予測継続期間は、ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／ＬおよびバリアントＳｅｒ
／Ｓｅｒを有する患者について必要な刺激継続期間より１．５日間短い（図７を参照され
たい）。したがって、処置前にＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／ＬおよびバリアントＡｓｎ
／Ａｓｎの両方（またはＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／ＬおよびバリアントＡｓｎ／Ｓｅ
ｒの両方）を有すると同定された患者への用量を調整することは、薬剤費の観点では大幅
な節約、およびこれらの患者において必要とされるよりも高い合計用量のＦＳＨの投与に
よる潜在的副作用の危険の低減を可能にし得る。

本発明によるさらなる態様では、１０から１２μｇの卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）を含
む不妊症の処置における使用のための組成物（例えば医薬組成物）であって、（処置前に
）ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＡｓｎ／ＡｓｎまたはバリアントＡｓｎ／Ｓｅｒ
を有すると同定された（として選択された）患者への（例えば連日の）投与のための組成
物が提供される。組成物は、ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＡｓｎ／Ａｓｎまたは
バリアントＡｓｎ／Ｓｅｒを有すると同定され（例えば、として選択され）、かつ（処置
前に）血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９
ｐｍｏｌ／Ｌ）を有すると同定された（例えば、として選択された）患者への（例えば連
日の）投与のためのものであってよい。組成物は、ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアント
Ａｓｎ／Ａｓｎを有すると同定され（例えば、として選択され）、かつ（処置前に）血清
ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／
Ｌ）を有すると同定された（例えば、として選択された）、患者への投与のためのもので
あってよい。組成物は、１０から１２μｇ未満のＦＳＨ、例えば１０から１１．９μｇの
ＦＳＨ、例えば１１から１１．９μｇのＦＳＨ、例えば１１．３３または１１．６７μｇ
のＦＳＨを含んでよい。

組成物（例えば医薬組成物）は、上に、本明細書におよび特許請求の範囲に定義のヒト
由来ｒＦＳＨの量の日用量または相当する日用量を含んでよい。組成物（例えば医薬組成
物）は、処置の１日目に開始し、６から１６日間、例えば７から１６日間、例えば８から
１６日間、例えば８から１３日間継続する、ＦＳＨの（連日）投与のためのものであって
よい。

不妊症の処置は、患者のＦＳＨ受容体の６８０位でのバリアントを同定する（例えば決
定する、例えば測定する）ステップ、およびＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＡｓｎ
／ＡｓｎまたはバリアントＡｓｎ／Ｓｅｒを有する（と同定された）患者に用量を投与す
るステップを含んでよい。不妊症の処置は、患者の血清ＡＭＨレベルを同定する（例えば
決定する、例えば測定する）ステップ、および１５ｐｍｏｌ／Ｌ未満の血清ＡＭＨレベル
（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）を有する（と同定された）患
者に用量を投与するステップを含んでよい。

本発明によるさらなる態様では、血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０
５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）を有し、かつＦＳＨ受容体の６８０位にバリ
アントＡｓｎ／ＡｓｎまたはバリアントＡｓｎ／Ｓｅｒを有する患者における不妊症の処
置における使用のための卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）を含む組成物（例えば医薬組成物）
であって、１日あたり１０から１２μｇの用量または相当量の組換えＦＳＨが投与され、
不妊症の処置が、患者の血清ＡＭＨレベルを同定する（例えば決定する）ステップ、患者
のＦＳＨ受容体の６８０位でのバリアントを同定するステップ、ならびに血清ＡＭＨレベ
ル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）および
ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＡｓｎ／ＡｓｎまたはバリアントＡｓｎ／Ｓｅｒを
有する（と同定された）患者に組成物を投与するステップを含む、組成物が提供される。
組成物は、１０から１２μｇ未満のＦＳＨ、例えば１０から１１．９μｇのＦＳＨ、例え
ば１１から１１．９μｇのＦＳＨ、例えば１１．３３または１１．６７μｇのＦＳＨを含
んでよい。

組成物（例えば医薬組成物）は、血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０
５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）を有し、かつびＦＳＨ受容体の６８０位にバ
リアントＡｓｎ／Ａｓｎを有する患者における不妊症の処置における使用のためのもので
あってよい［不妊症の処置は、患者の血清ＡＭＨレベルを同定する（例えば決定する）ス
テップ、患者のＦＳＨ受容体の６８０位でのバリアントを同定するステップ、ならびに血
清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ
／Ｌ）およびＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＡｓｎ／Ａｓｎを有する（と同定され
た）患者に用量を投与するステップを含む］。

本発明によるさらなる態様では、不妊症［例えば、血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／
Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）を有し、かつＦＳＨ受容体
の６８０位にバリアントＡｓｎ／ＡｓｎまたはバリアントＡｓｎ／Ｓｅｒを有する患者に
おける不妊症］の処置方法であって、（ａ）患者の血清ＡＭＨレベルを同定する（例えば
決定する）こと、（ｂ）患者のＦＳＨ受容体の６８０位でのバリアントを同定すること、
ならびに（ｃ）血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから
１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）およびＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＡｓｎ／Ａｓｎまた
はバリアントＡｓｎ／Ｓｅｒを有する（と同定された）患者に１日あたり１０から１２μ
ｇの用量または相当量の組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）を投与するステップを含む、
不妊症の処置方法が提供される。組成物は、１０から１２μｇ未満のＦＳＨ、例えば１０
から１１．９μｇのＦＳＨ、例えば１１から１１．９μｇのＦＳＨ、例えば１１．３３ま
たは１１．６７μｇのＦＳＨを含んでよい。

