JP7142085B2 - Asmt発現促進剤 - Google Patents
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Description
(1)エクトイン又はその生理学的に許容しうる塩を有効成分として含有するASMT発現促進剤。
(2)エクトイン又はその生理学的に許容しうる塩を有効成分として含有し、ASMT発現促進を介してメラトニンの合成を促進するメラトニン合成促進剤。
(3)エクトイン又はその生理学的に許容しうる塩を有効成分として含有し、ASMT発現促進を介してメラトニンの合成を促進することにより抗酸化活性を亢進する抗酸化剤。
(4)(1)に記載のASMT発現促進剤を含む組成物。
(5)(2)に記載のメラトニン合成促進剤を含む組成物。
(6)(3)に記載の抗酸化剤を含む組成物。
(7)ASMT発現促進を介してメラトニンの合成を促進することにより、睡眠障害の改善、認知機能の向上、気分障害の改善、抗酸化活性の亢進、および抗炎症活性の亢進から選択される1又は複数の作用を増強するための、(4)又は(5)に記載の組成物。
(8)化粧品組成物又は食品組成物である、(4)~(7)いずれか1項に記載の組成物。
試料の調製
市販のエクトイン(メルク)を精製水で溶解してフィルター滅菌し、濃度1Mのエクトイン試料を調製した。
市販の正常成人皮膚由来角化細胞(クラボウ)を5×105cells/フラスコとなるようにT75フラスコに接種し、角化細胞用培地(Humedia-KG2、クラボウ)中で37℃、5%CO2雰囲気下でセミコンフルエントに達するまで培養し、種細胞とした。この角化細胞をトリプシン処理により回収し、24ウェルプレートに2×104cells/ウェルとなるように接種し、角化細胞用培地(Humedia-KG2、クラボウ)中で37℃、5%CO2雰囲気下でコンフルエントに達するまで培養した。
コンフルエントに達した表皮角化細胞に、エクトイン試料を培地中濃度が1mMとなる様に適切な希釈率で添加し、37℃、5%CO2雰囲気下で培養を続けた。対照として、エクトイン試料を添加しない培地のみで培養を行った。
エクトインを添加してから10時間後に培地を除去し、市販のRNA抽出試薬(RNeasy Mini Kit、Qiagen)を用いて、細胞の溶解とRNAの抽出を行なった。
抽出したRNAを鋳型として、市販の定量PCR試薬(BrilliantII QRT-PCR kit、Agilent)と定量PCR装置(Mx-3005P、Agilent)を用いて定量PCRを実施し、ASMT遺伝子の発現量を測定した。内部標準として発現量がほぼ一定であるRPLP0遺伝子の発現量も同時に測定した。PCR用プライマーには各遺伝子に特異的な市販のPCR用プライマー(タカラバイオ社)を用いた。
試料の調製
市販のエクトイン(メルク)を精製水で溶解してフィルター滅菌し、10重量%のエクトイン試料を調製した。
実施例1と同様に培養した表皮角化細胞に、エクトイン試料を培地中濃度が0.005重量%、0.01重量%、0.02重量%、0.05重量%、0.1重量%となる様に適切な希釈率で添加し、37℃、5%CO2雰囲気下で培養を続けた。
エクトインを添加してから10時間後に培地を除去し、市販のRNA抽出試薬(RNeasy Mini Kit、Qiagen)を用いて、細胞の溶解とRNAの抽出を行なった。
抽出したRNAを鋳型として、市販の定量PCR試薬(BrilliantII QRT-PCR kit、Agilent)と定量PCR装置(Mx-3005P、Agilent)を用いて定量PCRを実施し、ASMT遺伝子の発現量を測定した。内部標準として発現量がほぼ一定であるRPLP0遺伝子の発現量も同時に測定した。PCR用プライマーには各遺伝子に特異的な市販のPCR用プライマー(タカラバイオ)を用いた。
試料の調製
実施例1と同様の方法でエクトイン試料を調製した。対照薬剤として、抗酸化作用を有することが知られている物質(グリコシルヘスペリジン、緑茶抽出液、ウーロン茶抽出液)を含有する試料も作成した。市販のグリコシルヘスペリジン(東洋製糖)を精製水で溶解してフィルター滅菌し、100mMのグリコシルヘスペリジン試料を調製した。緑茶抽出液(香栄興業)、ウーロン茶抽出液(サントリー)は市販の抽出液をフィルター滅菌して用いた。
Claims (2)
- エクトイン又はその生理学的に許容しうる塩を有効成分として含有するASMT発現促進剤。
- エクトイン又はその生理学的に許容しうる塩を有効成分として含有し、ASMT発現促進を介してメラトニンの合成を促進するメラトニン合成促進剤。
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