ＦＳＨの投与は、処置の１日目に開始され、６から１３日間、例えば７から１３日間、
例えば８から１３日間、例えば８から１１日間継続してよい。

本発明によるさらなる態様では、不妊症の処置のための医薬品の製造における使用のた
めのＦＳＨを含む組成物（例えば医薬組成物）であって、１０から１２μｇの卵胞刺激ホ
ルモン（ＦＳＨ）を含み、医薬品が（処置前に）ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＡ
ｓｎ／ＡｓｎまたはバリアントＡｓｎ／Ｓｅｒを有すると同定された（として選択された
）患者への（例えば連日の）投与のための組成物が提供される。医薬品は、ＦＳＨ受容体
の６８０位にバリアントＡｓｎ／ＡｓｎまたはバリアントＡｓｎ／Ｓｅｒを有すると同定
され（例えば、として選択され）、かつ（処置前に）血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／
Ｌ（例えば０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）を有すると同定された（例
えば、として選択された）患者への（例えば連日の）投与のためのものであってよい。医
薬品は、ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＡｓｎ／Ａｓｎを有すると同定され（例え
ば、として選択され）、かつ（処置前に）血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば
０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）を有すると同定された（例えば、とし
て選択された）患者への投与のためのものであってよい。組成物は、１０から１２μｇ未
満のＦＳＨ、例えば１０から１１．９μｇのＦＳＨ、例えば１１から１１．９μｇのＦＳ
Ｈ、例えば１１．３３または１１．６７μｇのＦＳＨを含んでよい。

本発明のこれらの態様に関するＦＳＨ、患者の血清ＡＭＨレベルおよびＦＳＨ受容体の
６８０位でのバリアントの同定などは、本明細書に列挙する本発明の他の態様についても
同様であってよいことは理解される。

発明の詳細な記載
本発明は、添付の図を参照してここにより詳細に記載される。

配列選択
ヒトＦＳＨ
ＦＳＨアルファポリペプチドに対する遺伝子のコード領域は、Ｆｉｄｄｅｓ ａｎｄ
Ｇｏｏｄｍａｎ（１９８１）に従って使用された。配列はＡＨ００７３３８として預けら
れ、構築時にこのタンパク質配列の他のバリアントはなかった。配列は本明細書において
配列番号１と称される。

ＦＳＨベータポリペプチドに対する遺伝子のコード領域は、Ｋｅｅｎｅ ｅｔ ａｌ（
１９８９）に従って使用された。配列はＮＭ＿０００５１０として預けられ、構築時にこ
のタンパク質配列の他のバリアントはなかった。配列は本明細書において配列番号２と称
される。

シアル酸転移酵素
α２，３－シアル酸転移酵素 － ベータガラクトシドアルファ－２，３－シアル酸転
移酵素４（α２，３－シアル酸転移酵素、ＳＴ３ＧＡＬ４）に対する遺伝子のコード領域
は、Ｋｉｔａｇａｗａ ａｎｄ Ｐａｕｌｓｏｎ（１９９４）に従って使用された。配列
はＬ２３７６７として預けられ、本明細書において配列番号３と称される。

α２，６－シアル酸転移酵素 － ベータガラクトサミドアルファ－２，６－シアル酸
転移酵素１（α２，６－シアル酸転移酵素、ＳＴ６ＧＡＬ１）に対する遺伝子のコード領
域は、Ｇｒｕｎｄｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９９０）に従って使用された。配列はＮＭ
＿００３０３２として預けられ、本明細書において配列番号４と称される。

［実施例１］ＦＳＨ発現ベクターの構築
ＦＳＨアルファポリペプチド（ＡＨ００７３３８、配列番号１）およびＦＳＨベータポ
リペプチド（ＮＭ＿００３０３２、配列番号２）のコード配列を、プライマーの組合せ、
ＦＳＨａ－ｆｗおよびＦＳＨａ－ｒｅｖならびにＦＳＨｂ－ｆｗおよびＦＳＨｂ－ｒｅｃ
をそれぞれ使用して、ＰＣＲによって増幅した。
ＦＳＨａ－ｆｗ ５’－ＣＣＡＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＣＴＡＣＡＧ
ＡＡＡＡＡＴＡＴＧＣ－３’（配列番号９）
ＦＳＨａ－ｒｅｖ ５’－ＧＧＡＴＧＧＣＴＡＧＣＴＴＡＡＧＡＴＴＴＧＴＧＡＴＡＡＴ
ＡＡＣ－３’（配列番号１０）
ＦＳＨｂ－ｆｗ ５’－ＣＣＡＧＧＣＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＡＧＡＣＡＣＴＣＣＡＧ
ＴＴＴＴＴＣ－３’（配列番号１１）
ＦＳＨｂ－ｒｅｖ ５’－ＣＣＧＧＧＴＴＡＡＣＴＴＡＴＴＡＴＴＣＴＴＴＣＡＴＴＴＣ
ＡＣＣＡＡＡＧＧ－３’（配列番号１２）

得られた増幅ＦＳＨベータＤＮＡを制限酵素ＡｓｃＩおよびＨｐａＩで消化し、ネオマ
イシン選択マーカーを有するＣＭＶ駆動哺乳動物発現ベクター上のＡｓｃＩおよびＨｐａ
Ｉ部位に挿入した。同様にＦＳＨアルファＤＮＡをＢａｍＨＩおよびＮｈｅＩで消化し、
ＦＳＨベータポリペプチドＤＮＡを既に含む発現ベクター上のＢａｍＨＩおよびＮｈｅＩ
部位に挿入した。

ベクターＤＮＡを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のＤＨ５α株を形質転換するために使用した
。コロニーを増幅のために取った。ＦＳＨアルファおよびベータの両方を含有するクター
を含有するコロニーを配列決定のために選択し、全てが配列番号１および配列番号２によ
る正しい配列を含有していた。プラスミドｐＦＳＨ Ａ＋Ｂ＃１７をトランスフェクショ
ンのために選択した（図１）。

［実施例２］ＳＴ３発現ベクターの構築
ベータガラクトシドアルファ－２，３－シアル酸転移酵素４（ＳＴ３、Ｌ２３７６７、
配列番号３）のコード配列を、プライマーの組合せ、２，３ＳＴｆｗおよび２，３ＳＴｒ
ｅｖを使用してＰＣＲによって増幅した。
２，３ＳＴｆｗ ５’－ＣＣＡＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＧＧ
ＣＴＧＧＡＡＧＣ－３’（配列番号１３）
２，３ＳＴｒｅｖ ５’－ＴＴＴＴＴＴＴＣＴＴＡＡＧＴＣＡＧＡＡＧＧＡＣＧＴＧＡＧ
ＧＴＴＣＴＴＧ－３’（配列番号１４）

得られた増幅ＳＴ３ ＤＮＡを制限酵素ＢａｍＨＩおよびＡｆｌＩＩで消化し、ハイグ
ロマイシン耐性マーカーを有するＣＭＶ駆動哺乳動物発現ベクター上のＢａｍＨＩおよび
ＡｆｌＩＩ部位に挿入した。ベクターを既に記載のとおり増幅し、配列決定した。クロー
ンｐＳＴ３＃１（図２）は、配列番号３による正しい配列を含有しており、トランスフェ
クションのために選択した。

［実施例３］ＳＴ６発現ベクターの構築
ベータガラクトサミドアルファ－２，６－シアル酸転移酵素１（ＳＴ６、ＮＭ＿００３
０３２、配列番号４）のコード配列を、プライマーの組合せ、２，６ＳＴｆｗおよび２，
６ＳＴｒｅｖを使用してＰＣＲによって増幅した。
２，６ＳＴｆｗ ５’－ＣＣＡＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＴＴＣＡＣＡＣＣＡＡ
ＣＣＴＧＡＡＧ－３’（配列番号１５）
２，６ＳＴｒｅｖ ５’－ＴＴＴＴＴＴＴＣＴＴＡＡＧＴＴＡＧＣＡＧＴＧＡＡＴＧＧＴ
ＣＣＧＧ－３’（配列番号１６）

得られた増幅ＳＴ６ ＤＮＡを制限酵素ＢａｍＨＩおよびＡｆｌＩＩで消化し、ハイグ
ロマイシン耐性マーカーを有するＣＭＶ駆動哺乳動物発現ベクター上のＢａｍＨＩおよび
ＡｆｌＩＩ部位に挿入した。ベクターを既に記載のとおり増幅し、配列決定した。クロー
ンｐＳＴ６＃１１（図３）は、配列番号４による正しい配列を含有しており、トランスフ
ェクションのために選択した。

［実施例４］ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞におけるｐＦＳＨ α＋βの安定発現。ク
ローンのトランスフェクション、単離およびスクリーニング
単一のプラスミドからＦＳＨの両ポリペプチド鎖を発現することによって、ＦＳＨを産
生するＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）クローンを生成した（実施例１を参照されたい）。

安定クローンを得るためのｐＦＳＨ α＋β構築物を含むリポソームベーストランスフ
ェクション剤。安定クローンを、１０％のＦＣＳを補充し、Ｇ４１８を含有するＶＰＲＯ
中で選択した。トランスフェクション３週間後、Ｇ４１８耐性クローンが増殖した。クロ
ーンを単離のために選択した。単離したクローンを７０～８０％コンフルエントまで選択
培地で培養した。上清を、ＦＳＨタンパク質含有量についてＦＳＨ選択的ＥＬＩＳＡを使
用して、およびクローン細胞株におけるＦＳＨ受容体での薬理学的活性についてｃＡＭＰ
蓄積アッセイを使用して、アッセイした。機能性タンパク質を発現しているクローンを培
養増殖のために２４ウエル、６ウエルおよびＴ８０フラスコに進めた。

７個のクローンからの物質の生産性および品質を決定するための研究を、十分な物質を
生成するためにＴ８０フラスコ中で開始した。細胞を既に記載のとおり補充培地で７日間
培養し、上清を回収した。生産性をＦＳＨ選択的ＥＬＩＳＡを使用して決定した。物質の
等電点プロファイルを当技術分野において公知の方法による等電点電気泳動（ＩＥＦ）に
よって決定した。十分な生産性および品質を有するクローンをシアル酸転移酵素操作のた
めに選択した。

［実施例５］シアル酸付加のレベルは、α２，３－シアル酸転移酵素を過剰発現してい
る細胞において増加している。ＦＳＨ発現ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞におけるｐＳＴ
３の安定発現、クローンのトランスフェクション、単離およびスクリーニング。
高度にシアル酸付加されたＦＳＨを産生するＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）クローンを、Ｆ
ＳＨの両ポリペプチド鎖を既に発現している（実施例４由来）ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）
細胞中で、別のプラスミド（実施例２）からα２，３－シアル酸転移酵素を発現させるこ
とによって生成した。実施例４に記載のとおりＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞から産生さ
れたクローンを、生産性、良好な増殖プロファイル、機能性タンパク質の産生およびいく
つかのシアル酸付加を含む産生されたＦＳＨを含むそれらの特徴について選択した。安定
クローンは実施例４に既に記載のとおり生成した。クローンを単離し、増殖させ、アッセ
イした。α２，３－シアル酸転移酵素クローンを無血清培地および懸濁条件に適合させた
。

前述のとおり、クローンをＦＳＨ選択的ＥＬＩＳＡ、ＦＳＨ受容体細胞株における機能
性応答、ＩＥＦ、代謝クリアランス速度およびＳｔｅｅｌｍａｎ Ｐｏｈｌｅｙ分析を使
用してアッセイした。結果を、商業的に入手できる組換えＦＳＨ（Ｇｏｎａｌ－ｆ、Ｓｅ
ｒｏｎｏ）および親ＦＳＨ ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞株と比較した。大部分のクロ
ーンによって産生されたＦＳＨは、α２，３－シアル酸転移酵素を伴わずに発現されたＦ
ＳＨと比較して、顕著に改善されたシアル酸付加（すなわち多数のシアル酸を有するＦＳ
Ｈアイソフォームが平均でより多い）を有する。結論としてＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細
胞におけるシアル酸転移酵素を伴うＦＳＨの発現は、ＦＳＨだけを発現している細胞と比
較してＦＳＨのシアル酸付加のレベルが上昇していた。

［実施例６］産生および精製概要
手順は、無血清培地中に懸濁で培養したＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞においてＦＳＨ
を産生するために開発した。手順を下に記載し、いくつかのＦＳＨ産生ＰＥＲ．Ｃ６（登
録商標）細胞株に適用した。

α２，３－クローン（実施例５）由来のＦＳＨをＬｏｗｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９７６
）によって記載の方法の変法を使用して調製した。

ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）－ＦＳＨの産生のために、細胞株を無血清培地、すなわち、
Ｅｘｃｅｌｌ ５２５（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に適合させた。細胞をＴ８０
培養フラスコ中で７０％～９０％コンフルエント単層を形成するように最初に培養した。
継代の際に、細胞を無血清培地、Ｅｘｃｅｌｌ ５２５＋４ｍＭ Ｌ－グルタミン中に、
０．３×１０^６個／ｍｌの細胞密度で再懸濁した。細胞懸濁物２５ｍｌを２５０ｍｌ振盪
フラスコに入れ、１００ｒｐｍ、３７℃、５％ＣＯ_２で振盪した。１×１０^６個／ｍｌ超
の細胞密度に達した後、細胞を０．２または０．３×１０^６個／ｍｌの細胞密度で継代培
養し、さらに振盪フラスコ中、３７℃、５％ＣＯ_２、１００ｒｐｍで培養した。

ＦＳＨの産生のために、細胞を無血清産生培地、すなわち、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）
細胞の増殖を非常に高い細胞密度（バッチ培養で通常１０^７個／ｍｌ超）に支持するＶＰ
ＲＯ（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に移した。細胞を１×１０^６個／ｍｌ超にＥｘ
ｃｅｌｌ ５２５中で最初に培養し、次いで５分間、１０００ｒｐｍで遠沈し、続いてＶ
ＰＲＯ培地＋６ｍＭ Ｌ－グルタミンに１×１０^６個／ｍｌの密度で懸濁した。次いで細
胞を振盪フラスコ中で７～１０日間、３７℃、５％ＣＯ_２、１００ｒｐｍで培養した。こ
の期間で、細胞は１０^７個／ｍｌ超の密度に増殖した。培養培地を細胞生存率が減少し始
めた後に回収した。細胞を５分間、１０００ｒｐｍで遠沈し、上清をＦＳＨの定量および
精製のために使用した。ＦＳＨの濃度をＥＬＩＳＡ（ＤＲＧ ＥＩＡ １２８８）を使用
して決定した。

次いでＦＳＨの精製をＬｏｗｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９７６）によって記載の方法の変
法を使用して実行した。電荷選択的クロマトグラフィーを使用する精製を、当技術分野に
おいて周知の方法によって、高度にシアル酸付加された形態を富化するために実行した。

全てのクロマトグラフィー手順の際に、本明細書で特許請求されるＦＳＨのシアル酸付
加形態の富化をＲＩＡ（ＤＲＧ ＥＩＡ １２８８）および／またはＩＥＦによって確認
した。

［実施例７］α２，３およびα２，６シアル酸の相対量の定量
精製されたｒＦＳＨ（実施例６）上のα２，３およびα２，６シアル酸の相対百分率量
を公知の技術を使用して測定した。

Ｎ－グリカンを変性条件下でＰＮＧａｓｅ Ｆを使用して試料から放出させ、次いで２
－アミノベンズアミドで標識した。次いで放出されたグリカン形態を、電荷分布の決定の
ために、Ｗｅａｋ Ａｎｉｏｎ Ｅｘｃｈａｎｇｅ（ＷＡＸ）カラムによって分離および
分析した。全シアル酸の決定のために２，３，６，８シアリダーゼで、および２，３シア
ル酸の決定のために２，３シアリダーゼで処置した標識グリカンを、ＷＡＸカラムによっ
てさらに分析した。

電荷グリカンの相対百分率を未消化および消化グリカンプール中に存在する構造から算
出し、図４に示す（試料８個について）。これらは、α２，３シアル酸付加について５０
％～９５％（例えば約８０％から９０％）およびα２，６シアル酸付加について５％から
５０％、一般に約１０から２０％（または約３１％もしくは３５％）の範囲内に見出され
た。

［実施例８］ＧＯＮＡＬ－Ｆと比較してＦＥ９９９０４９を調査する複数用量研究
以下は、体外受精（ＩＶＦ）／細胞質内精子注入法（ＩＣＳＩ）のために調節卵巣刺激
を受けている患者におけるＦＥ９９９０４９の用量応答関係を評価する、無作為化、対照
、査定者盲検、並行群、多国籍、多施設試験を記載する。患者集団は、年齢１８から３７
歳、ＢＭＩが１８．５から３２．０ｋｇ／ｍ^２のＩＶＦ患者２６５名であった。

試験は、主要評価項目として採取された卵母細胞の数での用量応答試験として設計した
。二次評価項目は、エンドクリンプロファイル、卵胞発育、卵母細胞受精、胚品質および
処置効率（すなわち全ゴナドトロピン消費および刺激の継続期間）に関するさまざまな用
量のＦＥ９９９０４９の定性的および定量的影響を調査する。試験は、ＩＶＦ／ＩＣＳＩ
周期のための調節卵巣刺激において使用される場合の、妊娠を確立するためのＦＥ９９９
０４９の有効性を評価するために設計されている。

対象を、卵巣応答に関連して治験集団の均一性を増加させ、試験で使用されるＦＥ９９
９０４９用量およびＧＯＮＡＬ－Ｆ用量に対する潜在的応答不良者および過剰応答者の数
を最少化するための、抗ミュラー管ホルモン（ＡＭＨ）評価を含む、組み入れ基準および
除外基準でのコンプライアンスについて無作為化する前の３カ月以内に評価した。ＡＭＨ
評価は、ＡＭＨ Ｇｅｎ－ＩＩ ｅｎｚｙｍｅ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅ
ｎｔ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｗｅｂｓｔｅ
ｒ、Ｔｅｘａｓ）を使用して測定した。このアッセイは、１．１ｐｍｏｌ／Ｌを定量の最
少限度として、０．５７ｐｍｏｌ／Ｌより高いＡＭＨ濃度を検出できる。

彼女らの月経周期の２～３日目に、対象を１：１：１：１：１：１様式で９０ＩＵ、１
２０ＩＵ、１５０ＩＵ、１８０ＩＵもしくは２１０ＩＵ ＦＥ９９９０４９または１５０
ＩＵ ＧＯＮＡＬ－Ｆのいずれかでの処置に無作為化し、卵巣刺激を開始した。無作為化
は、スクリーニングでのＡＭＨレベルに応じて層別化した［５．０～１４．９ｐｍｏｌ／
Ｌ（低ＡＭＨ）および１５．０から４４．９ｐｍｏｌ／Ｌ（高ＡＭＨ））。

ＦＤＡの要求でＧｏｎａｌ－Ｆは質量によって充填（ＦｂＭ）されており、したがって
μｇ用量を参照することは好適である。Ｇｏｎａｌ－Ｆラベルは、６００ＩＵ／４４μｇ
を示しており、そのことは１５０ＩＵが１１μｇであることを示す。しかしいくらかの変
動があり、この試験についてのバッチ証明書は１１．３μｇのＧｏｎａｌ－Ｆが１５０Ｉ
Ｕに相当することを示した。ＦＥ９９９０４９用量は生物学的活性ではなくタンパク質含
有量（μｇ）によって表されている。したがって、ＦＥ９９９０４９の用量は、５．２μ
ｇ（９０ＩＵ）、６．９μｇ（１２０ＩＵ）、８．６μｇ（１５０ＩＵ）、１０．３μｇ
（１８０ＩＵ）または１２．１μｇ（２１０ＩＵ）であった。

対象および用量分布を次に記載する（データは対象数）。

ＦＥ９９９０４９またはＧＯＮＡＬ－Ｆの日用量レベルは、刺激期間全体を通じて固定
する。刺激の際に、対象は刺激１、４および６日目ならびにその後少なくとも２日ごとに
モニターする。１５ｍｍ以上の卵胞３個が観察される場合、来診は連日で実施する。対象
は、ＦＥ９９９０４９またはＧＯＮＡＬ－Ｆで最長１６日間処置する。

早発性ＬＨサージを予防するために、ＧｎＲＨアンタゴニスト（ガニレリクスアセテー
ト、ＯＲＧＡＬＵＴＲＡＮ、ＭＳＤ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ）を刺激６日目に
０．２５ｍｇの日用量で開始し、刺激期間にわたって継続してもよい。最終卵胞成熟の誘
発は、直径≧１７ｍｍを有する卵胞が３個以上観察される時に行う。直径≧１２ｍｍを有
する卵胞が２５個未満の場合、組換えｈＣＧ（絨毛性ゴナドトロピンアルファ、ＯＶＩＴ
ＲＥＬＬＥ、Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｒｏｎｏ／ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）２５０μｇを投与する
。直径≧１２ｍｍを有する卵胞が２５～３５個ある場合、ＧｎＲＨアゴニスト（トリプト
レリンアセテート、ＤＥＣＡＰＥＰＴＹＬ／ＧＯＮＡＰＥＰＴＹＬ、Ｆｅｒｒｉｎｇ Ｐ
ｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）０．２ｍｇを投与する。直径≧１２ｍｍを有する卵胞が
３５個超として定義される過剰卵巣応答の場合、処置は中止する。刺激１０日目に直径≧
１０ｍｍを有する卵胞が３個未満として定義される卵巣応答不良が観察される場合、周期
は中止することができる。

卵母細胞採取は、最終卵胞成熟化の誘発後３６時間（±２時間）で行い、卵母細胞をＩ
ＶＦおよび／またはＩＣＳＩによって授精させた。受精および胚発育を卵母細胞採取から
移植の日まで評価する。ｈＣＧでの最終卵胞成熟化の誘発を受けた対象について、利用可
能な最良の質の胚盤胞１個を卵母細胞採取の５日後に移植し、残りの胚盤胞は凍結する。
ＧｎＲＨアゴニストでの最終卵胞成熟化の誘発を受ける対象について、新鮮周期では胚移
植は行わず、代わりに胚盤胞は５日目に凍結する。膣用プロゲステロン錠剤（ＬＵＴＩＮ
ＵＳ、Ｆｅｒｒｉｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）１００ｍｇ、１日３回を黄体
期支持のために卵母細胞採取翌日から臨床妊娠来診日まで提供する。βｈＣＧ検査を胚移
植１３～１５日後に実施し、臨床的妊娠を経膣超音波（ＴＶＵ）によって胚移植５～６週
間後に確認する。

結果
採取された卵母細胞の数（主要評価項目）を次の表に示す。

主目的は満たされた：顕著な用量応答関係が採取された卵母細胞の数に関してＦＥ９９
９０４９について確立された。この発見は、全体的な治験集団においてだけでなく、無作
為化で使用された２つのＡＭＨ層それぞれについても観察された。
ＦＥ９９９０４９について顕著な用量応答を全ての重要な客観的薬力学的パラメーター、
例えばエストラジオール、インヒビンＢおよびインヒビンＡについて実証した。同程度の
マイクログラム用量レベルで、ＦＥ９９９０４９での薬力学的応答はＧＯＮＡＬ－Ｆでの
ものよりも大きかった（これらの結果は未記載）。
ＦＥ９９９０４９への曝露後の血清ＦＳＨ濃度は、ＧＯＮＡＬ－Ｆについてよりも顕著に
高かった。結果は、ＦＥ９９９０４９のＰＫプロファイルがＧＯＮＡＬ－Ｆのものとは異
なっていることを確認している。
ＦＥ９９９０４９で処置したＩＶＦ／ＩＣＳＩ患者における受精率、胚盤胞発育および妊
娠率は、予測の範囲内であった。
ＦＥ９９９０４９の使用に安全性への懸念はなかった。良好な局所忍容性を記載した。

さらなる分析
本出願者らは、採取される卵母細胞の数に関して次の基準を満たすＦＥ９９９０４９用
量（複数可）を同定するためにデータをさらに分析した：
・ 卵母細胞が８～１４個の範囲で採取される
・ 卵母細胞が８個未満である患者の割合の最少化
・ 卵母細胞が４個未満または２０個以上である患者の割合の最少化

低ＡＭＨ層
表２に見られるとおり、第１の判定基準（卵母細胞が８～１４個の範囲で採取される）
を満たすＦＥ９９９０４９の用量は、１２．１μｇであった（平均９．４個の卵母細胞を
採取した）。卵母細胞の分布を下の表３に示す。

四角および矢印によって示すとおり、１２．１μｇのＦＥ９９９０４９の用量は、低Ａ
ＭＨ群の対象の６０％において最も望ましい数の卵母細胞の採取を提供する。これは、Ｇ
ｏｎａｌ－Ｆ（対象の３３％だけが卵母細胞の最も望ましい数）についての顕著な改善で
ある。中程度または重度の性質の初期ＯＨＳＳの徴候はなく、予防的処置が必要とされる
ことはなかったので、低ＡＭＨを有する患者における１２．１μｇのＦＥ９９９０４９の
用量に関連する懸念はない。

したがって本出願者らは、６から２４μｇ、例えば９から１４μｇ、例えば１２μｇの
用量または相当する用量のヒト由来組換えＦＳＨが、血清ＡＭＨ＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ、例
えば０．０５～１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ、例えば５．０～１４．９ｐｍｏｌ／Ｌを有する患
者における不妊症の処置における使用のために好適であることを見出した。この用量は、
ＯＨＳＳの危険を最少化する一方で効果的な応答をもたらす。

予備評価
予備評価として本発明者らは、ＦＥ９９９０４９での刺激後の卵巣応答および治療効率
への、ＦＳＨ受容体多型の寄与を調査した。

試験の全ての患者由来のゲノムＤＮＡをＦＳＨ－Ｒの２９、３０７および６８０位での
一塩基多型（ＳＮＰ）について、モデナ・レッジョ・エミリア大学、イタリアで分析した
。図４は、エクソン１０のアミノ酸３０７および６８０位ならびにプロモーター中の２９
位での多型の位置を示すＦＳＨ受容体の模式図である。ＳＮＰ ＦＳＨ－Ｒ組合せのこの
分布は、次のとおり：２９位についてＡＡ ７％、ＡＧ ３５％およびＧＧ ５８％；３
０７位についてＴｈｒ／Ｔｈｒ ２９％、Ａｌａ／Ｔｈｒ ５４％およびＡｌａ／Ａｌａ
１７％；ならびに６８０位についてＡｓｎ／Ａｓｎ ３０％、Ａｓｎ／Ｓｅｒ ５３％
およびＳｅｒ／Ｓｅｒ １７％。図５は、実施例８の研究においてＦＳＨで処置した患者
２２２名についてのＦＳＨ受容体遺伝子でのＳＮＰハプロタイプの分布を示す。各位置に
ついての分布および全体の組合せは、低ＡＭＨと高ＡＭＨ層との間で顕著には異ならなか
った。

臨床試験の結果を、ＳＮＰが処置の継続期間および必要な合計用量に影響を有するかど
うかを評価するためにさらに分析した。これは、低ＡＭＨ群および高ＡＭＨ群について行
った。

ＦＳＨＲ多型をＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）およびＲＦＬＰ（制限断片長多型）に
よって当技術分野において公知の方法により調査した。女性をＡｓｎ／Ａｓｎ、Ａｓｎ／
ＳｅｒおよびＳｅｒ／Ｓｅｒ遺伝子型に分類した。遺伝子解析は次のプロトコール概要に
記載されており、患者は特別なインフォームドコンセントに署名した。試料は刺激１日目
に他の血液試料の一部として取った。それらをモデナ・レッジョ・エミリア大学で測定し
た。

ＦＳＨ受容体遺伝子でのＳＮＰ分析のために使用された手順概要
一般的手順：
１．ゲノムＤＮＡ抽出（Ｎｕｃｌｅｏｎ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏ
ｎ ｋｉｔ、ＧＥ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥを使用して血液から）
２．ｎａｎｏｄｒｏｐを使用する操作手順

ＨＲＭ手順：
高解像度融解分析（ＨＲＭ）法によるＳＮＰ遺伝子型判定（ＳｓｏＦａｓｔ ＥｖａＧ
ｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｃｏｄ ｅｎｚｙｍｅ．１７２－５２０１、Ｂｉｏ－Ｒａ
ｄ；ＨＳＰ－９６ ｐｌａｔｅｓ、ｃａｔ．ＨＳＰ９６４５、Ｂｉｏ－Ｒａｄ；およびＣ
ＦＸ９６ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｔｈｅｒｍａｌ ｃｙｃｌｅｒ Ｂｉｏ－Ｒａｄを使用
する）。

配列決定手順：
ＨＲＭ結果に疑問がある場合（同じ試料での２回の独立したＨＲＭ後）、次の配列決定
手順を利用する：
１．ＰＣＲ反応および増幅
２．ＰＣＲ産生物精製
３．精製されたＰＣＲの定量
４．配列反応プロトコール
５．配列産生物精製
６．ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ３１３０装置によって実行するキャピラリー電気泳動
７．ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ３１００でのキャピラリー電気泳動配列決定によって得られた
結果の評価および検証

結果
図７は、完全分析セットについて、６８０位に関する３種の異なるＦＳＨ受容体遺伝子
型：Ａｓｎ／Ａｓｎ、Ａｓｎ／ＳｅｒおよびＳｅｒ／Ｓｅｒのそれぞれにおいて、ＡＭＨ
＜１５ｐｍｏｌ／Ｌを有する患者／対象に送達されたゴナドトロピン（ＦＳＨ）処置の予
測された継続期間（日）を、用量について調整して示す結果の表である。

図７は、ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／ＬおよびバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有する患
者の刺激のために必要な処置の予測平均継続期間が９．５９日間であり、ＡＭＨレベル＜
１５ｐｍｏｌ／ＬおよびバリアントＡｓｎ／Ａｓｎ（８．１３日間）を有する患者の刺激
のために必要なものより約１．５日間長く、ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌおよびバリ
アントＳｅｒ／Ａｓｎ（８．２６日間）を有する患者の刺激のために必要なものより約１
．３日間長いことを示している。

上に記載のとおり、成功（妊娠および／または出生に関して）は、患者が理想的な処置
ウインドウ内で生じる適当な応答（予期された卵巣多卵胞発育、循環中の１７－β－エス
トラジオールの上昇）を有する場合に可能性が高い。成功は、応答がこの処置ウインドウ
の中央にある、すなわちウインドウ内で早すぎも遅すぎもしない場合にさらに増強される
。低ＡＭＨおよびＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有する患者にお
ける処置の継続期間の低減（用量を１２μｇを超えて増加させることによる）は、応答を
処置ウインドウの中央内へと移動させ、成功の見込みを増強し得る。

したがって、処置前にＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／ＬおよびバリアントＳｅｒ／Ｓｅ
ｒを有すると同定された患者への用量を調整することは可能であり得る。処置前にＳｅｒ
／Ｓｅｒを有する患者が同定されると、Ｓｅｒ／ＡｓｎおよびＡｓｎ／Ａｓｎを有する者
と比較して、これらの患者において開始用量を増加できるようになり得る。

上に記載のとおり、１２．１μｇのＦＥ９９９０４９の用量は、低ＡＭＨ群における対
象の６０％において最も望ましい数の卵母細胞の採取を提供する（表３）。表３に示す低
ＡＭＨ群は、バリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有する患者も、Ｓｅｒ／ＡｓｎおよびＡｓｎ／
Ａｓｎを有する者も含んでいた。低ＡＭＨ［ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ、（例えば
０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ、例えば５．０ｐｍｏｌ／Ｌから１４．
９ｐｍｏｌ／Ｌ）］を有し、またＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを
有する患者への、ＦＳＨのより高い開始用量（例えば９から２４μｇ、例えば１２μｇ超
から２４μｇ、例えば１２．３３μｇまたは１３μｇのヒト由来組換え体）の投与は、そ
れが成功（妊娠および／または出生に関する）のさらに高い可能性および成功のさらに良
好な予測を提供できることから、有利なものとなり得る。

図７は、ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／ＬおよびバリアントＡｓｎ／Ａｓｎを有する患
者の刺激のために必要な処置の平均継続期間が８．１３日間であること、およびＡＭＨレ
ベル＜１５ｐｍｏｌ／ＬおよびバリアントＳｅｒ／Ａｓｎを有する患者の刺激のために必
要な期間が８．２６日間であって、ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／ＬおよびバリアントＳ
ｅｒ／Ｓｅｒを有する患者の相当する処置のための継続期間（９．５９日間）よりも約１
．５から１．３日間短いことを示している。それにより処置前でのＡＭＨレベル＜１５ｐ
ｍｏｌ／ＬならびにバリアントＳｅｒ／ＡｓｎおよびＡｓｎ／Ａｓｎを有する患者が同定
されると、これらの患者について卵胞発育に関して良好な応答を依然として提供しながら
、開始用量を１２μｇ未満、例えば１０から１２μｇのＦＥ９９９０４９に低減、または
処置の継続期間を低減できるようになり得る。これは、薬剤費の観点から、およびこれら
の患者における効果のために必要であるよりも高い用量の投与に伴う危険の低減の観点か
らも薬剤費を提供できる。

図６は、完全分析セットについて、６８０位に関する３種の異なるＦＳＨ受容体遺伝子
型：Ａｓｎ／Ａｓｎ、Ａｓｎ／ＳｅｒおよびＳｅｒ／Ｓｅｒのそれぞれにおいて、ＡＭＨ
＜１５ｐｍｏｌ／Ｌを有する患者／対象の、ゴナドトロピン（ＦＳＨ）処置の観察された
継続期間（日）ならびに送達された合計ゴナドトロピン（ＦＳＨ）用量（μｇ）を示す結
果の表である。これは、図７に示す効果を確認している。

結果は、高ＡＭＨ集団ではＳＮＰに関連するこの効果を示さなかった。

これは、特定のＡＭＨレベル、およびＦＳＨＲに特定の多型を有すると同定された特定
の患者におけるＦＳＨの用量の調整を可能にする。

［実施例９］個別化されたＣＯＳプロトコール（低ＡＭＨ）
選択された患者は、当技術分野において公知の方法による体外受精（ＩＶＦ）／細胞質
内精子注入法（ＩＣＳＩ）のためにＣＯＳを受けようとしている。前処置プロトコールは
、ＡＭＨ Ｇｅｎ－ＩＩ ｅｎｚｙｍｅ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ
ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｗｅｂｓｔｅｒ、Ｔ
ｅｘａｓ）を使用する患者の血清ＡＭＨの評価／スクリーニングを含む。このアッセイは
、１．１ｐｍｏｌ／Ｌを定量の最少限度として、０．５７ｐｍｏｌ／Ｌより高いＡＭＨ濃
度を検出できる。ＡＭＨは、他のアッセイキット（例えばＲｏｃｈｅから入手可能）を使
用して測定してもよい。前処置プロトコールは、当技術分野において周知の方法によるゲ
ノムＤＮＡの抽出に続くＦＳＨ受容体の６８０位での対立遺伝子バリアントの同定を含む
（例えば、Ｇｒｏｍｏｌｌ ｅｔ ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２１，８３～９７（２０００
）、Ｓｉｍｏｎｉ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｎｄｏｃ
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７５５（１９９９）、Ｆａｌｃｏｎｅｒ ｅｔ ａｌ，Ａｃｔａ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎ
ｅｃｏｌ Ｓｃａｎｄ ２００５：８４：８０６～８１１（２００５）およびこれらの参
考文献に記載のとおり、血液からのゲノムＤＮＡの抽出のためのキットおよび続くＤＮＡ
配列決定の手段による、またはＬｏｕｔｒａｄｉｓ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．
２３，Ｎｏ．４，Ａｐｒｉｌ ２００６に記載のものなどのＰＣＲおよびＲＦＬＰ法によ
る）。

ＣＯＳプロトコールは、通常の様式では、スクリーニングでのＡＭＨレベルによるＦＥ
９９９０４９の初回量の投与とは別に開始する。１５ｐｍｏｌ／Ｌ未満のＡＭＨレベルお
よびバリアントＳｅｒ／ＡｓｎまたはＡｓｎ／Ａｓｎを有する患者は、およそ１２μｇの
ＦＥ９９９０４９、実施例６の方法により製造されたヒト由来組換えＦＳＨ産生物、また
は１２μｇ未満のＦＥ９９９０４９、例えばヒト由来組換えＦＳＨの１０から１２μｇ、
例えば１１．３３μｇもしくは１１．６７μｇの初回日用量を投与される。１５ｐｍｏｌ
／Ｌ未満のＡＭＨレベルおよびバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有する患者は、ヒト由来組換
えＦＳＨの１２μｇより高い初回日用量（例えば１２．３３から２４μｇまたは１３～２
４μｇ）を受ける。

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配列番号１
卵胞刺激ホルモンアルファポリペプチド
受託番号ＡＨ００７３３８
ＦＳＨアルファのヌクレオチド配列

ＦＳＨアルファのタンパク質配列（配列番号５）

配列番号２
卵胞刺激ホルモンベータポリペプチド
受託番号ＮＭ＿０００５１０
ＦＳＨベータのヌクレオチド配列

ＦＳＨベータのタンパク質配列（配列番号６）

配列番号３
ベータガラクトシドアルファ－２，３－シアル酸転移酵素４
受託番号Ｌ２３７６７
ＳＴ３ＧＡＬ４のヌクレオチド配列

ＳＴ３ＧＡＬ４のタンパク質配列（配列番号７）

配列番号４
ベータガラクトサミドアルファ－２，６－シアル酸転移酵素１
受託番号ＮＭ＿００３０３２
ＳＴ６ＧＡＬ１のヌクレオチド配列

０ｐ－
ＳＴ６ＧＡＬ１のタンパク質配列（配列番号８）

Claims (9)

1. 卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）を含む、不妊症の処置における使用のための組成物であって、前記処置は、
   処置前に、ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有し、血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌを有し、かつ両卵巣において合計された胞状卵胞数（ＡＦＣ）≧８を有する患者を同定するステップ、および
   ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有し、血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌを有し、かつ両卵巣において合計された胞状卵胞数（ＡＦＣ）≧８を有すると同定された患者に、１日あたり１２μｇ超から２４μｇの用量または相当量のＦＳＨを投与するステップ
   を含む、組成物。
2. 前記処置が、処置前に、ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＳｅｒ／Ｓｅｒを有し、血清ＡＭＨレベル０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌを有し、かつ両卵巣において合計された胞状卵胞数（ＡＦＣ）≧８を有する患者を同定するステップを含む、請求項１に記載の使用のための組成物。
3. 卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）を含む、不妊症の処置における使用のための組成物であって、前記処置は、
   処置前に、ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＡｓｎ／ＡｓｎまたはバリアントＡｓｎ／Ｓｅｒを有し、血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌを有し、かつ両卵巣において合計された胞状卵胞数（ＡＦＣ）≧８を有する患者を同定するステップ、および
   ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＡｓｎ／ＡｓｎまたはバリアントＡｓｎ／Ｓｅｒを有し、血清ＡＭＨレベル＜１５ｐｍｏｌ／Ｌを有し、かつ両卵巣において合計された 胞状卵胞数（ＡＦＣ）≧８を有すると同定された患者に、１日あたり１０から１２μｇの用量または相当量のＦＳＨを投与するステップ
   を含む、組成物。
4. 前記処置が、処置前に、ＦＳＨ受容体の６８０位にバリアントＡｓｎ／ＡｓｎまたはバリアントＡｓｎ／Ｓｅｒを有し、血清ＡＭＨレベル０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌを有する患者を同定し、かつ両卵巣において合計された胞状卵胞数（ＡＦＣ）≧８を有するステップを含む、請求項３に記載の使用のための組成物。
5. 処置の１日目に開始し、６から１６日間継続するＦＳＨの投与のための、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
6. ＦＳＨが組換えＦＳＨである、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
7. ＦＳＨがα２，３－およびα２，６－シアル酸付加を含む組換えＦＳＨである、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
8. 組換えＦＳＨがα２，３－およびα２，６－シアル酸付加を含み、全シアル酸付加の１から９９％がα２，６－シアル酸付加であり、全シアル酸付加の９９％から１％がα２，３－シアル酸付加である、請求項６または７に記載の使用のための組成物。
9. 組換えＦＳＨがα２，３－およびα２，６－シアル酸付加を含み、全シアル酸付加の１から５０％がα２，６－シアル酸付加であり、全シアル酸付加の５０％から９９％がα２，３－シアル酸付加である、請求項６または７に記載の使用のための組成物。

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